ADLN-PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA SKRIPSI

ADLN-PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

SKRIPSI PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI METABOLIT DARI FRAKSI 12 EKSTRAK ETIL ASETAT JAMUR ENDOFIT Cladosporium oxysporum DARI Aglaia odorata Lour.

ARMILA FATMA S.

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA DEPARTEMEN FARMAKOGNOSI DAN FITOKIMIA SURABAYA

2016 i

SKRIPSI

PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI

ARMILA F.


SKRIPSI PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI METABOLIT DARI FRAKSI 12 EKSTRAK ETIL ASETAT JAMUR ENDOFIT Cladosporium oxysporum DARI Aglaia odorata Lour.

ARMILA FATMA S. 051211131172

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS AIRLANGGA DEPARTEMEN FARMAKOGNOSI DAN FITOKIMIA SURABAYA

2016 ii

SKRIPSI


ARMILA F.


LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH Demi perkembangan ilmu pengetahuan, saya menyetujui skripsi/karya ilmiah saya, dengan judul : PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI METABOLIT DARI FRAKSI 12 EKSTRAK ETIL ASETAT JAMUR ENDOFIT Cladosporium oxysporum DARI Aglaia odorata Lour. untuk dipublikasi atau ditampilkan di internet atau media lain yaitu Digital

Library

Perpustakaan

Universitas

Airlangga

untuk

kepentingan akademik sebatas sesuai dengan Undang-Undang Hak Cipta. Demikian pernyataan persetujuan publikasi karya ilmiah ini saya buat dengan sebenar-benarnya.

Surabaya, Agustus 2016

Armila Fatma S. NIM : 051211131172

iii SKRIPSI


ARMILA F.


LEMBAR PERNYATAAN Saya yang bertanda tangan di bawah ini, Nama

: Armila Fatma S.

NIM

: 051211131172

Fakultas

: Farmasi

menyatakan dengan sesungguhnya bahwa hasil tugas akhir yang saya tulis dengan judul : PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI METABOLIT DARI FRAKSI 12 EKSTRAK ETIL ASETAT JAMUR ENDOFIT Cladosporium oxysporum DARI Aglaia odorata Lour. adalah benar-benar merupakan hasil karya saya sendiri. Apabila di kemudian hari diketahui bahwa skripsi ini merupakan hasil plagiarisme, maka saya bersedia menerima sangsi berupa pembatalan kelulusan dan atau pencabutan gelar yang saya peroleh. Demikian surat pernyataan ini saya buat untuk dipergunakan sebagaimana mestinya. Surabaya, Agustus 2016

Armila fatma S. NIM : 051211131172

iv SKRIPSI


ARMILA F.


Lembar Pengesahan PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI METABOLIT DARI FRAKSI 12 EKSTRAK ETIL ASETAT JAMUR ENDOFIT Cladosporium oxysporum DARI Aglaia odorata Lour.

SKRIPSI Dibuat untuk memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Airlangga 2016 Oleh : ARMILA FATMA S. 051211131172 Skripsi ini telah disetujui oleh

v SKRIPSI


ARMILA F.


KATA PENGANTAR Segala puji syukur saya haturkan kepada Allah SWT atas berkah kemudahan dan segala bentuk pertolonganNya yang tiada terkira sehingga saya dapat menyelesaikan tugas akhir yang berjudul PURIFIKASI SEKUNDER

DAN

KARAKTERISASI

METABOLIT

DARI FRAKSI 12 EKSTRAK ETIL ASETAT

JAMUR ENDOFIT Cladosporium oxysporum DARI Aglaia odorata Lour. pada waktunya. Tugas akhir ini tidak dapat serta merta terselesaikan tanpa bantuan dan dukungan dari banyak pihak, oleh karena itu dengan setulus hati saya sampaikan terimakasih kepada :

1. Prof. Dr.rer.nat Gunawan Indrayanto, Apt. selaku pemimbing utama

yang

senantiasa

sabar

dalam

membimbing

dan

memberikan masukan serta dukungan, saran serta kritik.

2. Prof. Dr. Noor Erma N.S., MS., Apt selaku dosen pembimbing serta dan dosen wali yang tiada hentinya mencurahkan kasih sayang

dalam

bentuk

semangat,

doa,

dukungan,

serta

bimbingan. Terimakasih sudah menjadi ibu kedua bagi saya.

3.

Prof. Dr. Moh. Nasih, SE., MT., Ak., CMA. selaku Rektor Universitas Airlangga yang telah memberikan kesempatan dan bantuan selama menempuh pendidikan program Sarjana Farmasi.

vi SKRIPSI


ARMILA F.


4.

Dr. Hj. Umi Athijah, Apt., M.S selaku dekan Fakultas Farmasi Universitas Airlangga yang telah memberikan kesempatan dan bantuan selama menempuh pendidikan program Sarjana Farmasi.

5.

Dr. Aty widyawaruyanti, MSi selaku ketua departemen farmakognosi

dan

fitokimia

yang

telah

memberikan

kesempatan dan bantuan selama mengerjakan penelitian.

6.

Prof. Dr. Bambang Prajogo EW.,MS. selaku dosen penguji yang telah banyak memberikan saran dan kritik serta mendorong penulis untuk belajar dan menggali lebih banyak ilmu.

7.

Dra. Rakhmawati, MSi. Selaku dosen penguji yang telah banyak memberikan saran dan kritik serta mendorong penulis untuk belajar dan menggali lebih banyak ilmu.

8. Ibu terhebat di dunia, yang tiada henti mendoakan dan memotivasi saya setiap harinya. Semoga Tuhan memberikan kesehatan dan umur panjang. Terimakasih untuk selalu ada, Ibu.

9. Bapak tercinta yang senantiasa memotivasi dan mendoakan saya, terimakasih telah memperjuangkan saya dari kecil hingga detik ini tiada henti, terimakasih untuk setiap tetes peluh untuk saya dan adik. Semoga Tuhan senantiasa merahmati.

10. Mbak Risma Pratiwi dan Tia Purwa, peneliti “pendahulu” saya dalam riset endofit yang selalu menginsipirasi.

vii SKRIPSI


ARMILA F.


11. Teman-teman seperjuangan “Jamur Endofit” Izzatulaili, Aisa, Desy, Ni Putu Diah dan Bian atas dukungan, motivasi dan bantuannya selama ini.

12. Sahabat-sahabat terbaik saya, Annisa , Apriliana, Lourenzdita, Dwi fatmawati, Nyimas, Ika, Ayuning, dan Diah, Putri, Berthy, Dek Tia, Rizki, dan Fitri

atas semangat yang tak henti

dicurahkan selama ini.

13. Teman-teman seperjuangan di lab laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi. Terimakasih atas waktu berjuang bersama dan saling menyemangati.

14. Teman-teman

“Amoksilin

B12”

atas

semangat

dan

dukungannya selama ini. Terimaksih telah menjadi keluarga terbaik saya disini.

15. Pak Bakir, Mbak Nur, Pak Iwan, Pak Jarwo, Pak Kus, Mas Iwan yang selalu siap memberikan bantuan, bimbingan, serta kesabarannya.

16. Unit Layanan Penelitian (ULP) Fakultas Farmasi Universitas Airlangga atas bantuannya. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi kemajuan ilmu kefarmasian

dan

almamater

tercinta

Fakultas

Farmasi

Universitas Airlangga

Surabaya, Agustus 2016 Penulis

viii SKRIPSI


ARMILA F.


RINGKASAN PURIFIKASI DAN KARAKTERISASI METABOLIT DARI FRAKSI 12 EKSTRAK ETIL ASETAT JAMUR ENDOFIT Cladosporium oxysporum DARI Aglaia odorata Lour. Armila Fatma S. Cladosporium oxysporum, merupakan jamur endofit yg diisolasi dari Aglaia odorata, aktivitas antimikrobanya menunjukkan 6 dari 13 fraksi ekstrak menghambat S. aureus ATCC 6538, E. coli ATCC 8739 dan C. albicans ATCC 10231. Fraksi ke 12 memiliki aktivitas antijamur terhadap C. albicans ATCC 10231, sehingga menarik untuk diteliti lebih lanjut. Tujuan penelitian ini melakukan purifikasi dan karakterisasi senyawa aktif yang terkandung dalam fraksi 12 ekstrak etil asetat jamur endofit C. oxysporum dari A. odorata Lour. Purifikasi dilakukan dengan kromatografi kolom, fase diam Sephadex LH-20 dan fase gerak metanol 100%, diperoleh tiga subfraksi yaitu 12.1, 12.2, dan 12.3 (Pratiwi, 2015). Dilakukan purifikasi lebih lanjut subfraksi 12.2 dengan KLT-preparatif, fase diam silica gel 60 F254 dan fase gerak diklorometana : etilasetat= 9:1, didapatkan 8 subfraksi. Hasil KLT subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 terdapat satu noda dominan untuk itu dilakukan uji kemurnian dengan KLT dua dimensi. Subfraksi 12.2.6 pada KLT masih terdapat beragam noda dengan annisaldehid-H2SO4 p, satu noda dominan pada Rf 0,43 yang aktif sinar UV254nm dengan λ mak 268 nm. Hasil kromatogram HPLC dengan kolom Phenomenex® RP-18 eluen metanol : air gradient menunjukkan satu puncak dominan pada tr 7,959 menit dengan λmak 261 nm. Serapan pada λ ini menunjukkan adanya gugus kromofor inti aromatis (Sampietro et al., 2009). Subfraksi 12.2.7 diperoleh padatan amorf, larut dalam etilasetat. Hasil uji kemurnian didapat satu noda warna merah-ungu dengan anisaldehid-H2SO4 p dan aktif UV254nm, berdasarkan KLT dapat dikatakan senyawa yang terkandung dari golongan terpenoid atau steroid dan murni secara KLT (Sherma, 2003). Karakterisasi noda hasil KLT-densitometer subfraksi 12.2.7 menunjukkan adanya

ix SKRIPSI


ARMILA F.


puncak pada Rf 0,34 dan λ mak 273 nm, hal ini menjadi petunjuk adanya senyawa fenol (Skoog et al., 2007). Hasil kromatogram GC detektor FID, kolom HP-5 menunjukkan puncak dominan pada tr 27,868 menit. Analisis GC-MS dengan kolom HP-5 menunjukkan puncak dominan pada tr 23,30 menit dan dari spektrum MS yang dihasilkan identik dengan senyawa 4,4’-(1methylethylidene)bisphenol atau bisfenol A dengan kemiripan 88,31% data base mass bank dan 87% data base wiley7n.1. Kriteria kemiripan dengan database dapat dianggap signifikan bila > 80% (Odchimar et al., 2016). Eluen terpilih untuk KLT subfraksi 12.2.8 kloroform:metanol = 8:2, terdapat dua noda dengan Rf 0,7 dan 0,8 yang berwarna ungu dengan anisaldehid-H2SO4 p dan aktif terhadap UV254nm. Hasil analisis subfraksi 12.2.8 dengan HPLC menunjukkan puncak dominan pada tr 5,085 dan 6,089 menit. Dalam hal ini perlu dilakukan analisis dengan LC-MS-MS.

x SKRIPSI


ARMILA F.


ABSTRACT

PURIFICATION AND CHARACTERIZATION SECONDARY METABOLITES FROM FRACTION 12 OF ETHYL ACETATE EXTRACT ENDOPHYTIC FUNGI Cladosporium oxysporum ISOLATED FROM Aglaia odorata LOUR. Armila Fatma S. Endophytes are microbes which reside in living plant tissue without causing diseases to the host. Endophytes produce some substances that have biological activity. Cladosprium oxysporum is one of endophytic fungi isolated from Aglaia odorata Lour. It was proven that 6 from 13 of its ethyl acetate fraction had activity against Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 8739, and Candida albicans ATCC 10231. Purification of secondary metabolites from subfraction 12.2.6, 12.2.7, and 12.2.8 using preparative chromatography with silica gel 60 F254 as stationary phase and dicloromethane : ethylacetate = 9:1 as mobile phase was conducted. Subfraction 12.2.6, 12.2.7, and 12.2.8 was shown UV 254 active compound and positive when sprayed by anisaldehyde-H2SO4 p reagent. All of them are classified as steroid or terpenoid group based on its TLC profile using anisaldehyde-H2SO4 p reagent. Subfraction 12.2.7 was analyzed using GC-MS, and resulted compound which identified as 4-4’-(1-methylethylidene)bisphenol. Keywords : Secondary metabolites, endophytic fungi, Cladosporium oxysporum, Aglaia odorata Lour, 4-4’-(1methylethylidene)bisphenol.

xi SKRIPSI


ARMILA F.


DAFTAR ISI Halaman LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH……………………………………………………….. iii LEMBAR PERNYATAAN…………………………………...

iv

LEMBAR PENGESAHAN……………………………………

v

KATA PENGANTAR………………………………………… vi RINGKASAN ………………………………………………… ix ABSTRACT ………………………………………………….

xi

DAFTAR ISI………………………………………………….. xii DAFTAR TABEL…………………………………………….. xv DAFTAR GAMBAR…………………………………………. xvi DAFTAR SINGKATAN……………………………………... xxiii BAB I. PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Permasalahan………………….

1

1.2 Rumusan Masalah……………………………...

6

1.3 Tujuan Penelitian……………………………....

6

1.4 Manfaat Penelitian……………………………..

6

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Tinjauan tentang Tanaman Aglaia odorata L… 2.1.1 Klasifikasi Tanaman……………………..

7

2.1.2 Nama Daerah……………………………..

7

2.1.3 Morfologi tanaman……………………....

8

2.1.4 Penyebaran dan habitat………………….

8

2.1.5 Kandungan kimia………………………..

9

xii SKRIPSI

7


ARMILA F.


2.1.6 Kegunaan tanaman………………………

21

2.2 Tinjauan tentang Jamur………………………..

21

2.2.1 Definisi tentang Jamur Endofit………...

22

2.2.2 Tinjauan tentang Cladosporium oxsporum . 28 2.2.2.1 Klasifikasi C.oxysporum……… 28 2.2.2.2Ciri morfologi…………………

28

2.2.2.3 Habitat………………………..

29

2.2.2.4 Kandungan metabolit sekunder… 29 2.2.2.5 Tinjauan tentang ekstrak etilasetat jamur endofit Cladosporium oxysporum……………………… 30 2.3 Tinjauan tentang antibiotik……………………….. 38 2.4 Tinjauan tentang fraksinasi dan kromatografi…… 39 2.4.1 Fraksinasi…………………………………... 39 2.4.2 Kromatografi………………………………. 39 2.4.2.1 Kromatografi Lapis Tipis………..

