Lampiran 1. Proses pembuatan sediaan. Organ ginjal, hati, dan pankreas. Fiksasi dengan Bouin (24 jam) Dehidrasi dengan alkohol bertingkat

97

Lampiran 1. Proses pembuatan sediaan Organ ginjal, hati, dan pankreas ↓ Fiksasi dengan Bouin (24 jam) ↓ Dehidrasi dengan alkohol bertingkat ↓ Clearing dengan xylol ↓ Embedding dalam parafin

98

Lampiran 2. Pereaksi dan prosedur analisis MDA 1. TCA 15 % (w/v) Sebanyak 25 g TCA dilarutkan dengan air bebas ion sampai volume 100 ml 2. TBA (Thiobarbituric acis) 0.37% (x/v) dalam 0.25 N HCL (pH 2-3) Sebanyak 0.7 g TBA dilarutkan dengan HCl 0.25 N sampai volume 100 ml 3. Larutan Standar 1,2,3,3 tetraetoksipropana Dari larutan tetraetoksipropan 20 nmo/ml (tersedia) dibuat sederetan larutan standar, yaitu 0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 3.2, dan 6.4 nmol/ml. Prosedur analisis MDA 1 .Ekstraksi Sampel Sampel dari frezer dibiarkan mencair kemudian disentrius pada 3000 rpm selama 10 menit a. Diambil 1 ml supernatan b. Ditambahkan 1 ml larutan TCA 15% c. Ditambahkan 1 ml larutan TBA 0.37% d. Divortek dan dipanaskan selama 15 menit pada air mendidih e. Setelah dingin dilakukan sentrifus pada 1.000 rpm selama 10 menit f. Absorbans dari supernatan dibaca pada panjang gelombang 535 nm 2. Pengukuran Standar Membuat sederet larutan standar yaitu 0, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1.6, 3.2, 6.4, dan 12.8 nmol/ml dari larutan standar 0.02 nmol/µl= 20 nmol/ml

No. Tab

Standar (µl) Aquades (µl) TCA 15% (ml)

1 2 0 0.1 nmol/ml 0 15 3000 2985 1 1

30 2970 1

60 120 2940 2880 1 1

240 480 960 2760 2520 2040 1 1 1

TBA 0,37% (ml)

1

1

1

1

1

3

4 0.2

5 0.4

6 0.8

1

7 1.6

1

8 3.2

6.4

1

Dipanaskan selama 15 menit pada air mendidih, setelah dingin disentrifus pada 1.000 rpm selama 10 menit. Absorban dibaca dari supernatan pada panjang gelombang 535 nm.

99

Lampiran 3. Kurva Standar MDA

Konsentrasi Absorbansi 515 nm (pmol/50µL) 500 0.037 1000 0.053 2000 0.101 2500 0.133 3000 0.138 4000 0.194 5000 0.255

0,3

Absorban

0,25

y = 0,034x - 0,008 R² = 0,960

0,2 0,15 0,1 0,05 0 500 1000 2000 2500 3000 4000 5000 Konsentrasi

100

Lampiran 4. Prosedur dan pereaksi untuk analisis SOD Bahan analisis untuk aktivitas SOD: - Buffer potassium fosfat (50 mM, pH 7.8) mengandung 0.1 mM EDTA - Larutan 0.001 M sodium hidroksida - Larutan xantin (Sigma, USA) - Larutan xantin oksidase (Sigma, USA) dengan aktivitas 0.2 U/ml - Larutan sitokrom c (Sigma, USA) - SOD murni (Sigma, USA) - Aquades dingin - Larutan khloroform/etanol 37.5/62.5 Persiapan pereaksi: 1. Buffer fosfat 50 nm mengandung 0.1 mM EDTA, pH 7.8 (blanko) a. Dilarukan 0.18 g Na2 HPO4 .12H2O ke dalam aquades hingga 100 ml b. Dilarukan 0.8709 g K 2HPO4 .2H2O ke dalam aquades hingga 100 ml c. Dilarutkan 0.0372 g EDTA ke dalam aquades hingga 100 ml Larutan a dimasukkan dalam gelas beker dan larutan b dituang secara perlahan-lahan serta diaduk sambil ditambahkan larutan EDTA (larutan c) sampai mencapai pH 7.8 2. Larutan natrium hidrokisda (NaOH) 0.01 M: sebanyak 0.04 g NaOH dilarutkan ke dalam 100 aquades 3. Larutan sitokrom c : bubuk sitokrom c (0.37 mg) dilarutkan dalam 100 ml buffer fosfat 50 mM pH 7.8. Pembuatan buffer seperti di atas, namun tanpa mengandung EDTA 4. Larutan xantin (Larutan A) : sebanyak 0.76 mg xantin dilarutkan ke dalam 10 ml 0.001 M NaOH. Selanjutnya ini disimpan pada suhu 4oC dan tahan selama 3 hari serta digunakan untuk analisis pada suhu 25o C. 5. Larutan xantin oksidase (larutan B): larutan xantin oksidase dalam buffer fosfat ditambah EDTA pH 7.8 dengan aktivitas 0.2 U/ml, disimpan pada suhu 4o C. 6. Larutan SOD baku untuk kurva standar: dibuat larutan SOD dengan mengencerkan SOD murni komersial dalam aquades dengan konsentrasi 0, 50, 100, 200, 250, 300, dan 500 units/ml.

