UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

EFEK PEMBERIAN AIR PERASAN JERUK NIPIS (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle) TERHADAP PEMBENTUKAN, PERTUMBUHAN, DAN PENGHANCURAN BIOFILM Staphylococcus aureus SECARA IN VITRO

SKRIPSI

FIRDA KHANIFAH 1111102000010

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA 2015

UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

EFEK PEMBERIAN AIR PERASAN JERUK NIPIS (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle) TERHADAP PEMBENTUKAN, PERTUMBUHAN, DAN PENGHANCURAN BIOFILM Staphylococcus aureus SECARA IN VITRO

SKRIPSI Diajukan Sebagai Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi

FIRDA KHANIFAH 1111102000010

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA 2015

ABSTRAK Nama NIM Judul

: Firda Khanifah : 1111102000010 : Efek Pemberian Air Perasan Jeruk Nipis Terhadap Pencegahan Pembentukan, Penghambatan Pertumbuhan, dan Penghancuran Biofilm Staphylococcus aureus Secara In Vitro

Pembentukan biofilm Staphylococcus aureus dapat menyebabkan masalah kesehatan yang serius karena dapat meningkatkan resistensi terhadap antibiotik, desinfektan, dan imunitas hospes. Air perasan jeruk nipis (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle) mengandung flavonoid, saponin, asam sitrat dan minyak atsiri, dimana telah diketahui bahwa beberapa flavonoid, saponin, asam sitrat dan minyak atsiri dari berbagai tanaman dilaporkan memiliki aktivitas sebagai antibiofilm. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek air perasan jeruk nipis terhadap pembentukan, pertumbuhan dan penghancuran biofilm Staphylococcus aureus dengan menggunakan metode Microtitter Plate Biofilm Assay (OD595nm). Perlakuan berupa penambahan ekstrak etanol daun kelor dengan konsentrasi 0,0625%, 0,1255, 0,25%, 0,55, 1%, 2%, 4%, dan 8%. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa air perasan jeruk nipis memiliki aktivitas pencegahan, penghambatan dan penghancuran biofilm pada semua konsentrasi. Hasil optimasi dengan menggunakan response surface analysis (RSA) menunjukkan bahwa pada konsentrasi 8% dengan waktu kontak selama30 menit dan suhu 27,270C adalah kondisi optimal dalam menghambat pertumbuhan biofilm Staphylococcus aureus. Kondisi terbaik dalam menghancurkan biofilm Staphylococcus aureus adalah pada konsentrasi 8% dengan waktu inkubasi selama 1 hari dan suhu 27,270C. Kata Kunci : Antibiofilm, (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle), Staphylococcus aureus, Response Surface Analysis (RSA).

v UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

ABSTRACT Name NIM Title

: Firda Khanifah : 1111102000010 : Effect Of Lime Juice Towards The Biofilm Prevention, Inhibition, And Destruction Of Staphylococcus aureus By In Vitro.

Biofilm formation of Staphylococcus aureus would be act as a caused serious health problems because it may increase resistance to antibiotics, disinfectant and hiospes immunity. Lime juice (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle) contain flavonoids, saponins, citric acids and essential oils, which have known that some flavonoids, saponins, citric acids and essential oils of various plants are reported to have antibiofilm activity. This study aims to investigate the effect of lime juice (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle) towards biofilm formation, inhibition and destruction of Staphylococcus aureus using Microtitter Plate Biofilm Assay (OD595nm) methods. The treatments is addition of lime juice (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle) with concentration of 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5%, 1%, 2%, 4% and 8%. The result of this study showed that all of the concentration of lime juice (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle) have prevention, inbition, and destruction activity. The result of optimization by using response surface analysis (RSA) showed that the 8% (v/v) for 30 minutes at 27,270C is the best contion to inhibit the biofilm formation of Staphylococcus aureus. The best condition to destruct the biofilm at 8% for 1 day incubation and 27,270C temperature. Keywords: antibiofilm, (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle), Staphylococcus aureus, Response Surface Analysis (RSA).

vi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

KATA PENGANTAR

Alhamdulillah segala puji dan syukur penulis panjatkankan kehadirat Allah SWT yang maha segala dengan kasih dan sayang-Nya, berkat limpahan rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan skripsi ini yang berjudul : “Efek Pemberian Air Perasan Jeruk Nipis (Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle)

terhadap

Pembentukan,

Pertumbuhan

dan

Penghancuran

Biofilm

Staphylococcus aureus Secara In Vitro. Penyusunan skripsi ini ditujukan sebagai salah satu syarat dalam rangka memperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Shalawat dan salam peulis panjatkan atas junjungan baginda kita, Nabi Muhammad SAW, nabi yang mengajarkan kita berbagai ilmu pengetahuan dan telah membawa kita dari alam kegelapan menuju kea lam terang benderang, beserta orangorang yang senantiasa istiqomah dijalannya. Dalam pembuatan skripsi ini, penulis mendapat banyak bimbingan, bantuan dan dukungan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penghargaan dan ucapan terimakasih yang tulus dan tak hingga penulis sampaikan kepada : 1. Bapak Arief Sumantri SKM., M. Kes., selaku Dekan Fakultas kedokteran dan Ilmu kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. 2. Bapak Yardi, M.Si., Ph.D., Apt., selaku ketua Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta dan selaku pembimbing akademik yang telah banyak memberikan masukan dan saran. 3. Ibu Eka Putri, M.Si., Apt., selaku pembimbing pertama dan Bapak Novik Nurhidayat, Ph.D., selaku pembimbing kedua, yang memberikan bantuan pengarahan, nasehat, dukungan , dan bimbingannya, sehingga penulis bisa

vii UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

menyelesaikan dan menyusun skripsi ini. Semoga segala bantuan dan bimbingan ibu dan bapak mendapat imbalan yang lebih baik. 4. Ibu Nelly Suryani, Ph.D., Apt., selaku sekretaris Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. 5. Seluruh staf pengajar Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan khususnya staf pengajar Program Studi Farmasi yang telah memberikan banyak ilmu kepada penulis. 6. Kedua orang tua yang tersayang dan tercinta, Ayahanda Dasukih dan Ibu Munyati, yang telah memberikan motivasi yang sangat besar serta doa dan kasih sayang yang melimpah kepada penulis. Semoga Allah selalu melimpahkan rahmat dan karunia-Nya kepada mereka. 7. Kakak tercinta Vijar Zulfikar dan adik tersayang Khusnul Khotimah serta saudara-saudara penulis, yang senantiasa memberikan doa dan dukungannya dalam pembuatan skripsi ini. 8. Rekan penelitian tersayang The BIOFILMERS (Rika, Fatah, Kiki, Kak Eka dan Kak Via), serta The BIOSENSORERS (Kak Anom dan Kak Afif) yang telah membantu, mengajarkan dan memberi masukannya kepada penulis. 9. Sahabat perkuliahan terhebat dan tersayang Wafa, Novila Tari, Khabbatun Ni’mah, Mazaya Fadhila, Yulia N. Raihana, Dini Fauzana, Dana Yusshiammanti, Fitri Rahmadhani, Dhenny Arman Siregar, serta adik kelasKu Noni dan Nita, yang selalu memberikan keceriaan dan motivasi untuk selalu semangat dalam menyelesaikan skripsi ini. 10. Sahabat putih abu-abu tersayang FECHRIEN ( Rini Okatviani, Kartika Pratiwi, Ahmad Ependi, Ahmad Faisal, Febriandanu S., dan Ichsan Kahfi), terimakasih atas keceriaan dan dorongannya selama ini kepada penulis. 11. Laboran terbaik Kak Lusi dan Pak Acun, yang telah banyak membantu penulis pada saat penelitian. 12. Rekan-rekan Farmasi 2011, khususnya kelas AC tercinta.

viii UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

13. Serta semua pihak yang telah membantu dari awal hingga akhir penyusunan skripsi ini yang tidak dapat disebutkan satu persatu. Dengan segala keterbatasan dan kemampuan yang ada penulis menyadari sepenuhnya bahwa masih banyak kekurangan dalam penyusunan skripsi ini, karena pada dasarnya manusia adalah letak ketidaksempurnaan, maka dari itu dengan segala keterbukaan penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat membangun. Semoga penelitian ini bermanfaat bagi pembangunan ilmu farmasi ke depannya.

Jakarta, 17 Juni 2015

Penulis

ix UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ILMIAH TUGAS AKHIR UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS

Sebagai sivitas akademik Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta saya yang bertanda tangan di bawah ini : Nama

: Firda Khanifah

NIM

: 1111102000010

Program Studi : Farmasi Fakultas

: Kedokteran dan Ilmu Kesehatan

Jenis Karya

: Skripsi

Demi perkembangan ilmu pengetahuan saya menyetujui skripsi/karya ilmiah saya, dengan judul : “Efek Pemberian Air Perasan Jeruk Nipis (Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle) terhadap Pembentukan, Pertumbuhan dan Penghancuran Biofilm Staphylococcus aureus Secara In Vitro” untuk dipublikasikan atau ditampilkan di internet atau media lain yaitu Digital Library Perpustakaan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta untuk kepentingan akademik sebatas sesuai dengan Undang-Undang Hak Cipta. Demikian pernyataan persetujuan publikasi karya ilmiah ini saya buat dengan sebenar-benarnya.

Dibuat di : Ciputat Pada tanggal

: 17 Juni 2015

Yang menyatakan,

Firda Khanifah

x UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL ........................................................................................................ i HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS .......................................................... ii HALAMAN PERSETUJUAN SKRIPSI ..................................................................... iii HALAMAN PENGESAHAN SKRIPSI ....................................................................... iv ABSTRAK ...................................................................................................................... v ABSTRACT ................................................................................................................... vi KATA PENGANTAR .................................................................................................. vii HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ILMIAH ............................................... x DAFTAR ISI ................................................................................................................... xi DAFTAR TABEL ........................................................................................................ xiii DAFTAR GAMBAR .................................................................................................... xiv DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................................. xv BAB I PENDAHULUAN ................................................................................................ 1 1.1 Latar Belakang ............................................................................................................ 1 1.2 Rumusan Masalah ....................................................................................................... 3 1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................................................ 3 1.4 Hipotesa ...................................................................................................................... 3 1.5 Manfaat Penelitian ...................................................................................................... 3 BAB II TINJAUAN PUSTAKA..................................................................................... 4 2.1 Tanaman Jeruk Nipis(Citrus aurantifolia) .................................................................. 4 2.1. 1 Taksonomi........................................................................................................ 4 2.1. 2 Morfologi ......................................................................................................... 4 2.1. 3 Kandungan Kimia ............................................................................................ 5 2.1. 4 Khasiat ............................................................................................................. 5 2.2 Infeksi .......................................................................................................................... 5 2.3 Staphylococcus aureus ................................................................................................ 6 2.3.1 Klasifikasi Staphylococcus aureus ................................................................... 6 2.3.2 Uraian Staphylococcus aureus .......................................................................... 6 2.3.3 Patogenisitas ..................................................................................................... 6 2.3.4 Faktor Virulensi Staphylococcus aureus .......................................................... 7 2.4 Biofilm ........................................................................................................................ 7 2.4.1 Definisi Biofilm ................................................................................................ 7 2.4.2 Pembentukan Biofilm ....................................................................................... 7 2.4.3 Resistensi Antibiotik Terhadap Biofilm ........................................................... 9 2.4.4 Pengendalian Biofilm...................................................................................... 10 BAB III METODE PENELITIAN .............................................................................. 12 3.1 Waktu dan Tempat Penelitian ................................................................................... 12 3.2 Alat dan Bahan .......................................................................................................... 12 3.2.1 Alat .................................................................................................................. 12 3.2.2 Bahan .............................................................................................................. 12 3.2.2.1 Tanaman ............................................................................................. 12 3.2.2.2 Bakteri Uji Bahan ............................................................................... 12 3.2.2.3 Bahan Lainnya Bahan ......................................................................... 12 xi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

3.3 Metode ...................................................................................................................... 13 3.3.1 Determinasi Jeruk Nipis (Citrus aurantifolia) ............................................... 13 3.3.2 Sterilisasi Alat dan Bahan ............................................................................... 13 3.3.3 Penyiapan Air Perasan Jeruk Nipis (Citrus aurantifolia) .............................. 13 3.3.4 Pemeriksaan Kandungan Kimia Jeruk Nipis ................................................. 14 3.3.5 Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Staphylococcus aureus ............................... 14 3.3.6 Pembuatan Medium Agar .............................................................................. 15 3.3.6.1 Luria Bertani Agar .............................................................................. 15 3.3.6.2 Media Heterotrof ............................................................................... 16 3.3.7 Purifikasi dan Karakterisasi Bakteri Pada Media Luria Bertani Agar ............ 16 3.3.8 Pembuatan Suspensi Bakteri Staphylococcus aureus ..................................... 16 3.3.9 Uji Pembentukan dan Pertumbuhan Biofilm Bahan ....................................... 16 3.3.10 Uji Aktivitas Antibiofilm Secara In Vitro ..................................................... 17 3.3.11 Rancangan Penelitian dan Analisa Data ....................................................... 19 3.3.12 Optimasi Aktivitas Terseleksi ....................................................................... 20 3.3.13 Uji Aktivitas Antibiofilm Air Perasan Jeruk Nipis dari 3.3.14 Hasil Optimasi .............................................................................................. 20 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ...................................................................... 21 4.1.Determinasi ............................................................................................................... 21 4.2 Karakterisasi dan Proses Penyiapan Sampel ............................................................. 21 4.3 Uji Penapisan Fitokimia ............................................................................................ 21 4.4 Karakterisasi Bakteri Staphylococcus aureus ........................................................... 22 4.5 Uji Pembentukan dan Pertumbuhan Biofilm Staphylococcus aureus ...................... 24 4.6 Uji Aktivitas Antibiofilm Air Perasan jeruk Nipis terhadap Biofilm S. aureus ...... 26 4.7 Optimasi Aktivitas Penghambatan ............................................................................ 31 4.8 Optimasi Aktivitas Penghancuran (degradasi) ......................................................... 34 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................................ 39 DAFTAR PUSTAKA .................................................................................................... 40 LAMPIRAN ................................................................................................................... 46

xii UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

DAFTAR TABEL

Tabel 4.1 Hasil Uji Penapisan Fitokimia ....................................................................... 21 Tabel 4.2 Hasil Karakterisasi Bakteri ............................................................................. 22 Tabel 4.3 Rata-Rata Densitas Optis Biofilm Aktivitas Antibiofilm ............................... 27 Tabel 4.4 Rata-Rata % Aktivitas Antibiofilm Air Perasan Jeruk Nipis .......................... 27 Tabel 4.5 Rerata Densitas Optis Uji Penghambatan Biofilm Kondisi Optimal .............. 33 Tabel 4.6 Rerata Densitas Optis Aktivitas Penghambatan Biofilm Kondisi Optimal .... 36

xiii UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Proses Pembentukan Biofilm ........................................................................ 8 Gambar 4.1 Hasil Purifikasi Bakteri Staphylococcus aureus ......................................... 23 Gambar 4.2 Hasil Pewarnaan Gram Bakteri Staphylococcus aureus ............................. 24 Gambar 4.3 Grafik Pertumbuhan Biofilm Staphylococcus aureus ................................. 25 Gambar 4.4 Grafik Persentase Aktivitas Antibiofilm Air Perasan Jeruk Nipis terhadap Biofilm S. aureus.......................................................................................... 32 Gambar 4.5 Contour plot dari %Penghambatan vs Konsentrasi dan Suhu .................... 32 Gambar 4.6 Persentase aktivitas penghambatan kondisi optimal .................................. 33 Gambar 4.7 Contour plot dari %Penghancuran vs Waktu Kontak dan Suhu ................. 34 Gambar 4.8 Contour plot dari % penghancuran vs waktu kontak dan konsentrasi ........ 35 Gambar 4.9 Persentase aktivitas penghancuran kondisi optimal ................................... 36

xiv UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Skema Metode Penapisan Fitokimia .......................................................... 46 Lampiran 2. Hasil Determinasi ....................................................................................... 48 Lampiran 3. Hasil Penapisan Fitokimia .......................................................................... 49 Lampiran 4. Alat dan Bahan .......................................................................................... 50 Lampiran 5. Hasil Pembuatan Ekstrak ........................................................................... 52 Lampiran 6. Hasil Karakterisasi Bakteri Staphylococcus aureus .................................. 53 Lampiran 7. Hasil Uji Pertumbuhan Biofilm Staphylococcus aureus ........................... 54 Lampiran 8. Hasil Uji Aktivitas Antibiofilm ................................................................. 55 Lampiran 9. Hasil Uji Statistik Aktivitas Pencegahan Pembentukan Biofilm ............... 57 Lampiran 10. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penghambatan Pertumbuhan Biofilm ......... 62 Lampiran 11. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penhancuran (Degradasi) Biofilm .............. 67 Lampiran 12. Hasil Uji Aktivitas Penghambatan Pertumbuhan Biofilm Menggunakan Response Surface Analysis (RSA) ......................................................... 72 Lampiran 13. Hasil Uji Aktivitas Penghancuran (Degadasi) Biofilm Menggunakan Response Surface Analysis (RSA) ......................................................... 74 Lampiran 14. Data Hasil Uji Aktivitas Penghambatan Pertumbuhan Biofilm .............. 76 Lampiran 15. Data Hasil Uji Aktivitas Penghancuran (Degradasi) Biofilm ................. 79 Lampiran 16. Hasil Uji Aktivitas Penghambatan Biofilm (Setelah Pemberian Kristal Violet) Kondisi Optimal ......................................................................... 82 Lampiran 17. Hasil Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm (Setelah Pemberian Kristal Violet) Kondisi Optimal .......................................................................... 83 Lampiran 18. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penghambatan Pertumbuhan Biofilm Kondisi Optimal ..................................................................................... 84 Lampiran 19. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penghancuran (Degradasi) Biofilm Kondisi Optimal ................................................................................................... 87

xv UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

1

BAB I PENDAHULUAN

1.1 LATAR BELAKANG Pada Negara-negara berkembang seperti halnya Indonesia, penyakit infeksi masih merupakan penyebab utama tingginya angka kesakitan (morbidity) dan angka kematian (mortility) (Darmadi, 2008). Berbagai infeksi diperantarai oleh kemampuan bakteri untuk melekat dan berkolonisasi membentuk biofilm pada bahan organik atau anorganik. Biofilm saat ini dianggap sebagai mediator utama infeksi, dengan perkiraan 80% kejadian infeksi berkaitan dengan pembentukan biofilm. Pembentukan biofilm pada jaringan hidup, dan alat medis menimbulkan masalah kesehatan yang kritis (Archer, et al., 2011). Biofilm merupakan bentuk struktural dari sekumpulan mikroorganisme yang dilindungi oleh matriks ekstraseluler yang disebut Extracellular Polymeric Substance (EPS), dimana EPS merupakan produk yang dihasilkan sendiri oleh mikroorganisme tersebut dan dapat melindungi dari pengaruh buruk lingkungan. EPS umumnya terdiri dari polisakarida, dan bakteri dalam EPS menginduksi peradangan kronis yang menunda penyembuhan (Prakash, et al., 2003). Bakteri dalam biofilm memiliki perilaku yang berbeda dari bakteri planktonik, terutama dalam hal respon mereka terhadap pengobatan antibiotik. Bakteri dalam biofilm terkait sangat resisten terhadap antibiotik. Struktur rumit biofilm dengan matriks polimer ekstraseluler dapat mencegah antibiotik mencapai bakteri (Meng Chen et al., 2013). Terapi antibiotik pada umumnya hanya akan membunuh sel-sel planktonik sedang bakteri yang tersusun rapat dalam biofilm akan tetap hidup berkembang serta akan melepaskan sel-sel planktonik keluar dari formasi biofilm. Salah satu bakteri penyebab infeksi yang mampu memproduksi biofilm adalah Staphylococcus aureus. S. aureus

merupakan bakteri patogen yang

menimbulkan berbagai permasalahan dalam dunia kesehatan. Infeksi yang paling sering ditimbulkan oleh S. aureus adalah infeksi piogenik kulit, S. aureus juga dapat menyebabkan furunkel, karbunkel, osteomielitis, infeksi luka, abses, pneumonia, endokarditis, perikarditis, meningitis, dan penyakit yang diperantarai

