LightCycler SeptiFast Test MG

LightCycler® SeptiFast Test MG A LightCycler® 2.0 készülékhez való használatra (1415001 és nagyobb sorozatszámok)

In vitro diagnosztikai célra. AZ ALÁBBIAKKAL VALÓ HASZNÁLATRA:

LightCycler® SeptiFast Kit MG

54 Tests

SeptiFast Lys Kit MG

100 Tests

SeptiFast Prep Kit MG

10 Tests

SeptiFast Software Set v2.0

REF : 04 469 046 001 REF : 04 404 432 001 REF : 04 404 459 001 REF : 05 164 443 001

A FELHASZNÁLÁS CÉLJA A LightCycler® SeptiFast Test MG egy in vitro nukleinsav-amplifikációs vizsgálat a SeptiFast Test Master List (SML) listán megadott mikroorganizmusokból származó bakteriális, illetve gomba DNS kimutatására és azonosítására humán K-EDTA-s vérben LightCycler® 2.0 készülék segítségével. A vizsgálat a klinikai megjelenéssel, elfogadott mikrobiológiai vizsgálatokkal és/vagy egyéb laboratóriumi markerekkel együtt olyan betegek gondozásában nyújthat segítséget, akiknél szepszis vagy más bakteriális/gomba véráram-fertőzés gyanúja merült fel. A VIZSGÁLAT ÖSSZEGZÉSE ÉS MAGYARÁZATA A leginkább bacteriaemia és/vagy fungaemia okozta szepszis a kórházi mortalitás és morbiditás fő okainak egyike. A szepszissel kapcsolatos morbiditás és mortalitás csökkentésében a megfelelő antibiotikus terápia és a kezelés minél előbbi megkezdése kritikus tényezők. Az intenzív terápiás osztályokon a kezdettől inadekvát antibiotikus terápiával kezelt betegek hányada jelentős, 11–46% (1,2,3). A kórházakban rendszerint legalább 48 órát vesz igénybe a bakteriális/gomba kórokozó(k) azonosítása és gyógyszerérzékenységük meghatározása haemokultúrákból (1). Molekuláris diagnosztikai eszközökkel végzett gyors kórokozó-kimutatás elősegítheti a bacteriaemia/fungaemia gyors diagnózisát, és a megfelelő antibiotikum-terápia korai adását, ugyancsak csökkentve a széles spektrumú antibiotikumok túlzott használatát (4,5). A LightCycler® SeptiFast Test MG olyan mikroorganizmusok kimutatására szolgál, amelyek az összes véráram-fertőzések mintegy 90%-át okozzák (1,6). Míg a mikrobiológiai módszerek élő mikroorganizmusokat mutatnak ki, ez a vizsgálat élő és élettelen mikroorganizmusokat, valamint szabad mikrobiális DNS-t egyaránt kimutat. A target fajokat a SeptiFast Test Master List (SML) sorolja fel az 1. táblázatban. Ezeket a fajokat a LightCycler® SeptiFast Test MG segítségével belső vizsgálatok és/vagy klinikai kísérletek során pozitívként detektálták. Ezen fajok némelyike a leggyakrabban inadekvát módon kezelt fajok közé tartozik: Enterococcus spp.; E. coli; Candida spp.; Klebsiella spp (6). Továbbá az SML target fajok némelyikének korai azonosítása azért is fontos, mert ezek a legnehezebben kezelhető fertőzéseket okozzák: Acinetobacter spp., Stenotrophomonas spp., Enterococcus spp., Candida spp., Pseudomonas spp. (6). Egy mintán belül egynél több faj is kimutatható. Tehát a valós idejű PCR egy kiegészítő eszköz a korai klinikai döntéshozás elősegítésére. 1. táblázat: SeptiFast Test Master List (SML)

Gram (-) Escherichia coli

Gram (+)

Gombák

Staphylococcus aureus

Candida albicans

Klebsiella (pneumoniae/oxytoca)

CoNS1

Candida tropicalis

Serratia marcescens

Streptococcus pneumoniae

Candida parapsilosis

Enterobacter (cloacae/aerogenes)

Streptococcus spp.2

Candida glabrata

Proteus mirabilis

Enterococcus faecium

Candida krusei

Pseudomonas aeruginosa

Enterococcus faecalis

Aspergillus fumigatus

Acinetobacter baumannii 3 Stenotrophomonas maltophilia 1

Koaguláz negatív Staphylococcusok (a CoNS csoportba tartozó fajok a 8. táblázatban vannak felsorolva). 2 A Streptococcus spp. csoportba tartozó fajok a 8. táblázatban vannak felsorolva. 3 Gyakran A. calcoaceticus-A. baumannii (Acb komplex) elnevezésű fajokat nem mutatja ki (8).

A Dokumentum verzióinformációi rész a dokumentum végén található. 04822617001-07HU

1

Doc Rev. 7.0

AZ ELJÁRÁS ALAPELVEI A LightCycler® SeptiFast Test MG 3 fő eljáráson alapul: • A minta előkészítése mechanikai lízissel és a DNS tisztításával • A target DNS valós idejű PCR-amplifikálása 3 párhuzamos reakcióban (Gram-pozitív baktériumok, Gram-negatív baktériumok, gombák), majd a specifikus hibridizációs próbákkal történő kimutatás • Eredmény automatikus létrehozása az olvadási görbe elemzésével Minta előkészítése A minták mechanikus feltárása a SeptiFast Lys Kit MG és a MagNALyser készülék segítségével történik. A SeptiFast Prep Kit MG segítségével a mintákat magas hőmérsékleten való inkubálás során roncsolják egy proteáz és egy olyan chaotrop feltáró puffer segítségével, amely szabaddá teszi a nukleinsavakat, és megvédi a szabaddá vált DNS-t a vérben lévő DNázoktól. Belső kontroll (IC) meghatározott térfogata kerül a feltáróreagenssel együtt hozzáadásra valamennyi mintához. Az IC a targetszekvenciák kötő régióival identikus primer kötő régiókkal bíró szintetikus kettős szálú DNS-molekulákat tartalmaz. Az IC egyedi H próba kötő régiókat tartalmaz, amelyek lehetővé teszik az amplifikált IC megkülönböztetését a target-specifikus amplikontól. A kötő puffer hozzáadását követően a keverék egy üvegszálas szűrőbetéttel ellátott centrifugaoszlopba kerül. A humán genom és a bakteriális/gomba DNS az üvegszál felületéhez kötődik. A nem kötődött anyagok, mint sók, fehérjék és egyéb sejtfragmensek két mosási lépés során kerülnek eltávolításra. A mosási lépések befejezését követően az adszorbeált nukleinsavakat magas hőmérsékleten eluálják. Az elutátumokon PCR-analízist végeznek. Valós idejű PCR-amplifikáció és kimutatás A targetszekvencia kiválasztása A baktérium- és gombafajok differenciálására target régióként az internal transcribed spacer (ITS) régiót jelölték ki. Ez az egyetlen kópiájú géneknél nagyobb fokú analitikai érzékenységet nyújt, mivel a baktériumok és gombák genomjában számos operon található. Továbbá az ITS fajspecifikusabb, mint a riboszomális RNS-ek, és ezért a legalkalmasabb fajok közti differenciálásra. Valamennyi Gram-negatív és Gram-pozitív baktérium esetén a 16S és 23S riboszomális DNS-szekvenciák között, valamennyi gomba esetén pedig a 18S és 5,8S riboszomális DNS-szekvenciák között helyezkedik el. Amplifikáció A PCR-amplifikálás előtt az amplikonszennyezés kockázatát AmpErase (uracil-N-glikoziláz) enzim használatával csökkentik. Az enzim felismeri és katalizálja az olyan DNS-szálak megsemmisítését, amelyek dezoxiuridint tartalmaznak, a dezoxitimidint tartalmazókét viszont nem. A mintákat LightCycler® kapillárisokban (100 µl) MG lévő "hot-start" Taq polimerázt tartalmazó amplifikáló elegyhez adják, ahol a PCR-amplifikálás megtörténik. Az adott faj minden egyes targetja amplifikálódik vagy általános vagy specifikus primerek segítségével. Egy targetkeverék párhuzamosan amplifikálódik a reagens kontrollokban (RC). A PCR-termékek valós idejű kimutatása H próbák segítségével Az amplikon két specifikus H próba segítségével fluoreszcens technikával mutatható ki. Ezek a fluoreszcens festékkel jelölt H próbák az amplifikált fragmens belső szekvenciájához hibridizálnak az amplifikálási ciklus annealing fázisában. A kibocsátott

fluoreszcenciát a LightCycler® 2.0 készülék a négy különböző detektáló csatorna egyikén méri. Az amplifikálás befejeztével az olvadási görbe elemzése történik. Az olvadási hőmérséklet TM függ a hosszúságtól, a szekvenciától, valamint a próba és a target DNS közti homológia mértékétől. A próbákat az egy csatornán belül kimutatott fajok TM értékei alapján történő megkülönböztetésére tervezték. A minták és kontrollok automatikus azonosítása A minták és kontrollok olvadási hőmérsékleteinek (TM) elemzését a mellékelt azonosító szoftver (SeptiFast Identification Software) végzi el, és egy eredménylap kerül kinyomtatásra. A munkafolyamat során történő szennyeződés tartományába eső alacsony koncentrációjú Staphylococcus (CoNS) és Streptococcus fajok nem jelennek meg eredményként. Ha Staphylococcus aureus pozitív eredményt kap, azt követően mecA rezisztencia vizsgálat megfontolandó. A részleteket illetően tanulmányozza a LightCycler® SeptiFast mecA Kit MG mellékelt használati utasítását (P/N: 04 488 814 001). REAGENSEK SeptiFast Lys Kit MG

P/N: 04 404 432 001 100 teszt

LM (feltáró mátrix) üveg/kerámia gyöngyök

100 x


P/N: 04 404 459 001

10 teszt 20 x 1500 µl

+ +

[1] LB (feltáró puffer) < 50% guanidin-tiocianát trisz-HCl puffer 20% Triton X-100

Ártalmas

[2] PK (proteináz K) 2% proteináz K glicerin

2 x 850 µl

Ártalmas

04822617001-07HU

2

Doc Rev. 7.0


P/N: 04 404 459 001

10 teszt 10 x 1000 µl

+ +

[3] BB (kötő puffer) < 50% guanidin-tiocianát trisz-HCl puffer 20% Triton X-100

Ártalmas

[4] IRB (gátlás eltávolító puffer) < 50% guanidin HCl trisz-HCl puffer < 40% etanol

10 x 1800 µl

Ártalmas

[5] WB (mosópuffer) < 0,2% nátrium-klorid trisz-HCl puffer < 80% etanol

10 x 1600 µl

Tűzveszélyes [6] EB (eluáló puffer) trisz-HCl puffer

10 x 400 µl

BET (vérextraháló csövek)

1 x 50

FC (szűrőoszlopok)

2x5


04822617001-07HU

P/N: 04 469 046 001

54 teszt

[1a] RM 1a (reakciókeverék 1a) 3 U/µl FastStart Taq polimeráz < 0,1% AmpErase (uracil-N-glikoziláz) enzim

3 x 27 µl

[1a] RM 1b (reakciókeverék 1b) < 1% Brij < 0,1% magnéziumoldat < 0,1% dNTP trisz-HCl puffer

3 x 620 µl

[2] DM G+ (kimutatási keverék Gram-pozitív) < 0,001% primer, próbák G+ < 1% Brij trisz-HCl puffer

3 x 126 µl

[3] DM G- (kimutatási keverék Gram-negatív) < 0,001% primer, próbák G< 1% Brij trisz-HCl puffer

3 x 126 µl

[4] DM F (kimutatási keverék gomba) < 0,001% primer, próbák F < 1% Brij trisz-HCl puffer

3 x 126 µl

[5] RC G+ (reagens kontroll Gram pozitív) <0,001% DNS kontroll templát G+ EDTA trisz-HCl puffer

1 x 330 µl

[6] RC G- (reagens kontroll Gram-negatív) <0,001% DNS kontroll templát GEDTA trisz-HCl puffer

1 x 330 µl

[7] RC F (reagens kontroll gomba) <0,001% DNS kontroll templát F EDTA trisz-HCl puffer

1 x 330 µl

[8] IC (belső kontroll) <0,001% DNS in process kontroll templát G+, G-, F EDTA trisz-HCl puffer