101

Lampiran 5. Kurva Standar SOD

Konsentrasi U/ml protein 0 50 100 200 250 500

Absorbansi 550 nm 0.027 0.023 0.019 0.016 0.009 0.004

0,025

y = -0.004x + 0.028 R² = 0.981

Absorbansi

0,02 0,015 0,01 0,005 0 50

100

200 Konsentrasi

250

500

102

Lampiran 6. Pereaksi dan prosedur analisis katalase 1.K2 Cr2O7 5% (b/v) a. 5 potassium bikromat dilarutkan dalam air bebas ion dalam labu ukur 100 ml b. Asam asetat galsial Ditambahkan larutan a dan b dengan perbandingan 1 : 3 dibuat sebanyak 200 ml yaitu 50 ml K2 Cr2O7 5% ditambahkan dengan asam asetat glacial sebanyak 150 ml 2. Buffer fosfat 0,05 M pH 7,0 a. Sebanyak 1.70 g KH2 PO4 (BM 136.09) dilarutkan dengan air bebas ion sampai volume 250 ml b. Sebanyak 1.775 g Na2 HPO 4 dilarutkan dengan air bebas ion sampai volume 250 ml c. Ke dalam larutan b ditambahkan sedikit demi sedikit larutan a, cek pH 7.0

3. Larutan standar H2 O2 Larutan standar H2 O 2 0.4 M dibuat dengan melarutkan H2 O2 30% (BM 34.01), masa jenis 1.11 kg/0.1 setara dengan 9.8 M H2 O 2 sebanyak 4.1 ml dalam labu 100 ml dengan air bebas ion (larutan induk). Dari larutan induk ini dibuat derek larutan standar H2O 2 sebagai berikut : 0,0.04, 0.08, 0.12, 0.16, 0.2 M Prosedur Analisis katalase 1. Ekstrak sampel 3.5 ml homogen hati ditambahkan dengan 0.5 ml Triton X-100 0.1 % sentrifuse pada 4000 rpm selama 5 menit, 2-8°C. Ambil supernatan untuk ditentukan aktivitasnya. 2. Aktivitas katalase a. 1 ml sampel ditambahkan 5 ml buffer fosfat 0.05 M pH 7.0 divortex b. Ditambahkan 4 ml H2 O 2 0.2 M, inkubasi selama 30 menit c. Diambil 1 ml kemudian ditambahkan 2 ml larutan warna, dipanaskan pada air mendidih selama 10 menit d. Setelah dingin dan serapannya dibaca pada panjang gelombang 570 nm e. Absorban yang terbaca setara dengan konsentrasi H2 O 2 tersisa. f. Konsentrasi H2O 2 yang dipakai oleh katalase = 0.2 M-konsentrasi terbaca H2 O 2 3. Kurva Standar Larutan standar H2 O 2 dibuat dari larutan Induk H2 O 2 0.4 M dengan cara

103

Konsentrasi H2 O 2 30 %= 9.8 V1.N1 = V2.N2 V1.9,8 M = 0.1 l x 0.4 M V1 = 4.1 ml Vol = 100 ml Larutan H2 O2 30% dipipet sebanyak 4.1 ml kemudian diencerkan dengan aquades sampai volume 100 ml disebut larutan induk 0.4 M. dari larutan induk ini dibuat sederet larutan standar H2 O2 dengan konsentrasi 0, 0.4, 0.08, 0.12, 0.16, 0.2, 0.4 M yaitu dengan mengikuti tabel di bawah ini : No. Gelas ukur 10 ml H2 O2 0.4 M (ml) H2 O (ml)

1 2 0 1 10 9

3 2 8

4 3 7

5 6 4 5 6 5

7 10 0

Masing-masing larutan standar dipipet sebanyak 1 ml dimasukkan ke dalam tabung reaksi bersih, kemudian ditambahkan 2 ml pewarna K 2 Cr2 O7 . Larutan tersebut dipanaskan pada air mendidih selama 10 menit dan setelah dingin serapan dibaca pada panjang gelombang 570 nm.