1 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

2

toksin, termasuk keracunan makanan, sindrom kulit terbakar dan sindrom syok toksik (Richard, 1999). Kemampuan pembentukan biofilm merupakan salah satu faktor virulensi S. aureus yang dapat menyebabkan peningkatan toleransi terhadap antibiotik dan desinfektan serta resistensi terhadap fagositosis dan sel-sel imunokompeten lain (Hoiby et al., 2010; Lee et al., 2013). Dilaporkan bahwa Staphylococcus aureus telah resisten terhadap berbagai antibiotik diantaranya penisilin, oksasilin dan antibiotik beta laktam lainnya (Mardiastuti, 2007). Selain sulitnya mengobati penyakit terkait biofilm dengan terapi antibiotik konvensional, pengobatan lebih lanjut terhalang oleh resistensi antibiotik yang meningkat di kalangan patogen sehingga menyebabkan peningkatan kesulitan pengendalian penyakit. Resistensi antibiotik pada S. aureus seperti resistensi metisilin adalah salah satu masalah kesehatan yang paling mendesak. Pendekatan alternatif selain terapi antibiotik konvensional sangat dibutuhkan untuk mengobati infeksi yang disebabkan oleh bakteri pembentuk biofilm (Meng Chen et al, 2013). Oleh karena itu diperlukan pencarian senyawa-senyawa aktif yang memiliki aktivitas sebagai antibiofilm. Coleman et al, (2010) menunjukkan bahwa saponin dapat mengganggu pembentukan biofilm dengan merusak matriks biofilm. Sedangkan flavonoid berpotensi sebagai antibiofilm karena dapat menghambat proses quorum sensing dalam pembentukan biofilm (Vikram et al., 2010). Asam sitrat juga diketahui memiliki aktivitas antibiofilm yang baik. Mekanisme antibiofilm asam sitrat adalah dengan memecah jembatan kalsium dan merusak matriks biofilm (Faot et al., 2014). Menurut Afifah (2013), jeruk nipis mengandung senyawa flavonoid, saponin dan fenol. Dan menurut Rahardjo 2012, jeruk nipis mengandung senyawa asam organik yang memiliki aktivitas antibakteri seperti asam sitrat yang merupakan komponen utama kemudian asam malat, asam laktat dan asam tartarat. Secara empiris jeruk nipis (Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle) juga telah lama digunakan untuk mengobati berbagai penyakit yang disebabkan oleh bakteri seperti batuk, demam, disentri, jerawat dan menangani bau badan.


3

Berdasarkan uraian di atas dan belum adanya penelitian mengenai aktivitas antibiofilm air perasan jeruk nipis (C. aurantifolia) maka dilakukan penelitian mengenai efek pemberian air perasan jeruk nipis (C. aurantifolia) terhadap pembentukan, pertumbuhan, dan penghancuran biofilm S. aureus secara in vitro.

1.2 RUMUSAN MASALAH Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan di atas maka dapat dirumuskan permasalahan sebagai berikut : 1.

Belum adanya penelitian mengenai aktivitas antibiofilm air perasan jeruk nipis (C. aurantifolia).

2.

Bagaimana efek pemberian air perasan jeruk nipis (C.aurantifolia) terhadap pembentukan, pertumbuhan, dan penghancuran biofilm S.aureus secara in vitro?

1.3 TUJUAN PENELITIAN Penelitian ini dilakukan untuk menguji dan mengetahui efek pemberian air perasan jeruk nipis (C. aurantifolia) terhadap pembentukan, pertumbuhan, dan penghancuran biofilm S. aureus secara in vitro.

1.4 HIPOTESA Air perasan jeruk nipis (C. aurantifolia) memiliki aktivitas sebagai antibiofilm.

1.5 MANFAAT PENELITIAN Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah mengenai aktivitas air perasan jeruk nipis (Citrus aurantifolia) dalam mencegah pembentukan, menghambat pertumbuhan dan menghancurkan (degradasi) biofilm Staphylococcus aureus secara in vitro.


4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 TANAMAN JERUK NIPIS 2.1.1

Taksonomi Secara taksonomi, tanaman jeruk nipis (Citrus aurantifolia (Christm.)

Swingle) termasuk dalam klasifikasi sebagai berikut (Saraf, 2006) : Kingdom

: Plantae

Divisio

: Spermatophyta

Subdivisio

: Angiospermae

Kelas

: Dicotyledone

Bangsa

: Rutales

Famili

: Rutaceae

Genus

: Citrus

Species

: Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle.

2.2 Morfologi Jeruk nipis termasuk salah satu jenis citrus genuk yang termasuk jenis tumbuhan perdu yang banyak memiliki bahan dan ranting. Tingginya sekitar 0,53,5 meter dan memiliki daun yang majemuk, elips atau bulat telur, pangkal daun membulat dan berujung tumpul. Batang pohonnya berkayu ulet, berduri dan keras, sedangkan permukaan kulit luarnya berwarna tua dan kusam. Bunganya berukuran majemuk/tunggal yang tumbuh di ketiak daun atau di ujung batang dengan diameter 1,5-2,5 cm. Buah jeruk nipis berdiameter 3,5 sampai 5 cm, memiliki warna hijau ketika masih muda dan menjadi kuning setelah tua. Biji berbentuk bulat telur, pipih, putih kehijauan. Tanaman jeruk umumnya menyukai tempat-tempat yang dapat memperoleh sinar matahari langsung (Syamsuhidayat dan Hutape, 1991).

2.2.1 Kandungan Kimia Jeruk

nipis

mengandung

saponin,

flavonoid,

dan

minyak

atsiri

(Syamsuhidayat dan Hutape, 1991). Mengandung minyak atsiri dengan komponen


5

siral, limonene, feladren, dan glikosida hedperidin. Buah jeruk juga mengandung zat bioflavonoid, pectin, dan enzim, protein, lemak dan pigmen (karoten dan klorofil). Sari jeruk buah nipis mengandung asam sitrat 7% dan minyak atsiri limonene. Buah matang berumur lebih dari 3 bulan, terutama sari uahnya mengandung 8% asam sitrat dari berat buah. Ekstrak air 41% dari berat buah, vitamin C 4,6%, air 91%, karbohidrat 5,9%, protein 0,5% dan lemak 2,4% (Sethpakdee, 1992).

2.2.2 Khasiat Daun jeruk dan bunga jeruk nipis dapat digunakan untuk pengobatan hipertensi, batuk, lender tenggorokan, demam, panas pada malaria, jerawat, ketombe, dan lain-lain. Buah jeruk nipis dapat digunakan menurunkan panas, obat batuk, peluruh dahak, menghilangkan ketombe, influenza, dan obat jerawat. Pada kulit dan buah jeruk nipis juga dapat diambil minyak atsiri yang digunakan sebagai bahan obat dan hampir seluruh industri makanan, minuman, sabun, kosmetik, dan parfum menggunakan sedikit minyak atsiri ini sebagai pengharum dan juga dapat digunakan sebagai antirematik, antiseptik, antiracun, astringen, antibakteri, diuretik, antipiretik, antihipertensi, antijamur, insektisida, tonik, antivirus, dan ekspektoran. Getah batang ditambahkan dengan sedikit garam dapat dipergunakan sebagai obat sakit tenggorokan (Ninditha, 2012).

2.3 INFEKSI Infeksi adalah proses invasif oleh mikroorganisme dan berproliferasi didalam tubuh yang menyebabkan sakit (Potter & Perry, 2005).

Infeksi terjadi jika

mikroorganime bertumbuh dan mengalahkan mekanisme pertahanan tubuh. Jika mikroorganisme ini merusak tubuh maka disebut patogen. Suatu patogen harus berkembang biak dalam tubuh untuk dapat menimbulkan infeksi (Joyce et al., 2008). Dua faktor penting yang jelas berperan pada patogenesis infeksi adalah dosis kontaminasi bakteri dan ketahanan pasien (David,1995).


6

2.4 Staphylococcus Aureus 2.4.1

Klasifikasi Staphylococcus aureus

Klasifikasi Staphylococcus aureus adalah sebagai berikut : Divisi : Protophyta atau Schizophyta Kelas : Schizomycetes Bangsa : Eubacteriales Suku : Micrococcaceae Marga : Staphylococcus Spesies: Staphylococcus aureus

2.4.2

Uraian Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif berbentuk bulat

berdiameter 0,7-1,2 μm, tersusun dalam kelompok-kelompok yang tidak teratur seperti buah anggur, fakultatif anaerob, tidak membentuk spora, dan tidak bergerak. Bakteri ini tumbuh pada suhu optimum 37 ºC, tetapi membentuk pigmen paling baik pada suhu kamar (20-25 ºC). Koloni pada perbenihan padat berwarna abu-abu sampai kuning keemasan, berbentuk bundar, halus, menonjol, dan berkilau. Lebih dari 90% isolat klinik menghasilkan S.aureus yang mempunyai kapsul polisakarida atau selaput tipis yang berperan dalam virulensi bakteri (Jawetz et al., 1995).

2.4.3

Patogenisitas Infeksi oleh S. aureus ditandai dengan kerusakan jaringan yang disertai

abses bernanah. Beberapa penyakit infeksi yang disebabkan oleh S. aureus adalah bisul, jerawat, impetigo, dan infeksi luka. Infeksi yang lebih berat diantaranya pneumonia, mastitis, plebitis, meningitis, infeksi saluran kemih, osteomielitis, dan endokarditis. S. aureus juga merupakan penyebab utama infeksi nosokomial, keracunan makanan, dan sindroma syok toksik (Ryan, et al., 1994; Warsa, 1994). Infeksi yang paling sering ditimbulkan oleh Staphylococcus aureus adalah infeksi piogenik kulit (Richard, 1999). Bisul atau abses setempat, seperti jerawat dan borok merupakan infeksi kulit di daerah folikel rambut, kelenjar sebasea, atau kelenjar keringat. Mula-mula


7

terjadi nekrosis jaringan setempat, lalu terjadi koagulasi fibrin di sekitar lesi dan pembuluh getah bening, sehingga terbentuk dinding yang membatasi proses nekrosis. Infeksi dapat menyebar ke bagian tubuh lain melalui pembuluh getah bening dan pembuluh darah, sehingga terjadi peradangan pada vena, trombosis, bahkan bakterimia. Bakterimia dapat menyebabkan terjadinya endokarditis, osteomielitis akut hematogen, meningitis atau infeksi paru-paru (Warsa, 1994; Jawetz et al., 1995).

2.4.4

Faktor Virulensi Staphylococcus aureus Staphylococcus

aureus

dapat

menimbulkan

penyakit

melalui

kemampuannya tersebar luas dalam jaringan dan melalui pembentukan berbagai zat ekstraseluler. Berbagai zat yang berperan sebagai faktor virulensi dapat berupa protein, termasuk enzim dan toksin (Jawetz et al., 1995)..

2.5 BIOFILM 2.5.1

Definisi Biofilm Biofilm merupakan bentuk struktural dari sekumpulan mikroorganisme

yang dilindungi oleh matrik ekstraseluler yang disebut Extracellular Polymeric Substance (EPS), dimana EPS merupakan produk yang dihasilkan sendiri oleh mikroorganisme tersebut dan dapat melindungi dari pengaruh buruk lingkungan (Prakash, et al., 2003). Komponen utama EPS terdiri dari polisakarsida yang dapat berasosiasi dengan ion-ion logam dan makromolekul lain seperti protein dan lipid. Biofilm saat ini dianggap sebagai mediator utama infeksi, dengan perkiraan 80% kejadian infeksi berkaitan dengan pembentukan biofilm (Archer, et al., 2011). Bakteri membentuk biofilm pada permukaan yang terendam atau lembab seperti jaringan hidup, permukaan gigi, peralatan medis yang ditempelinya dan implan.

2.5.2

Pembentukan Biofilm Biofilm terbentuk ketika bakteri menempel pada suatu permukaan pada

lingkungan yang lembab dan mulai mensekresikan suatu lender yang dapat


8

melekatkannya pada berbagai jenis benda seperti logam, plastik, pasir, partikel tanah dan jaringan.

Gambar 2.1. Proses Pembentukan Biofilm (Ranganathan, 2014) Pembentukan biofilm dimulai dari perlekatan awal dari bentuk planktonik bakteri pada permukaan jaringan inang, pada tahap iniperlekatan sel masih bersifatreversibel. Tahap selanjutnya dimulai pembentukan sel monolayer dan produksilen direkstra selular, pada tahap ini kumpulan mikroba tertutup dalam matriks ekstrapolimer yang merupakan senyawa perekat yang kuat sehingga perlekatan menjadi ireversibel. Kemudian terbentuk mikrokoloni bakteri dan biofilm mulai terbentuk, bakteri mulai berkembang biak dan memancarkan sinyal kimiawi sebagai alat komunikasi antarsel bakteri (Prakash et al., 2003). Selanjutnya biofilm yang terbentuk semakin banyak dan membentuk struktur tiga dimensi yang mengandung sel terselubung dalam beberapa kelompok yang saling terhubung satu sama lainnya. Struktur biofilm dewasa terdiri dari bentuk dan saluran yang kompleks. Tahap terakhir terjadi disperse sel sehingga memungkinkan beberapa bakteri meninggalkan

biofilm

untuk berkembang kembali menjadi sel

planktonik. Sel bakteri dapat melepaskan diri dari biofilm matang dan menyebar kesistem organ lain. Akibatnya, biofilm menjadi sumber infeksi persisten dan kronis(Manuel et al., 2010). Aspek biologis yang mengatur pembentukan biofilm, antara lain (Manuel et al., 2010) : 

Sifat permukaan sel 8 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

9

Permukaan sel hidrofobik dan adanya pelengkap berserabut ekstraseluler dapat mempengaruhi tingkat keterikatan mikroba. Menurut Drenkard dan Ausubel(2002), kemampuan bakteri untuk menempel satu sama lain pada permukaan tergantung pada interaksi domain hidrofobik. 

Zat Polimer Ekstraseluler (EPS) EPS bertanggung jawab atas sel-sel dan bahan partikulat lain yang terikat ke permukaan (adhesi). Sebuah fungsi yang sering dikaitkan dengan EPS adalah efek perlindungan umum terhadap kondisi buruk mikroorganisme biofilm. Selain itu matriks molekul EPS diperlukan untuk komunikasi antar sel.



Komunikasi Antar Sel Komunitas bakteri adalah organisasi yang mandiri dan memiliki kerjasama antar sel, signaling antar sel telah ditunjukkan untuk memainkan peran dalam penempelan sel dan detasemen dari biofilm. Suksesnya adaptasi bakteri terhadap perubahan kondisi alam tergantung pada kemampuan mereka untuk merasakan dan merespon lingkungan eksternal dan memodulasi ekspresi gen yang sesuai.

2.5.3

Resistensi Antibiotik Terhadap Biofilm Bakteri dalam biofilm memiliki perilaku yang berbeda dari bakteri

planktonik, terutama dalam hal respon mereka terhadap pengobatan antibiotik. Bakteri biofilm terkait sangat resisten terhadap antibiotik (Meng Chen et al., 2013). Bakteri bebas umumnya rentan terhadap pengobatan antibiotik dan mekanisme pertahanan dari sel inangnya. Namun, konsentrasi minimal penghambatan (MIC) dan konsentrasi bakterisida minimal (MBC) antibiotik untuk bakteri biofilm meningkat menjadi sampai dengan 100-1000 kali lipat lebih tinggi daripada bakteri bebas. Struktur rumit biofilm dengan matriks polimer ekstraseluler dapat mencegah antibiotik mencapai bakteri serta kondisi fisiologis yang berubah pada bakteri bisa membuatnya lebih tahan terhadap antibiotik. Umur sel biofilm juga merupakan faktor yang menyebabkan

berbedanya

ketahanan sel biofilm terhadap senyawa kimia. Semakin lama umur sel biofilm maka ketahanannya terhadap antibakteri dan desinfektan semakin tinggi karena terbentuknya beberapa lapis sel biofilm (multilayers) pada substrat. 9 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

10

2.5.4

Pengendalian Biofilm Proses pengendalian biofilm dapat dilakukan melalui tiga cara, yakni

secara kima, fisika dan biologi: 

Secara Kimia Pengendalian biofilm secara kimia dilakukan melalui proses sanitasi dengan penambahan zat kimia. Sanitasi kimia dilakukan dengan menggunakan desinfektan. Tujuan penggunaan desinfektan ialah untuk mereduksi jumlah mikroorganisme patogen. Teknik perlakuan deaktivasi biofilm mikroba dapat dilakukan dengan menggunakan enzim berbasis deterjen yang juga dikenal dengan bio-cleaners identik dengan bahan kimia ramah lingkungan yang banyak digunakan dalam industri pengolahan produk pangan (Simoes et al., 2010).



Secara Fisika Pengendalian biofilm secara fisika dilakukan dengan memanfaatkan suhu yang tinggi atau pemanasan. Sanitasi dengan menggunakan air panas lebih menguntungkan karena air panas mudah tersedia dan tidak beracun. Peralatan kecil seperti pisau, serta bagian–bagian alat pengolahan pangan dapat direndam dalam air yang dipanaskan hingga suhu 800C (Yunus, 2000). Tinggi rendahnya suhu mempengaruhi pertumbuhan mikroorganisme.Aktivitas panas sering dijadikan sebagai sanitasi suatu peralatan kesehatan dan peralatan proses penanganan makanan.