39

2.4.2.2 KLT preparative…………...…….. 42 2.4.2.3 KLT dua arah……………………. 43 2.5 Tinjauan tentang karakterisasi…………………..

43

2.5.1 KLT-Densitometer………………………... 43 2.5.2 HPLC……………………………………..... 44 2.5.3 GC………………………………………….. 44 2.5.4 Mass Spectroscopy (MS)………………….. 44 BAB III. KERANGKA KONSEPTUAL…………………….. 46 BAB IV. METODE PENELITIAN 4.1 Tempat penelitian……………………………….. 50

xiii SKRIPSI


ARMILA F.


4.2 Sampel Penelitian................................................... 50 4.3 Pelarut dan pereaksi……………………………..

51

4.4 Alat………………………………………………

51

4.5 Pelaksanaan penelitian………………………….

51

4.5.1 Optimasi eluen……………………………

51

4.5.2 Kromatografi lapis tipis preparatif………

52

4.5.3 Uji kemurnian……………………………

52

4.5.4 Karakterisasi isolat……………………....

52

4.6 Skema kerja……………………………………..

53

BAB V. HASIL PENELITIAN 5.1 Fraksi terpilih untuk dimurnikan………………

54

5.2 KLT-preparatif untuk subfraksi 12.2………….

54

5.3 Uji kemurnian subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 dengan KLT 2D………………………………………………

57

5.4 Karakterisasi subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7……...

58

5.4.1 Karakterisasi dengan KLT-Densitometer subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7……………..

58

5.4.2 Karakterisasi subfraksi 12.2.6 dengan HPLC 59 5.4.2 Karakterisasi subfraksi 12.6.8 dengan HPLC 59 5.4.3 Karakterisasi subfraksi 12.2.7 dengan GC-FID …………………………………………….. 64 5.4.4 Karakterisasi subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 dengan GC-MSD…………………………………... 65 BAB VI. PEMBAHASAN………………………………………. 69 BAB VII. KESIMPULAN DAN SARAN……………………... 77 DAFTAR PUSTAKA…………………………………………… 78

xiv SKRIPSI


ARMILA F.


DAFTAR TABEL Halaman Tabel 2.1

Metabolit sekunder yang dihasilkan oleh tanaman

10

Aglaia odorata Lour. Tabel 2.2

Data aktivitas dari beberapa jamur endofit

26

Tabel 2.3

Metabolit sekunder yang dihasilkan oleh jamur marga Cladopsorium yang hidup tidak sebagai endofit

32

Tabel 2.4

Metabolit sekunder yang dihasilkan oleh jamur endofit dari marga Cladopsorium sebagai endofit

33

Tabel 5.1

Penimbangan subfraksi hasil KLT preparatif

56

Tabel 5.2

Rf dan panjang gelombang maksimum subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7

59

Tabel 5.3

Kondisi HPLC untuk analisis subfraksi 12.2.6 dan 12.2.8

59

Tabel 5.4

Program waktu gradien eluen HPLC untuk subfraksi 12.2.6 dan 12.2.8

60

xv SKRIPSI


ARMILA F.


DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 2.1

Aglaia odorata Lour

7

Gambaran makroskopis dan mikroskopis Gambar 2.2.

konidiofor Cladosporium oxysporum

28

menggunakan SEM Hasil KLT fraksi 1-2 dari eksrak etilasetat jamur Cladosporium oxysporum dengan Gambar 2.3(a)

fase diam silica gel 60 F254nm; fase gerak

31

EtOAc:CHCl3 (1:1) dengan penampak noda UV dan anisaldehid-H2SO4 p Hasil KLT fraksi 3-8 dari eksrak etilasetat jamur Cladosporium oxysporum dengan Gambar 2.3 (b)

fase diam silica gel 60 F254nm; fase gerak EtOAc:n-heksan dengan penampak noda

31

UV dan anisaldehid-H2SO4 p. Fraksi 6 dan 7 digabung

Gambar 2.3 (c)

Hasil KLT fraksi 9-14 dari eksrak etilasetat jamur Cl. oxysporum dengan fase diam silica gel 60 F254nm; fase gerak CHCl3:MeOH:Air (65:35:1) dengan penampak noda UV dan anisaldehidH2SO4 p. Fraksi 10-11 dan 13-14 digabung

31

xvi SKRIPSI


ARMILA F.


Hasil KLT fraksi 15-16 dari eksrak etilasetat jamur Cladosporium oxysporum Gambar 2.3 (d)

dengan fase diam silica gel 60 F254nm; fase gerak CHCl3:MeOH (65:35) dengan

31

penampak noda UV dan anisaldehidH2SO4 p

Gambar 3.1

Gambar 4.1

Kerangka konseptual penelitian

49

Skema kerja pelaksanaan penelitian fraksi no 12 ekstrak etilasetat jamur Cladosporiun oxysporum dari Aglaia odorata Lour.

53

Gambar 5.1

KLT fraksi 12.2 ekstrak etil asetat jamur Cladosporium oxysporum dengan fase diam silica gel 60F254; fase gerak adalah Diklorometana : EtOAc = 9:1. Penampak noda UV254 serta anisaldehid-asam sulfat. Keterangan angka menunjukkan nomor fraksi.

54

Gambar 5.2

Hasil KLT 8 subfraksi KLT preparatif subfraksi 12.2 ekstrak etil asetat jamur Cladosporium oxysporum dengan fase diam silica gel 60F254; fase gerak Diklorometana : EtOAc= 9:1. Keterangan angka menunjukkan nomor fraksi.

55

xvii SKRIPSI


ARMILA F.


Gambar 5.3

Gambar 5.4

Hasil KLT Fraksi 12.2.8 ekstrak etil asetat jamur Cladosporium oxysporum dengan fase diam silica gel 60F254; fase gerak kloroform : metanol= 8:2. Penampak noda dengan sinar UV panjang gelombang 254nm (kiri) dan penampak noda anisaldehid-asam sulfat pekat (kanan). Keterangan angka menunjukkan nomor fraksi.

Hasil KLT 2 Dimensi subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 dengan fase diam silica gel 60F254; fase gerak Diklorometana : EtOAc= 9:1. Penampak noda UV254 serta anisaldehidasam sulfat. Keterangan angka menunjukkan nomor fraksi.

56

57

Hasil kromatogram subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 dianalisa pada panjang gelombang Gambar 5.5

58

254nm.

Hasil spektra UV subfraksi 12.2.6 dengan Rf: 0,43 dan 12.2.7 dengan Rf: 0,34 Gambar 5.6

dianalisa

dengan

KLT-densitometer

dengan eluen diklorometana : etilasetat =

59

9:1.

xviii SKRIPSI


ARMILA F.


Gambar 5.7 (A)

Hasil kromatogram HPLC fraksi 12.2.6 61

pada panjang gelombang 254nm Profil spectra UV puncak senyawa yang

Gambar 5.7 (B)

Gambar 5.7

memiliki

waktu

retensi

7,959

menit

dengan panjang gelombang maksimum 261 nm Hasil counter plot senyawa subfraksi 12.2.6 dengan waktu retensi 7,959 menit.

(C)

Gambar 5.8(D)

61

61

Hasil kromatogram HPLC subfraksi 12.2.8 62

pada panjang gelombang 254nm

Profil spectra UV senyawa yang memiliki Gambar 5.8 (E)

waktu retensi 5,085 menit dengan panjang gelombang maksimum 261 nm

62

Profil spectra UV senyawa yang memiliki Gambar 5.8 (F)

waktu retensi 6,089 menit dengan panjang gelombang maksimum 264 nm

62

xix SKRIPSI


ARMILA F.


Gambar 5.8 (G)

Gambar 5.8 (H)

Profil contour plot senyawa yang memiliki 63

waktu retensi 5,085 meni

Profil contour plot senyawa yang memiliki 63

waktu retensi 6,089 menit. Hasil kromatogram fraksi 12.2.7 yang dianalisis

dengan

GC-FID

dengan 0

kolom HP-5, suhu inlet 250 C, Split Gambar 5.9

ratio 50:1, flow 1.0, suhu dimulai dari 1000C hingga 2500C dengan kenaikan

64

50C per menit selama 30 menit dan fase gerak gas helium Gambar

5.10

Hasil

kromatogram

subfraksi 12.2.6 dianalisis dengan GCMS dengan kolom HP-5, suhu inlet Gambar 5.10

2500C, Split ratio 50:1, flow 1.0, suhu dimulai dari 1000C hingga 2500C

65

dengan kenaikan 50C per menit selama 30 menit dan fase gerak gas helium.

xx SKRIPSI


ARMILA F.


Hasil spektrum mass senyawa pada Gambar 5.11

subfraksi 12.2.6 dengan waktu retensi 24,22 menit

65

Hasil kromatogram fraksi 12.2.7 yang dianalisis

dengan

GC-MS

dengan 0

kolom HP-5, suhu inlet 250 C, Split Gambar 5.15

ratio 50:1, flow 1.0, suhu dimulai dari 1000C hingga 2500C dengan kenaikan

66

50C per menit selama 30 menit dan fase gerak gas helium Hasil

spektrum

massa

senyawa

subfraksi 12.2.7 dengan tr: 23,30 menit yang dianalisis dengan GC-MS Agilent dengan kondisi: kolom HP-5, suhu Gambar 5.16

inlet 2500C, Split ratio 50:1, flow 1.0,

66

suhu dimulai dari 1000C hingga 2500C dengan kenaikan 50C per menit selama 30 menit dan fase gerak gas helium. Hasil spektrum massa senyawa 4-4’-(1Gambar 5.17

methylethylidene)bisphenol

67

xxi SKRIPSI


ARMILA F.


Struktur Gambar 5.18

senyawa

4-4’-(167


Hasil prediksi fragmentasi senyawa 4-4’Gambar 5.15

(1-methylethylidene)bisphenol

68

xxii SKRIPSI


ARMILA F.


DAFTAR SINGKATAN DCM

: Diklorometana

EtOAc

: Etilasetat

GC

: Gas chromatography

GC-MS

: Gas chromatography-Mass spectrometry

GC-MSD

: Gas chromatography -Mass selective detector

HPLC

: High Performance Liquid Chromatography

KLT

: Kromatografi Lapis Tipis

MeOH

: Metanol

Rf

: Retardation factor

tR

: Time retention

UV

: Ultraviolet

0

: Derajat selsius

nm

: Nanometer

λmax

: Panjang gelombang maksimum

C

xxiii SKRIPSI


ARMILA F.


BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Penyakit infeksi merupakan salah satu masalah kesehatan masyarakat yang penting, khususnya di negara berkembang. Infeksi dapat

disebabkan oleh bakteri, jamur, virus, dan parasit

(Kementerian Kesehatan RI, 2015). Berdasarkan hasil penelitian, 100.000 kematian disebabkan oleh penyakit infeksi seperti infeksi pernapasan bawah, HIV/AIDS, diare, tuberkulosis (TB), malaria, measles, pertusis, tetanus, meningitis, sipilis, hepatitis B, dan berbagai penyakit tropik yang lain (Restinia, 2012). Salah satu obat untuk mengatasi masalah tersebut adalah antimikroba antara lain antibakteri, antijamur, antivirus, dan antiprotozoa. Antibiotik merupakan obat yang paling banyak digunakan pada infeksi yang disebabkan oleh bakteri. Intensitas penggunaan antibiotik yang relatif tinggi menimbulkan berbagai permasalahan dan merupakan ancaman global bagi kesehatan terutama resistensi bakteri terhadap antibiotik. Pada awalnya resistensi hanya terjadi ditingkat rumah sakit, tetapi lambat laun juga berkembang di lingkungan masyarakat, khususnya Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, dan Escherichia coli (Kementerian Kesehatan RI, 2011). Menurut kementerian kesehatan RI (2011), Beberapa kuman resisten antibiotik sudah banyak ditemukan di seluruh dunia, antara lain Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA),

1

SKRIPSI


ARMILA F.


Vancomycin-Resistant

Enterococci

(VRE),

2

Penicillin-Resistant

Pneumococci, Klebsiella pneumoniae yang menghasilkan ExtendedSpectrum

Beta-Lactamase

Acinetobacter

baumannii

(ESBL), dan

Carbapenem-Resistant

Multiresistant

Mycobacterium

tuberculosis. Hal ini menunjukkan resistensi antibiotika dari bakteri merupakan suatu masalah kesehatan masyarakat yang bersifat global (Yenny, 2007). Akibat adanya resistensi ini, dibutuhkan penemuan antibiotika baru untuk mengatasi masalah infeksi yang terjadi (Restinia, 2012). Antibiotika merupakan senyawa organik dengan berat molekul kecil yang dihasilkan oleh mikroorganisme dan pada konsentrasi rendah mampu melawan organisme lain (Strobel dan Daisy, 2003). Jamur memberikan potensi yang sangat besar sebagai sumber penemuan bahan baku obat baru seperti berbagai jenis antibiotika (Schulz et al., 2002). Akhir-akhir ini jamur endofit mempunyai prospek sebagai sumber diperolehnya antibiotika baru. Menurut Brunner dan Petrini, dari 80 jenis jamur endofit yang diuji 75 % mampu menghasilkan antibiotika baru (Sugijanto, 2011; Strobel dan Daisy, 2003). Contohnya Pada alga coklat Sargassum spp ditemukan jamur endofit Bacillus subtilis. Endofit ini menghasilkan senyawa

lipopeptida yang menunjukkan aktivitas

antimikroba melawan Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermidis. Pada tanaman Kennedia nigricans ditemukan jamur endofit Streptomyces sp. Endofit ini menghasilkan antibiotik munumbisin yang aktif terhadap bakteri Gram positif seperti Bacillus anthracis dan M. tuberculosis. Pada daun pohon Grevillea

SKRIPSI


ARMILA F.


