Lampiran 1. Tahap Melakukan Desain Primer3 Bakteri B.subtilis

LAMPIRAN

80

Lampiran 1. Tahap Melakukan Desain Primer3 Bakteri B.subtilis

1. Diinput 3 sekuen gen endoglukonase dari bakteri Bacillus subtilis a. Dibuka program NCBI “http://www.ncbi.nlm.nih.gov/”, pada database dipilih “Protein”

b. Diinput sekuen “Endoglucanase (Bacillus subtilis)” pada kolom “search”, lalu klik “search”

81

c. Dipilih 3 strain berbeda pada sekuen bakteri Bacillus subtilis dengan ukuran asam amino yang sama d. Klik sekuen tersebut, lalu pada kolom GenPept dipilih “FASTA (text)”, klik “Apply”

e. Setelah itu, dicopy sekuen tersebut ke dalam aplikasi Notepad, klik “File” lalu klik “Save as”. Beri nama file tersebut, ex: “Endoglucanase_Bacillus subtilis 1”

f. Lakukan hal yang sama pada poin c-e pada 2 sekuen bakteri lainnya.

82

2. Dilakukan alignment pada 3 sekuen endoglukonase menggunakan software BioEdit a. Dipilih 3 susunan basa protein endoglukonase (Bacillus subtilis) dengan strain berbeda. Klik “File”, lalu “Open”. Setelah itu, cara untuk membuka 2 sekuen bakteri lainnya yaitu klik “File” lalu dipilih “Import”. Kemudian klik “Sequence Alignment” pilih “Open”

b. Tampilan 3 sekuen basa protein pada software BioEdit

c. Setelah itu, klik menu “Accessory Aplication”, dipilih “ClustalW Multiple Alignment”, klik “Run ClustalW”, klik “OK”.

83

d. Klik “Alignment” pada menu bar, lalu klik “Create Consensus Sequence” untuk membuat consensus

e. Setelah consensus didapatkan, maka kemudian ubah mode dengan cara pilih “Edit”, lalu isi susunan basa protein yang kosong dengan cara diinput kode basa. f. Kode basa yang diinput, dipilih berdasarkan kesamaan kode basa dari 1 pasangan basa protein. g. Diisi basa protein yang kosong hingga penuh, kemudian simpan ke “Notepad”.

84

h. Klik “Select/Slide” pada kolom “Mode”. Lalu klik basa yang paling pertama. Dipilih “Edit” pada menu bar, lalu klik “Select to End”

i. Dicopy consensus dengan cara klik “Ctrl+A”, paste di Notepad. Save consensus tersebut. Beri nama file tersebut “Consensus” 3. Ditranslate consensus Bakteri Bacillus subtilis a. Dibuka program EBI (Emboss) “www.ebi.ac.uk/Tools/st/” b. Dipilih “Launch Backtranseq”

85

c. Diinput sequence dengan cara pilih “Choose File”, klik data “consensus”, lalu klik “Open” d. Select Parameters dengan cara ubah codon usage dengan parameter “Bacillus subtilis”, klik “Submit”

e. Disave hasil translate ke dalam aplikasi Notepad dan beri nama file tersebut “Translation” 3. Didapatkan Primer yang dibutuhkan dengan membuka program NCBI. a. Dibuka program BLAST “ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/”, pada kolom PCR Templates klik “Choose File’, dipilih data “translation” lalu klik “Open” b. Disetting PCR product size (Min = 900, Max = 1497)

86

c. Diubah Database menjadi “nr” d. Diubah Organism menjadi “bacteria (taxid:2) e. Klik “Get Primers”, software akan membaca primer yang dibutuhkan

f. Setelah itu, muncul beberapa primer yang mungkin dapat digunakan. g. Dilakukan rekap data terlebih dahulu dengan cara dicopy seluruh “Primer Pair” ke dalam Aplikasi Microsoft Words.

4. Primer yang telah direkap lalu dihitung Temperature Melting (Tm). a. Dibuka link http://www.sigma-genosys.com/calc/DNACalc.asp b. Diinput “Primer Pair” ke dalam situs tersebut dengan cara : diinput Forward ke dalam kolom Sequence No. 1 dan diinput Reverse ke dalam kolom Sequence No. 2.

