TRILLIUM DIAGNOSTICS

TRILLIUM DIAGNOSTICS

Leuko64™ Vizsgálat akut felismerésére

szisztémás

gyulladásos

válaszreakciók

i Terméktájékoztató

h LK-064-75 (75 vizsgálat) ; LK-064-250 (250 vizsgálat) V In vitro diagnosztikai használatra ÖSSZEFOGLALÓ ÉS ALAPELVEK A neutrophil leukocyták CD64 kifejeződését a gyulladásos mediátorok, mint például az interferon-gamma és a G-CSF (1-3) in vitro és in vivo egyaránt gyorsan növelték. Ugyanazt a változást figyelték meg válaszul a dokumentált fertőzésre vagy szövetsérülésre, ami jelezte, hogy a neutrofil leukociták CD64 kifejeződésének mérése összefüggésben van ezeknek a feltételeknek jelenlétével az emberekben (4-14). A Leuko64TM vizsgálat három monoclonalis antitest keverékét használja, sajátlagosan a CD64-et (22-es és 32.2-es klónok) és a CD163-at (Mac2-158-as klón). Két antitest használata a CD64 különböző epitópjaihoz növeli a vizsgálat jel-zaj arányát és egy mechanizmust biztosít a reagens fluoreszcens jele tételről tételre történő változásának minimalizálásához. A monoclonalis antitest hozzáadása a CD163-hoz, egy monocyta-specifikus antigénhez, növeli a leukocyta alpopuláció azonosítás sajátlagosságát, támogatva a Leuko64TM QuantiCALC™ szoftver klaszter-kereső algoritmusát és lehetővé téve a belső "pozitív és negatív" populációk azonosítását. Az automatizált szoftver használata kiküszöböli a standard, szubjektív áramlási citometriás lista módú elemzéssel együtt járó változást. A fluoreszcens gyöngy szuszpenzió felhasználása a CD64 sejt tömeg-meghatározáshoz lehetővé tette az SRM 1932 (RM 8640) NIST standard referenciaanyag nyomon követhetőségét, és egy mechanizmust biztosít a tételek közötti különbség minimalizálására a Leuko64TM vizsgálati készletekben. A Leuko64TM vizsgálat eredményei a PMN CD64 mutatószám diagnosztikai paramétereként jelenthetők, a monocyta CD64 és a CD163 mutatószámokkal együtt.

ALKALMAZÁS

A Leuko64TM vizsgálati készlet LK-064-75 és LK-064-250 verziói kifejezetten a következő áramlási citometriás készülékkel használhatók: Beckman Coulter XL, Beckman Coulter FC-500, Beckman Coulter Navios, BD Biosciences FACScan, BD Biosciences FACSCalibur és BD Biosciences Cantos.

Telefonszám: 1-207-945-0900  Fax: 1-207-942-0346  [email protected]  www.trilliumdx.com

Leuko64 ™

Assay for Detection of Inflammation and Tissue Injury

TERVEZETT HASZNÁLAT

A Trillium Diagnostics Leuko64TM vizsgálati készlet a neutrophil leukocyta CD64 kifejeződésének mérésére használható, és egyéb laboratóriumi eredményekkel és klinikai kiértékelésekkel együtt használható a szövetsérülésre adott akut szisztémás gyulladásos válaszreakció diagnosztizálására, amely szövetkárosodásban, fertőzésben vagy szepszisben fordul elő. A Trillium Leuko64TM készletet csak képzett személyzet használhatja in vitro diagnosztizálásra.

A KÉSZLET ÖSSZETEVŐI

DIAGNOSTICS

A reagens B reagens C reagens Leuko64TM szoftver

Murin monoclonalis antitestek keveréke ( 0,5%-os tisztaságú marha szérum albuminnal (bovine serum albumin, BSA) és 0,01 %-os nátrium-aziddal pufferált sóoldatot tartalmaz). 10x koncentrált Trillium lízis oldat (ammónium-kloridot tartalmaz) StarFire RedTM feliratú 5-6 µm-es polisztirol gyöngyök és fluoreszcein izotiocianát (fluorescein isothiocyanate, FITC) szuszpenziója, (<0,1 %os nátrium-azidot és 0,01 %-os Tween 20-at tartalmaz). Áramlási citometriás lista módú fájlok elemzéséhez és a leukocyták CD64 mutatószámainak kiszámításához használható. A mellékelt CD betanító programokat is tartalmaz a felhasználó képzéséhez és a Leuko64TM vizsgálati készlet optimális használatához.

