SKRIPSI F PERTANIANN INSTITUT PERTANIAN BOGOR

PENGAR RUH EKSTR RAK BIJI BLIIGO (Benincassa hispida Thu unb Cogn) TE ERHADAP PENGHAM MBATAN EFE EK TOKSIK T TARTRAZIN DAN RHODA AMIN PADA A AKTIVITAS S PROLIFERASI LIMFO OSIT TIKUS

SKRIPSI

KEN NNY MULIA AWAN F24070033

FAKULTAS TEKNOLOGII PERTANIAN N INSTITU UT PERTANIA AN BOGOR BOGOR 2011

1

THE INFLUENCE OF BLIGO (Benincasa hispida Thunb Cogn) SEED EXTRACT TOWARDS THE INHIBITION OF TARTAZINE AND RHODMINE TOXIC EFFECT ON THE PROLIFERATION ACTIVITY OF A RAT LYMPHOCYTES Kenny Muliawan and Prof. Dr. Ir. Fransiska Rungkat, M.sc Department of Food Science and Technology, Faculty of Agricultural Technology, Bogor Agricultural University, IPB Darmaga Campus, PO BOX 220, Bogor, West Java, Indonesia. Phone: +62 818 0899 7972, E-mail: [email protected]

ABSTRACT

Bligo (Benincasa hispida Thunb Cogn) is one of medical plants that would be useful as medicine for some diseases. Previous study of bligo showed that bligo extract has the ability to cure ulcer in rats and should no toxicity in rat serum analysis. This effect is estimated to be due to some bioactive compounds, like fenolic, terpene, flavonoid c-glycoside and sterols that have antioxidant effect. This bioactive compound were asumed to be able to increase lymphocyte cell proliferation activity. This research purpose is to get the scientific data and to know the effect of consuming bligo seed extract in rat growth and on spleen lymphocyte cell proliferation activity. Three groups of rats, including control or 0 g/kg bw of bligo seed extract, 0.1 g/kg bw bligo seed extract, and 1 g/kg bw bligo seed extract. After 90 day treatment, splenocytes of rats were cultured in the presence of LPS 12.5 µg/ml culture, tartrazine 90 µg/ml, 180 µg/ml, 270 µg/ml culture, or rhodamine 6 µg/ml, 12 µg/ml, 18 µg/ml culture. After 72 hours of incubation, spleen lymphocyte cell proliferation activity was measured by MTT method. Results of this research showed that 0.1 g/kg bw bligo seed extract has increased proliferation activity by 14.30% on treatment with LPS, -0.09% on tartrazine 90 µg/ml culture, 11.42% on tartrazine 180 µg/ml culture, 21.92% on tartrazine 270 µg/ml culture, meanwhile, lymphocyte cultured with rhodamine 6 µg/ml culture, rhodamin 12 µg/ml culture, and rhodamin 18 µg/ml culture, has increased proliferation activity of 25.22%, 7.42%, and 12.19% respectively, compare to that of lymphocyte cultured with media alone. And 1 g/kg bw bligo seed extract can increase proliferation activity by 12.30% on LPS, 24.38% on tartrazine 90 µg/ml, 11.54% on tartrazine 180 µg/ml, 52.74% on tartrazine 270 µg/ml, -4.03% on rhodamine 6 µg/ml, -15.04% on rhodamin 12 µg/ml, and -17.66% on rhodamin 18 µg/ml, compare to that of control culture. Bligo seed extract can prevent toxic effect of tartrazine and rhodamine. The effective result was from rats that gavaged with 0.1 g/kg bw bligo seed extract. The conclusion of this research is bligo is good for health. Keywords: bligo, Benincasa hispida, proliferation, lymphocyte, tartrazine, rhodamine, rats, MTT method

2  

KENNY MULIAWAN. F24070033. Pengaruh Ekstrak Biji Bligo (Benincasa hispida Thunb Cogn) terhadap Penghambatan Efek Toksik Tartrazin dan Rhodamin pada Aktivitas Proliferasi Limfosit Tikus. Di bawah bimbingan Fransiska Rungkat Zakaria. 2011. RINGKASAN Dewasa ini produk pangan dari tanaman seperti sayur, buah, dan serealia dilaporkan memiliki keunggulan di bidang kesehatan dan menunjukkan kecendrungan menurunkan resiko penyakit kanker dibandingkan dengan sumber pangan hewani. Tanaman pangan di Indonesia yang belum banyak diteliti potensinya sebagai pangan yang memiliki komponen bioaktif yang baik untuk kesehatan salah satunya adalah bligo (Benincasa hispida). Benincasa hispida Thunb Cogn atau disebut bligo merupakan tanaman menjalar, batang berkayu, lunak, berbulu, warna hijau. Buah buni, bulat memanjang, berdaging, panjang 15-20 cm, warna hijau keputih-putihan dan bagian yang digunakan biji dan buah. Biji bligo berbentuk seperti biji mentimun tetapi sedikit lebih besar dan berwarna putih kekuningan. Biji buah bligo telah dimanfaatkan di Cina sebagai pengobatan antihelmitik. Komponen bioaktif yang terdapat pada bligo seperti komponen fenolik selain diduga dapat meningkatkan aktivitas proliferasi limfosit juga diduga dapat menghambat efek toksik dari beberapa senyawa xenobiotik. Eksploitasi potensi bligo dapat dilakukan melalui kajian biologisnya atau secara in vivo menggunakan hewan percobaan terhadap aktivitas proliferasi limfosit. Tujuan dari penelitian ini adalah mengetahui efek konsumsi ekstrak biji bligo dengan konsentrasi 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb terhadap kondisi tikus Sprague Dawley melalui kenaikan berat badan dan tingkat konsumsinya, mempelajari efek konsumsi ekstrak biji bligo terhadap tingkat proliferasi sel limfosit sebagai indikasi sistem imun atau sifat immunomodulator pada tikus Sprague Dawley, dan mempelajari pengaruh ekstrak biji bligo terhadap penghambatan efek toksik dari senyawa xenobiotik tartrazin dan rhodamin terhadap tingkat proliferasi sel limfosit tikus Sprague Dawley. Penelitian terhadap ekstrak biji bligo ini dilakukan secara in vivo selama 90 hari. Tikus percobaan dibagi menjadi tiga kelompok perlakuan yaitu, kelompok tikus kontrol, kelompok tikus yang disonde ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan kelompok tikus yang disonde ekstrak biji bligo 1 g/kg bb. Kemudian limfa dari tikus percobaan diisolasi untuk mendapatkan sel limfositnya. Sel limfosit yang didapatkan kemudian dikulturkan dan diberi perlakuan dengan media saja sebagai kontrol, penambahan LPS, atau penambahan senyawa xenobiotik berupa tartrazin atau rhodamin. Perhitungan sel limfosit hidup dilakukan dengan metode MTT. Hasilnya dibandingankan dengan nilai absorbansi perlakuan dengan kontrol dan dinyatakan sebagai Indeks Stimulasi (IS) dalam persen. Hasil dari penelitian ini adalah pemberian ekstrak biji bligo baik pada konsentrasi 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb tidak mempengaruhi pertumbuhan tikus Sprague Dawley, pemberian ekstrak biji bligo tidak mempengaruhi nafsu makan atau tidak mengurangi nafsu makan tikus. Setelah 90 hari perlakuan, ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dapat meningkatkan aktivitas proliferasi sebesar 14.30% pada perlakuan dengan penambahan LPS, -0.09% pada tartrazin 90 µg/ml, 11.42% pada tartrazin 180 µg/ml, dan 21.92% pada tartrazin 270 µg/ml, sementara pada kultur rhodamin 6 µg/ml, rhodamin 12 µg/ml, dan rhodamin 18 µg/ml, ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dapat meningkatkan proliferasi limfosit secara berturut-turut sebesar 25.22%, 7.42%, dan 12.19% dibandingkan dengan kultur kontrol (proliferasi spontan). Ekstrak biji bligo 1 g/kg bb dapat meningkatkan aktivitas proliferasi sebesar 12.30% pada LPS, 24.38% pada tartrazin 90 µg/ml, 11.54% pada tartrazin 180 µg/ml, 52.74% pada tartrazin 270 µg/ml, -4.03% pada rhodamin 6 µg/ml, -15.04% pada rhodamin 12 µg/ml, dan -17.66% pada rhodamin 18 µg/ml dibandingkan dengan limfosit pada kultur kontrol.

3  

Ekstrak biji bligo dengan konsentrasi 0.1 g/kg bb dapat digunakan sebagai imunomodulator baik pada kultur kontrol maupun pada kultur dengan xenobiotik. Pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb pada kultur dengan tartrazin (90 µg/ml, 180 µg/ml, dan 270 µg/ml) tidak berpengaruh secara nyata terhadap aktivitas proliferasi sel limfosit tikus. Pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb pada kultur dengan rhodamin (6 µg/ml, 12 µg/ml, dan 18 µg/ml) berpengaruh secara nyata terhadap peningkatan aktivitas proliferasi limfosit. Pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb dapat menghambat efek toksik dari tartrazin dan rhodamin. Perlakuan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb menunjukkan hasil paling efektif pada kondisi tubuh normal dan tidak sakit dengan aktivitas proliferasi limfosit limfa tertinggi dan paling resisten terhadap serangan xenobiotik terutama rhodamin. Komponen bioaktif yang diduga bertindak sebagai antioksidan dari ekstrak biji bligo adalah senyawa fenolik, terpene (alunsenol dan multiflurenol), flavonoid c-glikosida, dan sterol.

4  

PENGARUH EKSTRAK BIJI BLIGO (Benincasa hispida Thunb Cogn) TERHADAP PENGHAMBATAN EFEK TOKSIK TARTRAZIN DAN RHODAMIN PADA AKTIVITAS PROLIFERASI LIMFOSIT TIKUS

SKRIPSI Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN pada Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor

Oleh KENNY MULIAWAN F24070033

FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2011

5  

Judul Skripsi

Nama NIM

: Pengaruh Ekstrak Biji Bligo (Benincasa hispida Thunb Cogn) Terhadap Penghambatan Efek Toksik Tartrazin dan Rhodamin Pada Aktivitas Proliferasi Limfosit Tikus : Kenny Muliawan : F24070033

Menyetujui: Pembimbing I,

Prof. Dr. Ir. Fransiska Rungkat, M.sc NIP 19490614.198503.2.001

Mengetahui: Ketua Departemen,

Dr. Ir. Dahrul Syah, M.sc NIP 19680505.199203.2.002

Tanggal lulus

: 21 April 2011

6  

PERNYATAAN MENGENAI SKRIPSI DAN SUMBER INFORMASI

Saya menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa skripsi dengan judul Pengaruh Ekstrak Biji Bligo (Benincasa hispida Thunb Cogn) terhadap Penghambatan Efek Toksik Tartrazin dan Rhodamin pada Aktivitas Proliferasi Limfosit Tikus adalah hasil karya saya sendiri dengan arahan Dosen Pembimbing Akademik, dan belum diajukan dalam bentuk apapun pada perguruan tinggi manapun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir skripsi ini.

Bogor, 21 April 2011 Yang membuat pernyataan

Kenny Muliawan F24070033

7  

© Hak cipta milik Kenny Muliawan, tahun 2011 Hak cipta dilindungi

Dilarang mengutip dan memperbanyak tanpa izin tertulis dari Institut Pertanian Bogor, sebagian atau seluruhnya dalam bentuk apapun, baik cetak, Fotokopi, mikrofilm, dan sebagainya

8  

BIODATA PENULIS

Kenny Muliawan. Lahir di Jakarta, 28 April 1989 dari ayah Rudi Muliawan dan ibu Yunita Tjen, sebagai putra kedua dari dua bersaudara. Penulis menamatkan SMA pada tahun 2007 dari SMA Negeri 13 Jakarta, selama SMA penulis berhasil menjadi juara kedua Olimpiade Sains SMA Mata Pelajaran Fisika Tingkat Kotamadya Jakarta Utara Tahun 2006. Penulis diterima di IPB pada tahun 2007 melalui jalur Undangan Seleksi Masuk IPB (USMI). Penulis memilih Program Studi S1, Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian. Selama mengikuti perkuliahan, penulis aktif dalam berbagai kegiatan termasuk menjadi asisten mata kuliah Mikrobiologi Pangan pada tahun 2010. Penulis juga menjadi atlet catur IPB dan menjadi juara pertama kompetisi catur beregu pada OMI IPB 2008 sampai 2010. Pada tahun 2008 penulis memperoleh beasiswa dari Peningkatan Prestasi Akademik (PPA). Penulis melaksanakan penelitian pada tahun 2010 di Kampus IPB Darmaga, Bogor.

9  

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur dipanjatkan ke Tuhan Yang Maha Esa dan Hiyang Buddha atas karunia-Nya sehingga skripsi ini berhasil diselesaikan. Penelitian dengan judul Pengaruh Ekstrak Biji Bligo (Benincasa hispida Thunb Cogn) terhadap Penghambatan Efek Toksik Tartrazin dan Rhodamin pada Aktivitas Proliferasi Limfosit Tikus dilaksanakan di Laboratorium SEAFAST dan Ilmu dan Teknologi Pangan Kampus IPB Darmaga, Bogor sejak bulan Febuari sampai April 2010. Dengan telah selesainya penelitian hingga tersusunya skripsi ini, penulis ingin menyampaikan penghargaan dan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada: 1. 2.

Prof. Dr. Ir. Fransiska Rungkat, M.Sc sebagai dosen pembimbing. Dr. Ir. Hj. Endang Prangdimurti, M.Si dan Antung Sima Firlieyanti, STP, M.Sc sebagai dosen penguji. 3. Mama dan Papa yang selalu memberi dukungan. 4. Cici yang selalu membantu iuran SPP. 5. Kak Sugito, Kak Anas, Kak Zatil, Kak Jali, Dinda, dan Anisa sebagai teman satu tim penelitian. 6. Pak Adi, Bu Sri, dan Pak Wahid sebagai teknisi yang telah membantu pelaksanaan penelitian. 7. Kak Anto dan Kak Nindi yang telah membantu selama penelitian. 8. Ko Kenci, Ci Kallista, Kak Umam, dan Kak Kamlit yang sudah bersedia meluangkan waktunya untuk membagi pengalaman kepada penulis. 9. Sindhu, Eddy, dan Ricky (Sindhu’s Angel) yang selalu menghibur dan mendukung penulis. 10. Amel, Reggie, Eliana, dan teman-teman ITP 44 yang selalu mendukung dan memicu semangat penulis. Akhirnya penulis berharap semoga tulisan ini bermanfaat dan memberikan kontribusi yang nyata terhadap perkembangan ilmu pengetahuan di bidang pangan.

Bogor, 21 April 2011

Kenny Muliawan

 

iii

10

DAFTAR ISI

Halaman KATA PENGANTAR ……………………………………………………….…………..................... iii DAFTAR TABEL ……………………………………………………………….….………..……...... v DAFTAR GAMBAR ……………………………………………………………….……….…….…. vi DAFTAR LAMPIRAN ………………………………………………………….…………..………. vii PENDAHULUAN ………………………………………………………….….……………………... 1 Latar Belakang ……….……………………………………….…….………………....…….. 1 Tujuan …………………..………………………………………………………………….... 2 Hipotesis …………………..………………………………………………………………… 3 Manfaat Penelitian …………..………………………………………………………………. 3 TINJAUAN PUSTAKA ………………..…………………………………………………………….. 4 Bligo (Benincasa hispida Thunb Cogn) …..………………………....……………………… 4 Tartrazin ……………………………………..…………………………….……………….... 6 Rhodamin ……………………………………..………………………….……………..…… 7 Limfosit ………………………………………..………………………….………................. 8 Proliferasi Limfosit ……………………………...……………………...……………….…. 10 Kultur Sel ………………………………………...………………………...……………..... 11 Tikus Percobaan …………………………………...………………………...…...……..….. 12 METODOLOGI ……………………………………………..…………………......…….…….……. 14 Waktu dan Tempat …………………………………..……………………...….…….…….. 14 Alat dan Bahan ………………………………………...…………………..………............. 14 Metode Penelitian ………………………………………...………………...………............ 14 Pembuatan Ekstrak Bligo ………………………...……………….…....….….….. 14 Pemeliharaan Tikus ………………………………...…………….……..…........... 15 Pengukuran Proliferasi Sel Limfosit Limfa …………...………….….…...…….… 15 A. Isolasi limfosit limfa ………………………………...…………..……...….… 15 B. Perhitungan sel limfosit limfa ………………………...………………...….... 16 C. Pengujian proliferasi sel limfosit limfa menggunakan MTT …………………………………......…….…………...… 16 HASIL DAN PEMBAHASAN ……………………………………………..…………...…………. 19 Kondisi Tikus Percobaan ………………………………………………..…….…………… 19 Berat Badan dan Sisa Pakan ……………………………………………..…....…………… 19 Proliferasi Sel Limfosit Limfa ……………………………………………....…………..…. 21 SIMPULAN DAN SARAN ………………………………………………………..……………….. 35 Simpulan ………………………………………………………….…………..……………. 35 Saran …………………………………………………………….……………..………....... 36 DAFTAR PUSTAKA ………………….……………………………………….………..………...... 37 LAMPIRAN ……………………………….……………………………………….……..…………. 43

 

iv

11

DAFTAR TABEL

Halaman Tabel 1. Data Biologis Tikus ……………………………………….…………………………….….. 13 Tabel 2. Komposisi Bahan dalam 100 g Pakan ...…...…………………….…………………………. 15 Tabel 3. Rata-rata berat badan tikus selama 3 bulan ……………………………….……….……….. 20 Tabel 4. Rata-rata konsumsi pakan bulan ke-1, ke-2, dan ke-3 …..……………....…….….………... 20

 

v

12

DAFTAR GAMBAR

Halaman Gambar 1. Buah bligo (Benincasa hispida Thunb Cogn) ………………………………..…………… 4 Gambar 2. Diagram alir penelitian ………………………………………………...…………..…..… 18 Gambar 3. Sel limfosit limfa pada hemasitometer …………………………………...………...….… 22 Gambar 4. Pengambilan organ limfa dalam laminair flow steril ….……………………………….... 23 Gambar 5. Indeks stimulasi sel limfosit spontan, dengan mitogen LPS, dan senyawa xenobiotik tartrazin dan rhodamin pada kultur kontrol dan yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb ……………………………………….…...…….............. 25 Gambar 6. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan mitogen LPS pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb …..….………………………...……………. 26 Gambar 7. Reaksi penangkapan radikal bebas oleh komponen fenolik dan reaksi pengkelatan logam oleh komponen fenolik …………………...………………...………. 27 Gambar 8. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan tartrazin 90 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb …………………………...………… 29 Gambar 9. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan tartrazin 180 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb ……….…………………..………… 30 Gambar 10. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan tartrazin 270 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb …….…………………..................... 31 Gambar 11. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan rhodamin 6 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb …….……………...……………….. 32 Gambar 12. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb …….…….………...………………. 33 Gambar 13. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan rhodamin 18 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb …….………………...…………..… 34

 

vi

13

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman Lampiran 1. Perkembangan berat tikus selama 90 hari ………………….………………………….. 43 Lampiran 2a. Tabel konsumsi pakan selama 90 hari ………………………………….…………….. 49 Lampiran 2b. Tabel konsumsi pakan rata-rata bulan ke-1, ke-2 dan ke-3 ……….….………………. 60 Lampiran 3. Tabel ANOVA terhadap konsumsi pakan rata-rata bulan ke-1, ke-2, dan ke-3 ……………………………………………………….………………..... 60 Lampiran 4. Berat tikus hari ke 0 ……………………………………….……….……..………….… 61 Lampiran 5. Tabel ANOVA berat tikus hari ke 0 ……………………………….………….……...... 61 Lampiran 6 . Berat tikus bulan ke-1 …………………………………….……….…………............... 61 Lampiran 7. Tabel ANOVA berat tikus bulan ke 1 …………………….……....………….…….….. 61 Lampiran 8. Berat tikus bulan ke-2 …………………………………….……….…………................ 61 Lampiran 9. Tabel ANOVA Berat tikus bulan ke-2 …………………………………………..…...... 62 Lampiran 10. Berat tikus bulan ke-3 …………………………………………………........................ 62 Lampiran 11. Tabel ANOVA Berat tikus bulan ke-3 ………………………………….…….…........ 62 Lampiran 12. Pertumbuhan tikus selama 3 bulan ………………………………………….…...…… 62 Lampiran 13. Tabel ANOVA Pertumbuhan tikus selama 3 bulan ……………………….……...…... 62 Lampiran 14. Data hasil absorbansi splenosit tikus pada setiap kelompok tikus …………......….…. 63 Lampiran 15. Data hasil Indeks Stimulasi splenosit tikus pada setiap kelompok tikus ……………………………………………………………………..…. 63 Lampiran 16. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan LPS …………………………..………………………………….……… 64 Lampiran 17. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan tartrazin 90 µg/ml …………..…………………………………………………..……... 65 Lampiran 18. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan tartrazin 180 µg/ml ………..……………………………………………..……………. 65 Lampiran 19. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan tartrazin 270 µg/ml …………………………………………………………...………. 66 Lampiran 20a. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan rhodamin 6 µg/ml ………………………………………………………...…….…… 67 Lampiran 20b. Tabel uji lanjut Duncan Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan rhodamin 6 µg/ml ………………………………………..…..……...… 67 Lampiran 21a. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml ………………………………………………...………….……... 68 Lampiran 21b. Tabel uji lanjut Duncan Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml ……………………………………………...…...... 68 Lampiran 22a. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan rhodamin 18 µg/ml ……………………………………………….……..………........ 69 Lampiran 22b. Tabel uji lanjut Duncan Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan rhodamin 18 µg/ml ……………………………………………….....… 69 Lampiran 23a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan LPS …………………………………………………………………..………..…..… 70

vii  

14

Lampiran 23b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan LPS ……………………………………………………………………….….........… 70 Lampiran 23c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan LPS …………………………………………………………………………...……… 71 Lampiran 24a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan tartrazin 90 µg/ml …………………………………………………………….……… 72 Lampiran 24b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan tartrazin 90 µg/ml …………………………………………………………….……… 72 Lampiran 24c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan tartrazin 90 µg/ml ……………………………………………………….………….... 73 Lampiran 25a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan tartrazin 180 µg/ml ………………………………………………………………...… 74 Lampiran 25b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan tartrazin 180 µg/ml ………………………………………………………….….….… 74 Lampiran 25c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan tartrazin 180 µg/ml …………………………………………………….…….............. 75 Lampiran 26a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan tartrazin 270 µg/ml …………………………………………………….…………..… 76 Lampiran 26b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan tartrazin 270 µg/ml …………………………………………………………...……… 76 Lampiran 26c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan tartrazin 270 µg/ml …………………………………………………….……….….… 77 Lampiran 27a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan rhodamin 6 µg/ml ……………………………………………………..…....………... 78 Lampiran 27b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan rhodamin 6 µg/ml ……………………………………………………………....…..... 78 Lampiran 27c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan rhodamin 6 µg/ml …………………………………………………………..……...… 79 Lampiran 28a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml …………………………………………………..………..……... 80 Lampiran 28b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml …………………………………………………..………….....… 80 Lampiran 28c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml …………………………………………………..……………..... 81 Lampiran 29a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan rhodamin 18 µg/ml ……………………………………………………..……….....… 82 Lampiran 29b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan rhodamin 18 µg/ml ………………………………………………………………....... 82 Lampiran 29c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan rhodamin 18 µg/ml ……………………………………….……………………..…... 83

 

viii  

15

I. PENDAHULUAN Latar Belakang Seiring dengan berkembangnya zaman, manusia dituntut untuk menjadi lebih praktis dan lebih efisien dalam menjalankan kehidupannya. Akibatnya terjadi perubahan dalam pola konsumsi pangan. Konsumsi pangan pada zaman sekarang ini lebih cenderung pada konsumsi pangan dalam bentuk instan dan memiliki citarasa yang enak dengan banyak mengandung lemak, garam, gula, dan senyawa xenobiotik (pewarna, pengawet, dan lain-lain). Dimana hal ini dapat menyebabkan penyakit degeneratif seperti penyakit jantung, cardiovaskuler, osteoporosis, diabetes militus tipe II bahkan penyakit kanker (WCRF/AICR 1997). Perkembangan ilmu pangan dan gizi menunjukkan bahwa pangan nabati baik sayur-sayuran maupun buah-buahan selain mengandung komponen zat gizi juga mengandung zat non gizi yang sangat berguna bagi kesehatan yaitu serat makanan (dietary fiber) dan antioksidan. Pangan nabati tidak hanya diunggulkan karena kandungan seratnya, tapi juga senyawa fitokimia yang terkandung di dalamnya. Fitokimia (phytochemicals) atau disebut juga produk sekunder tanaman (secondary plant product) mulai dikenal tahun 1950-an. Dalam beberapa tahun terakhir fitokimia menjadi sorotan banyak peneliti karena kaitannya dengan status kesehatan masyarakat yang mengonsumsinya. Di antaranya ada yang dapat memberikan efek fisiologis yang menguntungkan bagi kesehatan karena dapat mencegah penyakit-penyakit degeneratif (Nair 2001; Inoue et al. 2002). Komponen fitokimia meliputi berbagai kelompok senyawa, seperti fenol, alkaloid, turunan isoprene: terpen, dan steroid (Pandoyo 2000). Beberapa fitokimia yang diketahui mempunyai fungsi fisiologis adalah karotenoid, fitosterol, saponin, glukosinolat, polifenol, inhibitor protease, monoterpen, fitoestrogen, sulfida, dan asam fitat. Fungsi fisiologis yang dimiliki antara lain sebagai antikanker, antimikroba, antioksidan, antiinflamasi, immunostimulan, pengatur tekanan darah, pengatur kadar gula darah dan penurun kadar kolesterol (Reyburn et al. 1998). Benincasa hispida Thunb Cogn atau disebut bligo merupakan tanaman menjalar, batang berkayu, lunak, berbulu, warna hijau. Buah berbentuk seperti buah buni, bulat memanjang, berdaging, panjang 15-20 cm, warna hijau keputih-putihan dan bagian yang digunakan biji dan buah. Buah ini secara tradisional digunakan sebagai laksatif (anti sembelit), diuretik, tonik, aphrodisiac, kardiotonik (penguat otot jantung), urynary calkuli (batu saluran kencing), penyakit darah, insanity, epilepsi, dan juga dalam kasus jaundice (penyakit kuning), dispepsia (kesalahan saluran pencernaan atas), demam dan gangguan mentruasi (Kirtikar dan Basu 1975). Buah ini secara umum digunakan sebagai sayuran di India dan negara tropis lainnya juga merupakan tanaman obat yang sering digunakan untuk menyembuhkan penyakit epilepsi dan gangguan syaraf lainnya (Aslokar et al. 1992). Ekstrak metanolik buah ini dilaporkan memiliki khasiat antiulker (gangguan pencernaan) (Grover et al. 2001), antiinflamasi (Chandrababu et al. 2001), antihistamin dan aktivitas antidepresant (Anilkumar dan Ramu 2002). Selain itu, ekstrak metanol juga memiliki efek menstabilkan sel mast, aktivitas diuretik dan aktivitas nephroprotektif (perlindungan sel saraf) melawan keracunan merkuri pada tikus (Mingyu et al. 1995). Berdasarkan hasil penelitian (Rukumani et al. 2003) bahwa ekstrak metanol Benincasa hispida Thunb Cogn menunjukkan aktivitas antikanker yang signifikan, perlindungan terhadap bronchospasm yang diinduksi histamin, aktivitas neotropic (vitamin sel saraf) dan antidepresan. Menurut Kumar dan Vimalavathini (2004) bahwa kemampuan ekstrak Benincasa hispida terhadap aktivitas anorektik (penyakit yang berkaitan dengan anus dan rektum) dimediasi melalui sistem saraf pusat (CNS) tanpa mempengaruhi pengosongan gastrik.