5 x 100 µl

[9] NC (negatív kontroll) < 35% polietilén-glikol 10000 trisz-HCl puffer

10 x 1600 µl

3

Doc Rev. 7.0

SeptiFast Software Set v2.0

P/N: 05 164 443 001

1x

SeptiFast Identification Software v2.0 SeptiFast Macro v2.0 SeptiFast mecA Macro v1.0 SeptiFast MCC Macro v1.0 SeptiFast Proof Files v2.0 FIGYELMEZTETÉSEK ÉS ÓVINTÉZKEDÉSEK Általános figyelmeztetések és óvintézkedések • In vitro diagnosztikai célra. • Csak humán K-EDTA-s vérmintákhoz. • Ne pipettázzon szájjal. • Ne egyen, igyon vagy dohányozzon a laboratórium területén. Viseljen púdermentes, egyszer használatos védőkesztyűt, védőruhát és szemvédőt a minták és a készlet reagensei kezelése közben. A minták és a tesztreagensek kezelését követően gondosan mosson kezet. • Ne öntse össze a különböző gyártási tételekből származó reagenseket. • Ne keverje a különböző készletekből származó reagenseket, a master mixhez szükségeseket kivéve. • A fel nem használt reagensek, hulladék és minták kezelésének összhangban kell lennie a megfelelő országos, szövetségi, állami és helyi szabályozásokkal. • Ne használja a készletet a lejárati idő után. • Az anyagok biztonsági adatlapjai (MSDS) igény esetén hozzáférhetők a Roche helyi képviselőjétől. • A mintákat fertőzőként kell kezelni a Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (8) és a CLSI Document M29-A (9) előírásoknak megfelelő biztonságos laboratóriumi eljárásokat alkalmazva. Minden munkafelületet és kesztyűt alaposan tisztítson meg és fertőtlenítsen DNS-dekontamináló reagenssel (pl. LTK-008™). Győződjön meg arról, hogy a kesztyűk ellenállóak a DNS-dekontamináló reagenssel szemben. • Viseljen szemvédőt, védőruhát és egyszer használatos védőkesztyűt bármely reagens kezelése közben. Ezen reagensek bőrrel, szemmel és nyálkahártyákkal való érintkezése kerülendő. Ha mégis előfordul érintkezés, azonnal mossa le nagy mennyiségű vízzel. Ellenkező esetben égő érzés előfordulhat. Ezen reagensek kiömlése esetén szárazra törlés előtt vízzel hígítsa. • A feltáró puffer (LB) és kötő puffer (BB) bőrrel, szemmel és nyálkahártyákkal való érintkezése kerülendő. Ha mégis előfordul érintkezés, azonnal mossa le nagy mennyiségű vízzel, ellenkező esetben égés történhet. A kiömlött reagenseket feltörlés előtt hígítsa fel vízzel. Az LB és BB pufferek ne kerüljenek kapcsolatba hipoklorit (fehérítő) oldattal. Az ilyen keverékből erősen mérgező gáz fejlődhet. • A laboratóriumi munkafolyamatnak egyirányú módon kell zajlania, kezdve a preamplifikálási területtől a posztamplifikálási (amplifikálási/ kimutatási) területig haladva. A preamplifikálási műveletek a reagens-előkészítés és a minta-előkészítés. Valamennyi preamplifikálási művelethez tartozó felszerelést és eszközt jelölni kell, és tilos használni más művelethez vagy más munkaterületre átvinni. Valamennyi munkaterületen kesztyűt kell viselni, és a terület elhagyása előtt le kell venni. A reagens és kontroll kezeléséhez használt felszerelést és eszközöket tilos használni minta-előkészítési műveletekhez, amplifikált DNS vagy más target DNS-forrás pipettázásához vagy feldolgozásához. A posztamplifikálási műveletekhez tartozó felszerelést és eszközöket mindenkor a posztamplifikálási munkaterületen kell tartani. • A master mixben jelen lévő AmpErase enzim csökkenti az amplikonszennyezés kockázatát. Ugyanakkor a pozitív kontrollokból és pozitív klinikai mintákból származó szennyeződés csak helyes laboratóriumi gyakorlattal és ezen Használati utasításban meghatározott eljárások gondos betartásával kerülhető el. Specifikus figyelmeztetések és óvintézkedések a LightCycler® SeptiFast Test MG használatához A LightCycler® SeptiFast Test MG target organizmusaiból származó DNS jelen van a környezetben. Az ilyen, környezeti DNS kimutatásából származó álpozitív eredmények (DNS-szennyezés) elkerülése érdekében szükséges DNS-szennyezéstől mentes munkafolyamat biztosítása. Különösen a kezelő személy lehet DNS-szennyezés forrása, mivel az emberi bőrt és felső légutakat olyan különböző mikroorganizmusok népesítik be, amelyek a LightCycler® SeptiFast Test MG target organizmusai is [pl. Streptococcusok és koaguláz negatív Staphylococcusok (CoNS)]. Az alábbi szabályok ajánlások a DNS-szennyezés elkerülésére. LightCycler® SeptiFast Test MG reagensek és egyszer használatos eszközök • A LightCycler® SeptiFast Test MG reagenseket és egyszer használatos eszközöket a bakteriális DNS-sel való kontamináció lehetőségének minimalizálására fejlesztették ki. • Az MG termékeket bakteriális és gombákból származó nukleinsavak nagyon érzékeny kimutatására tervezték. Szabadalmazott gyártási eljárásokat fejlesztettek ki annak érdekében, hogy kizárják az ilyen jellegű vizsgálatokat zavaró DNS-szennyezést. • Kerülje a reagensfiolák szükségtelen kinyitását és lezárását. Ruházat és kesztyű • Viseljen púdermentes kesztyűt a teljes munkafolyamat alatt. • Ne hagyjon fedetlen bőrfelületet, viselje a kesztyűt a labor köpeny ujjára húzva. • Szennyeződés esetén azonnal cseréljen kesztyűt, vagy kezelje DNS-dekontamináló reagenssel (pl. LTK-008™; a kesztyűnek ellenállónak kell lennie a DNS-dekontamináló reagenssel szemben). • Felvételkor ne érjen a kesztyűk tenyér részéhez és az ujjakhoz.

04822617001-07HU

4

Doc Rev. 7.0

A lamináris áramlású fülke gondozása • A munkaállomás felületeinek tisztítását lamináris áramlás mögött végezze DNS-dekontamináló reagenssel minden egyes minta-előkészítést követően. MEGJEGYZÉS: Győződjön meg arról, hogy a felszerelés ellenálló a DNS-dekontamináló reagenssel szemben. • Rendszeres időközönként takarítson le minden felületet a lamináris áramlású fülkén belül (oldalfalak, alsó tálca alatti terek, padlótálca). • Ha több felhasználó használja a lamináris áramlású fülkét, biztosítsa annak DNS-mentességét. • Kapcsolja be az UV-fényt és a levegőáramot legalább 30 percre a munka előtt. • Kapcsolja ki az UV-fényt, amíg dolgozik. A PCR-munkaállomás gondozása • A PCR-munkaállomás munkafelületeinek tisztítását DNS-dekontamináló reagenssel végezze el minden egyes PCR-üzembeállítást követően. • Rendszeres időközönként takarítsa le a PCR-munkaállomás valamennyi felületét. • Kapcsolja be az UV-fényt legalább 30 percre a munka előtt. Kapcsolja ki az UV-fényt, amíg dolgozik. MEGJEGYZÉS: A lamináris áramlású fülke és PCR-munkaállomás UV-lámpájának cseréjét a gyártó utasításai szerint végezze. Munkaeszközök és fogyóeszközök kezelése • A LightCycler® SeptiFast Test MG vizsgálathoz használt specifikus fogyóeszközöket és munkaeszközöket hagyja a lamináris áramlású fülkében, ha lehetséges. • A munka megkezdése előtt sugározzon be minden darabot UV-fénnyel legalább 30 percig. • Csak DNS-mentes egyszer használatos anyagokat használjon (lásd a Szükséges, de nem biztosított anyagok c. fejezetet). Csak egyszer használja azokat. • A kapillárisok lezárásához használjon kupakozó eszközt (a kezelési utasításokat illetően tanulmányozza a LightCycler® 2.0 készülék Felhasználói kézikönyvét). • Kapilláris törése esetén kérjük, tanulmányozza a LightCycler® 2.0 készülék Felhasználói kézikönyvét ("Karbantartás" fejezet). Óvintézkedések pipettázáskor • Csak a lamináris áramlású levegőszűrő alatt nyissa ki a reagensfiolákat, pipettahegyes dobozokat és kapillárisdobozokat. • A lamináris áramláson kívül ne használja ugyanazokat a pipettahegyeket és kapillárisokat. • Ne érjen nyitott fiola pereméhez vagy csavarmenetéhez. Pipettázáskor a fiolát a pereme alatt érintse. • Ne érjen nyitott kapilláris pereméhez. • Rendezze a műveletek során használt valamennyi eszközt logikai sorrendbe a lamináris áramlás alatt (kerülje az összevissza történő pipettázást). • Ha kifröccsenés fordul elő, fejezze be az aktuális munkalépést, és utána azonnal takarítsa le munkaterületet DNS-dekontamináló reagenssel (pl. LTK-008™) TÁROLÁSI ÉS KEZELÉSI KÖVETELMÉNYEK SeptiFast Lys Kit MG • • •

15–25 °C között tárolandó. Csak egyszer nyissa ki a fiolákat. Tilos újra felhasználni őket. A lejárati idő után ne használja fel azokat.

SeptiFast Prep Kit MG • • • • •

15–25 °C között tárolandó (tilos lefagyasztani vagy hűtőben tárolni). A PK-t (2-es cső) legfeljebb 3-szor nyissa ki. A többi fiolát csak egyszer nyissa ki, és a fel nem használt reagenseket dobja ki. Ne használjon különböző gyártási tételekből származó reagenseket egy extrakciós futtatáson belül. A lejárati idő után ne használja fel azokat.

LightCycler® SeptiFast Kit MG • • • • • • • •

-15 ° és -25 °C között tárolandó. Sötét helyen tárolandó. A master mixeket ([1a], [1b] és [2] vagy [3] vagy [4] keverékét) legfeljebb 3 napig 2–8 °C között tárolja. A RC-t használat után legfeljebb 10 napig 2–8 °C között tárolja, vagy minden egyes használat után fagyassza le azonnal -15 ° és -25 °C közé. A RC-t legfeljebb 6-szor nyissa ki. A többi fiolát csak egyszer nyissa ki, és a fel nem használt reagenseket dobja ki. Ne használjon különböző gyártási tételekből származó reagenseket egy PCR-futtatáson belül. A lejárati idő után ne használja fel azokat.

A KÉSZLET TARTALMA SeptiFast Lys Kit MG

P/N: 04 404 432 001 100 teszt


P/N: 04 404 459 001 10 teszt


P/N: 04 469 046 001 54 teszt

SeptiFast Software Set v2.0 (egy alkalommal mellékelve) P/N: 05 164 443 001

04822617001-07HU

5

Doc Rev. 7.0

SZÜKSÉGES, DE NEM BIZTOSÍTOTT ANYAGOK Megvásárolhatók a Roche-tól LightCycler® 2.0 készülék és a Software 4.1

03 531 414 001

LightCycler® kapillárisok MG (100 µl)

03 612 066 001

LC mintatárcsa-centrifuga 2.0

03 709 582 001

MagNALyser készülék (230 V)

03 358 976 001

LightCycler® Multicolor Compensation Set

04 484 355 001

SeptiFast hűtőblokk

04 555 864 001

Megvásárolhatók más gyártóktól Kilendülő fejes centrifuga 15 ml-es csövekhez min. 4200 g ülepítőerejű VWR International (pl. Eppendorf) 521-0076 • 1x centrifuga 5810 521-0061 • 2x illesztőelem (1 pár) 15 ml-es csövekhez kúpos fenékkel 521-0044 • 1x kilendülő fejes rotor min. 4200 x g Centrifuga (pl. Eppendorf) • 1x MiniSpin®

VWR International 521-0012

2 termo keverő (pl. Eppendorf) • 2x Thermomixer Comfort benne • 1x termoblokk 24 x 2,0 ml-es fiolákhoz és • 1x termoblokk 8 x 15 ml-es fiolákhoz

VWR International 460-1112 460-1116 460-1120

Cső/palack átforduló keverő (pl. Stuart Scientific) • 1x átforduló keverő • 1x vortex

VWR International 445-5210 444-1372

DNS-mentes fiolák és hegyek (pl. MG egyszer használatos anyagok, greiner bio-one) • 5 ml-es szűrőhegyek MG • 1 ml-es szűrőhegyek MG • 100 µl-es szűrőhegyek MG • 20 µl-es szűrőhegyek MG • 1 ml-es szérumpipetta MG • 1,5 ml-es csövek MG

greiner bio-one 940525MG 750289MG 772289MG 774289MG 700371MG 616202MG

1,5 ml csavarókupakos csövek, steril

Sarstedt 72.692.105 vagy ennek megfelelő

DNS-dekontamináló reagens (pl. biodelta GmbH) • LTK-008™ set

biodelta GmbH 200-000

Pipetta 1–5 ml-es (pl. Thermo Life Sciences) • 1x Finnpette 1–5 ml-es


Pipetta 10–1000 µl-es (pl. Eppendorf) • 2x referencia 100–1000 µl • 2x referencia 10–100 µl • 1x referencia 2–20 µl (csak mecA vizsgálathoz)

VWR International 613-3650 613-3649 613-3647

Lamináris áramlású fülke (pl. Cleanair) • BioSafety Cabinet EF 4E


PCR-munkaállomás (pl. Safety Cabinet Solutions Ltd.) • Biocap Passive DNA PCR Cabinet


Pozitív kontrollanyag • Más gyártó által biztosítva vagy a felhasználó laboratóriumában előállítva (lásd az Ajánlás a pozitív kontrollanyagok készítésére c. szakaszt).