3

pteridifolia ditemukan jamur endofit Streptomycete. Endofit ini menghasilkan antibiotika spektrum luas kakadumisin yang aktif terhadap bakteri Gram positif (Susilowati et al, 2015; Strobel dan Daisy, 2003). Pada tahun 1996, penemuan Taxol® sebagai senyawa antikanker dari jamur endofit Pestalotiopsis microspora

yang

diisolasi dari tanaman Taxus brevifolia, menjadikan jamur endofit sebagai pusat perhatian untuk sumber alternatif penemuan obat baru. Jamur endofit merupakan mikroba yang hidup di jaringan tumbuhan tanpa menyebabkan gejala apapun pada tanaman inangnya. Sebagian besar endofit mampu menghasilkan metabolit aktif dan beberapa darinya terbukti mempunyai manfaat sebagai obat. Beberapa penelitian telah melaporkan bahwa senyawa yang dihasilkan jamur endofit mempunyai potensi aktivitas biologis yang besar dan beragam diantaranya sebagai antimikroba, antivirus, antiparasit dan antitumor (Astuti et al., 2014; Santiago et al., 2014). Selain itu jamur endofit

juga

mempunyai

aktivitas

sebagai

antioksidan,

imunomodulator, antituberkulosis dan insektisida (Hussain et al., 2014). Berbagai jenis senyawa kimia yang diproduksi oleh jamur endofit yaitu terpenoid, alkaloid, fenilpropanoid, senyawa aromatik, poliketid, dan peptida (Astuti et al., 2014). Senyawa yang dihasilkan oleh jamur endofit adakalanya sama dengan tanamana inangnya, misalnya Taxol® yang dihasilkan oleh jamur endofit Taxomycetes andreanae yang diisolasi dari Taxus brevifolia. Hal ini yang menjadi

SKRIPSI


ARMILA F.


4

dasar pemikiran bahwa untuk mendapatkan senyawa bioaktif yang dihasilkan oleh jamur endofit utamanya dapat dilakukan isolasi dari tanaman obat (Sugijanto, 2011; Santiago et al, 2014). Menurut Strobel dan Daisy (2003) ada beberapa kriteria tumbuhan inang yang dapat diisolasi mikroba endofitnya, yaitu tumbuhan yang berasal dari lingkungan yang unik, mempunyai sejarah etnobotani, tumbuh di daerah endemik, dan tumbuh di daerah yang mempunyai banyak biodiversitas/ beriklim tropis. Berdasarkan penelitian yang pernah dilakukan, jamur endofit di tanaman tropis terdapat pada familia Arecaceae, Orchidaceae, Musaceae, Poaceae, Piperaceae, Crassulaceae, Meliaceae, Acanthaceae, Rubiaceae, dan Sterculiaceae (Arnold et al., 2001). Hampir semua tanaman yang memiliki jaringan pengangkutan diketahui mengandung bakteri dan atau jamur endofit (Tan dan Zou, 2001). Indonesia merupakan negara yang kaya akan tumbuhan obat, salah satunya Aglaia odorata Lour (pacar cina) familia Meliaceae. Aglaia odorata Lour (pacar cina) mempunyai berkas jaringan pengangkutan, hidup di iklim tropis,

dan

termasuk

dalam

familia

Meliaceae

sehingga

memungkinkan adanya mikroba endofit yang tumbuh dan hidup didalamnya. Aglaia odorata Lour (pacar cina) telah dipercaya masyarakat sebagai terapi stimulan jantung, panas, batuk, diare, inflamasi serta luka (Kinghorn et al., 2011). Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan oleh Zhang et al., (2012), pada tanaman ini berhasil diisolasi 20 jenis senyawa yaitu dua senyawa kumarin-lignoid, satu

SKRIPSI


ARMILA F.


5

senyawa sterol, delapan senyawa triterpenoid, enam senyawa flavonoid, dua senyawa bisamid dan satu senyawa flavagline. Senyawa flavagline dan bisamida merupakan senyawa yang baru dilaporkan dari Aglaia odorata Lour. Berdasarkan penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Sugijanto et al., (2003), berhasil mengisolasi jamur endofit dari Aglaia odorata Lour yang diperoleh dari Kebun Raya Purwodadi dan telah didapatkan 135 isolat jamur endofit. Beberapa diantaranya telah diidentifikasi sebagai Eurotium rubrum, Cladosporium oxysporum, dan Aspergillus penicilloides. Hasil pengujian aktivitas terhadap ekstrak etil asetat jamur endofit Cladosporium oxysporum dari Aglaia odorata Lour menunjukkan 6 dari 13 fraksi-fraksi ekstrak yaitu fraksi 3, 4, 5, 6, 7 dan 10 yang diuji menghambat Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 8739 dan Candida albicans ATCC 10231 dan 2 dari 13 fraksi ekstrak yaitu fraksi 11 dan 12 yang diuji menghambat Candida albicans ATCC 10231 (Dorra, 2011). Berdasarkan adanya bukti penelitian aktivitas antimikroba dari metabolit sekunder yang ada di fraksi-fraksi aktif ekstrak etil asetat jamur endofit Cladosporium oxysporum dari tanaman Aglaia odorata Lour maka dilakukan penelitian lanjutan yaitu isolasi senyawa aktif dari fraksi 12 tersebut dengan melakukan pemurnian dan karakterisasi terhadap isolat yang diperoleh.

SKRIPSI


ARMILA F.


6

1.2 Rumusan Masalah Rumusan masalah dari penelitian ini adalah: Termasuk Senyawa apakah metabolit sekunder yang terkandung dalam fraksi 12 dari ekstrak etil asetat jamur endofit Cl. oxysporum dari A. odorata Lour? 1.3 Tujuan Penelitian Tujuan penelitian ini adalah melakukan purifikasi dan karakterisasi senyawa aktif yang terkandung dalam fraksi 12 ekstrak etil asetat jamur endofit Cl. oxysporum dari A. odorata Lour. 1.4 Manfaat Penelitian Diharapkan mampu mengisolasi senyawa metabolit sekunder yang terdapat dalam fraksi 12 ekstrak etil asetat jamur endofit Cl. oxysporum dari Aglaia odorata Lour. Senyawa tersebut diharapkan mampu diidentifikasi lebih lanjut dan dijadikan pertimbangan untuk pengembangan antimikroba baru dalam mengatasi masalah infeksi.

SKRIPSI


ARMILA F.


BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Tinjauan Tentang Tanaman Aglaia odorata Lour.

Gambar 2.1 Aglaia odorata Lour. (Setiawan, 2008) 2.1.1 Klasifikasi Tanaman Divisi

: Spermathophyta

Sub divisi

: Angiospermae

Kelas

: Dicotyledonae

Sub Kelas

: Dialypetale

Bangsa

: Rutales

Suku

: Meliaceae

Marga

: Aglaia

Jenis : Aglaia odorata Lour

Sinonim

: Camunium sinense Rumph

(Setiawati et al., 2008) 2.1.2 Nama daerah Sumatra

: culan, pacar cina (Melayu)

Jawa

: culan, pacar culan

Borneo

: bunga maniran

7

SKRIPSI


ARMILA F.


8

2.1.3 Morfologi tanaman Tanaman perdu, tinggi 2 - 6 m, batang berkayu, bercabang banyak, tangkai berbintik-bintik hitam. Daun majemuk menyirip ganjil yang tumbuh berseling, anak daun 3 5. Anak daun bertangkai pendek, bentuk bundar telur sungsang, panjang 3 - 6 cm, lebar 1 - 3,5 cm, ujung runcing, pangkal meruncing, tepi rata, permukaan licin mengilap terutama daun muda. Bunga dalam malai rapat, panjangnya 5-16 cm, warna kuning, dan harum. Buah buni, bulat lonjong, warnanya merah,panjang 6-7 mm,dengan ruang 1-3, biji berjumlah 1-3 buah. Pacar cina sering ditanam di kebun dan pekarangan sebagai tanaman hias, atau tumbuh liar di ladang-ladang yang cukup mendapat sinar matahari. Di Indonesia tumbuhan ini dapat ditemui tumbuh di pulau Sumatera, Kalimantan, Jawa, Sulawesi, Bali dan Flores (Setiawati et a.l, 2008). 2.1.4 Penyebaran dan habitat Daerah penyebaran tumbuhan meliputi India, Cina bagian selatan, Laos, Asia Tenggara, Australia bagian utara dan kepulauan di Samudra Pasifik. Di Indonesia tumbuhan ini dapat ditemui tumbuh di pulau Sumatera, Kalimantan, Jawa, Sulawesi, Bali dan Flores. Pacar cina sering ditanam di kebun dan pekarangan sebagai tanaman hias, atau tumbuh liar di ladang-ladang yang cukup mendapat sinar matahari (Setiawati et al., 2008).

SKRIPSI


ARMILA F.


9

2.1.5. Kandungan Kimia Kandungan senyawa berkhasiat yang terdapat dalam daun Aglaia senyawa

odorata

turunannya,

antara lain rokaglamida dan tiga yaitu

desmetil-rokaglamida,

metil

rokaglat dan rokaglaol (Setiawati et al., 2008). Penelitian terbaru yang telah dilakukan oleh Zhang et al., (2012) pada tanaman ini berhasil diisolasi 20 senyawa yaitu dua senyawa kumarin-lignoid, satu senyawa sterol, delapan senyawa triterpenoid, enam senyawa flavonoid, dua senyawa bisamid dan satu senyawa flavagline. Senyawa flavagline dan bisamida merupakan senyawa yang baru dilaporkan dari Aglaia odorata Lour.

SKRIPSI


ARMILA F.


10

Tabel 2.1 Metabolit sekunder yang dihasilkan oleh tanaman Aglaia odorata Lour. Golongan metabolit

Nama metabolit

Struktur molekul

Berat molekul

Acuan

8-(7’,8’,9’-propanetriolCoumarinolignoids

4’-methoxy-3’-Ophenylpropanoid)-7hydroxy-6-

Zhang et 404,11

al., (2012)

methoxycoumarin

SKRIPSI


ARMILA F.


11

Zhang et cleomiscosin A

386.35

al., (2012)

Zhang et -sitosterol Sterol

SKRIPSI

414,70

al., (2012)


ARMILA F.


12

Zhang et 456,70

asam betulinat

al., (2012)

Triterpenoid Zhang et 472,69 alphitol acid

SKRIPSI


al., (2012)

ARMILA F.


13

Zhang et asam ursolat

456,70

al., (2012)

Zhang et cabraleahydroxylactone

416,64

al., (2012)

SKRIPSI


ARMILA F.


14

Zhang et xanthocerasic acid

470,68

al., (2012)

20S,24S-dihydroxydammar-25-en-3-one

SKRIPSI


458,72

Zhang et al., (2012)

ARMILA F.


15

24R,25-dihydroxydammar-20-en-3-one

Dammar-20-ene3β,24(R),25-triol

SKRIPSI


Zhang et 458,72

al., (2012)

Zhang et 460,73

al., (2012)

ARMILA F.


16

Zhang et 312,31 Sideroxylin

al., (2012)

Flavonoid Zhang et 298,29 8-demethylsideroxylin

SKRIPSI


al., (2012)

ARMILA F.


17

2’-hydroxy-4,4’,6’trimethoxy-chalcone

(2R,3R)-(+)-4’,5,7trimethoxydihydroflavonol

Naringenin trimethyl ether

SKRIPSI

Zhang et 314,33

al., (2012)

Zhang et 330,33

al., (2012) Zhang et

330,33

al., (2012)


ARMILA F.


18

2,3-dihydro-5-hydroxy4’,7-dimethoxyflavon

Zhang et 300,31

al., (2012)

Zhang et Odorine

300,40

al., (2012)

Bisamide Zhang et 316,40

Odorinol

al., (2012)

SKRIPSI


ARMILA F.


19

Zhang et Flavagline

Rocaglaol

434.17

al., (2012)

SKRIPSI


ARMILA F.


20

4’-o- demethyldeacetylaglaxiflorin A

Peng et 655.2632

al., (2015)

Lignan

Peng et 3’-methoxy-Ndemethylrocaglamide

SKRIPSI


544.1947

al., (2015)

ARMILA F.


21

2.1.6 Kegunaan Tanaman Pacar cina telah dipercaya masyarakat sebagai terapi stimulan jantung, panas, batuk, diare, inflamasi serta luka (Kinghorn et al., 2011). Bagian tanaman pacar cina memiliki beberapa khasiat antara lain daun berkhasiat sebagai insektisida, penghambat makan (antifeedant), penghambat perkembangan serangga (growth regulator), mengatasi memar, bisul, darah haid banyak, bau badan dan diare. Bagian bunga berkhasiat untuk mengatasi perut kembung, sukar menelan,

batuk,

pusing

dan

mempercepat

persalinan

(Setiawati et al., 2008). 2.2 Tinjauan tentang jamur Jamur merupakan organisme eukariotik dan dianggap sebagai kelompok spesifik yang memiliki berbagai manfaat karena dapat digunakan untuk pengobatan, produksi makanan, kontrol polusi dan agrikultural (Moretti dan Sarocco, 2015). Jamur

tidak

mampu

melakukan

fotosintesis

untuk

memproduksi nutrisi, sehingga kebutuhan nutrisinya diperoleh dari lingkungan maupun organisme lain, oleh karena itu jamur disebut sebagai organisme heterotrof (Subandi, 2010). Jamur dapat bersifat saprofit dan parasit. Jamur saprofit mendapatkan sumber nutrisi dari benda mati sedangkan Jamur parasit memperoleh sumber nutrisi dari organisme hidup (Pratiwi, 2008). Pada jamur terdapat dua istilah kapang (mold) dan khamir (yeast). Kapang merupakan Jamur yang berfilamen dan

SKRIPSI


ARMILA F.


22

multiseluler. Khamir merupakan bentuk jamur yang berupa sel tunggal (Pratiwi, 2008). Jamur bereproduksi secara aseksual (pembelahan, pembentukan tunas atau spora) maupun seksual (pembelahan inti dari kedua induk). Berdasarkan ciri-ciri spora seksualnya jamur diklasifikasikan menjadi empat kelas utama yaitu Phycomycetes, Deuteromycetes

Ascomycetes, (Pratiwi,

2008).

Basidiomycetes, Untuk

tumbuh

dan Jamur

memerlukan kondisi kelembapan yang tinggi, persediaan bahan organik, dan oksigen yang cukup. Lingkungan yang hangat dan lembab dapat mempercepat pertumbuhannya (Pratiwi, 2008). 2.2.1 Jamur endofit Endofit

merupakan

bakteri

(termasuk

Actinomycetes) atau jamur yang siklus hidupnya berada secara intra dan/atau ekstra seluler dalam jaringan sehat dari tanaman inang, yang pada umumnya tidak menyebabkan gejala penyakit pada inangnya (Fouda et al., 2015). Bakteri dan/atau jamur endofit ditemukan hampir pada semua spesies tanaman yang mempunyai jaringan pembuluh (Tan dan Zou, 2001). Secara harfiah, kata endofit berarti "di dalam tanaman" (Endon = dalam, Phyton = tanaman). Penggunaan istilah tersebut mengandung arti yang sangat luas, misalnya bakteri, jamur, tanaman dan serangga pada tanaman, dan juga untuk alga. Namun jamur lebih banyak diteliti daripada bakteri karena memiliki ketahanan terhadap perubahan lingkungan yang lebih

SKRIPSI


ARMILA F.