1  

Di Cina, biji dari buah Benincasa hispida Thunb Cogn digunakan dalam pengobatan antihelmitik. Minyak dari biji buah ini merupakan bahan saporifik, baik untuk otak dan liver dan efektif untuk pengobatan sifilis. Abu dari biji buah ini untuk pengobatan gonorhoea, pengobatan terhadap luka dan bengkak (Nadkarni’s 1995). Hasil penelitian Sugito (2010) menunjukkan bahwa ekstrak biji bligo tidak toksik pada tikus percobaan dengan dosis 5 g/kg bb dengan metode akut, ekstrak biji bligo juga tidak toksik pada tikus percobaan dengan dosis 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb. Selain itu dari penelitian ini juga didapatkan bahwa ekstrak biji bligo tidak menyebabkan gangguan metabolisme hati, dilihat dari berat hati, SGOT, SGPT, bilirubin, total trigliserida, kolesterol, dan protein total, ekstrak biji bligo secara nyata menurunkan kadar alkali fosfatase, bilirubin total, glukosa, lemak total, dan meningkatkan kadar albumin, dan ekstrak biji bligo tidak menyebabkan gangguan metabolisme ginjal, dilihat dari kadar urea, fosfor, kalsium, dan kalium. Sejak beberapa tahun belakangan ini, tanaman herbal diyakini memiliki khasiat dalam mencegah dan menyembuhkan penyakit tertentu, tetapi tanaman herbal umumnya digunakan oleh masyarakat untuk pengobatan atau konsumsi tanpa pengawasan dokter atau ahli terkait. Beberapa publikasi terbaru menyebutkan adanya konsekuensi serius dari efek samping beberapa produk herbal (Gurib dan Fakim 2006; Bush et al. 2007 dalam Fragoso et al. 2009). Beberapa efek samping yang letal dan berbahaya dilaporkan sebagai dampak penggunaan beberapa produk herbal. Efek samping ini dapat terjadi melalui beberapa mekanisme, termasuk efek toksik langung dari herbal, efek dari kontaminan yang terkandung dalam produk herbal, dan interaksi antara herbal dengan obat. Tanaman herbal dapat mencegah penyakit tertentu karena senyawa fitokimia yang terdapat di dalamnya dapat meningkatkan status imun orang yang mengonsumsinya. Untuk melihat peningkatan status imun individu salah satunya dapat dilihat dari aktivitas proliferasi sel limfosit. Kemampuan sel limfosit untuk berproliferasi atau membentuk klon, menunjukkan secara tidak langsung kemampuan respon imunologik (Zakaria et al. 2003). Potensi bligo (Benincasa hispida) sebagai sumber senyawa fitokimia dan fenolik selain diduga dapat meningkatkan aktivitas proliferasi sel limfosit, juga diduga dapat menghambat efek toksik dari beberapa senyawa xenobiotik. Hal ini penting untuk dieksploitasi agar dapat menunjang perkembangannnya. Eksploitasi bligo dapat dilakukan melalui kajian potensi biologisnya atau secara in vivo menggunakan hewan percobaan terhadap aktivitas proliferasi limfosit. Studi terhadap aktivitas proliferasi limfosit ini juga melibatkan beberapa parameter, seperti pengamatan ada tidaknya kematian tikus akibat pemberian ekstrak biji bligo, pengamatan dapat tidaknya ekstrak biji bligo digunakan sebagai immunomodulator, dan pengamatan ada tidaknya pengaruh ekstrak biji bligo terhadap penghambatan efek toksik dari senyawa xenobiotik (tartrazin dan rhodamin) terhadap aktivitas proliferasi limfosit.

Tujuan

1. 2. 3.

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk : Mengetahui efek konsumsi ekstrak biji bligo dengan konsentrasi 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb terhadap kondisi tikus Sprague Dawley melalui kenaikan berat badan dan tingkat konsumsinya. Mempelajari efek konsumsi ekstrak biji bligo terhadap tingkat proliferasi sel limfosit sebagai indikasi sistem imun atau sifat immunomodulator pada tikus Sprague Dawley. Mempelajari pengaruh ekstrak biji bligo terhadap penghambatan efek toksik dari senyawa xenobiotik tartrazin dan rhodamin terhadap tingkat proliferasi sel limfosit tikus Sprague Dawley.

2  

Hipotesis Hipotesis dalam penelitian ini adalah bahwa ekstrak biji bligo memiliki komponen bioaktif seperti komponen fenolik, terpene (alunsenol dan multiflurenol), flavonoid c-glikosida, dan sterol yang bersifat antioksidan yang dapat diserap sehingga memiliki peranan dalam mempertahankan aktivitas proliferasi limfosit sebagai indikasi respon imun atau sifat immunomodulator. Selain itu komponen fenolik dari ekstrak biji bligo mampu mengurangi efek toksik dari senyawa xenobiotik tartrazin dan rhodamin.

Manfaat Penelitian Manfaat dari penelitian ini adalah memberikan suatu informasi berupa data ilmiah ekstrak biji bligo terhadap peranan untuk pangan dan pemeliharaan kesehatan melalui sifat immunomodulator secara in vivo. Informasi ini diharapkan dapat digunakan sebagai dasar pengembangan pangan fungsional berbasis bligo yang lebih bersaing.

3  

II. TINJAUAN PUSTAKA Bligo (Benincasa hispida Thunb Cogn) Benincasa hispida Thunb Cogn atau sering disebut bligo merupakan tanaman menjalar, berbatang berkayu, lunak, berbulu, warna hijau. Daun tunggal, bulat, tepi rata, ujung tumpul, pangkal membulat, panjang 10-17 cm, lebar 9-15 cm, warna hijau. Bunga tunggal, berkelamin dua, tumbuh di ketiak daun, mahkota berbulu halus, warna kuning. Buah berbentuk seperti buah buni, bulat memanjang, berdaging, panjang 15-20 cm, warna hijau keputih-putihan. Bligo mempunyai banyak nama daerah di Indonesia, antara lain: Kundo (Aceh), Gundur (Gayo), Kudul (Simalur), Undru (Nias), Kundue (Minangkabau), Sardak (Lampung), Butong (Dayak), Leyor (Sunda), Baligo (Jawa), Bhaligu, Kondur (Madura), Kunrulu (Bugis), Laha (Irian) (Hermanto 1993).

Gambar 1. Buah bligo (Benincasa hispida Thunb Cogn) (Anonim 2009) Di Indonesia, bligo digunakan sebagai tanaman obat yang dapat digunakan dalam penyembuhan berbagai penyakit antara lain; biji untuk obat: batu ginjal, demam, kencing manis, pelembut kulit, radang paru, radang usus, sembelit, tonik dan wasir. Buahnya untuk pengobatan: disentri, panas dalam, pendarahan pada organ bagian dalam danonik (Hermanto 1993). Benincasa hispida Thunb Cogn. yang merupakan famili Curcubitaceae dikenal dengan banyak nama antara lain: bhuru kulu atau safet kolu (Gujarat), petha (Hindi), white pumpkin, white gouard atau wax gourd atau ash gourd, chinese preserving melon, hairy melon (English) dan kushmanda (Sansekerta). Buah ini secara tradisional digunakan sebagai laksatif, diuretik, tonik, aphrodisiac, kardiotonik, urynary calkuli, penyakit darah, insanity, epilepsi, dan juga dalam kasus jaundice, dispepsia, demam dan gangguan mentruasi (Kirtikar dan Basu 1975). Buah ini secara umum digunakan sebagai sayuran di India dan negara tropis lainnya juga merupakan tanaman obat yang sering digunakan untuk menyembuhkan penyakit epilepsi dan gangguan syaraf lainnya (Aslokar et al. 1992). Ekstrak metanolik buah ini dilaporkan memiliki khasiat antiulker (Grover et al. 2001), antiinflamasi (Chandrababu et al. 2001), antihistamin dan aktivitas antidepresant (Anilkumar dan Ramu 2002). Selain itu, ekstrak metanol juga memiliki efek menstabilkan sel mast, aktivitas diuretik dan aktivitas nephroprotektif melawan keracunan merkuri pada tikus (Mingyu et al. 1995). Berdasarkan hasil penelitian (Rukumani et al. 2003) bahwa ekstrak metanol Benincasa hispida Thunb Cogn menunjukkan aktivitas antikanker yang signifikan, perlindungan terhadap bronchospasm (gangguan saluran pernafasan) yang diinduksi histamin, aktivitas neotropic dan antidepresan. Menurut Kumar dan Vimalavathini (2004) bahwa kemampuan ekstrak Benincasa hispida terhadap aktivitas anorektik dimediasi melalui sistem saraf pusat tanpa mempengaruhi pengosongan gastrik. Menurut

4  

Qodrie et al. (2009) bahwa Benincasa hispida yang diekstrak dengan etanol secara farmakologi membuktikan manfaatnya sebagai pengontrol suhu tubuh pada saat demam dan menghilangkan nyeri. Pada dosis 250 dan 500 mg/kg bb ekstrak buah ini secara signifikan mampu menurunkan antinociceptive tikus wistar. Menurut Sivarajan (1994) buah ini digunakan untuk pengobatan gastrointestinal, penyakit pernafasan, penyakit jantung, vermifuge, diabetes militus dan penyakit uriner. Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Kumar dan Vimalavathini (2004) menunjukkan bahwa buah Benincasa hispida mengandung fitokimia dari golongan triterpen yaitu alunsenol dan multiflurenol yang mempunyai efek menyetabilkan mast sel pada tikus. Selain itu buah Benincasa hispida Thunb Cogn yang diekstrak dengan metanol, mampu melindungi bronchospasm yang diinduksi oleh histamin. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak buah ini mempunyai aktivitas antihistaminik. Kemampuan perlindungan sudah ditunjukkan pada dosis 50 mg/kg bb dan dosis maksimalnya 400 mg/kg bb, karena diatas dosis ini tidak menunjukkan kenaikan perlindungan yang signifikan. Sedangankan perlindungan yang dilakukan oleh obat antihistaminik chlorphrniramine maleate dan atropine sulfat sudah ditunjukkan pada dosis 2 mg/kg bb. Berdasarkan penelitian Shetty et al. (2008) bahwa ekstrak buah Benincasa hispida Thunb Cogn mempunyai kemampuan penyembuhan pada ulcer di tikus percobaan. Pada penelitian ini menunjukkan bahwa senyawa aktif pada buah ini seperti terpene, flavonoid c-glikosida, dan sterol memiliki efek antioksidan. Senyawa ini menurunkan malondialdehid (MDA), kadar superoksida dismutase (SOD) di dalam sel darah merah, tingkat homogenat dan vitamin C pada plasma darah, jika dibandingkan dengan tikus kontol yang tidak diberi ekstrak buah Benincasa hispida Thunb Cogn. Mekanisme ini memungkinkan terjadinya penghambatan luka mukosa lambung dengan scavenging radikal bebas dan menekan produksi SOD dan vitamin C dalam tikus. Penurunan kadar SOD dan vitamin C pada tikus percobaan diduga disebabkan tingginya senyawa antioksidan pada ekstrak buah Benincasa hispida sehingga tubuh tikus percobaan menekan produksi SOD. Hasil penelitian lain menunjukkan bahwa dari hasil eksplorasi bligo mengandung beberapa senyawa fitokimia yang antara lain; triterpenen (alnusenol, multiflasenol, isomultiflasenol), flavon (iso-vitesix) dan sterol (lupeol, lupeol asetat dan β-sitosterol). Beberapa konstituen penting yang diisolasi dari buah Benincasa hispida Thunb Cogn antara lain: triterpen, sterol dan glikosida serta minyak-minyak volatil (Yoshizumi et al. 1998; Wu et al. 1987). Beberapa komponen yang terdapat pada tanaman dan digunakan sebagai produk herbal antara lain: polisakarida (serat) dan pektin dari daun naupal (Reyburn et al. 1998). Daun dan minyak peppermint mengandung asetaldehida, amyl alcohol, methyl ester, limone, pinene, phellandrene, cardinene, pugelone dan dimethyl sulfide. Komponen minornya terdiri dari alpha-pinene, sabinene, terpinolene, ocimene, gamma-terpinene, fenchene, alpha- dan beta-thujone, citronellol dan senyawa lainnya (Nair 2001; Inoue et al. 2002). Daun bunga dan akar dandelion mengandung quercetin, luteolin, luteolin-7-O-glucoside, p-hydroxyphenylacetic acid, germacranolide acids, clhorogenic acid, chicoric acid. Monocaffeyltartaric acid, scopoletin, aesculetin, aesculin, cichoriin, amidiol, faradiol, caffeic acid, taraxacoside, taraxasterol, inulin dan kandungan kalium yang tinggi (Williams et al. 1995; Hu dan Kitts 2003; Seo et al. 2005). Mullein mengandung harpagoside, harpagide, aucubin, hesperidin, verbascoside, saponin, dan minyak atsiri (Turker dan Camper 2002). Akar dari stinging nettle mengandung polisakarida, vitamin C, karoten, beta sitosterol, flavonoid quercetin, rutin dan kaempferol (Newall et al. 1996; Schottner et al. 1997; Konrad et al. 2000). Di Cina, biji dari buah Benincasa hispida Thunb Cogn digunakan dalam pengobatan antihelmitik (anti cacing). Biji dari buah bligo ini berbentuk seperti biji mentimun tetapi sedikit lebih besar dan berwarna putih kekuningan. Minyak dari biji buah ini memberikan rasa yang pedas, baik

5  

untuk otak dan liver dan efektif untuk pengobatan sifilis. Abu dari biji buah ini untuk pengobatan gonorhoea, pengobatan terhadap luka dan bengkak (Nadkarni’s 1995). Hasil penelitian Sugito (2010) menunjukkan bahwa ekstrak biji bligo tidak toksik pada tikus percobaan dengan dosis 5 g/kg bb dengan metode akut, ekstrak biji bligo juga tidak toksik pada tikus percobaan dengan dosis 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb. Selain itu dari penelitian ini juga didapatkan bahwa ekstrak biji bligo tidak menyebabkan gangguan metabolisme hati, dilihat dari berat hati, SGOT, SGPT, bilirubin, total trigliserida, kolesterol, dan protein total, ekstrak biji bligo secara nyata menurunkan kadar alkali fosfatase, bilirubin total, glukosa, lemak total, dan meningkatkan kadar albumin, dan ekstrak biji bligo tidak menyebabkan gangguan metabolisme ginjal, dilihat dari kadar urea, fosfor, kalsium, dan kalium. Sejumlah tanaman curcubitaceae lainnya juga memiliki aktivitas antikanker dan antioksidan (Yang et al. 2007) seperti Curcubita moscata (buah), Momordica charantia (buah mentah), Cucumis melo (buah matang). Berdasarkan hasil penelitian Rach dan Sunita (2008) bahwa Benincasa hispida Thunb Cogn yang diekstrak dengan petroleum eter dan metanol mempunyai kemampuan antikanker dan antioksidan yang siknifikan terhadap tikus percobaan, dibandingkan dengan Benincasa hispida Thunb Cogn yang diekstrak dengan metanol, etil asetat, aqueous, dan omoprazol. Kumar dan Vimalavathini (2004) menyatakan bahwa Benincasa hispida Thunb Cogn yang diekstrak dengan metanol memiliki kemampuan antibakteri. Ekstrak ini mampu menghambat pertumbuhan Propionibakterium acne dan Staphylococcus epidermidis, dimana kedua bakteri ini menyebabkan inflamasi pada jerawat. Ekstrak buah ini mampu menghambat kedua bakteri uji baik pada metode difusi disk dan difusi agar. Nilai MIC ekstrak buah ini terhadap Propionibakterium acne dan Staphylococcus epidermidis sebesar 0.049 mg/ml dan nilai MBC nya sebesar 0.049 dan 0.186 mg/ml. Dari hasil analisa kimia, ekstrak metanol dari Benincasa hispida Thunb Cogn positif mengandung triterpenoid, flavonoid, carbohidrat, glikosida, vitamin dan asam uronic. Dengan demikian ekstak etanol dari buah ini mampu menghambat inflamasi pada jerawat dengan menghambat pertumbuhan bakteri Propionibakterium acne dan Staphylococcus epidermidis. Berdasarkan uji Toksisitas akut yang dilakukan oleh Qodrie et al. (2009) terhadap ekstrak etanol Benincasa hispida Thunb Cogn menunjukkan bahwa ekstrak ini tidak bersifat lethal sampai penggunaan 5 g/kg bb. Dan tidak menunjukkan adanya gejala keracunan selama dilakukan penelitian.

Tartrazin Tartrazin atau yang juga dikenal sebagai E102 atau FD&C yellow 5 merupakan pewarna sintetik azo dye berwarna kuning lemon yang diperoleh dari coal tar. Tartrazin memiliki nama kimia trinatrium 5-hidroksi-1-(4-sulfonatofenil)-4-[4-sulfanatofenilazo]-H-pirazol-3-karboksilat dengan C.I. No. 19140, nomor CAS 1934-21-0 dan beberapa nama sinonim antara lain acid yellow 23, filter yellow, food yellow 4, C.I. acid yellow 23, dan lain-lain (Burdock 1997). Tartrazin adalah garam trinatrium dari 4,5-dihidro-5-oxo-1-(4-sulfofenil)-4-[sulfofenil-azo]H-pirazol-3-asam karboksilat, berbentuk bubuk berwarna kuning-jingga yang mudah larut dalam air, dengan larutannya berwarna kuning keemasan. Bila dilarutkan dalam asam sulfat pekat, akan terbentuk larutan berwarna kuning-jingga yang akan menjadi kuning bila diencerkan dengan air. Kelarutannya dalam alkohol 95% hanya sedikit, dalam gliserol dan glikol mudah larut. Tartrazin tahan terhadap cahaya, asam asetat, HCl, NaOH 10%. Mudah luntur oleh adanya oksidator, FeSO4 membuat larutan zat berwarna menjadi keruh. Adanya tembaga (Cu) akan mengubah warna kuning menjadi kemerah-merahan. Tartrazin memiliki rumus molekul C16H9N4Na3O9S2 (Winarno 2004).

6  

Pada umumnya tartrazin digunakan dalam dessert (misalnya puding, custard, gelatin, es krim), permen, minuman (termasuk minuman berkarbonasi dan serbuk minuman perisa), daging olahan, dan sayuran beku yang dikalengkan. Selain itu juga digunakan dalam kosmetik dan obat. Tartrazin diizinkan penggunaanya dalam pangan di Indonesia, Malaysia, Amerika Serikat, Australia, dan Eropa (Burdock 1997). Tartrazin dapat menimbulkan reaksi alergi dan intoleransi seperti halnya pada semua pewarna azo dye, terutama pada orang yang menderita asma dan intoleransi terhadap aspirin. Mekanisme sensitifitasnya tidak diketahui dan biasanya disebut psudoalergi. Prevalensi intoleransi tartrazin diperkirakan kurang dari 0.12% dari populasi umum. Gejala sensitifitas tarhadap tartrazin dapat terjadi jika terpapar melalui kulit atau menelan senyawa yang mengandung tartrazin. Reaksi yang timbul antara lain anxiety (rasa takut dan bingung), migrain, depresi klinis, mata buram, gatal, rhinitis, urtikaria, lemah, panas, jantung berdebar, merasa lumpuh, pruritus, kulit bengkak dengan warna ungu, dan gangguan pola tidur. Pada kasus yang jarang, gejala sensitifitas tartrazin dapat timbul bahkan pada dosis kecil dan dapat berlangsung sampai 72 jam setelah terpapar. Beberapa peneliti menghubungkan tartrazin dengan gangguan obsessive-compulsive dan hiperaktif pada anak-anak. Menurut Depkes (1999) batas penggunaan maksimum tartrazin di Indonesia adalah 18-300 mg/kg. Menurut Inchem (1964), ADI tartrazin adalah 0-7.5 mg/kg bb.

Rhodamin Rhodamin adalah salah satu zat pewarna sintetis yang biasa digunakan pada industri tekstil dan kertas. Zat ini ditetapkan sebagai zat yang dilarang penggunaannya pada makanan melalui Menteri Kesehatan (Permenkes) No.239/Menkes/Per/V/85 dan menurut Inchem (2006) LD50 rhodamin adalah sebesar 89.5 mg/kg. Namun penggunaan rhodamin dalam makanan masih terdapat di lapangan. BPOM di Makassar berhasil menemukan zat rhodamin B pada kerupuk, sambal botol, dan sirup melalui pemeriksaan pada sejumlah sampel makanan dan minuman. Rhodamin B ini juga adalah bahan kimia yang digunakan sebagai bahan pewarna dasar dalam tekstil dan kertas. Pada awalnya zat ini digunakan untuk kegiatan histologi dan sekarang berkembang untuk berbagai keperluan yang berhubungan dengan sifatnya dapat berfluorensi dalam sinar matahari (Marmion 1991). Rumus Molekul dari rhodamin B adalah C28H31N2O3Cl dengan berat molekul sebesar 479000. Zat yang sangat dilarang penggunaannya dalam makanan ini berbentuk kristal hijau atau serbuk ungu kemerah-merahan, sangat larut dalam air yang akan menghasilkan warna merah kebirubiruan dan berfluorensi kuat. Rhodamin B juga merupakan zat yang larut dalam alkohol, HCl, dan NaOH, selain dalam air. Di dalam laboratorium, zat tersebut digunakan sebagai pereaksi untuk identifikasi Pb, Bi, Co, Au, Mg, dan Th dan titik leburnya pada suhu 165ºC (Winarno 2004). Dalam analisis dengan metode destruksi dan metode spektrofometri, didapat informasi bahwa sifat racun yang terdapat dalam rhodamin B tidak hanya saja disebabkan oleh senyawa organiknya saja tetapi juga oleh senyawa anorganik yang terdapat dalam rhodamin B itu sendiri, bahkan jika rhodamin B terkontaminasi oleh senyawa anorganik lain seperti timbal dan arsen (Subandi 1999). Dengan terkontaminasinya rhodamin B dengan kedua unsur tersebut, menjadikan pewarna ini berbahaya jika digunakan dalam makanan. Ciri makanan yang mengandung rhodamin B adalah warna kelihatan cerah (berwarna-warni), sehingga tampak menarik, ada sedikit rasa pahit (terutama pada sirup atau limun), muncul rasa gatal di tenggorokan setelah mengonsumsinya, dan baunya tidak alami sesuai makanannya. Di dalam rhodamin B sendiri terdapat ikatan dengan klorin (Cl) yang dimana senyawa klorin ini merupakan senyawa anorganik yang reaktif dan juga berbahaya. Reaksi untuk mengikat ion klorin

7  

disebut sebagai sintesis zat warna. Disini dapat digunakan reaksi Frield-Crafts untuk mensintesis zat warna seperti triarilmetana dan xentana. Rekasi antara ftalat anhidrida dengan resorsinol dengan keberadaan seng klorida menghasilkan fluoresein. Apabila resorsinol diganti dengan N-Ndietilaminofenol, reaksi ini akan menghasilkan rhodamin B (Kusmayadi dan Sukandar 2009). Selain terdapat ikatan rhodamin B dengan klorin terdapat juga ikatan konjugasi. Ikatan konjugasi dari Rhodamin B inilah yang menyebabkan Rhodamin B bewarna merah. Ditemukannya bahaya yang sama antara rhodamin B dan klorin membuat adanya kesimpulan bahwa atom klorin yang ada pada rhodamin B yang menyebabkan terjadinya efek toksik bila masuk ke dalam tubuh manusia. Atom Cl yang ada sendiri adalah termasuk dalam halogen, dan sifat halogen yang berada dalam senyawa organik akan menyebabkan toksik dan karsinogen (Kusmayadi dan Sukandar 2009). Beberapa sifat berbahaya dari rhodamin B seperti menyebabkan iritasi bila terkena mata, menyebabkan kulit iritasi dan kemerahan bila terkena kulit hampir mirip dengan sifat dari klorin yang seperti disebutkan di atas berikatan dalam struktur rhodamin B. Penyebab lain senyawa ini begitu berbahaya jika dikonsumsi adalah senyawa tersebut adalah senyawa yang radikal. Senyawa radikal adalah senyawa yang tidak stabil. Dalam struktur rhodamin kita ketahui mengandung klorin (senyawa halogen), sifat halogen adalah mudah bereaksi atau memiliki reaktivitas yang tinggi maka dengan demikian senyawa tersebut karena merupakan senyawa yang radikal akan berusaha mencapai kestabilan dalam tubuh dengan berikatan dengan senyawa-senyawa dalam tubuh kita sehingga pada akhirnya akan memicu kanker pada manusia. Klorin sendiri pada suhu ruang berbentuk sebagai gas. Sifat dasar klorin sendiri adalah gas beracun yang menimbulkan iritasi sistem pernafasan. Efek toksik klorin berasal dari kekuatan mengoksidasinya. Bila klorin dihirup pada konsentrasi di atas 30 ppm, klorin mulai bereaksi dengan air dan sel-sel yang berubah menjadi asam klorida (HCl) dan asam hipoklorit (HClO). Ketika digunakan pada tingkat tertentu untuk desinfeksi air, meskipun reaksi klorin dengan air sendiri tidak mewakili bahaya utama bagi kesehatan manusia, bahan-bahan lain yang hadir dalam air dapat menghasilkan disinfeksi produk sampingan yang dapat merusak kesehatan manusia. Klorit yang digunakan sebagai bahan disinfektan yang digunakan dalam kolam renang pun berbahaya, jika terkena akan menyebabkan iritasi pada mata dan kulit manusia (Kusmayadi dan Sukandar 2009).