87

c. Klik “Calculate”

88

d. Hasil Primer setelah di calculate menunjukkan bahwa pada Forward (Sec. Str. : None, Primer Dimer : No) dan Reverse (Sec. Str. : None, Primer Dimer : No), artinya primer ini dapat digunakan untuk pengaplikasian PCR

89

Lampiran 2. Tahap Melakukan Desain Primer Degenerate Bakteri B.thuringiensis

1. Diinput 3 sekuen gen endoglukonase dari bakteri Bacillus thuringiensis a. Dibuka link “http://www.ncbi.nlm.nih.gov/”, pada database dipilih “Protein”

b. Diinput sekuen “Endoglucanase (Bacillus thuringiensis)” pada kolom “search”, lalu klik “search”.

c. Dipilih 3 strain berbeda pada sekuen bakteri Bacillus thuringiensis dengan ukuran asam amino yang sama. d. Klik sekuen tersebut, lalu pada kolom GenPept dipilih “FASTA (text)”, klik “Apply”

90

e. Setelah itu, copy sekuen tersebut ke dalam aplikasi Notepad, klik “File” lalu klik “Save as”. Beri nama file tersebut, ex: “Endoglucanase_Bacillus thuringiensis 1”

f. Dilakukan hal yang sama pada poin c-e pada 2 sekuen bakteri lainnya.

91

2. Dilakukan alignment pada 3 sekuen endoglukonase menggunakan software ClustalX a. Dibuka program ClustalX, klik “File” lalu dipilih “Load Sequence”

b. Dipilih 3 sekuen bakteri yang telah diinput lalu pilih “Open” c. Dipilih “Alignment” lalu dipilih “Do Complete Alignment” Daerah Conserved :

92

d. Save hasil alignment sequence pada dengan cara dipilih ‘File” lalu pilih “Save Sequence as”. e. Save dalam 3 format diantaranya “CLUSTAL”, “FASTA”, dan “NEXUS”. Lalu klik ‘Ok”.

f. Setelah itu, dilakukan desain primer degenerate pada program CODEHOP “http://blocks.fhcrc.org/blocks/process_blocks.html”. g. Dipilih “Choose File”, “Open Sequence FASTA”, lalu dipilih “Submit”.

93

h. Setelah itu, dipilih “Primers” dan klik “CODEHOP”

i. Diganti codon usage tabel menjadi “Bacillus thuringiensis” lalu dipilih “Look for primers”

94

j. Dipilih “Block” yang paling atas untuk mendapatkan primer forward dan dipilih “Complement of Block” yang paling bawah untuk mendapatkan primer reverse.

95

k. Dilakukan rekap data dari primer yang telah didapatkan. Kode Forward

AA Penempelan IGLASFSNSSFAA

Reverse

WWKPIPDDKKTQ

Sequen Primer 5'GAATTGGATTAGCATCTTTTTCTAATTCTwsnttygcngc3' 5'-TGAGTTTTCTTATCATCTGGAACTggyttccacca-3'

Lokasi Block x24798xblA

Tm 60.8

Complement of Block x24798xblH

61.9

l. Dibuka hasil multiple alignment format “NEXUS”, dicari daerah penempelan primer untuk forward dan reverse lalu ditandai. Hasil Multiple Sequence Alignment (MSA) Menggunakan Clustal X (tampilan didalam format.NXS) :

96

m. Setelah itu, dibuka program “GENEIOUS” untuk melihat ilustrasi penempelan primer. n. Dibuat file baru pada folder “local” dengan cara klik kanan pada forlder tersebut lalu dipilih “New Folder”.

o. Diberi nama file tersebut dengan format “Endoglukonase (Bacillus thuringiensis)” p. Diinput “translation” dengan cara dipilih “File”, “Import”, “From File”. Dipilih “translation” lalu dipilih “Import”.

97

q. Setelah itu, diinput primer dengan cara dipilih “Sequence”, “New Sequence”, “Copy Forward” (Type : primer) lalu klik “Ok”. r. Dibuka program BioEdit untuk reverse complement (menyamakan arah baca dengan sekuen forward). s. Klik “File” lalu “Open”, dipilih sekuen “reverse primer” lalu klik “Open”.

t. Dipilih “Sequence pada menu bar lalu dipilih “Nucleid Acid”. Setelah itu, dipilih “Reverse Complement”.