KÖTELEZŐ, DE NEM MELLÉKELT REAGENSEK és ANYAGOK Desztillált víz Áramlási citométer Örvénykeverő

Egyszer használatos 12x75 polisztirol kémcsövek Mikropipetta, ami 5ul, 50ul, és 1ml elkészítéséhez alkalmas Számítógép lista módú fájlelemzéshez

TRILLIUM

MINTA

A Leuko64TM vizsgálathoz csak 50µl antikoagulált teljes vér szükséges; az EDTA, a heparin, a nátrium-citrát vagy az ACD mind ezzel a vizsgálati rendszerrel kompatibilis antikoagulánsok. A vérminták legtöbb 8 órán át maradnak elfogadható állapotban, ha szobahőmérsékleten tartják (18-22 C) vagy 48 órán át, ha le vannak fagyasztva (2-8 C).

A MINTA ELKÉSZÍTÉSE Hígítsa a 10X Trillium lízis oldatot (B reagens) 1:10 arányban 1 rész koncentrált B reagenst 9 rész szűrt desztillált vízzel keverve. Az oldat végső pH-ja 7,40 + 0,05. A tervezett számú vizsgálathoz elegendő mennyiséget készítsen (minden mintához 1,0 ml szükséges). A hígított vagy 1X Trillium lízis szobahőmérsékleten (20-26° C) 1 hétig vagy fagyasztva (2-8° C) napig stabil. 2. A hígított Trillium Lyse oldat hőmérsékletének felhasználásakor 20° C és 37° C között kell lennie. A hideg oldat rossz feloldódást és szuboptimális vizsgálati feltételeket eredményez. 3. Egyetlen 12 x 75 mm-es polisztirol kémcsövet címkézzen fel minden elemzendő mintához. 4. Csepegtessen 50µl Leuko64TM A reagenst minden felcímkézett kémcsőbe. 1.

Telefonszám: 1-207-945-0900  Fax: 1-207-942-0346  [email protected]  www.trilliumdx.com LK64-V11-2013 A4 EN

Oldal: 2 - 9

Leuko64 ™


TRILLIUM

DIAGNOSTICS

5. Csepegtessen 50µl, <25 x 109 sejt/l (szükség szerint hígított) fehérvérsejtszámú jól elkevert antikoaguláns vérmintát az A reagenst tartalmazó megfelelő kémcsőbe; finoman keverje vagy rázza össze; és 10 percig termosztálja a sötétben szobahőmérsékleten (18-22 C). 6. Adjon hozzá 1ml 1X Trillium Lyse (hígított B reagens) oldatot minden kémcsőhöz és alaposan keverje össze. Termosztálja 15 percig sötétben, szobahőmérsékleten. Az intermittens keverés elősegíti a feloldódást. TM 7. Adjon hozzá 5 µl-es Leuko64 gyöngyöket (C reagens) minden kémcsőhöz, keverje össze és elemezze az áramlási citométerrel az alábbi műszerbeállítást és elemzési protokollt használva. Az azonnal nem elemzett elkészített mintákat 2-8° C-on kell tartani és a fénytől védeni amíg elemzésre kerülnek. Az áramlási citometriás elemzés a 4 órás festés alatt kell elvégezni. AZ ÁRAMLÁSI CITOMÉTER BEÁLLÍTÁSA Az első minta elemzése előtt az áramlási citométeren egy adatgyűjtési protokollt kell beállítani. A Leuko64TM gyöngyök (C reagens) kalibrátorként szolgálnak a műszererősítésekhez és a feszültségbeállításokhoz. Az automatizált szoftver megfelelő működése érdekében, a következő lépések pontos betartása kötelező. További utasításokért lásd a betanító programokat a Leuko64TM QuantiCALC szoftver CD-jén. 1.

2.