Limfosit Limfosit adalah bagian dari sel darah putih (leucocytes) yang tidak memiliki granula dalam sitoplasma (Kuby et al. 2007). Limfosit merupakan sel berukuran kecil, memiliki bentuk bulat dengan diameter 7-15 µm dan banyak terdapat pada organ limfoid seperti limfa, kelenjar limfe, dan timus. Sel ini merupakan inti dalam proses respon imun spesifik karena sel-sel limfosit dapat mengenal setiap jenis antigen, baik antigen yang terdapat pada intraselular maupun ekstraselular (Kresno 1996). Guyton dan Hall (2006) mengatakan bahwa limfosit manusia berjumlah sekitar 30% dari jumlah normal sel darah putih. Limfosit dapat membentuk ratusan jenis antibodi dan limfosit sensitif yang berbeda-beda. Masing-masing jenis, sifatnya spesifik untuk suatu antigen yang khusus dan tiap jenisnya dapat menggandakan diri mencapai jumlah yang sangat besar apabila distimulasi oleh antigen spesifik yang jumlahnya cukup. Limfosit dibawa ke hampir semua jaringan dan organ vertebrata tingkat tinggi lewat dua jaringan sirkulasi, darah dan sistem limfa. Limfosit terdapat sebanyak 20-80% dari sel bernukleasi dalam darah dan lebih dari 99% dalam cairan limfatik (limfa) (Weissman et al. 1978). Limfosit dibentuk di dalam sumsum tulang dan berdiferensiasi menjadi sel limfosit B dan limfosit T. Berdasarkan fungsinya terdapat tiga kelompok sel limfosit, yaitu sel limfosit B, sel limfosit

8  

T, dan sel limfosit NK (Natural Killer). Sel limfosit B dan T memiliki reseptor pada permukaan yang mampu mengenali antigen tertentu, sedangkan sel limfosit NK tidak mempunyai reseptor untuk mengenal antigen. Pada manusia normal, sel limfosit B berjumlah 5-15% dan sel limfosit T berjumlah sekitar 65-80% dari jumlah limfosit dalam tubuh. Kedua sel tersebut berperan sebagai respon spesifik di mana sel limfosit B berperan di dalam respon imun humoral dan sel limfosit T berfungsi dalam sistem imun seluler, sedangkan sel limfosit NK (Natural Killer) berperan dalam respon imun nonspesifik (Harris 1991). Sel limfosit B merupakan sel yang berasal dari sel stem dalam sumsum tulang belakang, tumbuh menjadi sel plasma yang menghasilkan antibodi dan sel memori. Limfosit B termasuk sistem perthanan humoral yaitu tidak menggunakan sel dalam melawan antigen tetapi menghasilkan zat yaitu berbagai jenis antibodi yang digunakan untuk melawan antigen (Sheeler dan Bianchi 1982). Sel limfosit B dewasa memiliki imunoglobulin permukaan atau Surface Immunoglobulin (sIg) yang bertindak sebagai reseptor antigen spesifik, terdapat 1.5 x 105 molekul sIg pada permukaan membrane sel limfosit B yang memiliki status peningkatan sesuai dengan antigen tertentu. Sel limfosit B dewasa bergerak ke jaringan limfoid primer dan sekunder untuk dapat memberikan respon terhadap rangsangan antigenik dengan cara pembelahan dan diferensiasi menjadi sel plasma dan sel memori dibawah kontrol sitokin, khususnya limfokin yang disekresi oleh sel limfosit T (Roitt dan Delves 2001). Sel limfosit T merupakan sistem pertahanan seluler termasuk leukosit non fatogenik yang berasal dari stem sel (sumsum tulang belakang), kemudian bermigrasi ke organ timus untuk menjadi dewasa. Sel limfosit T membelah diri di dalam organ timus dengan sangat cepat. Sel limfosit T dalam proses pendewasaannya mengalami diferensiasi menjadi tiga bentuk, yaitu sel Thelper (Th), Tsuppresor (Ts), dan Tcytotoxic (Tc). Sel Thelper merupakan sel limfosit T yang berperan dalam stimulasi antibodi dan aktivasi makrofag dengan cara mengsekresikan molekul yang disebut sitokin. Sel Tsuppresor berperan menekan aktivitas sel limfosit T yang lain dan mempunyai aktivitas menurunkan produksi antibodi. Sel Tcytotoxic berperan untuk menghacurkan sel alogenik dan sel sasaran yang terinfeksi patogen intraseluler seperti virus (Baratawijaya 2007). Menurut Roitt dan Delves (2001) sel Thelper dapat dibedakan dari sel Tcytotoxic berdasarkan adanya glikoprotein yang berbeda pada permukaan membran mereka. Sel limfosit T yang memiliki CD4 berfungsi sebagai sel Thelper sedangkan sel limfosit T yang memiliki CD8 pada permukaan membrannya berfungsi sebagai sel Tcytotoxic. Sel limfosit T memiliki T Cell Antigen Receptor (TCR) yang dapat mengenali epitop suatu antigen melalui kerjasama dengan molekul protein permukaan pada Antigen Presenting Cell (APC) yaitu Mayor Histocompatibility Complex (MHC). Sel limfosit T teraktivasi oleh antigen spesifik sehingga terstimulasi untuk berproliferasi dan berdiferensiasi menjadi sel T memori dan berbagai sel T efektor yang mengsekresikan berbagai sitokin. Sitokin ini berpengaruh pada aktivasi sel B, sel Tc, sel-sel fagosit, sel NK, dan sel lain yang terlibat dalam respon imun. Sel limfosit NK atau Natural Killer termasuk sel nul karena tidak memiliki reseptor antigen pada permukaan tetapi memiliki reseptor untuk komplemen (C) dan fragmen molekul antibodi (Kresno 1996). Sel limfosit NK memiliki granula yang banyak seperti granula azurofilik dan ukuran lebih besar dari sel limfosit B dan T sehingga dikenal dengan LGL (Roitt dan Delves 2001). Sel limfosit NK berfungsi sebagai sel efektor sitolitik yang dapat menyerang dan melisis sel target yaitu sel abnormal seperti sel neoplastik, sel terinfeksi virus atau patogen seluler, dan sel normal yang tidak dewasa (Roitt dan Delves 2001).

9  

Proliferasi Limfosit Proliferasi limfosit adalah suatu fungsi biologis, yaitu proses perbanyakan sel melalui pembelahan sel atau mitosis sebagai respon terhadap antigen atau mitogen. Proses tersebut menghasilkan sel-sel efektor atau sel-sel plasma yang berperan dalam respon spesifik dan non spesifik. Jika sel dikultur dengan senyawa mitogen, sel limfosit akan berproliferasi secara non spesifik. Respon proliferasi limfosit digunakan untuk menggambarkan fungsi limfosit dan status imun individu (Zakaria et al. 2003). Kemampuan sel limfosit untuk berproliferasi atau membentuk klon, menunjukkan secara tidak langsung kemampuan respon imunologik. Uji aktivitas sel limfosit dapat dilakukan secara in vitro dan merupakan indikator kualitas respon imun. Berbagai jenis bahan pangan seperti jahe, kunyit, dan bawang putih telah diketahui dan diteliti memiliki aktivitas imunostimulan, yaitu meningkatkan kemampuan proliferasi sel limfosit untuk meningkatkan sistem imunitas (Zakaria et al. 2003). Mitogen adalah agen yang mampu menginduksi pembelahan sel, baik sel T maupun sel B dalam persentase tinggi. Mitogen dikenal sebagai aktivator poliklonal karena dapat mengaktivasi banyak klon sel T atau sel B tanpa tergantung spesifitas antigennya. Stimulasi limfosit dengan antigen atau mitogen mengakibatkan berbagai reaksi biokimia di dalam sel, di antaranya adalah fosforilasi nukleoprotein, pembentukan DNA dan RNA, serta peningkatan metabolisme lemak, dan lain-lain. Aktivitas sel T dan sel B berproliferasi ini dapat diukur melalui Indeks Stimulasi (IS) (Zakaria et al. 2000). Beberapa jenis mitogen yang umum merupakan protein yang mengikat gula yang disebut lektin, yang secara spesifik mengikat glikoprotein pada pada permukaan berbagai sel, termasuk limfosit. Pengikatan molekul lektin ke glikoprotein membran sering memicu aglutinasi, atau pengklusteran sel, yang kemudian memicu aktivasi seluler dan proliferasi (Bartosz 1990). Menurut Tizar (1988), mitogen yang sering digunakan dalam proliferasi limfosit dapat berupa senyawa lektin dan non lektin. Contoh mitogen berupa senyawa lektin adalah PHA (Phytohaemagglutinin), PWM (Pokeweed), dan contoh mitogen berupa senyawa non lektin adalah Con A (Concanavalin A), dan LPS (Lipopolisakarida). Senyawa Con A berasal dari ekstrak tanaman kacang jaks (Conavalin ensiformis). LPS berasal dari suatu bakteri Gram negatif seperti E. coli dan Salmonella thyphymurium. Menurut Lao et al. (2001) aktivitas mitogen bersifat spesifik, seperti Con A dan PHA umumnya menginduksi proliferasi limfosit sel T, LPS menginduksi sel B, sedangkan PWM menginduksi sel T dan B. Pengujian proliferasi sel dapat dilakukan dengan pewarnaan MTT (3-[4,5-dimetilthiazol2yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide; thiazolyl blue) yang ditambahkan pada media kultur (5 mg/ml) (Wyllie et al. 1998). Prinsip dari metode MTT ini adalah reduksi enzim suksinat dehidrogenase pada sel dari garam tetrazolium (MTT) yang berwarna kuning menjadi kristal biru formazan yang kemudian dihitung absorbansinya menggunakan microplate reader atau ELISA Reader pada λ 570 nm. Enzim suksinat dehidrogenase merupakan enzim yang disintesis oleh semua sel pada mitokondria. Semakin banyak terbentuk warna formazan, berarti jumlah enzim yang menghidrolisis garam tetrazolium juga banyak dan hal ini menunjukkan jumlah sel yang hidup banyak (Bounous 1992). Selain dengan metode MTT, terdapat juga jenis metode pengujian proliferasi sel lainnya, yaitu dengan menggunakan metode pewarnaan biru trifan dan dilihat menggunakan mikroskop pada perbesaran 400 kali. Prinsip metode ini adalah penyerapan zat warna melalui membran sel, biru trifan hanya dapat mewarnai jika sel tersebut rusak, sehingga digunakan untuk membedakan sel yang mati atau rusak dengan sel yang hidup. Sel yang hidup memiliki bentuk bulat dan berwarna terang,

10  

sedangkan sel yang mati memiliki bentuk mengkerut dan berwarna biru. Sel mati tesebut berwarna biru disebabkan pecahnya dinding sel yang mengakibatkan warna biru dari biru trifan dapat masuk dan mewarnai keseluruhan sel (Shaper 1998).

Kultur Sel Kultur sel merupakan teknik mengembangbiakkan sel di luar tubuh (in vitro). Kultur sel biasanya dilakukan pada sel limfosit. Biakan sel atau jaringan akan diamati untuk mempelajari sifat sel di luar tubuhnya. Pelaksanaan kultur sel secara in vitro ini memerlukan kondisi pertumbuhan yang mirip dengan kondisi di dalam tubuh meliputi pengaturan temperatur, konsentrasi O2 dan CO2, pH, tekanan osmosis, dan kandungan nutrisi (Davis 1994). Pengaturan kondisi untuk pertumbuhan merupakan suatu keuntungan karena kondisi fisiologis dari kultur sel relatif konstan, sedangkan kekurangannya adalah hilangnya spesifitas sel, karena sel bekerja tidak secara terintegritas dalam suatu jaringan, tetapi selnya terpisah-pisah. Kultur sel dilakukan dalam media yang kondisinya steril, butuh keahlian dan keterampilan khusus dan biaya relatif mahal (Malole 1990). Menurut Freshney (1994), terdapat beberapa perbedaan karakteristik sel dalam kultur (in vitro) dengan sel di dalam tubuh (in vivo). Interaksi yang spesifik antar sel pada jaringan secara in vitro hilang karena sel tersebar dan mudah bergerak, laju pertumbuhan sel meningkat karena ada kemungkinan berproliferasi. Lingkungan kultur kekurangan beberapa komponen yang mempengaruhi pengaturan homeostatik tubuh seperti sistem saraf dan sistem endokrin. Energi yang dibutuhkan dalam metabolisme in vitro berasal dari glikolisis, sedangkan meabolisme sel secara in vivo berasal dari glikolisis, daur Krebs, dan transpor elektron. Media pertumbuhan kultur sel berfungsi mempertahankan pH, menyediakan lingkungan yang baik, sehingga sel dapat bertahan hidup, berkembang dan berdiferensiasi dan menyediakan substansisubstansi yang tidak dapat disintesis oleh sel itu sendiri. Nutrisi yang umumnya terkandung adalah asam amino, vitamin, glukosa atau gula lain, garam, dan protein tertentu. Pemilihan media harus didasarkan pada kebutuhan sel yang ditumbuhkan dan disesuaikan dengan tujuan dari studi penggunaan sel tersebut. Media yang sering digunakan untuk kultur sel limfosit adalah RPMI-1640. RPMI (Rosewell Park Memorial Institut). Selain RPMI-1640 terdapat juga RPMI-1630 dan RPMI1629 (Davis 1994). Dalam pembuatan media kultur sel, dilakukan penambahan buffer dan antibiotik. Penambahan buffer bertujuan menjaga keseimbangan pH yaitu memiliki pH 7.4 karena jika pH sedikit lebih rendah dari pH 7, pertumbuhan sel akan terhambat (Freshney 1994). Buffer yang sering digunakan adalah NaHCO3. Penambahan antibiotik bertujuan mencegah kontaminasi media. Antibiotik yang berbeda mempunyai spektrum antimikroba yang berbeda seperti Penicilin merupakan antimikroba untuk bakteri gram positif, Streptomicin untuk bakteeri gram positif dan negatif, sedangkan Gentamicin untuk bakteri gram positif, negatif, dan mikroplasma (Freshney 1994). Selain itu juga ditambahkan serum untuk menunjang pertumbuhan sel di luar tubuh dan pelekatan sel. Serum yang biasanya digunakan sebagai suplemen standar adalah serum janin sapi (Fetal Calf Serum atau Fetal Bovine Serum), karena kaya dengan faktor pertumbuhan dan rendahnya kandungan gamma globulin. Penambahan serum berkisar 5-20% (Walun et al. 1990). Disamping medium, jumlah atau konsentrasi sel yang dikulturkan harus diperhatikan. Jumlah sel limfosit yang dikulturkan sekitar 1-4 x 106 sel/ml, karena sel limfosit tidak dapat bertahan hidup dan tumbuh pada konsentrasi sel yang rendah atau kurang dari 1.5 x 105 sel/ml (Bellanti 1993). Sel limfosit memerlukan O2 untuk bertahan hidup. Kondisi O2 yang rendah masih dapat mendorong proses proliferasi, tetapi pertumbuhannya tidak berlangsung lama dalam kondisi anaerob.

11  

Temperatur kultur dipertahankan 37oC. konsentrasi 5 % CO2 dan 95% udara bertujuan membuat kondisi yang sama dengan kondisi di dalam tubuh. Temperatur dapat mempengaruhi pH melalui peningkatan kelarutan CO2 misalnya pada temperatur rendah akan terjadi perubahan ionisasi sehingga terjadi perubahan pH (Freshney 1994). Kultur sel limfosit dapat digunakan sebagai model uji toksisitas karena limfosit adalah sel yang bertanggungjawab terhadap respon imun spesifik, dimana sel tersebut mempunyai kemampuan untuk mengenal berbagai macam antigen yang berbeda (Cambier 1987). Lebih dari satu juta struktur antigenik dapat dibedakan karena kemampuan pengenalan yang dimiliki limfosit. Limfosit mempunyai fungsi yang paling beragam dibanding semua sel dalam sistem imun. Menurut Kresno (1996), sel limfosit mampu mengenal setiap jenis antigen baik antigen yang terdapat pada intraseluler maupun ekstraseluler misalnya dalam cairan tubuh atau dalam tubuh.

Tikus Percobaan Tikus putih merupakan hewan yang paling banyak digunakan sebagai hewan model untuk percobaan laboratorium. Hal ini disebabkan karena tikus putih sangat produkstif dan mudah dalam pengelolaannya. Selain itu, siklus hidup dari hewan ini relatif pendek, jumlah anak perkelahiran banyak, serta sifat produksi dan reproduksinya menyerupai hewan mamalia (Mariwaki 1987). Tikus putih termasuk dalam Kingdom Animalia, Kelas Mammalia, Ordo Rodentia, Subordo Myomorpha, Superfamili Muroidea, Famili Muridae, Subfamili Murinae, Genus Rattus dan Spesies Rattus sp (Robinson 1979). Penelitian toksikologi suatu sampel memerlukan serangkaian percobaan in vivo melibatkan hewan uji dengan harapan mendapatkan estimasi keamanan atau tingkat toksisitas suatu sampel pada manusia. Tikus laboratorium berasal dari tikus liar yang sudah didomistikasi. Mencit laboratorium biasanya berwarna putih, matanya berwarna merah dan biasanya tidak terlalu agresif. Secara garis besar, fungsi dan bentuk organ, proses biokimia dan biofisik antara tikus dan manusia memiliki banyak kemiripan. Perbedaan antara tikus dan manusia antara lain terdapat pada struktur dan fungsi plasenta tikus; tingkat pertumbuhan tikus yang lebih cepat dari manusia; kekurangpekaan tikus pada senyawa neurotoksik dan teratogen. Tikus dapat membuat vitamin C sendiri sedangkan sumber vitamin C manusia hanya melalui makanan. Berbeda dengan manusia, tikus tidak mempunyai kantung empedu (Koeman 1987). Terdapat lima galur tikus putih, yaitu galur Sprague Dawley, Wistar, Sherman, OsborneMendel dan Long-Evans. Untuk studi kesehatan dan penyakit pada manusia, tikus Sprague Dawley merupakan model yang sangat bagus untuk toksikologi, reproduksi, farmakologi dan tingkah laku. Galur Sprague Dawley yang umum digunakan untuk penelitian mempunyai ciri berwarna putih albino, berkepala kecil dan ekornya lebih panjang dari badannya (Malole dan Pramono 1989). Berikut ini beberapa karakteristik anatomis dan fisiologis tikus Sprague Dawley: Rumus gigi tikus Sprague Dawley adalah 2 (I 1/1, M 3/3) = 16. Gigi seri tumbuh terus menerus. Tikus akan menggigit atau menjepit dengan gigi serinya yang tajam jika salah penanganan. Esofagus masuk ke lambung melewati lubang yang kecil karena ada lipatan jaringan pada lambung. Karena struktur anatomis tersebut, tikus tidak mampu muntah. Seperti kuda, tikus tersebut tidak mempunyai kantung empedu. Paru-paru kiri terdiri dari satu lobus sementara paru-paru kanan terdiri atas empat lobus. Tikus memiliki lima pasang kelenjar susu. Distribusi jaringan mammae tersebar, dari garis tengah ventral melewati panggul, toraks dan bagian leher. Uretra tikus betina tidak berhubungan dengan vagina atau vulva. Kelenjar membrane niktitasi (kelenjar Harderian) merupakan kelenjar lakrimal terpigmentasi yang teletak di belakang bola mata, melingkari saraf optik. Hasil sekresi dari kelenjar

12  

ini kaya akan lemak dan porfirin. Meskipun banyak spesies lain memiliki kelenjar Harderian, pada tikus kelenjar ini memiliki fungsi khusus. Selama masa stress dan atau sakit tertentu, air mata mengalir dan mewarnai wajah di sekitar mata dan hidung. Ketika air mata mengering, pigmen tersebut memberikan warna seperti darah kering. Pigmen tersebut akan berpendar saat dipaparkan pada sinar ultraviolet dan mengandung sedikit darah atau tidak sama sekali. Respon tikus terhadap penurunan suhu ruang/kandang berupa termogenesis tanpa gemetar. Sedangkan saat suhu kandang meningkat, terjadi vaskularisasi pada ekornya yang panjang, yang juga berperan sebagai organ termoregulator. Sebagian besar termogenesis tersebut terjadi pada jaringan lemak yang coklat, konsentrasi yang paling tinggi ditemukan pada jaringan subkutan di antara skapula (Malole dan Pramono 1989). Tabel 1. Data Biologis Tikus Kriteria Berat badan dewasa jantan Berat badan dewasa betina Berat lahir Suhu tubuh Harapan hidup Konsumsi makanan Konsumsi air minum Jumlah pernafasan Penggunaan oksigen Detak jantung Volume darah Tekanan darah Lama produksi ekonomis Lama bunting Umur sapih Umur dewasa kelamin Jumlah anak per kelahiran Kecepatan pertumbuhan

Nilai 450-520 g 250-300 g 5-6 g 35,9-37,5°C 2,5-3,5 tahun 10 g/100 g/hari 10-12 mL/100 g/hari 70-115/menit 0,68-1,10 mL/g/hari 250-450/menit 54-70 mL/kg 84-134/60 mmHg 9 bulan 19-21 hari 21 hari 35 hari 6 sampai 15 1 gram/hari

Sumber : Malole dan Pramono (1989)

13  

III. METODOLOGI Waktu dan Tempat Penelitian dilaksanakan pada bulan Febuari 2010 sampai April 2010, bertempat Laboratorium Bersama Hewan Percobaan Departemen ITP dan SEAFAST CENTER IPB, Laboratorium Kimia Pangan, Laboratorium Biokimia Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan Fateta IPB, dan Laboratorium Terpadu Fakultas Kedokteran Hewan IPB.

Alat dan Bahan

a. b. c. d. e. f.

a. b. c. d.

Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain: Alat untuk pemeliharaan tikus, yaitu: kandang plastik dengan tutup yang terbuat dari kawat, botol minum, wadah pakan, dan timbangan. Alat untuk pembuatan ekstrak biji bligo, yaitu: blender kering, blender basah, kain kasa, botol, gelas piala, dan tabung reaksi. Alat untuk pemberian ekstrak biji bligo pada tikus, yaitu: alat sonde (syringe yang dilengkapi dengan jarum berujung bundar). Alat untuk anastesi tikus, yaitu: toples kaca besar. Alat untuk pengambilan sampel limfa, yaitu: alat bedah, alumunium foil, dan cawan petri steril. Alat untuk analisis proliferasi limfosit, yaitu: laminar flow hood steril, pipet mikro, tabung sentrifuse steril, syringe steril, pipet pasteur steril, sentrifuse, hemasitometer, microplate 96 sumur, ELISA reader, mikroskop, mikroskop inverted, inkubator, timer, dan counter. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain: Bahan untuk pemeliharaan tikus, yaitu: air minum dalam kemasan dan ransum yang mengikuti standar AIN 1976. Bahan untuk pembuatan ekstrak biji bligo, yaitu: biji bligo kering dan air akuades. Bahan untuk euthanasia tikus, yaitu: eter atau kloroform, dan alkohol 70%. Bahan untuk analisis proliferasi limfosit, yaitu: limfa tikus, RPMI-1640, Phosphat Buffer Saline (PBS), Fetal Bovine Serum (FBS), NH4Cl 0.85% steril, biru trifan, 3-[4,5-dimetilthiazol2yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide; thiazolyl blue (MTT), Lipopolisakarida (LPS) Salmonella thyphimurium, Tartrazin 0.3 mg/ml, 0.6 mg/ml, 0.9 mg/ml, Rhodamin 20 µg/ml, 40 µg/ml, 60 µg/ml, dan HCl-isopropanol 0.04 N.

Metode Penelitian Pembuatan Ekstrak Bligo (mengacu Sugito 2010)

a. b.

Pembuatan ekstrak bligo dilakukan melalui tahapan sebagai berikut: Biji bligo kering yang didapat dari Fytagoras BV Plant Science Belanda digiling dengan menggunakan disk mill, kemudian diayak dengan ayakan 70 mesh. Tepung biji bligo ditambahkan dengan aquades. Untuk pembuatan ekstrak dengan dosis 0.1 g/kg bb, tiap 1 g bubuk biji bligo ditambahkan 50 ml akuades kemudian didiamkan selama 10

14  

c.

menit sambil diaduk. Untuk dosis 1 g/kg bb, tiap 1 g bubuk biji bligo ditambahkan 5 ml akuades kemudian didiamkan selama 10 menit sambil diaduk. Selanjutnya, agar homogen ekstrak disaring dengan menggunakan saringan 70 mesh.

Pemeliharaan Tikus (mengacu Sugito 2010) Tahap-tahap pemilihan dan pemeliharaan tikus, sebagai berikut: 1. Tikus Sprague Dawley jantan dan betina berumur sekitar 2 bulan dikelompokkan menjadi tiga kelompok. Tiap kelompok terdiri dari 8 tikus jantan dan 2 betina. Selisih berat rata-rata kelompok tidak lebih dari 5 g. 2. Kelompok 1 merupakan kontrol negatif, kelompok kedua diberikan ekstrak biji bligo sebanyak 0.1 g/kg bb, sedangkan kelompok 3 diberikan ekstrak biji bligo sebanyak 1 g/kg bb. Ransum yang digunakan sesuai dengan standar AIN (1976), ransum dan air diberikan secara ad libitum. 3. Tikus diadaptasi selama 10 hari. Setelah masa adaptasi selesai, tiap harinya tikus kelompok 1 disonde dengan air; tikus kelompok 2 disonde dengan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb; sementara tikus kelompok 3 disonde dengan ekstrak bligo 1 g/kg bb. 4. Tikus dipelihara selama 90 hari (3 bulan). 5. Pengamatan kondisi tikus mencakup observasi tanda-tanda klinis, berat badan dan konsumsi pakan. Tabel 2. Komposisi Bahan dalam 100 g Pakan No 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Bahan Kasein Minyak jagung Serat (CMC) Campuran mineral Vitamin Air Karbohidrat (Maizena)

Berat (g) 23.06 4.79 5.00 3.25 1.00 8.77 54.13

Komposisi vitamin: vitamin A (1000 IU), vitamin B1 (1,4 mg), vitamin B2 (1,6 mg), vitamin B6 (2 mg), Vitamin B12 (3 mg), vitamin C (60 mg), vitamin D (100 IU), vitamin E (5 mg), nikotinamida (9 mg), kalsium pantotenal (5 mg). Campuran mineral : NaCl (139,3 mg), KI (0,790 mg), KH2PO4 (389 mg), MgSO4.7H2) (57,3 mg), CaCO3 (381,4 mg), FeSO4.7H2O (27 mg), MnSO4.7H2O (4,01 mg), ZnSO4.7H2O (0,548 mg), CuSO4.5H2O (0,477 mg) dan CoCl2.6H2O (0,023 mg).

Pengukuran Proliferasi Sel Limfosit Limfa A. Isolasi limfosit limfa (Prangdimurti 1999) Tikus yang sudah diterminasi dengan cara pembiusan diambil organ limfanya secara steril, kemudian dicuci dengan 5 ml PBS dalam botol steril selanjutnya pekerjaan dilakukan di bawah laminar flow hood steril. Limfa dipindahkan ke dalam cawan petri steril yang berisi 5 ml RPMI-1640. Limfa tersebut digerus sampai homogen dengan syringe steril, selanjutnya dimasukkan dengan pipet

15  

pasteur ke dalam tabung sentrifuse 15 ml steril. Suspensi kemudian disetrifuse dengan kecepatan 2500 rpm (559.5 g) selama 10 menit. Supernatan dibuang, pelet (bagian bawah) dijentik-jentikkan, ditambah 2 ml NH4Cl 0.85% steril, didiamkan selama 2 menit, kemudian ditambahkan 3 ml RPMI1640, selanjutnya disentrifuse dengan kecepatan 2500 rpm (559.5 g) selama 5 menit. Supernatan yang berisi sel darah merah yang lisis dibuang. Pelet dijentik-jentikkan, ditambahkan 5 ml RPMI-1640, lalu disentrifuse dengan kecepatan 2500 rpm (559.5 g) selama 5 menit. Endapan sel limfosit disuspensikan dengan 5 ml RPMI-1640 lengkap yang sudah ditambah antibiotik.