23

baik dibandingkan bakteri dan waktu pertumbuhannya lebih lambat dibandingkan dengan bakteri sehingga faktor faktor yang berpengaruh terhadap pertumbuhannya lebih dapat dikendalikan (Pratiwi, 2015). Endofit dapat berupa bakteri, jamur , Aktinomycetes dan alga (Gond et al., 2011). Endofit lebih banyak diisolasi dari jamur (Strobel dan Daisy, 2003). Hal ini dikarenakan menurut Keller and Holly (1998) Jamur endofit memiliki ketahanan terhadap perubahan lingkungan yang lebih baik dibandingkan bakteri dan waktu pertumbuhannya lebih lambat dibandingkan dengan bakteri sehingga

faktor

faktor

yang

berpengaruh

terhadap

pertumbuhannya lebih dapat dikendalikan (Pratiwi, 2015). Jamur endofit dapat membentuk koloni dalam jaringan tanaman tanpa membahayakan inangnya (Arnold et al., 2001). Hubungan antara jamur endofit dengan tanaman inangnya bervariasi dari saprofit, parasit, hingga mutualistik (Strobel dan Daisy, 2003). Jamur endofit akan bersifat patogen apabila tanaman inang mengalami stres dan/atau usia tanaman inang sudah mulai tua (Tan dan Zou, 2001). Menurut Stroobel and Daisy, (2003) ada beberapa kriteria tumbuhan inang yang dapat diisolasi mikroba endofitnya yaitu, tumbuhan yang berasal dari lingkungan yang unik, mempunyai sejarah etnobotani, tumbuh di daerah endemik dan tumbuh di daerah yang kaya akan biodiversitas/ beriklim tropis. Hampir semua tanaman yang memiliki jaringan pengangkutan diketahui

SKRIPSI


ARMILA F.


24

mengandung bakteri dan atau jamur endofit. Pada umumnya jamur

endofit

bersifat

menguntungkan

bagi

tumbuhan

inangnya. Endofit mampu meningkatkan kelarutan dari mineral fosfat, memproduksi siderofores atau ammonia, serta mampu mensistesis beberapa faktor pertumbuhan bagi tumbuhan inang seperti auxin, ACC, dan IAA sehingga berperan penting dalam memperbaiki asupan nutrisi tumbuhan inang. Selain itu, endofit mampu meningkatkan pertahanan tumbuhan inang terhadap infeksi dengan membentuk antibiotik dan menstimulasi mekanisme pertahanan tumbuhan inangnya (Andreolli et al., 2015). Faktor genetik, perkembangan dan kondisi lingkungan tempat tumbuh endofit mempengaruhi profil dari metabolit sekunder yang dihasilkan (Roopa, 2015). Metabolit sekunder yang dihasilkan akan lebih aktif dan spesifik jika diisolasi dari mikroba yang hidup pada biotop yang spesifik. Mikroba endofit terutama yang hidup di lingkungan yang spesifik atau bahkan di lingkungan yang tidak umum sering digunakan sebagai sumber penemuan senyawa bioaktif baru (Prihatiningyas, 2005). Jamur endofit yang diisolasi dari daerah tropis lebih potensial sebagai sumber senyawa bioaktif jika dibandingkan dengan jamur endofit yang diisolasi dari daerah temperate (Strobel dan Daisy, 2003). Misalnya jamur endofit Thievalia polygonoperda yang diisolasi dari tumbuhan akar kuning (Fibraurea chloroleuca) yang tumbuh di hutan Kalimantan memiliki daya antibakteri yang kuat (Prihatiningtias, 2005). Jamur endofit merupakan

SKRIPSI


ARMILA F.


25

sumber metabolit yang kaya dengan aktivitas biologis yang beragam.

Beberapa

peneliti

melaporkan

senyawa

yang

dihasilkan jamur endofit mempunyai potensi aktivitas biologis yang

sangat

besar

dan

beragam

diantaranya

sebagai

antimikroba, antivirus, antiparasit, antitumor, antioksidan, imunomodulator, antituberkulosis dan insektisida (Astuti et al., 2014; Hussain et al., 2014). Beberapa aktivitas dari jamur endofit disajikan dalam tabel berikut:

SKRIPSI


ARMILA F.


26

Tabel 2.2 Beberapa aktivitas dari jamur endofit Jamur endofit penghasil

Tanaman inang

Lewia infectoria

Tachia grandifolia

Nigrospora oryzae

Nyctanthes arbortristis

Penicillium chrysogenum

Asclepias sinaica

Nama metabolit

pyrrocidine C

Aktivitas terhadap

Acuan

Staphylococcus aureus

Casella et al.,2013

(Antibakteri)

-

-

Pseudomonas aeruginosa dan Shigella sp (Antibakteri)

Gond et al., 2012

Candida albicans dan Escherisia coli

Fouda et al., 2015

(Antibakteri)

Paraphaeosphaeri a nolinae

Pleosporales

Artemisia annua

Pinus strobus

paranolin

Dihydrobenzofu ran Xanthene

Botryosphaeria rhodina

SKRIPSI

Salacia oblonga

Taxol


Antikanker

Richardson et al., 2015

Microbotryum violaceum dan Bacillus subtilis

Richardson et al., 2015

Antikanker

ARMILA F.

Roopa et al., 2015


27

Bacillus subtilis Phoma sp

Cinnamomum mollissimum

4hydroximellein

(antibakteri)

Santiago et al., 2014

Antikanker MRSA

Bacillus subtilis

Sargassum spp

lipopeptides

Dan Staphylococcus epidermidis

Susilowati et al., 2015

(Antibakteri)

Streptomyces sp

Kennedia nigricans

munumbisin

Bacillus anthracis dan M. Tuberculosis

Strobel dan Daisy, 2003

(Antibakteri)

Streptomycete.

Pestalotiopsis microspora

Chaetomiu sp

SKRIPSI

Grevillea pteridifolia

kakadumisin

Terminalia morobensis

pestacin and isopestacin

Eugenia jambolana

Bakteri Gram positif (Antibakteri)

Strobel dan Daisy, 2003

Antioksidan

Fenolik


ARMILA F.

Yadav et al., 2014


28

2.2.2 Tinjauan tentang Cladosporium oxysporum

Gambar 2.2 Gambaran makroskopis dan mikroskopis konidiofor Cladosporium oxysporum menggunakan SEM (De Hoog, 2000). 2.2.2.1 Klasifikasi Cladosporium oxysporum Kingdom : Fungi Phylum

: Ascomycota

Kelas

: Ascomycetes

Ordo

: Mycosphaerellales

Famili

: Mycosphaerallaceae

Genus

: Cladosporium

Spesies : Cladosporium oxysporum Berk. & Curtis (De Hoog, 2000) 2.2.2.2 Ciri Morfologi Mikroorganisme endofit Cladosporium oxysporum memiliki ciri-ciri

miselium internal dan dangkal

atau

superfisial, hifa longgar bercabang, lebar 1-4 µm, septae yang tidak berkerut, subhialin berwarna hijau pucat lebih gelap pada

SKRIPSI


ARMILA F.


29

dasar konidiofora, tengah berwarna hijau zaitun kecoklatan, lembut, dinding sel kadang tipis kadang tebal, kadang tertutup senyawa seperti polisakarida, seringkali membentuk tali (Bensch et al., 2010; Bensch et al., 2012). 2.2.2.3 Habitat Cladosporium oxysporum diisolasi dari udara, tanah, pada bagian mati dari daun dan ranting herbal dan tanaman berkayu serta bahan organik lain, tersebar luas terutama di daerah subtropis (Bensch et al., 2012). Jamur ini diketahui bersifat saprofit dan parasit pada tanaman dan patogen pada manusia yang

menyebabkan

reaksi

alergi

serius

pada

saluran

pernapasan, infeksi pada kulit, mata dan kuku (Huyan et al., 2012; Tasic et al., 2007). 2.2.2.4

Kandungan

metabolit

sekunder

bioaktif

marga

Cladopsorium Sampai saat ini dilaporkan bahwa beberapa spesies dari marga Cladosporium yang hidup sebagai endofit mampu menghasilkan metabolit bioaktif seperti Aconitine, Bulgarein, Cladosporol, Huperzine A, Paclitaxol, 3-Phenyl-2-propenoic acid,

Bis(2-ethyl-hexyl)phthalate,

Sumiki’s

acid,

acetyl

Sumiki’s acid, Brefeldin A, Pandangolide 1a, pandangolide 1, Pandangolide 2 dan iso cladospolide B (Yang et al., 2012; Zhang et et al., 2007; Hua Qi et al., 2008; Assante et al., 2005; Jadulco et al., 2001; Raj et al., 2014; Gesner et al., 2005). Beberapa spesies dari marga Cladosporium yang hidup bebas

SKRIPSI


ARMILA F.


30

seperti C. fulvum, dan C. cladosporioides juga diketahui menghasilkan

mikotoksin

emodin

(2-methyl-4,5,7-

trihydroxyanthraquinone) yang dapat menyebabkan diare pada manusia. C. cladosporioides juga mengahasilkan toksin cladosporin (3,4-dihydro-6,8-dihydroxy-3-(6-methyltetrahydropyran-2-ylmethyl)

isocoumarin)

yang

bersifat

sitotoksik

(Ogórek, 2012). 2.2.3 Tinjauan Tentang Ekstrak Etilasetat Jamur Endofit Cladosporium Oxysporum Ekstrak

etilasetat

jamur

endofit

Cladosporium

oxysporum diperoleh dari filtrat ekstraksi jamur dengan pelarut etilasetat. Ekstrak etilasetat jamur endofit Cladosporium oxysporum

dipisahkan

dengan

kromatografi

kolom

menggunakan fase gerak gradien. Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, ekstrak etil asetat jamur endofit Cladosporium oxysporum diduga mengandung golongan senyawa steroid dan flavonoid yang bersifat sebagai antioksidan dan senyawa terpenoid yang aktif dalam melawan bakteri, jamur, virus dan protozoa (Putri, 2014; Winarti, 2005). Hasil pengujian aktivitas terhadap ekstrak etil asetat jamur endofit Cladosporium oxysporum dari Aglaia odorata Lour menunjukkan bahwa 6 ( fraksi 3, 4, 5, 6, 7, 10, 11 dan 12) dari 13 fraksi-fraksi yang diuji menghambat Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 8739 dan Candida albicans ATCC 10231 (Dorra, 2011).

SKRIPSI


ARMILA F.


A

B

C

31

D

Gambar 2.3 (a) Hasil KLT fraksi 1-2 dari eksrak etilasetat jamur Cladosporium oxysporum dengan fase diam silica gel 60 F254nm; fase gerak EtOAc:CHCl3 (1:1) dengan penampak noda UV dan anisaldehid-H2SO4 p (b) Hasil KLT fraksi 3-8 dari eksrak etilasetat jamur Cladosporium oxysporum dengan fase diam silica gel 60 F254nm; fase gerak EtOAc:n-heksan dengan penampak noda UV dan anisaldehid-H2SO4 p. Fraksi 6 dan 7 digabung (c) Hasil KLT fraksi 9-14 dari eksrak etilasetat jamur Cladosporium oxysporum dengan fase diam silica gel 60 F254nm; fase gerak CHCl3:MeOH:Air (65:35:1) dengan penampak noda UV dan anisaldehid-H2SO4 p. Fraksi 10-11 dan 13-14 digabung (d) Hasil KLT fraksi 15-16 dari eksrak etilasetat jamur Cladosporium oxysporum dengan fase diam silica gel 60 F254nm; fase gerak CHCl3:MeOH (65:35) dengan penampak noda UV dan anisaldehid-H2SO4 p (Dorra, 2011).

SKRIPSI


ARMILA F.


32

Tabel 2.3 Metabolit sekunder yang dihasilkan oleh jamur marga Cladopsorium yang hidup tidak sebagai endofit Nama metabolit

Jamur penghasil

Berat Molekul

Emodin (2-methyl-4,5,7trihydroxyanthraquinone)

Cladosporium. fulvum

270.2369

dihydro-6,8-dihydroxy-3-(6methyltetrahydro-pyran-2ylmethyl)isocoumar

Cladosporium cladosporioides

SKRIPSI

Struktur molekul

292.327


Acuan

Ogórek,et al., 2012

Ogórek et al., 2012

ARMILA F.


33

Tabel 2.4 Metabolit sekunder yang dihasilkan oleh jamur endofit dari marga Cladosporium sebagai endofit Nama metabolit

Tanaman Jamur endofit

inang

Asal inang

Berat Molekul

Struktur Molekul

Acuan

penghasil

Aconitine

SKRIPSI

Cladosporium cladosporioides

Aconitum leucostomum

Terrestrial

645.7370


Yang et al., 2012

ARMILA F.


34

Huperzine A

Cladosporium cladosporioide s LF70

Pandangolid e 1a

Cladosporium sp.

Cladosporium oxysporum

Paclitaxol

SKRIPSI

Terestrial

242.3162

Zhang et al.,2011

Niphates rowi

Sponge

244.2840

Gesner et al, 2005

Tidak disebutkan

Terestrial

853.9061

Raj et al., 2014

Huperzia serratia


ARMILA F.


35

Iso cladopsolide B

Cladosporium sp.

Niphates rowi

3-Phenyl-2propenoic acid

Cladosporium sp.

Tidak disebutkan

SKRIPSI

Sponge

sponge

228.2850

Gesner et al, 2005

148.05

Hua Qi et al., 2008


ARMILA F.


36

Sumiki’s acid

Cladosporium herbarum

Callyspongi a aerizusa

sponge

142.1094

Jadulco et al., 2001

acetyl Sumiki’s acid



sponge

184.1461

Jadulco et al., 2001

SKRIPSI


ARMILA F.


37

Brefeldin A

Pandangolid e2

SKRIPSI

Cladosporium sp.

Quercus variabilis

Terestrial

280.3593

Wang et al., 2006



Sponge

318.386

Jadulco et al,2001


ARMILA F.