98

u. Klik 1 basa paling awal, dipilih “Edit” lalu dipilih “Select to End”.

v. Dicopy sekuen reverse tersebut ke dalam “Notepad”. Diberi nama dengan format “Reverse Primer Complement”

w. Dilakukan hal yang sama pada poin q tetapi dilakukan untuk sekuen reverse. x. Setelah itu, klik “ctrl” pada “translation”, “forward, “reverse” lalu klik “Alignment”, ‘Ok” y. Dibuka “Alignment View” dan ‘Text View” untuk melihat penempelan primer degenerate.

99

Visualisasi Penempelan Primer pada “Alignment View” Menggunakan Program Geneious :

Berdasarkan analisis geneious, maka estimasi produk PCR yang akan didapatkan sebesar ±1250 bp Penempelan Primer pada “View Text” Menggunakan Program Geneious :

EMBOSS_001 Forward Reverse

1 10 20 30 40 50 60 | | | | | | | ATGAATGGCAAAAGAAAAATTTTTACATGCATTTCAATTGTTGGCATTGGCCTGGCATCA -------------------------------------------GAATTGGATTAGCATCT ------------------------------------------------------------


TTTTCAAATTCATCATTTGCAGCATCAGTTACAGATAATTCAATTCAAAATTCAATTCCG TTTTCTAATTCTWSNTTYGCNGC------------------------------------------------------------------------------------------------


ATTGTTAATCAACAAGTTGCAGCAGCAAAAGAAATGAAACCGTTTCCGCAACAAGTTAAT -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


TATGCAGGCGTTATTAAACCGAATCATGTTACACAAGAATCACTGAATGCATCAGTTAGA -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


TCATATTATGATAATTGGAAAAAAAAATATCTGAAAAATGATCTGTCATCACTGCCGGGC -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


GGCTATTATGTTAAAGGCGAAATTACAGGCGATGCAGATGGCTTTAAACCGCTGGGCACA -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

EMBOSS_001

TCAGAAGGCCAAGGCTATGGCATGATTATTACAGTTCTGATGGCAGGCTATGATTCAAAT

100

Forward Reverse

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


GCACAAAAAATTTATGATGGCCTGTTTAAAACAGCAAGAACATTTAAATCATCACAAAAT -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


CCGAATCTGATGGGCTGGGTTGTTGCAGATTCAAAAAAAGCACAAGGCCATTTTGATTCA -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


GCAACAGATGGCGATCTGGATATTGCATATTCACTGCTGCTGGCACATAAACAATGGGGC -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


TCAAATGGCACAGTTAATTATCTGAAAGAAGCACAAGATATGATTACAAAAGGCATTAAA -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


GCATCAAATGTTACAAATAATAATAGACTGAATCTGGGCGATTGGGATTCAAAATCATCA -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


CTGGATACAAGACCGTCAGATTGGATGATGTCACATCTGAGAGCATTTTATGAATTTACA -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


GGCGATAAAACATGGCTGACAGTTATTAATAATCTGTATGATGTTTATACACAATTTTCA -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


AATAAATATTCACCGAATACAGGCCTGATTTCAGATTTTGTTGTTAAAAATCCGCCGCAA -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


CCGGCACCGAAAGATTTTCTGGATGAATCAGAATATACAAATGCATATTATTATAATGCA -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


TCAAGAGTTCCGCTGAGAATTGTTATGGATTATGCAATGTATGGCGAAAAAAGATCAAAA -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


GTTATTTCAGATAAAGTTTCATCATGGATTCAAAATAAAACAAATGGCAATCCGTCAAAA -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


ATTGTTGATGGCTATCAACTGAATGGCTCAAATATTGGCTCATATCCGACAGCAGTTTTT -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


GTTTCACCGTTTATTGCAGCATCAATTACATCATCAAATAATCAAAAATGGGTTAATTCA -----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

EMBOSS_001

GGCTGGGATTGGATGAAAAATAAAAGAGAATCATATTTTTCAGATTCATATAATCTGCTG

101

Forward Reverse

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------


ACAATGCTGTTTATTACAGGCAATTGGTGGAAACCGGCACCGGATGATAAAAAAACACAA -----------------------------------------------------------------------------------TGGTGGAARCCAGTTCCAGATGATAAGAAAACTCA-