B. Penghitungan sel limfosit limfa Sebelum dilakukan pengkulturan suspensi sel limfosit, dilakukan penghitungan sel limfosit dengan biru trifan. Suspensi sel limfosit sebanyak 50 µl ditempatkan dalam sumur microplate, ditambah 50 µl biru trifan (perbandingan 1:1). Perhitungan sel limfosit dilakukan dengan hemasitometer di bawah mikroskop pada pembesaran 400 kali, perhitungan dilakukan pada sel yang hidup (sel yang akan dikultur 95% hidup). Sel hidup tampak terang, jernih, dan berbentuk bulat, sedangkan sel yang mati akan berwarna biru mengkerut. Berdasarkan hasil perhitungan pada area 2 kotak besar (@ 16 kotak kecil) kemudian ditentukan jumlah sel yang hidup setiap mililiter suspensi dengan rumus: N = V/2 x FP x 104 sel/ml Keterangan: N = jumlah sel/ml V/2 = rata-rata jumlah sel terhitung dari 2 bidang pandang berlawanan FP = Faktor Pengenceran 104 = jumlah sel per luas bidang pandang (1.0 mm x 1.0 mm x 0.1 mm)

C. Pengujian proliferasi sel limfosit limfa menggunakan MTT (mengacu Puspaningrum 2003; Keller et al. 2005) Tujuannya melihat kemampuan proliferasi sel limfosit melalui teknik kultur. Suspensi sel limfosit ditepatkan menjadi 2 x 106 sel/ml melalui pengenceran dengan RPMI-1640. Selanjutnya dikultur dalam microplate 96 sumur, ke dalam tiap sumur dimasukkan 60 µl suspensi sel limfosit, kemudian setiap kultur ditambah 30 µl RPMI-1640 lengkap untuk kultur kontrol, atau 30 µl mitogen LPS S. thyphimurium (0.417 mg dalam 10 ml PBS) sehingga konsentrasinya 12.5 µg/ml kultur, atau 30 µl tartrazin 0.3 mg/ml sehingga konsentrasinya menjadi 90 µg/ml kultur, tartrazin 0.6 mg/ml sehingga konsentrasinya menjadi 180 µg/ml kultur, atau tartrazin 0.9 mg/ml sehingga konsentrasinya menjadi 270 µg/ml kultur, atau 30 µl rhodamin 20 µg/ml sehingga konsentrasinya menjadi 6 µg/ml kultur, rhodamin 40 µg/ml sehingga konsentrasinya menjadi 12 µg/ml kultur, atau rhodamin 60 µg/ml sehingga konsentrasinya menjadi 18 µg/ml kultur. Tiap suspensi sel limfosit limfa tikus dikultur dalam 3 sumur atau dibuat triplo. Selanjutnya ke dalam tiap sumur ditambah 10 µl FBS sehingga volume tiap sumur berisi 100 µl. Kultur sel diinkubasi pada suhu 37ºC dengan atmosfer 5% CO2, 95% udara, dan RH 96% selama 72 jam. Empat jam sebelum masa inkubasi berakhir ke dalam masingmasing sumur ditambahkan 10 µl larutan MTT 0.5%. Setelah masa inkubasi berakhir 80 µl HClisopropanol 0.04 N ditambahkan pada setiap sumur. Sebelum pengukuran absorbansi dilakukan, setiap sumur diperiksa apakah kultur terkontaminasi atau tidak menggunakan mikroskop inverted.

16  

Kemudian absorbansi masing-masing sumur diukur dengan microplate reader (ELISA reader) pada λ 570 nm. Nilai OD (Optical Density) hasil pembacaan dengan ELISA reader bersifat proposional terhadap jumlah sel hidup dengan menentukan IS (indeks stimulus) sebagai penentuan aktivitas proliferasi. IS dihitung dengan menggunakan persamaan berikut: IS = OD sel perlakuan (dengan mitogen, LPS, Tartrazin, Rhodamin) OD sel kontrol (tanpa mitogen, LPS, Tartrazin, Rhodamin) Besar peningkatan atau penurunan aktivitas proliferasi limfosit akibat penambahan LPS, tartrazin, atau rhodamin dalam % dihitung dengan menggunakan persamaan berikut: % Aktivitas = (IS perlakuan (LPS, Tartrazin, Rhodamin) – IS spontan) X 100% IS spontan Besar % Aktivitas kultur dengan perlakuan LPS atau tartrazin atau rhodamin kemudian dibandingkan dengan kultur kontrol dan dianalisis dengan uji statistik yaitu dengan uji T.

17  

Berikut ini adalah diagram alir penelitian:

Biji Bligo

Penggilingan dan pengayakan 70 mesh

Pembuatan ekstrak 1 gram dalam 5 mL, dan 1 gram dalam 50 mL aquades Aquades

Penyondean 1 mL aquades

0,1 g/kg bb

1 g/kg bb

Kontrol (10 ekor tikus)

Perlakuan 1 (10 ekor tikus)

Perlakuan 2 (10 ekor tikus)

Pemeliharaan selama 90 hari dan disonde 1 kali/hari Terminasi LPS atau Tartrazin atau Rhodamin

Pengambilan Limfa

1. 2. 3.

Analisis Proliferasi Limfosit: Hasil Dan Pembahasan Isolasi Limfosit Perhitungan Sel Limfosit Pengujian Proliferasi Dengan Metode MTT

Analisis ANOVA dan Uji T

Gambar 2. Diagram alir penelitian (Modifikasi metode Sugito 2010)

18  

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN Kondisi Tikus Percobaan Tikus yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih galur Sprague Dawley jantan dan betina berumur 60 hari, yang diperoleh dari Laboratorium Bersama Hewan Percobaan (SEAFAST Centre dan Departemen Ilmu Teknologi Pangan) IPB sebanyak 30 ekor, dimana 24 ekor diantaranya adalah tikus jantan dan 6 ekor sisanya adalah tikus betina. Berat rata-rata tikus pada awal masa adaptasi adalah 166.77 ± 10.54 gram. Setelah diadaptasikan selama seminggu berat rata-rata tikus menjadi 195.07 ± 15.26 gram. Penggunaan tikus Sprague Dawley disebabkan tikus ini mudah didapat, banyak digunakan dalam penelitian imunitas, dan tidak bisa muntah. Selanjutnya tikus percobaan dipelihara dalam kandang individu yang terbuat dari bahan plastik. Kondisi ruangan diatur pada suhu 22-24 ºC, dan dengan siklus gelap terang masing-masing selama 12 jam. Menurut Muchtadi (1989) suhu optimum ruangan untuk tikus percobaan berkisar 22-24 ºC. Sebelum diberi perlakuan, tikus percobaan diadaptasikan selama seminggu tujuannya agar tikus percobaan menyesuaikan dengan lingkungan baru atau lingkungan laboratorium, mengamati apakah tikus terus digunakan atau tidak dalam penelitian misalnya tidak sakit dan berperilaku normal, dan menyeragamkan kondisi tikus sebelum diberi perlakuan (Muchtadi 1989). Pakan dan minuman diberikan secara ad libitum, dimana formulasi pakan standar yang diberikan mengacu pada America Institute of Nutrition (AIN 1976). Pakan standar dengan kadar protein 20% berasal dari kasein susu (komposisi pakan secara lengkap disajikan pada Tabel 2). Minuman yang diberikan berupa air aqua dengan menggunakan botol individu yang berwarna gelap. Pakan yang diberikan pada tikus percobaan dalam bentuk bubuk dan berjumlah 20 gram/ekor/hari. Pemberian pakan dalam jumlah 20 gram/ekor/hari sudah mencukupi kebutuhan konsumsi pakan tikus per hari untuk berat badan tikus 250-300 gram. Selain itu pemberian pakan 20 gram/ekor/hari bertujuan menentukan jumlah pakan riil yang dikonsumsi setiap harinya. Pakan ditempatkan dalam wadah alumunium yang diganti setiap 3 hari sekali. Pakan dan minum diberikan pada pukul 08.00-09.00 WIB untuk setiap harinya, dan sisa pakan ditimbang untuk mengetahui berat pakan yang dikonsumsi oleh tikus. Penggantian pakan diberikan pada kisaran waktu yang sama dengan tujuan untuk memberikan keseragaman dalam penelitian ini berkaitan dengan waktu konsumsi pakan, perubahan jumlah konsumsi, waktu sonde, dan perubahan berat badan. Penggantian botol minum dilakukan setiap 3 hari sekali. Penggantian kandang tikus juga dilakukan setiap 3 hari sekali, hal ini dilakukan karena setelah 3 hari kandang tampak basah dan berbau amoniak dari urin tikus.

Berat Badan dan Sisa Pakan Penimbangan berat badan tikus dilakukan setiap hari selama 15 hari pertama dan selanjutnya dilakukan setiap 2 hari sekali sampai 90 hari. Penimbangan berat badan tikus dilakukan dalam kisaran waktu yang sama, yaitu pada pukul 08.00-09.00 WIB, dan dilakukan sebelum pengggantian pakan dan penyondean ekstrak biji bligo. Berat badan tikus digunakan untuk menghitung volume ekstrak biji bligo yang akan disonde pada hari berikutnya. Volume ekstrak biji bligo untuk sonde rata-rata bertambah 0.1 ml dalam 4 hari pemeliharaan tikus atau setelah mengalami periode penimbangan sebanyak 2 kali. Penimbangan berat badan tikus bertujuan untuk mengetahui pertumbuhan tikus, memperkirakan tingkat kesehatan, dan indikasi keracunan subkronis akibat pemberian ekstrak biji bligo.

19  

Tikus dibagi menjadi 3 kelompok setelah masa adaptasi, setiap kelompok terdiri atas 8 tikus jantan dan 2 tikus betina. Kelompok pertama adalah kelompok kontrol yang disonde dengan aquades sebanyak 1 ml untuk setiap tikus. Kelompok kedua adalah kelompok perlakuan yang disonde dengan ekstrak biji bligo sebanyak 0.1 g/kg bb. Kelompok ketiga adalah kelompok perlakuan yang disonde dengan ekstrak biji bligo sebanyak 1 g/kg bb. Hasil penimbangan berat badan tikus selama 3 bulan disajikan pada Tabel 3. Data ini sama dengan yang dilaporkan oleh Sugito (2010). Tabel 3. Rata-rata berat badan tikus selama 3 bulan

Perlakuan Kontrol 0.1 g/kg bb 1 g/kg bb

Bulan ke0 (g) 165.6 ± 11.41 167.0 ± 6.79 166.3 ± 11.13

1 (g) 257.3 ± 34.70 255.1 ± 26.99 257.9 ± 37.30

2 (g) 296.5 ± 30.37 299.1 ± 27.32 290.1 ± 37.26

3 (g) 330.8 ± 43.76 319.1 ± 45.93 315.0 ± 47.91

Tabel 3 menunjukkan bahwa pertumbuhan rata-rata tikus setelah satu bulan pertama sebesar 91.7 g untuk tikus kontrol, 88.1 g untuk tikus perlakuan 0.1 g/kg bb, dan 91.6 g untuk tikus perlakuan 1 g/kg bb. Pertumbuhan rata-rata tikus satu bulan berikutnya (pertumbuhan berat badan tikus bulan ke-1 dan bulan ke-2) sebesar 39.2 g untuk tikus kontrol, 44.0 g untuk tikus perlakuan 0.1 g/kg bb, dan 32.2 g untuk tikus perlakuan 1 g/kg bb. Dan pertumbuhan rata-rata tikus satu bulan berikutnya adalah sebesar 34.3 g untuk tikus kontrol, 20.0 g untuk tikus perlakuan 0.1 g/kg bb, dan 24.9 g untuk tikus perlakuan 1 g/kg bb. Pertumbuhan rata-rata selama 3 bulan sebesar 165.2 ± 43.79 g untuk tikus kontrol, 152.1 ± 45.93 g untuk tikus perlakuan 0.1 g/kg bb, dan 148.0 ± 73.78 g untuk tikus perlakuan 1 g/kg bb. Berdasarkan uji statistik ANOVA (p>0.05), pemberian ekstrak biji bligo pada dosis 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb tidak berpengaruh secara nyata terhadap berat badan tikus pada bulan ke-1, ke2, dan ke-3 dan pemberian ekstrak biji bligo pada dosis 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb juga tidak berpengaruh secara nyata terhadap pertumbuhan berat badan tikus selama 3 bulan. Perhitungan jumlah konsumsi pakan pada bulan ke-1, ke-2, dan ke-3 disajikan pada Tabel 4. Berdasarkan uji statistik ANOVA, konsumsi pakan tikus pada bulan ke-1, ke-2, dan ke-3 tidak berbeda secara nyata antara tikus kontrol dan tikus yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb. Hal ini menunjukkan bahwa pakan yang dikonsumsi tikus baik tikus kontrol dan tikus perlakuan tidak memiliki perbedaan yang signifikan walaupun secara umum tikus perlakuan mengonsumsi pakan lebih banyak. Tabel 4. Rata-rata konsumsi pakan bulan ke-1, ke-2, dan ke-3

Perlakuan Kontrol 0.1 g/kg bb 1 g/kg bb

1 (g) 16.88 ± 1.06 17.89 ± 1.45 18.43 ± 1.24

Bulan ke2 (g) 16.52 ± 1.20 17.13 ± 1.78 18.48 ± 1.39

3 (g) 17.50 ± 0.77 17.79 ± 2.25 18.13 ± 1.71

Tabel 4 menunjukkan bahwa konsumsi pakan tikus yang diberi ekstrak biji bligo pada dosis 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb lebih tinggi dari tikus kontrol baik pada bulan ke-1, ke-2, maupun ke-3. Selisih jumlah konsumsi pakan rata-rata antara tikus kontrol dengan tikus perlakuan pada bulan ke-1 adalah sebesar 1.01 g untuk tikus 0.1 g/kg bb dan sebesar 1.55 g untuk tikus 1 g/kg bb. Selisih jumlah

20  

konsumsi pakan rata-rata antara tikus kontrol dengan tikus perlakuan pada bulan ke-2 adalah sebesar 0.61 g untuk tikus 0.1 g/kg bb dan sebesar 1.96 g untuk tikus 1 g/kg bb. Selisih jumlah konsumsi pakan rata-rata antara tikus kontrol dengan tikus perlakuan pada bulan ke-3 adalah sebesar 0.29 g untuk tikus 0.1 g/kg bb dan sebesar 0.63 g untuk tikus 1 g/kg bb. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak biji bligo tidak mengandung senyawa yang mengganggu saluran pencernaan sehingga nafsu makan tikus perlakuan tidak berkurang. Penurunan nafsu makan dapat disebabkan bahan yang dikonsumsi mengandung senyawa toksik yang mengganggu kinerja enzim pencernaan, dimana hal ini dapat berlanjut hingga terganggunya metabolisme tubuh. Nafsu makan yang rendah juga dapat menggangu pertumbuhan tubuh (dalam hal ini tikus percobaan). Dari Tabel 4 dapat kita lihat bahwa ekstrak biji bligo tidak mengandung senyawa toksik yang mengganggu enzim pencernaan dan tidak mengandung senyawa yang dapat menutup permukaan usus atau mengkelat zat gizi tertentu sehingga penyerapan zat gizi menjadi terganggu. Hal ini terlihat dari tidak menurunnya nafsu makan tikus dan pertumbuhan berat badan tikus yang berbeda tidak nyata dengan tikus kontrol. Menurut Qodrie et al. (2009), biji bligo tidak mengandung senyawa-senyawa yang berbahaya bagi tikus percobaan, dan tidak menyebabkan gangguan pada saluran pencernaan, sehingga tikus dapat tumbuh normal, dan tidak toksik sampai dosis 5 g/kg bb. Dengan demikian, ekstrak biji bligo tidak menggangu kerja enzim pencernaan dan tidak mengganggu metabolisme zat gizi. Menurut Sugito (2010) ekstrak biji bligo juga tidak menyebabkan gangguan kesehatan atau tidak toksik pada tikus percobaan dengan dosis 5 g/kg bb metode akut, dan juga tidak toksik pada pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb.

Proliferasi Sel Limfosit Limfa Proliferasi merupakan fungsi fisiologis yaitu proses pembelahan secara mitosis dan diferensiasi sel sebagai respon terhadap antigen atau mitogen (Zakaria et al. 2003). Proliferasi limfosit merupakan suatu proses yang dapat mengindikasikan aktivitas respon imun spesifik yang berkaitan dengan suatu sistem imun. Sel limfosit yang dapat berproliferasi adalah sel B dan sel T. Proses proliferasi diawali oleh bertambahnya sel B dan sel B tersebut berdifensiasi menjadi sel plasma (efektor) dan sel memori, sedangkan sel T berdiferensiasi menjadi sel Th, Tc, dan Ts. Sel B dan sel T merupakan bagian dari sel limfosit yang memiliki peranan dalam sistem imun spesifik. Sel T akan menghasilkan sitokin yang menginduksi sistem imun yang lain. Sel B akan menghasilkan antibodi dari sel plasmanya untuk melawan benda asing (antigen) yang dapat merugikan bagi kesehatan (Kuby 2006). Dengan adanya proliferasi maka jumlah sel B dan sel T semakin banyak, hal ini mengakibatkan kemampuan menghasilkan sitokin dan antibodi yang diperlukan untuk melawan antigen meningkat dan pertahanan tubuh (imun) meningkat. Menurut Roitt dan Delves (2001) sistem imun itu bekerja secara terintegrasi bukan sendiri-sendiri. Penentuan aktivitas proliferasi sel limfosit limfa tikus setelah 90 hari masa perlakuan melalui proses isolasi sel limfosit limfa, perhitungan sel limfosit, dan pengkulturan sel limfosit limfa. Penggunaan organ limfa ini disebabkan organ limfa merupakan organ limfoid sekunder. Organ limfoid sekunder memiliki fungsi menangkap dan mempresentasikan antigen dengan efektif, sel B dan sel T sudah dalam keadaan matang sehingga sudah siap untuk berproliferasi dan berdiferensiasi, dan merupakan tempat utama produksi antibodi. Organ limfa juga merupakan tempat untuk saringan darah dan tempat respon imun utama terhadap antigen asal darah (Baratawijaya 2007). Isolasi sel limfosit dilakukan dengan melisis sel eritrosit dan pencucian dengan medium RPMI-1640 sehingga didapatkan suspensi sel limfosit.

21  

Perhitungan sel limfosit limfa menggunakan metode biru trifan, hemasitometer, dan mikroskop dengan perbesaran 400 kali. Hal ini bertujuan untuk mengetahui bentuk dan jumlah sel yang hidup atau mati. Sel yang hidup tidak akan mengalami kerusakan membran sel sehingga biru trifan yang diberikan tidak dapat masuk ke dalam sel. Sel yang hidup akan tampak berbentuk bulat utuh dan bening. Sedangkan pada sel yang mati, membran sel rusak, biru trifan dapat masuk ke dalam sel sehingga sel mengkerut dan berwarna kebiruan (seperti warna biru trifan). Suspensi sel limfosit yang dikultur harus memiliki jumlah sel ynag hidup sebesar 95%.

Gambar 3. Sel limfosit limfa pada hemasitometer Pengkulturan sel limfosit limfa dilakukan secara in vitro karena sel limfosit dapat tumbuh di luar tubuh hewan atau manusia (Lao et al. 2001). Suspensi sel limfosit yang akan dikultur ditepatkan menjadi 2 x 106 sel/ml didasari oleh penelitian yang telah dilakukan Krismawati (2007) dengan waktu kultur 72 jam. Ke dalam tiap sumur microplate dimasukkan 60 µl suspensi sel limfosit, 30 µl mitogen LPS S. thyphimurium atau senyawa uji berupa Tartrazin dan Rhodamin, dan 10 µl FBS (Fetal Bovine Serum), sehingga tiap sumur terdapat 100 µl kultur. Dengan demikian konsentrasi sel limfosit sebanyak 1.2 x 106 sel/ml kultur, jumlah sel limfosit sebanyak 106 sel/ml kultur merupakan syarat utama agar sel limfosit dapat tumbuh selama pengkulturan. Pengkulturan sel secara in vitro ini memerlukan kondisi lingkungan pertumbuhan hampir sama dengan in vivo (keadaan tubuh hewan atau manusia) seperti pH, suhu, udara, dan asupan nutrisi (asam amino, vitamin, mineral, garam organik) sehingga proses biologis yang terjadi mendekati keadaan sebenarnya di dalam tubuh. Pengkulturan sel limfosit dilakukan dengan media RPMI 1640. Media ini mengandung nutrisi yang diperlukan untuk pertumbuhan sel. Selain RPMI 1640 pada pengkulturan sel limfosit ditambahkan FBS (Fetal Bovine Serum) sebanyak 10 µl, hal ini bertujuan menambah nutrien yaitu hormon-hormon penting untuk pertumbuhan, sebagai faktor penempel sel pada matriks tempat sel tumbuh (microplate), protein, mineral, lipid, serta mineral-mineral yang penting untuk pertumbuhan (Freshney 1994). Di dalam media juga ditambahkan antibiotik yang bertujuan mengatasi kontaminasi mikroorganisme. Di dalam media juga ditambahkan NaCO3 yang berfungsi sebagai buffer untuk mempertahankan pH yang diperlukan dalam pengkulturan sel limfosit (Freshney 1994). Pengkulturan sel limfosit limfa pada penelitian ini ada yang ditambahkan dengan mitogen berupa LPS (lipopolisakarida) dari S. thyphimurium dan ada yang ditambahkan dengan senyawa xenobiotik berupa tartrazin dan rhodamin. Penambahan LPS bertujuan memacu proliferasi karena LPS ini sejenis antigen yang dapat menginduksi terjadinya proliferasi. Menurut Watter et al (2002), LPS adalah komponen membran luar bakteri gram negatif yang dapat meningkatkan aktivitas sel imun. Sedangkan tujuan penambahan senyawa xenobiotik adalah untuk mengetahui apakah senyawa

22  

tersebut (tartrazin dan rhodamin) dapat membunuh sel limfosit atau menghambat aktivitas proliferasi sel limfosit. Setelah kultur sel limfosit diinkubasi selama 72 jam, dilakukan pengecekan untuk memastikan apakah kultur terkontaminasi atau tidak dengan menggunakan mikroskop inverted. Dari hasil pengecekan, tidak ditemukan bakteri (berupa bintik-bintik kecil yang bergerak) ataupun kapang sehingga dapat dipastikan bahwa setiap sumur tidak terkontaminasi. Kemudian pengukuran absorbansi dilakukan dengan ELISA reader. Metode yang digunakan dalam pengujian proliferasi limfosit adalah metode MTT (3-[4,5-dimetilthiazol-2yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide). Metode ini termasuk metode kalorimetri. Prinsip kerja metode ini adalah senyawa MTT yang berwarna kuning akan bereaksi dengan enzim suksinat dehidrogenase yang ada dalam mitokondria sel, yang kemudian enzim ini mengubah senyawa tetrazolium dari MTT menghasilkan kristal formazan yang berwarna biru. Semakin banyak sel limfosit yang hidup semakin pekat warna biru yang dihasilkan sehingga absorbansi yang terbaca semakin besar. Kesalahan perhitungan absorbansi dapat terjadi pada metode MTT disebabkan adanya kontaminasi dari bakteri ataupun khamir. Mitokondria sel bakteri juga dapat menghasilkan enzim suksinat dehidrogenase yang dapat bereaksi dengan garam tetrazolium dari MTT sehingga menghasilkan kristal formazan berwarna biru dan mengakibatkan kesalahan positif. Oleh sebab itu, penelitian harus dilakukan di dalam laminair flow steril agar tercapainya kondisi yang aseptis.

Gambar 4. Pengambilan organ limfa dalam laminair flow steril Penambahan HCl-isopropanol pada saat akhir masa inkubasi atau sebelum diukur absorbansi dengan ELISA reader bertujuan menghentikan aktivitas proliferasi sel limfosit sehingga stabil selama pengukuran absorbansi dan untuk melarutkan kristal formazan yang terbentuk sehingga memudahkan dalam pengukuran absorbansinya. Penentuan proliferasi sel limfosit ditentukan melalui perhitungan indeks stimulasi (IS). Semakin tinggi indeks stimulasi menandakan proliferasi limfosit semakin banyak atau semakin tinggi aktivitas proliferasi limfosit (Cambier 1987). Penelitian yang dilakukan oleh Krismawati (2007) juga menggunakan pengujian proliferasi limfosit untuk mengetahui tingkat toksisitas dan efek imunomodulator pada sampel daun delima putih, daun kemuning, daun ceremai, daun jati belanda, dan bunga kecombrang. Diketahui bahwa sampel daun delima putih, ceremai, kemuning, dan bunga kecombrang memicu proliferasi sel limfosit, sedangkan ekstrak daun jati belanda dengan peningkatan konsentrasi menghambat proliferasi. Hal ini menyatakan bahwa keempat ekstrak bersifat tidak toksik dan mampu berperan sebagai

23  

imunomodulator, sementara ekstrak daun jati belanda menghambat proliferasi limfosit dan tidak dapat berperan sebagai imunomodulator bagi sistem imun manusia. Selain penelitian oleh Krismawati (2007), penelitian yang dilakukan oleh Susanti (2006) juga menggunakan pengujian proliferasi sel limfosit mencit secara in vivo, in vitro, dan in vivo-in vitro dengan metode MTT terhadap ekstrak buah merah. Diketahui bahwa pengujian secara in vivo, penambahan ekstrak buah merah yang disondekan pada mencit berpengaruh nyata terhadap peningkatan proliferasi sel limfosit mencit. Pengujian secara in vitro menunjukkan bahwa dosis ekstrak buah merah berpengaruh nyata terhadap peningkatan proliferasi sel limfosit mencit. Dan pada pengujian secara in vivo-in vitro ekstrak buah merah juga berpengaruh nyata terhadap peningkatan proliferasi sel limfosit mencit. Hasil aktivitas proliferasi sel limfosit limfa tikus dalam bentuk nilai indeks stimulasi (IS) dengan adanya mitogen LPS dan senyawa xenobiotik tartrazin dan rhodamin pada semua perlakuan dapat dilihat pada Gambar 5. Data absorbansi dan IS setiap kelompok tikus dapat dilihat pada Lampiran 15. Gambar 5 menunjukkan bahwa berdasarkan proliferasi limfosit spontan pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb pada tikus dapat meningkatkan aktivitas proliferasi limfosit lebih tinggi dibandingkan kontrol dan pemberian ekstrak biji bligo 1 g/kg bb. Hasil indeks stimulasi pada tikus kontrol adalah 1, pada tikus perlakuan dengan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb adalah sebesar 1.097, dan pada tikus perlakuan dengan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb adalah sebesar 0.944. Aktivitas proliferasi limfosit pada pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb yang lebih tinggi dibandingkan pemberian ekstrak 1 g/kg bb menunjukkan bahwa konsentrasi yang efektif dalam meningkatkan proliferasi pada penelitian ini adalah pada konsentrasi 0.1 g/kg bb, perlu penelitian lebih lanjut untuk mengetahui secara pasti konsentrasi yang paling efektif. Hal ini mendekati penelitian yang dilakukan oleh Krismawati (2007) yang menyebutkan, dari ekstrak daun delima putih, ceremai, kemuning, dan bunga kecombrang dengan aquades yang ditambahkan dalam konsentrasi berbeda didapatkan proliferasi limfosit tertinggi ada pada konsentrasi tertentu atau didapat juga konsentrasi yang efektif. Penelitian yang dilakukan Kumar dan Vimalavathini (2004) menunjukkan bahwa buah bligo mengandung fitokimia dari golongan triterpen yaitu alunsenol dan multiflurenol yang mempunyai efek menyetabilkan mast sel pada tikus. Selain itu buah Benincasa hispida Thunb Cogn atau bligo yang diekstrak dengan metanol, mampu melindungi bronchospasm yang diinduksi oleh histamin. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak buah ini mempunyai aktivitas antihistaminik. Kemampuan perlindungan sudah ditunjukkan pada dosis 50 mg/kg bb dan dosis maksimalnya 400 mg/kg bb, karena diatas dosis ini tidak menunjukkan kenaikan perlindungan yang signifikan. Hal ini juga yang diduga terjadi pada pemberian ekstrak biji bligo dengan konsentrasi 1 g/kg bb, dimana dosis yang berlebih tidak menunjukkan peningkatan aktivitas proliferasi yang signifikan.