04822617001-07HU

6

Doc Rev. 7.0

A MINTA LEVÉTELE, TRANSZPORTJA ÉS TÁROLÁSA MEGJEGYZÉS: Valamennyi mintát és kontrollt fertőzések átvitelére alkalmasként kell kezelni. A minta levétele A LightCycler® SeptiFast Test MG kizárólag K-EDTA-s vérmintákhoz való használatra alkalmas. A vért K-EDTA alvadásgátlót tartalmazó steril csövekbe kell levenni. A minta transzportja és tárolása A teljes vér transzportja meg kell feleljen a kóroki ágensek transzportjára vonatkozó országos, szövetségi, állami és helyi szabályozásoknak (10). A teljes vér -15 ° és -25 °C vagy 2–8 °C között legfeljebb 3 napig, 15–25 °C között pedig legfeljebb 4 óra hosszat transzportálható/tárolható. Az eluátumok stabilitása A feldolgozott mintát közvetlenül a DNS-tisztítás után használja fel. Ha szükséges, tároljon egy a mecA vizsgálat céljára előkészítendő kis részletet (további részleteket illetően kérjük, tanulmányozza a LightCycler® SeptiFast mecA Kit MG készletet). Az eluátumok -15 ° és -25 °C között legfeljebb 30 napig, vagy 2–8 °C között legfeljebb 8 napig, 15–25 °C között pedig legfeljebb 4 óra hosszat tárolhatók. HASZNÁLATI UTASÍTÁS A LightCycler® 2.0 készülék és PCR-munkaállomás üzembe helyezése Színkompenzáció Áttekintés: A Multicolor Compensation Set használatakor színkompenzáció-objektumok (CCO-k) képződnek a LightCycler® 2.0 készüléken. Használat előtt a CCO-kat minősíteni kell. Színkompenzációs eljárás előkészítése • Használja a LightCycler® Multicolor Compensation Setet (P/N: 04 484 355 001). • Használjon elúciós puffert (EB, SeptiFast Prep Kit MG 6-os cső) (P/N: 04 404 459 001). MEGJEGYZÉS: Összesen 70 µl EB szükséges. Megmaradt elúciós puffer (EB, SeptiFast Prep Kit MG 6-os cső) felhasználható. A megmaradt EB-t -15 – -25°C-on kell tárolni, és 6 hónapig használható fel. 1. Vegyen egy cső elúciós puffert (EB, SeptiFast Prep Kit MG 6-os cső). 2. Olvassza ki a LightCycler® Multicolor Compensation (MCC) Set összes csövét az 1-es cső (CCB) kivételével, óvatosan keverje meg, és röviden centrifugázza. 3. Helyezzen hat LightCycler® kapillárist (20 µl) a LightCycler® mintatárcsa 1 – 6 pozíciójába. 4. Készítsen 1:6-os hígítást a CC530-ből (2-es cső, LightCycler® MCC Set) az elúciós pufferral (EB, 6-os cső, SeptiFast Prep Kit): • Pipettázzon 50 µl EB-t (6-os cső, SeptiFast Prep Kit MG) egy 1,5 ml-es steril csavarókupakos csőbe, és adjon hozzá 10 µl CC530-at (2-es cső). Óvatosan keverje meg, és röviden centrifugázza. 5. Pipettázzon 20 µl-t minden komponensből különböző kapillárisokba az alábbiak szerint: • 1-es rotorpozíció: EB (6-os cső, SeptiFast Prep Kit MG) • 2-es rotorpozíció: CC530 (hígított 2-es cső) • 3-as rotorpozíció: CC610 (3-as cső) • 4-es rotorpozíció: CC640 (4-es cső) • 5-ös rotorpozíció: CC670 (5-ös cső) • 6-os rotorpozíció: CC705 (6-os cső) MEGJEGYZÉS: Ne csökkentse a térfogatot. Ne változtassa meg a kapillárisok sorrendjét a LightCycler® mintatárcsában. 6. Zárja le a kapillárisokat a lezárókkal. Centrifugázzon az LC mintatárcsa-centrifuga 2.0 használatával, majd tegye át a LightCycler® mintatárcsát a LightCycler® 2.0 készülékbe. Indítsa el és tárolja a színkompenzáció-futást (CCR) A SeptiFast MCC_Macro_v1.0 vagy újabb telepítési és használati utasításai a LightCycler® 2.0 készülék Felhasználói kézikönyvének "Roche-makró végrehajtása" című fejezetében találhatók. MEGJEGYZÉS: Ne használja az mezőt a Macro Wizardban. Helyette a tételszámot a mintaszerkesztő megfelelő mezőjébe írja. 1. Mentse el a futtatást (pl. a következő néven: SeptiFast_CCR_ÉÉHHNN-xx, ÉÉ = év, HH = hónap, NN = nap, xx = futtatás száma). 2. A futtatás befejezését követően automatikusan létrejön egy jelentés. 3. Nyomtassa ki a jelentést, és őrizze meg az eredeti példányt. Futtatás validálása: • Ha a LightCycler® Multicolor Compensation Set jelentése meg van jelölve (pl.: <User Developed or Modified Test Method>), akkor a futtatás érvénytelen. Ismételje meg a futtatást. Színkompenzáció-objektum (CCO) létrehozása 1. Aktiválja a Színkompenzáció-analízis modult, majd nyomja meg a <save CC object> gombot. 2. A SeptiFast Identification Software (SIS) által történő egyértelmű azonosítás érdekében a CCO-t a következő képpen mentse: SeptiFast_CCO_ÉÉHHNN-xx (ÉÉ = év, HH = hónap, NN = nap, xx = futtatás száma, pl.: SeptiFast_CCO_050313-01). MEGJEGYZÉS: A CC objektumot használat előtt minősíteni kell a LightCycler® SeptiFast Test MG vagy a LightCycler® SeptiFast mecA Test MG segítségével.

04822617001-07HU

7

Doc Rev. 7.0

LightCycler® SeptiFast Test eljárás végzése a CCO minősítéséhez Egy új CCO minősítéséhez egy olyan LightCycler® SeptiFast futtatás szükséges egy RC és egy NC kontrollal, amely eleget tesz a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 1. rész" lapon leírt elfogadási feltételeknek. Ajánlott egy specifikus, reagenskontrollokból és 5 negatív kontrollból álló LightCycler® SeptiFast Test futtatás elvégzése úgy, hogy egy negatív kontrollt kiválaszt a CCO minősítéshez. MEGJEGYZÉS: Amennyiben egy érvényes LightCycler® SeptiFast Test futtatás, amely eleget tesz a SIS feltételeknek, már rendelkezésre áll a LightCycler® 2.0 készüléken, akkor lehetősége van rá, hogy a "Érvényes LightCycler® SeptiFast Test futtatás kiválasztása a CCO minősítéséhez" szakasszal folytassa. • Használjon SeptiFast Lys Kit MG-t (P/N: 04 404 432 001). • Használjon SeptiFast Prep Kit MG-t (P/N: 04 404 459 001). • Használjon LightCycler® SeptiFast Kit MG-t (P/N: 04 469 046 001). • Használja a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 1. rész" mintalapot (ld. ebben a szakaszban). 1. Végezzen el egy LightCycler® SeptiFast Test eljárást a teljes munkafolyamatot (minta-előkészítést és PCR-t is beleértve) követően. Az eljárás pozitív és negatív kontrollt tartalmaz mind a 3 vizsgálathoz. Ajánlott 4 további negatív kontroll használata, mint 1 – 4 minta. MEGJEGYZÉS: A minta és kontroll előkészítése, a reagens előkészítése, a PCR előkészítése, valamint a LightCycler® 2.0 készülék betöltése és működtetése részletes leírását illetően tanulmányozza ennek a tájékoztatónak a megfelelő szakaszait. MEGJEGYZÉS: Olyan néven mentse a futtatást, amely lehetővé teszi az egyértelmű azonosítást (pl. Minősítés_ÉÉHHNN-xx, ÉÉ = év, HH = hónap, NN = nap, xx = futtatás száma). 2. Elemezze a futtatás a "Csúcsészlelés és automatikus mintaazonosítás" című szakaszban megadott leírást követve, majd nyomtassa ki a SeptiFast Identification Software (SIS) jelentést. 3. Töltse ki a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 1. rész" lapon a megfelelő mezőket miután értékelte a SIS jelentésben a RUN FLAGS és ASSAY FLAGS eredményeket, azaz hogy a futtatás kapott-e jelzőt (FLAG) vagy megjegyzést (COMMENT), valamint a Specimen ablakot a 4 minta negatív kontrollra vonatkozóan. Ezt az ellenőrzőlapot kell a dokumentálás során használni. 4. Térjen vissza a LightCycler® SeptiFast Test futtatáshoz, és értékelje mindkét Abs Quant modult [G(+) 610 és 640] a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 1. rész" szerint. Ezt az ellenőrzőlapot kell a dokumentálás során használni. Kezdje az Abs Quant modul G(+) 610 értékelésével. Kövesse az alábbi utasításokat az Abs Quant modul G(+) 640 esetén is. • Görgessen le az analízis modulhoz [Abs Quant G(+) 610 modul], és kattintson rá. • A kezelősávra kattintva növelje meg az analízis ablakot. • Ellenőrizze a CP-t. • Írjon egy I (Igen) vagy N (Nem) betűt a "CP vagy CP in [ ]" oszlopba az eredménynek megfelelően. • A dokumentálás befejezéseként nyomtassa ki a LightCycler® szoftver analíziseredmény-ablakát (válassza ki a <print window> menüpontot a File menüből). A kinyomtatott eredeti példányokat meg kell őrizni. Pipálja ki ezt a lépést a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 1. rész" "Print Window √ " mezőjében. 5. Jelölje be, ha a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 1. rész" szerint az elfogadási feltételek teljesülnek. 6. Válassza ki az egyik CP nélküli negatív kontrollt, majd folytassa "Színkompenzáció-objektum (CCO) minősítése" szakasszal. MEGJEGYZÉS: Egy minden elfogadási feltételt teljesítő LightCycler® SeptiFast Test futtatás, mint specifikus LightCycler® SeptiFast.ixo-fájl használható valamennyi további CCO minősítéshez. Olyan LightCycler® SeptiFast Test futtatást, amely nem elégíti ki valamennyi elfogadási feltételt, tilos használni CCO minősítéshez. Ilyen esetben ismételje meg a LightCycler® SeptiFast Test eljárást teljesen új negatív kontrollokkal.

04822617001-07HU

8

Doc Rev. 7.0

CCO minősítési ellenőrzőlap - 1. rész (LightCycler® SeptiFast Test futtatás ellenőrzése és egy NC kiválasztása) Dokumentációs célra az ellenőrzőlapról másolat készítése javasolt. Operator’s Name / Date: LightCycler® SeptiFast Test run (*.ixo-file): Tanulmányozza a "LightCycler® SeptiFast Test eljárás végzése a CCO minősítéséhez" című szakasz 2. és 3. lépését: • Elemezze a LightCycler® SeptiFast Test futtatást. • Exportálja a LightCycler® SeptiFast Test futtatást a SIS szoftverbe. • Értékelje a SIS jelentésben a Run Flags és Assay Flags eredményeket, azaz, hogy a futtatás kapott-e jelzőt (FLAGS) vagy megjegyzést (COMMENTS). Run Flags (I/N)

Assay Flags (I/N)

1. sz. elfogadási feltétel: "Nem (N)" a Run Flags és Assay Flags mezőkben. MEGJEGYZÉS: Amennyiben "Igen (I)" szerepel a Run Flags vagy Assay Flags mezőben, úgy ismételje meg a LightCycler® SeptiFast Test munkafolyamatot teljesen új negatív kontrollokkal. •

Értékelje a SIS jelentés Specimen ablakának eredményeit a 4 minta negatív kontrollra vonatkozóan (csak specifikus LightCycler® SeptiFast Test futtatás esetén, amelyet 4 minta negatív kontrollal végeztek).