104

Lampiran 7. Kurva Standar Katalase

Konsentrasi H2 O 2

Absorbansi 570 nm

0.00 0.04 0.08 0.12 0.16 0.20 0.40

0.00 0.042 0.084 0.126 0.167 0.201 0.387

0,45 0,4 0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0

Absorbansi

y = 0,060x - 0,043 R² = 0,868

0,042

0,084

0,126 0,167 Konsentrasi

0,201

0,387

105

Lampiran 8. Pereaksi dan prosedur analissis aktivitas Glutation peroksidase 1. Buffer fosfat 0.1 M mengandung 0.001 M NaEDTA a. Ditimbang Na2 HPO4 (BM 138) sebanyak 3.45 g kemudian dilarutkan sampai volume 250 ml dengan air bebas ion b. Ditimbang sebanyak 3.55 g Na2 HPO 4 (BM 142), kemudian dilarutkan sampai volume 250 ml dengan air bebas ion c. Ditimbang 37.2 mg NaEDTA (BM 372), kemudian dilarutkan sampai volume 100 ml dengan air bebas ion d. Larutan a dan b dicampur, larutan a ditambah sedikit demi sedikit sambil dicek pH 7.0 2. Larutan NADPH 1.5mM dalam NaHCO3 0.1% a. NaHCO 3 0.1% dibuat dengan cara melarutkan 0.1g NaHCO3 dengan 100 ml air bebas ion b. Sebanyak 12.5 mg NADPH (BM 833.4) dilarutkan sampai volume 10 ml dengan NaHCO3 0.1% 3. Larutan Glutation Reduktase 2.4 unit/mg protein Dibuat dengan jalan melarutkan glutation reduktase 198 unit/mg protein sampai 10 ml dengan buffer fosfat pH 7.0 (larutan induk). Dari larutan induk ini dilakukan pengenceran sehingga didapatkan larutan glutation reduktase 2.4 unit/ mg protein dengan menggunakan buffer fosfat 4. Larutan glutation tereduksi (GSH) 10 mM, sebanyak 25 mg GSH (BM 250.3) dilarutkan sampai 10 ml dengan menggunakan air bebas ion. 5. Larutan H2 O 2 1.5 mM dibuat dengan jalan mengencerkan H2 O2 30% sebanyak 15.306 µl sampai 100 ml dengan air bebas. Prosedur Analisis GPx 1. Sampel diekstraksi, 100 µl homogenat hati ditambahkan 200 l garam fisiologi 0.9% sentrifus pada 3000 rpm selama 5 menit 2-8°C, ambil supernatan 2. Pengukuran aktivitas GSH-Px Buffer fosfat 0.1 M pH 7 (µl) Sampel (µl) GSH reduktase 2.4 u/ml (µl) GSH 10 mM (µl) Inkubasi selama 10 menit pada suhu 37°C NADPH 1.5 mM (µl) Inkubasi selama 3 menit pada suhu 37°C H2O2 1.5 mM (µl)

A 1000 200 200 200

B (kontrol) 1000 200 200

200

200

200

200

Serapan dibaca di antara waktu 1-2 menit setelah dimasukkan larutan ke dalam kuvet silica (tidak boleh kurang atau lebih), panjang gelombang 340 nm