38

2.3 Tinjauan antibiotik Antibiotik merupakan zat kimia yang dihasilkan oleh mikroorganisme (Aktinomycetes, fungi dan bakteri)

yang dapat

menghambat atau membasmi mikroorganisme lain (Goodman dan Gilman, 2011). Obat yang digunakan untuk membasmi mikroba (penyebab infeksi pada manusia) ditentukan harus memiliki toksisitas selektif setinggi mungkin, artinya obat antimikroba harus bersifat sangat toksik untuk mikorba tetapi relatif tidak toksik untuk hospes. Berdasarkan spektrumnya antibiotika dibagi menjadi dua kelompok, yaitu spektrum luas (broad spectrum) seperti tetrasiklin dan kloramfenikol dan spektum sempit (narrow spectrum) seperti benzil penisilin dan streptomisin (Gunawan, 2012). Antibiotik memiliki cara kerja yang berbeda-beda dalam membunuh

atau

menghambat

pertumbuhan

mikroorganisme.

Berdasarkan mekanisme kerjanya antibiotika dibagi dalam lima kelompok, yaitu antibiotik yang menghambat sintesis dinding sel bakteri, antibiotik yang bekerja dengan merusak membran sel mikroorganisme, antibiotik yang menghambat sintesis protein mikroorganisme dengan mempengaruhi subunit ribosom 30S dan 50S, antibiotik yang menghambat sintesis asam nukleat sel mikroba, dan antibiotik yang menghambat enzim yang berperan dalam metabolisme folat (Amin, 2014).

38

SKRIPSI


ARMILA F.

39


2.4 Tinjauan fraksinasi dan kromatografi 2.4.1 Tinjauan tentang fraksinasi Fraksinasi

merupakan

suatu

proses

pemisahan

komponen dari ekstrak berdasarkan sifat kepolaran atau ukuran molekul (Sharker dan Nahar, 2012). 2.4.2 Tinjauan tentang kromatografi Kromatografi merupakan metode pemisahan yang berdasarkan distribusi senyawa antara dua fase pemisah yaitu fasa diam dan fasa gerak. Sampel dilarutkan dalam fase gerak yang berupa gas atau cair. Fase gerak mengelusi fase diam yang ditempatkan dalam suatu kolom maupun plat. Fase diam dapat berupa zat padat atau cair. Fase gerak dan fase diam dipilih sedemikian rupa sehingga sampel terdistribusi diantara kedua fase bergantung pada afinitas terhadap keduanya (Spangenberg et al., 2011; Skoog et al., 2007). 2.4.2.1 Kromatografi Lapis Tipis Kromatografi lapis tipis merupakan bagian dari kromatografi cair dimana fase gerak berupa cairan dan fase diam berupa selapis lapisan tipis pada permukaan plat datar. Mekanisme pemisahan kromatografi lapis tipis yaitu adsorpsi. Kromatografi lapis tipis dapat digunakan untuk menganalisa komponen

dalam

campuran,

mendeteksi

kontaminan,

mengetahui kesempurnaan reaksi dan memilih sistem eluen untuk kromatografi kolom (Skoog et al., 2007).

SKRIPSI


ARMILA F.

40


Prinsip dasar dari kromatografi lapis tipis adalah sejumlah tertentu solut ditotolkan pada fase diam yang berupa lapisan tipis sorbent sebagai zona awal eluasi untuk kemudian dikeringkan. Fase gerak yang berupa campuran pelarut organik murni dikembangkan dalam suatu chamber tertutup selanjutnya plat fase diam dieluasi dengan fase gerak yang telah

disiapkan

(Sherma

et

al.,

2003).

Fase

gerak

menyebabkan solut bermigrasi sepanjang lintasan pada fase diam melalui suatu gaya kapilaritas (Skoog et al., 2007). Pada akhir dari eluasi, didapat suatu jarak yang ditempuh noda solut, solut yang bergerak dengan pelan berarti memiliki afinitas yang lebih besar terhadap fase diam sedangkan solut yang bergerak dengan cepat dapat diartikan memiliki afinitas yang rendah terhadap fase diam atau kelarutan yang lebih tinggi terhadap fase gerak (Gritter et al., 1991). Fase diam yang digunakan dalam KLT merupakan penjerap berukuran kecil dengan diameter partikel antara 9-30 µm. Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik efisiensi dan resolusinya. Penjerap yang paling sering digunakan adalah silika gel, aluminium oxida, kieselguhr, magnesium oxida, dan magnesium silicate, sementara mekanisme pemisahan yang utama pada KLT adalah adsorpsi dan partisi (Spangenberg et al., 2011).

SKRIPSI


ARMILA F.


41

Sistem fase gerak yang paling sederhana ialah campuran 2 pelarut organik karena daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi secara optimal. Berikut adalah beberapa petunjuk dalam memilih dan mengoptimasi fase gerak: - Fase gerak harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT merupakan teknik yang sensitif. - Fase gerak harus mempunyai toksisitas rendah dan bersifat inert - Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf terletak antara 0,2 - 0,8 untuk memaksimalkan pemisahan. - Pemisahan dengan menggunakan fase diam polar seperti silica gel, polaritas fase gerak akan menentukan kecepatan migrasi solut yang berarti juga menentukan nilai Rf. Penambahan pelarut yang bersifat sedikit polar seperti dietil eter ke dalam pelarut non polar seperti metil benzen akan meningkatkan harga Rf secara signifikan. - Solut-solut ionik dan solut-solut polar lebih baik digunakan campuran pelarut sebagai fase geraknya, seperti campuran air dan metanol dengan perbandingan tertentu. Penambahan sedikit asam etanoat atau ammonia masingmasing akan meningkatkan solut-solut yang bersifat basa dan asam. Reprodusibilitas diperoleh bila volume sampel yang

SKRIPSI


ARMILA F.


42

ditotolkan paling sedikit 0,5 µl, jika volume sampel yang ditotolkan lebih besar dari 2-10 µl, maka penotolan harus dilakukan secara bertahap dengan dilakukan pengeringan antar totolan. Sampel setelah ditotolkan maka tahap selanjutnya adalah mengembangkan sampel dalam bejana kromatografi yang sebelumnya telah dijenuhi dengan uap fase gerak. Tepi bagian bawah lempeng tipis yang telah ditotoli sampel dicelupkan kedalam fase gerak kurang lebih 0,5-1 cm. Tinggi fase gerak dalam bejana harus dibawah lempeng yang telah berisi totolan sampel. Bejana kromatografi harus tertutup rapat dan sedapat mungkin volume fase gerak sedikit mungkin (akan tetapi harus mampu mengelusi lempeng sampai

ketinggian

Penjenuhan

lempeng

yang

telah

ditentukan).

fase gerak dilakukan dengan cara melapisi

bejana dengan kertas saring, fase gerak telah mencapai ujung dari kertas saring, maka dapat dikatakan fase gerak telah jenuh (Spangenberg et al., 2011). 2.4.2.2 Kromatografi Lapis Tipis Preparatif KLT preparatif hampir selalu digunakan sebagai langkah pemurnian akhir dalam prosedur isolasi. Ketebalan penjerap yang sering dipakai adalah 0,5-2 mm, ukuran plat yang digunakan untuk KLT preparatif biasanya 20x20 cm atau 20x40 cm. Penjerap yang paling umum digunakan untuk KLT preparatif adalah silika gel. Sebagai acuan, KLT preparatif sebaiknya untuk memisahkan campuran senyawa

SKRIPSI


ARMILA F.

43


yang terdiri dari tidak lebih dari tiga senyawa. Jumlah sampel yang dapat dipisahkan adalah 10-1000 mg (Sherma et al., 2003). 2.4.2.3 Kromatografi Lapis Tipis dua arah KLT dua arah atau KLT dua dimensi ini bertujuan untuk meningkatkan resolusi sampel ketika komponenkomponen solut mempunyai karakteristik kimia yang hampir sama, karena nilai Rf juga hampir sama. Selain itu dua sistem fase gerak yang sangat berbeda dapat digunakan secara berurutan

pada

suatu

campuran

tertentu

sehingga

memungkinkan untuk melakukan pemisahan analit yang mempunyai tingkat polaritas yang hampir sama. KLT dua arah dilakukan dengan melakukan penotolan sampel pada lempeng kemudian dikembangkan dengan satu sistem fase gerak sehingga campuran terpisah menurut jalur yang sejajar dengan salah satu

sisi

kemudian lempeng diangkat,

o

dikeringkan, diputar 90 C dan diletakkan kedalam bejana kromatografi yang berisi sistem fase gerak kedua, sehingga bercak yang terpisah pada pengembangan pertama terletak dibagian bawah lempeng kemudian dilakukan kromatografi lagi (Gandjar dan Rohman, 2012). 2.5 Tinjauan tentang karakterisasi 2.5.1 KLT-Densitometer Densitometer merupakan alat untuk mengukur sinar balik yang dipantulkan atau yang dipancarkan oleh lempeng

SKRIPSI


ARMILA F.

44


KLT yang mengandung analit (Gandjar dan Rohman, 2012). Hasil pengukuran dari densitometer berupa kromatogram dengan data area sebagai sumbu Y dan Rf sebagai sumbu X. 2.5.2 HPLC HPLC merupakan metode pemisahan senyawa kimia oleh perbedaan kecepatan elusi (Gandjar dan Rohman, 2012). HPLC dapat digunakan untuk pemisahan, pemurnian dan identifikasi senyawa kimia dengan mendasarkan pada waktu retensi senyawa kimia tersebut (Gandjar dan Rohman, 2012). Detektor yang sering digunakan pada HPLC adalah detektor PDA. Detektor PDA merupakan detektor UV-Vis yang mampu memberikan kumpulan kromatogram secara simultan pada panjang gelombang yang berbeda (antara 190-400 nm) dalam sekali proses ((Gandjar dan Rohman, 2012). 2.5.3 GC GC merupakan metode pemisahan senyawa organik yang mudah menguap (Fowlis, 1998). Gas kromatografi merupakan salah satu teknik kromatografi yang menggunakan prinsip

pemisahan

campuran

berdasarkan

perbedaan

kecepatan migrasi komponen-komponen penyusunnya. Gas kromatografi biasa digunakan untuk mengidentifikasi suatu senyawa yang terdapat pada campuran gas (Fowlis, 1998). 2.5.4 Speketroskopi Masa (MS) Spektroskopi masa (Mass Spectroscopy) adalah salah satu teknik analisis yang berguna untuk mengidentifikasi

SKRIPSI


ARMILA F.

45


senyawa yang belum diketahui identitasnya dan juga berguna untuk elusidasi struktur. Prinsip dari spektroskopi masa adalah melihat pola fragmentasi dari sampel yang telah diubah menjadi bentuk ion melalui suatu proses ionisasi. Teknik ini merupakan teknik yang sensitif, spectra yang bagus tetap dapat dihasilkan meski dengan ukuran sampel yang kecil (beberapa mikrogram). Teknik ini terbagi menjadi ESI-MS,

SKRIPSI

LC-MS,

dan

HR-MS


(Kjer,

2009)

ARMILA F.


BAB III KERANGKA KONSEPTUAL Endofit merupakan bakteri (termasuk Actinomycetes) atau jamur yang siklus hidupnya berada secara intra dan/atau ekstra seluler dalam jaringan sehat dari tanaman inang, yang pada umumnya tidak menyebabkan gejala penyakit pada inangnya (Fouda et al., 2015). Bakteri dan/atau jamur endofit ditemukan hampir pada semua spesies tanaman yang mempunyai jaringan pembuluh (Tan dan Zou, 2001). Endofit lebih banyak diisolasi dari jamur (Strobel dan Daisy, 2003). Hal ini dikarenakan menurut Keller and Holly (1998) jamur endofit memiliki ketahanan terhadap perubahan lingkungan yang lebih baik dibandingkan bakteri dan waktu pertumbuhannya lebih lambat dibandingkan dengan bakteri sehingga faktor faktor yang berpengaruh terhadap pertumbuhannya lebih dapat dikendalikan (Pratiwi, 2015). Sebagian besar endofit mampu menghasilkan metabolit aktif dan beberapa darinya terbukti mempunyai manfaat sebagai obat (Astuti et al., 2014). Jamur endofit dapat membentuk koloni dalam jaringan tanaman tanpa membahayakan inangnya (Arnold et al., 2001). Hubungan antara jamur endofit dengan tanaman inangnya bervariasi dari saprofit, parasit, hingga mutualistik (Strobel dan Daisy, 2003). Jamur endofit akan bersifat patogen apabila tanaman inang mengalami stres dan/atau usia tanaman inang sudah mulai tua (Tan dan Zou, 2001). Metabolit sekunder yang dihasilkan jamur endofit meliputi berbagai golongan senyawa kimia seperti isoprenoid, poliketida,

46

SKRIPSI


ARMILA F.

47


turunan asam amino, terpenoid, steroid, xanton, fenol, isokumarin, benzopiranon, tetralon, sitokalasin, eniatin, alkaloid, fenilpropanoid, senyawa aromatik, dan peptida (Schulz et al., 2002; Astuti et al., 2014). Beberapa peneliti melaporkan senyawa yang dihasilkan jamur endofit mempunyai potensi aktivitas biologis yang sangat besar dan beragam diantaranya sebagai antimikroba, antivirus, antiparasit, antitumor,

antioksidan,

imunomodulator,

antituberkulosis

dan

insektisida (Astuti et al., 2014; Hussain et al., 2014). Aglaia odorata Lour merupakan salah satu diantara beragam tanaman berkhasiat obat yang digunakan masyarakat Indonesia. Bagian tanaman pacar cina memiliki beberapa khasiat antara lain daun

berkhasiat

(antifeedant),

sebagai

penghambat

insektisida,

penghambat

makan

serangga

(growth

perkembangan

regulator), mengatasi memar, bisul, darah haid banyak, bau badan dan diare. Bagian bunga berkhasiat untuk mengatasi perut kembung, sukar menelan, batuk, pusing dan mempercepat persalinan (Setiawati et al., 2008). Selain itu, ekstrak Aglaia odorata Lour mempunyai khasiat sebagai antimiroba, insektisida, dan sebagai wangi-wangian (Kinghorn et al., 2011). Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan oleh Zhang et al., (2012), pada tanaman ini berhasil diisolasi 20 jenis senyawa yaitu dua senyawa kumarin-lignoid, satu senyawa sterol, delapan senyawa triterpenoid, enam senyawa flavonoid, dua senyawa bisamid dan satu senyawa flavagline. Senyawa flavagline dan bisamida merupakan senyawa yang baru dilaporkan dari Aglaia odorata Lour.