Secara Biologi Teknik perlakuan deaktivasi biofilm mikroba secara biologi dapat dilakukan dengan pengendalian fage dan interaksi mikrobiologis atau molekul metabolit (Simoes et al., 2010). Fage dapat juga digunakan untuk pengendalian biofilm pada produk pangan. Pada dasarnya fage merupakan virus yang menginfeksi bakteri melalui jalur yang spesifik serta bersifat non-toksik terhadap manusia, sehingga memiliki potensi yang baik untuk dikembangkan sebagai bahan biofilm mikroba pada produk pangan (Kudva et al., 1999). Pengendalian biofilm juga dapat dilakukan dengan interaksi interspesies jamak atau produksi suatu metbolit sederhana (Rossland et al, 2005). Banyak bakteri 10 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

11

yang mampu mensintesis dan mensekresikan biosurfaktan dengan sifat anti lekat yang kuat (Rodriguez et al, 2004).


12

BAB III METODE PENELITIAN

3.1. WAKTU DAN TEMPAT PENELITIAN Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi Kesehatan, Bidang Botani, Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) - Cibinong pada bulan Maret sampai bulan Mei 2015.

3.2. ALAT DAN BAHAN 3.2.1. Alat Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini adalah erlenmeyer, kertas saring, membran penyaring 0.2 µ, corong, cawan petri, tabung reaksi, rak tabung reaksi, pinset, vortex, incubator, mikroplate, miroplate reader, jarum ose, kapas, kain kasa, spatula, batang pengaduk, mikropipet, bunsen, pinset, alumunium foil, plastik wrap, vial, timbangan analitik, autoklaf, oven, Laminar Air flow (LAF), lemari pendingin, seperangkat alat filtrasi, dan spektrofotometer UV-Vis.

3.2.2. Bahan 3.2.2.1. Tanaman Jeruk nipis (Citrus aurantiolia (Christm.) Swingle) yang diperoleh dari kelurahan Cipondoh Indah, kecamatan Cipondoh - Tangerang. Buah ini dipetik pada tanggal 9 Maret 2015 dan 26 April 2015.

3.2.2.2. Bakteri Uji Kultur Staphylococcus aureus yang telah diisolasi dari kulit manusia.

3.2.2.3. Bahan Lainnya Aquadest steril, etanol 96%, NaCl fisiologis, lugol, safranin, kristal violet 1 %, media heterotrof (HTR) cair, luria bertani (LB) agar, klorin, biorem 1 (basa alkali), biorem 10 (enzim), media kingler iron agar (KIA), susu skim, H2O2 3%, dan media pelarut fosfat,.


13

3.3. METODE 3.3.1. Determinasi Jeruk Nipis (Citrus aurantiolia (Christm.) Swingle) Determinasi dilakukan untuk memastikan klasifikasi tanaman yang digunakan dalam penelitian. Determinasi terhadap jeruk nipis (Citrus aurantiolia (Christm.) Swingle) dilakukan di Herbarium Bogoriense LIPI – Cibinong.

3.3.2. Sterilisasi Alat dan Bahan Seluruh alat yang akan digunakan dalam penelitian dicuci bersih, dikeringkan dan disterilkan terlebih dahulu. Gelas beker, erlenmeyer, cawan petri, tabung reaksi, jarum ose, spatula, dan pinset disterilkan dengan autoklaf pada suhu 1210C selama 15 menit. Alat-alat kaca seperti gelas beker, Erlenmeyer, dan tabung reaksi ditutup mulutnya dengan kapas dan cawan petri dibungkus dengan kertas. Bahan-bahan yang terbuat dari karet disterilkan dengan direndam dalam alcohol 70% dan jarum ose disterilkan dengan nyala Bunsen (Pertiwi, 2010). Seluruh media pembenihan (nutrient agar dan media heterotrof) disterilkan dengan autoklaf pada suhu 1210C selama 15 menit. Pengerjaan aseptis dilakukan di dalam lemari aseptis yang sebelumnya telah dibersihkan dengan alkohol, lalu disterilkan dengan UV yang dinyalakan selama lebih kurang 2 jam sebelum digunakan.

3.3.3. Penyiapan Air Perasan Jeruk Nipis (Citrus aurantiolia (Christm.) Swingle) Jeruk nipis (Citrus aurantiolia (Christm.) Swingle) yang akan digunakan diukur terlebih dahulu menggunakan penggaris, kemudian dicuci dengan air bersih dan dibilas dengan etanol lalu dipotong menjadi 2 bagian. Kemudian airnya diperas kedalam tabung erlenmeyer dan disaring dengan menggunakan kertas saring lalu disaring kembali menggunakan membran penyaring berukuran 0.2 µm (Ninditha, 2012). Selanjutnya dilakukan penyiapan berbagai seri konsentrasi air perasan jeruk nipis (Citrus aurantifolia). Konsentrasi air perasan jeruk nipis (Citrus aurantifolia) yang digunakan pada penelitian ini adalah 0.0625%, 0,125%, 0,25%,


14

0,50%, 1%, 2%, 4 % dan 8% v/v. Proses ini dilakukan untuk memperoleh sampel yang siap untuk digunakan.

3.3.4. Pemeriksaan Kandungan Kimia Jeruk Nipis Penapisan fitokimia dilakukan untuk mengetahui metabolit sekunder yang terkandung di dalam air perasan jeruk nipis (Citrus aurantiolia). Metabolit sekunder yang diuji secara kualitatif ini antara lain alkaloid, flavonoid, steroid, tannin, saponin, triterpenoid dan hidrokuinon. Penapisan fitokimia pada penelitian ini dilakukan oleh Pusat Studi Biofarmaka – LPPM IPB. Metode penapisan fitokimia tersebut dapat dilihat pada lampiran 1.

3.3.5. Karakterisasi Bakteri Staphylococcus aureus Jarum ose yang berbentuk bulat diusapkan pada kulit kemudian ose tersebut digoreskan pada media BHI dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 370C. Bakteri yang tumbuh pada media kemudian dikarakterisasi menggunakan pewarnaan Gram. Selanjutnya bakteri gram positif yang berbentuk staphylococcus dikarakterisasi menggunakan media KIA, media pelarut fosfat, susu skim 20% dan penambahan H2O2 3% (Breed et al., 1957).

3.3.5.1. Karakterisasi Bakteri Menggunakan Media KIA (Deteksi H2S) Media KIA (Klingler Iron Agar) dibuat sebanyak 9 ml dengan posisi tegak dalam tabung reaksi. Kemudian ditusukkan sebanyak 1 ose bakteri uji ke dalam media menggunakan ose yang berbentuk jarum. Terbentuknya H2S menunjukkan bahwa bakteri uji adalah Staphylococcus aureus. Terbentuknya H2S dapat dilihat dari perubahan warna pada media dari warna merah menjadi warna hitam pada bekas tusukan bakteri dan dapat juga dilihat dari media agar yang terangkat (Breed, et al., 1957).

3.3.5.2. Karakterisasi

Bakteri

Menggunakan

Media

Pelarut

Fosfat

(Phospatase) Dibuat media BHI dengan penambahan NaCl, dan Ca3(PO4)2 sebagai media selektif untuk karakterisasi bakteri Staphylococcus aureus. Media dibuat dalam 14 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

15

cawan petri. Kemudian ditusukkan sebanyak 1 ose bakteri uji ke dalam media menggunakan ose yang berbentuk jarum. Setelah itu diinkubasi pada suhu 370C selama 24 jam. Terbentuknya zona bening disekitar tempat penusukan bakteri menunjukkan bahwa bakteri uji adalah Staphylococcus aureus (Breed, et al., 1957).

3.3.5.3. Karakterisasi Bakteri Menggunakan Susu Skim 20% (Koagulase) Dibuat susu skim 20%, kemudian dipasteurisasi selama 30 menit pada suhu 900C. Selanjutnya dibuat kultur bakteri dalam tabung appendorf, dengan memasukkan sebanyak 1 mL aquadest kemudian ditambahkan sebanyak 2 ose bakteri ke dalamnya dan divortex hingga homogen. Susu yang telah dipasteurisasi dimasukkan ke dalam tabung reaksi sebanyak 2 mL

kemudian ditambahkan

500µL kultur bakteri dan diinkubasi pada suhu 370C selama 24 jam. Terbentuknya gumpalan (koagulasi) menunjukkan bahwa bakteri uji adalah Staphylococcus aureus (Breed, et al., 1957).

3.3.5.4. Karakterisasi Bakteri dengan Penambahan H2O2 3% (Katalase) Sebanyak 1 ose bakteri uji disebar pada kaca objek, kemudian ditambahkan 1 tetes H2O2 3%. Terbentuknya gelembung menunjukkan bahwa bakteri uji adalah Staphylococcus aureus (Breed, et al., 1957).

3.3.6. Pembuatan Medium Agar 3.3.6.1. Luria Bertani Agar Media luria bertani agar dibuat dengan cara mencampur bacto agar 2.25 gram, yeast ekstrak 0.75 gram, tripton, 1,5 gram, dan NaCl 0.75 gram, kemudian dilarutkan dengan pemanasan dalam 150 mL aquadest. Selanjutnya disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 1210C selama 15 menit. Penuangan media dilakukan ketika masih cair, yaitu pada suhu sekitar 45 – 500C. Kemudian diratakan dengan menggoyang cawan dan diputar membentuk angka 8 sebanyak 3 kali lalu disterilisasi dan disimpan dalam kulkas (Adela, 2011).


16

3.3.6.2. Media Hetrotrof (HTR) Cair Media HTR cair dibuat dengan cara mencampur pepton 3,75 gram, K2HPO4 0,625, glukosa 0,625 gram, NaCl 1,25 gram dan tripton 0,75 gram, kemudian dilarutkan dengan pemanasan dalam 250 mL aquadest. Selanjutnya disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 1210C selama 15 menit.

3.3.7. Purifikasi dan Karakterisasi Bakteri pada Media Luria Bertani Agar Hasil karakterisasi bakteri Staphylococcus aureus kemudian dipurifikasi (dimurnikan). Teknik yang digunakan adalah Streak Plate. Jarum ose dipanaskan terlebih dahulu sampai berpijar, lalu didinginkan. Kemudian bakteri diambil dan digoreskan pada media luria bertani agar. Selanjutya diinkubasi pada suhu 370C selama 24 jam (Deby et al., 2012). Kemudian dilakukan pengamatan secara morfologis terhadap bakteri Staphylococcus aureus yang telah ditumbuhkan pada media luria bertani agar, serta dilakukan karakterisasi bakteri dengan pewarnaan Gram.

3.3.8. Pembuatan Suspensi Bakteri Staphylococcus aureus Diambil sebanyak satu ose bakteri Staphylococcus aureus yang telah dibiakkan dan dimasukkan ke dalam tabung berisi media heterotrof (HTR) sebanyak 10 mL dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 370C. Kultur bakteri uji divorteks kemudian diukur nilai optical dencity (OD) pada panjang gelombang 600nm untuk mengetahui konsentrasi dari suspensi bakteri tersebut. Kemudian suspensi bakteri diencerkan mengunakan media HTR hingga OD mencapai 0.5.

3.3.9. Uji Pembentukan dan Pertumbuhan Biofilm Optimal Uji pembentukan biofilm dilakukan dengan menggunakan 10 mL suspensi bakteri dalam tabung reaksi yang diinkubasi selama 24 jam pada suhu 370C. Jika terbentuk biofilm terlihat lapisan-lapisan seperti benang halus pada suspensi bakteri. Selanjutnya dilakukan uji pertumbuhan biofilm untuk mengetahui waktu inkubasi yang menghasilkan pertumbuhan biofilm Staphylococcus aureus paling baik. Pengujian dilakukan dengan menggunakan

microtitier flat-bottom


17

polystyrene 96 wells, dengan cara memvariasikan waktu inkubasinya. Jumlah suspensi bakteri yang dimasukkan adalah 200 µL dengan variasi waktu inkubasi adalah 1, 2, 3, dan 4 hari. Setelah masa inkubasi, microplate dicuci menggunakan air mengalir sebanyak 3 kali, kemudian ditambahkan 200 µL larutan kristal violet 1% ke tiap well dan diinkubasi pada suhu ruang selama 15 menit. Microplate dicuci kembali dengan cara yang sama seperti sebelumnya, yaitu dengan air mengalir sebanyak 3 kali. Larutan etanol 96% sebanyak 200 µL dimasukkan ke tiap well dan diinkubasi pada suhu ruang selama 15 menit. Pebacaan Optical Dencity (OD) dilakukan dengan Mark Bio-Rad microplate reader pada panjang gelombang 595nm. Pengujian dilakukan triplo. Hasil absorbansi terbesar pada waktu inkubasi dan jumlah bakteri tersebut dinyatakan memiliki pembentukan biofilm yang optimal (George, 2011).

3.3.10. Uji Aktivitas Antibiofilm Secara In Vitro (Yosephine, 2013) 

Uji Pencegahan Pembentukan Biofilm pada Permukaan Uji ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas air perasan jeruk nipis terhadap

pencegahan pembentukan biofilm Staphylococcus aureus. Pengujian dilakukan dengan menggunakan microtitier flat-bottom polystyrene 96 wells. Pengujian dilakukan terhadap masing-masing ekstrak tanaman dengan variasi konsentrasi 0.0625%, 0,125%, 0,25%, 0,50%, 1%, 2%, 4 % dan 8%

v/v. 200 µL ekstrak

tanaman terlebih dahulu dimasukkan pada tiap well dan diinkubasi selama 1 jam, kemudian ekstrak tanaman dibuang lalu dimasukkan suspensi bakteri sebanyak 200 µL pada tiap well. Suspensi uji kemudian diinkubasi selama 2 hari pada suhu 370C. Setelah masa inkubasi, microplate dicuci menggunakan air mengalir sebanyak 3 kali, kemudian ditambahkan 200 µL larutan kristal violet 1% ke tiap well dan diinkubasi pada suhu ruang selama 15 menit. Microplate dicuci kembali dengan cara yang sama seperti sebelumnya, yaitu dengan air mengalir sebanyak 3 kali. Larutan etanol 96% sebanyak 200 µL dimasukkan ke tiap well dan diinkubasi pada suhu ruang selama 15 menit. Pebacaan Optical Dencity (OD) dilakukan dengan Mark Bio-Rad microplate reader pada panjang gelombang 595nm. Pengujian dilakukan triplo. % pencegahan = 17 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

18



Uji Penghambatan Pertumbuhan dan Perkembangan Biofilm Uji ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas air perasan jeruk nipis terhadap

penghambatan pertumbuhan biofilm Staphylococcus aureus. Pengujian dilakukan dengan menggunakan microplate flat-bottom polystyrene 96 wells. Suspensi bakteri, ekstrak dan media dimasukkan dalam waktu bersamaan. Media HTR yang dimasukkan sebanyak 60 µL, suspense bakteri sebanyak 70 µL dan ekstrak tanaman sebanyak 70 µL dengan variasi konsentrasi 0,125%, 0,25%, 0,50%, 1%, 2%, 4 % dan 8% v/v. Suspensi uji kemudian diinkubasi selama 2 hari pada suhu 370C. Setelah masa inkubasi, microplate dicuci menggunakan air mengalir sebanyak 3 kali, kemudian ditambahkan 200 µL larutan kristal violet 1% ke tiap well dan diinkubasi pada suhu ruang selama 15 menit. Microplate dicuci kembali dengan cara yang sama seperti sebelumnya, yaitu dengan air mengalir sebanyak 3 kali. Larutan etanol 96% sebanyak 200 µL dimasukkan ke tiap well dan diinkubasi pada suhu ruang selama 15 menit. Pebacaan Optical Dencity (OD) dilakukan dengan Mark Bio-Rad microplate reader pada panjang gelombang 595nm di laboratorium mikrobiologi, LIPI Cibinong. Pengujian dilakukan triplo. % penghambatan =



Uji Penghancuran (Degradasi) Biofilm Uji ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas air perasan jeruk nipis dalam

mendegradasi

biofilm

Staphylococcus

aureus.

Pengujian

ini

dilakukan

sebagaimana penghambatan perlekatan dan pertumbuhan biofilm hanya saja suspensi ekstrak uji ditambahkan pada saat biofilm telah terbentuk. Biofilm terbentuk setelah masing-masing wells diinkubasi selama 2 hari pada suhu 370C dengan jumlah suspensi bakteri sebanyak 200 µL. Setelah terbentuknya biofilm, suspensi dalam microplate tersebut dibuang, kemudian dimasukkan 200 µL ekstrak tanaman dengan variasi konsentrasi 0,125%, 0,25%, 0,50%, 1%, 2%, 4 % dan 8% v/v. Setelah itu diinkubasi dalam suhu ruang selama 1 jam. Setelah masa inkubasi, microplate dicuci menggunakan air mengalir sebanyak tiga kali, dan seterusnya sebagaimana dilakukan pada uji penghambatan perlekatan dan


19

pertumbuhan biofilm. Persentase pendegradasian dari biofilm dapat diukur dengan rumus sebagai berikut : % penghancuran =

3.3.11. Rancangan Penelitian dan Analisis Data Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratories dengan desain penelitian post test only control-group design. Data yang diperoleh merupakan data kuantitatif berupa nilai absorbansi atau Optical Density (OD595nm). Data hasil pengujian aktivitas antibiofilm air perasan jeruk nipis (Citrus auranifolia (Christm) Swingle) terhadap pencegahan pembentukan, penghambatan pertumbuhan dan penghancuran biofilm Staphylococcus aureus dianalisis secara statistik. Tujuan dilakukan analisa statistik adalah untuk melihat apakah air perasan jeruk nipis memperlihatkan perbedaan aktivitas antibiofilm yang signifikan terhadap biofilm yang dibentuk oleh bakteri Staphylococcus aureus. Data yang diperoleh dianalisis secara deskriptif, uji homogenitas dilakukan dengan menggunakan Levene Kolmogorov-Smirnov

dan uji normalitas menggunakan

test. Apabila hasil sebaran data normal, maka untuk

melihat perbedaan kadar masing-masing kelompok perlakuan dianalisis dengan uji statistik One way ANOVA. Hipotesis : Ho : tidak ada perbedaan yang bermakna antara setiap kelompok Ha : terdapat perbedaan yang bermakna antara setiap kelompok. Pengambilan keputusan : Bila nilai signifikansi ≤0.05 Ho ditolak, berarti terdapat perbedaan Bilai nilai signifikansi ≥0.05 Ho diterima, berarti tidak terdapat perbedaan (Santoso, 2009).

