SeptiFast rychlá detekce sepse
Olga Bálková Roche s.r.o., Diagnostics Division
Požadavky kliniků
Rychlá detekce a identifikace patogenů způsobujících sepsi
Æ Rychlé výsledky Výsledky do několika hodin Æ Jednoznačné výsledky Jasná diagnostická informace, určující použití vhodných antibiotik Æ Citlivost Zvýšit výskyt pozitivních výsledků i přes již zahájenou terapii antibiotiky
Použití SeptiFast • In vitro test založený na amplifikaci DNA a identifikaci bakterií a kvasinek/plísní obsažených v lidské krvi (K-EDTA) za použití přístroje LightCycler® Instrument 2.0 • Použití a hodnocení testu v kontextu klinického obrazu, výsledků dalších standardních mikrobiologických metod a/nebo dalších laboratorních markerů
LightCycler® Instrument 2.0
Detekované organismy Detekce 25 nejdůležitějších septických patogenů Původci > 90 % systémových krevních infekcí
Gram (-)
Gram (+)
Fungi
• • • • • • • •
• • • • • •
• • • • • •
Escherichia coli Klebsiella (pneumoniae, oxytoca) ( , Serratia marcescens Enterobacter (cloacae, aerog.) Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Acinetobacter baumanii Stenotrophomonas maltophilia
Staphylococcus aureus Koaguláza neg. Stafylokoky Streptococcus pneumoniae Streptococcus spp . Enterococcus faecium Enterococcus faecalis
MRSA (mecA) Zdroj: Kollef M, et al., Chest 1999, 1158:462-474.
Harbarth S, et al., Am J Med. 2003, 115: 529-535
Candida albicans Candida tropicalis Candida parapsilosis Candida crusei Candida glabrata Aspergillus fumigatus
Pracovní postup
MagNA Lyser Beads & Extrakční Kit, SeptiFast Kit
1,5 ml plné krve
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
mechanická lýza
manuální extrakce DNA
pipetování
PCR
analýza křivek tání
automatické určení patogenů
Výsledek
05‘
~60‘
Identifikační software
LightCycler 2.0 Instrument
MagNA Lyser 3.0 Instrument ~20‘
~135‘
~15-30‘
01‘
Total ~ 4,5 hod.
Časové srovnání den 1
den 2
den 3
den 4
Testy rezistence
2-3 dny Hemokultura
Gram
Species
Rezistence
Testy rezistence
4,5h PCR
Gram, species, rezistence (MRSA)
PCR
– nová dimenze stupně čistoty Nezbytné pro vysoce citlivé PCR
DNA z okolního prostředí a reagencií → falešně pozitivní výsledky •
= nová kvalita speciálně připravovaných reagencií produkty jsou určeny pro vysoce citlivou detekci bakteriální a fungální DNA. Patentovaný výrobní proces byl vyvinut pro eliminaci DNA nečistot/příměsí, které mohou interferovat s vysoce citlivou PCR technikou.
• Speciálně čištěné místnosti, filtrace vzduchu, několikastupňový dekontaminační proces, kontrola přístupu personálu, validační procesy
Potřebný materiál a přístroje Roche Diagnostics
Reagencie Spotřební materiál
Přístroje, zařízení
SeptiFast Reagents LightCycler® capillaries MGRADE 100 µl LightCycler® 2.0 Instrument* Multicolor Compensation Kit SeptiFast Software Set MagNA Lyser Instrument LightCycler® Carousel Centrifuge SeptiFast Cooling Block * LightCycler ® 2.0 CE IVD (Software 4.05.415 nebo vyšší)
SeptiFast beta-trial 99,1% diagnostická specifičnost
Pacienti
Total
Frankfurt
Bonn
113
52
61
Souhrn SeptiFast 2 / 217 falešně pozitivní výsledky
Výsledky hemokultury
102
SeptiFast výsledky
217
52
52
50 57 z
61
Bonnu
Specifičnost = 99,1 % 47 z FRA
1x nespecifický signál (částice v kapiláře) 1x Klebsiella / Enterobacter
Vzorky pac. JIP bez podezření na sepsi
Hemokultura
BC inkubovány v nemocnici, netransportovány
23 / 102 falešně pozitivní výsledky - 22 klasifikováno jako „kontaminace" - 1 klasifikován jako „neznámý" (S. mitis)
Každý vzorek PCR (SeptiFast test) testován na obou místech (zkřížená kontrola krevních vzorků)
SeptiFast beta-trial
Analýza PCR pozitivních výsledků
BC (+) 9.4%
PCR (+) 27.0%
50
50 pozitivních výsledků PCR bez potvrzení BC
41
41 pozitivních výsledků při opakování PCR hemokultura negativní 45 pozitivních výsledků v kultuře z jin. vzorku (BAL, biopsie...)
45
221
29
29 pozitivních výsledků BC u stej. pacienta
56
56 pozitivních výsledků BC ve stejném vzorku
221 pozitivních výsledků PCR
SeptiFast beta-trial Srovnání hemokultury a PCR 136
140 Počet vzorků
120 100 80 60 40
67
35
20 0
hemokultura (BC) SeptiFast
5
1
5
0
2 Počet patogenů
3
Srovnání SeptiFast detekuje živé i neživé mikroorganismy a volnou mikrobiální DNA. Rychlost
Polymikrobiální infekce
Cílená ATBlepší léčdetekce ba vícečetných
rychlejší než kultivační metody výsledky do 6-8 hod.
Senzitivita více pozitivních výsledků než kultivační metody (namnožení bakt. a fung. DNA)
infekčních agens
Vliv léčby antibiotiky úspěšná detekce u předléčených nemocných, ATB neinterferují se stanovením PCR
snížení množství méně příměsí/nečistot než při rezistentníMykotické ch kmeninfekce ů kultivačních metodách, zvl. pro CoNS Strep. spp. záchytřCandida vanemocni čnímvyšší prost edí a Aspergillus
Specifičnost
SeptiFast 6000 Kč
denní náklady/pacienta na JIP 11 000-13 000 Kč