SKRIPSI


ARMILA F.


48

Kriteria tumbuhan inang untuk dapat diisolasi mikroba endofitnya yaitu Berasal dari lingkungan unik, sejarah etnobotani, tumbuh di daerah endemik, dan tumbuh di daerah biodiversitas tinggi/ daerah beriklim tropis, memiliki berkas pengangkutan (Stroobel dan Daisy, 2003). Cladosporium oxysporum merupakan salah satu dari 135 jamur endofit yang berhasil diisolasi dari Aglaia odorata Lour yang diperoleh dari Kebun Raya Purwodadi (Sugijanto et al, 2003). Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, ekstrak etil asetat jamur endofit Cladosporium oxysporum diduga mengandung golongan senyawa steroid atau

flavonoid yang bersifat sebagai

antioksidan dan senyawa terpenoid yang aktif dalam melawan bakteri, jamur, virus dan protozoa.(Putri, 2014; Laksmi, 2014). Senyawa antimikroba dari Cladosporium sp yaitu Brefeldin A, Sumiki’s acid, acetyl Sumiki’s acid, iso cladospolide B, 3-Phenyl-2propenoic acid, Aconitine (Yang et al., 2012; Wang et al., 2007; Jadulco et al., 2001; Gesner et al., 2005). Hasil pengujian aktivitas terhadap ekstrak etil asetat jamur endofit Cladosporium oxysporum dari Aglaia odorata Lour menunjukkan bahwa 6 dari 13 fraksi-fraksi yang diuji menghambat Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 8739 dan Candida albicans ATCC 10231 (Dorra, 2011). Penelitian ini merupakan kelanjutan dari penelitian terdahulu yang bertujuan untuk isolasi dan karakterisasi untuk mendapatkan senyawa metabolit sekunder yang bertanggung jawab terhadap aktivitas antimikroba dari fraksi aktif tersebut. Kerangka konseptual penelitian disajikan dalam gambar 3.1

48 SKRIPSI


ARMILA F.

49


Endofit merupakan bakteri (termasuk Actinomycetes) atau jamur yang hidup secara intra dan/atau ekstra seluler dalam jaringan sehat dari tanaman inang, pada umumnya tidak menyebabkan gejala penyakit pada tanaman inangnya (Fouda et al., 2015).

Kriteria tumbuhan inang untuk dapat

diisolasi

mikroba

endofitnyaBerasal lingkungan

unik,

dari Sejarah

etnobotani, Tumbuh di daerah endemik, dan Tumbuh di daerah biodiversitas tinggi/

Beberapa penelitian telah melaporkan

tropis,

bahwa senyawa yang dihasilkan jamur endofit

pengangkutan

mempunyai potensi aktivitas biologis yang sangat

Daisy, 2003).

besar

dan

beragam

diantaranya

beriklim

Memiliki (Strobel

berkas dan

sebagai

:Antimikroba, Antivirus, Antiparasi, Antitumor, Antioksidan, Imunomodulator, Antituberkulosis, Insektisida (Astuti et al., 2014; Hussain et al., 2014).

Ekstrak etil asetat jamur endofit Cladosporium oxysporum mengandung golongan senyawa steroid atau flavonoid yang bersifat sebagai antioksidan dan senyawa terpenoid yang aktif dalam melawan bakteri, jamur, virus dan protozoa (Putri, 2014; Laksmi, 2014).

Tanaman pacar cina memiliki khasiat : daun sebagai insektisida, penghambat makan (antifeedant), penghambat perkembangan serangga (growth regulator), mengatasi memar, bisul, darah haid banyak, bau badan dan diare. Bagian bunga untuk mengatasi perut kembung, sukar menelan, batuk, pusing, dan mempercepat persalinan. Ekstrak pacar cina berkhasiat sebagai bakterisida, insektisida, dan angiwangian. (Kinghorn et al., 2011; Setiawati et al., 2008).

Senyawa antimikroba dari Cladosporium sp : Brefeldin A -> Quercus variabilis Sumiki’s acid -> Callyspongia aerizusa iso cladospolide B -> Niphates rowi (Wang et al., 2007; Jadulco et al., 2001; Gesner et al., 2005). Aktivitas ekstrak EtOAc jamur endofit Cl. oxysporum dari A. odorata Lour 6 dari 13 fraksi-fraksi yang diuji menghambat S. aureus ATCC 6538, E. coli ATCC 8739 dan C. albicans ATCC 10231 (Dorra, 2011).

Isolasi dan karakterisasi senyawa metabolit sekunder dari fraksi 12 jamur

49 dari tanaman Aglaia odorata Lour. Cladosporium oxysporum Gambar 3.1 Skema kerangka konseptual penelitian SKRIPSI


ARMILA F.


BAB IV METODE PENELITIAN 4.1 Tempat penelitian Penelitian Bioteknologi

dilakukan

Departemen

di Kimia

Laboratorium

Mikrobiologi-

Farmasi

Laboratorium

dan

Fitokimia Departemen Farmakognosi dan Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Airlangga. 4.2 Sampel Penelitian Sampel yang digunakan adalah fraksi 12 ekstrak etil asetat jamur endofit Cladosporium oxysporum yang diisolasi dari tanaman inang Aglaia odorata Lour yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Farmasi, Universitas Airlangga, Surabaya (Sugijanto et al.,2006). Determinasi C.oxysporum dilakukan oleh Arnulf Diesel di Institut fur Pharmazeutische Biologie, HeinrichHeine-Universitat Dusseldof, Jerman. Jamur ditumbuhkan pada media padat (malt extract agar) dan diinokulasi pada media tersebut selama 7 hari kemudian dipindahkan ke media cair malt extract dan diinkubasi selama 28-30 hari. Setelah dipanen jamur di ekstraksi menggunakan pelarut etil asetat. Ekstrak etil asetat difraksinasi menggunakan kolom silica gel dan menghasilkan 13 fraksi untuk dilakukan uji aktivitas antimikroba, hasil akhir didapatkan bahwa 6 dari 13 fraksi mempunyai aktivitas antimkroba terhadap Escherichia coli ATCC 8739, Candida albicans ATCC 10231, Staphylococcus aureus ATCC 6538 (Dorra, 2011).

50 SKRIPSI


ARMILA F.


51

4.3 Pelarut dan Pereaksi Pelarut yang digunakan yaitu metanol p.a (J.T Baker), etil asetat p.a (J.T Baker), kloroform p.a (Merck), n-hekasan p.a (J.T Baker), dan diklorometana p.a (J.T Baker). KLT menggunakan plat KLT silica gel 60 F254 Alumunium sheets 20x20 cm (Merck). Deteksi noda dilakukan dengan lampu UV pada panjang gelombang 254 dan 366 nm dan pereaksi penampak noda anisaldehid-asam sulfat pekat. 4.4 Alat-alat Alat yang digunakan yaitu timbangan analitik, chamber kromatografi CAMAG, lampu UV, ultrasonik, UFHPLC Shimadzu 20D, spektroskopi masa, kolom kromatografi ukuran diameter 2 cm dan panjang 50 cm, dan alat-alat gelas yang biasa digunakan di laboratorium. 4.5 Pelaksanaan Penelitian 4.5.1 Optimasi Eluen Fraksi 12 ekstrak etil asetat jamur endofit Cladosporium oxysporum yang diisolasi dari tanaman inang Aglaia odorata Lour dilarutkan dengan etil asetat q.s dan diultrasonik selama 5 menit. Fraksi 12 dianalisis menggunakan KLT Silica gel 60 F254 dengan berbagai macam eluen dan perbandingan yang mampu memberikan pemisahan yang paling baik. Penampak noda yang digunakan adalah sinar UV 254nm dan 366nm dan anisaldehid- Asam sulfat pekat.

51 SKRIPSI


ARMILA F.


52

4.5.2 Kromatografi lapis tipis preparatif Fraksi 12 ekstrak etil asetat jamur endofit Cladosporium oxysporum yang diisolasi dari tanaman inang Aglaia odorata Lour dilarutkan dengan etil asetat q.s dan diultrasonik selama 5 menit. Menotolkan fraksi yang terpilih pada plat KLT silica gel 60 F254 kemudian dilakukan eluasi. Setelah eluasi selesai noda dianalisis dengan sinar UV pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm dan penampak noda anisaldehid-asam sulfat pekat. Noda yang sudah dianalisi kemudian dikerok. 4.5.3 Uji kemurnian Uji kemurnian menggunakan KLT 2 dimensi. Menotolkan fraksi yang terpilih pada plat KLT Silica gel F254 dengan ukuran 5cm X 5cm dan mengeluasi menggunakan eluen terpilih kemudian dianalisis menggunakan sinar UV pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm dan penampak noda anisaldehid- asam sulfat pekat. 4.5.4 Karakterisasi isolat Karakterisasi isolat dilakukan dengan menggunakan KLT-densitometri, HPLC, GC, Mass Spectroscopy (MS) dan Nuclear Magnetic Resonance (NMR). Prinsip dari KLTdensitometri, HPLC dan GC adalah partisi sampel pada fase gerak dan fase diam berdasarkan polaritasnya, sedangkan prinsip dari Mass Spectroscopy adalah melihat pola fragmentasi dari sampel yang telah diubah menjadi bentuk ion melalui suatu proses ionisasi.

52 SKRIPSI


ARMILA F.


53

4.6 Skema kerja Fraksi no. 12 ekstrak etil asetat jamur Cladosporium oxysporum dari Aglaia odorata Lour.

Gambar 4.1 Skema kerja pelaksanaan penelitian fraksi no 12 ekstrak etilasetat 53 jamur Cladosporiun oxysporum dari Aglaia odorata Lour. SKRIPSI


ARMILA F.

54 ADLN-PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

BAB V HASIL PENELITIAN 5.1 Fraksi terpilih untuk dimurnikan Fraksi jamur endofit yang aktif dipilih fraksi 12.2 dengan berat 52,3 mg untuk dimurnikan lebih lanjut. Profil KLT dari subfraksi 12.2

ekstrak etiasetat jamur endofit Cladopsorium

oxysporum dari Aglaia odorata L adalah sebagai berikut :

Gambar 5.1 KLT fraksi 12.2 ekstrak etil asetat jamur Cladosporium oxysporum dengan fase diam silica gel 60F254; fase gerak adalah Diklorometana : EtOAc = 9:1. Penampak noda UV254 (kiri) serta anisaldehid-asam sulfat pekat (kanan). Keterangan angka menunjukkan nomor fraksi. 5.2 Kromatografi lapis tipis preparatif untuk fraksi 12.2 Fraksi 12.2 dipilih untuk dimurnikan berdasarkan pertimbangan pertimbangan profil KLT yang menarik dengan pereaksi anisaldehid-asam sulfat pekat dengan RF 0,34 mempunyai

54 SKRIPSI


ARMILA F.


warna merah-ungu dan noda dengan Rf 0,43 aktif kuat terhadap sinar UV254nm. Proses kromatografi lapis tipis preparatif menggunakan fase diam silica gel60 dan fase gerak diklorometana : EtOAc = 9:1. Hasil kromatografi lapis tipis preparatif adalah 8 subfraksi, selanjutnya dilakukan uji kemurnian untuk subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 dan optimasi eluen untuk subfraksi 12.2.8. Fase gerak terpilih untuk subfraksi 12.2.8 adalah kloroform : methanol = 8:2.

1 2 3 4 5 6 7 8

1 2 3 4 5 6 7 8

1 : subfraksi 12.2.1 2: subfraksi 12.2.2 3: subfraksi 12.2.3 4 : subfraksi 12.2.4 5 : subfraksi 12.2.5 6 : subfraksi 12.2.6 7 : subfraksi 12.2.7 8 : subraksi 12.2.8 Gambar 5.2 Hasil KLT 8 subfraksi hasil KLT preparatif subfraksi 12.2 ekstrak etilasetat jamur C. oxysporum dengan fase diam silica gel 60F254; fase gerak diklorometana : EtOAc= 9:1. Keterangan angka menunjukkan nomor fraksi. Keterangan :

SKRIPSI


ARMILA F.


Hasil penimbangan subfraksi : Tabel 5.1 Penimbangan subfraksi hasil KLT preparative Rf dengan penampak No. Fraksi

Berat zat (mg)

Rf dengan UV254nm

noda AnisaldehidH2SO4 p

12.2.1

1,8

0,86

0,86

12.2.2

1,0

-

-

12.2.3

2,4

0,95

-

12.2.4

3,5

0,45

-

12.2.5

4,6

-

-

12.2.6

6,3

0,43

-

12.2.7

13,7

-

0,34

12.2.8

9,1

-

-

Gambar 5.3 Hasil KLT Fraksi 12.2.8 ekstrak etil asetat jamur C. oxysporum dengan fase diam silica gel 60 F254; fase gerak kloroform : metanol= 8:2. Penampak noda dengan sinar UV panjang gelombang 254nm (kiri) dan penampak noda anisaldehid-asam sulfat pekat (kanan). Keterangan angka menunjukkan nomor fraksi.

SKRIPSI


ARMILA F.


5.3 Uji kemurnian subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 dengan KLT 2 Dimensi Berdasarkan hasil KLT dengan fase diam silica gel 60G dan fase gerak Diklorometana:EtOAc= 9:1, subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 menunjukkan satu noda untuk memastikan bahwa noda sudah murni maka dilakukan uji kemurnian dengan KLT 2 Dimensi. KLT 2 Dimensi

menggunakan

ukuran

plat

5x5

cm,

fase

gerak

Diklorometana : EtOAc= 9:1 dan fase diam silica gel 60 G.

12.2.6

12.2.6

12.2.7 12.2.7 Gambar 5.4 Hasil KLT 2 Dimensi subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 dengan fase diam silica gel 60F254; fase gerak diklorometana : EtOAc= 9:1. Penampak noda UV254 (kiri) serta anisaldehid-asam sulfat (kanan). Keterangan angka menunjukkan nomor fraksi.

SKRIPSI


ARMILA F.


5.4 Karakterisasi subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 Berdasarkan hasil KLT 2 Dimensi subfraksi 12.2.6 menunjukkan satu noda yang aktif terhadap UV254nm tetapi dengan penampak noda anisaldehid-asam sulfat pekat masih terdapat jumlah noda yang banyak dan subfraksi 12.2.7 menunjukkan satu noda yang aktif terhadap penampak noda anisaldehid-asam sulfat dan UV254nm. Karakteristik kimia dari senyawa yang terkandung dalam subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 dilakukan dengan KLT- Densitometer, HPLC dan GC. 5.4.1

Karakterisasi

dengan

KLT-densitometer

subfraksi

12.2.6 dan 12.2.7 dengan CAMAG TLC SCANNER 3

12.2.6

12.2.7

Gambar 5.5 Hasil kromatogram subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 dianalisa pada panjang gelombang 254nm. Keterangan angka menunjukkan nomor fraksi.