106

Lampiran 9. Prosedur pewarnaan Cu-ZnSOD secara Immunohistokimia

Deparafinisasi-Rehidrasi air mengalir (10-15 menit) ↓ Deionized water (15 menit) ↓ H2 O2 dalam metanol (15 menit) ↓ air mengalir (15 menit) ↓ Deionized water 2x (@ 10 menit) ↓ PBS 2x (@ 10 menit) ↓ Normal serum 50-60 µL ↓ Inkubator 37 o C (30-60o C) ↓ PBS (3x5 menit) ↓ Anti SOD 37o C (refrigerator) (2 malam) ↓ PBS (3x10 menit) ↓ Dako envision peroksidase system (antibodi II) 50-60µL inkubator 37 o C (kondisi gelap 30-60 menit) ↓ PBS (3x 5 menit) ↓ Diamino Benzidine (10-20 menit) 5 menit sebelum larutan DAB dipakai ditambahkan 50µL H2O 2 dicuci dengan aquades ↓ conterstain dengan hematoxylin ↓ Deionized water ↓ Dehidrasi, clearing, mounting

107

Lampiran 10. Proses pewarnaan hemotoxylin eosin (HE)

Deparafinisasi (5 menit) ↓ Rehidrasi (5 menit) ↓ Air mengalir (10-15 menit) ↓ Aquades (5-10 menit) ↓ Hemotoxylin (5-7 menit) ↓ Air mengalir (30-60 menit) ↓ Aquades (5 menit) ↓ Eosin (30-60 menit) ↓ Aquades (5-10 menit) ↓ Dehidrasi (1-3 menit) ↓ Clearing (5 menit) ↓ Mounting

108

Lampiran 11. Pemeriksaan lesi aterosklerosis

Deparafinisasi (55-60°C I jam) ↓ Xilol III-I ↓ Alkohol Absolut III-I ↓ Alkohol 100%-95%-90%-80%-70% ↓ Air kran ↓ Ferric chlorida 20% (2-3x celup) ↓ Ferric chlorida 2 % (4x celup) ↓ Bilas segera dengan aquades ↓ Tiosulfat (5%) 5 menit ↓ Air kran (15 menit) ↓ Pewarnaan Van Gieson 3 menit ↓ Alcohol 70, 80, 90, 95, 100% (1x celup) ↓ Xilol I-III ↓ Direkatkan pada gelas obyek

109

Lampiran 12. Analisis ragam pengaruh jenis pelarut aquades, metanol, dan etanol pada kadar total fenol daun cengkeh.

Sumber keragaman Perlakuan Galat Total koreksi

Derajat bebas (db) 2 6 8

Kuadrat tengah (KT) 785.236 16.394

Fhitung Signifika n 47.89 0.006 8

α = 0.05

Perlakuan Aquades

Jumlah kuadrat (JK) 1570.472 98.363 1668.834

N 3 3

1 32.42000

2 56.58333

Etanol 3

63.14333

Metanol 1.000 Sig.

.094

110

Lampiran 13. Aktivitas antioksidan ekstrak aquades, metanol, dan etanol jika dibanding dengan α -tokoferol.

Perlakuan Kontrol Jumlah Rerata Aquades jumlah rerata Metanol Jumlah Rerata Etanol Jumlah Rerata αTokoferol Jumlah Rerata

Nilai absorbansi jam ke24 48 72 0.198 0.222 0.287 0.2 0.225 0.277 0.398 0.447 0.564 0.199 0.2235 0.282

0 0.059 0.06 0.119 0.0595

6 0.13 0.125 0.255 0.1275

96 0.411 0.399 0.81 0.405

130 0.567 0.56 1.127 0.5635

0.048 0.057 0.105 0.0525

0.12 0.117 0.237 0.1185

0.168 0.197 0.365 0.1825

0.22 0.213 0.433 0.2165

0.257 0.249 0.506 0.253

0.31 0.305 0.615 0.3075

0.321 0.3 0.621 0.3105

0.045 0.047 0.092 0.046

0.1 0.088 0.188 0.094

0.115 0.125 0.24 0.12

0.139 0.145 0.284 0.142

0.169 0.161 0.33 0.165

0.187 0.188 0.375 0.1875

0.199 0.206 0.405 0.2025

0.044 0.035 0.079 0.0395

0.097 0.089 0.186 0.093

0.107 0.1 0.207 0.1035

0.149 0.161 0.31 0.155

0.191 0.199 0.39 0.195

0.261 0.271 0.532 0.266

0.273 0.282 0.555 0.2775

0.031

0.068

0.081

0.117

0.15

0.235

0.24

0.025 0.056 0.028

0.072 0.14 0.07

0.067 0.148 0.074

0.123 0.24 0.12

0.149 0.299 0.1495

0.246 0.481 0.2405

0.251 0.491 0.2455

111

Lampiran 14. Regresi linear, periode induksi dan faktor protektif. Perlakuan Kontrol