2. sz. elfogadási feltétel: "Θ : no analyte detected" a minta NC eredmény oszlopában. MEGJEGYZÉS: Olyan minta negatív kontrollt, amelyben analit volt kimutatható, tilos használni további vizsgálatokhoz.

•

Print SIS Report √

Dokumentálás céljából nyomtassa ki a SIS jelentést.

Tanulmányozza a "LightCycler® SeptiFast Test eljárás végzése a CCO minősítéséhez" című szakasz 4. és 6. lépését: • Térjen vissza a LightCycler® SeptiFast Test futtatáshoz, és elemezze mindkét Abs Quant modult [G(+) 610 és 640]. CP vagy CP in [ ] (I/N)

Minta

Abs Quant G(+) 610

Abs Quant G(+) 640

#NC# Csak specifikus LightCycler® SeptiFast futtatás esetén, amelyet 4 minta negatív kontrollal végeztek: 1. minta NC 2. minta NC 3. minta NC 4. minta NC Print Window 610 √

Print Window 640 √

3. sz. elfogadási feltétel: "Nem (N)" a "CP vagy CP in [ ]" mezőkben mind az Abs Quant G(+) 610, mind az Abs Quant G(+) 640 modulnál legalább egy NC esetén. MEGJEGYZÉS: Amennyiben egyik NC sem teljesíti ezt az elfogadási feltételt, úgy ismételje meg a LightCycler® SeptiFast Test munkafolyamatot teljesen új negatív kontrollokkal. 1., 2. és 3. sz. elfogadási feltételek teljesítve: IGEN

NEM

A futtatás használható CCO minősítésre

A futtatás nem használható CCO minősítésre

Minősítésre kiválasztott NC (minta neve):

04822617001-07HU

9

Doc Rev. 7.0

Érvényes LightCycler® SeptiFast Test futtatás kiválasztása a CCO minősítéséhez Alternatív eljárás a "LightCycler® SeptiFast Test eljárás végzése a CCO minősítéséhez" című szakasz helyett. Csak akkor alkalmazható, ha egy érvényes LightCycler® SeptiFast Test futtatás, amely eleget tesz a "LightCycler® SeptiFast Test eljárás végzése a CCO minősítéséhez" című szakaszban leírt érvényességi feltételeknek, már rendelkezésre áll a LightCycler® 2.0 készüléken. • Használja a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 1. rész" mintalapot (ld. a "LightCycler® SeptiFast Test eljárás végzése a CCO minősítéséhez" című szakaszban). 1. Válasszon ki egy korábban elvégzett érvényes LightCycler® SeptiFast Test futtatást. Ezt a futtatást egy megfelelő SIS jelentés érvényesnek minősítette volna. 2. Alkalmazza az új CCO-t az érvényes LightCycler® SeptiFast Test futtatáson: • Nyissa meg a kiválasztott érvényes LightCycler® SeptiFast Test fájlt. Nyissa ki a Run modult. • Válassza ki az új CCO-t a menüből az alábbiak szerint (1. ábra): • Kattintson a gombra. • Kattintson a <Select Color Compensation…> elemre. 1. ábra: CCO alkalmazása

•

Megnyílik egy párbeszédpanel (<Select Object>). Keresse meg, és válassza ki az új CCO-t. Kattintson az gombra. Megnyílik egy másik párbeszédpanel (). Ne inaktiválja egyik csatornát sem. Kattintson az gombra. • Járjon el ugyanígy mind a 12 Tm elemzés modul (3 vizsgálat, 4 csatorna) és a 2 abszolút kvantifikációs modul esetén. 3. Analizálja a LightCycler® SeptiFast futtatást a "LightCycler® SeptiFast Test eljárás végzése a CCO minősítéséhez" című szakasz 2. és 3. lépésében leírtakat követve. 4. Értékelje mindkét Abs Quant modult [G(+) 610 és 640] a "LightCycler® SeptiFast Test eljárás végzése a CCO minősítéséhez" című szakasz 4. és 6. lépésében leírtak szerint. 5. Mentse el a futtatást az újonnan alkalmazott CCO-val. Megnyílik egy párbeszédpanel (). Adja meg a változás okát (pl. új CCO). Színkompenzáció-objektum (CCO) minősítése 1. Nyissa meg a kijelölt LightCycler® SeptiFast Test fájlt. 2. Minősítse a CCO-t a kiválasztott NC-t használva (lásd: "CCO minősítési ellenőrzőlap - 1. rész"). 3. Értékelje valamennyi TM elemzés modult a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 2. rész" szerint. Ezt az ellenőrzőlapot kell a dokumentálás során használni. Kövesse az alábbi utasításokat valamennyi TM elemzés modul és TM target tartomány esetén. Kezdje a TM elemzés modul G(+) 640-nel: • Kattintson az analízismodulra [pl. TM Calling G(+) 640]. • Áttekintés nyeréséhez aktiválja a kiválasztott NC-t az #RC#-vel együtt. (Az automata skálázás a legmagasabb csúcsra fog beállni.) • Módosítsa az alapvonalat a megfelelő "CCO minősítési alapvonal" értékkel, amely a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 2. rész" lapon a "CCO minősítési alapvonal" oszlopban van megadva (2. ábra). MEGJEGYZÉS: Minden egyes target TM tartomány egy új, eltérő alapvonal beállítást igényel az NC ellenőrzéséhez. • Aktiválja csak a kiválasztott NC-t (3. ábra). Az automata skálázás a negatív kontroll háttér fluoreszcenciájára fog beállni. Az alapvonal adott esetben többé már nem látható. 2. ábra: RC és NC olvadási görbék (áttekintés)

RC

NC

CCO minősítési alapvonal

04822617001-07HU

10

Doc Rev. 7.0

3. ábra: LightCycler® szoftver analíziseredmény-ablaka negatív kontroll esetén


NC

Target TM tartomány

Állítsa be a két TM vonalat, amelyek a target TM tartomány alsó és felső értékét jelölik. Tanulmányozza a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 2. rész" lapon a "Target TM tartomány" oszlopot a Tm vonalakhoz tartozó értékek módosításához. Ellenőrizze a kiválasztott NC maximális fluoreszcencia értékét a "Target TM tartomány"-on belül. Írjon egy I (Igen) vagy N (Nem) betűt a "Maximális fluoreszcencia a CCO minősítési alapvonal alatt" oszlopba az eredménynek megfelelően. • A dokumentálás befejezéseként nyomtassa ki a LightCycler® szoftver analíziseredmény-ablakát (válassza ki a <print window> menüpontot a File menüből). A kinyomtatott eredeti példányokat meg kell őrizni. Pipálja ki ezt a lépést a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 2. rész" "Print Window √ " mezőjében. 4. Ismételje meg a 3. lépést, amíg valamennyi target TM tartományt a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 2. rész" lapon megadott összes TM elemzés modulban analizálta, valamint az ellenőrzőlap kitöltésével és adott oldalak kinyomtatásával ezt dokumentálta. 5. Jelölje be, ha a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 2. rész" szerint az elfogadási feltételek teljesülnek. Az elfogadási feltételeket teljesítő CCO érvényes, és hat hónapig felhasználható. Hat hónaponként új színkompenzációs futtatást és minősítést kell végezni kell elvégezni. Hibaelhárítás Ha a "CCO minősítési ellenőrzőlap - 2. rész" lapon megadott elfogadási feltételek nem teljesülnek, a CCO nem érvényes, és nem használható fel. A színkompenzációs eljárást meg kell ismételni, és az új CCO-ra egy új CCO minősítést kell elvégezni. Ha a CCO harmadszor sem megy át a CCO minősítésen, lépjen kapcsolatba a Roche helyi képviselőjével. •

• •

04822617001-07HU

11

Doc Rev. 7.0

CCO minősítési ellenőrzőlap - 2. rész Dokumentációs célra az ellenőrzőlapról másolat készítése javasolt. Operator’s Name / Date: LightCycler® SeptiFast Test futtatás CCO minősítéshez (*.ixo-fájl): Minősítésre kiválasztott NC (minta neve): CCO (*.ixo-fájl): Lásd "Színkompenzáció-objektum (CCO) minősítése" című szakasz 1. – 4. lépését: • Minősítse a CCO-t a kiválasztott NC-t használva.

Minta


Target TM tartomány

NC

0,029

49,03 – 56,04

NC

0,037

59,07 – 63,07

TM Calling G(+) 670

NC

0,061

49,32 – 53,42

TM Calling G(+) 705

NC

0,031

60,33 – 64,33

NC

0,039

55,48 – 62,37

NC

0,004

63,81 – 68,06

NC

0,256

48,88 – 53,38

NC

0,223

55,50 – 60,00

NC

0,107

49,51 – 53,51

TM elemzés modul

TM Calling G(+) 640

TM Calling G(–) 640

TM Calling G(–) 670

TM Calling F 670

Maximális fluoreszcencia a CCO minősítési alapvonal alatt (I/N)

Print Window √

Elfogadási feltétel: "IGEN (I)" a "Maximális fluoreszcencia a CCO minősítési alapvonal alatt" oszlopban valamennyi TM elemzés modul és CCO minősítési alapvonal esetén a kiválasztott negatív kontrolnál. IGEN

NEM

CCO érvényes, és hat hónapig felhasználható.

CCO nem használható. Lásd a Hibaelhárítás szakaszt.

A SeptiFast Identification Software v2.0 (SIS) telepítése:

A frissítések telepítése során ellenőrizze, hogy van-e újabb információ adva a termékhez. 1. Jelentkezzen be a LightCycler® adatállomásra rendszergazdaként. 2. Helyezze be a SeptiFast Software Set CD-t a LightCycler® adatállomás CD-meghajtójába. MEGJEGYZÉS: Ha a program telepítő nem indul automatikusan, akkor a SIS manuális telepítésének megkezdéséhez kattintson a SeptiFast Software Set CD-n található setup.exe fájlra. 3. Első alkalommal történő telepítéskor: Abban az esetben, ha a Microsoft .NET 1.1 keretrendszer nincs telepítve, a SIS beállításának megkezdésekor emlékeztetve lesz annak telepítésére. A Microsoft .NET 1.1 keretrendszer telepítése kötelező, különben a SIS nem fog megfelelően működni. 4. A SIS telepítéséhez nyomja meg az gombot, kövesse a telepítő varázslót. 04822617001-07HU

12

Doc Rev. 7.0

5. Ha csak egy felhasználó fog dolgozni a LightCycler® adatállomáson, válassza, hogy <just me>, ha egynél több felhasználó fog dolgozni a LightCycler® adatállomáson, válassza, hogy <everyone>. 6. Erősítse meg a <Setup succeeded> üzenetet az megnyomásával (a SIS mostantól az asztalon lévő ikonjával indítható). 7. Az *.ixo fájlok adatmappája: automatikusan létrejön. A SIS helyes telepítésének ellenőrzése (a LightCycler® SeptiFast Test MG és a LightCycler® SeptiFast mecA Kit MG):

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Valamennyi biztonsági fájlt a SeptiFast Software Set CD-ről a program automatikusan a mappába másolja. Kattintson duplán a SIS ikonra az asztalon, nyomja meg a <Start> gombot. Jelölje ki a biztonsági fájlt a mappából (SeptiFast Proof v2.0.ixo vagy SeptiFast mecA Proof v2.0, rendre). Jelölje meg a "NO" választ arra, hogy a LightCycler® eredménylap tartalmazza-e a <User Developed or Modified Test Method> jelzést. A program automatikusan elemzi a fájlt, és megjeleníti az adatokat. Nyomtassa ki a jelentést. Nyissa meg és nyomtassa ki a vonatkozó PDF-fájlokat (SeptiFast Proof v2.0.pdf vagy SeptiFast mecA Proof v2.0.pdf, rendre). A kinyomtatott jelentésnek és a kinyomtatott proof.pdf fájlnak meg kell felelnie egymásnak. Ha nem, akkor lépjen kapcsolatba a Roche helyi képviselőjével. 9. Végezze el a 3–8. lépéseket a második biztonsági fájllal.

A SIS eltávolítása:

1. 2. 3. 4. 5.

Jelentkezzen be a LightCycler® adatállomásra rendszergazdaként. Kattintson a <Start> gombra a LightCycler® adatállomás tálcáján. Válassza ki a <Settings - Control Panel - Add/Remove Programs> pontot. Megjelenik az aktuálisan telepített programok listája, kattintson a <SIS>-re. Válassza, hogy , és erősítse meg, hogy .