SKRIPSI


ARMILA F.


12.2.6

12.2.7

Gambar 5.6 Hasil spektra UV subfraksi 12.2.6 dengan Rf: 0,43 dan 12.2.7 dengan Rf: 0,34 dianalisa dengan KLT-densitometer dengan eluen dcm : EtOAc = 9:1. Keterangan angka menunjukkan nomor fraksi. Tabel 5.2 Rf dan panjang gelombang maksimum subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7

5.4.2

Fraksi

Rf

λmak (nm)

12.2.6

0,43

268

12.2.7

0,34

273

Karakterisasi subfraksi 12.2.6 dan 12.2.8 dengan HPLC

Tabel 5.3 Kondisi HPLC untuk analisis subfraksi 12.2.6 dan 12.2.8

SKRIPSI

Merk HPLC

UFLC Shimadzu 20 AD

Kolom

Phenomenex RP-18, ukuran pori 100 Å


ARMILA F.


Suhu kolom

300C

Konsentrasi sampel

25.000 ppm

Time program

45.00 menit

Pump Mode

Low pressure gradient

Total flow

1,000 ml/min

Pressure limit

Max 350

Detector

PDA

Tabel 5.4 Program waktu gradien eluen HPLC untuk subfraksi 12.2.6 dan12.2.8 Waktu (menit)

Eluen

Komposisi (%)

0.01

Metanol:Air

30:70

22.00

Metanol:Air

50:50

30.00

Metanol:Air

80:20

36.00

Metanol:Air

99.9:0.1

37.00

Metanol

100

45.00

Metanol

100

SKRIPSI


ARMILA F.


A

B

C Gambar 5.7 (A) Hasil kromatogram HPLC fraksi 12.2.6 pada panjang gelombang 254nm (B) Profil spectra UV puncak senyawa yang memiliki waktu retensi 7,959 menit dengan panjang gelombang maksimum 261 nm (C) Hasil counter plot senyawa subfraksi 12.2.6 dengan waktu retensi 7,959 menit.

SKRIPSI


ARMILA F.


D

E

F Gambar 5.8 (D) Hasil kromatogram HPLC subfraksi 12.2.8 pada panjang gelombang 254nm (E) Profil spectra UV senyawa yang memiliki waktu retensi 5,085 menit dengan panjang gelombang maksimum 261 nm (F) Profil spektra UV senyawa yang memiliki waktu retensi 6,089 menit dengan panjang gelombang maksimum 264 nm

SKRIPSI


ARMILA F.


Contour plot senyawa dengan tr: 5,085 menit

G

Contour plot senyawa dengan tr: 6,089 menit

H Gambar 5.8 (G) Profil contour plot senyawa yang memiliki waktu retensi 5,085 menit (H) Profil contour plot senyawa yang memiliki waktu retensi 6,089 menit.

SKRIPSI


ARMILA F.


5.4.3

Karakterisasi subfraksi 12.2.7 dengan GC-FID dengan Agilent Technologies 6890N Analisis menggunakan kromatografi gas dilakukan dengan

kondisi sebagai berikut: kolom HP-5 dengan panjang kolom 30 meter, suhu inlet 2500C, Split ratio 50:1, flow 1.0, suhu dimulai dari 1000C hingga 2500C dengan kenaikan 50C per menit selama 30 menit.

Gambar 5.9 Hasil kromatogram fraksi 12.2.7 yang dianalisis dengan GC-FID dengan kolom HP-5, suhu inlet 2500C, Split ratio 50:1, flow 1.0, suhu dimulai dari 1000C hingga 2500C dengan kenaikan 50C per menit selama 30 menit dan fase gerak gas helium.

SKRIPSI


ARMILA F.


5.4.4 Karakterisasi subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 dengan GCMSD Agilent 6973 series

Gambar 5.10 Hasil kromatogram subfraksi 12.2.6 dianalisis dengan GC-MSD dengan kolom HP-5, suhu inlet 2500C, Splitless, flow 1.0, suhu dimulai dari 1000C hingga 2500C dengan kenaikan 50C per menit selama 30 menit dan fase gerak gas helium.

Gambar 5.11 Hasil spektrum massa senyawa pada subfraksi 12.2.6 dengan waktu retensi 24,22 menit

SKRIPSI


ARMILA F.


Gambar 5.15

Hasil kromatogram fraksi 12.2.7 yang dianalisis

dengan GC-MS dengan kolom HP-5, suhu inlet 2500C, Split ratio 50:1, flow 1.0, suhu dimulai dari 1000C hingga 2500C dengan kenaikan 50C per menit selama 30 menit dan fase gerak gas helium.

Gambar 5.16 Hasil spektrum massa senyawa subfraksi 12.2.7 dengan tr: 23,30 menit yang dianalisis dengan GC-MS Agilent dengan kondisi: kolom HP-5, suhu inlet 2500C, Split ratio 50:1, flow 1.0, suhu dimulai dari 1000C hingga 2500C dengan kenaikan 50C per menit selama 30 menit dan fase gerak gas helium.

SKRIPSI


ARMILA F.


Gambar

5.17

Hasil

spektrum

massa

senyawa

4-4’-(1-


Gambar 5.18 Struktur senyawa 4-4’-(1-methylethylidene)bisphenol

SKRIPSI


ARMILA F.


Gambar 5.19 Hasil prediksi fragmentasi senyawa 4-4’-(1methylethylidene)bisphen

SKRIPSI


ARMILA F.


BAB VI PEMBAHASAN Proses pemurnian awal dari fraksi 12 menggunakan kromatografi kolom dengan fase diam Sephadex LH-20 dengan fase gerak metanol 100% , diperoleh 3 subfraksi yaitu subfraksi 12.1, 12.2 dan 12.3 (Pratiwi, 2015). Subfraksi 12.2 merupakan subfraksi yang

terpilih

untuk

dimurnikan

lebih

lanjut

berdasarkan

pertimbangan karakter noda yang menarik dan keterpisahan antar noda sudah baik. Metode pemurnian dilakukan dengan kromatografi lapis tipis preparatif. Metode pemurnian ini terpilih karena jumlah sampel sedikit yaitu 53,2 mg sehingga tidak memungkinkan dipisahkan dengan kromatografi kolom. Fase diam yang digunakan dalam KLT-preparatif adalah silika gel 60 dan fase gerak terpilih yaitu diklorometana : etilasetat = 9:1. Hasil kromatografi preparatif subfraksi 12.2 sebanyak 8 subfraksi. Dari 8 subfraksi dilakukan KLT. Hasil KLT (Gambar 5.2) terdapat tiga subfraksi yang dapat dilakukan analisis lebih lanjut yaitu fraksi 12.2.6, 12.2.7 dan 12.2.8. Pada subfraksi 12.2.6 dan 12.2.7 menunjukkan satu noda sehingga dipilih untuk dilakukan uji kemurnian. Subfraksi 12.2.8 belum menunjukkan keterpisahan noda yang baik namun memiliki berat yang cukup besar yaitu 9,1 mg sehingga dilakukan optimasi fase gerak (eluen). Proses optimasi fase gerak (eluen) dilakukan

untuk mendapatkan eluen yang dapat

memisahkan noda dengan baik dan fase gerak terpilih nantinya akan 69 SKRIPSI


ARMILA F.


digunakan sebagai fase gerak dalam KLT subfraksi 12.2.8 untuk pemurnian lebih lanjut. Optimasi eluen dilakukan dengan mencoba beberapa komposisi eluen. Fase gerak terpilih untuk subfraksi 12.2.8 adalah kloroform : metanol 8:2 (Gambar 5.3). Subfraksi 12.2.6 memiliki berat 6,3 mg dan berdasarkan hasil KLT didapatkan noda tunggal dengan Rf 0,43 yang terlihat dengan UV254 dan terlihat dengan penampak noda anisaldehid-asam sulfat dengan warna coklat lemah, warna yang timbul dapat demikian kemungkinan dapat disebabkan oleh kurang meratanya penampak noda yang disemprotkan atau noda kurang aktif terhadap penampak noda anisaldehid-asam sulfat pekat. Proses analisis selanjutnya dilakukan uji kemurnian dengan KLT 2D dengan fase gerak diklorometana : etilasetat = 9:1. Hasil uji kemurnian (Gambar 5.4) noda pada subfraksi 12.2.6 belum murni tetapi terdapat satu noda dominan yang aktif kuat terhadap sinar UV254. Subfraksi 12.2.6 diketahui larut dalam metanol sehingga analisis lebih lanjut dapat dilakukan dengan KLT-densitometer dan HPLC sistem reverse phase. Profil kromatogram KLT-densitometer subfraksi 12.2.6 menunjukkan terdapat satu puncak dominan pada Rf 0,43 (Gambar 5.5). Diamati spektrum UV pada Rf tersebut menunjukkan adanya serapan pada λmak 268 nm (Gambar 5.6). Serapan pada panjang gelombang ini dapat menjadi petunjuk adanya gugus kromofor benzene atau inti aromatis (202nm - 275nm) (Sampietro et al., 2009).

SKRIPSI


ARMILA F.


71

Profil kromatogram HPLC subfraksi 12.2.6 dapat dilihat pada Gambar 5.7(A). Eluasi dilakukan secara gradien dengan eluen metanol dan air. Eluasi gradien baik digunakan untuk kondisi pemisahan dengan sampel yang komplek seperti bahan alam yang memiliki derajat polaritas yang beragam (Sarker et al., 2006). Eluasi gradien dimulai dengan komposisi metanol : air (30:70) hingga menit ke 45 komposisi eluen menjadi metanol 100%. Detektor yang digunakan adalah detektor PDA yang dapat mendeteksi senyawa organik pada rentang panjang gelombang 200-600 nm, detektor PDA dapat mendeteksi absorbansi UV/Vis pada beberapa panjang gelombang sekaligus (Sarker et al., 2006). Kromatogram

HPLC

subfraksi

12.2.6

pada

panjang

gelombang 254 nm menunjukkan ada satu puncak dominan pada waktu retensi 7,959 menit dengan % kemurnian 84,98% (Gambar 5.7(A)). Diamati spektrum UV pada puncak tersebut (Gambar 5.7(B)) menampilkan adanya serapan pada panjang gelombang maksimum 261 nm dengan intensitas 300 mAU. Serapan pada panjang gelombang ini dapat menjadi petunjuk adanya gugus kromofor benzene atau inti aromatis (202nm - 275nm) (Sampietro et al., 2009). Berdasarkan gambaran contour plot terhadap subfraksi 12.2.6 (Gambar 5.7(C)) dapat dilihat bahwa puncak yang terdeteksi pada waktu retensi 7,959 menit memiliki intensitas berwarna biru yang berarti cukup murni. Berdasarkan gambaran contour plot dikatakan bahwa dalam satu puncak pada waktu retensi ke 7,959

SKRIPSI


ARMILA F.


72

menit hanya terdapat satu senyawa, untuk memastikan senyawa yang terkandung dalam subfraksi 12.2.6 maka dilakukan analisis lebih lanjut menggunakan GC-MS. Hasil kromatogram GC-MS subfraksi 12.2.6 menunjukkan adanya puncak pada waktu retensi 24,22 menit (Gambar 5.10). MS merupakan detektor yang dapat mendeteksi molekul-molekul gas bermuatan, berdasarkan massa atau beratnya (Pavia et al., 2009). Spektrum massa merupakan gambaran antara limpahan relative lawan perbandingan massa/muatan. Spektrum massa senyawa pada subfraksi 12.2.6 dengan waktu retensi 24,22 menit dapat dilihat pada Gambar 5.11. Selanjutnya akan dilakukan elusidasi struktur terhadap subfraksi 12.2.6. Subfraksi 12.2.7 memiliki berat 13,7 mg dan berdasarkan hasil KLT didapatkan noda tunggal yang terlihat dengan UV254 dan terlihat dengan penampak noda anisaldehid-asam sulfat dengan warna merah-ungu. Senyawa yang menghasilkan noda warna keungunan

dengan

menunjukkan bahwa

penampak senyawa

noda

tersebut

anisaldehide-H2SO4 merupakan

golongan

terpenoid atau steroid (Sherma, 2003). Proses analisis selanjutnya dilakukan uji kemurnian dengan KLT dua dimensi dengan fase gerak diklorometana : etilasetat = 9:1. Dari hasil uji kemurnian (Gambar 5.4) noda pada fraksi 12.2.7 sudah murni atau hanya terdapat satu noda. Subfraksi 12.2.7 diketahui larut dalam etilasetat sehingga analisis selanjutnya dapat dilakukan dengan KLT-densitometer dan GC.

SKRIPSI


ARMILA F.


73

Profil kromatogram KLT-densitometer subfraksi 12.2.7 menunjukkan terdapat satu puncak dominan pada Rf 0,34 (Gambar 5.5). Diamati spektrum UV pada Rf tersebut menunjukkan adanya serapan pada panjang gelombang maksimum 273 nm (Gambar 5.6). Serapan UV pada panjang gelombang sekitar 270 nm dapat menjadi petunjuk adanya senyawa fenol (Skoog et al., 2007). Profil kromatogram GC subfraksi 12.2.7 dapat dilihat pada Gambar 5.9. Pemograman suhu dilakukan secara pemisahan suhu terprogram atau suhu yang berubah secara terkendali yaitu dengan suhu dimulai dari 1000C hingga 2500C dengan kenaikan 50C per menit selama 30 menit. Pemisahan dengan suhu terprogram mampu meningkatkan resolusi komponen-komponen dalam suatu campuran yang mempunyai titik didih pada kisaran yang luas seperti sampel bahan alam (Skoog, 2013). Detektor yang digunakan adalah detektor FID yang dapat mendeteksi adanya atom karbon pada senyawa organik sehingga detektor ini dapat digunkana oleh hampir semua senyawa organik (Skoog, 2013). Kromatogram GC subfraksi 12.2.7 menunjukkan ada 1 puncak dominan pada waktu retensi 27,868 menit (Gambar 5.9). Memastikan senyawa yang terkandung dalam subfraksi 12.2.7 maka dilakukan analisis lebih lanjut menggunakan GC-MS. Kromatogram GC-MS subfraksi 12.2.7 menunjukkan ada 1 puncak dominan pada waktu retensi 23,30 menit (Gambar 5.15). MS merupakan detektor yang dapat mendeteksi molekul-molekul

SKRIPSI


ARMILA F.