Regresi Linear Periode Induksi Faktor Protektif Y=0.077X-0.043 4.455 Y=0.075X-0.039 4.52 Y=0.076X-0.041 4.49 Aquades Y=0.046X+0.022 6.04 1.36 Y=0.041X+0.040 6.34 1.40 Y=0.043X+0.031 6.26 1.39 Metanol Y=0.024X+0.037 10.96 2.46 Y=0.025X+0.035 10.60 2.35 Y=0.025X+0.036 10.56 2.35 Etanol Y=0.039X-0.003 7.62 1.71 Y=0.043X-0.009 7.19 1.59 Y=0.041X-0.003 7.39 1.65 8.75 1.96 α-Tokoferol Y=0.036X-0.015 Y=0.039X-0.025 8.33 1.84 Y=0.038X-0.020 8.42 2.00

112

Lampiran 15 Analisis ragam periode induksi ekstrak aquades, metanol, dan etanol Sumber keragaman Perlakuan Galat Total koreksi




Fhitung Signifika n 495.7 0.006 3

113

Lampiran 16. Uji beda Duncan periode induksi ekstrak aquades, metanol, etanol, dan α -tokoferol

Perlakuan

N

1

Kontrol Aquades Etanol Tokoferol Metanol Sig.

3 3 3 3 3

4.487

2

α = 0.05 3

4

5

6.213 7.397 8.501 1.000

1.000

1.000

1.000

10.705 1.000

114

Lampiran 17. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kadar kolesterol total serum darah kelinci pada tahap awal Sumber keragaman Perlakuan Galat Total koreksi



Kuadrat tengah Fhitun (KT) g 27.058 4.06 6.657 5

α = 0.05 Perlakuan C10 P10 KK+ P20 C30 EDC+K P30 C20 Sig.

N

1

3 3 3 3 3 3 3 3 3

58.070 58.133 60.962 62.558

2

.065

60.962 62.558 63.264 64.480 65.334 65.375 65.742 .060

Signifika n 0.006

115

Lampiran 18. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kadar kolesterol total serum darah kelinci pada tahap akhir Sumber keragaman

Derajat Jumlah kuadrat bebas (db) (JK)

Perlakuan Galat Total koreksi

Perlakuan

8 18 26

173610.816 1189.655 174800.472

N

1

K-

3

62.70 3

P30 C30 EDC+K P20

3 3 3 3

C20

3

C10

3

P10 K+

3 3

Sig.

2


α = 0.05 3 4

Fhitung

Signifikan

328.351

0.00

5

6

160.649 168.957 174.787 192.92 1 205.61 3

205.61 3 215.49 0

215.490 222.555

1.000

.058

.072

.154

.301

387.21 9 1.000

116

Lampiran 19. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kadar kolesterol LDL serum darah kelinci pada tahap awal Sumber keragaman

Derajat bebas (db)

Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

132.171 2.332 134.503


α = 0.05 Perlakuan C30 P10 K+ KC10 EDC+K P20 C20 P30 Sig.

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

1 10.567 10.637 10.665 10.715 11.146 11.534

.093

2

15.804 16.762 16.831 .065


Fhitung

Signifikan

70.838

0.00

117

Lampiran 20. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kadar kolesterol LDL serum darah kelinci pada tahap akhir Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


8 18 26

135210.792 451.239 135662.031

Perlakuan

N

1

KP30 EDC+K C30 P20

3 3 3 3 3

8.031

C20

3

P10

3

C10

3

K+

3

Sig.

Jumlah kuadrat (JK)

2


α = 0.05 3

4

Fhitung

Signifikan

524.376

0.00

5

87.953 91.332 97.726 121.49 8 130.24 7 152.73 3 173.61 9 1.000

.091

.110

.865

306.067 1.000

118

Lampiran 21. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kadar kolesterol HDL serum darah kelinci pada tahap awal

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)

Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

41.907 71.279 113.186


α = 0.05 Perlakuan

N 1

P20 C20 C10 C30 KP30 EDC+K P10 K+ Sig.

3 3 3 3 3 3 3 3 3

41.017 41.148 41.758 41.961 42.560 42.593 43.183 44.292 44.844 .055


Fhitung Signifikan

1.323

0.00

119

Lampiran 22. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kadar kolesterol HDL serum darah kelinci pada tahap akhir

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

421.916 53.598 475.514


α =0.05 Perlakua n

N

K+ KP10 C10 P20 C20 EDC+K C30 P30 Sig.