AATCAAATTAATGATGCAATTTATGAAGGCTATGATAAT -----------------------------------------------------------------------------

102

Lampiran 3. Datasheet Oligonukleotida Primer Gen Endoglukanase Bakteri B.subtilis dan B.thuringiensis SynthID

Oligo Name

1303796 F_BS

1303797 R_BS

1303798 F_BT

1303799 R_BT

Sequence

5’-TCA GCA GCA GGC ACA AAA AC-3’ 5’-TTC GGT TCT GTG CCC CAA AT-3’ 5'-GAA TTG GAT TAG CAT CTT TTT CTA ATT CTW SNT TYG CNG C-3' 5'-TGA GTT TTC TTA TCA TCT GGA ACT GGY TTC CAC CA-3'

Len

Scale

Tm (0C)

GC (%)

µg

pmol

20

50 nmole

65.2

50.0

169. 5

27720

20

50 nmole

66.2

50.0

199. 8

32981

40

50 nmole

65.5

36.3

343. 7

28080

35

50 nmole

67.6

41.4

323. 4

30282

To make 100 µM

add 277 µl of dH2O add 330 µl of dH2O add 281 µl of dH2O

add 303 µl of dH2O

103

Lampiran 4. Alat-alat Peremajaan Biakan dan Kultur Padat

Jarum Ose

Analytical Balance

Autoclave

Bunsen

Inkubator

Cawan Petri

Hot Plate

Spatula

Labu Erlenmeyer 250 mL

Magnetic Stirrer

Rak Tabung Reaksi

Gelas Ukur 25 mL

Tabung Reaksi

Corong

104

Lampiran 5. Alat-alat Uji Aktivitas Selulolitik

Autoclave

Analytical Balance

Jarum Ose

Bunsen

Inkubator

Cawan Petri

Hot Plate

Spatula

Labu Erlenmeyer 250 mL

Magnetic Stirrer

Jangka Sorong

Gelas Ukur 25 mL

105

Lampiran 6. Alat-alat Kultur Cair dan Isolasi DNA Genom

Rak Microtube

Microtube Eppendorf 1,5 mL

Sentrifuge

Deep Freezer

Waterbath

Vortex

Mikropipet

Mikrotips

Timer

Tabung Reaksi

Incubator Shaker

Rak Tabung Reaksi

Bunsen

Jarum Ose

Beaker Glass 250 mL

106

Lampiran 7. Alat-alat Amplifikasi

Rak Microtube

Microsentrifuge

Deep Freezer

Microtube PCR

Mikropipet

Mikrotips Putih

Thermal Cycler

107

Lampiran 8. Alat-alat Elektroforesis

Bejana Elektroforesis yang dilengkapi dengan power supply dan tangki penutup

Analytical balance

Ultraviolet Transilluminator

Hot Plate dan Magnetic Stirrer

Waterpass

Rak Microtube

Mikrotipst Putih

Mikropipet

Gelas Ukur 100 mL

Sendok Pipih

Botol schott 100 mL

Digital Camera

108

Lampiran 9. Bahan-bahan Peremajaan Biakan dan Kultur Padat

Nutrient Agar

Air Laut Steril

Isolat Bakteri Bacillus subtilis

Parafilm

Alkohol 70%

Isolat Bakteri Bacillus thuringiensis

Kain Kasa

Plastik

Alumunium Foil

Kapas

Kertas Label

109

Lampiran 10. Bahan-bahan Uji Aktivitas Selulolitik

Nutrient Agar

CMC (Carboxy Methyl Celullose)