3.3.12. Optimasi Aktivitas Terseleksi


20

Pada penelitian ini, optimasi aktivitas terseleksi dilakukan

dengan

menggunakan aplikasi metode Response Surface Analysis (RSA). Konsentrasi air perasan jeruk nipis, suhu dan waktu inkubasi yang digunakan divariasikan. Tujuannya adalah untuk mengetahui konsentrasi air perasan jeruk nipis dengan suhu dan waktu inkubasi yang menunjukkan aktivitas

optimal. Kemudian

dilakukan uji aktivitas antibiofilm dengan konsentrasi air perasan jeruk nipis, waktu inkubasi, dan suhu yang digunakan sesuai dengan kondisi optimal yang diperoleh dari RSA dan hasilnya dibandingkan dengan kontrol positif.


21

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Determinasi Hasil determinasi tumbuhan menunjukkan bahwa sampel buah yang digunakan adalah jeruk nipis dengan nama spesies Citrus aurantifolia (Christm.) Swingle, suku Rutaceae ( Lampiran 2 ).

4.2 Karakterisasi dan Penyiapan Sampel Karakteristik buah jeruk nipis

yang digunakan adalah berbentuk bulat,

berwarna hijau kekuningan dan berdiameter 35-40 mm. Dari 3 buah jeruk nipis diperoleh sebanyak 45 mL air perasan jeruk nipis yang kemudian disaring dengan menggunakan membran penyaring berukuran 0,2µm untuk menyaring bakteri dan virus yang mungkin mengkontaminasi air perasan jeruk nipis pada proses penyiapan sampel. Kemudian dibuat seri konsentrasi 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5%, 1%, 2%, 4% dan 8% v/v. Pengenceran air perasan jeruk nipis dilakukan dengan menggunakan aquadest steril untuk menghindari terjadinya kontaminasi.

4.3 Uji Penapisan Fitokimia Kandungan metabolit sekunder golongan alkaloid, flavonoid, tannin, steroid, triterpenoid, saponin dan hidrokuinon pada air perasan jeruk nipis diuji dengan cara penapisan fitokimia. Hasil penapisan fitokimia air perasan jeruk nipis tersebut dapat dilihat pada tabel 4.1. Tabel 4.1.Hasil uji penapisan fitokimia Golongan

Hasil

Alkaloid

-

Flavonoid

+

Steroid

-

Triterpenoid

-

Tannin

-

Saponin

+

Hidrokuinon


22

Dari hasil pengujian penapisan fitokimia menunjukkan bahwa air perasan jeruk nipis memiliki kandungan senyawa saponin, dan flavonoid, dimana zat aktif tersebut berpotensi memiliki aktivitas sebagai antibiofilm. Menurut Calabro et al (2004) flavonoid terdapat pada Citrus sp., 3 dari 6 jenis utama flavonoid yang terdapat pada citrus adalah flavanone (eriocitrin, hesperidin, narirutin dan neoriocitrin), flavone (apigenin) dan flavonols (kaempferol, quercetin dan rutin). Hisperidin merupakan flavonoid paling dominan yang terdapat pada jeruk nipis (Peterson, Julia J., et al, 2005). Penelitian yang dilakukan oleh Vikram et al (2010) membuktikan bahwa flavonoid Citrus sp.

dapat menghambat proses

quorum sensing dalam pembentukan biofilm. Sedangkan saponin berpotensi sebagai antibiofilm karena dapat mengganggu pembentukan biofilm dengan merusak matriks biofilm (Coleman et al., 2010). Selain mengandung senyawa flavonoid dan saponin, air perasan jeruk nipis juga mengandung asam sitrat dan minyak atsiri (Dalimarta, 2010). Asam sitrat dan minyak atsiri juga diketahui memiliki aktivitas antibiofilm yang baik. Mekanisme antibiofilm asam sitrat adalah dengan memecah jembatan kalsium dan merusak matriks biofilm (Faot et al., 2014). Sedangkan minyak atsiri dapat menginaktivasi enzim yang berperan dalam pembentukan biofilm (Dwi & Triana, 2010).

4.4 Karakterisasi Bakteri Staphylococcus aureus Dilakukan pewarnaan terhadap 7 koloni bakteri yang tumbuh dari hasil isolasi bakteri pada kulit. Isolasi bakteri dilakukan dari kulit karena S. aureus merupakan bakteri yang banyak ditemukan pada kulit dan permukaan mukosa (Voung & Otto, 2002). Hasil pewarnaan tersebut menunjukkan bahwa seluruh koloni bakteri merupakan bakteri Gram positif yang tersusun dari sel yang berbentuk bulat (coccus) dan berkoloni seperti buah anggur (staphylococcus). Kemudian dilakukan karakterisasi lebih lanjut untuk mengetahui bakteri dengan spesies Staphylococcus aureus dari 7 koloni bakteri tersebut. Hasil karakterisasi tersebut dapat dilihat pada tabel 4.2.


23

Tabel 4.2.Hasil karakterisasi bakteri Karakterisasi

Bakteri

Media KIA

1 -

2 -

3 -

4 -

5 -

6 +

7 +

Media pelarut fosfat

-

-

-

-

-

+

-

Susu skim 20%

-

-

-

-

-

+

-

H2O2 3%

+

+

+

+

+

+

+

Dari hasil karakterisasi bakteri yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa bakteri 6 merupakan bakteri Staphylococcus aureus. Kemudian bakteri dipurifikasi dan dilakukan karakterisasi secara morfologis dan mikroskopis. Hasil purifikasi dan karakterisasi bakteri Staphylococcus aureus secara morfologis dapat dilihat pada gambar 4.1.

Gambar 4.1. Hasil purifikasi bakteri Staphylococcus aureus

Secara morfologis dapat dilihat bahwa bakteri Staphylococcus aureus yang tumbuh pada media pembenihan berwarna putih kekuningan, berbentuk bundar, menonjol dan berkilau. Sedangkan hasil karakterisasi bakteri Staphylococcus aureus secara mikroskopis dapat dilihat pada gambar 4.2.


24

Gambar 4.2. Hasil pewarnaan Gram bakteri Staphylococcus aureus

Berdasarkan karakterisasi yang dilakukan dengan cara pewarnaan Gram, dapat dipastikan bahwa bakteri Staphylococcus aureus yang digunakan dalam penelitian ini adalah benar bakteri Gram positif yang menghasilkan warna ungu setelah

pewarnaan

Gram.

Secara

mikroskopis

bakteri

ini

berbentuk

Staphylococcus (bulat dan tersusun seperti anggur).

4.5 Uji Pembentukan dan Pertumbuhan Biofilm Staphylococcus aureus Pada uji pembentukan biofilm terbentuk lapisan-lapisan seperti benang halus pada suspensi bakteri yang telah diinkubasi pada suhu 370C selama 24 jam. Hal ini menunjukkan bahwa bakteri Staphylococcus aureus yang digunakan positif dapat membentuk biofilm. Menurut Meng Chen (2013), S. aureus merupakan salah satu bakteri yang paling sering membentuk biofilm. Pembentukan biofilm S.aureus dapat terjadi melalui beberapa regulasi, salah satunya adalah melalui ica-dependent biofilm production (Lee et al, 2013). Kemampuan pembentukan biofilm merupakan salah satu faktor virulensi S. aureus yang dapat menyebabkan peningkatan toleransi terhadap antibiotik dan desinfektan serta resistensi terhadap fagositosis dan sel-sel imunokompeten lain (Hoiby et al., 2010; Lee et al., 2013). Setelah dilakukan uji pembentukan biofilm kemudian dilakukan pengujian pertumbuhan biofilm S. aureus untuk mengetahui waktu inkubasi yang menghasilkan pembentukan biofilm paling baik dengan jumlah suspensi bakteri sebanyak 200µL selama 1-4 hari. Uji pertumbuhan biofilm ini menggunakan suspensi bakteri yang telah diinkubasi pada suhu 370C selama 24 jam. Suspensi bakteri diinkubasi pada suhu 24 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

25

370C karna suhu ini merupakan suhu optimal dalam pertumbuhan S.aureus. Setelah 24 jam kemudian diukur nilai optical dencity (OD) suspensi bakteri pada panjang gelombang 600nm untuk mengetahui konsentrasi dari suspensi bakteri tersebut.Kemudian suspensi bakteri diencerkan mengunakan media HTR hingga OD mencapai 0,5 atau sekitar 108 CFU/ml (Abdelhady et al., 2013). Digunakan OD 0,5 pada suspensi bakteri karena bakteri membentuk biofilm dengan baik (kuat) dengan OD ≥0,5 (Ando et al., 2004). Media yang digunakan dalam pembuatan suspensi bakteri tidak selalu harus menggunakan HTR cair namun bisa juga menggunakan media lainnya seperti Tryticase soy broth, LB broth dan media BHI. Uji pertumbuhan biofilm ini menggunakan metode Microtitter Plate Biofilm Assay (OD595nm) dengan kristal violet 1% sebagai pendeteksi. Kristal violet akan mewarnai biofilm sehingga terbentuk cincin berwarna ungu di sekeliling sumuran yang kemudian ditambahkan dengan etanol 96 % untuk melarutkan kristal violet yang terikat pada biofilm. Banyaknya kristal violet yang terlarut berbanding lurus dengan jumlah biofilm yang terbentuk. Namun demikian, faktor fisika, kimia, dan biologis juga dapat mempengaruhi ikatan kristal violet dan biofilm. Faktor-faktor tersebut antara lain adalah faktor struktural yang mempengaruhi difusi pewarna, perbedaan morfologi dan fisiologi dari setiap sel, dan interaksi kimia antara komponen senyawa dalam tanaman dengan pewarna itu sendiri (Niu dan Gilbert,

Densitas Biofilm (OD kristal violet)

2004). Hasil pertumbuhan biofilm dapat dilihat pada gambar 4.3. 1.04

1.2

0.98

1 0.8

0.45

0.6

0.29

0.4 0.2 0 1

2

3

Waktu (Hari)

4 Densitas Biofilm

Gambar 4.3.Grafik pertumbuhan biofilm Staphylococcus aureus. 25 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

26

Dari grafik diatas diketahui bahwa bakteri S. aureus membentuk biofilm paling baik pada waktu inkubasi selama 2 hari, sehingga waktu ini yang akan digunakan untuk pengujian antibiofilm. Dari grafik ini juga terlihat pertumbuhan biofilm meningkat dari hari pertama ke hari kedua kemudian terjadi penurunan biofilm di hari ketiga dan hari keempat. Penurunan biofilm ini diduga terjadi karena pembentukan biofilm sudah berada pada fase terakhir yaitu dispersi. Pada tahap dispersi, sel-sel dalam koloni akan terlepas sendiri atau bersama sebagian komponen matriks. Pada tahap ini, matriks ekstraseluler biofilm akan didegradasi oleh enzim dispersin B dan deoxyribonuclease (Kaplan, 2010).

4.6 Uji Aktivitas Antibiofilm Air Perasan Jeruk Nipis terhadap Biofilm Staphylococcus aureus Setelah diketahui waktu dan konsentrasi bakteri yang menghasilkan pembentukan biofilm paling baik, kemudian dilakukan uji aktivitas antibiofilm air perasan jeruk nipis. Hasil uji aktivitas antibiofilm ini menunjukkan bahwa air perasan jeruk nipis memiliki aktivitas terhadap pencegahan pembentukan, penghambatan pertumbuhan dan penghancuran biofilm S. aureus. Hal ini ditunjukkan dari densitas optis yang diperoleh pada perlakuan dengan penambahan air perasan jeruk nipis konsentrasi 0,0625% sampai dengan 8% dibandingkan dengan kontrol negatif dan dari % pencegahan, % penghambatan dan % penghancuran biofilm mulai dari pemberian air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 0,0625% sampai dengan 8%. Kontrol negatif yang digunakan pada uji aktivitas antibiofilm ini adalah suspensi bakteri tanpa penambahan media dan air perasan jeruk nipis. Densitas optis antibiofilm air perasan jeruk nipis terhadap biofilm Staphylococcus aureus dapat dilihat pada tabel 4.3.


27

Tabel 4.3.Rata-rata densitas optis aktivitas antibiofilm air perasan jeruk nipis. Perlakuan

Rata-Rata Densitas Optis ± SD Pencegahan

Penghambatan

Penghancuran

Kontrol (-)

0.46 ± 0,02

0.46 ± 0,02

0.92 ± 0,06

Ekstrak 0.0625%

0.12 ± 0,05

0.20 ± 0,03

0.32 ± 0,10

Ekstrak 0.125%

0.15 ± 0,01

0.15 ± 0,06

0.35 ± 0,06

Ekstrak 0.25%

0.15 ± 0,04

0.10 ± 0,01

0.37 ± 0,04

Ekstrak 0.5%

0.15 ± 0,05

0.10 ± 0,09

0.37 ± 0,07

Ekstrak 1%

0.22 ± 0,04

0.11 ± 0,02

0.39 ± 0,13

Ekstrak 2%

0.18 ± 0,03

0.11 ± 0,02

0.48 ± 0,03

Ekstrak 4%

0.19 ± 0,06

0.12 ± 0,03

0.48 ± 0,02

Ekstrak 8%

0.26 ± 0,03

0.17 ± 0,07

0.48 ± 0,09

Persentase aktivitas antibiofilm air perasan jeruk nipis terhadap biofilm Staphylococcus aureus dapat dilihat pada tabel 4.4 dan gambar 4.4.

Tabel 4.4.Rata-rata % aktivitas antibiofilm air perasan jeruk nipis. Perlakuan

Rata-Rata % Aktivitas ± SD % Pencegahan

% Penghambatan

% Penghancuran

Ekstrak 0.0625%

66,23 ± 11,36

56,33 ± 5,99

64,86 ± 11,10

Ekstrak 0.125%

65,94 ± 0,75

67,75 ± 13,59

62,48 ± 6,33

Ekstrak 0.25%

62,40 ± 9,34

79,18 ± 3,01

59,55 ± 4,54

Ekstrak 0.5%

61,10 ± 10,50

77,80 ± 6,17

59,48 ± 7,74

Ekstrak 1%

61,10 ± 9,11

76,14 ± 4,14

57,75 ± 14,15

Ekstrak 2%

61,03 ± 5,86

75,20 ± 4,74

48,50 ± 3,01

Ekstrak 4%

53,15 ± 12,03

74,19 ± 6,21

48,25 ± 2,51

Ekstrak 8%

50,69 ± 6,54

62,55 ± 15,32

48,10 ± 9,99


60 50

64.86 62.48 59.55 59.48 57.75 48.50 48.25 48.10

70

56.33

Aktivitas Antibiofilm

80

66.23 65.94 62.40 61.10 61.10 61.03 53.15 50.69

90

67.75 77.18 77.80 76.14 75.20 74.19 62.55

28

Ekstrak 0.0625% Ekstrak 0.125% Ekstrak 0.25% Ekstrak 0.5%

40

Ekstrak 1%

30

Ekstrak 2 %

20

Ekstrak 4%

10

Ekstrak 8%

0 Pencegahan

Penghambatan

Penghancuran

Gambar 4.4.Grafik persentase aktivitas antibiofilm air perasan jeruk nipis terhadap biofilm S. aureus Uji pencegahan pembentukan biofilm S. aureus menunjukkan bahwa air perasan jeruk nipis memiliki aktivitas dalam mencegah pembentukan biofilm. Pada uji ini diketahui microplate yang digunakan berbahan dasar polystyrene yang bersifat lipofilik. Air perasan jeruk nipis diketahui mengandung minyak atsiri yang juga bersifat lipofilik sehingga ketika air perasan jeruk nipis dibuang diduga minyak atsiri masih menempel pada permukaan microplate sehingga dapat mencegah pembentukan biofilm. Grafik pada gambar 4.4 menunjukkan bahwa pada uji pencegahan pembentukan biofilm S.aureus, semakin besar konsentrasi air perasan jeruk nipis maka semakin kecil aktivitasnya (berbanding terbalik). Hal ini diduga terjadi karena semakin kecil konsentrasi air perasan jeruk nipis maka semakin besar kemampuan dari senyawa aktifnya untuk berpenetrasi ke dalam bakteri sehingga kemampuan pencegahannya semakin besar. Belum diketahui secara pasti mekanisme dari pencegahan pembentukan biofilm karena penelitian mengenai uji pencegahan pembentukan biofilm masih sangat sedikit dilakukan. Aktivitas yang paling baik pada uji pencegahan penbentukan biofilm S.aureus dihasilkan pada konsentrasi ekstrak 0,0625% dengan % pencegahan hingga mencapai 66,23% dan % pencegahan yang terendah pada konsentrasi ekstrak 8% dengan % pencegahan yang diperoleh sebesar 50,69%. Hasil uji 28 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

29

statistik One-way ANOVA menunjukkan

terdapat perbedaan yang bermakna

(signifikan) terhadap semua perlakuan (p ≤ 0,05). Kemudian dilanjutkan uji post hoc yang menjelaskan tentang perbandingan densitas optis antar perlakuan. Dari hasil uji post hoc, dinyatakan bahwa air perasan jeruk nipis dapat mencegah pembentukan biofilm S. aureus secara bermakna (signifikan) terhadap kontrol negatif. Densitas optis air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5%, 1% dan 2% tidak berbeda secara bermakna (signifikan). Hal ini menunjukkan bahwa air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5%,1% dan 2% memiliki aktivitas pencegahan yang sama. Begitupun pada konsentrasi 4% dan 8% yang tidak berbeda secara bermakna (signifikan). Namun pada konsentrasi 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5%, 1% dan 2% memiliki perbedaan yang bermakna (signifikan) terhadap konsentrasi 4% dan 8%. Hal ini menunjukkan bahwa air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5%, 1% dan 2% memiliki perbedaan aktivitas terhadap air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 4% dan 8%. Selanjutnya

pengujian

aktivitas

air

perasan

jeruk

nipis

terhadap

penghambatan pertumbuhan biofilm S. aureus. Grafik pada gambar 4.4 menunjukkan bahwa pola aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm mengikuti pola sigmoid. Hasil ini sesuai dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh Keerthiga & Anand (2015) pada uji penghambatan pertumbuhan biofilm S. aureus dengan menggunakan anggrek tanah (Geodorum densiflorum (Lam.) Schltr.) yang juga menunjukkan pola sigmoid. Hal ini diduga terjadi karena pada konsentrasi kecil, senyawa aktif dari ekstrak dapat berpenetrasi dengan baik ke dalam bakteri namun daya hambatnya kurang kuat sedangkan pada konsentrasi besar senyawa aktif dari ekstrak memiliki daya hambat yang kuat namun tidak dapat berpenetrasi dengan baik ke dalam bakteri sehingga aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm yang paling baik dihasilkan pada konsetrasi yang tidak terlalu kecil dan tidak teralu besar. Berbeda dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh Loresta, (2014) pada uji penghambatan pertumbuhan biofilm S. aureus dengan menggunakan ekstrak etanol daun kelor (Moringa oleifera) yang menunjukkan pola linier yaitu semakin