24  

1.6 1.4 1.2

Indeks Stimulasi

1

1.097 1 0.944

1.254 1.14 1.06

1.293 1.174 1.096

1.442 1.338

1.374

1.222 1.053

1.179

1.122

1.231

0.906

0.864

0.802

0.8

0.64

0.6

0.56

0.777 0.513

kontrol 0.1 g/kg bb 1 g/kg bb

0.4 0.2 0 Spontan

LPS

t90

t180

t270

r6

r12

r18

Gambar 5. Indeks stimulasi sel limfosit spontan, dengan mitogen LPS, dan senyawa xenobiotik tartrazin dan rhodamin pada kultur kontrol dan yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb Gambar 6 menunjukkan bahwa pemberian ekstrak biji bligo pada tikus meningkatkan proliferasi limfosit yang dikultur dengan LPS terutama pada pemberian dengan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb. Pada kultur limfosit tikus kontrol dengan pemberian LPS didapatkan nilai indeks stimulasi sebesar 1.140 ± 0.30, pada kultur limfosit tikus yang diberi perlakuan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb nilai indeks stimulasinya sebesar 1.254 ± 0.17, dan pada kultur limfosit tikus yang diberi perlakuan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb nilai indeks stimulainya sebesar 1.060 ± 0.04. Walaupun ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb memberikan indeks stimulasi yang lebih tinggi dibandingkan kultur limfosit tikus kontrol dan kultur limfosit tikus perlakuan dengan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb namun berdasarkan uji statistik ANOVA peningkatan proliferasi sel limfosit tersebut menunjukkan peningkatan yang tidak nyata (p>0.05). Hasil uji statistik ANOVA indeks stimulasi dengan mitogen LPS dapat dilihat pada Lampiran 16.

25  

1.4

1.254 1.14

1.2 1

1.097

1

1.06 0.944

0.8

Spontan LPS

0.6 0.4 0.2 0 kontrol

0.1 g/kg bb

1 g/kg bb

Gambar 6. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan mitogen LPS pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb Berdasarkan perbandingan diantara aktivitas proliferasi limfosit dengan mitogen LPS dan tanpa mitogen LPS (proliferasi limfosit spontan) menunjukkan bahwa penambahan mitogen LPS dapat meningkatkan aktivitas proliferasi. Besar peningkatan indeks stimulasi oleh mitogen LPS pada kultur limfosit tikus kontrol adalah 14.04%, pada kultur limfosit tikus dengan perlakuan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb adalah 14.30%, dan pada kultur limfosit tikus dengan perlakuan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb adalah 12.30%. Berdasarkan uji t berpasangan, penambahan mitogen LPS tidak berpengaruh secara nyata pada kultur limfosit tikus kontrol, perlakuan 0.1 g/kg bb, dan pada perlakuan 1 g/kg bb. Penambahan LPS berfungsi sesuai dengan tujuannya yaitu untuk memicu proliferasi karena LPS ini sejenis antigen yang dapat menginduksi terjadinya proliferasi. Menurut Watter et al (2002), LPS adalah komponen membran luar bakteri gram negatif yang dapat meningkatkan aktivitas sel imun. Peningkatan aktivitas proliferasi oleh LPS juga menunjukkan bahwa LPS dapat bekerja secara sinergis dengan komponen bioaktif yang terdapat dalam ekstrak biji bligo. Peningkatan proliferasi limfosit pada kultur limfosit tikus yang diberi perlakuan ekstrak biji bligo diduga adanya kandungan komponen bioaktif pada ekstrak biji bligo seperti komponen fenolik, terpene, flavonoid c-glikosida, dan sterol yang memiliki efek antioksidan. Adanya senyawa antioksidan tersebut dapat melindungi sel limfosit dari stres oksidatif. Stres oksidatif dapat merusak sel limfosit sehingga aktivitas proliferasi sel limfosit dapat terhambat. Menurut Shetty et al. (2008) bahwa ekstrak bligo mempunyai kemampuan penyembuhan pada ulcer di tikus percobaan. Pada penelitian ini menunjukkan bahwa senyawa aktif pada buah ini seperti terpene, flavonoid c-glikosida, dan sterol memiliki efek antioksidan. Senyawa ini menurunkan malondialdehid (MDA), kadar superoksida dismutase (SOD) di dalam sel darah merah, tingkat homogenat dan vitamin C pada plasma darah, jika dibandingkan dengan tikus kontol yang tidak diberi ekstrak bligo. Penurunan SOD ini diduga disebabkan oleh tingginya senyawa antioksidan yang terdapat pada ekstrak bligo sehingga tubuh tikus menekan produksi SOD.

26  

Penelitian yang dilakukan oleh Huang et al (2004) menunjukkan bahwa ekstrak biji bligo memiliki kemampuan antioksidan yang tinggi dan hal ini diduga disebabkan oleh tingginya kandungan total fenol dan aktivitas superoksida dismutase (SOD). Mekanisme komponen bioaktif bligo (terutama komponen fenolik) seperti komponen fenolik, terpene, flavonoid c-glikosida, dan sterol sebagai antioksidan dalam melindungi sel limfosit dari stres oksidatif atau meningkatkan aktivitas proliferasi limfosit diduga melalui kemampuan senyawa fenolik mendonorkan elektron atau mekanisme menangkap radikal bebas atau ROS menjadi produk yang non reaktif dan kemampuan sebagai pengkelat logam sehingga tidak memicu terbentuknya radikal bebas hidroksil (OH•) yang bersifat sangat reaktif merusak sel. Mekanisme penangkapan radikal bebas oleh senyawa antioksidan fenolik (MrOH) melalui pemberian elektron pada radikal peroksil (LOO•) sehingga radikal peroksil tidak bereaksi dengan asam lemak tidak jenuh (LH) dan terbentuk radikal yang lebih stabil seperti hidroperoksida (LOOH) dan radikal fenoksil (MrO•), radikal fenoksil bereaksi dengan radikal alkosil (LO•) membentuk produk non radikal atau non reaktif (LOO-MrO) dan mekanisme pengkelat logam (M) (Hall dan Cuppet 1997). Penelitian yang dilakukan oleh Puspawati (2009), sorgum dan jewawut memiliki mekanisme yang sama dalam meningkatkan aktivitas proliferasi limfosit karena sorgum dan jewawut memiliki komponen fenolik berupa asam fenolik, flavonoid, dan kondensat tanin yang memiliki sifat antioksidan sehingga mencegah stres oksidatif sel limfosit. Mekanisme komponen fenolik dalam melindungi sel limfosit dari stres oksidatif dapat dilihat pada Gambar 7. LOO• + LH

MrOH + LOO• MrO• + LO• MrOH + M

LOOH + MrO• LOO MrO MrOH M

Gambar 7. Reaksi penangkapan radikal bebas oleh komponen fenolik dan reaksi pengkelatan logam oleh komponen fenolik Mekanisme lain adalah diduga adanya komponen fenolik dari bligo yang berikatan dengan reseptor pada permukaan sel limfosit yang tersusun atas protein. Menurut Albert et al. (1994) dan Tejasari (2007) komponen fenolik dapat berikatan dengan reseptor sel limfosit karena komponen fenolik dapat berikatan dengan protein. Adanya ikatan antara senyawa fenolik dengan protein pada reseptor sel limfosit (sel B dan sel T) ini dapat mengaktivasi protein G (G-protein) yang kemudian protein G ini mengaktivasi enzim fosfolipase C. Enzim ini menghidrolisis fosfatidil inositol bifosfat (PIP2) menjadi produk reaktif berupa diasil gliserol (DAG) dan inositol trifosfat (IP3), reaksi ini terjadi di membran. IP3 berdifusi dari membran ke sitosol dan berikatan dengan protein reseptor pada permukaan sitoplasmik calcium-sequestering compartement. Pengikatan ini menyebabkan peningkatan konsentrasi ion Ca2+ sitosol. Diasil gliserol dan peningkatan konsentrasi Ca2+ mengaktivasi enzim protein kinase C. Protein kinase C akan menstimulasi produksi interleukin-2 (IL2), interleukin-2 ini kemudian mengaktivasi sel limfosit untuk berproliferasi (Tejasari 2000). Hasil penelitian Sugito (2010) menunjukkan bahwa ekstrak biji bligo tidak toksik pada tikus percobaan dengan dosis 5 g/kg bb dengan metode akut, ekstrak biji bligo juga tidak toksik pada tikus percobaan dengan dosis 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb. Selain itu dari penelitian ini juga didapatkan bahwa ekstrak biji bligo tidak menyebabkan gangguan metabolisme hati, dilihat dari berat hati,

27  

SGOT, SGPT, bilirubin, total trigliserida, kolesterol, dan protein total, ekstrak biji bligo secara nyata menurunkan kadar alkali fosfatase, bilirubin total, glukosa, lemak total, dan meningkatkan kadar albumin, dan ekstrak biji bligo tidak menyebabkan gangguan metabolisme ginjal, dilihat dari kadar urea, fosfor, kalsium, dan kalium. Dalam penelitian ini juga dilakukan penentuan indeks stimulasi dengan senyawa xenobiotik yaitu tartrazin dan rhodamin pada tiga konsentrasi, yaitu tartrazin 90 µg/ml, tartrazin 180 µg/ml, dan tartrazin 270 µg/ml kultur dan rhodamin 6 µg/ml, rhodamin 12 µg/ml, dan rhodamin 18 µg/ml kultur. Hal ini bertujuan melihat seberapa besar senyawa xenobiotik tersebut dapat menghambat aktivitas proliferasi sel limfosit. Sebagai pembanding adalah proliferasi limfoit spontan. Pemilihan senyawa tartrazin dan rhodamin didasarkan penggunaan senyawa xenobiotik ini memiliki paparan yang banyak pada berbagai produk makanan. Tartrazin merupakan pewarna sintetik yang diizinkan penggunaannya dalam produk pangan dengan batas maksimum 18-300 mg/kg (Depkes 1999). Menurut Inchem (1964), ADI tartrazin adalah 0-7.5 mg/kg bb. Dalam penelitian ini, batasan ADI inilah yang digunakan sebagai acuan pemilihan konsentrasi tartrazin. Rhodamin merupakan salah satu zat pewarna sintetis yang biasa digunakan pada industri tekstil dan kertas. Zat ini ditetapkan sebagai zat yang dilarang penggunaannya pada makanan melalui Menteri Kesehatan (Permenkes) No.239/Menkes/Per/V/85 dan menurut Inchem (2006) LD50 rhodamin adalah sebesar 89.5 mg/kg. Dalam penelitian ini, pemilihan konsentrasi rhodamin ditentukan berdasarkan nilai LD50 rhodamin. Rhodamin memiliki senyawa klorin yang reaktif dan juga berbahaya. Klorin dalam rhodamin diduga memiliki efek toksik dan karsinogenik. Efek toksik klorin berasal dari kekuatan mengoksidasinya (Kusmayadi dan Sukandar 2009). Gambar 8 menunjukkan bahwa limfosit yang dikultur dengan tartrazin 90 µg/ml, nilai indeks stimulasi atau aktivitas proliferasi limfosit dari tikus kontrol lebih tinggi 29.25% dibandingkan pada proliferasi limfosit spontan. Pada kultur limfosit tikus dengan perlakuan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, aktivitas proliferasi limfosit yang dikultur dengan tartrazin 90 µg/ml hampir sama dengan proliferasi limfosit tanpa penambahan tartrazin (proliferasi limfosit spontan), hanya lebih rendah 0.09%. Pada kultur limfosit tikus perlakuan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb, aktivitas proliferasi limfosit yang dikultur dengan tartrazin 90 µg/ml mengalami peningkatan sebesar 24.38%. Hasil uji statistik ANOVA menunjukkan bahwa pemberian ekstrak biji bligo lalu limfositnya dikulturkan dengan penambahan tartrazin 90 µg/ml tidak berpengaruh secara nyata terhadap aktivitas proliferasi limfosit. Hal ini menunjukkan bahwa pada pengkulturan dengan tartrazin 90 µg/ml, aktivitas proliferasi limfosit yang dihasilkan tidak berbeda secara nyata antara kultur limfosit tikus yang diberi perlakuan dengan ekstrak biji bligo dengan yang tidak diberi ekstrak biji bligo (kultur kontrol). Sedangkan hasil uji t berpasangan antara proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan tartrazin 90 µg/ml adalah, penambahan tartrazin 90 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol tidak berpengaruh secara nyata terhadap aktivitas proliferasi limfosit, pada kultur limfosit tikus dengan perlakuan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb juga tidak berpengaruh secara nyata terhadap aktivitas proliferasi limfosit, sedangkan pada kultur limfosit tikus dengan perlakuan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb dengan pemberian tartrazin 90 µg/ml memberikan pengaruh yang nyata terhadap peningkatan proliferasi limfosit. Hal ini menunjukkan bahwa penambahan tartrazin 90 µg/ml pada kultur limfosit tikus yang diberi perlakuan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb memberikan pengaruh yang nyata terhadap peningkatan proliferasi limfosit sebesar 24.38%. Hal ini berarti ekstrak biji bligo 1 g/kg bb memberikan perlindungan terhadap limfosit sehingga mampu berproliferasi. Pada tikus kontrol yang tidak diberi ekstrak biji bligo, limfositnya tidak peka terhadap tartrazin 90 µg/ml.

28  

1.4

1.293 1.174

1.2 1

1.097

1.096

1

0.944

0.8

Spontan t90

0.6 0.4 0.2 0 kontrol

0.1 g/kg bb

1 g/kg bb

Gambar 8. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan tartrazin 90 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb Gambar 9 menunjukkan aktivitas proliferasi limfosit dengan tartrazin 180 µg/ml pada kultur limfosit tikus perlakuan lebih tinggi dibandingkan dengan proliferasi limfosit spontan. Sedangkan pada kultur limfosit tikus kontrol aktivitas proliferasi lebih tinggi pada proliferasi limfosit spontan dibandingkan dengan pemberian tartrazin 180 µg/ml. Besar peningkatan aktivitas proliferasi limfosit dengan tartrazin 180 µg/ml pada kultur limfosit tikus perlakuan 0.1 g/kg bb ekstrak biji bligo adalah 11.42% dan pada tikus perlakuan 1 g/kg bb ekstrak biji bligo adalah 11.54%. Sedangkan penurunan aktivitas proliferasi limfosit pada kultur limfosit tikus kontrol dengan pemberian tartrazin 180 µg/ml adalah sebesar 13.61%. Secara umum berdasarkan uji statistik ANOVA aktivitas proliferasi limfosit dengan penambahan tartrazin 180 µg/ml, pemberian ekstrak biji bligo tidak berpengaruh secara nyata pada semua perlakuan termasuk pada kultur limfosit tikus kontrol. Dan berdasarkan uji t berpasangan, peningkatan dan penurunan aktivitas proliferasi limfosit pada penambahan tartrazin 180 µg/ml dibandingkan dengan proliferasi limfosit spontan adalah, penambahan tartrazin 180 µg/ml tidak berpengaruh secara nyata baik pada kultur limfosit tikus kontrol, kultur limfosit tikus perlakuan dengan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan kultur limfosit tikus perlakuan dengan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb. Penarikkan kesimpulan bahwa peningkatan atau penurunan aktivitas proliferasi sel limfosit dengan penambahan tartrazin 180 µg/ml tidak berpengaruh nyata adalah berdasarkan nilai probabilitas (Sig. 2-tailed) yang didapatkan dari uji t adalah >0.05. Hal ini menunjukkan bahwa penambahan tartrazin 180 µg/ml tidak mempengaruhi secara nyata atau mengganggu aktivitas proliferasi limfosit jika tikus diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb atau 1 g/kg bb.

29  

1.4 1.222 1.2 1

1.097 1

1.053 0.944

0.864

0.8

Spontan t180

0.6 0.4 0.2 0 kontrol

0.1 g/kg bb

1 g/kg bb

Gambar 9. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan tartrazin 180 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb Gambar 10 menunjukkan penambahan tartrazin 270 µg/ml pada sel limfosit menghasilkan peningkatan aktivitas proliferasi limfosit baik pada kultur limfosit tikus kontrol maupun kultur limfosit tikus perlakuan dibandingkan dengan proliferasi limfosit spontan. Besar peningkatan aktivitas proliferasi limfosit pada kultur limfosit tikus kontrol akibat penambahan tartrazin 270 µg/ml adalah 12.23%, pada kultur limfosit tikus yang diberi perlakuan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb adalah 21.92%, dan pada kultur limfosit tikus yang diberi perlakuan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb adalah 52.74%. Berdasarkan uji statistik ANOVA aktivitas proliferasi limfosit dengan penambahan tartrazin 270 µg/ml pemberian ekstrak biji bligo tidak berpengaruh secara nyata pada semua perlakuan. Hal ini menunjukkan bahwa pada pengkulturan dengan tartrazin 270 µg/ml, aktivitas proliferasi limfosit yang dihasilkan tidak berbeda secara nyata antara kultur limfosit tikus yang diberi perlakuan dengan ekstrak biji bligo dengan yang tidak diberi ekstrak biji bligo. Dan berdasarkan uji t berpasangan, peningkatan aktivitas proliferasi akibat penambahan tartrazin 270 µg/ml adalah, tidak berpengaruh secara nyata pada kultur limfosit tikus kontrol, dan memberikan pengaruh yang nyata pada kultur limfosit tikus perlakuan baik pada pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb maupun 1 g/kg bb. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian tartrazin 270 µg/ml dapat meningkatkan secara nyata aktivitas proliferasi sel limfosit pada kultur limfosit tikus perlakuan dengan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb sebesar 21.92% dan 52.74%.

30  

1.6

1.442 1.338

1.4 1.122

1.2 1

1.097

1

0.944 Spontan

0.8

t270

0.6 0.4 0.2 0 kontrol

0.1 g/kg bb

1 g/kg bb

Gambar 10. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan tartrazin 270 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb Secara umum, pemberian tartrazin pada konsentrasi 90 µg/ml, 180 µg/ml, dan 270 µg/ml pada kultur limfosit tikus perlakuan baik dengan pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb maupun 1 g/kg bb tampak tidak berbahaya, hal ini ditunjukkan dengan aktivitas proliferasi limfosit yang lebih tinggi dibandingkan proliferasi limfosit spontan. Hal ini diduga disebabkan komponen fenolik yang terdapat pada ekstrak biji bligo atau sistem antioksidan yang ada dapat mencegah terjadinya stres oksidatif pada sel limfosit limfa. Dugaan lain jumlah komponen fenolik yang sampai pada limfa kemudian dapat melekat pada reseptor sel limfosit sehingga memicu proliferasi sel limfosit. Dugaan berikutnya adalah komponen fenolik dapat bekerja sinergis dengan tartrazin dalam memicu proliferasi limfosit, tetapi ini memerlukan kajian lebih lanjut. Gambar 11 menunjukkan bahwa aktivitas proliferasi limfosit dengan penambahan rhodamin 6 µg/ml menurun pada kultur limfosit tikus kontrol dan kultur limfosit tikus yang diberi perlakuan dengan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb. Sedangkan pada kultur limfosit tikus yang diberi perlakuan dengan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, rhodamin 6 µg/ml menghasilkan peningkatan aktivitas proliferasi limfosit. Besar penurunan aktivitas proliferasi limfosit akibat penambahan rhodamin 6 µg/ml pada kultur kontrol adalah 36.00%, pada kultur limfosit tikus yang diberi perlakuan dengan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb adalah 4.03%, dan peningkatan aktivitas proliferasi limfosit pada kultur limfosit tikus perlakuan 0.1 g/kg bb adalah sebesar 25.22%. Berdasarkan uji statistik ANOVA, aktivitas proliferasi limfosit dengan pemberian ekstrak biji bligo pada pengkulturan dengan rhodamin 6 µg/ml adalah tidak berbeda nyata antara kultur limfosit tikus kontrol dengan kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 1 g/kg bb, berbeda nyata antara kultur limfosit tikus kontrol dengan kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan berbeda nyata antara kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dengan kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 1 g/kg bb. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb memberikan pengaruh yang nyata terhadap aktivitas proliferasi limfosit. Hasil uji statistik ANOVA secara lengkap disajikan pada Lampiran 20a, 20b, dan 20c. Dan berdasarkan uji t berpasangan penurunan dan peningkatan aktivitas proliferasi akibat penambahan

31  

rhodamin 6 µg/ml adalah, pemberian rhodamin 6 µg/ml berpengaruh secara nyata menurunkan proliferasi limfosit pada kultur limfosit tikus kontrol, berpengaruh secara nyata meningkatkan proliferasi limfosit pada kultur limfosit tikus perlakuan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan tidak berpengaruh secara nyata pada kultur limfosit tikus perlakuan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian rhodamin 6 µg/ml mengakibatkan penurunan aktivitas proliferasi sel limfosit pada kultur limfosit tikus kontrol, tetapi hal ini dapat dicegah dengan pemberian ekstrak biji bligo.

1.6 1.374

1.4 1.2 1 0.8

1.097 1

0.944

0.906 Spontan r6

0.64

0.6 0.4 0.2 0 kontrol

0.1 g/kg bb

1 g/kg bb

Gambar 11. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan rhodamin 6 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb Gambar 12 menunjukkan bahwa pada penambahan rhodamin 12 µg/ml, nilai indeks stimulasi atau aktivitas proliferasi limfosit dari kultur limfosit tikus kontrol lebih rendah 44.03% dibandingkan kultur limfosit tikus kontrol pada proliferasi limfosit spontan, pada kultur limfosit tikus dengan perlakuan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb aktivitas proliferasi limfositnya lebih tinggi 7.42% dibandingkan proliferasi limfosit tanpa penambahan rhodamin (proliferasi limfosit spontan), dan pada kultur limfosit tikus perlakuan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb aktivitas proliferasi limfositnya lebih rendah 15.04% dibandingkan pada proliferasi limfosit spontan. Hasil uji statistik ANOVA menunjukkan bahwa aktivitas proliferasi limfosit dengan pemberian ekstrak biji bligo dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml menghasilkan perbedaan yang nyata yaitu antara kultur limfosit tikus kontrol dengan kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, tidak berbeda nyata antara kultur limfosit tikus kontrol dengan kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 1 g/kg bb, dan berbeda nyata antara kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dengan kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 1 g/kg bb. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb memberikan pengaruh yang nyata terhadap aktivitas proliferasi limfosit. Sedangkan hasil uji t berpasangan antara proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml adalah penambahan rhodamin 12 µg/ml berpengaruh secara nyata pada kultur limfosit tikus kontrol dalam menurunkan proliferasi limfosit, penambahan rhodamin 12 µg/ml tidak berpengaruh secara nyata pada kultur

32  

limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dalam meningkatakan proliferasi limfosit, dan penambahan rhodamin 12 µg/ml juga tidak berpengaruh secara nyata pada kultur limfosit tikus perlakuan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb dalam menurunkan proliferasi limfosit. Hal ini menunjukkan bahwa penambahan rhodamin 12 µg/ml dapat menurunkan aktivitas proliferasi limfosit secara nyata pada kultur limfosit tikus kontrol dan penurunan aktivitas proliferasi limfosit ini dapat dicegah dan dihambat dengan pemberian ekstrak biji bligo.

1.4 1.179

1.2 1

1.097 1

0.944 0.802

0.8 0.6

Spontan r12

0.56

0.4 0.2 0 kontrol

0.1 g/kg bb

1 g/kg bb

Gambar 12. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb Gambar 13 menunjukkan penambahan rhodamin 18 µg/ml meghasilkan aktivitas proliferasi limfosit yang menurun pada kultur limfosit tikus kontrol dan kultur limfosit tikus perlakuan dengan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb dibandingkan dengan proliferasi limfosit spontan. Sedangkan pada kultur limfosit tikus dengan perlakuan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb aktivitas proliferasi limfosit lebih tinggi dibandingkan dengan proliferasi limfosit spontan. Penurunan aktivitas proliferasi limfosit pada kultur limfosit tikus kontrol dan kultur limfosit tikus perlakuan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb secara berturutturut adalah sebesar 48.74% dan 17.66%. Sedangkan peningkatan aktivitas proliferasi pada kultur limfosit tikus perlakuan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb adalah sebesar 12.19%. Berdasarkan uji statistik ANOVA penambahan ekstrak biji bligo dengan penambahan rhodamin 18 µg/ml menghasilkan perbedaan yang nyata antara kultur limfosit tikus kontrol dengan kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb terhadap aktivitas proliferasi limfosit, tidak berbeda nyata antara kultur limfosit tikus kontrol dengan kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 1 g/kg bb terhadap aktivitas proliferasi limfosit, dan berbeda nyata antara kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dengan kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 1 g/kg bb terhadap aktivitas proliferasi limfosit. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dapat memberikan pengaruh yang nyata terhadap aktivitas proliferasi limfosit. Sedangkan pada uji t berpasangan, penambahan rhodamin 18 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol memberikan pengaruh yang nyata terhadap penurunan aktivitas proliferasi sel limfosit, penambahan rhodamin 18 µg/ml pada kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 0.1

33  

g/kg bb tidak berpengaruh secara nyata terhadap peningkatan proliferasi limfosit, dan penambahan rhodamin 18 µg/ml pada kultur limfosit tikus perlakuan yang diberi ekstrak biji bligo 1 g/kg bb tidak berpengaruh secara nyata terhadap penurunan proliferasi limfosit. Hal ini menunjukkan bahwa penambahan rhodamin 18 µg/ml dapat menurunkan aktivitas proliferasi limfosit secara nyata pada kultur limfosit tikus kontrol dan penurunan aktivitas proliferasi limfosit ini dapat dicegah dan dihambat dengan pemberian ekstrak biji bligo.