Deionized water

NaCl 1M

Kain Kasa

Plastik

Alumunium Foil

Red congo 0,1%

Kertas Label

Kapas

110

Lampiran 11. Bahan-bahan Isolasi DNA Genom dan Kultur Cair

Nuclei Lysis Solution

0,5M EDTA pH 8,0

Isopropanol

Ethanol 70%

RNase Solution

Nutrient Broth

Protein Precipitation Solution

DNA Rehydration Solution

Air Laut Steril

111

Lampiran 12. Bahan-bahan Amplifikasi PCR Bakteri Bacillus subtilis

a

b

c

Ket : (a) 2x KAPA2G Fast Ready Mix

(b) Nuclease Free Water (NFW) (c) Primer F_BS dan Primer R_BS

PCR Bakteri Bacillus thuringiensis

a Ket : (a) 2x KAPA2G Fast Ready Mix

(b) Nuclease Free Water (NFW) (c) Primer F_BT dan Primer R_BT

b

c

112

Lampiran 13. Bahan-bahan Elektroforesis

Bubuk Agarose

TBE Buffer 10X

NFW

Ethidium Bromide

Loading Dye

DNA Ladder 1 kb

113

Lampiran 14. Proses Peremajaan Biakan dan Kultur Padat

Penimbangan NA Pada Analytical Balance

Kultur Padat Disimpan Pada Inkubator

Pencampuran NA Pada Erlenmeyer yang Berisi Air Laut Steril

Proses Streak Isolat Bakteri Pada Cawan Petri

Medium NA + Air Laut Steril Dididihkan Pada Hot Plate

Proses Penuangan Medium NA + Air Laut Steril Pada Cawan Petri

114

Lampiran 15. Hasil Peremajaan Biakan dan Kultur Padat a. Agar Miring

Isolat Bakteri Bacillus subtillis

Isolat Bakteri Bacillus thuringiensis

b. Agar Cawan

Hasil Streak I Bacillus subtillis

Hasil Streak I Bacillus thuringiensis

Hasil Streak II Bacillus subtillis

Hasil Streak III Bacillus subtillis

Hasil Streak II Bacillus thuringiensis

Hasil Streak III Bacillus thuringiensis

115

Lampiran 16. Hasil Pewarnaan Gram Bakteri

a. Bakteri B.subtilis

b. Bakteri B.thuringiensis

116

Lampiran 17. Proses Uji Aktivitas Selulolitik

Penimbangan NA dan CMC Pada Analytical Balance

Pencampuran NA dan CMC Pada Erlenmeyer yang telah terisi Air Laut Steril

Proses Pendidihan Media NA + CMC + Air Laut Steril

Congo Red Dimasukkan Ke Dalam Gelas Ukur

Proses Inkubasi Media NA + CMC + Air Laut Steril

Proses Streak Isolat Bakteri Pada Media NA + CMC + Air Laut Steril

Pencampuran Congo Red dan Aquades

Congo Red + Aquades Pada Dimasukkan Ke Dalam Botol Film

Congo Red + Aquades Direndam Pada Medium CMC

Pengukuran Indeks Selulolitik

NaCl Hasil Perendaman dibuang

NaCl 1 M Dimasukkan Ke Dalam Medium CMC

117

Lampiran 18. Bagan Alir Kultur Cair dan Isolasi DNA Genom a. Kultur Cair

Proses Pendidihan Media NB + Air Laut Steril

Penimbangan NB Pada Analytical Balance

Pencampuran NB dan Air Laut Steril

Pengambilan Koloni Tunggal Isolat Bakteri

Penuangan Medium NB + Air Laut Steril Pada Tabung Reaksi

Sterilisasi Medium NB + Air Laut Steril Balance

Isolat Bakteri Dihomogenkan Pada Medium NB + Air Laut Steril

Sentrifugasi

Inkubasi Pada Incubator Shaker

118

b. Isolasi DNA Genom Hasil kultur cair disentrifugasi pada 13.000 rpm selama 2 menit, buang supernatan

Tambahkan Lysozyme 60µl dan lakukan pipet mix

Tambah 100µl Protein Precipitation Solution, vortex 20 detik. Inkubasi on ice selama 5 menit Sentrifugasi 13.000 rpm selama 3 menit

Inkubasi sampel pada suhu 37OC selama 45 menit

Transfer supernatan ke tube baru Tambah 300µl Isopropanol, sentrifugasi 13.000 rpm selama 2 menit

Sentrifugasi selama 2 menit pada 13.000 rpm

Buang supernatan, tambahkan 300 µl Ethanol 70%, bolak-balik tube

Sentrifugasi 13.000 rpm selama 2 menit

Tambah 300µl Nuclei Lysis Solution hingga tersuspensi lalu vortex

Buang supernatan dengan hati-hati, keringkan diatas tissue selama 15 menit Tambah 50µl DNA Rehydration Solution untuk mencuci pellet