Készítsen elő egy 12 x 75 mm-es poliszterol kémcsövet, amely 5 µl-es Leuko64TM gyöngyöket (C reagens) tartalmaz 0,5 ml 1X Trillium lízis oldatban (B reagens 1:10 arányban hígítva szűrt desztillált vízzel, pH 7,40 + 0,05). Ez a gyöngyoldat az áramlási citométer optimális PMT feszültségének és fényszórási beállításainak megállapítására kerül felhasználásra. A citométer adatgyűjtési üzemmódjában (Beckman Coulter XL, FC500 vagy Navios felhasználók- lásd alább) állítson be 5 kétparaméteres hisztogramot:  FS (lin) SS (log)  FL3 (gyöngyök) SS (log) függvényében függvényében  CD64 FITC SS (log)  CD163 PE CD64 FITC függvényében  CD163 PE SS (log) függvényében függvényében És 3 egyparaméteres hisztogramot:  FL1 - CD64 FITC  FL2 - CD163 PE  FL3 (vagy PMT 685 nm fény érzékelésére képes szűrőbeállítással)

MEGJEGYZÉS: A Beckman Coulter XL, FC500 és Navios műszerek adatgyűjtési paramétereinek a következő sorrendben kell lenniük:  P1 = FALS  P4=log PE  P2 = log oldalsó szórás  P5=log PMT 685 nm-es  P3 = log FITC jelhez (általában FL4) 3. Kapcsoljon ki minden kompenzációs és küszöb beállítást. Telefonszám: 1-207-945-0900  Fax: 1-207-942-0346  [email protected]  www.trilliumdx.com LK64-V11-2013 A4 EN

Oldal: 3 - 9

Leuko64 ™ 4.

Feszültségbeállítások minden műszerhez, a BDB FACSCanto II kivételével. (a FACSCanto II felhasználók esetén az utasításokat lásd alább)

Megjegyzés: Állítson be minden logaritmikus paramétert 4 dekádos kijelzőre az áramlási citometriás adatgyűjtő szoftveren az adatgyűjtés előtt. Futtassa a gyöngy szuszpenziót és végezze el a következő kiigazításokat az egyparaméteres hisztogramokon (lásd diagram) A csúcs középpontját az FL1 (FITC) tengelyen a 100-as csatornára kell centrálni, (a fluoreszcens intenzitás harmadik dekádjának kezdetére). A csúcs középpontját az FL2 (PE) tengelyen a ~ 20-ra kell centrálni, (a fluoreszcens intenzitás második tikje).







DIAGNOSTICS



TRILLIUM


A csúcs középpontját az FL3 tengelyen a 100-as csatornára kell centrálni, vagy a fluoreszcens intenzitás harmadik dekádjának kezdetére. Az FS log SS függvényében ábrázolt hisztogramon a gyöngy populációt a harmadik dekád végére kell pozicionálni a logaritmikus oldalsó szórási jelre és a 200-as csatorna mellé az előrevezető vagy kisszögű jelre (a 256-os skálán használja a 25-ös – 50-es csatornát).

 

Minden Beckman Coulter modell esetében, FACSCalibur és FACScan™ felhasználóknak:

CD64‐FITC

CD163‐PE

Starfire Red

SSC Log

**Feszültségbeállítások csak BDB FACSCanto II™ felhasználóknak: A BD FACSCanto II áramlási citométerekhez más beállítási utasítások szükségesek a logaritmikus fluoreszcens skála kijelzőjének különbségei miatt, amely a Canto II műszeren használt BD FACSDiva adatgyűjtési szoftver esetében egyedi.  

Megjegyzés: Állítson be minden logaritmikus paramétert 4 dekádos kijelzőre az áramlási citometriás adatgyűjtő szoftveren az adatgyűjtés előtt. Futtassa a gyöngy szuszpenziót és végezze el a következő kiigazításokat az egyparaméteres hisztogramokon (lásd diagram):  A csúcs középpontját az FL1 (FITC) tengelyen a 3000-as csatornára kell centrálni, (a fluoreszcens intenzitás harmadik dekádjának második tikje).  A csúcs középpontját az FL2 (PE) tengelyen a fluoreszcens intenzitás második dekádja vége mellé kell centrálni.  A csúcs középpontját az FL3 tengelyen a 3000-as csatornára kell centrálni, (a fluoreszcens intenzitás harmadik dekádjának második tikje).