3 3 3 3 3 3 3 3 3

1 39.359

2 43.508 44.171 44.817 46.690

1.000

.051

3

4

44.171 44.817 46.690 47.100

.071

50.374 50.732 52.763 .125

Fhitung

Signifikan

17.712

0.00

120

Lampiran 23. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kadar trigliserida serum darah kelinci pada tahap awal

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

392.718 1534.175 1926.893

α = 0.05 Perlakuan

N 1

P20 KK+ EDC+K C10 P30 P10 C20 C30 Sig.

3 3 3 3 3 3 3 3 3

45.337 45.893 47.917 48.652 50.200 50.790 52.700 54.559 57.677 .170


Fhitung

Signifika n

0.576

0.784

121

Lampiran 24. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kadar trigliserida serum darah kelinci pada tahap akhir Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


Perlakuan KP30 C30 P20 C20 EDC+K P10 C10 K+ Sig.

Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

29920.193 2659.872 32580.065

1 48.316

α = 0.05 2


3

110.100 112.762 118.667 119.663 120.407 129.007 133.104 1.000

.055

186.557 1.000

Fhitung Signifikan

25.310

0.000

122

Lampiran 25. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kadar MDA hati kelinci

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)

Jumlah kuadrat (JK)


8 18 26

33252154.229 25992.457

Fhitung

Signifikan

2558.600

0.000

33278146.686

Perlakuan

N

KC30

3 3

P30

3

EDC

3

P20

3

C20

3

P10

3

C10

3

K+

3

Sig.


1 936.133

2 1634.33 3 1679.50 0

α = 0.05 3 4

5

6

1679.50 0 1720.25 0 2523.50 0 2528.33 3 2637.00 0 2699.33 3

1.000

.211

.257

.891

.091

5724.75 0 1.000

123

Lampiran 26. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kadar MDA ginjal kelinci Sumber keragaman

Derajat bebas (db)

Jumlah kuadrat (JK)


8 18 26

19110686.855 9382.250

Perlakuan KP30 C30 EDC+K P20 P10 C20 C10 K+ Sig.


Signifikan

2546.123

0.000

19120069.105

α = 0.05

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

Fhitung

1 1260.750

2

3

4

5

6

1945.500 2305.500 2360.250 2725.500 2743.000 2750.500 2866.000 1.000

1.000

.099

.877

1.000

5272.000 1.000

124

Lampiran 27. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk aktivitas SOD hati kelinci

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


8 18 26

Jumlah kuadrat (JK)


519768.519 81145.833 600914.352

α = 0.05 Perlakuan K+ P10 C10 P20 C20 KP30 EDC+K C30 Sig.

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

1 55.83 111.67 135.58 307.08

2

145.17 357.33

.279

.503

3

357.33 566.25

.128

4

566.25 502.03 474.58 .167

Fhitung

Signifikan

14.412

0.000

125

Lampiran 28. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk aktivitas SOD ginjal kelinci

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


8 18 26



Fhitung

Signifikan

28.953

0.000

α = 0.05 Perlakuan K+ C10 P10 P20 C20 C30 KEDC+K P30 Sig.

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

1 50.254 89.326 94.924

2

3

4

94.924 189.833 189.831 530.417 368.501 390.833

.348

.054

.555

362.916 1.000

126

Lampiran 29. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk aktivitas katalase hati kelinci

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

0.208 0.042 0.250


α = 0.05 Perlakuan K+ C10 P10 P20 C20 KEDC+K C30 P30 Sig.

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

1 1.5602 1.6211 1.6510

.121

2

3

1.6211 1.6510 1.7643 1.7342 1.8000 1.8100 1.8140 1.8622 .159 .458

Fhitung

Signifikan

11.264

0.000

127

Lampiran 30. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk aktivitas katalase ginjal kelinci

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


perlakuan K+ P10 C10 P20 C20 EDC+K KC30 P30 Sig.

Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

0.221 0.007 0.228

2

α = 0.05 3

1.7015 1.711 1.804 1.8023 1.8123 1.823

1.804 1.8023 1.8123 1.823

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

1 1.601 1.7015 1.711 1.804 1.8023

.067


.067

.055

4

1.8123 1.823 1.891 .072

Fhitung

Signifikan

72.439

0.000

5

1.891 1.902 .644

128

Lampiran 31. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk aktivitas GPx hati kelinci

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

Perlakua n

N

1

K+ P10

3 3

82.26

C10 C20

3 3

P20

3

K-

3

EDC+K

3

P30 C30 Sig.