30

besar

konsentrasi

yang

digunakan

maka

semakin

besar

aktivitas

penghambatannya. Aktivitas terbaik pada uji penghambatan pertumbuhan biofilm S. aureus dengan menggunakan ekstrak etanol daun kelor adalah pada ekstrak 8% dengan % penghambatan hingga menacapai 40,22%, dimana aktivitas ini diduga terjadi karena adanya zat aktif tannin dan flavonoid yang terkandung di dalam ekstrak. Penelitian Vikram et al (2010) dan Taganna et al (2011) menunjukkan bahwa flavonoid dan tannin dapat menghambat quorum sensing yang merupakan proses penting dalam pembentukan biofilm. Penelitian yang dilakukan oleh Geethashri et al, (2014) juga menunujukkan pola linier pada uji penghambatan pertumbuhan biofilm S. aureus dengan menggunakan ekstrak Azadirachta indica, Mangifera indica, Piper betel, dan Piper ningrum. Aktivitas terbaik pada uji penghambatan pertumbuhan biofilm S. aureus dengan menggunakan ekstrak Azadirachta indica, Mangifera indica, Piper betel, dan Piper ningrum ditunjukkan pada ekstrak Azadirachta indica dengan konsentrasi ekstrak 30 mg/ml yang menghasilkan % penghambatan hingga mencapai 48,21% dan aktivitas terbaik pada uji penghambatan pertumbuhan biofilm S.aureus dengan menggunakan air perasan jeruk nipis adalah pada konsentrasi 0,25% dengan % penghambatan yang dihasilkan hingga mencapai 66,23%. Hal ini menunjukkan bahwa air perasan jeruk nipis memiliki aktivitas yang lebih baik dalam menghambat pertumbuhan biofilm dibandingkan dengan ekstrak etanol daun kelor, ekstrak Azadirachta indica, ekstrak Mangifera indica, ekstrak Piper betel, dan ekstrak Piper ningrum. Tingginya aktivitas penghambatan biofilm S. aureus karena memiliki banyak kandungan zat aktif yang memiliki aktivitas sebagai antibiofilm, yaitu flavonoid, saponin, asam sitrat dan minyak atsiri. Hasil uji statistik One-way ANOVA menunjukkan terdapat perbedaan yang bermakna (signifikan) pada semua perlakuan (p ≤ 0,05). Kemudian dilanjutkan uji post hoc yang menjelaskan tentang perbandingan densitas optis antar perlakuan. Dari hasil uji post hoc, dinyatakan bahwa air perasan jeruk nipis dapat menghambat pertumbuhan biofilm S. aureus secara bermakna (signifikan) terhadap kontrol negatif. Densitas optis air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 0,125%, 0,25%, 0,5%, 1%, 2%, dan 4% tidak berbeda secara bermakna


31

(signifikan). Hal ini menunjukkan bahwa air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 0,125%, 0,25%, 0,5%, 1%, 2%, dan 4% memiliki aktivitas penghambatan yang sama. Air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 0,0625% menunjukkan perbedaan yang signifikan terhadap konsentrasi 0,125%, 0,25%, 0,5%, 1%, 2%, 4%, dan 8%. Hal ini menunjukkan bahwa air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 0,0625% memiliki perbedaan aktivitas terhadap air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 0,125%, 0,25%, 0,5%, 1%, 2%, 4% dan 8%. Begitupun pada konsentrasi 8% yang menunjukkan perbedaan yang bermakna terhadap konsentrasi 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5%, 1%, 2%, dan 4%. Pengujian aktivitas air perasan jeruk nipis yang terakhir dilakukan terhadap penghancuran (degradasi) biofilm S. aureus. Kemampuan degradasi biofilm dari senyawa terkait dengan kemampuan penetrasi senyawa ke dalam biofilm yang terbentuk, yakni mampu berpenetrasi pada lapisan EPS atau lendir yang menyelubungi bakteri. Selain itu, kemampuan senyawa dalam mendegradasi biofilm adalah menghilangkan EPS pada biofilm yang sudah terbentuk (Ardani et al., 2010). Grafik pada gambar 4.4 menunjukkan bahwa semakin besar konsentrasi air perasan jeruk nipis maka semakin kecil aktivitas penghancurannya (berbanding terbalik). Hal ini diduga terjadi karena semakin kecil konsentrasi air perasan jeruk nipis maka semakin besar kemampuan dari senyawa aktifnya untuk berpenerasi ke dalam lapisan EPS atau lendir yang menyelubungi bakteri. Berbeda dengan hasil penelitian yang ditunjukkan oleh Yosephine (2013) pada uji penghancuran biofilm Streptococcus mutans dengan menggunakan minyak atsiri kemangi (Ocimum basilicum L.) yang menunjukkan pola linier yaitu semakin besar konsentrasi minyak atsiri maka semakin besar kemampuannya dalam mendegradasi biofilm. Semakin besar konsentrasi maka semakin besar kandungan zat aktif yang berfungsi sebagai antibiofilm, sehingga semakin besar pula potensinya dalam menghancurkan biofilm. Namun aktivitas degradasi yang dihasilkan oleh minyak atsiri kemangi tidak terlalu baik, dengan % aktivitas penghancuran paling baik yang dihasilkannya adalah 57,64% pada konsentrasi 0,2%. Rendahnya nilai % degradasi biofilm ini menunjukkan bahwa minyak atsiri kurang efektif sebagai agen pendegradasian biofilm. Kemungkinan penyebabnya adalah karena minyak


32

atsiri kemangi tidak memiliki kemampuan yang tinggi dalam berpenetrasi ke dalam lapisan EPS dan membersihkan lapisan EPS tersebut. Aktivitas air perasan jeruk nipis yang paling baik dalam menghancurkan biofilm Staphylococcus aureus dihasilkan pada konsentrasi 0,0625% dengan % penghancuran hingga mencapai 64,86% dan yang terendah dihasilkan pada konsentrasi 8% dengan % penghancuran 48,10%. Hasil ini menunjukkan bahwa air perasan jeruk nipis memiliki aktivitas penghancuran yang lebih baik jika dibandingkan minyak atsiri kemangi. Hasil uji statistik One-way ANOVA menunjukkan terdapat perbedaan yang bermakna (signifikan) pada semua perlakuan (p ≤ 0,05). Kemudian dilanjutkan uji post hoc yang menjelaskan tentang perbandingan densitas optis antar perlakuan. Dari hasil uji post hoc, dinyatakan bahwa air perasan jeruk nipis dapat menghancurkan biofilm S. aureus secara bermakna (signifikan) terhadap kontrol negatif. Densitas optis air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5% dan 1% tidak berbeda secara bermakna (signifikan). Hal ini menunjukkan bahwa air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5% dan 1% memiliki aktivitas penghancuran yang sama. Begitupun pada konsentrasi 2%, 4% dan 8% yang tidak berbeda secara bermakna (signifikan). Namun pada konsentrasi 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5% dan 1% memiliki perbedaan yang bermakna (signifikan) terhadap konsentrasi 2%, 4% dan 8%. Hal ini menunjukkan bahwa air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 0,0625%, 0,125%, 0,25%, 0,5% dan 1% memiliki perbedaan aktivitas terhadap air perasan jeruk nipis dengan konsentrasi 2%, 4% dan 8%.

4.7 Optimasi Aktivitas Penghambatan Selanjutnya dilakukan optimasi aktivitas terseleksi. Optimasi ini dilakukan pada uji antibiofilm yang menunjukkan hasil yang paling baik dengan menggunakan air perasan jeruk nipis. Dari pengujian yang dilakukan sebelumnya menunjukkan bahwa penghambatan pertumbuhan biofilm menghasilkan aktivitas yang paling baik. Namun, karena biofilm S. aureus biasanya sudah terbentuk terlebih dahulu maka optimasi dilakukan pada aktivitas penghambatan pertumbuhan dan penghancuran biofilm.


33

Optimasi dilakukan dengan menggunakan metode Response Surface Analysis (RSA) terhadap 3 faktor yaitu suhu, konsentrasi dan waktu inkubasi. 250C - 500C, rentang

Rentang suhu yang digunakan pada uji ini adalah

konsentrasi yang digunakan adalah 0,0625% - 8% dan rentang waktu inkubasi yang digunakan adalah 1 – 4 hari. Setelah dioptimasi, didapatkan hasil sebanyak 20 pasang dari ketiga faktor yang harus dilakukan uji aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm S. aureus. Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan (triplo). Hasil uji aktivitas terseleksi dianalisa menggunakan RSA untuk mengetahui kondisi optimal yang menghasilkan aktivitas paling baik.Kemudian diperoleh hasil (contour plot) yang menunjukkan suhu, konsentrasi dan waktu yang optimal dalam menghasilkan aktivitas antibiofilm yang paling baik. Hasil contour plot dari % penghambatan terhadap waktu inkubasi dan suhu pada konsentrasi 0,0625% dapat dilihat pada gambar 4.5. Contour Plot of %PENGHAMBATAN vs WAKTU INKUBASI, SUHU 4.0

%PENGHAMBATAN < 40 40 – 45 45 – 50 50 – 55 55 – 60 60 – 65 > 65

WAKTU INKUBASI

3.5 3.0

Hold Values KONSENTRASI 0.0625

2.5 2.0 1.5 1.0 25

30

35

40

45

50

SUHU

Gambar 4.5.Contour plot dari % penghambatan vs konsentrasi dan suhu. Countor plot pada RSA berwana biru hingga hijau tua. Kondisi optimal ditandai dengan warna hijau tua pada contour plot. Contour plot dari % penghambatan terhadap waktu inkubasi dan suhu pada konsentrasi 0,0625% menunjukkan bahwa waktu inkubasi tidak mempengaruhi aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm dan suhu optimum dalam menghambat pertumbuhan biofilm adalah pada suhu ± 270C - 410C. Hasil contour plot dari % penghambatan terhadap waktu inkubasi dan konsentrasi pada suhu 250C dapat dilihat pada gambar 4.6.


34

Contour Plot of %PENGHAMBATAN vs WAKTU INKUBASI, KONSENTRASI 4.0

%PENGHAMBATAN < 55 55 – 60 60 – 65 65 – 70 70 – 75 75 – 80 > 80

WAKTU INKUBASI

3.5 3.0

Hold Values SUHU 25

2.5 2.0 1.5 1.0

1

2

3 4 5 KONSENTRASI

6

7

8

Gambar 4.6.Contour plot dari % penghambatan vs waktu inkubasi dan konsentrasi. Contour plot dari % penghambatan terhadap waktu inkubasi dan konsentrasi pada suhu 250C menunjukkan bahwa semakin besar konsentrasi maka semakin besar aktivitasnya sedangkan waktu inkubasi tidak mempengaruhi aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm. Dari hasil optimasi aktivitas penghambatan didapatkan kondisi optimal untuk aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm Staphylococcus aureus adalah pada suhu 27,270C, dengan konsentrasi 8% dan waktu inkubasi selama 1 hari. Kemudian

dilakukan

pengujian

dengan

kondisi

tersebut

dan

hasilnya

dibandingkan dengan kontrol negatif dan kontrol positif. Kontrol negatif yang digunakan adalah suspensi bakteri tanpa penambahan media dan air perasan jeruk nipis sedangkan kontrol positif untuk uji penghambatan pertumbuhan biofilm menggunakan klorin.Karna tidak ada inkubator dengan suhu 27,270C maka pengujian dilakukan disuhu ruang ±250C. Menurut Heins et al (1995), suhu ruang berkisar antara 230C -270C. Persentase aktivitas penghambatan kondisi optimal yang dibandingkan dengan kontrol positif dapat dilihat pada tabel 4.5 dan gambar 4.6. Tabel 4.5. Rata-rata densitas optis uji penghambatan biofilm kondisi optimal Kelompok Perlakuan Rata-Rata Densitas Optis ± SD Kontrol (-)

0.55 ± 0.03

Ekstrak 8%

0.12 ± 0.06

Kontrol (+)

0.18 ± 0.05


35

% Penghambatan

80

78.42

75 70

66.49

65 60 Ekstrak 8%

Klorin (Kontrol +)

Sampel Uji Gambar 4.6.Persentase aktivitas penghambatan kondisi optimal. Hasil pengujian aktivitas air perasan jeruk nipis kondisi optimal terhadap penghambatan pertumbuhan biofilm S. aureus menunjukkan bahwa ekstrak air perasan jeruk nipis memberikan hasil yang lebih baik terhadap penghambatan pertumbuhan biofilm S. aureus dibandingkan dengan kontrol positif. Hasil uji statistik One-way ANOVA menunjukkan

terdapat perbedaan yang bermakna

(signifikan) pada semua perlakuan (p ≤ 0,05). Kemudian dilanjutkan uji post hoc yang menjelaskan tentang perbandingan densitas optis antar perlakuan. Dari hasil uji post hoc, dinyatakan bahwa air perasan jeruk nipis dapat menghambat pertumbuhan biofilm S. aureus secara bermakna (signifikan) terhadap kontrol negatif dan kontrol positif.

4.8 Optimasi Aktivitas Penghancuran (Degradasi) Optimasi aktivitas penghancuran dilakukan sama halnya dengan aktivitas penghambatan pertumbuhan hanya saja pada aktivitas menggunakan rentang waktu kontak yaitu 30-90 menit. Hasil contour plotdari % penghancuran terhadap waktu kontak dan suhu pada konsentrasi 0,0625% dapat dilihat pada gambar 4.7.


36

Contour Plot of % DEGRADASI vs WAKTU KONTAK, SUHU 90

% DEGRADA SI < 15 15 – 20 20 – 25 25 – 30 30 – 35 35 – 40 > 40

WAKTU KONTAK

80 70 60

Hold Values KONSENTRASI 0.0625

50 40 30 25

30

35

40

45

50

SUHU

Gambar 4.7.Contour plot dari % penghancuran vs waktu kontak dan suhu

Contour plotdari % penghancuran terhadap waktu kontak dan suhu pada konsentrasi 0,0625% menunjukkan bahwa suhu optimum dalam penghancuran biofilm adalah pada suhu ±250C - 410C. Sedangkan untuk waktu kontak, semakin lama waktu kontaknya maka semakin kecil aktivitasnya. Hasil contour plot dari % penghancuran terhadap waktu kontak dan konsentrasi pada suhu 250C dapat dilihat pada gambar 4.8.

Contour Plot of % DEGRADASI vs WAKTU KONTAK, KONSENTRASI 90

% DEGRADA SI < 0 0 – 10 10 – 20 20 – 30 30 – 40 > 40

WAKTU KONTAK

80 70

Hold Values SUHU 25

60 50 40 30

1

2

3 4 5 KONSENTRASI

6

7

8

Gambar 4.8.Contour plot dari % penghancuran vs waktu kontak dan konsentrasi

Contour plot dari % penghancuran terhadap waktu kontak dan konsentrasi pada suhu 250C menunjukkan bahwa konsentrasi yang paling baik adalah pada


37

konsentrasi kecil (0,0625%) dan besar (8%). Sedangkan untuk waktu kontak, semakin lama waktu kontaknya maka semakin kecil aktivitasnya. Dari hasil countor plot pada optimasi aktivitas penghancuran didapatkan kondisi optimal untuk aktivitas penghancuran biofilm Staphylococcus aureus adalah pada suhu 27,270C, dengan konsentrasi 8% dan waktu inkubasi selama 30 menit. Setelah diketahui kondisi optimal dalam menghasilkan aktivitas antibiofilm yang paling baik, kemudian dilakukan pengujian dengan kondisi tersebut dan hasilnya dibandingkan dengan kontrol negatif dan kontrol positif. Kontrol negatif yang digunakan adalah suspensi bakteri tanpa penambahan media dan air perasan jeruk nipis sedangkan kontrol positif untuk uji penghancuran biofilm menggunakan biorem. Karna tidak ada inkubator dengan suhu 27,270C maka pengujian dilakukan disuhu ruang ±250C. Densitas Optis dan persentase aktivitas penghancuran kondisi optimal yang dibandingkan dengan kontrol positif dapat dilihat pada tabel 4.6 gambar 4.9.

Tabel 4.6. Rerata densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm kondisi optimal Kelompok Perlakuan Rata-Rata Densitas Optis ± SD 0.92 ± 0.06

Ekstrak 8%

0.24 ± 0.09

Kontrol (+)

0.35 ± 0.06

% Penghancuran

Kontrol (-)

52.57

60

43.62 40 20 0 Ekstrak 8%

BIOREM (Kontrol +)

Sampel Uji Gambar 4.9.Hasil uji penghancuran kondisi optimal. 37 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

38

Hasil pengujian aktivitas air perasan jeruk nipis kondisi optimal terhadap penghancuran (degradasi) biofilm S. aureus memberikan hasil yang lebih baik dibandingkan dengan kontrol positif. Hasil uji statistik One-way ANOVA menunjukkan

terdapat perbedaan yang bermakna (signifikan) (p ≤ 0,05).

Kemudian dilanjutkan uji post hoc yang menjelaskan tentang perbandingan densitas optis antar perlakuan. Dari hasil uji post hoc, dinyatakan bahwa air perasan jeruk nipis dapat menghancurkan biofilm S. aureus secara bermakna (signifikan) terhadap kontrol negatif tetapi tidak bermakna (signifikan) terhadap kontrol positif.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 KESIMPULAN 1. Air perasan jeruk nipis (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle) memiliki aktivitas dalam mencegah pembentukan, menghambat pertumbuhan dan menghancurkan (degradasi) biofilm Staphylococcus aureus. 2. Air perasan jeruk nipis (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle) memberikan aktivitas paling baik dalam menghambat pertumbuhan biofilm Staphylococcus aureus. 3. Berdasarkan hasil penelitian ini air perasan jeruk nipis memiliki aktivitas paling baik dalam penghambatan pertumbuhan biofilm pada konsentrasi 8%, suhu 27,270C dan waktu inkubasi selama 1 hari, sedangkan pada penghancuran biofilm pada konsentrasi 8%, suhu 27,270C dan waktu kontak selama 30 menit.

5.2 SARAN 1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengidentifikasi senyawa aktif yang berfungsi sebagai antibiofilm dalam air perasan jeruk nipis (Citrus aurantifolia (Christm) Swingle). 2. Untuk penelitian selanjutnya sebaiknya air perasan jeruk nipis diuapkan atau di freez dry.


