Endokrin vizsgálatok pediátriai mintákban Lányi Éva Pécs 2009.10.06.
Neonatalis szőrés (Crit Rev Clin Lab Sci 2009 46 55-82) -50 betegség szőrése beszárított vérbıl módszerek: MS /MS, immunoassay, enzim-assay, elfo, HPLC, endokrin betegségek: Congenitális Adrenális Hyperplasia 1:15 000 Congenitális Hypothyreosis 1:4000 - Magyarország: 2007/44 Eü.M. Rendelet : kiterjesztett szőrés eddigi 4 mellett további 22 betegség szőrése
Congenitális Hypothyreoidismus 1. 2. 3. 4.
Dysgenesis 1:4000 85% sporadikus Dyshormonogenesis 1:30000 10% autosom recesszív Hypothalamus-hypophysis 1:100000 5% Transitorikus hypothyreoidismus - TBII transplacentáris transfer 1:50000 - Jód expozíció - Koraszülöttek - „Sick euthyroid syndrome”
Érett újszülött születés után TSH peak (30 min, 80 mU /L) ⇒ T4 és T3 peak (24-36 h) okok: T4 maternalis-placentaris transfere megszőnik, hideg stressz? SZŐRÉS: 48 óra után!
TSH cut off 〉 20 mU/L ⇓ T4 cut off 〈 6.5 µg/dl
Szőrés hatékonysága Kiszőrt újszülöttek 14% 8% 78%
congenitális hypothyreosis tranziens hypothyreosis normális = fals pozitív
Mit NEM diagnosztizál? 1. Centrális hypothyeroidismus 2. TBG deficiencia (X-kötött, 1:5000, TSHn, T4⇓, fT4n) 3. Hypothyroxinemia a TSH késleltetett elevációjával
Koraszülöttek
1.Születést követı TSH peak kisebb v. nincs ⇒ T4 ⇓ ( TBG ⇓) T3 ⇓ (perifériás konverzó ⇓) 2. Abszolút értékben a TSH magasabb, azonban ennek fiziológiás effektivitása alacsony (H-P tengely) 3. Koraszülöttek leggyakoribb gyógyszerei (glucocorticoidok, amidaron, propanolol, dopamin, dobutamin, furosemid) csökkentik a T4-T3 konverziót
TSH referens értékei gyermekeknél Clin Biochem 2008 41 1091-98 (Elecsys 2010 system Roche )
T3 és T4 referens értékei gyermekeknél Clin Biochem 2008 41 1091-98 ( Elecsys 2010 system Roche )
TSH és thyroid hormonok covariánsai Clin Biochem 2008 41 1091-98 (Elecsys 2010 system Roche )
1. Életkor – prediktor 2. Nem – nem prediktor (kivéve 16-20 év, T4⇑ nıknél) 3. WBC – nem prediktor 4. BMI - nem prediktor (populáció normál súlyú!) DE! Obes ⇒ TSH⇑ (BMI ~TSH), T4/ fT4 norm, fT3 norm, T3 n/⇑ leptin: TRH neuronokat innervál T4 ⇒ T3 átalakulást fokozza Obesitas ≠ szubklinikai hypothyreosis!
Congenitális Adrenális Hyperplasia (CAH)
CAH gyakoriság és klinikai jellemzık
CAH klinikai és laboratóriumi jellemzık 1.Klasszikus forma- sóvesztı (75%) - csak virilizáló (25%) 1:15000 (homozygota gyakoriság kaukázusi rasszban) 1: 60 (heterozygota gyakoriság zárt közösségben)
2.Non-klasszikus forma: prenatalisan nincs virilizáció 1:1000 heterozygota hordozó kaukázusi rasszban
Laboratóriumi jellemzık: Akut adrenális krízis
⇒⇒⇒
Asymptomatikus
Na⇓,K⇑, (ok:aldosteron hiány) adrenalin⇓ (ok:cortisol⇓) Glucose⇓,Metab.acid.(ok: kotrainzuláris faktorok⇓) 17-OH-Progesteron⇑,
21-hydroxylase gén: CYP21
CAH genotípus és fenotípus összefüggése
CAH diagnosztika hagyományos ACTH stimulációs teszttel
Neonatalis szőrés 1. Beszárított vérminta:17- OH-Progesteron (Enzaplate ELISA, minimális keresztreakció egyéb endogén steroidokkal ?) alacsony cut off 〉 4 ng/ml ⇒ fals pozitív⇑ (koraszülöttek, kis súlyúak) 2. Beszárított vérminta:17- OH-Progesteron (J.Pharm.Biomed.Anal.2008 48 177-82) LC - ESI-MS/ MS
Neonatalis szőrés
Neonatalis szőrés 3. Nyálminta: 17- OH-Progesteron LC- ESI - MS/MS ( J. Chromat. 2008 867 49-56 )
Neonatalis szőrés 4. RATIO =
(17-OH-Progesteron+Androstendion)/Cortisol (Pediatric Research 2009 66 230-235)