Oldal: 4 - 9

Leuko64 ™

Assay for Detection of Inflammation and Tissue Injury 

Az FS log SS függvényében ábrázolt hisztogramon a gyöngy populációt a harmadik dekád végére kell pozicionálni a logaritmikus oldalsó szórási jelre és a 25-ös – 50-es csatornába az előrevezető vagy kisszögű jelre.

TRILLIUM

DIAGNOSTICS

Csak BD FACSCanto II felhasználóknak:

CD64‐FITC

5.

6.

7.

CD163‐PE

Starfire Red

SSC Log

A küszöb a vérlemezke és vörösvérsejt hulladék kizárására a logaritmikus SS-en kerül beállításra lymphocyták használatával. A diszkriminátort a logaritmikus SS-re közvetlenül a Lymphocyta populáció bal oldalára kell beállítani. Ne használjon egy, az előre szóródásra beállított diszkriminátort, mivel a gyöngyök kizárásra kerülnek az adatgyűjtésből. Az adatgyűjtési és tárolási beállításokat ki kell igazítani 50000 nem kapuzott esemény összegyűjtésére. A felbontás 1024-re állítása általánosan ajánlott, de Beckman Coulter Cytomics™ FC500 vagy BD Biosciences FACSCanto™ citométerek használata esetén kötelező. Mentse a beállításokat és az adatgyűjtési sablont. Ismételje meg a 4.-7. lépéseket bármely új Leuko64TM tétel esetén vagy a műszer szervizelése után.

LISTA MÓDÚ FÁJLELEMZÉS Telepítse a mellékelt Leuko64™ QuantiCALC szoftvert a MacIntosh-ra vagy személyi számítógépre, amelyet az adatelemzéshez használ majd. Kövesse a szoftver súgófájljában levő felhasználóbarát utasításokat a lista módú adatelemzéshez. MEGJEGYZÉS: A szoftver tételspecifikus és a használati protokollok műszermodell-specifikusak. Felkérik, hogy ellenőrizze a megfelelő választást.

MINŐSÉGELLENŐRZÉSI STRATÉGIA A LEUKO64TM VIZSGÁLATHOZ A vizsgálat autológ sejtpopulációt használ a betegmintán belül a pozitív és negatív kontrollhoz egyaránt, ami optimizálja az elemzés előtti változókat. A lymphocyta populáció, amelyből a CD64 és a CD163 kifejeződése egyaránt hiányzik, negatív kontroll populációként szolgál, és biztosítja a megfelelő reagensek hozzáadását, és felismerheti a fluoreszcens anyagok jelenlétét a diagnosztikai mintában.A monocyta populáció, amelyben megvan az egymás utáni kifejeződése a CD64-nek és a CD163-nek egyaránt, pozitív kontrollként szolgál a megfelelő mintafestés biztosításához az A reagenssel. Kövesse a Leuko64TM szoftver súgófájljában levő felhasználóbarát utasításokat a lista módú adatelemzéshez, a vizsgálat negatív és pozitív kontrolljaira vonatkozó további részletekért. MEGJEGYZÉS: A szoftver vezérléshez kapcsolódó jelzőkkel és irányelvekkel rendelkezik. Telefonszám: 1-207-945-0900  Fax: 1-207-942-0346  [email protected]  www.trilliumdx.com LK64-V11-2013 A4 EN

Oldal: 5 - 9

Leuko64 ™


tl H Y C KEZELÉS ÉS TÁROLÁS A kémcsöveket felállítva, szorosan lezárva, 2-8 C-on tárolja, ha nem használja őket. A ki nem nyitott kémcsövek stabilak az egyes kémcsöveken és a vizsgálati lapon jelzett lejárati dátumig. Kerülje a szükségtelen melegítési és hűtési ciklusokat, mivel a vizsgálat harminc (30) vagy kevesebb termociklusra van jóváhagyva. Védje a terméket a fagyástól, a 30C feletti hőmérsékletektől és a szobahőmérsékleten (1826C) való hosszas tárolástól vagy fénynek való kitettségtől.

DIAGNOSTICS

FIGYELMEZTETÉS A készlet minden komponense nátrium-azidot tartalmaz (<0,1%-os tömegtérfogat). Ez a vegyszer mérgező és veszélyes vegyület, ha savakkal és fémekkel kombinálják. Kellő óvatossággal kezelje. A nátrium-azidot tartalmazó oldatokat megfelelően kell ártalmatlanítani.

