Retikulocytární hemoglobin Soňa Vytisková
1
Úvod
2
Erytropoeza Kostní dřeň
Krev
1-3 dny KD / 1-2dny PK Proerytroblast
Basofilní erytroblast
Polychromatický erytroblast
Ortochromatický erytroblast
Retikulocyt
Erytrocyt
Zmenšování velikosti buňky
Nárůst syntézy HGB
Retikulocyt obsahuje zbytky organel obsahující RNA (ribozomy, zbytky endoplazmatického retikula). 3
Erytrocyty a retikulocyty Vzhledem
k tomu, že normální doba života RBC je 120 dní, zhruba 1/120 (~1%) nových RBC musí být denně doplněno do periferní krve, aby byl zachován jejich konstantní počet. Erytrocyty
jsou „dlouhověké“ a mohou nám vypovídat o erytropoetické aktivitě během několika posledních měsíců. ◦Erytrocyty již neprodukují nový hemoglobin.
Naproti
tomu retikulocyty jsou „krátkověké“ a mohou nám proto poskytnout informace o aktuální erytropoetické aktivitě. ◦Retikulocyty stále produkují Hgb.
Erytrocyty – nové parametry
HPO
-% hypochromních erytrocytů
HPR
-% hyperchromních erytrocytů
MIC
- % mikrocytů
MAC
- % makrocytů
střední koncentrace korpuskulárního HGB
obsah korpuskulárního HGB
šíře distribuce dle koncentrace HGB
šíře distribuce dle obsahu buněčného hemoglobinu
stanovení počtu fragmentů (schistocytů)
5
Retikulocyty – nové parametry Retikulohematokrit Koncentrace HGB v retikulocytech
Rozdíl mezi koncentrací HGB v RBC a RETI Střední objem RETI Střední obsah HGB v RETI- Ret-He, CHr, MCHr (od 6. 4. 2016 – žádanka)
Šíře distribuce RETI Mladší a starší vývojové formy RETI (IRF, LFR, MFR, HFR) Střední koncentrace korpuskulárního HGB v RETI Obsah buněčného HGB v RETI Šíře distribuce dle koncentrace HGB v RETI Šíře distribuce dle buněčného obsahu HGB v RETI 6
Princip stanovení
7
Retikulocyty – metody stanovení Mikroskop: barvení brilantkresylovou nebo metylenovou modří – barví se tzv. substatnia granulofilametosa Fluorescenční metoda: Sysmex Abbott Cytochemická metoda: Beckman Coulter Advia Dle množství zbytkové RNA rozeznáváme zralé a nezralé retikulocyty (IRF). 8
Mieho teorie Při průchodu světla skrze kulovitý (sférický) objekt dochází k jeho odchýlení (difrakci) o vnitřní strukturu objektu
Publikováno 1908
Kulaté částice rozptylují světlo tak, že rozptýlené světlo tyto částice popisuje co do velikosti a obsahu Mieho teorii lze aplikovat na jakýkoli kulovitý objekt - erytrocyty nevyjímaje, avšak za předpokladu, že jsou izovolumetricky sferizovány.
Mohandas et al. Accurate and independent measurement of volume and hemoglobin concentration of individual red cells by laser scattering, Blood, 1986: 68:506-213 9
Mieho teorie
High refractive index
Low refractive index
10
Princip stanovení Advia 11
Advia – parametr CHr
12
Erytrogram, histogram CHr
13
Princip stanovení Abbott 14
Sapphire – parametr MCHr •
Identifikace retikulocytů •FL1 (intensita fluorescence, RNA) 90º detector
PMT3 PMT2
•Koncentrace
hemoglobinu v buňce •IAS (lom světla v 7º; log + lin) •PSS (lom světla 90º)
•Objem
buňky •ALL (lom světla 0º) •PSS (lom světla 90º)
Laser 488 nm
PMT1 FL1 detector
Optical flow cell
7º detector 0º detector
15
Optické RBC parametery Diagram „Objem vs. CHC“ (MCVr, MCHr, CHCr)
MCVr 85.7 fL
MCHr = MCVr x CHCr CHCr
Červené tečky: RBC Zelené tečky: retikulocyty
289 g/L
Put science on your side.
Erytrogram
-----Hypochromic---
-----Macrocytic------
Červené tečky: RBC Zelené tečky: retikulocyty
-------Microcytic-----Normocytic, normochromic
Put science on your side.