A SeptiFast makrók telepítése:

1. Telepítse a makrókat a SeptiFast Software Set v2.0 CD-ről. 2. Egy makró telepítéséhez kérjük, tanulmányozza a LightCycler® 2.0 készülék Felhasználói kézikönyvét ("in vitro diagnosztikai célra"). A lamináris áramlású fülke és PCR-munkaállomás előkészítése 1. Gondosan takarítsa ki és dekontaminálja a lamináris áramlású fülkét és a PCR-munkaállomást (pl. LTK-008™ segítségével). 2. Legalább 30 percre kapcsolja be: a lamináris áramlású fülke UV-lámpáját és levegőáramát, a PCR-munkaállomás UV-lámpáját. 3. Kapcsolja ki az UV-fényt, amíg dolgozik. 4. Nyissa ki a LightCycler® SeptiFast Kit MG-t és vegyen elő: • 1 fiola IC és 1 fiola NC kontrollt, és hagyja őket felolvadni 2–8 °C hőmérsékleten egy, a minta-előkészítéshez használt állványban (nem tartozék). • 1 fiola RM 1a, RM 1b, DM G+, DM G-, DM F, RC G+, RC G-, RC F reagenseket, és hagyja őket felolvadni SeptiFast hűtőblokkban a minta előkészítés során 2–8 °C között. 5. Kapcsolja be: Termo keverő 1 (15 ml-es csövekhez) és állítsa be 56 °C-ra, termo keverő 2 (2,0 ml-es csövekhez) és állítsa be 70 °C-ra. 6. Helyezzen megfelelő mennyiségű EB fiolát (1 fiola per minta/NC) a termo keverő 2-be (70 °C). 7. Tegye a vérvételi csöveket vagy minta fiolákat átforduló keverőbe, és keverje 30 percig. Dolgozza fel őket azonnal. Minta és kontroll előkészítése MEGJEGYZÉS: Valamennyi műveleti lépést a lamináris áramlású fülkében végezzen el. Ajánlás a pozitív kontrollanyagok készítésére • A minta-előkészítési eljárás megkezdése esetén valamennyi lépést végre kell hajtani. • A pozitív kontrollanyagokat más gyártóktól is meg lehet vásárolni. • Amennyiben a felhasználó laboratóriumában készülnek, jellemző klinikai izolátumokat kell kiválasztani a helyi előfordulás és a klinikai jelentőség szerint. Ezen izolált telepeket fel kell oldani, és körülbelül 300 CFU/ml koncentrációnak megfelelően be kell oltani negatív vérbe. • Pozitív kontrollnak, ATCC anyag 33592, egy methicillin-rezisztens S. aureus használható, amely megteremti annak a lehetőségét, hogy az eluátumot pozitív kontrollként lehessen használni a LightCycler® SeptiFast Test MG és a LightCycler® SeptiFast mecA Kit MG vizsgálatokhoz (P/N: 04 488 814 001) is. • A törzset 18–24 óra hosszat 28–37 °C között tenyésztették véres agaron (5% birkavér), és reszuszpendálták 0,5 McFarland-nak megfelelően (~1,5x108 CFU/ml). Ezt a szuszpenziót kell beoltani negatív vérbe 300 CFU/ml végső koncentrációnak megfelelően. Előfeltárás SeptiFast Lys Kit MG segítségével MEGJEGYZÉS: Olvassa el gondosan a MagNALyser készülék Felhasználói kézikönyvét. 1. Használjon 1 megfelelően felcímkézett LM fiolát minden egyes mintához, illetve NC-hez. 2. Nyissa ki a fiolát és vigyen át 1500 µl vérmintát vagy NC-t. 3. Zárja le szorosan a csövet. MEGJEGYZÉS: Ne a kupak tetején jelölje meg a csöveket. 4. Végezzen elő feltárást a mintákon a MagNALyser készülékben 70 másodpercig 7000 rpm fordulatszámon. 5. Hagyja a fiolákat a készüléken kívül állni 10 percig. Centrifugálni tilos! Minta-előkészítés SeptiFast Prep Kit MG segítségével. MEGJEGYZÉS: Valamennyi reagensnek tiszta oldatnak kell lennie. Ha csapadék képződött, melegítse fel az oldatot (max. 37 °C-ra). Rázza finoman, amíg a csapadék feloldódik. 1. Mérjen 150 µl PK-t a BET 1-be. 2. Mérjen 1 ml előfeltárt mintát vagy NC-t a BET 1-be. Kerülje el a szilárd feltáró mátrix vagy hab pipettázását. 3. Tegye fel a kupakot, és röviden vortexelje. 4. Adjon hozzá 10 µl IC-t. Használjon új pipettahegyet minden egyes mintához, illetve NC-hez. 5. Adja hozzá 2 fiola LB tartalmát, tegye rá a kupakot és azonnal vortexelje alaposan. 6. Inkubálja 15 percig 56 °C-on óvatos keverés közben (pl. 500 rpm Eppendorf termokeverővel). MEGJEGYZÉS: A BET 1-ben lévő valamennyi folyadékot le kell fedni az inkubáló eszközzel. 7. Adja hozzá 1 fiola BB tartalmát, tegye rá a kupakot és vortexelje. 04822617001-07HU

13

Doc Rev. 7.0

8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24.

Tegyen FC-t a BET 2-re. Ne érjen az FC belső oldalához vagy kivezető nyílásához. Pipettázza a minta-előkészítő keverék felét a BET 1-ből az FC szűrőjére (kb. 2,7 ml). Tegye rá a kupakot és centrifugálja le a BET 2-FC szerelvényt 1900 x g-n 1 percig. Pipettázza a minta előkészítő keverék maradékát a BET 1-ből az FC szűrőjére (kb. 2,7 ml). Használjon új pipettahegyet minden egyes mintához, illetve NC-hez. Tegye rá a kupakot és centrifugálja le a BET 2-FC szerelvényt 1900 x g-n 3 percig. Tegyen FC-t a BET 3-ra. Dobja ki a BET 2-t átáramoltatással. Mérje egy fiola IRB tartalmát a BET 3-ban lévő FC szűrőjére. Tegye rá a kupakot és centrifugálja le a BET 3-FC szerelvényt 4200 x g-n 2 percig. Mérje egy fiola WB tartalmát a BET 3-ban lévő FC szűrőjére. Tegye rá a kupakot és centrifugálja le a BET 3-FC szerelvényt 4200 x g-n 10 percig. Tegyen FC-t a BET 4-re. Dobja ki a BET 3-at átáramoltatással. Centrifugázza a BET 4-et 4200 x g-n 1 percig. Tegyen FC-t a BET 5-re. Dobja ki a BET 4-et. Pipettázzon 300 µl előmelegített EB-t (70 °C) az FC közepére. Tegye rá a kupakot, és inkubálja 5 percig szobahőmérsékleten. Centrifugázza 4200 x g-n 2 percig. Dobja ki az FC-t. Vigye át az eluátumot 1,5 ml-es fiolákba (pl. greiner bio-one szérumpipettákkal). Kerülje a cső falával való érintkezést.

Reagens-előkészítés LightCycler® SeptiFast Kit MG segítségével MEGJEGYZÉS: Javasoljuk, hogy valamennyi műveleti lépést a minta-előkészítési helytől elkülönített PCR-munkaállomáson végezzen el. 1. Vegye ki a SeptiFast hűtőblokkot a reagens fiolákkal a hűtőszekrényből, szennyezésmentesítse DNS-dekontamináló reagenssel (pl. LTK-008™), és vigye át a PCR-munkaállomásra. 2. Röviden vortexelje a felolvadt reagenseket (kivéve RM 1a), és centrifugálja le őket (ha csapadék képződött, melegítse fel az oldatot 37 °C-ra 5 percig, és keverje óvatosan, amíg a csapadék fel nem oldódik). 3. Helyezze a felolvadt reagenses és az eluátumos fiolákat a SeptiFast hűtőblokk kijelölt pozícióiba. 4. Nyissa ki az RM 1b, RM 1a, DM G+, DM G- és DM F fiolákat. 5. Pipettázzon 600 µl RM 1b-t az RM 1a-ba, keverje meg óvatosan fel-le pipettázással. 6. Master mix MM G(+), MM G(-) és MM F létrehozásához pipettázzon 200 µl reakciókeveréket 1a-ból mindegyik DM G+, DM G- és DM F fiolába; keverje meg óvatosan fel-le pipettázással. A PCR-reakciók előkészítése 1. Helyezze a szükséges számú kapillárist a SeptiFast hűtőblokkba, 3 kapillárist az RC-k számára (1, 2, 3 pozíciók), 3 kapillárist az NC eluátum számára (4, 5, 6 pozíciók), 3 kapillárist minden egyes mintaeluátum számára (7 és afeletti pozíciók). 2. Pipettázzon 50 µl MM G(+)-t a felső sor minden egyes kapillárisába. 3. Pipettázzon 50 µl MM G(-)-t a középső sor minden egyes kapillárisába. 4. Pipettázzon 50 µl MM F-t az alsó sor minden egyes kapillárisába. 5. Nyissa ki az első minta eluátum fiolát. Kezdje a SeptiFast hűtőblokk jobb oldalán lévő fiolával. 6. Pipettázzon 50 µl mintaeluátumot az MM G(+), MM G(-) és MM F oldatokat tartalmazó három kapilláris mindegyikébe. MEGJEGYZÉS: Minden pipettázási lépés után cserélje le a hegyet. 7. Kupakozó eszköz segítségével zárja le a három kapillárist (a LightCycler® 2.0 készülék tartozéka; a használatot illetően kérjük, tanulmányozza a LightCycler® 2.0 készülék Felhasználói kézikönyvét). 8. Folytassa a maradék mintaeluátumokkal az 5–7. lépésekben leírtak szerint. Pipettázza az NC-eluátumot utoljára a 4, 5 és 6 pozíciókban elhelyezkedő kapillárisokba. 9. Nyissa ki az RC G+-t. 10. Pipettázzon 50 µl-t az 1 pozíciójú kapillárisba. 11. Zárja le a kapillárist, majd zárja le az RC G+-t. 12. Pipettázzon RC G- és RC F kontrollokat rendre a 2 és 3 pozíciójú kapillárisokba a 9–11. lépésben leírtak szerint. 13. Vigye át valamennyi kapillárist a sorszámaik szerint a LightCycler® mintatárcsába. 14. Centrifugálja le a LightCycler® mintatárcsát LC mintatárcsa-centrifuga 2.0 segítségével. 15. Helyezze a LightCycler® mintatárcsát a LightCycler® 2.0 készülékbe. A maradék reagensek és eluátumok tárolása 1. Címkézze fel a fel nem használt MM G(+), MM G(-) és MM F oldatokat a fennmaradó reakciószámokkal és dátummal. Helyezze a fiolákat a SeptiFast hűtőblokk megfelelő pozícióiba. 2. A master mix MM 2–8 °C között legfeljebb 3 napig tárolható. A következő futtatáshoz szükséges munkaoldat-térfogat biztosításához a tárolt master mix (MM) friss MM oldattal feltölthető Ez az oldat azonnal felhasználandó. 3. Címkézze fel a mintaeluátumokat és az NC-t a futtatási sorszámmal és dátummal, és tárolja a javaslatnak megfelelően. 4. Dobja ki valamennyi üres reagensfiolát. LightCycler® 2.0 készülék betöltése és működtetése MEGJEGYZÉS: A LightCycler® 2.0 készülék működtetése egy, a DNS-tisztítástól és a munkaoldatok elhelyezésétől elkülönített helyiségben javasolt. 1. Indítsa el a "SeptiFast_2.0_04469046001" SeptiFast makrót (kérjük, tanulmányozza a LightCycler® 2.0 készülék Felhasználói kézikönyvének "Roche-makró végrehajtása" c. fejezetét). MEGJEGYZÉS: Ha a felhasználó kijelentkezett, ne folytassa a futtatást. Kezdjen el egy új futtatást egy új névvel. MEGJEGYZÉS: Ne használja az mezőt. Ha szeretné a vizsgálat tételszámát hozzáadni a futtatáshoz, szúrja be ezt az adatot a mintaszerkesztő megfelelő mezőjébe. 04822617001-07HU