1.4 1.231 1.2 1

1.097 1

0.944 0.777

0.8 0.6

Spontan r18

0.513

0.4 0.2 0 kontrol

0.1 g/kg bb

1 g/kg bb

Gambar 13. Rata-rata indeks stimulasi proliferasi limfosit spontan dan proliferasi limfosit dengan penambahan rhodamin 18 µg/ml pada kultur limfosit tikus kontrol, yang diberi ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb Berdasarkan perbandingan diantara aktivitas proliferasi limfosit dengan penambahan senyawa xenobiotik rhodamin pada konsentrasi 6 µg/ml, 12 µg/ml, dan 18 µg/ml dan tanpa penambahan rhodamin (proliferasi limfosit spontan), penambahan rhodamin baik pada konsentrasi 6 µg/ml, 12 µg/ml, dan 18 µg/ml menghasilkan penurunan aktivitas proliferasi pada kultur limfosit tikus kontrol dan kultur limfosit tikus perlakuan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb. Penurunan yang terjadi pada kultur limfosit tikus kontrol lebih besar dibandingkan kultur limfosit tikus perlakuan dengan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb. Hal ini diduga kompoenen fenolik pada ekstrak biji bligo dapat melindungi sel limfosit limfa dari kerusakan oksidatif yang disebabkan senyawa klorin yang ada pada rhodamin. Dimana komponen fenolik dari ekstrak biji bligo bersifat antioksidan. Sedangkan peningkatan aktivitas proliferasi limfosit yang terjadi pada kultur limfosit tikus perlakuan dengan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb diduga pada konsentrasi inilah ekstrak biji bligo efektif memberikan efek antioksidan tertinggi sehingga pada perlakuan pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb bukan hanya mencegah kerusakan oksidatif akibat senyawa klorin dari rhodamin tetapi juga senyawa fenolik pada ekstak biji bligo dapat berikatan dengan reseptor di permukaan sel limfosit sehingga memicu protein kinase C dan protein ini menstimulasi sel limfosit untuk berproliferasi. Semakin tinggi konsentrasi rhodamin, aktivitas proliferasi limfosit pada kultur limfosit tikus kontrol semakin menurun.

34  

V. SIMPULAN DAN SARAN Simpulan Simpulan yang dapat diambil dari penelitian in vivo pada tikus Sprague Dawley adalah pemberian ekstrak biji bligo baik pada konsentrasi 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb tidak mempengaruhi pertumbuhan tikus Sprague Dawley. Pertumbuhan tikus secara umum dalam kondisi normal dan dalam keadaan sehat. Pemberian ekstrak biji bligo pada dosis 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb berpengaruh tidak nyata terhadap berat badan tikus pada bulan ke-1, ke-2, dan ke-3 dan pemberian ekstrak biji bligo pada dosis 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb juga tidak berpengaruh secara nyata terhadap pertumbuhan berat badan tikus selama 3 bulan. Konsumsi pakan tikus yang diberi ekstrak biji bligo pada dosis 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb lebih tinggi dari tikus kontrol baik pada bulan ke-1, ke-2, maupun ke-3. Disamping itu pemberian ekstrak biji bligo tidak mempengaruhi atau tidak mengurangi nafsu makan tikus. Pemberian ekstrak biji bligo selama 90 hari (3 bulan) dapat meningkatkan proliferasi sel limfosit limfa dibandingkan kontrol. Aktivitas proliferasi sel limfosit limfa spontan pada perlakuan 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb secara berturut-turut adalah meningkat sebesar 9.71% dan menurun sebesar 5.60% dibandingkan dengan kontrol. Peningkatan aktivitas proliferasi sel limfosit limfa pada perlakuan kontrol, 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb dengan mitogen LPS adalah sebesar 14.04%, 14.30%, dan 12.30%. Aktivitas proliferasi sel limfosit limfa pada perlakuan kontrol, 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb dengan tartrazin 90 µg/ml secara berturut-turut adalah meningkat 29.25%, menurun 0.09%, dan meningkat 24.38%. Aktivitas proliferasi sel limfosit limfa pada perlakuan kontrol, 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb dengan tartrazin 180 µg/ml secara berturut-turut adalah menurun 13.61%, meningkat 11.42%, dan meningkat 11.54%. Peningkatan proliferasi sel limfosit limfa pada perlakuan kontrol, 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb dengan tartrazin 270 µg/ml adalah sebesar 12.23%, 21.92%, dan 52.74%. Aktivitas proliferasi sel limfosit limfa pada perlakuan kontrol, 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb dengan rhodamin 6 µg/ml secara berturut-turut adalah menurun 36.00%, meningkat 25.22%, dan menurun 4.03%. Aktivitas proliferasi sel limfosit limfa pada perlakuan kontrol, 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb dengan rhodamin 12 µg/ml secara berturut-turut adalah menurun 44.03%, meningkat 7.42%, dan menurun 15.04%. Aktivitas proliferasi sel limfosit limfa pada perlakuan kontrol, 0.1 g/kg bb, dan 1 g/kg bb dengan rhodamin 18 µg/ml secara berturut-turut adalah menurun 48.74%, meningkat 12.19%, dan menurun 17.66%. Secara umum semakin tinggi konsentrasi rhodamin, aktivitas proliferasi limfosit pada tiap kelompok tikus semakin menurun. Ekstrak biji bligo dengan konsentrasi 0.1 g/kg bb dapat digunakan sebagai imunomodulator. Pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb pada perlakuan tartrazin (90 µg/ml, 180 µg/ml, dan 270 µg/ml) tidak berpengaruh secara nyata terhadap aktivitas proliferasi sel limfosit tikus. Pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb pada perlakuan rhodamin (6 µg/ml, 12 µg/ml, dan 18 µg/ml) berpengaruh secara nyata terhadap peningkatan aktivitas proliferasi limfosit. Pemberian ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb dan 1 g/kg bb dapat menghambat efek toksik dari tartrazin dan rhodamin. Perlakuan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb menunjukkan hasil paling efektif pada kondisi tubuh normal dan tidak sakit dengan aktivitas proliferasi limfosit limfa tertinggi dan paling resisten terhadap serangan xenobiotik terutama rhodamin. Komponen bioaktif yang diduga bertindak sebagai antioksidan dari ekstrak biji bligo adalah komponen fenolik, terpene (alunsenol dan multiflurenol), flavonoid c-glikosida, dan sterol.

35  

Saran Berdasarkan hasil penelitian yang didapat maka perlu dilakukan kajian komponen bioaktif yang paling berperan karena komponen bioaktif yang terdapat dalam ekstrak biji bligo jenisnya lebih dari satu, selanjutnya perlu kajian lebih mendalam pada mekanisme komponen fenolik yang berkaitan dengan pangan atau kesehatan dalam sistem biologis, disamping itu perlu mengukur lebih jauh potensi biji bligo yang berkaitan dengan kesehatan melalui kajian in vitro atau in vivo pada hewan percobaan yang diberi kondisi seperti kanker atau stressing sehingga dapat diketahui mekanisme peningkatan aktivitas proliferasi sel limfosit dan potensi lainnya dari biji bligo, dan perlu kajian lebih lanjut pada hubungan sinergisme antara tartrazin dengan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb karena peningkatan aktivitas proliferasi yang terjadi pada kelompok kultur tartrazin belum tentu berfungsi sebagai immunomodulator mungkin saja tartrazin memicu growth factor, yang mana hal ini juga merupakan indikator timbulnya kanker.

36  

DAFTAR PUSTAKA

[AIN] American Institute of Nutrition. 1976. Report AIN Ad Hoc Comitte on Standar for Nutrition Studie. J Nutr 107: 1340-1348. [WCRF/AICR]. 1997. Food, Nutrition, and The Prevention of Cancer: A Global Perspective. Washington: The American Institute for Cancer Research. Albert B, Bray D, Lewis J, Raff M, Roberts K, JD Watson. 1994. Molecular Biology of The Cell. New York: Garland Pub. Co. Anilkumar D dan Ramu P. 2002. Effect of methanolic extract of Benincasa hispida against histamine and acetylcholine induced bronchospasm in guinea pigs. Indian J Pharmacol 34: 365-6. Anonim.

2009. http://www.google.co.id/m/imgres?q=bligo&start=0&site=images&imgid =ANd9GcT_GnR0QaIR5ZnPD4oKZGX3ul78DPud=49838. [18 Maret 2009].

Aslokar LV, Kakkar KK, Chakre OJ, (ED). 1992. Glossary Of Indian Medicinal Plants With Active Principles. Part I. 1st Ed. New Delhi: CSIR. Baratawijaya KG. 2007. Immunologi Dasar. Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Bartosz G. 1990. Erythrocyte membrane changes during aging in vivo. Di dalam: Blood Cell Biochemistry. Vol. 1 Erythroid Cell. Harris JR (ed.). New York: Plenum Press. Bellanti JA. 1993. Imunologi II. Yogyakarta: Universitas Gajah Mada Press. Bounous JA. 1992. Imunologi III. Yogyakarta: UGM Press. Burdock GA. 1997. Encyclopedia of Food and Color Additives. Boca raton: CRC Press. Bush TM et al. 2007. Adverse interactions between herbal and dietary substances and prescription medications: a clinical survey. Altem. Ther. Health Med. 13. Cambier JC. 1987. B-Lymphocyte Differentiation. Florida: CRC Press. Chandrababu S dan Umamaheshwari S. 2002. Studies on the anti-inflammatory activity of fruit rind extract of Benincasa hispida Cogn. Indian Drugs 39: 651-3. Davis JM. 1994. Basic Cell Culture: A Practical Approach. London: Oxford University Press. Departemen Kesehatan. 1999. Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 1168/ MENKES/PER/X/1999 tentang Kumpulan Peraturan Perundang-undangan di Bidang Makanan. Jilid II. Jakarta: Depkes. Fragoso LR, Esparza JR, Burchiel SW, Ruiz DH, Torres E. 2009. Risk and benefits of commonly used herbal medicines in Mexico. Toxicology and Applied Pharmacology 227: 128-135. Freshney RI. 1994. Animal Cell Culture: A Practical Approach. Washington DC: Oxford IRL Press.

37  

Grover JK, Adiga G, Vats V, Rathi SS. 2001. Extract of Benincasa hispida prevent development of experimental ulcers. J Ethnopharmacol 78: 64-159. Gurib-Fakim A. 2006. Medical plants: tradition of yesterday and drugs of tomorrow. Mol. Aspect Med. 27: 1-93. Guyton AC dan Hall JE. 2006. Textbook of Medical Physiology 10th edition. London: W.B. Saunders Company. Hall CA, Cuppet SL. 1997. Structure Activities of Natural Antioxidant: Antioxidant Methodology in vivo and in vitro Concept. Auroma OI, Cuppet SL (editor). USA: AOAC Press. Harris JR. 1991. Blood Cell Biochemistry. Vol 3 Lymphocyte and Granulocytes. London: Plenum Press. Hermanto. 1993. Benincasa hispida Thunb Cogn. http://www.iptek.net.id/ind/pd_tanobat/gambar/bligo.jpg[/img]. Di akses pada tanggal 3 April 2010. Hu C dan Kitts DD. 2003. Antioxidant, prooxidant, and cytotoxic activities of solvent fractionated dandelion (Taraxacum officinale) flower extracts in vitro. J. Agric. Food Chem. 52: 301-310. Huang HY, Huang JJ, Tso TK, Tsai YC, Chang CK. 2004. Antioxidant and angiotension-converting enzyme inhibition capacities of various parts of Benincasa hispida (wax gourd). Nahrung 48: 230-233. Inchem. 1964. JECFA Evaluation Tartrazine. http://www.inchem.org/jecfa/jeceval/jec_1614.htm. [18 Maret 2009]. ______.

2006. JECFA Evaluation of Rhodamine http://www.inchem.org/jecfa/jeceval/jec_2089.htm. [18 Maret 2009].

B.

Inoue T, Sugimoto Y, Masuda H, Kamei C. 2002. Antiallergenic effect of flavonoid glycoside obtained from Mentha piperita L. Biol. Pharm. Bull. 25: 256-258. Keller JM et al. 2005. Mitogen-Induced Limphocyte Proliferation in Loggerhead Sea Turtles: Comparison of Methods and Effects of Gender, Plasma Testosterone Concentration, and Body Condition on Immunity. J. Veterin Immuno & Immunophatology 103: 269-281. Kirtikar KR dan Basu BD. 1975. Benincasa hispida. In: Blatter E, Caius JF, Mhaskar KS, editors. Indian Medicinal Plants. Vol 2. 2nd ed. Dehradum: M/S Bishen Singh Mahendra Palsingh 1126-8. Koeman JH. 1987. Pengantar Umum Toksikologi. Yogyakarta: Gajah Mada Univerisity Press. Konrad L, Muller HH, Lenz C, Laubinger H, Aumuller G, Lichius JJ. 2000. Antiproliferative effect on human prostate cancer cells by a stinging nettle root (Urtica dioica) extract. Planta Med. 66: 44-47. Kresno SB. 1996. Imunologi: Diagnosis dan Prosedur Laboratorium. Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.

38  

Krismawati A. 2007. Pengaruh Ekstrak Tanaman Ceremai, Delima Putih, Jati Belanda, Kecombrang, dan Kemuning secara in vitro terhadap Proliferasi Sel Limfosit Manusia. [Skripsi]. Bogor: Fakultas Teknologi Pertanian. IPB. Kuby J, Kindt TJ, Richard AG, Barbara AO. 2007. Immunology. 6th Edition. New York: W.H. Freeman and Company. Kuby J. 2006. Immunology 3rd edition. New York: W.H. Freeman and Company. Kumar A dan Vimalavathini R. 2004. Possible anorectic effect of methanol extract of Benincasa hispida (Thumb) Cogn, fruit. Indian J Pharmacol 36 (6): 348-350. Kusmayadi A dan Sukandar D. 2009. Food Safety and Its Application in Daily Life to Prevent Dangers of Consuming Unsafe Foods and Promote SPFS Farmer’s Health. http://database.deptan.go.id/saims-indonesia/index.php?files [18 Maret 2009]. Lao CC, Lin TL, Wu CC. 2001. Factors Affecting Mitogenetic Respone of Turkey Lymphocytes. Acta Vet. BRNO 70: 433-442. Malole MBM dan Pramono CSU. 1989. Penggunaan Hewan-Hewan Percobaan di Laboratorium. Bogor: Pusat Antar Universitas Bioteknologi IPB. Malole MBM. 1990. Kultur Sel dan Jaringan Hewan. Bogor: Pusat Antar Universitas. Institut Pertanian Bogor. Mariwaki K. 1987. Genetic in Wild Mice. Its Application to Biomedical Research. Tokyo: Japan Scientific Societies Press. Marmion DM. 1991. Handbook of US Colorant: Food, Drugs, Cosmetics, and Medical Device 3rd ed. New York: John Wiley & Sons. Mingyu D, Mingzhang L, Quihong Y, Weiming U, Jianxing X, Weinming X. 1995. A study on Benincasa hispida contents effective for protection of kidney. Jiangsu J Agri Sci 11: 46-52. Muchtadi D. 1989. Evaluasi Nilai Gizi Pangan. Bogor: Departemen Pendidikan dan Kebudayaan, Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi-PAU-IPB. Nadkarni’s. 1995. Indian Medical Plants. Indian Materia Media 1: 185-186. Nair B. 2001. Final report on the the safety assessment of Mentha piperita (Peppermint) oil, Mentha piperita (Peppermint) leaf extract, Mentha piperita (Peppermint) leaf, and Mentha piperita (Peppermint) leaf water. Int. J. Toxicol. 20: 61-73. Newall CA, Anderson LA, Philpson JD. 1996. Herbal Medicine: A Guide for Healthcare Professionals. London: The Pharmaceutical Press. Pandoyo AS. 2000. Pengaruh aktivitas ekstrak tanaman cincau hijau (Cyclea barbata L. Miers) terhadap proliferasi sel limfosit darah tepi manusia secara in vitro. [Skripsi]. Bogor: Fakultas Teknologi Pertanian. IPB.

39  

Prangdimurti E. 1999. Efek Perlindungan Ekstrak Jahe terhadap Respon Imun Mencit yang diberi Perlakuan Stress Oksidatif oleh Pestisida Praquat. [Tesis]. Bogor: Program Pascasarjana IPB. Puspaningrum. 2003. Pengaruh Ekstrak Kayu Secang terhadap Proliferasi Sel Limfosit Limfa Tikus dan Sel Kanker k-562 (Chonic Myelogenous Leukimia) secara in vitro. [Skripsi]. Bogor: Fakultas Teknologi Pertanian. Institut Pertanian Bogor. Puspawati Kadek GA. 2009. Kajian Aktivitas Proliferasi Limfosit dan Kapasitas Antioksidan Sorgum (Sorghum bicolor L Moench) dan Jewawut (Pennisetum sp) pada tikus Sprague Dawley. [Disertasi]. Bogor: Sekolah Pascasarjana IPB. Qodrie ZL, Najat TH, Mohammad WAK, Moses S, dan Anandan R. 2009. Antinocicepative and antipyretic activity of Benincasa hispida Thunb cogn in wistar albino rats. Pak. J. Pharm. Sci. 22 (3): 287-290. Rach Manish A dan Sunita J Jain. 2008. Gatroprotective effect of Benincasa hispida fruit extract. Indian J Pharmacol 40 (6): 271-275. Reyburn K, Martinez R, Escobedo M. 1998. Glycemic effects of various species of nopal (Opuntia sp.) in type 2 diabetes mellitus. Texas J. Rural Health. 26: 68-76. Robinson DR. 1979. Eicosonoids, Inflammation, and Antiinflammantory Drugs. Clin Exp Rheumatol 7: 155-61. Roitt IM dan Delves PJ. 2001. Essential Immunology. London: Backwell Scientific Publications, Osney Mead, Oxford. Rukumani R, Nidya ISR, Suresh N, Kumar A. 2003. Investigation of anxiolytic like effect of antidepressant activity of Benincasa hispida, methanol extract. Indian J Pharmacol 35: 12930. Schottner M, Gansser D, Spiteller G. 1997. Lignans from the roots of Urtica dioica and their metabolites bind to human sex hormone binding globulin (SHBG). Planta Med. 63: 529-532. Seo SW, Koo HN, An HJ, Kwon KB, Lim BC, Seo EA. 2005. Taraxacum officinale protects against cholecytokinin-induced acute pancreatitis in rats. World J. Gastroenterol. 11: 597-599. Shaper PT. 1998. Methods of Cell Separation. Amsterdam: Elsevier. Sheeler P dan Bianchi DE. 1982. Cell Bology Structure: Biochemistry and Fungtion. 2nd ed. New York: John Wiley & Sons Inc. Shetty BV et al. 2008. Effect of extract Benincasa hispida on oxidative strss in rats with indometacin induced gastric ulcers. Indian J. Physiol Pharmacol 52(2): 178-182. Sivarajan KK. 1994. Extract of Benincasa hispida prevent development of experimental ulcer. J Ethnopharmacol 78: 159-164. Subandi. 1999. Menganalisis Komponen Toksik dari Rhodhamin B dengan Metode Destruksi dan Metode Spektrofotometri. [Skripsi]. Jakarta: Fakultas MIPA Kimia. Universitas Indonesia.

40  

Sugito. 2010. Uji Toksisitas Akut dan Subkronis Biji Buah Bligo (Benincasa hispida Thunb Cogn) secara In Vivo pada Tikus Sprague Dawley. [Tesis]. Bogor: Program Pascasarjana IPB. Susanti. 2006. Karakterisasi Ekstrak Buah Merah (Pandanus conoideus Lam.) dan Uji Biologis terhadap Proliferasi Limfosit Mencit. [Skripsi]. Bogor: Fakultas Teknologi Pertanian. IPB. Tejasari. 2000. Efek Komponen Bioaktif Oleoresin Rimpang Jahe (Zingiber officinale Roscoe) Terhadap Fungsi Limfosit secara in vitro. [Disertasi]. Bogor: Program Pascasarjana IPB. ______. 2007. Evaluation of Ginger (Zingiber officinale Roscoe) Bioactive Compounds in Increasing the Ratio of T-Cell Surface Molecules of CD3+CD4+: CD3+CD8+In-Vitro. Mal J Nutr 13 (2): 161-170. Tizar I. 1988. Pengantar Immunologi Veteriner. Surabaya: Airlangga Univ Press. Turker AU and Camper ND. 2002. Biological activity of common mullein, a medical plant. J. Ethnopharmacol 82: 117-125. Walun E, Stenberg K, Jenssen D. 1990. Understanding Cell Toxicology Principle and Practice. New York: Ellis Horwood. Watter JJ, Sommer JA, Pfeiffer ZA, Prabhu U, Guerra AN, Bertics PJ. 2002. A Differential Role for the Mitogen-Activated Protein Kinase in LPS Signaling: The MEK/ERK Pathway Is Not Essential for Nitric Oxide and Interleukin Iβ Production. The American Society for Biochemistry and Molecular Biology, Inc. hlm 1-39. Weissman IL, Hood LE, Wood WB. 1978. Essential concepts in immunology. California: the Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. Williams PP, Burson JL. 1995. The Basic Science of Toxicity. Ed ke-3. New York: Macmillan Publ. Co. Winarno FG. 2004. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta: PT. Gramedia Pustaka Utama. Wu CM, Liou SE, Chang YH, Chiang W. 1987. Volatile compounds of the wax gourd (Benincasa hispida Cogn) and a wax guard beverage. J Food Sci 52: 132-4. Wyllie A, Donahue V, Ficher B, Hill D, Keesey, dan Manzow S. 1998. Apoptosis and Cell Proliferation Boehringer mannheim GmbH. Jerman: Biochemical. Yang X, Zhao Y, Lv Y. 2007. Chemical composition and antioxidant activity of an acidic polysaccharide extracted from Curcubita moschata Duchesne ex Poiret. J Agric Food Chem 55: 4684-90. Yoshizumi S et al. 1998. Histamine release inhibitors from wax gourd, the fruits of Benincasa hispida Cogn. Yakugaku Zasski 118: 188-92. Zakaria FR, Djaelani M, Setyana, Rumondang E, dan Nurrochmah. 2000. Carotenoid bioavailability of vegetable and carbohydrate containing foods measures by retinol accumulation in rats liver. J. Food Composition and Analysis. Vol. 13, pp. 297-310.

41  

Zakaria FR, Nurahman, Prangdimurti E, Tejasari. 2003. Antioxidant and Immunoenhancement Activities of Ginger (Zingiber officinale Roscoe) Extract and Compounds in In Vitro and In Vivo Mouse and Human System. Nutraceutic Foods 8: 96-104.