Microcytic, hypochromic
Princip stanovení Sysmex 18
Sysmex – parametr Ret-He RET Channel – RET-He vs. RBC-He
RET-He
LFR-Area
DELTA-He RBC-He RBC- Area
Forward scattered light intensity
RET-He - RBC-He
IRF - Area
Fluorescence-Thrombocytes
Fluorescent light intensity
RET-He
RBC-He
● Reticulocyte haemoglobin equivalent
● RBC haemoglobin equivalent
● Calculated from RET-Y
● Calculated from RET-RBC-Y 19
Ret-He – r. 2005
20
Ret-He
21
Ret-He
22
Kontrola kvality
23
Klinické využití
24
Retikulocytární hemoglobin
Nazývaný „krátkodobým ekvivalentem MCH“ – oproti MCH poskytuje potřebnou informaci v horizontu dní
Retikulocyty v krevním oběhu pouze několik dní – díky svému rychlejšímu obratu jsou jejich parametry rychlejším a citlivějším indikátorem činnosti kostní dřeně (zejména její schopnosti využívat železo k syntéze hemoglobinu)
Zvýšené hodnoty retikulocytů pouze informují o počínající reakci kostní dřeně na stimulaci, nic však nevypovídají o skutečné kvalitě retikulocytů – obsahu hemoglobinu v nich
Prokazuje utilizaci železa ve tvorbě hemu, může být indikátorem nedostatku železa v kostní dřeni podobně jako barvení na železo v KD (Fishbane S., Mast A. E., Blood 2002)
Klinické využití Ret-He
Sledování erytropoetické aktivity kostní dřeně obsah hemoglobinu v retikulocytech odráží aktuální stav a kvalitu erytropoézy
Poskytuje informace o hemoglobinizaci v průběhu erytropoézy v reálném čase
Diagnostika a monitorace léčby anemie z nedostatku železa, optimalizace léčby železem
Účinný parametr při monitoringu kinetiky železa
Časná diagnostika funkčního nedostatku železa, odlišení funkčního a nefunkčního nedostatku železa
Účinný parametr pro optimalizaci a racionalizaci léčby erytropoetinem, zejména u pacientů podrobujících se chemoterapeutické léčbě a u dětí
Obdoba glykemie a % HbA1c
Retikulocytární hemoglobin vs. klasické parametry metabolismu Fe
Sérové železo
Sérový feritin – zásoby železa v organismu
Saturace transferinu – prezentuje mobilizaci železa
Solubilní transferrinový receptor (sTfR) a sTfR-F index (sTfR/log ferritin)
Hepcidin
Zn Protoporfyrin
RET-He - není ovlivněn reakcí akutní fáze, obsah hemoglobinu v retikulocytech je snížen bez ohledu na přítomnost či nepřítomnost zánětu
Klinické využití - nefrologie
dle dosud publikovaných údajů je největší klinické využití v oblasti léčby dialyzovaných pacientů EPO
1997 „FDA approved“: metoda validovaná pro pacienty podstupující hemodialýzu
Nefrolofická guidelines
(Evropské pokyny pro osvědčené postupy (EBPG) nebo iniciativa pro kvalitu výsledků vyšetření ledvinových onemocnění, National Kidney Foundation Kidney Disease Outcome Quality Initiative (NKF KDOQI).
Klinické využití - pediatrie
29
Klinické využití - gravidita
FN Brno
Refereční rozmezí:
28 -35 pg (Sysmex)
◦ Hodnoty nižší než 28 pg se považují za projev funkčního nedostatku železa
Vydávání výsledků pro klinická pracoviště od 6. 4. 2016
Počet vyšetření RET-He:
cca 130 RET-He /měsíc
Závěr
32
Shrnutí
Měření RET-He je rychlé, časově nenáročné
Nízké náklady pro laboratoře i zdravotní pojišťovny ◦ 96857 – stanovení počtu retikulocytů na automatickém analyzátrou – 66 bodů ◦ Vykazovat s KO
Časný ukazatel onemocnění/odpovědi na léčbu: dříve než klinické hematologické či biochemické ukazatele
Vysoká výpovědní hodnota ◦ 100% citlivost pro diagnostiku deficitu železa ◦ 80% specifita pro diagnostiku deficitu železa
Poděkování
Děkuji za pozornost
35