3 3

801681.822 3621.727 805303.549

2

3


4

α = 0.05 5

Fhitung

Signifikan

498.045

6

0.000

7

8

211.9 5 237.68 403.0 0 427.9 2 532.4 2 552.2 5

552.25 567.79

1.000

1.000

1.000

1.000

1.000

.104

.196

567.79 586.82 .118

129

Lampiran 32. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk aktivitas GPx ginjal kelinci

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

588868.607 42647.908 631516.515


α = 0.05 Perlakuan

N

K+ P10 C10 P20 C20 KP30 EDC+K C30 Sig.

3 3 3 3 3 3 3 3 3

1 76.634

2

3

4

204.984 211.683 360.665 376.741 411.57 424.124

1.000

.868

.109

533.494 540.193 .868

Fhitung

Signifikan

31.067

0.000

130

Lampiran 33. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kandungan Cu,Zn-SOD hati (negatif) Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


Perlakuan P30 C30 KC20 P20 EDC+K P10 C10 K+ Sig.

Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

22258.490 3013.973 25272.462

1 25.222 29.444 36.445 39.000 47.222 49.111

.058

α = 0.05 2


3

36.445 39.000 47.222 49.111 55.556 60.000 .062

127.333 1.000

Fhitung Signifikan

16.616

0.000

131

Lampiran 34. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kandungan Cu,Zn-SOD hati (positif 1) Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

663.419 5466.176 6129.595

α = 0.05 Perlakuan

N 1

K+ KP30 C30 C10 EDC+K C20 P20 P10 Sig.

3 3 3 3 3 3 3 3 3

17.000 17.666 22.111 23.778 24.000 26.333 27.444 29.555 33.111 .333


Fhitung Signifikan

0.273

0.000

132

Lampiran 35. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kandungan Cu,Zn-SOD hati (positif 2)

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


Perlakuan K+ P10 P20 KC10 C20 EDC+K C30 P30 Sig. .

Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

9517.150 3366.693 12883.843

1 2.000 11.666 16.445 17.111 22.444

.115

2 11.666 16.445 17.111 22.444 32.333

.112


α = 0.05 3

16.445 17.111 22.444 32.333 40.444

.067

Fhitung Signifikan

6.360

4

32.333 40.444 56.445 .054

0.000

5

40.444 56.445 59.111 .130

133

Lampiran 36. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kandungan Cu,Zn-SOD hati (positif 3) Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


Perlakuan K+ P10 KP20 C10 C20 EDC+K P30 C30 Sig.

Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

29868.627 5002.000 34870.627

1 0.000 28.528 29.333

.055

2 28.528 29.333 45.778

.246


α = 0.05 3

45.778 68.222 72.111

.082

Fhitung

Signifikan

13.436

0.000

4

68.222 72.111 91.111 95.444 .081

5

92.111 95.444 103.722 .323

134

Lampiran 37. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kandungan Cu,Zn-SOD ginjal (negatif)

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


Perlakuan C30 KEDC+K P30 P20 C20 P10 C10 K+ Sig.

Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

16916.699 3499.537 20416.236

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

1 18.222 33.222 33.333 36.500

.157

2 33.222 33.333 36.500 59.999 59.000

.055


α = 0.05 3

36.500 58.999 59.000 60.778

.064

Fhitung

Signifikan

10.876

0.000

4

5

58.999 59.000 60.778 69.444 .411

107.556 1.000

135

Lampiran 38. . Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kandungan Cu,Zn-SOD ginjal (positif 1)

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

6489.857 16159.953 22649.810

α = 0.05 Perlakuan

N 1

K+ C10 P10 KP20 P30 C20 C30 EDC+K Sig.

3 3 3 3 3 3 3 3 3

21.778 26.556 27.555 30.778 32.667 34.222 44.999 54.667 73.222 .083


Fhitung Signifikan

0.904

0.000

136

Lampiran 39. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kandungan Cu,Zn-SOD ginjal (positif 2)

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


8 18 26

Perlakuan

N

K+ C10 C20 P10 KP20 P30 C30 EDC+K Sig.