módszer: UPLC - ESI-MS/MS novum:- oszloptöltet partikulum mérete〈2.5µm ⇒ elválasztás ideje „sec”, minısége - a gyengén ionizálható steroidokat új derivatizációs eljárással jól ionizálhatóvá tenni cél: fals pozitivitás csökkentése (koraszülöttek, kis súlyúak, stress hatás)
Neonatalis szőrés
Growth Hormon Deficiencia (GHD) diagnosztikai problémái - Diagnosztika: klinikai, antropometriai, radiológiai, biokémiai - GH neurosecretoros dysfunkció ⇒ ⇒ ⇒ GH teljes hiány (GH provokációs teszt norm./IGF1⇓, IGFBP⇓) ↔ (GH⇓,IGF1⇓,IGFBP⇓) - Gyerek :GHD MINDEN formája kezelendı! ↔ Felnıtt: csak súlyos -
Milyen nehézséget jelent a klinikus számára a GH assay értelmezése? 1. Spontán GH mérés diagnosztikai értéke alacsony 2. Provokatív tesztek cut off értékei függnek: - protokoll (L-dopa, clonidin, arginin, glucagon, insulin, GHRH) - életkor, BMI, - metodika (analitika)
GH molekuláris és biológiai tulajdonságai -
-
-
GH-N gén transcriptum →2 fajta mRNA → → 2 termék : 22kD és 20 kD Posttranszlációs modifikáció: (22kD) - proteolítikus (fragmensek) - oligomerek (kovalens és non-kovalens) - deamináció, acyláció, glycoziláció, foszforiláció Biológiai aktivitás: 22kD a legaktívabb DE! 20 kD is biológiailag aktív 22 kD modifikált formái is lehetnek aktívak
GH Binding Proteinek (GHBP) és receptorok GH Binding Proteinek: 1.High affinity: Kd ~ nmol szekvencia homológia a GHR extracelluláris doménjével 2.Low affinity: Kd ~ µmol
α2- macroglobulin
GH isoformok perifériás vérben
GH assay standardizálása 1. Kalibrátor 1994 elıtt: hypophysis kivonat ( 2.6 U/mg ) 1994 után: hrGH 22 kD monomer (µg/l, 3U/mg) 2. Antitestek 1994 elıtt: poliklonális 1994 után: monoklonális - csak a 22kD monomért ismeri fel - a BP-hez kötött GH-t nem ismeri fel 3. Mátrix hatás- GHBP probléma ( BP maga a receptor!) Az új, automatizált assayk NEM teszik lehetıvé az equilibrációt!
GH assay standardizálása
GH assay standardizálása Probléma:- GH NEM homogén molekula - GHBP magas affinitású=receptor - Calibrátor= 22kD monomer Amit mérünk, az NEM tükrözi a fiziológiát! GH immunfunkciós mérése: immunoassay + biológiai aktivitás szilárd fázis: GHR site2 jelölı: rhGHBP – biotin - streptavidin-* Azokat a GH molekulákat mérjük, melyeknek mindkét kötıhelyük intakt.
IFA: Immunfunkcionális assay, MIA, RIA: kétlépéses IRMA, két monoklonális Ab, kalibrátor: pituitary (Horm Res 2007 68 171-77)
GHRH-ARG teszt cut-off értéke :BMI 〈25 (felnıtt,korátl=47, módszer: rGH IRMA) Eur J. Endocrinol 2005 153 257-264
GHRH-ARG teszt cut-off értéke : BMI = 25-30
GHRH-ARG teszt cut-off értéke : BMI 〉 30
Journal of Pediatric Endocrinology and Metabolism 2009 22
2000 Consensus guidelines
“In a child with clinical criteria for GHD, a peak GH concentration below 10 µg/l has traditionally been used to support the diagnosis. This value needs to be revised when using newer monoclonal-based assays and recombinant hGH reference preparations.”
2008 Consensus statement “In a child with clinical criteria for GHD, a peak GH concentration below 10 ng /ml has traditionally been used to support the diagnosis. At the present time, a new GH reference standard is being introduced which may require a downward adjustment of the lower limit of normal. In addition, changes in assay methodology influence choice of cut-off values for the diagnosis of GHD.”
Eight years and nothing has changed……….