TERMÉKMINŐSÉG-ELLENŐRZÉS A készletben levő reagensek teljesítménye és sajátossága a Trillium saját minőségellenőrzési módszereivel van bevizsgálva. A terméket a FDA QSR és az ISO 13485:2003 szabványnak megfelelő minőségrendszer és gyártási irányelvek felhasználásával gyártják .

TERMÉKKORLÁTOZÁSOK

TRILLIUM











Az interferon-gamma, a G-CSFl vagy a veleszületett immunválaszt moduláló bármely egyéb szer ismerten befolyásolja a leukocyta CD64 kifejeződésének felfelé szabályozását, és ezért befolyásolja a vizsgálat értelmezését. A Leuko64TM vizsgálat eredményeit nem szabad a gyulladás kizárólagos mértékeként használni ezeknél a betegeknél, de használható ezen kezelések hatásának figyelemmel követésére. A termék és a tesztelendő minták megfelelő tárolási és használati feltételeinek igazodniuk kell az optimális teljesítményhez és kerülniük kell a hamis vagy pontatlan eredményeket. A C reagens használat előtti hiányos keverése egyaránt érvénytelenítheti a kivont aliquot részt és a kémcsőben maradt anyagot. A helytelen műszerprotokoll vagy készlet-tételszám kiválasztása a szoftver indításánál a lista módú adatelemzés pontosságának csökkenését eredményezi. A szoftver tételspecifikus és a használati protokollok műszermodell-specifikusak. A megfelelő választást hajtsa végre, amikor felkérik rá. Bármely fájl a nagyon leukopéniás vagy neutropéniás vérmintából, amely kevesebb mint 200 WBC, a Leuko64TM szoftver által kapuzott eseményt jelenít meg a 3 kategória (PMN, Lymphocyta, vagy Monocyta) bármelyikéből, nem elemezhető a Leuko64TM vizsgálattal a PMN CD64 mutatószám szabatosságának és pontosságának jelentős csökkenése nélkül.


Oldal: 6 - 9

TRILLIUM

DIAGNOSTICS

Leuko64 ™




Bármely, kevesebb mint 1000 gyöngy esemény számmal rendelkező fájlt értékelni kell az alacsony gyöngyszám okának meghatározására, amelyet a nem megfelelő műszerbeállítás vagy a WBC >25 x 109 sejt/l értékkel rendelkező fel nem hígított vérminta okozhat.



Az áramlási citometriás műszereknek nem gyakran lehetnek atipikus konfigurációban elrendezett szűrői, amelyben FL1 nem a CD64 FITC jel és FL2 nem a CD163 PE jel, és emiatt veszélyeztetik a Leuko64TM szoftver teljesítményét. Ezen helyzet vagy a szoftverhasználattal kapcsolatos bármely más probléma megoldása érdekében kérjen segítséget a műszer forgalmazójától és a Trillium Diagnostics műszaki támogatásától.

TELJESÍTMÉNYJELLEMZŐK Minden laboratóriumnak egy elfogadható hivatkozási tartományt kell megállapítania minden Leuko64TM tételhez. A PMN CD64 mutatószám hivatkozási tartománya az egészséges normál vérmintákra várhatóan ≤1,00. Általában, minél erősebb a szisztémás akut gyulladásos válasz, annál nagyobb PMN (és monocyta) CD64 mutatószám érték kerül mérésre. A monocyta CD64 és CD163 mutatószámok várható hivatkozási tartományai nem kerültek meghatározásra.

HIVATKOZÁSOK 1. 2.

3.

4.

5.

6. 7.

8.

9.