14

Doc Rev. 7.0

2. Olyan néven mentse a futtatást, amely lehetővé teszi az egyértelmű azonosítást (pl. felhasználó neve és dátum). 3. Csökkentse a minták számát az alapértelmezett betöltési listából, ha 7-nél kevesebb mintára van szükség. Törölje egy minta mind a 3 kapillárisát a listában, nem csupán 1-et vagy 2-t a 3 párhuzamos vizsgálatból. Ha véletlenül túl sok kapillárist törölt, ne adja hozzá azokat, hanem kezdje az eljárást az elejétől. 4. Lehetséges, hogy a betegspecifikus adatokat adja meg az alapértelmezett beállítás helyett [pl. G(+) ahelyett, hogy G(+) <minta 1>]. A SIS helyes mintafelismerésének biztosítására egy mintalista 3 párhuzamos vizsgálatán belül a szövegnek azonosnak kell lenni. Vagy hagyja meg az alapértelmezett beállítást, és ha szükséges, akkor az adatbevitelhez használja a pontot. 5. Ha egyszer valamennyi mintaspecifikus információt megadta, folytassa a készletvarázslóval, és indítsa el a LightCycler® 2.0 készülék futtatását. MEGJEGYZÉS: Egy névnek a mezőbe történő megadásakor egyes speciális karakterek, pl. ' vagy < > ´ ` vagy € az elnevezési megállapodást illetően problémákat okozhatnak. MEGJEGYZÉS: Ne módosítsa a G(+), G(-), F előtagokat. Ne módosítsa a reagenskontrollok [pl. G(+) #RC#] és a negatív kontrollok [pl. G(+) #NC#] elnevezését. 6. A futtatás befejezése után ellenőrizze a folyadék szintet a kapillárisokban (egy adott kapillárisra nézve az eredmények érvénytelenek, ha a térfogat a kapillárisban változik. Csúcsdetektálás és automatizált fajazonosítás Az analízismodulok általános magyarázata MEGJEGYZÉS: Ne kezdje meg az adatelemzést a LightCycler® 2.0 készülék futása közben. • A manuális TM-elemzés 12 TM-elemzési modult (3 vizsgálat, 4 csatorna) igényel. Az abszolút mennyiségi meghatározási modulok a vizuális ellenőrzésen kívül nem igényelnek kézi beavatkozást. • A manuális TM-elemzés a TM-sávok segítségével legfeljebb 6 csúcs esetén végezhető (legfeljebb 6 csúcs jelölhető ki minden adott minta- vagy kontrollgörbe esetében). • Minden analízismodul TM-sávja előre definiálva van a SeptiFast makróban. • Az olvadási csúcs ablakban a kiválasztott grafikonok valamennyi görbéje megjelenik. • Lehetőség van a TM-sávok kijelölésére, illetve a kijelölés törlésére jelző elhelyezése nélkül is. • Mindegyik analízismód alapvonala a SeptiFast makróban van meghatározva. • Ne módosítsa az alapvonalakat, és ne törölje a kijelölésüket. Ha véletlenül módosította, írja be a helyes értéket a 3. táblázat alapján: Alapvonal értékek. • Ha egynél több kapilláris van aktiválva, akkor az ellenőrző ablakban az első kapilláris beállításai vannak feltüntetve. • A sávok közti váltás valamennyi aktivált kapillárist érinti. MEGJEGYZÉS: Ne módosítsa a következő beállításokat: , , , <Method>, <Show Shoulders>, vagy . • A beállítás kiválasztható. • A csúcsok, mint az alapvonal feletti maximumok vannak definiálva. A vállak nem csúcsok. • Kivétel az RC G-, csatorna 610 (lásd 4. ábra, 2. grafikon) és 670, valamint RC F, csatorna 705. • Az 1. grafikonon a két bal oldali csúcs a maximum, amelyeket sávokkal kell megjelölni. • A 2. grafikonon a csúcsok egyike (pl. a második) vállként jelenik meg, de ugyanúgy kijelölendő. • A 3. és 4. grafikonon az egyik csúcs hiányzik. Három sáv helyett csak kettőt kell aktiválni. 4. ábra: RC G-, CH 610 1. grafikon

• •

2. grafikon

3. grafikon

4. grafikon

Állítsa be mindegyik TM-sávot úgy, hogy az a csúcs maximumánál helyezkedjen el (az alapvonal fölött), a 2. táblázatban látható TM-tartományokat figyelembe véve. A meghatározott TM-tartományon kívül eső megjelölt csúcsok nem jelennek meg a SIS-jelentésben. 2. táblázat: Érvényes csúcsok TM tartományai CH 610

CH 640

CH 670

CH 705

Alacsony TM Magas TM Alacsony TM Magas TM Alacsony TM Magas TM Alacsony TM Magas TM [°C] [°C] [°C] [°C] [°C] [°C] [°C] [°C] G(+)

48

53

49

64

49

59

45

65

G(-)

52

66

55

69

48

65

57

62

F

56

61

44

58

49

62

51

62

04822617001-07HU

15

Doc Rev. 7.0

•

Az alapvonal értékek az alábbi táblázat szerint vannak meghatározva, és tilos azokat módosítani. (Ha véletlenül mégis módosítaná, írja vissza a táblázat szerinti eredeti értéket, különben a futtatás jelzőt kap.) 3. táblázat: Alapvonalértékek CH 610

CH 640

CH 670

G(+)

0,159

0,027

0,061

CH 705 0,027

G(-)

0,234

0,001

0,236

0,065

F

0,196

0,033

0,111

0,059

A TM sávok beállítása 1. A futtatás befejezése után a vizsgálati varázsló kiírja, hogy . 2. Tegye alulra az ablakot (ne nyomja meg a gombot). 3. Ügyeljen arra, hogy a TM és alapvonalértékek láthatóak legyenek. 4. Kattintson az analízismodulra [pl. TM-elemzés G(+) 610]. 5. Áttekintés nyeréséhez aktiválja a vizsgálat valamennyi pozícióját [pl. G(+)]. 6. Kattintson csak a G(+) #RC# pozícióra. 7. Állítsa be a TM-sávokat az alapvonal feletti csúcsmaximumokra, csak az érvényes TM-tartományokat figyelembe véve (lásd 2. táblázat: Érvényes csúcsok TM tartományai). Ha nincs csúcs az alapvonal felett, a TM sávot törölni kell (megszüntetni az aktiválást a megfelelő kis négyzetben). Egy adott kapilláris TM-elemzésének végén csak a csúcsmaximumokat kell megjelölni a TM-sávokkal (a görbe vízszintes és meredek szakaszait, illetve a vállakat nem szabad megjelölni, kivéve az itt felsorolt organizmusok esetében). Néhány esetben az E. faecium (G+, CH 705, TM 51,8–55,9) és a C. albicans (F, CH 640, TM 53,4–57,5) alacsony koncentrációi megjelenhetnek mint a megfelelő IC csúcsok vállai (G+, CH 705, TM 45,5–49,6; F, CH 640, TM 44,8–48,0). Ezeket a vállakat jelölje ki TM sávok – TM 53,9 (G+, CH 705) és TM 55,5 (F, CH 640) – segítségével. 8. Áttekintés nyeréséhez aktiválja a következő pozíciót [pl. G(+) #NC#] a G(+) #RC#-vel együtt. (Az automata skálázás a legmagasabb csúcsra fog beállni). 9. Aktiválja csak a kiválasztott pozíciót [pl. G(+) #NC#]. (Az automata skálázás a negatív kontroll háttércsúcsaira fog beállni. Az alapvonal adott esetben többé már nem látható.) 10. Folytassa a csúcsdetektálást az 5–7. lépésekben leírtaknak megfelelően. 11. Az egyik vizsgálat [pl. TM-elemzés G(+) 610] analízisének befejezését követően folytassa a következővel a 4–10. lépésekben leírtaknak megfelelően. A TM-elemzés befejezése 1. Váltsa a vizsgálati varázslót a monitor közepére, és nyomja meg a gombot. 2. A jelentést a program automatikusan létrehozza és kinyomtatja. 3. A futtatást a program automatikusan elmenti. MEGJEGYZÉS: Ha a LightCycler® szoftver területén levő betegspecifikus adatok módosítva lettek, a vizsgálónak frissítenie kell az adatbázist az "Abs Quant G(+) 610" és az "Abs Quant G(+) 640" ikonokra kattintva. 4. Exportálja az *.ixo fájlt a mappába. 5. Ellenőrizze az eredménylapon az esetleges jelzőket, és hogy a üzenet megjelent-e. 6. Ha jelző vagy egyéb üzenet jelenik meg a futás státuszával kapcsolatban a LightCycler® Software (LCS) jelentésében, a futás érvénytelen és az összes mintát újra kell vizsgálni. Automatikus csúcsazonosítás a SeptiFast Identification Software (SIS) segítségével 1. Kattintson duplán a SIS ikonra az asztalon, nyomja meg a <Start> gombot. 2. Válassza ki a futtatást a mappából, és töltse be a *.ixo fájlt. 3. Válassza ki a „Yes” vagy „No” választ attól függően, hogy a LightCycler® jelentés tartalmazza-e a <User Developed or Modified Test Method> jelzőt. 4. A *.ixo fájlt a program automatikusan feldolgozza, és az adatokat egy eredménylapon megjeleníti. 5. Nyomtassa ki a SIS eredménylapot. EREDMÉNYEK Futtatás validálása A futás validálását a SeptiFast Identification Software v2.0 (SIS) végzi. Az érvénytelen futások is megjelennek és jelet kapnak. Ha érvénytelen, a teljes futást (mind a 3 vizsgálatot) meg kell ismételni. A rendszerhibák, amelyek érvényteleníthetik a futást, a dokumentum Hibaelhárítás részében vannak felsorolva.

04822617001-07HU

16

Doc Rev. 7.0

Vizsgálat validálása A jelzők és értelmezésük, amelyek a három különböző vizsgálat érvényességével kapcsolatban jelenhetnek meg, a 4. táblázatban vannak felsorolva. 4. táblázat: Jelzők a vizsgálat és a minta validálására Megjegyzések

1

Magyarázat

ASSAY FLAG

NC: IC not detected

Az NC-ben sem target, sem IC nem kimutatható

ASSAY FLAG

NC: < CH …, TM …, PH …, CP1 …>,< fajok >

Az NC-ben faj mutatható ki

ASSAY FLAG

NC: more amplicons detected

Ráadás jelző, ha több, mint 3 amplikon mutatható ki az NC-ben

ASSAY FLAG

RC: No amplicon:

Az RC egy vagy több amplikonja nem mutatható ki

ASSAY FLAG

RC: more amplicons not detected

Ráadás jelző, ha az RC több, mint 3 amplikonja nem mutatható ki

SPECIMEN FLAG

IC not detected

Sem target, sem IC nem mutatható ki.

CP csak a G(+) csatorna 610, 640 esetében van feltüntetve.

Eredmények értelmezése A SeptiFast Identification Software v2.0 (SIS) jelzőket (FLAGS) és megjegyzéseket (COMMENTS) hozhat létre a SPECIMEN ablakban úgymint: RUN FLAGS, ASSAY FLAGS és FLAGS (lásd alább). A kezelő személynek meg kell néznie, hogy a kinyomtatott jelentés(ek)en van-e bármelyik ablakban FLAGS vagy COMMENTS. 5. ábra: Specimen ablak Specimen SeptiFast minta1

Assay

Data

Result

G(+)

G(-)



F



Flags

Comment

1

A CP értékek csak a G(+) csatorna 610, 640 esetében van feltüntetve. További információ szerezhető a RUN FLAGs és az ASSAY FLAGs COMMENT mezőiből. A minta eredményei A nevek a RESULT mezoben azt jelzik, hogy a minta pozitívnak bizonyult az adott mikroorganizmusra. A megfelelő csúcsok számított adatai a DATA mezőben vannak feltüntetve, mint csatorna (CH), olvadáspont (TM), csúcsmagasság (PH) és metszéspont (CP1). A RESULT mezőben lévő  szimbólum azt jelenti, hogy a faj meghatározott feltételeinek megfelelően nem volt kimutatható analit. A CP értékek értelmezése a G(+) csatorna 610 vagy 640 esetében A LightCycler® Software abszolút mennyiségi meghatározás moduljaiban megjelenő eredményeket össze kell vetni a SIS-jelentésben szereplő eredményekkel. 1. Kattintson az Abs Quant 610 ikonra. 2. Ellenőrizze, hogy a CP értékeket megjelenítő eredmények oszlop látható-e úgy, hogy a grafikonablakokat kiviszi a képernyő jobb oldalára. 3. Válasszon ki egy kapilláris pozíciót, amelynek a CP értéke megjelent. Szemrevételezze az amplifikációs növekedési görbét és ellenőrizze, hogy a növekedés és a megjelenő CP érték egyezik. 4. Az alábbiakban elmagyarázott „CP határérték szabály” segítségével hasonlítsa össze a megjelenő mintaeredményeket a megfelelő mintaeredményekkel a SIS-jelentésben. Bizonyosodjon meg arról, hogy az eredmények megegyeznek. Amennyiben nem, lépjen kapcsolatba tanácsért a helyi Roche leányvállalattal. 5. Ismételje meg a fenti 2 - 4. lépést minden kapilláris pozícióra, amely CP értéket adott. 6. Kattintson az Abs Quant 640 ikonra. 7. Ismételje meg a fenti 2 - 5. lépést minden kapilláris pozícióra, amely CP értéket adott. CP határérték (cut-off) szabály A SeptiFast Master List (SML) számos organizmusa megtalálható az emberi testen a normál flóra részeként, amely vérvételkor átvihető a SeptiFast Test vizsgálatba. A CP határérték szabály egy olyan szoftverjellemző, amely lecsökkenti bizonyos kommenzalista organizmusok pozitivitási arányát azon feltételezés alapján, hogy csak szennyeződések, nem pedig valós fertőzést okozó ágensek. A CP határérték szabály csak a CoNS és Streptococcus spp. organizmusokra vonatkozik, és 20 ciklusra van beállítva. Egy CP < 20 érték pozitív eredményt jelent, amíg egy CP > 20 érték szennyeződésnek tekintendő, és negatív eredményként jelenik meg a SIS-jelentésben. mecA vizsgálat Ha Staphylococcus aureus pozitív eredményt kap, azt követően mecA rezisztencia vizsgálat megfontolandó. Részletekért kérjük, tanulmányozza a LightCycler® SeptiFast mecA Kit MG használati utasítását (P/N: 04 488 814 001). MINŐSÉG-ELLENŐRZÉS Egy negatív kontrollt (NC) és egyet-egyet a 3 reagenskontrollból (RC) minden futtatás során a 3 párhuzamos vizsgálat [G(+), G(-), F] mindegyikének tartalmaznia kell. Az NC és RC kontrollokat meghatározott pozíciókba kell elhelyezni, ahogy az A PCR-reakciók előkészítése c. szakaszban le van írva. Pozitív kontrollként egy házon belüli pozitív anyag futtatása javasolt a teljes munkafolyamaton keresztül (lásd a Nem biztosított anyagok c. szakaszt). A SIS meghatározza az IC, NC és RC eredményeket. Amennyiben a kontrollok nem felelnek meg az adott specifikációknak, valamennyi mintaeredmény jelzőt kap a SPECIMEN ablak megfelelő mezőjében. Ellenőrizze a kinyomtatott eredménylap a SPECIMEN ablakában a jelzőket és megjegyzéseket, hogy meggyőződjön az eredmények érvényességéről. 04822617001-07HU