Inkubasi sampel pada suhu 80OC selama 5 menit, tabung dibolak-balik 2-5 kali, lalu dinginkan pada suhu ruang Tambah 1,5µl RNase Solution, tabung dibolak-balik hingga tercampur. Inkubasi sampel pada suhu 37OC selama 30 menit, dinginkan pada suhu ruang

Inkubasi pada suhu 65OC selama 60 menit

Simpan pellet pada suhu 4oC selama satu malam, kemudian DNA hasil isolasi siap digunakan untuk tahap berikutnya

119

Lampiran 19. Penapisan Gen Endoglukanase

Persiapan PCR dan PCR Master Mix

Penapisan Gen Endoglukanase

Memasukan Template DNA

Pembuatan Mix PCR

Distribusi Mix PCR

120

Lampiran 20. Bagan Alir Elektroforesis a. Pembuatan Gel Agarose

Penimbangan 0,4 gr agarose

Pemasukan agarose ke dalam botol schott

Pendinginan agar sampai hangat pada suhu ruang

Pemanasan agar hingga larut dengan Hot Plate

Penuangan agar ke dalam cetakan yang telah dipasangi sisir

Agar dibiarkan hingga mengeras

Pengukuran 50 mL TBE 50X

Pencampuran 50 mL TBE 50X dan agarose didalam botol schott

Setelah gel mengeras, sisir dicabut dari gel, dan meletakkan gel sesuai dengan prosedur penggunaan bak elektroforesis

Perendaman gel dengan TBE 50X

121

b. Loading Hasil Amplifikasi Penempatan dan pengurutan hasil amplifikasi pada cooler block dimulai dari marker dan sampel

Pengambilan dan pemasukkan 4 µl dari masing-masing tube produk hasil PCR ke dalam setiap sumur

Penutupan tangki dan kabel dihubungkan pada power supply

Pengambilan dan pemasukkan 2 µl marker ke dalam sumur yang lainnya

Pengaturan tegangan listrik antara 75 volt

Elektroforesis dijalankan sekitar 60 menit sampai migrasi DNA mencapai 3 /4 bagian sel

c. Dokumentasi Gel dengan UV trans-illuminator Setelah proses running selesai, power supply dimatikan dan dicabut kabelnya

Tutup tangki dibuka, dan pengangkatan cetakan gel

Pemasukkan gel kedalam UV trans-illuminator

Pendokumentasian gel

Pengamatan gel diatas UV transilluminator

122

Lampiran 21. Analisis Hasil Sekuensing Gen Endoglukanase 1. Buka program BioEdit, kemudian buka file/ data yang akan diolah menggunakan perangkat BioEdit

2. Sorot (reverse) dilanjutkan dengan klik sekuen → Nucleic acid → Reverse complement

123

3. Sorot (forward dan reverse) → Sequence → Pairwise Alignment → Align two sequence (allow end to slide)

4. Tampilan setelah dilakukan Pairwise Alignment

124

5. Sorot (forward dan reverse) → Alignment → Create concensus Sequence

6. Tampilan setelah dilakukan consensus

125

7. Klik basa pertama pada concensus → Edit → Select to end

8. Tampilan setelah consensus dilakukan select to end

126

9. Consensus di copy ke dalam notepad

10. Buka website http//ncbi.nlm.nih.gov → pilih BLAST → Nucleotide blast → blastx → Masukan urutan sekuen → Pada database pilih non-redundant protein sequences (nr) → Klik BLAST

127

Lampiran 22. Hasil Sekuensing Sampel B.1.2 Kromatogram Gen Endoglukanase Forward

Kromatogram Gen Endoglukanase Reverse

128

Lampiran 23. Hasil BLAST Sampel B.1.2

129

Lampiran 24. Hasil Sekuensing Sampel C2 Kromatogram Gen Endoglukanase Forward

Kromatogram Gen Endoglukanase Reverse

130

Lampiran 25. Hasil BLAST Sampel C2

Lampiran 1. Tahap Melakukan Desain Primer3 Bakteri B.subtilis

Recommend Documents