Davis BH. Improved diagnostic approaches to infection/sepsis detection. Expert Rev Mol Diag 2005;5:193-207. Schiff D, Rae J, et al. Increased phagocyte CD64 expression and improved Fcreceptor mediated phagocytosis following in vivo recombinant human interferonƔ treatment of normal human subjects. Blood 1997;90:2987-94. Petroni KC, Shen L, Guyre PM. Modulation of human polymorphonuclear leukocyte IgG Fc receptors and Fc receptor-mediated functions by IFN-gamma and glucocorticoids. J Immunol 1988;140:3467-72. Davis BH, Bigelow NC, et al. Neutrophil CD64 expression: potential diagnostic indicator of acute inflammation and therapeutic monitor of interferon- therapy. Lab Hematol 1995;1:3-12. Guyre PM, Campbell AS, et al. Monocytes and polymorphonuclear neutrophils of patients with streptococcal pharyngitis express increased numbers of type I IgG Fc receptors. J Clin Invest 1990;86:1892-1. Ng PC, Lam HS. Diagnostic markers for neonatal sepsis. Curr Opin Pediatr 2006;18:125-31. Davis BH, Bigelow NC. Comparison of neutrophil CD64 expression, manual myeloid immaturity counts, and automated hematology analyzer flags as indicators of infection or sepsis. Lab Hematol 2005;11:137- 47. Leino L, Sorvajarvi K, et al. Febrile infection changes the expression of IgG Fc receptors and complement receptors in human neutrophils in vivo. Clin Exp Immunol 1997;107:37-43. Davis BH, Olsen S, et al. Neutrophil CD64 is an improved indicator of infection or sepsis in emergency room patients. Arch Pathol Lab Med 2006;130(5):654-61. Telefonszám: 1-207-945-0900  Fax: 1-207-942-0346  [email protected]  www.trilliumdx.com

LK64-V11-2013 A4 EN

Oldal: 7 - 9

Leuko64 ™


Van der Meer W, Pickkers P, et al. Hematological indices, inflammatory markers and neutrophil CD64 expression: comparative trends during experimental human endotoxemia. J Endotoxin Res 2007;13:94-100.

10.

11. Groselj M, Ihan A, Derganc M. Neutrophil and monocyte CD64 and CD163 expression in critically ill neonates and children with sepsis: comparison of fluorescence intensity and calculated Indexes. Mediators Inflamm 2008; 2008:202646.

Bhandari V, Wang C, et al. Hematologic profile of sepsis in neonates: neutrophil CD64 as a diagnostic marker. Pediatrics 2008;121:129-134. Hoffmann JJ. Neutrophil CD64 as a sepsis biomarker. Biochemica Medica 2011;21:282-90.

12. 13.

Icardi M, Erickson Y, Kilborn S, et al. CD64 Index provides simple and predictive testing for detection and monitiroing of sepsis and bacterial infection in hospital patients. J Clin Microbiol 2009;47:3914-19. US Department of Labor, Occupational Safety and Health Administration. 29 CFR Parts 1910. 1030, Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens; Final Rule. Federal Register 235:64175-82. 1991. US Department of Health and Human Services. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication (NIH) 93-8395.Washington: US Government Printing Office. 1993.

14.

TRILLIUM

DIAGNOSTICS

15.

16.

VÉDJEGYEK 

  

A Leuko64™ QuantiCALC szoftvert a VERITY SOFTWARE HOUSE • Topsham, Maine, USA • www.vsh.com és a TRILLIUM DIAGNOSTICS, LLC • Brewer, Maine, USA • www.trilliumdx.com helyezte szerzői jogi védelem alá és fejlesztette ki közösen. A FACSCanto™ és a FACScan™ a BD Biosciences • San Jose, CA, USA • www.bdbiosciences.com védjegyei. Navios™, Gallios™Cytomics FC500™ és a XL™ a Beckman Coulter, Inc • Brea, CA, USA • www.beckman.com védjegyei A Leuko64™ egy szabadalmaztatott vizsgálat, amely a 8,116,984 számú egyesült államokbeli szabadalom, a 5047803 számú japán szabadalom és a 05851842.4 számú EPO alkalmazás által védett.

ÜGYFÉLSZOLGÁLAT

M

Trillium Diagnostics, LLC PO Box 67 Brewer, Maine, USA 04412 Tel. 1-207-945-0900 Fax 1-207-942-0346 Műszaki [email protected] Rendelések telefonon, faxon vagy a www.trilliumdx.com webhelyen


Oldal: 8 - 9

Leuko64 ™

P

Assay for Detection of Inflammation and Tissue Injury IQ Products BV Rozenburglaan 13a 9727 DL Groningen, The Netherlands Tel +31 (0) 50 57 57 000 Fax +31 (0) 50 57 57 002

TRILLIUM

DIAGNOSTICS

Műszaki [email protected] Rendelések [email protected] Weboldal www.iqproducts.nl


Oldal: 9 - 9

TRILLIUM DIAGNOSTICS

Recommend Documents