42  

LAMPIRAN Lampiran 1. Perkembangan berat tikus selama 90 hari Kode tikus

01-Feb

02-Feb

04-Feb

05-Feb

06-Feb

07-Feb

08-Feb

G1

168

168

166

170

175

170

172

G2

175

172

176

181

192

182

184

G3

195

200

209

214

219

221

222

G4

202

206

210

212

218

220

228

G5

207

205

220

211

219

221

222

G6

150

146

157

155

156

165

165

G7

216

222

224

226

230

230

233

G8

209

220

220

226

225

226

230

G9

221

228

232

236

239

241

240

G10

199

205

208

213

215

216

220

Rerata

194,2

197,2

202,2

204,4

208,8

209,2

211,6

H1

208

202

218

218

219

220

224

H2

213

217

224

227

230

235

239

H3

186

193

195

196

196

205

205

H4

170

177

180

183

185

190

195

H5

180

181

188

187

187

190

192

H6

205

214

220

225

227

232

233

H7

189

200

205

209

212

215

218

H8

185

194

192

191

191

195

197

H9

190

223

227

220

230

238

237

H10

192

200

201

204

205

208

210

Rerata

191,8

200,1

205

206

208,2

212,8

215

I1

198

207

212

214

215

223

224

I2

189

195

200

202

203

208

209

I3

182

184

191

194

198

200

205

I4

198

200

204

205

207

210

215

I5

184

195

197

197

195

196

195

I6

215

224

230

233

235

242

247

I7

216

225

230

235

236

235

235

I8

197

210

220

221

222

227

226

I9

205

210

212

215

220

226

235

I10

200

205

217

219

220

228

230

Rerata

198,4

205,5

211,3

213,5

215,1

219,5

222,1

43  

Kode tikus

09-Feb

10-Feb

11-Feb

12-Feb

13-Feb

14-Feb

16-Feb

18-Feb

G1

177

178

178

185

188

189

190

196

G2

187

188

195

195

200

202

203

205

G3

225

227

231

236

234

235

243

252

G4

229

233

233

237

242

246

252

259

G5

228

230

235

237

235

237

241

244

G6

165

166

168

174

177

179

170

182

G7

235

237

237

237

241

243

255

275

G8

232

238

239

238

257

259

258

260

G9

245

248

248

254

255

256

262

266

G10

215

231

233

236

237

238

245

253

Rerata

213,8

217,6

219,7

222,9

226,6

228,4

231,9

239,2

H1

223

222

224

228

229

230

235

237

H2

243

244

247

251

251

253

252

260

H3

210

209

217

220

220

220

222

222

H4

196

198

202

205

206

208

210

215

H5

194

190

193

200

200

200

205

195

H6

240

242

245

245

247

252

257

265

H7

219

218

224

225

228

232

237

240

H8

201

200

205

204

205

208

210

213

H9

238

238

241

248

250

253

259

259

H10

212

212

212

215

216

220

222

228

Rerata

217,6

217,3

221

224,1

225,2

227,6

230,9

233,4

I1

228

234

235

240

240

246

253

254

I2

217

217

218

221

224

229

232

238

I3

202

205

203

206

208

210

212

213

I4

215

215

217

219

219

219

217

217

I5

195

198

194

195

195

195

198

202

I6

247

247

255

261

263

267

273

278

I7

236

235

238

239

243

243

248

255

I8

229

235

235

239

242

243

245

251

I9

250

252

251

252

255

264

267

268

I10

232

236

238

244

245

246

250

255

Rerata

225,1

227,4

228,4

231,6

233,4

236,2

239,5

243,1

Kode tikus

20-Feb

22-Feb

25-Feb

27-Feb

02-Mar

04-Mar

06-Mar

08Mar

G1

214

221

222

225

229

233

235

237

G2

212

215

215

219

226

228

227

228

44  

G3

260

263

261

270

281

290

293

295

G4

265

266

292

291

295

296

302

305

G5

242

245

252

251

257

258

258

260

G6

182

185

191

193

222

247

245

247

G7

280

282

290

302

305

298

304

310

G8

262

263

270

277

281

284

281

286

G9

270

273

275

275

279

226

230

245

G10

257

258

270

270

275

274

280

280

Rerata

244,4

247,1

253,8

257,3

265,0

263,4

265,5

269,3

H1

253

255

261

265

273

250

271

273

H2

271

273

282

285

297

270

268

302

H3

230

233

230

232

232

224

234

235

H4

228

229

239

237

240

222

247

248

H5

209

210

210

208

212

193

209

205

H6

274

275

283

290

296

306

310

315

H7

255

257

253

267

276

300

280

283

H8

225

227

233

236

240

278

245

244

H9

270

271

278

282

293

303

299

303

H10

238

239

250

249

257

294

271

265

Rerata

245,3

246,9

251,9

255,1

261,6

264

263,4

267,3

I1

266

267

275

245

255

272

280

280

I2

246

248

254

278

260

350

269

273

I3

215

217

215

215

219

233

226

228

I4

220

222

220

226

224

240

222

217

I5

199

199

189

188

195

212

200

200

I6

285

287

283

292

294

300

310

320

I7

272

274

286

289

304

274

314

319

I8

260

263

270

269

277

240

284

290

I9

281

284

287

295

299

298

301

305

I10

270

273

277

282

289

289

287

300

Rerata

251,4

253,4

255,6

257,9

261,6

270,8

269,3

273,2

Kode tikus

10-Mar

12Mar

G1

14-Mar

16-Mar

18-Mar

20-Mar

22-Mar

24-Mar

240

241

239

241

246

244

246

257

G2

233

231

225

231

234

233

235

240

G3

298

306

306

315

315

315

318

324

G4

291

298

302

282

304

305

308

305

G5

262

266

269

255

271

272

275

275

G6

240

248

253

252

251

247

249

254

G7

310

318

323

318

324

315

317

334

45  

G8

290

293

307

298

300

290

305

303

G9

248

254

264

246

267

265

271

253

G10

275

283

288

290

292

295

298

298

Rerata

268,7

273,8

277,6

272,8

280,4

278,1

282,2

284,3

H1

272

268

274

273

279

262

265

285

H2

308

300

280

285

285

295

299

299

H3

235

238

243

248

248

250

253

254

H4

251

249

255

256

262

258

260

260

H5

187

190

188

190

198

194

196

202

H6

314

302

284

290

295

306

310

322

H7

288

286

292

301

304

309

311

302

H8

245

244

255

255

265

259

259

263

H9

306

309

311

311

312

315

317

324

H10

252

264

259

260

266

267

269

276

Rerata

265,8

265

264,1

266,9

271,4

271,5

273,9

278,7

I1

282

275

278

269

277

280

282

287

I2

273

267

270

269

271

279

280

285

I3

228

215

224

222

224

226

228

236

I4

218

210

215

215

220

219

220

223

I5

195

186

194

190

192

196

199

206

I6

324

321

327

330

326

329

330

337

I7

320

322

328

333

338

342

345

331

I8

295

284

264

273

280

281

283

283

I9

306

300

315

314

315

316

318

325

I10

301

308

306

307

315

316

319

325

Rerata

274,2

268,8

272,1

272,2

275,8

278,4

280,4

283,8

Kode tikus

26Mar

28-Mar

30-Mar

01-Apr

03-Apr

05-Apr

07-Apr

09-Apr

G1

285

285

286

299

300

308

310

312

G2

235

240

243

342

345

341

348

352

G3

330

333

336

239

240

242

242

247

G4

319

321

323

312

315

316

327

325

G5

279

281

282

288

289

288

290

292

G6

256

260

262

259

260

266

268

269

G7

343

348

349

348

349

358

359

360

G8

306

312

315

315

317

316

323

315

G9

256

266

267

268

269

268

280

278

G10

299

300

302

301

305

304

303

318

Rerata

290,8

294,6

296,5

297,1

298,9

300,7

305

306,8

H1

296

295

296

300

302

306

307

311

46  

H2

306

311

313

320

322

314

318

318

H3

252

255

260

256

257

261

266

263

H4

262

266

267

266

268

268

270

267

H5

208

210

315

212

215

218

200

220

H6

316

322

335

315

317

328

333

332

H7

328

333

325

342

345

350

350

345

H8

266

272

274

272

273

276

280

354

H9

330

329

330

338

339

332

343

344

H10

279

285

286

288

290

294

300

300

Rerata

284,3

287,8

300,1

290,9

292,8

294,7

296,7

305,4

I1

301

291

293

310

312

268

344

342

I2

288

293

295

290

293

301

305

309

I3

240

242

243

248

249

255

250

255

I4

225

227

229

229

230

230

228

228

I5

208

208

210

210

215

220

221

220

I6

348

351

353

353

355

339

340

347

I7

347

350

286

350

351

342

353

352

I8

285

285

329

288

289

287

280

280

I9

325

327

430

328

329

335

335

337

I10

330

329

233

335

337

340

338

344

Rerata

289,7

290,3

290,1

294,1

296

291,7

299,4

301,4

Kode tikus

11Apr

13-Apr

15-Apr

17-Apr

19-Apr

21-Apr

23-Apr

25-Apr

G1

315

315

319

321

322

330

335

335

G2

356

359

364

367

368

374

380

386

G3

249

268

266

272

273

304

318

264

G4

327

332

334

342

345

345

353

357

G5

295

296

299

301

303

305

306

311

G6

270

268

270

268

269

270

275

275

G7

361

366

370

372

375

377

388

388

G8

317

327

330

330

333

335

335

336

G9

280

280

278

279

280

285

296

295

G10

320

320

319

324

325

310

320

326

Rerata

309

313,1

314,9

317,6

319,3

323,5

330,6

327,3

H1

313

310

318

320

322

325

333

334

H2

320

311

308

310

312

312

310

303

H3

265

260

259

255

256

266

268

272

H4

268

270

270

272

275

275

278

280

H5

225

215

220

220

222

220

228

224

H6

335

343

343

342

345

352

358

356

47  

H7

247

351

355

354

356

360

367

361

H8

356

306

310

315

317

322

329

328

H9

347

349

351

355

356

357

365

365

H10

302

305

307

311

312

317

324

328

Rerata

297,8

302

304,1

305,4

307,3

310,6

316

315,1

I1

345

345

342

349

350

350

354

355

I2

310

305

304

303

305

300

305

300

I3

257

260

257

260

361

266

267

266

I4

229

230

230

229

230

228

231

230

I5

225

225

227

225

227

227

228

230

I6

249

353

345

361

362

364

371

371

I7

357

357

359

362

365

364

371

370

I8

282

282

279

280

282

285

290

285

I9

338

342

348

347

347

348

351

352

I10

345

346

356

356

357

357

365

361

Rerata

293,7

304,5

304,7

307,2

318,6

308,9

313,3

312

Kode tikus

27-Apr

29-Apr

01-Mei

G1

340

342

351

G2

385

387

386

G3

266

263

264

G4

355

355

360

G5

315

313

314

G6

274

274

277

G7

387

392

394

G8

337

340

337

G9

296

293

295

G10

330

325

330

Rata-rata

328,5

328,4

330,8

H1

330

335

339

H2

305

308

305

H3

275

275

277

H4

278

280

283

H5

222

225

228

H6

365

360

365

H7

365

364

368

H8

331

329

332

H9

363

367

367

H10

322

326

327

Rata-rata

315,6

316,9

319,1

I1

350

355

360

48  

I2

309

310

316

I3

268

271

275

I4

232

232

235

I5

220

224

220

I6

368

371

370

I7

368

367

365

I8

282

278

285

I9

340

352

350

I10

367

372

374

Rata-rata

310,4

313,2

315

Lampiran 2a. Tabel konsumsi pakan selama 90 hari Perlakuan

31-Jan

01-Feb

02-Feb

03-Feb

04-Feb

05Feb

06-Feb

07-Feb

G1

16,8

19,7

18,4

12,0

13,5

11,2

10,9

13,5

G2

17,3

12,5

14,2

13,1

15,8

19,8

12,4

19,0

G3

15,3

16,2

17,2

17,3

17,5

16,9

17,5

16,5

G4

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G5

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

15,1

20,0

G6

10,9

11,0

4,5

9,0

12,7

10,2

10,3

20,0

G7

17,8

20,0

19,2

20,0

20,0

20,0

20,0

16,6

G8

20,0

20,0

20,0

20,0

11,1

20,0

20,0

20,0

G9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

17,1

G10

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

Rerata

17,4

17,1

17,5

15,6

16,7

17,0

15,2

17,3

H1

20,0

17,0

20,0

14,8

20,0

20,0

20,0

20,0

H2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H3

20,0

20,0

20,0

20,0

14,7

20,0

20,0

20,0

H4

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

17,9

17,1

H5

19,0

18,7

18,2

19,4

13,8

17,2

15,8

17,4

H6

20,0

20,0

18,9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H7

20,0

20,0

20,0

20,0

16,0

15,7

15,8

20,0

H8

20,0

20,0

12,0

16,7

14,1

13,4

14,5

13,4

H9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H10

20,0

17,9

16,4

17,0

15,5

15,9

20,0

20,0

H11

20,0

19,4

18,5

18,8

17,4

18,2

18,4

18,8

Rerata

17,4

19,7

19,5

19,9

17,1

19,3

18,4

18,6

I1

20,0

19,2

15,3

18,4

15,0

20,0

12,5

16,2

49  

I2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

17,6

I3

19,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

18,1

I4

20,0

19,1

16,6

20,0

20,0

20,0

16,0

18,9

I5

20,0

20,0

14,8

15,7

20,0

20,0

20,0

14,4

I6

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

13,6

I7

20,0

17,5

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

12,4

I8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I9

20,0

17,0

15,5

16,4

18,7

20,0

17,1

20,0

I10

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

15,8

20,0

Rerata

19,8

19,6

18,0

19,6

18,7

20,0

17,1

17,7

08-Feb

09-Feb

10-Feb

11-Feb

12-Feb

13Feb

14-Feb

15-Feb

G1

15,4

16,9

18,7

19,4

19,2

19,6

19,5

20,0

G2

18,7

20,0

19,7

19,1

16,2

16,7

20,0

20,0

G3

15,0

15,5

16,7

16,2

14,3

14,4

20,0

20,0

G4

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

19,3

G5

20,0

20,0

16,0

18,0

20,0

20,0

20,0

18,7

G6

12,7

20,0

10,5

20,0

20,0

20,0

20,0

14,6

G7

20,0

20,0

20,0

20,0

14,1

20,0

20,0

20,0

G8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

19,7

20,0

G9

20,0

20,0

19,2

11,4

20,0

20,0

20,0

20,0

G10

20,0

19,1

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

Rerata

17,3

18,1

18,8

18,7

17,4

17,7

19,9

19,8

H1

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H3

20,0

13,0

14,7

20,0

20,0

20,0

20,0

13,0

H4

20,0

14,4

20,0

20,0

17,9

17,1

20,0

14,4

H5

7,8

20,0

13,8

17,2

15,8

17,4

7,8

20,0

H6

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H7

20,0

20,0

16,0

15,7

15,8

20,0

20,0

20,0

H8

14,3

15,4

14,1

13,4

14,5

13,4

14,3

15,4

H9

12,4

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

12,4

20,0

H10

13,5

15,9

15,5

15,9

20,0

20,0

13,5

15,9

H11

16,8

17,9

17,4

18,2

18,4

18,8

16,8

17,9

Rerata

16,9

16,9

17,1

19,3

18,4

18,6

16,9

16,9

I1

20,0

20,0

15,0

20,0

12,5

16,2

20,0

20,0

I2

13,6

20,0

20,0

20,0

20,0

17,6

13,6

20,0

I3

20,0

12,4

20,0

20,0

20,0

18,1

20,0

12,4

Perlakuan

50  

I4

15,0

17,8

20,0

20,0

16,0

18,9

15,0

17,8

I5

14,2

11,0

20,0

20,0

20,0

14,4

14,2

11,0

I6

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

13,6

20,0

20,0

I7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

12,4

20,0

20,0

I8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I9

20,0

20,0

18,7

20,0

17,1

20,0

20,0

20,0

I10

20,0

20,0

20,0

20,0

15,8

20,0

20,0

20,0

Rerata

17,1

17,5

18,7

20,0

17,1

17,7

17,1

17,5

Perlakuan

16Feb

17-Feb

18-Feb

19-Feb

20-Feb

21-Feb

22-Feb

23-Feb

G1

20,0

12,6

20,0

9,6

20,0

20,0

13,5

20,0

G2

20,0

20,0

20,0

15,0

15,9

20,0

13,0

13,2

G3

20,0

20,0

20,0

16,6

19,4

20,0

16,5

15,5

G4

20,0

20,0

20,0

20,0

14,0

20,0

20,0

18,0

G5

14,7

17,0

17,1

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G6

20,0

15,5

16,2

20,0

19,2

13,9

20,0

20,0

G7

16,0

16,7

20,0

20,0

20,0

20,0

16,6

20,0

G8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G9

16,4

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

17,1

20,0

G10

16,2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

Rerata

20,0

18,2

20,0

15,3

17,3

20,0

15,8

16,7

H1

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H2

20,0

14,8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H3

18,0

15,0

11,3

20,0

13,3

12,8

12,6

11,6

H4

20,0

20,0

20,0

13,1

12,7

12,3

12,9

12,8

H5

20,0

12,7

13,3

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H6

11,0

20,0

20,0

20,0

15,7

15,7

20,0

16,8

H7

6,6

15,7

20,0

20,0

20,0

19,7

20,0

20,0

H8

16,0

20,0

20,0

20,0

12,8

13,5

15,0

14,3

H9

14,9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H10

20,0

20,0

20,0

10,7

17,2

17,4

14,9

14,2

H11

16,6

17,8

18,5

18,4

17,2

17,1

17,5

17,0

Rerata

19,5

15,6

16,1

18,3

16,5

16,3

16,4

16,1

I1

12,7

15,9

20,0

20,0

15,1

15,5

20,0

20,0

I2

15,9

20,0

20,0

20,0

17,7

17,1

20,0

19,4

I3

17,1

20,0

20,0

12,6

20,0

20,0

20,0

20,0

I4

18,7

13,1

20,0

7,6

17,7

13,0

15,7

10,4

I5

20,0

20,0

12,4

20,0

18,8

16,3

18,6

14,6

51  

I6

20,0

12,2

15,4

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I7

17,4

20,0

12,4

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I10

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

Rerata

16,1

17,2

20,0

15,0

17,6

16,4

18,9

17,4

Perlakuan

24Feb

25-Feb

26-Feb

27Feb

28-Feb

01-Mar

02-Mar

03-Mar

G1

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G2

20,0

17,1

20,0

17,6

20,0

18,5

20,0

20,0

G3

19,7

14,0

20,0

20,0

15,6

20,0

20,0

20,0

G4

16,6

20,0

17,9

20,0

20,0

20,0

18,0

15,7

G5

20,0

18,9

20,0

20,0

20,0

20,0

19,4

18,5

G6

12,6

13,9

12,8

12,9

9,9

16,0

20,0

20,0

G7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

5,7

G8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G9

20,0

20,0

20,0

16,2

20,0

20,0

20,0

20,0

G10

20,0

20,0

20,0

20,0

14,9

16,3

20,0

20,0

Rerata

19,1

17,8

19,5

19,4

18,9

19,6

19,5

18,9

H1

20,0

20,0

20,0

16,4

12,7

11,8

20,0

14,9

H2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

15,9

4,3

2,8

H3

11,9

12,0

13,2

16,0

13,5

14,0

14,9

13,1

H4

14,0

15,2

14,5

15,6

11,8

10,2

20,0

12,0

H5

20,0

19,6

20,0

20,0

20,0

16,7

20,0

20,0

H6

20,0

18,6

18,9

14,9

11,4

10,3

9,4

3,0

H7

20,0

20,0

20,0

20,0

18,8

17,0

20,0

20,0

H8

17,4

16,0

16,2

14,2

10,7

13,4

13,4

17,2

H9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H10

18,5

17,6

18,3

20,0

12,7

15,9

20,0

10,5

H11

18,2

17,9

18,1

17,7

15,2

14,5

16,2

13,3

Rerata

16,5

16,7

16,9

17,9

16,3

14,2

14,8

12,0

I1

20,0

18,4

20,0

18,4

9,4

13,9

18,2

16,8

I2

18,4

16,8

17,3

16,6

12,6

10,7

7,7

16,9

I3

19,3

16,7

18,1

16,6

5,9

7,2

9,4

15,0

I4

17,4

13,0

15,1

15,4

14,9

17,3

18,4

20,0

I5

16,2

17,4

18,0

9,8

5,4

8,4

7,9

11,0

I6

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

11,9

7,7

20,0

I7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

52  

I8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

16,3

1,3

2,5

I9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

15,6

19,3

20,0

I10

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

14,1

20,0

Rerata

18,8

16,2

17,6

16,7

10,7

12,3

13,4

17,2

Perlakuan

04Mar

05-Mar

06-Mar

07-Mar

08-Mar

09-Mar

10Mar

11-Mar

G1

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

19,0

G2

20,0

16,3

15,9

16,1

15,4

12,0

20,0

16,3

G3

20,0

20,0

19,4

17,5

17,4

18,2

13,8

20,0

G4

16,2

13,7

14,0

13,8

18,3

19,1

12,8

12,7

G5

18,9

20,0

20,0

20,0

20,0

13,0

9,0

11,0

G6

18,0

20,0

19,2

16,8

13,5

15,2

14,9

18,3

G7

17,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G10

20,0

20,0

20,0

18,5

18,7

18,3

20,0

14,8

Rerata

19,1

17,5

17,3

16,9

17,8

17,3

16,7

17,0

H1

12,4

14,0

16,7

14,6

20,0

20,0

20,0

20,0

H2

10,9

12,5

7,7

15,0

18,0

17,9

18,9

20,0

H3

20,0

17,4

16,3

14,1

14,9

13,0

11,0

15,3

H4

13,5

15,0

15,0

14,2

20,0

11,7

14,2

14,3

H5

12,5

15,3

18,7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H6

13,5

10,0

20,0

12,8

19,4

15,0

19,1

17,0

H7

20,0

19,5

20,0

18,0

19,0

16,7

20,0

20,0

H8

17,8

15,8

16,3

15,8

14,6

20,0

19,6

20,0

H9

20,0

20,0

19,4

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H10

13,4

11,9

13,9

13,7

12,4

16,2

17,9

14,9

H11

15,4

15,1

16,4

15,8

17,8

17,0

18,1

18,1

Rerata

14,2

15,0

14,5

15,8

18,2

15,7

16,0

17,4

I1

14,2

11,5

20,0

15,5

13,9

17,5

20,0

20,0

I2

14,1

13,6

14,7

15,1

17,9

18,0

18,0

20,0

I3

20,0

15,8

18,2

20,0

17,6

19,3

20,0

20,0

I4

20,0

20,0

19,5

20,0

18,4

20,0

20,0

20,0

I5

13,2

13,5

16,0

20,0

15,9

13,8

16,9

18,2

I6

13,4

20,0

14,5

17,2

20,0

20,0

20,0

20,0

I7

20,0

20,0

20,0

20,0

19,7

20,0

20,0

20,0

I8

12,4

15,5

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

18,2

53  

I10

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

Rerata

17,1

15,2

18,1

17,7

16,9

18,7

19,5

20,0

Perlakuan

12Mar

13-Mar

14-Mar

15-Mar

16-Mar

17-Mar

18-Mar

19-Mar

G1

18,7

12,4

14,7

20,0

20,0

19,7

20,0

20,0

G2

12,4

12,0

17,2

17,4

20,0

17,1

20,0

20,0

G3

16,4

14,8

19,0

17,3

20,0

20,0

20,0

20,0

G4

16,5

5,0

15,1

17,9

18,8

20,0

20,0

20,0

G5

13,7

14,7

12,7

10,8

10,4

10,0

15,0

14,7

G6

15,9

16,0

14,9

15,4

16,4

15,2

12,7

20,0

G7

16,7

13,0

16,3

19,6

15,7

19,0

18,5

16,0

G8

20,0

20,0

20,0

15,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G9

20,0

17,2

19,4

16,2

13,1

17,9

18,0

16,4

G10

14,8

17,8

20,0

20,0

17,0

17,6

14,4

16,2

Rerata

16,0

11,0

16,5

18,2

19,7

19,2

20,0

20,0

H1

20,0

20,0

20,0

20,0

16,4

15,0

19,0

17,2

H2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H3

15,9

15,9

12,9

13,3

13,0

16,0

16,9

20,0

H4

12,0

13,9

11,3

13,3

13,3

14,2

15,8

15,3

H5

20,0

20,0

18,2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H6

15,9

20,0

20,0

20,0

20,0

18,7

13,7

16,0

H7

20,0

15,9

20,0

13,9

20,0

15,4

17,8

14,2

H8

18,0

15,6

16,0

13,3

17,5

15,2

20,0

16,4

H9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H10

13,6

17,5

15,2

13,3

14,9

14,9

16,0

20,0

H11

17,5

17,9

17,4

16,7

17,5

16,9

17,9

17,9

Rerata

17,0

17,5

15,6

16,6

16,6

17,5

18,2

18,8

I1

20,0

20,0

18,7

20,0

20,0

14,0

20,0

20,0

I2

13,9

20,0

20,0

19,3

20,0

19,1

20,0

18,0

I3

18,9

20,0

20,0

18,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I4

16,9

20,0

18,9

16,1

20,0

19,0

20,0

20,0

I5

20,0

16,9

17,2

13,4

12,7

13,2

20,0

14,7

I6

20,0

20,0

20,0

20,0

17,6

20,0

20,0

20,0

I7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I10

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

Rerata

17,4

20,0

19,4

18,3

20,0

18,0

20,0

19,5

54  

Perlakuan

20Mar

21Mar

22Mar

23Mar

24Mar

25Mar

26Mar

27Mar

28Mar

G1

12,6

20,0

20,0

20,0

20,0

15,3

20,0

20,0

20,0

G2

20,0

20,0

20,0

20,0

16,9

17,5

12,1

20,0

20,0

G3

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G4

20,0

20,0

20,0

20,0

16,9

17,7

12,4

18,7

14,0

G5

17,0

17,1

20,0

17,4

20,0

15,2

15,2

20,0

20,0

G6

15,5

16,2

20,0

13,1

15,4

17,0

15,2

16,6

13,4

G7

16,7

20,0

20,0

20,0

20,0

19,2

20,0

20,0

20,0

G8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G10

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

16,0

20,0

16,8

20,0

Rerata

18,2

20,0

20,0

20,0

18,4

17,6

16,1

19,7

18,5

H1

19,0

17,1

20,0

20,0

20,0

15,9

20,0

20,0

20,0

H2

20,0

20,0

20,0

13,1

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H3

20,0

20,0

18,1

15,9

14,2

11,3

13,8

20,0

16,8

H4

14,3

11,5

11,3

12,8

14,6

10,2

13,9

13,3

12,7

H5

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

14,5

20,0

20,0

H6

13,2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

11,3

20,0

20,0

H7

16,8

19,2

17,1

20,0

20,0

16,4

20,0

20,0

18,1

H8

20,0

15,9

14,4

16,5

20,0

20,0

16,0

16,8

16,1

H9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H10

20,0

20,0

20,0

16,5

17,5

15,8

20,0

18,0

18,8

H11

18,3

18,4

18,1

17,5

18,6

17,0

16,9

18,8

18,2

Rerata

18,6

17,9

17,3

15,4

17,2

15,4

15,6

18,3

17,4

I1

20,0

20,0

18,9

20,0

20,0

20,0

19,4

18,3

18,0

I2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

19,4

20,0

I3

20,0

20,0

17,1

20,0

17,4

17,2

20,0

20,0

20,0

I4

20,0

20,0

16,8

19,2

19,2

20,0

20,0

20,0

19,6

I5

14,7

12,9

20,0

17,4

15,8

18,0

20,0

15,9

14,5

I6

20,0

19,8

18,8

15,3

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

16,3

20,0

20,0

20,0

I9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I10

20,0

20,0

15,8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

Rerata

20,0

20,0

18,2

19,8

19,2

19,3

19,8

19,4

19,4

55  

Perlakuan

29Mar

30Mar

31Mar

01Apr

02Apr

03-Apr

04Apr

05Apr

06Apr

G1

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

17,6

G2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

13,3

19,0

G3

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G4

20,0

20,0

20,0

15,8

17,3

18,3

20,0

17,4

20,0

G5

20,0

12,2

12,1

18,4

19,3

16,5

20,0

19,5

16,4

G6

20,0

17,5

18,2

15,5

14,2

20,0

20,0

15,7

16,2

G7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G10

20,0

16,8

20,0

17,6

14,5

20,0

20,0

19,1

14,9

Rerata

20,0

20,0

20,0

18,9

19,3

19,6

20,0

17,7

19,2

H1

20,0

20,0

20,0

20,0

19,7

20,0

14,6

20,0

16,6

H2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

18,7

12,6

16,5

11,4

H3

13,3

18,4

17,5

13,1

12,2

20,0

15,5

13,9

13,4

H4

11,8

11,9

20,0

15,8

9,5

16,7

20,0

12,4

10,0

H5

20,0

20,0

20,0

18,9

20,0

15,8

19,1

20,0

20,0

H6

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H7

15,8

20,0

14,1

20,0

13,0

18,8

16,7

20,0

9,5

H8

15,8

1,5

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H9

20,0

20,0

12,8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H10

14,9

13,9

16,0

16,2

16,5

18,8

12,6

19,1

11,4

H11

17,2

16,6

18,0

18,4

17,1

18,9

17,1

18,2

15,2

Rerata

16,3

17,6

19,4

17,0

15,4

17,8

16,8

15,7

13,7

I1

14,9

13,4

13,4

18,1

16,2

18,2

10,9

18,2

10,7

I2

20,0

18,5

18,9

20,0

20,0

20,0

20,0

6,9

20,0

I3

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

17,2

13,0

19,3

20,0

I4

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I5

16,2

12,7

13,1

20,0

20,0

18,1

16,1

12,0

10,0

I6

20,0

20,0

18,2

17,1

17,9

20,0

14,9

19,4

10,7

I7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

17,8

20,0

20,0

20,0

I8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

16,9

20,0

20,0

20,0

I10

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

Rerata

18,7

18,0

18,1

19,5

19,0

18,9

16,0

16,1

17,7

56  

Perlakuan

07-Apr

08-Apr

09-Apr

10-Apr

11-Apr

13-Apr

14-Apr

15-Apr

G1

20,0

14,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G2

20,0

9,7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G3

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

18,6

20,0

20,0

G4

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G5

16,9

17,5

14,6

20,0

20,0

20,0

17,0

20,0

G6

17,3

13,9

16,8

11,7

13,8

13,5

20,0

12,9

G7

20,0

20,0

20,0

20,0

16,8

20,0

20,0

20,0

G8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G10

20,0

20,0

16,2

15,9

20,0

17,8

14,0

20,0

Rerata

20,0

15,9

20,0

20,0

20,0

19,7

20,0

20,0

H1

18,4

20,0

20,0

20,0

20,0

16,9

20,0

20,0

H2

20,0

14,9

19,6

17,8

18,6

18,2

12,4

20,0

H3

11,6

14,5

10,9

18,6

14,4

10,6

20,0

13,5

H4

9,7

12,6

13,0

17,4

13,6

12,6

15,2

12,3

H5

20,0

11,9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H6

20,0

20,0

20,0

15,6

20,0

18,9

20,0

20,0

H7

16,8

14,7

20,0

20,0

20,0

17,6

14,8

16,5

H8

20,0

20,0

20,0

16,9

20,0

20,0

20,0

20,0

H9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H10

15,9

16,4

17,0

20,0

20,0

15,4

15,3

15,8

H11

17,2

16,5

18,0

18,6

18,7

17,0

17,8

17,8

Rerata

15,3

13,5

15,9

18,5

16,6

15,3

16,9

16,5

I1

13,6

15,0

15,3

20,0

16,9

20,0

11,5

13,0

I2

20,0

20,0

16,3

15,8

19,1

20,0

13,2

15,2

I3

20,0

20,0

20,0

18,8

20,0

20,0

16,6

17,2

I4

20,0

20,0

20,0

17,8

20,0

20,0

20,0

20,0

I5

15,5

20,0

14,4

20,0

14,1

10,6

10,8

12,2

I6

20,0

18,6

20,0

20,0

20,0

20,0

18,0

20,0

I7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I8

20,0

20,0

20,0

16,7

20,0

20,0

20,0

20,0

I9

20,0

20,0

18,8

17,4

20,0

14,5

17,0

20,0