40

DAFTAR PUSTAKA

Abdelhady, Wessam, Arnold S. Bayer, Kati Seidl, Cynthia c. Nast, Megan R. Keidrowski, Alexander R. Horswill, Michael R. Yeaman, dan Yan Q. Xiong. 2013. Reduced Vancomycin Suspentibility in an In Vitro CatheterRelated Biofilm Model Correlates with Poor Therapeutic Outcomes in Experimental Endocarditis Due to Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 3:53, 1447-1454. Adela Novisa Charaswati. 2011. Uji Ekspresi Protein Rekombinan Jembrana Transmembran (JTEM-pGEX) Pada Berbagai Tingkat Kepadatan Sel Escherichia coli BL21. Departemen Biologi. Fakultas matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Indonesia. Alexander K, Strete D, Niles MJ. 2007. Organismal and Molecular Microbiology. Mc Graw Hill Higer Education. Ando, Eiichi, Koichi Monden, Ritsuko Mitsuhata, reiko Kariyama, dan Hiromi Kumon.

2004.

Biofilm

Formation

among

Methicillin-Resistant

Staphylococcus aureus Isolates from patients with Urinary Tract Infection. Acta Medica Okayama 58 : 4, 207-214. Archer, N.K., M.J. Mazaitis, J.W. Costerton, J.G. Leid, M.E. Powers, M.E Shirtliff. 2011. Staphylococcus Aureus Biofilms Properties, Regulation and Roles in Human Disease. Landes Bioscience. Virulence 2:5, 445-459. Ardani, M., Pratiwi, S. U. T., danHertiani, T., 2010, Efek Campuran Minyak Atsiri Daun Cengkeh dan Kulit Batang Kayu Manis sebagai Antiplak Gigi, Majalah Farmasi Indonesia, (21)3, 191-201. Behrman, Richard C, et al, 1999. Ilmu Kesehatan anak Nelson.Jakarta : EGC. Breed, Robert S., E.G.D. Murray, Nathan R. Smith. 1957. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology. Baltimore : Williams & Wilkins Company. Calabro, M.L., Galtieri, V., Cutroneo, P., Tommasini, S., Ficarra, P. and Ficarra, R. 2004. Study of the extraction procedure by experimental design and validation of a LC method for determination of flavonoids in Citrus bergamia juice. J Pharm Biomed Anal 35, 349– 363.

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

41

Carpentier B., Chassing D. 2004. Interaction in Biofilms Between Listeria Monocytogenos and Resident Microorganism From Food Industry Premises. International Journal of Food Microbiology. 97 : 111-122. Chanthaphon, Sumonrat, Suphitchaya C, Tipparat H. 2008. Antimicrobial activities of essential oils and crude extracts from tropical Citrus spp. against food-related microorganisms. Songklanakarin J. Sci. Technol. 125131. Chutia, M., Bhuyan, D. P., Pathak, M. G., Sarma, T. C., Boruah P. 2009. Antifungal activity and chemical composition of citrus reticulata blanco essential oil against phytopathogens from North East India. Food Science and Technology. 42: 777-780. Coleman, J.J., Ikechukwu Okoli, George P. Tegos, Edward B. Holson, Florence F. Wagner, Michael R. Hamblin, dan Eleftherios Mylonakis. 2010. Caracterization of Plant-Derived Saponin Natural Products Againts Candida Albicans. Dalimartha S. 2006. Atlas tumbuhan obat Indonesia: jilid 4. Jakarta: Puspa Swara. Darmadi. 2008. Infeksi Nosokomial : Problematika dan Pengendaliannya .Jakarta : Salemba Medika. Deby A,. 2010. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun (Coleus atropurpureus (L) Benth) Terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Pseudomonas aeruginosa Secara In Vitro. Program Studi Farmasi. FMIPA UNSRAT Manado, 95115. Desai J.D., Banat I.M. 1997. Microbial Production of Surfactans and Their Commercial Potential. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 61 : 147-164. Donlan, R. M. 2002. Biofilms: microbial life on surfaces. Emerging Infectious Diseases. 8 : 881–890. Dwidjoseputro, D. 1994. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : Djambatan. Faot Fernanda, Yuri Wanderley Cavalcanti, Martinna de Mendonca de Bertolini, Luciana de Rezende Pinto, Wander jose da Silva, dan Altair Antoninha Del Bel Cury. 2014. Efficacy of Citric Acid Denture Cleanser on the Candida albicans Biofilm Formed on Poly( Methyl Methacrylate) : Effects on


42

Residual Biofilm and Recolonization Process. BMC Oral Health 2014, 14 :77. George, O’Toole. 2011. Microtitier Dish Biofilm Formation Assay. Journal of Visualized Experiments. 47 : 2437. Geethashri, A., R. Manikandan, B. Ravishankar, A. Veena Shetty. 2014. Comparative evaluation of biofilm suppression by plant extract on oral pathogenic bacteria. Journal of Applied Pharmaceutial Science, 4 (03), 020023. Heins, Michael, Wolfgang Heil, dan Wolfgang Withold. 1995. Storage of serum or whole blood samples? Effects of time and temperature on 22 serum analytes. Eur J Clin Chem Clin biochem 33:231-238. Hoiby, N., T. Bjarnsholt, M. Givskov, S. Molin, O. Ciofu. 2010. Antibiotic resistance of bacterial biofilms. Int J Antimicrob Agents. (Abstr.); 35(4):322-32. Jawetz, E, et al, 1995. Mikrobiologi Kedokteran Edisi 20. Jakarta : EGC. Joyce, James. 2008. Prinsip-Prinsip Sains Untuk Keperawatan. Jakarta : Erlangga. Kaplan, J. B. 2010. Biofilm Dispersal : Mechanisms, Clinical Implications, and Potential Therapeutic Uses. Journal of Dental Research. 89(3) 305-218. Keerthiga M., Anand S.P., 2015. Anti-infective and anti-biofilm activity of Geodorum densiflorum (Lam.) Schltr against Methicillin resistant and sensitive Staphylococcus aureus. Advances in Aplied Science Research, 6(5): 43-46. Kudva I.T., Jelacic S., Tarr P.I., Youderian P., Hovde C.J. 1999. Biocontrol of Escherichia coli O157 with O157-specific bacteriophages. Applied and Environmental Microbiology.65: 3767-3773. Lee, J-H., J.H. Park, H.S. Cho, S.W. Joo, M.H. Cho, J. Lee. 2013. Anti-biofilm Activities of Quercetin and Tannic Acid Against Staphylococcus aureus. Biofouling: The Journal of 7 Bioadhesion and Biofilm Research. 29 : 5. Loresta, Sonya, Sri Murwani, Pratiwi Trisunuwati. 2014. Efek ekstrak etanol daun kelor (Moringa oleifera) terhadap pembentukan biofilm Staphylococcus


43

aureus secara in vitro. Program Studi Kedokteran Hewan. Universitas Brawijaya. Manuel Simoes, Lucia C. Simoes dan Maria J. Vieira. 2010. A review of current and emergent biofilm control strategies. 43: 573-583. Mardiastuti, H.W, et al. 2007. Emerging Resistance Pathogen : Situasi Terkini di Asia,Eropa, Amerika Serikat, Timur Tengah dan Indonesia. 57: 75-79. Meng Chen, Qingsong Yu dan Hongmin Sun. 2013. Novel Strategies for the Prevention and Treatment of Biofilm Related Infections. 14: 18488-18501. Nindhita Retno Pradani. 2012. Uji Aktivitas Antibakteri Air Perasan Jeruk Nipis (Citrus

aurantifolia,

Swingle)

Terhadap

Pertumbuhan

Bakteri

Staphylococcus aureus Secara In Vitro. Jurusan Kedokteran. Fakultas Kedokteran Universitas Jember. Nitschke M., Costa S.G.V.A.O. 2007. Biosurfactans in Food Industry. Trends in Food Science and Technology. 18 : 252-259. Pertiwi, Nursitasari. 2010. Uji Aktivitas Antibakteri dan Mekanisme Hambat Ekstrak Air Campuran Daun Piper bettle L Terhadap Bakteri Uji. Jurusan Farmasi. Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Peterson, Julia J., Gary R. Beecher, Seema A. Bhagwat, Johanna T. dwyer, E. Gebhardt, David B. Haytowiz, Joanne M. Holden. 2006. Falvanones in grapefruit, lemons, and limes : A compilation and review of the data from the analytical literature. Journal of Food Compotition and Analyisis 19 (2006) S74-S80. Prakash B., B.M. Veeregowda and G. Krishnappa. 2003. Biofilms: A Survival Strategy of Bacteri. Current Sci.85: 1299-1307. Prasasti D, Hertiani T. 2010. Potensi Campuran Minyak Atsiri Rimpang Temulawak dan Daun Cengkeh Sebagai Inhibitor Plak Gigi. The Journal of Indonesia Medical Plant. Vol 3 (2). Potter & Perry. 2005.Buku Ajar Fundamental Keperawatan: Konsep, Proses, dan Praktik, Jakarta: EGC.


44

Rahardjo, Agustinus Hantoro Djoko. 2012. Efektivitas Jeruk Nipis dalam Menurunkan Bakteri Salmonella dan Escherichia coli pada Dada Ayam Broiler. IJAS 2 : 3, 91-94 Ranganathan Vasudevan. 2014. Biofilms: Microbial Cities of Scientific Significance. 1 : 3. Rodrigues L. R., Van Der Mei H.C., Texeira J. A., Oliveira R. 2004. Biosurfactan from Lactococcus lactis 53 Inhibits Microbial Adhesion on Silicone Rubber. Applied Microbiology and Biotechnology 66 : 306-311. Rossland E., Langsrud T., Granum P.E., Sorhaug T. 2005. Production of antimicrobial metabolites by strains of Lactobacillus or Lactococcus cocultured with Bacillus cereus in milk. International Journal of Food Microiology. 98 : 193-200. Ryan, K.J., J.J. Champoux, S. Falkow, J.J. Plonde, W.L. Drew, F.C. Neidhardt, and C.G. Roy. 1994. Medical Microbiology An Introduction to Infectious Diseases. 3rd ed. Connecticut: Appleton&Lange. Sabiston, David C 1995. Buku Ajar Bedah. Jakarta : EGC. Sandasi, Leonard CM, Viljoen A M. 2010. The In Vitro Antibiofilm Activity of Selected Culinary Herb and Medical Plants Againt Listeria monocytogenes. Letters in Apllied Microbiology (50) : 30-35. Saraf, S. 2006. Textbook of oral pathology. USA: Jeypee Brothers Publisher. Sarwono B. 2006. Khasiat dan Manfaat Jeruk Nipis. Jakarta: Agromedia Pustaka. Sethpakdee, S. 2002. Citrus aurantifolia, In : Adible Fruit and Nut: Porsea Sent Resources Of South East Asia. 2 : 126-128. Simoes M.,Simoes L.C., Machado I., Pereira M.O., Viera M.J. 2006. Control of flow-generated biofilms using surfactans – evidence of resistance and recovery. Food and Bioproducts Processing. 84 : 338-345. Suriawira, Unus. 1995. Mikrbiologi Dasar. Jakarta : Parpasinas Sunar. Sutedjo, Mulmulyani., A. E. kartapoera, dan S. Sastroatmojo. 1991. Mikrobiologi Tanah. Jakarta : Rineka Cipta. Syamsuhidayat, S dan J.R. Hutape.1991. Inventasris Tanaman Obat Indonesia. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan. DepKes RI. Jakarta. 144.


45

Taganna, J.C., J.P. Quanico, R.M. Perono, E.C. Amor, W.L. Rivera. 2011. Tannin rich fraction from terminalia catappa inhibits quorum sensing (QS) in Chromobacterium violaceum and the QS-controlled biofilm maturation and lasA

Staphylolytic

activity

in

Pseudomonas

aeruginosa.

Journal

Ethnopharmacol. 134(3) : 865-871. Tait K., Sutherland I.W. 1998. Antagonistic interactions amongst bacteriocin producing enteric bacteria in dual species biofilms. Journal of Applied Microbiology. 93 : 345-352. Tiwari, Kumar, Kaur Mandeep, Kaur Gurpreet & Kaur Harleem. 2011. Phytochemical Screening and Extraction : A Riview. Internationale Pharmaceutica Scienca vol. 1 : issues 1. Vikram, A., G.K. Jayaprakasha, P.R. Jesudhasan, S.D. Pillai, dan B.S. Patil. 2009. Upression of Bacterial Cell-Cell Signalling Biofilm Formation and Type III Secretion System by Citrus Flavonoids. Journal of Applied Microbiology, 109(2010) 515-527. Volk. 1993. Mikrobiologi Dasar. Jakarta : Penerbit Erlangga. Vuong C, & Otto M. 2002. Staphylococcus epidermidis infections. Microbes Infect 4 (2002) 481–489. Warsa, U.C. 1994. Staphylococcus dalam Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran. Edisi Revisi. Jakarta : Penerbit Binarupa Aksara. Yosephine, Ardiana Dewi, Martha Purnami Wulanjati, Teuku Nanda Saifullah, dan Puji Astuti. 2013. Mouthwash Formulation of Basil Oil (Ocimum basilicumL.) and In Vitro Antibacterial and Antibiofilm Activities Againts Streptococcus Mutans. Traditional Medicine Journal, 18(2), 2013. Yunus, L. 2000. Pembentukan Biofilm Oleh Salmonella blockey Pada Permukaan Stainless Steel Serta Pengaruh Sanitasi Terhadap Pembentukan Kembali Biofilm Baru. IPB.


46

Lampiran 1. Skema Metode Penapisan Fitokimia a. Alkaloid

b. Fenolik


47

c. Triterpenoid/Steroid

d. Hidoro kuinon


48

Lampiran 2. Hasil Determinasi


49

Lampiran 3. Hasil Penapisan fitokimia


50

Lampiran 4. Alat dan Bahan

Mikroskop

Timbangan

Oven

Vortex

Mikropipet

Mikrowave

Inkubator

Kulkas

analitik

Autoklaf

Spektrometri

Sentrifugasi

Mikroplate reader


51

Panci dan kompor

Mikroplate

Mikropipet tube

LAF

Jeruk nipis CaCl2

Bahan

Pewarnaan

Kristal Violet

Gram

Bahan media LB Biorem

Etanol 96%

Bahan media HTR


52

Lampiran 5. Hasil Pembuatan Ekstrak a. Ekstrak Jeruk Nipis 100%

b. Variasi Konsentrasi Ekstrak Sebelum RSA

c. Variasi Konsentrasi Ekstrak Setelah RSA


53

Lampiran 6. Hasil Karakterisasi Bakteri Staphylococcus aureus. No

Karakterisasi

1

Klingler

2

Hasil

Keterangan

Iron

Bakteri 6 dan 7 menghasilkan

Agar (Deteksi

warna kehitaman pada dasar

H2S)

tempat penusukkannya.

Media Pelarut

Bakteri 6 dapat melarutkan

Fosfat

fosfat

(Fosfatase)

dibandingkan

paling

baik

dengan

6

bakteri lainnya, hal ini dapat dilihat dari zona bening yang dihasilkan oleh bakteri ini.

3

4

Susu

Skim

Bakteri

6

membentuk

20%

gumpalan (koagulasi) dengan

(Koagulase)

baik.

Penambahan

Semua bakteri menghasilkan

H2O2

gelembung

(Katalase)

3%

udara

setelah

penambahan H2O2 3%.


54

Lampiran 7. Hasil Uji Pertumbuhan Biofilm Staphylococcus aureus.

Waktu

Densitas Optis 1

2

3

Rata-Rata

Hari 1 100/100

0.444

0.489

0.496

0.476

Hari 1 150/50

0.593

0.59

0.595

0.593

Hari 1 200

0.298

0.282

0.29

0.29

Hari 2 100/100

0.798

0.722

0.664

0.728

Hari 2 150/50

0.517

0.48

0.65

0.549

Hari 2 200

1.431

1.422

1.158

1.337

Hari 3 100/100

0.264

0.35

0.324

0.313

Hari 3 150/50

1.099

0.985

1.008

1.031

Hari 3 200

1.224

1.223

1.119

1.189

Hari 4 100/100

0.33

0.377

0.31

0.326

Hari 4 150/50

0.583

0.557

0.588

0.576

Hari 4 200

0.447

0.482

0.419

0.449


55

Lampiran 8. Hasil Uji Aktivitas Antibiofilm Tabel 1. Data hasil uji pencegahan pembentukan biofilm Perlakuan

Densitas Optis 2 3 Rerata ± SD

1

% Pencegahan ± SD

Kontrol (-)

0,440

0,486

0,459

0,461±

-

Ekstrak 0,0625%

0,215

0,136

0,116

0,156±

66,233±

Ekstrak 0,125%

0,159

0,159

0,153

0,157±

65,944±

Ekstrak 0,25%

0,223

0,146

0,151

0,173±

62,401±

Ekstrak 0,5%

0,156

0,235

0,147

0,179±

61,099±

Ekstrak 1%

0,190

0,133

0,215

0,179±

61,099±

Ekstrak 2%

0,153

0,207

0,179

0,178±

61,027±

Ekstrak 4%

0,28

0,182

0,186

0,216±

53,145±

Ekstrak 8%

0,199

0,224

0,259

0,227±

50,687±

Tabel 2.Hasil Uji Penghambatan Pertumbuhan Biofilm Perlakuan

Densitas Optis

% Penghambatan±

1

2

3

Rata-Rata± SD

SD

Kontrol (-)

0,440

0,486

0,459

0,461±

-

Ekstrak 0,0625%

0,225

0,208

0,171

0,201±

56,327±

Ekstrak 0,125%

0,221

0,113

0,112

0,149±

67,751±

Ekstrak 0,25%

0,104

0,104

0,080

0,096±

79,176±

Ekstrak 0,5%

0,135

0,089

0,083

0,102±

77,802±

Ekstrak 1%

0,098

0,132

0,100

0,110±

76,139±

Ekstrak 2%

0,138

0,110

0,095

0,114±

75,199±

Ekstrak 4%

0,122

0,146

0,089

0,119±

74,187±

Ekstrak 8%

0,248

0,162

0,108

0,173±

62,545±


56

Tabel 3. Hasil Uji Penghancuran (Degradasi) Biofilm

Kontrol (-)

1 0,857

Densitas Optis 2 3 0,978 0,930

Ekstrak 0,0625%

0,217

0,335

0,421

0,324±

64,861±

Ekstrak 0,125%

0,398

0,283

0,358

0,346±

62,477±

Ekstrak 0,25%

0,335

0,418

0,367

0,373±

59,552±

Ekstrak 0,5%

0,456

0,325

0,341

0,374±

59,479±

Ekstrak 1%

0,538

0,341

0,291

0,390±

57,746±

Ekstrak 2%

0,483

0,438

0,505

0,475±

48,501±

Ekstrak 4%

0,451

0,493

0,489

0,478±

48,248±

Ekstrak 8%

0,507

0,376

0,554

0,479±

48,104±

Perlakuan

Rerata ± SD 0,923±

% Penghancuran ± SD -


57

Lampiran 9. Hasil Uji Statistik Aktivitas Pencegahan Pembentukan Biofilm a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat kenormalan distribusi data densitas optis uji pencegahan pembentukan biofilm. Hipotesis : Ho : data densitas optis aktivitas pencegahan pembentukan biofilm terdistribusi normal Ha : data densitas optis aktivitas pencegahan pembentukan biofilm tidak terdistribusi normal Pengambilan Keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima

Tabel 11.1. Hasil uji normalitas One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Absorbansi N

27

Normal Parameters

a

Mean Std. Deviation

Most Extreme Differences

.21437 .097696

Absolute

.239

Positive

.239

Negative

-.165

Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed)

1.239 .093

a. Test distribution is Normal.