3 3 3 3 3 3 3 3 3

Jumlah kuadrat (JK)


6278.035 1835.724 8113.759

Fhitung Signifikan

7.695

α = 0.05 1 3.889

2 25.389 27.111 30.333 31.445 34.00

1.000

.359

3

34.00 49.667

.074

4

49.667 53.444 54.556 .582

0.000

137

Lampiran 40. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk kandungan Cu,Zn-SOD ginjal (positif 3)

Sumber keragaman

Derajat bebas (db)

Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

24058.125 5 348.932 29407.058



Fhitung Signifikan

10.120

α = 0.05 Perlakuan K+ P10 C10 KP20 C20 EDC+K C30 P30 Sig.

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

1 0.000 18.889 21.778 27.334

.090

2 18.889 21.778 27.334 35.889 45.445

.105

3

45.445 69.11

.110

4

69.11 78.778 96.667 .079

0.000

138

Lampiran 41. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk perlemakan hati Sumber keragaman

Derajat bebas Jumlah (db) kuadrat (JK) Perlakuan 8 8736.376 Galat 18 26.296 Total koreksi 26 8762.672


Fhitung

Signifikan

705.995

0.000

5

6

α = 0.05 Perlakuan

N

KP30 EDC+K C30 P20

3 3 3 3 3

P10 C20 C10 K+ Sig.

3 3 3 3

1 0.000 0.000

2

3

4

4.000 4.667 13.77 8 16.667 17.333 20.667 1.000

.531

1.000

.531

1.000

62.333 1.000

139

Lampiran 42 Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk jumlah corpus dengan endapan protein Sumber keragaman Perlakuan Galat Total koreksi

PERLAKUAN K(-) P30 EDC+K C30 P20 C20 C10 P10 K(+) Sig.

Derajat bebas (db)

Jumlah kuadrat (JK)

8 18 26

1705.500 8.500 1714.00

N 3 3 3 3 3 3 3 2 3

1 .0000 .0000

2


α= 0.05 3

Fhitung

Signifikan

426.375

4

0.000

5

1.3333 1.6667 8.6667 11.3333 12.3333 12.5000 1.000

.581

1.000

.079

25.6667 1.000

140

Lampiran 43. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk plak aterosklerosis Sumber keragaman Perlakuan Galat Total koreksi

PERLAKUAN K(-) P30 EDC+K C30 P20 P10 C20 C10 K(+) Sig.


Jumlah kuadrat Kuadrat (JK) tengah (KT) 0.647 0.81 0.007 0.00 0.653

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

1 .00000 .00000 .00000 .02400 .03000

α = .05 2

3

.06300 .06630 .08867 .099

.135

.51667 1.000

Fhitung

Signifikan

221.679

0.000

141

Lampiran 44. Hasil analisis ragam dan uji perbandingan berganda Duncan untuk indeks aterogenik Sumber keragaman

Derajat bebas (db)


Perlakua n K(-) P30 C30 EDC+K C20 P20 C10 P10 K(+) Sig.

8 18 26

Jumlah kuadrat Kuadrat (JK) tengah (KT) 127.961 15.995 1.661 0.092 129.622

N 3 3 3 3 3 3 3 3 3

1 .44033

2 2.05133 2.39300 2.53733

Fhitung

Signifikan

173.388

0.000

Subset for alpha = .05 3 4

2.53733 2.99300

5

6

2.99300 3.13300 3.71700 4.05533

1.000

.079

.083

.579

.189

8.83800 1.000

142

Lampiran 45. Histogram Bobot Kelinci

4 3,5 3 2,5 2 1,5 1

1 2 3

0,5 0

Keterangan : K(-) = kontrol negatif, (+) = kontrol positif (hiperkolesterolemia), P10, P20, P30 = Preventif (diberi ekstrak daun cengkeh 10, 20, dan 30 hari sebelum diberi kolesterol), C10, C20, C30 = kuratif (diberi ekstrak daun cengkeh 10, 20, dan 30 hari sesudah diberi kolesterol, EDC+Kolest.= diberi ekstrak daun cengkeh dan kolesterol secara bersamaan selama 50 hari. Pengukuran dilakukan 3 kali. (1) setelah masa adaptas i, (2) setelah diberi perlakuan, (3) sebelum dibedah

Lampiran 1. Proses pembuatan sediaan. Organ ginjal, hati, dan pankreas. Fiksasi dengan Bouin (24 jam) Dehidrasi dengan alkohol bertingkat

Recommend Documents