17

Doc Rev. 7.0

Negatív kontroll (NC) Egy érvényes futás minden vizsgálatában a NC negatív, a belső kontroll pedig pozitív kell, hogy legyen. Amennyiben a NC nem felel meg ezen feltételeknek, a vizsgálatban szereplő valamennyi mintaeredmény jelzőt kap. A vizsgálat minden eredménye érvénytelen, amelyről jelentés nem adható ki. A többi érvényes vizsgálat eredménye ugyanebből az érvényes futásból érvényesnek számít és jelenthető. Ennek ellenére a teljes futást meg kell ismételni, mivel a LightCycler® Software nem működik megfelelően akkor, ha a háromból csak egy vagy két vizsgálatot ismétel meg. Reagenskontrollok (RC) Egy érvényes futás minden vizsgálatában a RC pozitív kell, hogy legyen a RC amplikon targetekre. Amennyiben a RC nem felel meg ennek a feltételnek, a vizsgálatban szereplő valamennyi mintaeredmény jelzőt kap. A vizsgálat minden eredménye érvénytelen, amelyről jelentés nem adható ki. A többi érvényes vizsgálat eredménye ugyanebből az érvényes futásból érvényesnek számít és jelenthető. Ennek ellenére a teljes futást meg kell ismételni, mivel a LightCycler® Software nem működik megfelelően akkor, ha a háromból csak egy vagy két vizsgálatot ismétel meg. Pozitív kontroll A külső pozitív kontroll pozitív kell, hogy legyen. Ha a házon belüli pozitív anyagok vagy külső pozitív kontrollok nem felelnek meg ennek a feltételnek, a teljes futtatás érvénytelen és meg kell ismételni. A SIS nem tüntet fel jelzőt. Belső kontroll (IC) A belső kontroll pozitív kell, hogy legyen valamennyi negatív mintában és a negatív kontrollban is. Amennyiben az IC nem felel meg ezen feltételnek, a minta eredménye érvénytelen és jelzőt kap. Érvénytelen kontrollok esetén ismételje meg a teljes eljárást (minta- és kontroll-előkészítés, amplifikálás és kimutatás mind a 3 vizsgálat esetén). Ha a kontrollok következetesen érvénytelenek, vegye fel a kapcsolatot a Roche helyi szervizével. HIBAELHÁRÍTÁS 5. táblázat: A SIS nyomtatott lap jelző részében látható rendszerüzenetek Rendszerüzenet (a SIS nyomtatott lap jelző részében látható)

Lehetséges ok

Javító intézkedés

User Developed or Modified Test Method

A futtatás érvénytelen; a lehetséges okok Nyissa meg az eredeti *.ixo fájlt a LightCycler® a LightCycler® 2.0 készülék Felhasználói szoftverben, és ellenőrizze az alapvonal értékeket kézikönyvében vannak ismertetve. Lehetséges, a 3. táblázat szerint. Mentse és exportálja újra a fájlt. hogy a makró alapértelmezett beállításait (pl. alapvonalak, futtatási protokoll stb.) módosították.

CCC File Name: Multiple CCC used!

Két vagy több színkompenzáció-fájl aktív egy vagy több analízismodulban.

Válassza ki a megfelelő színkompenzációt és számolja újra.

Color Compensation has expired on DD-Month-YY

A színkompenzáció-objektum hat hónaposnál régebbi.

Hozzon létre és minősítsen egy új színkompenzáció-objektumot.

Invalid Macro

Nem megfelelő makró lett alkalmazva

Keresse meg a megfelelő makrót a LightCycler® szoftverben és/vagy a SeptiFast Software Setben v2.0.

Invalid Baseline

Lehetséges, hogy az alapvonalértékeket véletlenül módosították

Nyissa meg az eredeti *.ixo fájlt a LightCycler® szoftverben, és ellenőrizze az alapvonal értékeket a 3. táblázat szerint. Mentse és exportálja újra a fájlt.

Invalid Control Tube

Egy vagy több tévesen elnevezett kontroll

Nyissa meg az eredeti *.ixo fájlt a LightCycler® szoftverben, és ellenőrizze a kontroll elnevezések megfelelő begépelését a mintaszerkesztőben. Módosítson az alapértelmezett nevekre, mentse és exportálja újra a fájlt.

Missing Sample Tube

Egy vagy több tévesen elnevezett mintakapilláris vagy hiányzó mintakapillárisok

Nyissa meg az eredeti *.ixo fájlt a LightCycler® szoftverben, és ellenőrizze a minta elnevezések megfelelő begépelését a mintaszerkesztőben. Módosítson az alapértelmezett nevekre, mentse és exportálja újra a fájlt.

Invalid LightCycler® SW Version

Nem megfelelő LightCycler® szoftververziót alkalmaztak az eljáráshoz

Nyissa meg a LightCycler® szoftvert és ellenőrizze, hogy megfelelő-e a verziószám.

No Manual TM Calling

Nem volt manuális TM-elemzés elvégezve (nincs minta és nincs analízis modulban). A makró befejezte analízis nélkül

Nyissa meg az eredeti *.ixo fájlt a LightCycler® szoftverben, és végezzen manuális TM-elemzést. Mentse és exportálja újra a fájlt.

+ additional run flags

5-nél több futtatási jelző került észlelésre

Kísérelje meg az egyes ismertetett jelzők megoldását, végezze el újra a SIS analízist.

Invalid CCC File Name

Két vagy több színkompenzáció-fájl aktív egy vagy több analízismodulban.

Válassza ki a megfelelő színkompenzáció-fájlt, és számolja újra.

Amennyiben egy vagy több minta hiányzik a SIS eredménylapon, ellenőrizze: 1) nincs-e egy minta három vizsgálati kapillárisának bármelyike tévesen elnevezve, azaz a vizsgálatspecifikus előtagok (G+, G-, F) tévedésből törölve lettek, vagy 2) nincs-e egy vagy több mintakapilláris tévesen elnevezve, vagy nincsenek-e hiányzó kapillárisok. A javításhoz nyissa meg az eredeti *.ixo fájlt a LightCycler® szoftverben, és ellenőrizze a minta elnevezések megfelelő begépelését a mintaszerkesztőben. Módosítson az alapértelmezett nevekre, mentse és exportálja újra a fájlt.

04822617001-07HU

18

Doc Rev. 7.0

ELJÁRÁSSAL KAPCSOLATOS KORLÁTOZÁSOK • A vizsgálatot csak K-EDTA alvadásgátlóval gyűjtött humán vér használatára validálták. Más típusú minták vizsgálata téves, álnegatív vagy álpozitív eredménnyel járhat. • A megbízható eredmény a megfelelő mintalevételen, -transzporton, -tároláson és -feldolgozáson múlik. • A terméket csak a LightCycler® SeptiFast Test MG vizsgálat munkafolyamatára speciálisan kiképzett személy használhatja. • A LightCycler® SeptiFast Test MG vizsgálat 1000–30 000 WBC/µl tartalmú vérmintán végezhető el. • A mikroorganizmusok jelenlegi nevezéktana főleg fenotípusos osztályozáson alapul (biokémiai és fiziológiai tulajdonságok), és lehetséges, hogy nem mutat azonosságot a genetikai meghatározással. • Bár a primerek és a próbák az internal transcribed spacer (ITS) régió nagyfokban konzervált régióhoz lettek tervezve, a H próbák targetspecifikus olvadási hőmérsékletét (TM) befolyásolhatják a mikrobafajok szekvenciáiban megtalálható véletlenszerű eltérések. • Egyes esetekben, amikor az SML listáról több organizmus is jelen van a mintában, a jelentésben nem mindegyik faj fog szerepelni. KLINIKAI ÉRTÉKELÉS Klinikai vizsgálati eredmények A diagnosztikus érzékenység és specificitás nem került meghatározásra, tekintettel arra, hogy nem áll rendelkezésre megfelelő referenciamódszer. Összességében 177 szeptikus beteg 358 mintáját elemezték BC vagy PCR segítségével. Az SML-be nem tartozó fajt tartalmazó mintákat nem vették figyelembe. 6. táblázat: A klinikai vizsgálat során EDTA-s vérben talált fajok száma Csak BC

Csak PCR

Mindkét módszer


1

17

7

CoNS

14

---

4


---

1

---

Streptococcus spp.

---

3

1


---

11

2


1

23

4

Acinetobacter baumannii

1

---

1

Enterobacter aerogenes / cloacae

---

8

---

Escherichia coli

---

8

6

Klebsiella pneumoniae / oxytoca

---

15

3

Proteus mirabilis

---

---

---


---

8

---

Serratia marcescens

---

---

---

Stenotrophomonas maltophilia

---

2

---


---

---

---

Candida albicans

---

8

6

Candida glabrata

---

---

1

Candida krusei

---

---

---


---

---

---

Candida tropicalis

---

---

---

Valamennyi mikroorganizmus

17

104

35

04822617001-07HU

19

Doc Rev. 7.0

NEM KLINIKAI ÉRTÉKELÉS Zavarást okozó anyagok Az alábbi anyagok nem zavarják a bakteriális és gomba DNS kimutatását ebben a vizsgálatban. 7. táblázat: Zavarást okozó anyagok Szám

Márkanév

Hatóanyag

Gyártó

1x Cmax

3x Cmax

Egység

1

Piperacillin®

Piperacillin

Hexal

4,0

12,0

mg/ml

2

Fortum®

Ceftazidim

GlaxoSmithKline

0,50

1,5

mg/ml

3

Zienam®

Imipenem/Cilastatin

MSD Sharp & Dohme

0,27

0,67

mg/ml

4

Tazobac®

Piperacillin/Tazobactam

Wyeth Pharma

0,75

2,3

mg/ml

5

Ciprobay®

Ciprofloxacin

Bayer

33,3

100,0

µg/ml

6

Vancomycin®

Vancomycin

Lilly

83,0

250,0

µg/ml

7

Refobacin®

Gentamicin

Merck

80,0

240,0

µg/ml

8

Zyvoxid®

Linezolid

Pfizer

0,10

0,30

mg/ml mg/ml

9

Sobelin®

Clindamycin

Pfizer

0,30

0,90

10

InfectoClont®

Metronidazol

Infectopharm

83,3

250,0

µg/ml

11

Diflucan®

Flukonazol

Pfizer

0,13

0,39

mg/ml

12

Cancidas®

Caspofungin

MSD Sharp & Dohme

8,3

25,0

µg/ml

13

Amphotericin B®

Amphotericin B

Bristol-Myers Squibb

20,0

60,0

µg/ml

14

Novalgin®

Metamizol

Aventis Pharma

0,83

2,5

mg/ml

15

Dexahexal®

Dexametazon

Hexal

1,3

4,0

µg/ml

16

ARA-cell®

Cytarabin

cellpharm

63,3

190,0

µg/ml

17

Arterenol®

Norepinephrin (noradrenalin)