Keputusan : data densitas optis aktivitas pencegahan pembentukan biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0.05) b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : untuk melihat homogenitas dari data densitas optis aktivitas pencegahan pembentukan biofilm Hipotesis :


58

Ho : data densitas optis aktivitas pencegahan pembentukan biofilm bervariasi homogen Ha : data densitas optis aktivitas pencegahan pembentukan biofilm tidak bervariasi homogen Pengambilan keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima

Tabel 11.2. Hasil uji homogenitas Test of Homogeneity of Variances Densitas Optis Levene Statistic

df1

2.136

df2 8

Sig. 18

.086

Keputusan : data densitas optis aktivitas pencegahan pembentukan biofilm bervariasi homogen (p ≥ 0.05). c. Uji One-Way ANOVA Tujuan : untuk melihat data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm antar konsentrasi terdapat perbedaan secara bermakna atau tidak. Hipotesa : Ho : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm tidak berbeda secara signifikan Ha : data densitas optis aktivitas pencegahan pembentukan biofilm berbeda secara signifikan Pengambilan Keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima


59

Tabel 12.3. Hasil uji One-Way ANOVA ANOVA Densitas Optis Sum of Squares

df

Mean Square

Between Groups

.220

8

.028

Within Groups

.028

18

.002

Total

.248

26

F

Sig.

17.738

.000

Keputusan : data densitas optis aktivitas pencegahan pembentukan biofilm berbeda secara signifikan (p ≤ 0.05). d. Uji Post Hoc Tabel. 12.4. Hasil uji post hoc Multiple Comparisons Densitas Optis LSD (I)

(J)

Konsentrasi Konsentrasi Kontrol (-)

0.0625

95% Confidence Interval

Mean Difference (I-J)

Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

0.0625

.306000

*

.032165

.000

.23842

.37358

0.125

.304667

*

.032165

.000

.23709

.37224

0.25

.288333

*

.032165

.000

.22076

.35591

0.5

.282333

*

.032165

.000

.21476

.34991

1

.282333

*

.032165

.000

.21476

.34991

2

.282000

*

.032165

.000

.21442

.34958

4

.245667

*

.032165

.000

.17809

.31324

8

.234333

*

.032165

.000

.16676

.30191

Kontrol (-)

-.306000

*

.032165

.000

-.37358

-.23842

0.125

-.001333

.032165

.967

-.06891

.06624

0.25

-.017667

.032165

.590

-.08524

.04991

0.5

-.023667

.032165

.471

-.09124

.04391

1

-.023667

.032165

.471

-.09124

.04391

2

-.024000

.032165

.465

-.09158

.04358

4

-.060333

.032165

.077

-.12791

.00724


60

0.125

8

-.071667

*

.032165

.039

-.13924

-.00409

Kontrol (-)

-.304667

*

.032165

.000

-.37224

-.23709

.001333

.032165

.967

-.06624

.06891

0.25

-.016333

.032165

.618

-.08391

.05124

0.5

-.022333

.032165

.496

-.08991

.04524

1

-.022333

.032165

.496

-.08991

.04524

2

-.022667

.032165

.490

-.09024

.04491

4

-.059000

.032165

.083

-.12658

.00858

8

-.070333

*

.032165

.042

-.13791

-.00276

Kontrol (-)

-.288333

*

.032165

.000

-.35591

-.22076

0.0625

.017667

.032165

.590

-.04991

.08524

0.125

.016333

.032165

.618

-.05124

.08391

0.5

-.006000

.032165

.854

-.07358

.06158

1

-.006000

.032165

.854

-.07358

.06158

2

-.006333

.032165

.846

-.07391

.06124

4

-.042667

.032165

.201

-.11024

.02491

8

-.054000

.032165

.110

-.12158

.01358

Kontrol (-)

-.282333

*

.032165

.000

-.34991

-.21476

0.0625

.023667

.032165

.471

-.04391

.09124

0.125

.022333

.032165

.496

-.04524

.08991

0.25

.006000

.032165

.854

-.06158

.07358

1

.000000

.032165

1.000

-.06758

.06758

2

-.000333

.032165

.992

-.06791

.06724

4

-.036667

.032165

.269

-.10424

.03091

8

-.048000

.032165

.153

-.11558

.01958

Kontrol (-)

-.282333

*

.032165

.000

-.34991

-.21476

0.0625

.023667

.032165

.471

-.04391

.09124

0.125

.022333

.032165

.496

-.04524

.08991

0.25

.006000

.032165

.854

-.06158

.07358

0.5

.000000

.032165

1.000

-.06758

.06758

2

-.000333

.032165

.992

-.06791

.06724

4

-.036667

.032165

.269

-.10424

.03091

8

-.048000

.032165

.153

-.11558

.01958

0.0625

0.25

0.5

1


61

2

4

8

*

.032165

.000

-.34958

-.21442

0.0625

.024000

.032165

.465

-.04358

.09158

0.125

.022667

.032165

.490

-.04491

.09024

0.25

.006333

.032165

.846

-.06124

.07391

0.5

.000333

.032165

.992

-.06724

.06791

1

.000333

.032165

.992

-.06724

.06791

4

-.036333

.032165

.273

-.10391

.03124

8

-.047667

.032165

.156

-.11524

.01991

Kontrol (-)

-.245667

*

.032165

.000

-.31324

-.17809

0.0625

.060333

.032165

.077

-.00724

.12791

0.125

.059000

.032165

.083

-.00858

.12658

0.25

.042667

.032165

.201

-.02491

.11024

0.5

.036667

.032165

.269

-.03091

.10424

1

.036667

.032165

.269

-.03091

.10424

2

.036333

.032165

.273

-.03124

.10391

8

-.011333

.032165

.729

-.07891

.05624

Kontrol (-)

-.234333

*

.032165

.000

-.30191

-.16676

0.0625

.071667

*

.032165

.039

.00409

.13924

0.125

.070333

*

.032165

.042

.00276

.13791

0.25

.054000

.032165

.110

-.01358

.12158

0.5

.048000

.032165

.153

-.01958

.11558

1

.048000

.032165

.153

-.01958

.11558

2

.047667

.032165

.156

-.01991

.11524

4

.011333

.032165

.729

-.05624

.07891

Kontrol (-)

-.282000

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Lampiran 10. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penghambatan Pertumbuhan Biofilm a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat kenormalan distribusi data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm. Hipotesis :


62

Ho : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm terdistribusi normal Ha : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm tidak terdistribusi normal Pengambilan Keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima Tabel 11.1. Hasil uji normalitas One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Absorbansi N

27

Normal Parameters

a

Mean Std. Deviation


.16956 .114913

Absolute

.248

Positive

.248

Negative

-.218


1.288 .072


Keputusan : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0.05).

b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : untuk melihat homogenitas dari data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm Hipotesis : Ho : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm bervariasi homogen Ha : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm tidak bervariasi homogen Pengambilan keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak


63

Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima Tabel 11.2. Hasil uji homogenitas Test of Homogeneity of Variances Densitas Optis Levene Statistic

df1

2.385

df2 8

Sig. 18

.060

Keputusan : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm bervariasi homogen (p ≥ 0.05).

c. Uji One-Way ANOVA Tujuan : untuk melihat data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm antar konsentrasi terdapat perbedaan secara bermakna atau tidak. Hipotesa : Ho : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm tidak berbeda secara signifikan Ha : data densitas optis aktivitas pencegahan pembentukan biofilm berbeda secara signifikan Pengambilan Keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima

Tabel 12.3. Hasil uji One-Way ANOVA

ANOVA Densitas Optis Sum of Squares

df

Mean Square

Between Groups

.318

8

.040

Within Groups

.026

18

.001

Total

.343

26

F 27.769

Sig. .000

Keputusan : data densitas optis aktivitas pencegahan pembentukan biofilm berbeda secara signifikan (p ≤ 0.05).


64

d. Uji Post Hoc Tabel. 12.4. Hasil uji post hoc Multiple Comparisons Densitas Optis LSD (I)

(J)

Konsentrasi Konsentrasi kontrol (-)

0.0625

0.125

0.25



Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

0.0625

.260333

*

.030872

.000

.19547

.32519

0.125

.313000

*

.030872

.000

.24814

.37786

0.25

.365667

*

.030872

.000

.30081

.43053

0.5

.359333

*

.030872

.000

.29447

.42419

1

.351667

*

.030872

.000

.28681

.41653

2

.347333

*

.030872

.000

.28247

.41219

4

.342667

*

.030872

.000

.27781

.40753

8

.289000

*

.030872

.000

.22414

.35386

-.260333

*

.030872

.000

-.32519

-.19547

0.125

.052667

.030872

.105

-.01219

.11753

0.25

.105333

*

.030872

.003

.04047

.17019

0.5

.099000

*

.030872

.005

.03414

.16386

1

.091333

*

.030872

.008

.02647

.15619

2

.087000

*

.030872

.011

.02214

.15186

4

.082333

*

.030872

.016

.01747

.14719

8

.028667

.030872

.365

-.03619

.09353

kontrol (-)

kontrol (-)

-.313000

*

.030872

.000

-.37786

-.24814

0.0625

-.052667

.030872

.105

-.11753

.01219

0.25

.052667

.030872

.105

-.01219

.11753

0.5

.046333

.030872

.151

-.01853

.11119

1

.038667

.030872

.226

-.02619

.10353

2

.034333

.030872

.281

-.03053

.09919

4

.029667

.030872

.349

-.03519

.09453

8

-.024000

.030872

.447

-.08886

.04086

kontrol (-)

-.365667

*

.030872

.000

-.43053

-.30081


65

0.5

1

2

4

0.0625

-.105333

*

.030872

.003

-.17019

-.04047

0.125

-.052667

.030872

.105

-.11753

.01219

0.5

-.006333

.030872

.840

-.07119

.05853

1

-.014000

.030872

.656

-.07886

.05086

2

-.018333

.030872

.560

-.08319

.04653

4

-.023000

.030872

.466

-.08786

.04186

8

-.076667

*

.030872

.023

-.14153

-.01181

kontrol (-)

-.359333

*

.030872

.000

-.42419

-.29447

0.0625

-.099000

*

.030872

.005

-.16386

-.03414

0.125

-.046333

.030872

.151

-.11119

.01853

0.25

.006333

.030872

.840

-.05853

.07119

1

-.007667

.030872

.807

-.07253

.05719

2

-.012000

.030872

.702

-.07686

.05286

4

-.016667

.030872

.596

-.08153

.04819

8

-.070333

*

.030872

.035

-.13519

-.00547

kontrol (-)

-.351667

*

.030872

.000

-.41653

-.28681

0.0625

-.091333

*

.030872

.008

-.15619

-.02647

0.125

-.038667

.030872

.226

-.10353

.02619

0.25

.014000

.030872

.656

-.05086

.07886

0.5

.007667

.030872

.807

-.05719

.07253

2

-.004333

.030872

.890

-.06919

.06053

4

-.009000

.030872

.774

-.07386

.05586

8

-.062667

.030872

.057

-.12753

.00219

kontrol (-)

-.347333

*

.030872

.000

-.41219

-.28247

0.0625

-.087000

*

.030872

.011

-.15186

-.02214

0.125

-.034333

.030872

.281

-.09919

.03053

0.25

.018333

.030872

.560

-.04653

.08319

0.5

.012000

.030872

.702

-.05286

.07686

1

.004333

.030872

.890

-.06053

.06919

4

-.004667

.030872

.882

-.06953

.06019

8

-.058333

.030872

.075

-.12319

.00653

kontrol (-)

-.342667

*

.030872

.000

-.40753

-.27781

0.0625

-.082333

*

.030872

.016

-.14719

-.01747


66

8

0.125

-.029667

.030872

.349

-.09453

.03519

0.25

.023000

.030872

.466

-.04186

.08786

0.5

.016667

.030872

.596

-.04819

.08153

1

.009000

.030872

.774

-.05586

.07386

2

.004667

.030872

.882

-.06019

.06953

8

-.053667

.030872

.099

-.11853

.01119

kontrol (-)

-.289000

*

.030872

.000

-.35386

-.22414

0.0625

-.028667

.030872

.365

-.09353

.03619

0.125

.024000

.030872

.447

-.04086

.08886

0.25

.076667

*

.030872

.023

.01181

.14153

0.5

.070333

*

.030872

.035

.00547

.13519

1

.062667

.030872

.057

-.00219

.12753

2

.058333

.030872

.075

-.00653

.12319

4

.053667

.030872

.099

-.01119

.11853



67

Lampiran 11. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penghancuran (Degardasi) Biofilm a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat kenormalan distribusi data densitas optis aktivitas penghancuran biofilm. Hipotesis : Ho : data densitas optis aktivitas penghancuran biofilm terdistribusi normal Ha : data densitas optis aktivitas penghancuran biofilm tidak terdistribusi normal Pengambilan Keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima Tabel 11.1. Hasil uji normalitas One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Absorbansi N

27

Normal Parameters

a

Mean Std. Deviation


.46241 .185933

Absolute

.220

Positive

.220

Negative

-.130


1.143 .146


Keputusan : data densitas optis aktivitas penghancuran biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0.05).

b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : untuk melihat homogenitas dari data densitas optis aktivitas penghancuran biofilm Hipotesis : Ho : data densitas optis aktivitas penghancuran biofilm bervariasi homogen


68

Ha : data densitas optis aktivitas penghancuran biofilm tidak bervariasi homogen Pengambilan keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima Tabel 11.2. Hasil uji homogenitas Test of Homogeneity of Variances Densitas Optis Levene Statistic

df1

1.875

df2 8

Sig. 18

.128

Keputusan : data densitas optis aktivitas penghancuran bervariasi homogen (p ≥ 0.05).

c. Uji One-Way ANOVA Tujuan : untuk melihat data densitas optis aktivitas penghancuran biofilm antar konsentrasi terdapat perbedaan secara bermakna atau tidak. Hipotesa : Ho : data densitas optis aktivitas penghancuran biofilm tidak berbeda secara signifikan Ha : data densitas optis aktivitas penghancuran biofilm berbeda secara signifikan Pengambilan Keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima

Tabel 12.3. Hasil uji One-Way ANOVA ANOVA Densitas Optis Sum of Squares Between Groups

.795

df

Mean Square 8

.099

F 17.296

Sig. .000


69

Within Groups

.103

18

Total

.899

26

.006

Keputusan : data densitas optis aktivitas penghacuran biofilm berbeda secara signifikan (p ≤ 0.05). d. Uji Post Hoc Tabel. 12.4. Hasil uji post hoc Multiple Comparisons Densitas Optis LSD (I)

(J)

Konsentrasi Konsentrasi kontrol (-)

0.0625

(I-J)

Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

0.0625

.597333

*

.061905

.000

.46728

.72739

0.125

.575333

*

.061905

.000

.44528

.70539

0.25

.548333

*

.061905

.000

.41828

.67839

0.5

.547667

*

.061905

.000

.41761

.67772

1

.531667

*

.061905

.000

.40161

.66172

2

.446333

*

.061905

.000

.31628

.57639

4

.444000

*

.061905

.000

.31394

.57406

8

.442667

*

.061905

.000

.31261

.57272

kontrol (-)

-.597333

*

.061905

.000

-.72739

-.46728

0.125

-.022000

.061905

.726

-.15206

.10806

0.25

-.049000

.061905

.439

-.17906

.08106

0.5

-.049667

.061905

.433

-.17972

.08039

1

-.065667

.061905

.303

-.19572

.06439

2

-.151000

*

.061905

.025

-.28106

-.02094

-.153333

*

.061905

.023

-.28339

-.02328

-.154667

*

.061905

.022

-.28472

-.02461

-.575333

*

.061905

.000

-.70539

-.44528

.022000

.061905

.726

-.10806

.15206

0.25

-.027000

.061905

.668

-.15706

.10306

0.5

-.027667

.061905

.660

-.15772

.10239

4 8 0.125


Mean Difference

kontrol (-) 0.0625


70

0.25

0.5

1

2

1

-.043667

.061905

.490

-.17372

.08639

2

-.129000

.061905

.052

-.25906

.00106

4

-.131333

*

.061905

.048

-.26139

-.00128

8

-.132667

*

.061905

.046

-.26272

-.00261

kontrol (-)

-.548333

*

.061905

.000

-.67839

-.41828

0.0625

.049000

.061905

.439

-.08106

.17906

0.125

.027000

.061905

.668

-.10306

.15706

0.5

-.000667

.061905

.992

-.13072

.12939

1

-.016667

.061905

.791

-.14672

.11339

2

-.102000

.061905

.117

-.23206

.02806

4

-.104333

.061905

.109

-.23439

.02572

8

-.105667

.061905

.105

-.23572

.02439

kontrol (-)

-.547667

*

.061905

.000

-.67772

-.41761

0.0625

.049667

.061905

.433

-.08039

.17972

0.125

.027667

.061905

.660

-.10239

.15772

0.25

.000667

.061905

.992

-.12939

.13072

1

-.016000

.061905

.799

-.14606

.11406

2

-.101333

.061905

.119

-.23139

.02872

4

-.103667

.061905

.111

-.23372

.02639

8

-.105000

.061905

.107

-.23506

.02506

kontrol (-)

-.531667

*

.061905

.000

-.66172

-.40161

0.0625

.065667

.061905

.303

-.06439

.19572

0.125

.043667

.061905

.490

-.08639

.17372

0.25

.016667

.061905

.791

-.11339

.14672

0.5

.016000

.061905

.799

-.11406

.14606

2

-.085333

.061905

.185

-.21539

.04472

4

-.087667

.061905

.174

-.21772

.04239

8

-.089000

.061905

.168

-.21906

.04106

kontrol (-)

