Mutace genu pro Connexin 26 jako významná příčina nedoslýchavosti Petr Lesný1, Pavel Seeman2, Daniel Groh1 1ORL klinika UK 2. LF a FN Motol
Subkatedra dětské ORL IPVZ Přednosta doc. MUDr. Zdeněk Kabelka 2Klinika dětské neurologie DNA laboratoř
UK 2. LF a FN Motol
Obsah • Prelingvální poruchy sluchu • Connexin 26 • Typická anamnéza a vyšetření • Naše výsledky
1
Poruchy sluchu • Nejčastější a nejzávažnější (WHO) smyslová vada u lidí • Prelingvální, perilingvální a postlingvální • Prelingvální hluchota 1:1000 případů • Více než 50% na genetickém základu (např. geny POU3F4, myosin 7A, otoferlin, pedrin, connexin 31)
Prelingvální poruchy sluchu Vrozené (~60%) Spojené s určitým syndromem (~30%)
Získané (40%)
Nesyndromové (~70%)
Autozomálně dominantní (~15%)
Autozomálně recesivní (dnes již (80-85%) >30 genů)
X-vázané a mitochondriální (<5%)
Mutace genu GJB2 kódujícího connexin 26 (80%)
2
Connexin 26 (Cx26) • Connexiny – Membránové proteiny – Součásti gap-junction (je tvořena 6 molekulami connexinu) – Umožňují pohyb malých molekul a iontů mezi buňkami
• Connexin 26 – tkáňově specifický (spojuje navzájem podpůrné bb. v hlemýždi)
Connexin 26 (Cx26) Na+-specifické iontově selektivní kanály Iontově selektivní kanály tvořené Connexinem 26
Umožňuje recirkulaci iontů K+ zpět do endolymfy v průběhu zvuku ! repolarizaci buněk
3
Mutace genu pro Cx26 • Gen GJB2 na chromosomu 13q11 • Jsou zodpovědné za 60-80% AR vrozených nesyndromických ztrát sluchu ! za 20-30% prelingválních ztrát sluchu • Četnost heterozygotů (nosičství) v Evropě je 1:31 (stejně jako například CF) • Není závislost mezi typem mutace Cx26 a závažností ztráty sluchu • Prokázán founder efekt (existence hypotetického Van Laer, 2001 společného předka) http://www.iro.es/cx26deaf.html
Heterozygoti pro Connexin 26/30 • Mutace v genu GJB6 kódujícím Connexin 30 je druhá nejčastější genetická příčina vrozené prelingvální nesyndromické poruchy sluchu • Heterozygoti pro Connexin 26 (odpovídající diagnostickým kritériím) ! mohou mít mutaci Connexinu 30 del Castillo, 2002
4
Genetické vyšetření mutací Cx26 • Ve světě dnes již běžné • „Malý gen“ umožňuje rutinní genetické vyšetření • Některé mutace jsou velmi časté (mutace 35delG je nacházena v Evropě až v 80% případů) • Genetické poradenství, prenatální diagnostika, prognóza pro CI?
Typická anamnéza RA: autozomálně recesivní typ vady: obě pohlaví jsou postižena stejně často rodiče mívají sluch normální sourozenci mohou být postižení (25%)
5
Typická anamnéza OA: Vyloučení získaných vad • kongenitální infekce (rubeola, VZV, CMV, EBV, toxoplasmóza, lues apod.) • asfyxie u porodu, porodního traumatu, prolongované UPV, Rh inkompatibilita apod. • kraniofaciální malformace • ototoxické léky • vady spojené s genetickými syndromy • u nedonošenců pod 1500g je časté krvácení do labyrintu
Typický nález Vyšetření svědčí pro bilaterální percepční ztrátu sluchu… otomikroskopie: vyloučeny anomálie zevního zvukovodu tympanometrie: křivka „A“ OAE: nevýbavné audiometrie: křivka plochá nebo klesající (největší ztráta je na 4000-8000 Hz)
6
Diagnostika • ORL a pediatrické vyšetření – zařazující kritéria – vylučující kritéria
• Genetická konzultace se sestavením rodokmenu, informovaný souhlas • Odběr krve či použití krevních skvrn – „Guthrie karet“ • DNA vyšetření nejčastějších mutací – 35delG • Sekvenování genu pro nalezení méně častých mutací • Genetická konzultace - dovyšetření rodičů, sdělení výsledků
Závěr 1. Poměr mezi vrozenými a získanými prelingválními ztrátami sluchu stoupá 2. 20-30% prelingválních ztrát sluchu je způsobeno mutací genu pro Connexin 26 3. Vyšetření mutací Cx26 v ČR? 4. Umožnění genetického poradenství i prenatální diagnostiky
7
První výsledek v ČR: (2001) prenatální diagnostika v rodině pacienta s kochleárním implantátem
CI
[email protected]
Molekulárně genetické vyšetření genu Cx26 1. Potvrzení či vyloučení hlavní mutace 35delG • •
fragment analýza - přítomnost fragmentu o 1 bp kratšího (většina postižených jsou homozygoti) nebo přímé sekvenování genu
2. V případě „nehomozygota“ pro 35delG •
dovyšetření všech dalších mutací pomocí sekvenování celého kódujícího úseku ve 2 PCR fragmentech
3. Vyšetření rodičů a sourozenců pro zjištění původu mutace
[email protected]
8
Kritický úsek sekvence genu Cx26 normální DNA sekvence - 6xG 1G často u pacientů chybí
[email protected]
První vyšetření v ČR a první potvrzený pacient Neslyšící dítě
Otec
Matka
Plod
[email protected]
9
Zpráva 1.Neslyšící pacient je homozygotem pro nejběžnější mutaci genu pro Cx26: 35delG 2.Rodiče jsou heterozygoti pro tuto mutaci, 25% riziko postižení dalších potomků 3.Plod je zdravý homozygot - neměl by být postižen poruchou sluchu závislou na mutaci Cx26
[email protected]
Druhý výsledek: vyšetření pacientů s kochleárními implantáty a kongenitální etiologií poruchy sluchu (2002) Předpoklad častého výskytu mutace. Celkem vyšetřeno (II/2002) 29 pacientů. bez mutace: 13 pacientů heterozygoti: 2 pacienti
homozygoti pro Cx26: 14 pacientů
10
Děkuji za pozornost
11