Aventis Pharma

4,8

14,4

µg/ml

18

Aquo-Trinitrosan®

Nitroglicerin

Merck

1,3

4,0

µg/ml

19

Heparin-Natrium-5000ratiopharm®

Heparin

ratiopharm

0,83

2,5

I.U./ml

04822617001-07HU

20

Doc Rev. 7.0

Analitikai érzékenység A LightCycler® SeptiFast Test MG analitikai érzékenységét az egyes analitokból készített hígítási sor (100, 30 és 3 CFU/ml egészséges donoroktól származó EDTA-s vérben) találati arány analízise révén elemezték (lásd 8. táblázat). 30 CFU/ml minimum érzékenységet tapasztaltak valamennyi faj esetén, kivéve a következőket: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus haemolyticus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae és Streptococcus mitis (100 CFU/ml). 8. táblázat: Találati arány analízissel vizsgált fajok Target

Pozitívok száma/összes vizsgálat

Target

Koncentráció [CFU/ml] Acinetobacter baumannii

1 2

100

30

3

8/8

12/12

11/20

Pozitívok száma/összes vizsgálat Koncentráció [CFU/ml]

Klebsiella pneumoniae

100

30

3

8/8

12/12

17/20 16/20


8/8

12/12

20/20

Proteus mirabilis

8/8

12/12

Candida albicans

8/8

12/12

12/20


8/8

12/12

5/20

Candida glabrata

8/8

12/12

10/20

Serratia marcescens

8/8

12/12

19/20

Candida krusei

8/8

12/12

8/20


8/8

12/12

8/20


8/8

12/12

7/20

Staphylococcus epidermidis1

8/8

1/12

0/20

Candida tropicalis

8/8

12/12

9/20

Staphylococcus haemolyticus1

8/8

0/12

0/20

Enterobacter aerogenes

8/8

12/12

16/20

Stenotrophomonas maltophilia

8/8

12/12

18/20

Enterobacter cloacae

8/8

12/12

12/20


8/8

7/12

1/20


8/8

12/12

15/20

Streptococcus agalactiae2

8/8

7/12

0/20


8/8

12/12

17/20

Streptococcus pyogenes2

8/8

9/12

4/20

Escherichia coli

8/8

12/12

20/20

Streptococcus mitis2

8/8

9/12

0/20

Klebsiella oxytoca

8/8

12/12

14/20

Az 1. táblázat SML listáján a CoNS csoportba tartozó fajok. Az 1. táblázat SML listáján a Streptococcus spp. csoportba tartozó fajok.

04822617001-07HU

21

Doc Rev. 7.0

Analitikai specificitás Inkluzivitás Az ITS targetrégió állandóságának és homogenitásának igazolására Európa (Dél-, Közép-, Észak-), Japán és az Egyesült Államok számos földrajzi régiójából származó klinikai izolátumot vizsgáltak. Összesen 1709 izolátumot karakterizáltak mikrobiológiai módszerekkel, és vizsgáltak a LightCycler® SeptiFast Test MG segítségével [lásd 1. táblázat SeptiFast Master Test List (SML)]. Az Egyesült Államokban és Japánban levett minták között nem szerepelt Aspergillus fumigatus, Candida krusei és Staphylococcus haemolyticus. A Streptococcus spp. és a koaguláz negatív Staphylococcus (CoNS) csoportokon belül a 9. táblázatban feltüntetett fajok bizonyultak pozitívnak a LightCycler® SeptiFast Test MG vizsgálat során. A Japánban levett minták között nem szerepelt Aspergillus fumigatus és Candida krusei. 9. táblázat: Rendre a Streptococcus spp. és a koaguláz negatív Staphylococcus (CoNS) csoportokba tartozó fajok, amelyek a LightCycler® SeptiFast Test MG vizsgálat során pozitívnak bizonyultak Streptococcus spp.

Koaguláz-negatív Staphylococcus (CoNS)

S. agalactiae

S. hominis subsp. novobiosepticus

S. anginosus

S. pasteuri

S. bovis

S. warneri

S. constellatus

S. cohnii subsp. urealyticum

S. cristatus

S. hominis subsp. hominis

S. gordonii

S. lugdunensis

S. intermedius

S. cohnii subsp. cohnii

S. milleri

S. capitis subsp. ureolyticus

S. mitis

S. capitis subsp. capitis

S. mutans

S. caprae

S. oralis

S. saprophyticus

S. parasanguinis

S. saprophyticus subsp. saprophyticus

S. pneumoniae

S. xylosus

S. pyogenes

S. epidermidis

S. salivarius

S. haemolyticus

S. sanguinis S. thermophilus S. vestibularis S. viridans Eltérő eredményeket az összes eredmény kevesebb, mint 1,2%-ában nyertek. • 143 Enterobacter (aerogenes/cloacae) törzsből 6 darab ITS régióját tekintve identikus volt Klebsiella (pneumoniae/oxytoca) törzzsel, és mint Klebsiella (pneumoniae/oxytoca) lett értékelve. • ACitrobacter freundii és a Salmonella enterica lehetséges, hogy ITS régiójukat tekintve identikusak rendre a Klebsiella (pneumoniae/oxytoca) és az E. coli fajokkal, és ezért mint Klebsiella (pneumoniae/oxytoca), illetve E. coli lesznek értékelve. • 160 Streptococcus viridans törzsből 14 darab ITS régióját tekintve identikus volt Streptococcus pneumoniae törzzsel, és mint S. pneumoniae lesz értékelve. • Ritka esetekben a Klebsiella (pneumoniae/oxytoca) lehetséges, hogy nem kimutatható, ha egy a targetszekvencián belüli mutáció az olvadáspont eltolódását okozza. Exkluzivitás 10. táblázat: Valamennyi vizsgált faj negatívnak bizonyult Actinobacillus actinomycetemcomitans

Corynebacterium jeikeium

Aeromonas hydrophila

Cryptococcus neoformans

Neisseria meningitidis

Bacillus cereus

Gemella haemolysans

Pantoea agglomerans

Bacteroides fragilis

Haemophilus influenzae

Peptostreptococcus magnus

Bartonella henselae

Histoplasma capsulatum

Porphyromonas gingivalis

Bordetella pertussis

Legionella pneumophila

Prevotella denticola

Borrelia burgdorferi

Listeria monocytogenes

Propionibacterium acnes

Burkholderia cepacia

Moraxella (Branhamella) catarrhalis

Proteus vulgaris

Campylobacter jejuni

Morganella morganii

Yersinia enterocolitica

Cardiobacterium hominis

Mycobacterium fortuitum

Clostridium perfringens

Mycobacterium tuberculosis

04822617001-07HU

22

Mycoplasma pneumoniae

Doc Rev. 7.0

VÁSÁRLÓI INFORMÁCIÓ Ezen termék megvásárlása lehetőséget biztosít a vásárlónak humán in vitro diagnosztika keretében nukleinsav-szekvenciák amplifikációjára és kimutatására. A termék megvásárlásával e specifikus használati jogon kívül semmilyen más jogosítványra, szabadalmi jogra vagy más engedélyre nem tesz szert. HIVATKOZÁSOK 1. Kollef M, et al. Inadequate antimicrobial treatment of infections, Chest 1999, 115: 462-474. 2. Garnacho-Montero J, et al. Impact of inadequate empirical antibiotic therapy on the outcome of patients admitted to the ICU with Sepsis, Crit Care Med. 2003, 31(12): 2742-51. 3. Byl B, et al. Impact of Infectious Disease Specialists and Microbiological Data on the Appropriateness of Antimicrobial Therapy for Bacteremia, Clin Infect Dis 1999: 29: 60-66. 4. Suttorp N. "Changing populations and future trends in the management of serious infections" from: AIM website (www.infectionacademy.org). 5. Peterson LR, et al. Towards targeted prescribing: will the cure for antimicrobial resistance be specific, directed therapy through improved diagnostic testing?, J Antimicrob Chemother 2004, 53: 902-5. 6. Harbarth S, et al. Inappropriate initial antimicrobial therapy and its effect on survival in a clinical trial of immunomodulating therapy for severe sepsis, Am J Med. 2003, 115: 529-535. 7. Houang, E.T.S., et al. Significance of Genomic DNA Group Delineation in Comparative Studies of Antimicrobial Susceptibility of Acinetobacter spp. Antimicrob Agents Chemother, Apr. 2003, p. 1472-1475. 8. Richmond, J.Y. and McKinney, R.W. eds. 1999. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication Number (CDC) 93-8395. 9. Clinical Laboratory Standards Institute. Protection of Laboratory Workers from Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue. Approved Guideline. CLSI Document M29-A Villanova, PA:CLSI, 1997. 10. International Air Transport Association. Dangerous Goods Regulations, 41st Edition. 2000. 704 pp.

Dokumentum verzióinformációi Doc Rev. 7.0 02/2013

Frissült a gyártó és a meghatalmazott képviselő címe. A veszélyre való figyelmeztetések szimbólumainak mérete nőtt. Kérdés esetén lépjen kapcsolatba a Roche helyi képviselőjével.

04822617001-07HU

23

Doc Rev. 7.0

Gyártva Németországban

" Distributed by

Roche Molecular Systems, Inc. 1080 US Highway 202 South Branchburg, NJ 08876 USA Roche Diagnostics 201, boulevard Armand-Frappier H7V 4A2 Laval, Quèbec, Canada (For Technical Assistance call: Pour toute assistance technique, appeler le: 1-877 273-3433)

Roche Diagnostics 2, Avenue du Vercors 38240 Meylan, France

Roche Diagnostics (Schweiz) AG Industriestrasse 7 6343 Rotkreuz, Switzerland

Distributore in Italia: Roche Diagnostics S.p.A. Viale G. B. Stucchi 110 20052 Monza, Milano, Italy

Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Straße 116 68305 Mannheim, Germany

Distribuidor em Portugal: Roche Sistemas de Diagnósticos Lda. Estrada Nacional, 249-1 2720-413 Amadora, Portugal

Roche Diagnostics, SL Avda. Generalitat, 171-173 E-08174 Sant Cugat del Vallès Barcelona, Spain

Roche Diagnostica Brasil Ltda. Av. Engenheiro Bilings, 1729 Jaguaré, Building 10 05321-010 São Paulo, SP Brazil

C Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Str. 116, 68305 Mannheim, Németország A ROCHE, a LIGHTCYCLER, az MGRADE, a MAGNALYSER, a FASTSTART, a HYBPROBE, a SEPTIFAST és az AMPERASE a Roche védjegye. A ROCHE RESPONSE CENTER a Roche szolgáltatási védjegye. Az AMPHOTERICIN B a Bristol-Myers Squibb Company védjegye. Az AQUO-TRINITROSAN a Merck & Co., Inc. védjegye. Az ARA-CELL a cell pharma GmbH védjegye. Az ARTERENOL az Aventis Pharma Ltd. védjegye. A CANCIDAS az MSD Sharp & Dohme GmbH védjegye. A CIPROBAY a Bayer AG védjegye. A DEXAHEXAL a Hexal AG védjegye. A DIFLUCAN a Pfizer Inc. védjegye. A FORTUM a GlaxoSmithKline védjegye. A HEPARIN-NATRIUM-5000-RATIOPHARM a ratiopharm International védjegye. Az INFECTOCLONT az Infectopharm GmbH védjegye. Az LTK-008 a biodelta, ZTB GmbH védjegye. A MINISPIN az Eppendorf védjegye. A NOVALGIN az Aventis Pharma Ltd. védjegye. A PIPERACILLIN a Hexal AG védjegye. A REFOBACIN a Merck & Co., Inc. védjegye. A SOBELIN a Pfizer Inc. védjegye. A TAZOBAC a Wyeth Pharmaceuticals AG védjegye. A VANCOMYCIN a Lilly Pharma Holding GmbH védjegye. A ZIENAM az MSD Sharp & Dohme GmbH védjegye. A ZYVOXID a Pfizer Inc. védjegye. A termékben található cianin festékeket a GE Healthcare Bio-Sciences Corp. és a Carnegie Mellon University szabadalmi jogai védik, és a Roche kizárólagos engedéllyel rendelkezik, hogy azokat a kutatásban és in vitro diagnosztikai rendszerek komponenseiként felhasználja. Az ilyen rendszereknek nem kutatási vagy in vitro diagnosztikai célú felhasználása a GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway, New Jersey, USA és a Carnegie Mellon University, Pittsburgh, Pennsylvania, USA további engedélyét kívánja meg. © 2013, Roche Molecular Systems, Inc. Minden jog fenntartva. 02/2013 Doc Rev. 7.0 04822617001-07HU

(04623886001-07ENGL) 04822617001-07 24

Doc Rev. 7.0

04822617001-07HU

25

Doc Rev. 7.0

LightCycler SeptiFast Test MG

Recommend Documents