-.446333

*

.061905

.000

-.57639

-.31628

0.0625

.151000

*

.061905

.025

.02094

.28106

0.125

.129000

.061905

.052

-.00106

.25906

0.25

.102000

.061905

.117

-.02806

.23206

0.5

.101333

.061905

.119

-.02872

.23139


71

4

8

1

.085333

.061905

.185

-.04472

.21539

4

-.002333

.061905

.970

-.13239

.12772

8

-.003667

.061905

.953

-.13372

.12639

kontrol (-)

-.444000

*

.061905

.000

-.57406

-.31394

0.0625

.153333

*

.061905

.023

.02328

.28339

0.125

.131333

*

.061905

.048

.00128

.26139

0.25

.104333

.061905

.109

-.02572

.23439

0.5

.103667

.061905

.111

-.02639

.23372

1

.087667

.061905

.174

-.04239

.21772

2

.002333

.061905

.970

-.12772

.13239

8

-.001333

.061905

.983

-.13139

.12872

kontrol (-)

-.442667

*

.061905

.000

-.57272

-.31261

0.0625

.154667

*

.061905

.022

.02461

.28472

0.125

.132667

*

.061905

.046

.00261

.26272

0.25

.105667

.061905

.105

-.02439

.23572

0.5

.105000

.061905

.107

-.02506

.23506

1

.089000

.061905

.168

-.04106

.21906

2

.003667

.061905

.953

-.12639

.13372

4

.001333

.061905

.983

-.12872

.13139



72

Lampiran 12. Hasil Uji Aktivitas Penghambatan Pertumbuhan Biofilm Menggunakan Response Surface Analysis (RSA) a. Hasil optimasi aktivitas penghambatan Tabel 1. Hasil Optimasi Aktivitas Penghambatan No

Konsentrasi

Waktu

Suhu

% Penghambatan

1

0.0625

1

25

50,948

2

0.0625

1

50

44,808

3

0.0625

2,5

37,5

64,176

4

0.0625

4

25

55,929

5

0.0625

4

50

34,243

6

4.03125

1

37,5

77,642

7

4.03125

2,5

25

79,327

8

4.03125

2,5

37,5

67,864

9

4.03125

2,5

37,5

68,242

10

4.03125

2,5

37,5

67,171

11

4.03125

2,5

37,5

66,541

12

4.03125

2,5

37,5

68,305

13

4.03125

2,5

37,5

66,667

14

4.03125

2,5

50

29,596

15

4.03125

4

37,5

73,086

16

8

1

25

79,502

17

8

1

50

5,577

18

8

2,5

37,5

77,967

19

8

4

25

68,85

20

8

4

50

3,474


73

b. Hasil plot optimasi

Gambar 1. Plot optimasi aktivitas penghambatan


74

Lampiran 13. Hasil

Uji Aktivitas Penghancuran (Degradasi) Biofilm

Menggunakan Response Surface Analysis (RSA) a. Hasil optimasi aktivitas penghancuran (degradasi) Tabel 1. Hasil Optimasi Aktivitas Penghancuran. No

Konsentrasi

Waktu

Suhu

% Penghancuran

1

0.0625

30

25

41,704

2

0.0625

30

50

31,170

3

0.0625

60

37,5

28,849

4

0.0625

90

25

16,485

5

0.0625

90

50

9,789

6

4.03125

30

37,5

33,094

7

4.03125

60

25

4,346

8

4.03125

60

37,5

0,233

9

4.03125

60

37,5

0,699

10

4.03125

60

37,5

1,398

11

4.03125

60

37,5

-3,029

12

4.03125

60

37,5

7,979

13

4.03125

60

37,5

-13,454

14

4.03125

60

50

9,204

15

4.03125

90

37,5

11,624

16

8

30

25

45,245

17

8

30

50

27,719

18

8

60

37,5

20,275

19

8

90

25

10,648

20

8

90

50

-3,071


75

b. Hasil plot optimasi

Gambar 1. Plot optimasi aktivitas penghancuran (degradasi)


76

Lampiran 14. Data Hasil Uji Aktivitas Penghambatan Pertumbuhan Biofilm a. Pada suhu 250C, konsentrasi 0.0625% dan 8%, waktu inkubasi 1 hari Perlakuan

Densitas Optis

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

Kontrol (-)

0.553

0.571

0.564

0.563

-

Ekstrak 0.0625%

0.236

0.292

0.3

0.276

50.948

Ekstrak 8%

0.115

0.114

0.117

0.115

79.502

b. Pada suhu 37.5 0C, konsentrasi 4.03125%, waktu inkubasi 1 hari Perlakuan

Densitas Optis

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

Kontrol (-)

0.394

0.386

0.365

0.382

-

Ekstrak 4.03125%

0.077

0.098

0.081

0.085

77.642

c. Pada suhu 500C, konsentrasi 0.0625% dan 8%, waktu inkubasi 1 hari Perlakuan

Densitas Optis

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

Kontrol (-)

0.172

0.171

0.177

0.173

-

Ekstrak 0.0625%

0.088

0.099

0.1

0.096

44.808

Ekstrak 8%

0.161

0.162

0.168

0.164

5.577

d. Pada suhu 250C, konsentrasi 4.03125%, waktu inkubasi 2,5 hari Perlakuan

Densitas Optis

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

Kontrol (-)

0.725

0.663

0.639

0.676

-

Ekstrak 4.03125%

0.144

0.136

0.139

0.140

79.329

e. Pada suhu 370C, konsentrasi 4.03125%, waktu inkubasi 2,5 hari


77

Perlakuan

Densitas Optis

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

Kontrol (-)

0.522

0.519

0.546

0.529

-

Ekstrak 4.03125%

0.21

0.116

0.184

0.17

67.864

Ekstrak 4.03125%

0.247

0.101

0.156

0.168

68.242

Ekstrak 4.03125%

0.32

0.093

0.108

0.174

67.171

Ekstrak 4.03125%

0.132

0.304

0.095

0.177

66.541

Ekstrak 4.03125%

0.232

0.104

0.167

0.168

68.305

Ekstrak 4.03125%

0.152

0.19

0.187

0.176

66.667

f. Pada suhu 370C, konsentrasi 0.0625% dan 8%, waktu inkubasi 2,5 hari Perlakuan

Densitas Optis

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

Kontrol (-)

0.608

0.616

0.596

0.607

-

Ekstrak 0.0625%

0.209

0.208

0.235

0.217

64.176

Ekstrak 8%

0.136

0.133

0.132

0.134

77.967

g. Pada suhu 500C, konsentrasi 4.03125%, waktu inkubasi 2,5 hari Perlakuan

Densitas Optis 1

2

3

Rerata

% Penghambatan

Kontrol (-)

0.15

0.157 0.139

0.149

-

Ekstrak 4.03125%

0.103 0.105 0.106

0.105

29.596

h. Pada suhu 250C, konsentrasi 0.0625% dan 8%, waktu inkubasi 4 hari Perlakuan

Densitas Optis 1

2

3

Rerata

% Penghambatan


78

Kontrol (-)

0.404

0.367

0.359

0.377

-

Ekstrak 0.0625%

0.112

0.191

0.195

0.166

55.929

Ekstrak 8%

0.116

0.118

0.118

0.117

68.850

i. Pada suhu 370C, konsentrasi 4.03125%, waktu inkubasi 4 hari Perlakuan

Densitas Optis

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

Kontrol (-)

0.476

0.582

0.588

0.549

-

Ekstrak 4.03125%

0.12

0.124

0.199

0.148

73.086

j. Pada suhu 500C, konsentrasi 0.0625% dan 8%, waktu inkubasi 4 hari Perlakuan

Densitas Optis

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

Kontrol (-)

0.138

0.134

0.131

0.134

-

Ekstrak 0.0625%

0.086

0.089

0.09

0.088

34.243

Ekstrak 8%

0.126

0.129

0.134

0.130

3.474


79

Lampiran 15. Data Hasil Uji Aktivitas Penghancuran (Degradasi) Biofilm a. Pada suhu 250C, konsentrasi 0.0625% dan 8%, waktu kontak 30 menit Perlakuan

1 0.87

Densitas Optis 2 3 Rerata 0.852 0.875 0.866

0.533

0.448

0.533

0.505

41.702

0.517

0.488

0.417

0.474

45.245

% Penghambatan -

Kontrol (-) Ekstrak 0.0625% Ekstrak 8%

b. Pada suhu 37.5 0C, konsentrasi 4.03125%, waktu kontak 30 menit Perlakuan

1 0.951


0.578

0.72

% Penghambatan -

Kontrol (-) 0.661

0.653

33.094

Ekstrak 4.03125%

c. Pada suhu 500C, konsentrasi 0.0625% dan 8%, waktu kontak 30 menit Perlakuan

1 0.921


0.647

0.487

0.701

0.612

31.170

0.704

0.693

0.53

0.642

27.719

% Penghambatan -

Kontrol (-) Ekstrak 0.0625% Ekstrak 8%

d. Pada suhu 250C, konsentrasi 4.03125%, waktu kontak 60 menit Perlakuan

1 0.73


0.662

0.649

% Penghambatan -

Kontrol (-) 0.67

0.660

4.346

Ekstrak 4.03125%


80

e. Pada suhu 370C, konsentrasi 4.03125%, waktu kontak 60 menit Perlakuan

Densitas Optis

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

Kontrol (-)

0.557

0.594

0.566

0.572

-

Ekstrak 4.03125%

0.602

0.48

0.631

0.571

0.233

Ekstrak 4.03125%

0.558

0.555

0.592

0.568

0.699

Ekstrak 4.03125%

0.585

0.554

0.554

0.564

1.398

Ekstrak 4.03125%

0.584

0.554

0.631

0.590

-3.029

Ekstrak 4.03125%

0.231

0.682

0.667

0.525

7.979

Ekstrak 4.03125%

0.667

0.643

0.638

0.650

-13.454

f. Pada suhu 370C, konsentrasi 0.0625% dan 8%, waktu kontak 60 menit Perlakuan Kontrol (-) Ekstrak 0.0625% Ekstrak 8%

Densitas Optis

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

0.697

0.747

0.667

0.704

-

0.595

0.484

0.423

0.501

28.849

0.61

0.552

0.521

0.561

20.275

g. Pada suhu 500C, konsentrasi 4.03125%, waktu kontak 60 Perlakuan Kontrol (-) Ekstrak 4.03125%

Densitas Optis

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

0.737

0.804

0.871

0.804

-

0.734

0.684

0.772

0.73

9.204

h. Pada suhu 250C, konsentrasi 0.0625% dan 8%, waktu kontak 90 menit


81

Perlakuan Kontrol (-) Ekstrak 0.0625% Ekstrak 8%

Absorbansi

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

0.5

0.522

0.537

0.520

-

0.439

0.442

0.421

0.434

16.485

0.521

0.516

0.356

0.464

10.648

i. Pada suhu 370C, konsentrasi 4.03125%, waktu kontak 90 menit Perlakuan Kontrol (-) Ekstrak 4.03125%

Absorbansi

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

0.896

0.841

0.852

-

0.896

0.666

0.799

0.753

11.624

0.666

j. Pada suhu 500C, konsentrasi 0.0625% dan 8%, waktu kontak 90 menit Perlakuan Kontrol (-) Ekstrak 0.0625% Ekstrak 8%

Absorbansi

% Penghambatan

1

2

3

Rerata

0.812

0.632

0.64

0.695

-

0.513

0.684

0.683

0.627

9.789

0.722

0.702

0.724

0.716

-3.071


82

Lampiran 16. Hasil Uji Aktivitas Penghambatan Biofilm (Setelah pemberian Kristal Violet) Kondisi optimal Kondisi optimal : Pada suhu 250C, konsentrasi 8%, waktu inkubasi 1 hari Tabel 1. Data uji aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm kondisi optimal Densitas Optik

Perlakuan Kontrol (-) Ekstrak 8% Kontrol (+)

1 0.464 0.183 0.251

2 0.524 0.263 0.269

3 0.509 0.264 0.324

RataRata 0.499 0.236 0.281

% Penghancuran

52.572 43.621


83

Lampiran 17. Hasil Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm (Setelah Pemberian Kristal Violet) Kondisi optimal Kondisi optimal : Pada suhu 250C, konsentrasi 8%, waktu kontak 30 menit Tabel 1. Data uji aktivitas penghancuran (degradasi) biofilm kondisi optimal Densitas Optik

Perlakuan

% Penghancuran

1

2

3

RataRata

Kontrol (-)

0.515

0.571

0.564

0.550

Ekstrak 8%

0.125

0.114

0.117

0.119

78.424

Kontrol (+)

0.167

0.237

0.149

0.184

66.485


84

Lampiran 18. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penghambatan Pertumbuhan Biofilm Kondisi Optimal a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat kenormalan distribusi data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm kondisi optimal. Hipotesis : Ho : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm kondisi optimal terdistribusi normal Ha : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm kondisi optimal tidak terdistribusi normal Pengambilan Keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima

Tabel 11.1. Hasil uji normalitas One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Absorbansi N Normal Parameters

9 a

Mean Std. Deviation


.28433 .203200

Absolute

.274

Positive

.274

Negative

-.205

Kolmogorov-Smirnov Z

.821

Asymp. Sig. (2-tailed)

.510


Keputusan : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm kondisi optimal terdistribusi normal (p ≥ 0.05) b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : untuk melihat homogenitas dari data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm kondisi optimal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

85

Hipotesis : Ho : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm kondisi optimal bervariasi homogen Ha : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm kondisi optimal tidak bervariasi homogen Pengambilan keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima

Tabel 11.2. Hasil uji homogenitas Test of Homogeneity of Variances Densitas Optis

Levene Statistic

df1

5.062

df2 2

Sig. 6

.052

Keputusan : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm bervariasi homogen (p ≥ 0.05).

c. Uji One-Way ANOVA Tujuan : untuk melihat data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm kondisi optimal antar kelompok perlakuan terdapat perbedaan secara bermakna atau tidak. Hipotesa : Ho : data densitas optis aktivitas penghambatan pertumbuhan biofilm tidak berbeda secara signifikan Ha : data densitas optis aktivitas pencegahan pembentukan biofilm berbeda secara signifikan Pengambilan Keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima Tabel 12.3. Hasil uji One-Way ANOVA UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

86

ANOVA Densitas Optis Sum of Squares

df

Mean Square

Between Groups

.324

2

.162

Within Groups

.006

6

.001

Total

.330

8

F

Sig.

155.571

.000

Keputusan : data densitas optis aktivitas pencegahan pembentukan biofilm berbeda secara signifikan (p ≤ 0.05). d. Uji Post Hoc Tabel. 12.4. Hasil uji post hoc Multiple Comparisons Densitas Optis LSD 95% Confidence Interval

(I)

(J)

Konsentrasi

Konsentrasi

Kontrol (-)

Ekstrak 8%

.431333

*

.026351

.000

.36685

.49581

Kontrol (+)

.365667

*

.026351

.000

.30119

.43015

Kontrol (-)

-.431333

*

.026351

.000

-.49581

-.36685

Kontrol (+)

-.065667

*

.026351

.047

-.13015

-.00119

Kontrol (-)

-.365667

*

.026351

.000

-.43015

-.30119

.065667

*

.026351

.047

.00119

.13015

Ekstrak 8%

Kontrol (+)

Ekstrak 8%


Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound



87

Lampiran 19. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penghancuran (Degardasi) Kondisi Optimal a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat kenormalan distribusi data densitas optis aktivitas penghancuran (degradasi) kondisi optimal biofilm. Hipotesis : Ho : data densitas optis aktivitas penghancuran (degradasi) kondisi optimal biofilm terdistribusi normal Ha : data densitas optis aktivitas penghancuran (degradasi) kondisi optimal biofilm tidak terdistribusi normal Pengambilan Keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima

Tabel 11.1. Hasil uji normalitas One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Absorbansi N Normal Parameters

9 a

Mean Std. Deviation


.33900 .126173

Absolute

.266

Positive

.266

Negative

-.172

Kolmogorov-Smirnov Z

.798

Asymp. Sig. (2-tailed)

.547


Keputusan : data densitas optis aktivitas penghancuran (degradasi) kondisi optimal biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0.05) b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : untuk melihat homogenitas dari data densitas optis aktivitas penghancuran (degradasi) kondisi optimal biofilm UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

88

Hipotesis : Ho : data densitas optis aktivitas penghancuran (degradasi) kondisi optimal biofilm bervariasi homogen Ha : data densitas optis aktivitas penghancuran (degradasi) kondisi optimal biofilm tidak bervariasi homogen Pengambilan keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima

Tabel 11.2. Hasil uji homogenitas Test of Homogeneity of Variances Densitas Optis

Levene Statistic

df1

.558

df2 2

Sig. 6

.600

Keputusan : data densitas optis aktivitas penghancuran (degradasi) kondisi optimal biofilm bervariasi homogen (p ≥ 0.05).

c. Uji One-Way ANOVA Tujuan : untuk melihat data densitas optis aktivitas penghancuran (degradasi) kondisi optimal biofilm antar konsentrasi terdapat perbedaan secara bermakna atau tidak. Hipotesa : Ho : data densitas optis aktivitas penghancuran (degradasi) kondisi optimal biofilm tidak berbeda secara signifikan Ha : data densitas optis aktivitas penghancuran (degradasi) kondisi optimal biofilm berbeda secara signifikan Pengambilan Keputusan : Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima


89

Tabel 12.3. Hasil uji One-Way ANOVA ANOVA Densitas Optis Sum of Squares

df

Mean Square

Between Groups

.118

2

.059

Within Groups

.009

6

.002

F 38.695

Sig. .000

Total .127 8 Keputusan : data densitas optis aktivitas penghancuran (degradasi) kondisi optimal biofilm berbeda secara signifikan (p ≤ 0.05). d. Uji Post Hoc Tabel. 12.4. Hasil uji post hoc Multiple Comparisons Densitas Optis LSD 95% Confidence Interval

(I)

(J)

Konsentrasi

Konsentrasi

Kontrol (-)

Ekstrak 8%

.262333

*

.031908

.000

.18426

.34041

Kontrol (+)

.217667

*

.031908

.000

.13959

.29574

Kontrol (-)

-.262333

*

.031908

.000

-.34041

-.18426

Kontrol (+)

-.044667

.031908

.211

-.12274

.03341

Kontrol (-)

-.217667

*

.031908

.000

-.29574

-.13959

.044667

.031908

.211

-.03341

.12274

Ekstrak 8%

Kontrol (+)

Ekstrak 8%

Mean Difference (I-J) Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound


UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

Recommend Documents