I10

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

Rerata

18,4

18,7

17,9

18,1

19,0

20,0

15,3

16,4

57  

Perlakuan

16-Apr

17-Apr

18-Apr

19-Apr

20Apr

21-Apr

22Apr

23-Apr

G1

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G3

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G4

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G5

15,5

20,0

20,0

20,0

20,0

17,9

20,0

20,0

G6

14,6

16,5

20,0

15,0

13,6

15,3

15,0

16,0

G7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G10

18,0

16,4

20,0

16,8

15,6

13,3

7,4

20,0

Rerata

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H1

20,0

19,3

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H2

18,9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H3

13,8

11,9

14,5

15,8

16,6

10,7

15,4

10,3

H4

10,8

11,2

17,5

13,6

17,8

14,8

10,7

12,8

H5

16,7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H6

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H7

20,0

10,1

20,0

17,9

18,8

15,9

16,0

16,0

H8

17,2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H10

20,0

15,7

20,0

13,6

14,1

15,5

16,1

16,6

H11

17,7

16,8

19,2

18,1

18,7

17,7

17,8

17,6

Rerata

15,1

15,8

18,0

17,3

18,6

16,4

16,5

15,8

I1

16,4

11,8

16,5

17,0

13,3

13,4

16,9

15,3

I2

16,8

14,8

18,3

19,6

14,2

16,6

16,4

18,8

I3

15,8

18,3

20,0

20,0

20,0

20,0

18,8

19,3

I4

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I5

8,4

12,3

15,0

8,4

20,0

7,4

9,6

8,4

I6

16,4

15,8

20,0

19,2

20,0

18,8

18,9

18,5

I7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

I9

14,5

9,9

20,0

20,0

16,2

20,0

20,0

18,0

I10

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

Rerata

17,2

16,2

18,7

19,1

16,9

17,5

18,0

18,4

58  

Perlakuan

24-Apr

25-Apr

26-Apr

27-Apr

28-Apr

29-Apr

30-Apr

01Mei

G1

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G3

20,0

20,0

20,0

17,1

20,0

20,0

20,0

20,0

G4

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G5

20,0

20,0

20,0

20,0

18,2

19,2

20,0

20,0

G6

11,4

14,9

15,6

13,8

15,8

20,0

10,8

15,7

G7

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G8

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

G10

18,9

20,0

20,0

20,0

16,0

16,3

20,0

20,0

Rerata

20,0

20,0

20,0

19,3

20,0

20,0

20,0

20,0

H1

20,0

16,9

16,9

20,0

12,8

19,8

15,4

13,8

H2

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H3

14,3

16,0

15,1

18,8

10,1

13,7

10,9

15,2

H4

17,8

13,2

16,3

18,8

11,8

11,3

16,0

16,4

H5

20,0

20,0

20,0

18,8

20,0

20,0

18,1

20,0

H6

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H7

16,9

17,4

18,6

20,0

14,0

16,7

15,3

17,7

H8

20,0

20,0

20,0

17,8

20,0

20,0

20,0

17,6

H9

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

20,0

H10

17,8

15,0

18,8

20,0

15,7

15,2

16,5

15,9

H11

18,7

17,9

18,6

19,4

16,4

17,7

17,2

17,7

Rerata

18,0

17,3

17,8

19,1

15,5

16,3

16,2

17,9

I1

18,8

12,3

20,0

20,0

20,0

18,9

17,8

16,8

I2

16,9

11,4

18,8

18,8

20,0

18,8

16,7

20,0

I3

20,0

13,5

17,8

18,0

18,7

17,9

18,9

17,7

I4

20,0

15,6

18,6

16,7

17,7

20,0

18,8

18,9

I5

10,0

11,9

20,0

20,0

15,7

20,0

17,9

17,9

I6

16,1

11,5

20,0

20,0

20,0

20,0

17,8

15,7

I7

20,0

20,0

16,8

18,8

17,8

18,8

20,0

16,7

I8

20,0

20,0

18,8

17,8

18,8

20,0

16,8

17,8

I9

14,1

14,0

20,0

20,0

20,0

17,8

16,9

17,8

I10

20,0

20,0

17,6

20,0

20,0

20,0

20,0

15,7

Rerata

18,9

13,2

18,8

18,4

19,1

18,9

18,1

18,4

Keterangan : Kode G = Tikus kontrol Kode H = Tikus yang diberi perlakuan ekstrak biji bligo 0.1 g/kg bb Kode I = Tikus yang diberi perlakuan ekstrak biji bligo 1 g/kg bb

59  

Lampiran 2b. Tabel konsumsi pakan rata-rata bulan ke-1, ke-2 dan ke-3 Jantan

Perlakuan

Betina

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Kontrol

17,3

17,5

19,5

19,5

19,2

19,7

19,2

19,7

17,4

14,9

0,1 g/kg bb

19,3

19,8

16,4

17,0

18,5

15,3

19,3

17,1

17,4

18,7

1 g/kg bb

17,4

18,4

18,1

19,1

19,0

20,0

19,3

19,7

16,7

16,5

Perlakuan

Jantan

Betina

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Kontrol

19,1

17,8

17,0

16,1

18,5

19,8

19,3

18,5

19,1

16,7

0,1 g/kg bb

18,2

17,3

15,7

13,8

18,2

16,4

19,7

16,0

19,2

16,7

1 g/kg bb

17,8

17,9

18,4

18,5

20,0

18,2

19,8

19,7

19,3

15,3

Perlakuan

Jantan

Betina

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Kontrol

19,7

19,4

19,6

18,9

19,9

20,0

20,0

17,6

19,9

15,5

0,1 g/kg bb

18,7

18,7

14,2

14,0

17,0

19,6

20,0

16,6

19,3

19,8

1 g/kg bb

16,1

17,4

18,6

18,2

19,6

19,6

18,1

19,8

19,5

14,6

Lampiran 3. Tabel ANOVA terhadap konsumsi pakan rata-rata bulan ke-1, ke-2 dan ke-3 Sumber

db

JK

KT

F hitung

F Tabel

0,287

3,35

Perlakuan

2

12,37

6,183

Galat

27

581,7

21,546

Total

29

594,1

Sumber

db

JK

KT

F hitung

F Tabel

Perlakuan

2

20,13

10,065

0,4257

3,35

Galat

27

638,4

23,644

Total

29

658,5

Sumber

db

JK

KT

F hitung

F Tabel

Perlakuan

2

1,979

0,9895

0,0406

3,35

Galat

27

657,3

24,344

Total

29

659,3

60  

Lampiran 4. Berat tikus hari ke 0 Jantan

Betina

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Ratarata

Kontrol

157

150

181

155

170

195

160

165

160

163

165,6

0,1 g/kg bb

178

175

172

160

160

160

170

170

163

162

167

1 g/kg bb

150

151

171

171

162

185

180

163

165

165

166,3

Perlakuan

Lampiran 5. Tabel ANOVA berat tikus hari ke 0 Sumber

db

JK

KT

F hitung

F Tabel

0,042

3,35

Perlakuan

2

9,8

4,9

Galat

27

3151

116,7

Total

29

3160

Lampiran 6 . Berat tikus bulan ke-1 Jantan

Perlakuan

Betina

Rerata

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Kontrol

225

219

275

291

251

270

302

277

270

193

257,3

0,1 g/kg bb

265

285

232

237

282

249

267

236

208

290

255,1

1 g/kg bb

245

278

215

295

282

292

289

269

226

188

257,9

Lampiran 7. Tabel ANOVA berat tikus bulan ke 1 Sumber

db

JK

KT

F hitung

F Tabel

Perlakuan

2

43,47

21,733

0,02

3,35

Galat

27

29924

1108,3

Total

29

29967

Lampiran 8. Berat tikus bulan ke-2 Perlakuan

Jantan

Betina

Rerata

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Kontrol

286

243

267

323

282

302

349

315

336

262

296,5

0,1 g/kg bb

296

313

250

267

330

286

325

274

315

335

299,1

1 g/kg bb

293

295

243

430

233

353

286

329

229

210

290,1

61  

Lampiran 9. Tabel ANOVA Berat tikus bulan ke-2 Sumber

db

JK

KT

Fhitung

F Tabel

Perlakuan

2

429,07

214,5

0,098

3,35

Galat

27

58966

2184

Total

29

59395

Lampiran 10. Berat tikus bulan ke-3 Perlakuan

Jantan

Betina

Rerata

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Kontrol

351

386

295

360

314

330

394

337

264

277

330,8

0,1 g/kg bb

339

305

277

283

367

327

368

332

228

365

319,1

1 g/kg bb

360

316

275

350

374

370

365

285

235

220

315

Lampiran 11. Tabel ANOVA Berat tikus bulan ke-3 Sumber

db

JK

KT

F hitung

F Tabel

Perlakuan

2

1344,5

672,2

0,273

3,35

2461

Galat

27

66435

Total

29

67779

Lampiran 12. Pertumbuhan tikus selama 3 bulan Perlakuan

Jantan

Betina

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Kontrol

194

236

114

205

144

125

234

172

104

114

0,1 g/kg bb

161

130

105

123

207

167

198

162

65

70

1 g/kg bb

210

165

104

179

212

185

185

122

70

55

Lampiran 13. Tabel ANOVA Pertumbuhan tikus selama 3 bulan Sumber Perlakuan

Db

JK

KT

2

653,4

326,7

Galat

27

72531

2686

Total

29

73185

Fhitung 0,1216

F Tabel 3,35

62  

Lampiran 14. Data hasil absorbansi splenosit tikus pada setiap kelompok tikus Perlakuan Kontrol

OD Kontrol 1.364

OD LPS 1.244

OD T90 1.186

OD T180 0.981

OD T270 1.266

OD R6 0.652

OD R12 0.543

OD R18 0.509

Kontrol

1.216

1.197

1.529

0.992

1.223

0.597

0.616

0.539

Kontrol

0.792

1.310

1.709

0.942

1.157

0.652

0.543

0.509

Kontrol

1.136

1.209

1.264

0.993

1.399

0.962

0.708

0.660

Kontrol

1.226

1.333

1.306

0.884

1.208

0.688

0.717

0.641

Rata-rata

1.147

1.259

1.399

0.958

1.251

0.710

0.625

0.572

0.1 g/kg bb

1.116

1.536

1.410

1.337

1.670

1.643

1.717

1.428

0.1 g/kg bb

1.262

1.630

1.218

1.678

1.630

1.907

1.723

1.667

0.1 g/kg bb

1.379

1.367

1.383

1.684

1.763

1.564

1.499

1.405

0.1 g/kg bb

1.373

1.636

1.177

1.428

1.640

1.840

1.170

1.636

0.1 g/kg bb

1.161

1.648

1.616

1.536

1.657

1.639

1.219

1.560

Rata-rata

1.258

1.563

1.361

1.533

1.672

1.719

1.466

1.539

1 g/kg bb

1.030

1.079

1.172

1.414

1.876

1.137

1.262

1.098

1 g/kg bb

0.967

0.991

1.222

1.297

1.794

1.205

1.052

1.153

1 g/kg bb

1.080

1.195

1.522

0.878

1.240

0.791

0.591

0.674

1 g/kg bb

1.117

1.147

1.219

1.064

1.478

0.902

0.708

0.621

1 g/kg bb

1.219

1.335

1.181

0.957

1.294

0.780

0.629

0.546

Rata-rata

1.083

1.149

1.263

1.122

1.536

0.963

0.848

0.818

Lampiran 15. Data hasil Indeks Stimulasi splenosit tikus pada setiap kelompok tikus Perlakuan Kontrol Kontrol Kontrol Kontrol Kontrol Rata-rata SD 0.1 g/kg bb 0.1 g/kg bb 0.1 g/kg bb 0.1 g/kg bb 0.1 g/kg bb

IS LPS 0.912 0.984 1.654 1.064 1.087 1.140 0.295 1.376 1.292 0.991 1.192 1.419

IS T90 0.870 1.257 2.158 1.113 1.065 1.293 0.503 1.263 0.965 1.003 0.857 1.392

IS T180 0.719 0.816 1.189 0.874 0.721 0.864 0.193 1.198 1.330 1.221 1.040 1.323

IS T270 0.928 1.006 1.461 1.232 0.985 1.122 0.222 1.496 1.292 1.278 1.194 1.427

IS R6 0.478 0.491 0.823 0.847 0.561 0.640 0.181 1.472 1.511 1.134 1.340 1.412

IS R12 0.398 0.507 0.686 0.623 0.585 0.560 0.111 1.539 1.365 1.087 0.852 1.050

IS R18 0.373 0.443 0.643 0.581 0.523 0.513 0.107 1.280 1.321 1.019 1.192 1.344

63  

Rata-rata SD 1 g/kg bb 1 g/kg bb 1 g/kg bb 1 g/kg bb 1 g/kg bb Rata-rata SD

1.254 0.171 1.048 1.025 1.106 1.027 1.095 1.060 0.038

1.096 0.222 1.138 1.264 1.409 1.091 0.969 1.174 0.168

1.222 0.118 1.373 1.341 0.813 0.953 0.785 1.053 0.285

1.338 0.122 1.821 1.855 1.148 1.323 1.062 1.442 0.374

1.374 0.149 1.104 1.246 0.732 0.808 0.640 0.906 0.258

1.179 0.272 1.225 1.088 0.547 0.634 0.516 0.802 0.330

1.231 0.132 1.066 1.192 0.624 0.556 0.4479 0.777 0.330

Lampiran 16. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan LPS Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N control 0.1 g/kg BB 1 g/kg BB Total

Mean

Std. Deviation

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Minimu m

Maximu m

5

1.14020

.295424

.132118

.77338

1.50702

.912

1.654

5

1.25400

.170709

.076343

1.04204

1.46596

.991

1.419

5

1.06020

.038075

.017028

1.01292

1.10748

1.025

1.106

15

1.15147

.201124

.051930

1.04009

1.26285

.912

1.654

Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic 2.655

df1

df2 2

Sig. 12

.111

ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

.095 .471 .566

df

Mean Square 2 12 14

.047 .039

F 1.207

Sig. .333

64  

Lampiran 17. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan tartrazin 90 µg/ml Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N control 0.1 g/kg BB 1 g/kg BB Total

Std. Deviation

Mean

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Minimu m

Maximu m

5

1.29260

.503198

.225037

.66780

1.91740

.870

2.158

5

1.09600

.222731

.099608

.81944

1.37256

.857

1.392

5

1.17420

.168475

.075344

.96501

1.38339

.969

1.409

15

1.18760

.318790

.082311

1.01106

1.36414

.857

2.158

Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic

df1

1.612

df2 2

Sig. 12

.240

ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

.098 1.325 1.423

df

Mean Square 2 12 14

F

.049 .110

Sig. .444

.652

Lampiran 18. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan tartrazin 180 µg/ml Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N control 0.1 g/kg BB 1 g/kg BB Total

Mean

Std. Deviation

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Minimu m

Maximu m

5

.86380

.193328

.086459

.62375

1.10385

.719

1.189

5

1.22240

.117861

.052709

1.07606

1.36874

1.040

1.330

5

1.05300

.284942

.127430

.69920

1.40680

.785

1.373

15

1.04640

.246641

.063683

.90981

1.18299

.719

1.373

65  

Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic

df1

3.660

df2 2

Sig. 12

.057

ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

.322 .530 .852

Mean Square 2 12 14

F

.161 .044

Sig.

3.644

.058

Lampiran 19. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan tartrazin 270 µg/ml Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N control 0.1 g/kg BB 1 g/kg BB Total

Std. Deviation

Mean

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Minimu m

Maximu m

5

1.12240

.221856

.099217

.84693

1.39787

.928

1.461

5

1.33740

.121794

.054468

1.18617

1.48863

1.194

1.496

5

1.44180

.373901

.167213

.97754

1.90606

1.062

1.855

15

1.30053

.277831

.071736

1.14668

1.45439

.928

1.855

Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic 7.054

df1

df2 2

Sig. 12

.009

ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

.265 .815 1.081

df

Mean Square 2 12 14

.133 .068

F 1.952

Sig. .185

66  

Lampiran 20a. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan rhodamin 6 µg/ml Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N control 0.1 g/kg BB 1 g/kg BB Total

Std. Deviation

Mean

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Minimu m

Maximu m

5

.64000

.180986

.080939

.41528

.86472

.478

.847

5

1.37380

.148806

.066548

1.18903

1.55857

1.134

1.511

5

.90600

.257604

.115204

.58614

1.22586

.640

1.246

15

.97327

.364998

.094242

.77114

1.17540

.478

1.511

Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic

df1

2.344

df2 2

Sig. 12

.138

ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

1.380 .485 1.865

Mean Square 2 12 14

.690 .040

F 17.072

Sig. .000

Lampiran 20b. Tabel uji lanjut Duncan Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan rhodamin 6 µg/ml Duncan Subset for alpha = .05 Perlakuan Control 1 g/kg BB 0.1 g/kg BB Sig.

N

1 5 5 5

2

.64000 .90600 .058

1.37380 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

67  

Lampiran 21a. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N Control 0.1 g/kg BB 1 g/kg BB Total

Std. Deviation

Mean

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Minimu m

Maximu m

5

.55980

.111269

.049761

.42164

.69796

.398

.686

5

1.17860

.272135

.121702

.84070

1.51650

.852

1.539

5

.80200

.330064

.147609

.39217

1.21183

.516

1.225

15

.84680

.353943

.091388

.65079

1.04281

.398

1.539

Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic

df1

5.900

df2 2

Sig. 12

.016

ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

.972 .782 1.754

Mean Square 2 12 14

.486 .065

F 7.465

Sig. .008

Lampiran 21b. Tabel uji lanjut Duncan Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml Duncan Subset for alpha = .05 Perlakuan Control 1 g/kg BB 0.1 g/kg BB Sig.

N

1 5 5 5

2

.55980 .80200 .159

1.17860 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

68  

Lampiran 22a. Tabel ANOVA Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan rhodamin 18 µg/ml Descriptives 95% Confidence Interval for Mean N Control 0.1 g/kg BB 1 g/kg BB Total

Std. Deviation

Mean

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Minimu m

Maximu m

5

.51260

.107382

.048022

.37927

.64593

.373

.643

5

1.23120

.132037

.059049

1.06725

1.39515

1.019

1.344

5

.77718

.330266

.147699

.36710

1.18726

.448

1.192

15

.84033

.365770

.094442

.63777

1.04288

.373

1.344

Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic

df1

10.230

df2 2

Sig. 12

.003

ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

1.321 .552 1.873

Mean Square 2 12 14

.660 .046

F 14.353

Sig. .001

Lampiran 22b. Tabel uji lanjut Duncan Indeks Stimulasi pada perlakuan dengan penambahan rhodamin 18 µg/ml Duncan Subset for alpha = .05 Perlakuan Control 1 g/kg BB 0.1 g/kg BB Sig.

N

1 5 5 5

2

.51260 .77718 .075

1.23120 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.

69  

Lampiran 23a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan LPS Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.00000 1.14020

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .295424

.000000 .132118

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test

Paired Differences

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.14020 0

Std. Error Mean

Std. Deviation

.13211 8

.295424

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.50701 7

.22661 7

-1.061

Sig. (2tailed)

df 4

.348

Lampiran 23b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan LPS Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.09700 1.25400

5 5

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .170709

.000000 .076343

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

.

Sig. .

70  

Paired Samples Test

Paired Differences

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.15700 0

Std. Error Mean

Std. Deviation

.07634 3

.170709

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.36896 3

.05496 3

-2.056

Sig. (2tailed)

df 4

.109

Lampiran 23c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan LPS Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

.94400 1.06020

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .038075

.000000 .017028

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test

Paired Differences

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.11620 0

Std. Deviation .038075

Std. Error Mean .01702 8

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.16347 6

.06892 4

-6.824

Sig. (2tailed)

df 4

.200

71  

Lampiran 24a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan tartrazin 90 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.0000 1.2926

Std. Deviation

Std. Error Mean

.00000 .50320

.00000 .22504

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test

Paired Differences

Std. Deviation

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

Std. Error Mean

.29260

.50320

.22504

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.91740

.33220

-1.300

Sig. (2tailed)

df 4

.263

Lampiran 24b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan tartrazin 90 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.09700 1.09600

5 5

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .222731

.000000 .099608

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

.

Sig. .

72  

Paired Samples Test

Paired Differences

Std. Deviation

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.00100 0

.222731

Std. Error Mean .09960 8

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.27555 7

.27755 7

.010

Sig. (2tailed)

df 4

.992

Lampiran 24c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan tartrazin 90 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

.94400 1.17420

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .168475

.000000 .075344

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test

Paired Differences

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.23020 0

Std. Deviation .168475

Std. Error Mean .07534 4

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.43938 9

.02101 1

-3.055

Sig. (2tailed)

df 4

.038

73  

Lampiran 25a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan tartrazin 180 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.00000 .86380

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .193328

.000000 .086459

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test

Paired Differences

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

Std. Error Mean

Std. Deviation

.13620 0

.193328

.08645 9

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

.10384 8

.37624 8

t 1.575

Sig. (2tailed)

df 4

.190

Lampiran 25b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan tartrazin 180 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.09700 1.22240

5 5

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .117861

.000000 .052709

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

.

Sig. .

74  

Paired Samples Test

Paired Differences

Std. Deviation

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.12540 0

.117861

Std. Error Mean .05270 9

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.27174 4

.02094 4

-2.379

Sig. (2tailed)

df 4

.076

Lampiran 25c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan tartrazin 180 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

.94400 1.05300

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .284942

.000000 .127430

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test

Paired Differences

Mean Pair IS Spontan - IS 1 Perlakuan

.10900 0

Std. Deviatio n

Std. Error Mean

.284942

.12743 0

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

.46280 2

.24480 2

t -.855

Sig. (2tailed)

df 4

.441

75  

Lampiran 26a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan tartrazin 270 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.00000 1.12240

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .221856

.000000 .099217

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test

Paired Differences

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

Std. Error Mean

Std. Deviation

.12240 0

.221856

.09921 7

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.39787 1

.15307 1

-1.234

Sig. (2tailed)

df 4

.285

Lampiran 26b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan tartrazin 270 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.09700 1.33740

5 5

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .121794

.000000 .054468

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

.

Sig. .

76  

Paired Samples Test Paired Differences

Std. Deviation

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.24040 0

.121794

Std. Error Mean .05446 8

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.39162 7

.08917 3

-4.414

Sig. (2tailed)

df 4

.012

Lampiran 26c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan tartrazin 270 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

.94400 1.44180

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .373901

.000000 .167213

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test

Paired Differences

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.49780 0

Std. Deviation .373901

Std. Error Mean .16721 3

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.96205 9

.03354 1

-2.977

Sig. (2tailed)

df 4

.041

77  

Lampiran 27a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan rhodamin 6 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.00000 .64000

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .180986

.000000 .080939

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test

Paired Differences

Std. Deviation

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.36000 0

.180986

95% Confidence Interval of the Difference

Std. Error Mean

Lower

Upper

.08093 9

.13527 6

.58472 4

t 4.448

Sig. (2tailed)

df 4

.011

Lampiran 27b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan rhodamin 6 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.09700 1.37380

5 5

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .148806

.000000 .066548

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

.

Sig. .

78  

Paired Samples Test Paired Differences

Std. Deviation

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.27680 0

.148806

Std. Error Mean .06654 8

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.46156 7

.09203 3

-4.159

Sig. (2tailed)

df 4

.014

Lampiran 27c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan rhodamin 6 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

.94400 .90600

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .257604

.000000 .115204

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test

Paired Differences

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.03800 0

Std. Deviation .257604

Std. Error Mean .11520 4

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.28185 8

.35785 8

.330

Sig. (2tailed)

df 4

.758

79  

Lampiran 28a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.00000 .55980

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .111269

.000000 .049761

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test

Paired Differences

Std. Deviation

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.44020 0

.111269

Std. Error Mean .04976 1

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

.30204 2

.57835 8

t 8.846

Sig. (2tailed)

df 4

.001

Lampiran 28b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.09700 1.17860

5 5

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .272135

.000000 .121702

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

.

Sig. .

80  

Paired Samples Test

Paired Differences

Std. Deviation

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.08160 0

.272135

Std. Error Mean .12170 2

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

.41950 0

.25630 0

t

Sig. (2tailed)

df

-.670

4

.539

Lampiran 28c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan rhodamin 12 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

.94400 .80200

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .330064

.000000 .147609

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test Paired Differences

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.14200 0

Std. Deviation .330064

Std. Error Mean .14760 9

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.26782 9

.55182 9

.962

Sig. (2tailed)

df 4

.391

81  

Lampiran 29a. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus kontrol dengan penambahan rhodamin 18 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.00000 .51260

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .107382

.000000 .048022

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test

Paired Differences

Std. Deviation

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

Std. Error Mean

.48740 0

.107382

.04802 2

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.35406 8

.62073 2

10.149

Sig. (2tailed)

df 4

.001

Lampiran 29b. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 0.1 g/kg bb dengan penambahan rhodamin 18 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

1.09700 1.23120

5 5

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .132037

.000000 .059049

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

.

Sig. .

82  

Paired Samples Test

Paired Differences

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

Std. Error Mean

Std. Deviation

.13420 0

.132037

.05904 9

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

t

.29814 5

.02974 5

-2.273

Sig. (2tailed)

df 4

.085

Lampiran 29c. Tabel Uji T Indeks Stimulasi pada tikus 1 g/kg bb dengan penambahan rhodamin 18 µg/ml Paired Samples Statistics

Mean Pair 1

IS Spontan IS Perlakuan

N

.94400 .77718

Std. Deviation

Std. Error Mean

.000000 .330266

.000000 .147699

5 5

Paired Samples Correlations N Pair 1

IS Spontan & IS Perlakuan

Correlation 5

Sig.

.

.

Paired Samples Test Paired Differences

Mean Pair 1

IS Spontan - IS Perlakuan

.16682 0

Std. Deviation .330266

Std. Error Mean .14769 9

95% Confidence Interval of the Difference Lower

Upper

.24325 9

.57689 9

t 1.129

Sig. (2tailed)

df 4

.322

83