74

gas bermuatan, berdasarkan massa atau beratnya (Pavia et al., 2009). Spektrum massa merupakan gambaran antara limpahan relative lawan perbandingan massa/muatan. Spektrum massa senyawa dalam subfraksi 12.2.7 dengan waktu retensi 23,30 menit dapat dilihat pada Gambar 5.16 dengan [M]+ m/z 228 menunjukkan tipe fragmentasi pada C kwartener dengan pola fragmentasi m/z 213 [M-15], 119 [M109], 91 [M-137], 77 [M-151], dan 65 [M-163].

Selanjutnya

dilakukan elusidasi struktur dari data spektrum massa tersebut menggunakan mass bank (www.massbank.jp) dan diidentifikasi identik dengan senyawa 4-4’-(1-methylethylidene)bisphenol dengan skor kemiripan 88,31%. Kriteria kemiripan dengan database dapat dianggap sama apabila > 80% (Odchimar et al., 2016). Struktur dan pola

fragmentasi

senyawa

4-4’-(1-methylethylidene)bisphenol

berturut-turut dapat dilihat pada Gambar 5.18 dan Gambar 5.19. Senyawa 4-4’-(1-methylethylidene)bisphenol atau Bisphenol A merupakan senyawa kimia penting yang terdiri dari dua gugus fenol dan utamanya digunakan pada industri untuk pembuatan plastic polikarbonat dan epoksi resin, selain itu bisfenol A dapat meenyebabkan gangguan pada endokrin (Chhaya dan Gupte, 2013; Fujiwara et al., 2016)). Senyawa bisphenol-sesquiterpen telah diisolasi dari jamur Kionochaeta ramifera BCC 7585. Senyawa bisphenol-sesquiterpen yang diisolasi adalah ramiferin dan menunjukkan aktivitas antimalarial dan antituberkulosis (Bunyapaiboonsri et al., 2008).

SKRIPSI


ARMILA F.


75

Adanya bukti penelitian diatas memungkinkan bahwa senyawa 4-4’(1-methylethylidene)bisphenol atau Bisphenol A merupakan salah satu senyawa yang bertanggung jawab terhadap aktifitas antijamur yang diberikan oleh fraksi 12 ekstrak etilasetat jamur endofit dari Aglaia odorata Lour. Subfraksi 12.2.8 memiliki berat 9,1 mg dan berdasarkan hasil KLT didapatkan noda pada subfraksi ini belum dapat terpisah (Gambar 5.2) oleh karena itu dilakukan optimasi eluen untuk mendapatkan eluen yang dapat memisahkan noda dengan baik. Optimasi eluen dilakukan dengan mencoba berbagai macam eluen. Eluen terpilih yaitu kloroform : methanol = 8:2. Profil KLT subfraksi 12.2.8 dengan eluen kloroform : methanol= 8:2 menunjukkan adanya dua noda dengan Rf masing-masing 0,7 dan 0,8 yang aktif terhdap sinar UV254nm dan penampak noda anisaldehide-H2SO4 pekat dengan warna ungu Gambar 5.3. Senyawa yang menghasilkan noda warna keungunan dengan penampak noda anisaldehide-H2SO4 pekat menunjukkan bahwa

senyawa

tersebut

merupakan

golongan

terpenoid atau steroid (Sherma, 2003). Subfraksi 12.2.8 larut dalam metanol. Memastikan noda yang terdapat pada subfraksi 12.2.8 murni maka dilakukan anlisis dengan HPLC dan GC. Kromatogram HPLC subfraksi 12.2.8 pada λ254 nm menunjukkan ada dua puncak dominan pada waktu retensi 5,085 menit dengan % kemurnian 22,11% dan 6,089 menit dengan % kemurnian 76,79% (Gambar 5.8(D)). Spektrum UV pada puncak

SKRIPSI


ARMILA F.


76

tersebut menampilkan adanya serapan pada λmak 261 nm pada tr 5,085 menit (Gambar 5.8(F)) dan λmak 264 nm pada tr 6,089 menit (Gambar 5.8(G)). Serapan pada λ ini dapat menjadi petunjuk adanya gugus kromofor inti aromatis (202nm - 275nm) (Sampietro et al., 2009). Berdasarkan gambaran contour plot terhadap subfraksi 12.2.8 (Gambar 5.7(C)) dapat dilihat bahwa puncak yang terdeteksi pada waktu retensi 5,085 menit dan 6,089 menit memiliki intensitas berwarna merah yang berarti cukup tinggi, berdasarkan gambaran contour plot dikatakan bahwa dalam satu puncak pada waktu retensi ke 5,085 dan 6,089 menit hanya terdapat satu senyawa. Kromatogram GC dengan detektor FID subfraksi 12.2.8 tidak menunjukkan adanya puncak yang dominan, namun terdapat puncak kecil-kecil yang sangat banyak. Hal ini dikarenakan senyawa pada subfraksi 12.2.8 tidak tahan terhadap suhu tinggi sehingga senyawa pada subfraksi 12.2.8 terurai ketika di analisis dengan GC, maka perlu dilakukan pemurnian kembali dengan HPLC-preparatif atau LC-MS-MS karena jumlah sampel subfraksi 12.2.8 cukup kecil.

SKRIPSI


ARMILA F.


77

BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN 7.1 Kesimpulan 1.

Subfraksi 12.2.7 hasil pemisahan fraksi 12.2 ekstrak etil asetat jamur Cladosporium oxysporum dari Aglaia odorata Lour berdasarkan hasil spektrum MS dihasilkan identik dengan senyawa 4,4’-(1-methylethylidene)bisphenol atau bisfenol A dengan kemiripan 88,31% data base mass bank dan 87% data base wiley7n.1.

2.

Subfraksi 12.2.6 dan 12.2.8 hasil pemisahan fraksi 12.2 ekstrak etil asetat jamur endofit Cladosporium oxysporum dari tanaman Aglaia odorata Lour. berdasarkan pereaksi warna anisaldehid-H2SO4, mengandung senyawa golongan terpenoid atau steroid yang bersifat aktif UV254.

7.2 Saran Melakukan pemurnian lebih lanjut terhadap subfraksi 12.2.8 dengan LC-MS-MS atau HPLC-preparatif.

77

SKRIPSI


ARMILA F.


78

DAFTAR PUSTAKA Amin, Lukman Zulkifli. 2014. Pemilihan Antibiotik yang Rasional. Medical Review Medicinus Vol. 27, No.3 Andreolli Marco

, Silvia

Lampisa, Giacomo

Zapparoli, Elisa

Angelini, Giovanni Vallini, 2015. Diversity of bacterial endophytes in 3 and 15 year-old grapevines of Vitis vinifera cv. Corvina

and

their

potential

for

plant

growth

promotion and phytopathogen control. Microbiological Research

183

(2016)

42–52.

DOI:

10.1016/j.micres.2015.11.009 Arnold Elizabeth, Zuleyka Maynard, Gregory Gilbert, 2001. Fungal endophytes in dicotyledonous neotropical tress: patterns of abundance and diversity. Mycological Society 105 (12): 1502-1507. DOI: 10.1017/S0953756201004965 Assante

Gemma,

Adriana

Bava,

Gianluca

Nasini,

2005.

Enhancement of a pentacyclic tyrosine kinase inhibitor production

in

Cladosporium

cf.

cladosporioides

by

Cladosporol. Appl Microbiol Biotechnol (2006) 69: 718– 721. DOI 10.1007/s00253-005-0054-2 Bensch, K., Groenewald, J. Z., Dijksterhuis, J., dkk., 2010. Species and

Ecological

diversity

within

the

Cladosporium

78

SKRIPSI


ARMILA F.


79

cladosporioides complex (Davidiellaceae, Capnodiales). Study in Mycology, Bunyapaiboonsri T, Veeranondha S, Boonruangprapa T, Somrithipol S, 2009. Ramiferin, a bisphenol-sesquiterpene from the fungus Kionochaeta ramifera BCC 7585. Phytochemistry Letters, p 204–206 Carolina santiago1, Lin Sun2, Murray Herbert Gibson Munro2, jacinta Santhanam1, 2014. Polyketide and benzopyran compounds of an

endophytic

fungus

isolated

from

Cinnamomum

mollissimum: biological activity and structure. Asian Pac J Trop Biomed, 4(8), p 627-632. Casella hiago M., Véronique Eparvier, Hugues Mandavid, Audrey Bendelac, Guillaume Odonne, Laura Dayan, Christophe Duplais,

Laila

S.

Espindola,

Didier

Stien,

2013.

Antimicrobial and cytotoxic secondary metabolites from tropical leaf endophytes: Isolation of antibacterial agent pyrrocidine C from Lewia infectoria SNB-GTC2402. Phytochemistry

96

(2013)

370–377.

DOI:

10.1016/j.phytochem.2013.10.004 Chhaya, Urvish dan Gupte, Akshaya 2013. Possible role of laccase from Fusarium incarnatum UC-14 in bioremediation of Bisphenol A using reverse micelles system. Journal of Hazardous Materials 254–255

SKRIPSI


ARMILA F.


80

De Hoog, G.,S., 2000. Atlas Of Clinical Fungi. Ed. 2:589 Diakses di www.clinicalfungi.org pada tanggal 20 Januari 2016 Dorra, B. L., 2011. Skripsi : Aktivitas Antimikroba Fraksi dari Ekstrak Etil Asetat Jamur Endofit Cladosporium oxysporum dari Aglaia odorata Lour. Fakultas Farmasi Universitas Airlangga Departemen Farmakognosi dan Fitokimia. Erma, N., Zaini, N. C., Indrayanto, G., 2003. Isolasi dan Determinasi Jamur Endofit dari Aglaia eusideroxylon, Aglaia odorata, dan Alyxia reinwardtii. Laporan Penelitian DIKS, Surabaya : Universitas Airlangga. Fouda Amr Hamza, Saad El-Din Hassan, Ahmed Mohamed Eid, Emad El-Din Ewais, 2015. Biotechnological applications of fungal endophytes associated with medicinal plant Asclepias sinaica (Bioss.). Annals of Agricultural Science. DOI: 10.1016/j.aoas.2015.04.001 Fowlis, Ian A.,1998. Gas Chromatography Analytical Chemistry by Open Learning. John Wiley & Sons Ltd: Chichester. Diakses

di

https://books.google.co.id/books?id=wVkz6Lei2dYC&pg=P A35&lpg=PA35&dq=fowlis,+1998&source=bl&ots=GSdm B32bg5&sig=VKXNHXDQvufpShbJF2rPm49iQAg&hl=en &sa=X&ved=0ahUKEwii0rSh5I7OAhUKso8KHYX8AusQ

SKRIPSI


ARMILA F.


81

6AEIHzAB#v=onepage&q=fowlis%2C%201998&f=false pada tanggal 25 juli 2016 Gandjar, I. G., Rohman, A., 2012. Analisis Obat Secara Spektrofotometri

Dan

Kromatografi.

Yogyakarta:

Pustaka Pelajar. Hal 378. Gesner R, Cohen N, Ilan M, Yarden O, Carneli S. 2005. Pandangolide 1a, a Metabolite of the Sponge-Associated Fungus Cladopsorium sp., and the Absolute Stereochemistry of Pandangolide 1 and iso-Cladopsolide B. J. Nat. Prod. 68: 1350-1353 Goodman dan Gilman. 2011. The Pharmacological Basis of Therapetuic. New York: The McGraw-Hill Companies, Inc Gritter Roy J, James M. Bobbitt, Arthur E. Schwarting. 1991. Introduction to Chromatography. USA: Holden-Day, inc Gunawan, Sulistia G., 2008. Farmakologi dan Terapi. Edisi 5. Departemen

Farmakologi

dan

Terapeutik

Fakultas

Kedokteran Universitas Indonesia, hal. 585. Heng

Zhanga, Zhi-Jun Songb, Wei-Quan Chena, Xin-Zhou Wuc, Han-Hong Xua, Chemical constituents from Aglaia odorata Lour. 2012. Biochemical Systematics and Ecology 41 (2012) 35–40.

SKRIPSI


ARMILA F.


82

Hidayat Hussain, Christine Kliche-spory, Ahmed Al-Harrasi, Ghulam Abbas, Ivan Robert Green, Barbara Schulz, Karsten Krohn, Afzal Shah, 2014. Antimicrobial constituents from three endophytic fungi. Asian Pac J Trop Med, 7(suppl 1): S224-S227. Hostettmann Kurt, Hostettmann Maryse, Andrew Marston. 1985. Preparative Chromatography Techniques. New York: Springer-Verlag Berlin Heidelberg Huyan X.-H., Y.-P. Yang, Y.-M. Fan, W.-M. Huang, W. Li and Y. Zhou, 2012. Cutaneous and Systemic Pathogenicity of a Clinical Isolate of Cladosporium sphaerospermum in a Murine Model. J. Comp. Path. 2012, Vol. 147, 354e359. DOI: 10.1016/j.jcpa.2012.01.023 Jadulco R, Proksch P, Wray V, Sudarsono, Berg A, Grafe U. 2001. New Macrolides and Furan Carboxylic Acid Derivatives from the Sponge-Derrived Fungus Cladopsorium herbarum. J. Nat. Prod. 64: 527-530 p. 61. Johnson Edward L dan Stevenson Robert. 1991. Basic Liquid Chromatography. Varian Sassociates, inc Kinghorn Douglas, falk H, J. Kobayashi, 2011. Progress In the Chemistry of Organic Natural Products, Volume 94. New york: Springer p 4-5

SKRIPSI


ARMILA F.


83

Kjer, Julia. 2009. Disertation: New Natural Products from Endophytic Fungi from Mangrove Plants – Structure Elucidation and Biological Screening. MathematischNaturwissenschaftlichen

Fakultät

der

Heinrich-Heine-

Universität Düsseldorf Kumar V, Ahamad T, Nishat N, 2008. Some O,O’,O’’,O’’’-di/tetra aryldithioimidophonate transition metal complexes derived from catechol and bisphenol-A as antibacterial and antifungal

agents.

European

Journal

of

Medicinal

Chemistry 44 785-793 Laksmi, ni kadek lintia. 2014. Isolasi: Purifikasi dan Karakterisasi Metabolit dari fraksi no. 150-200 dan 2110-13 ektrask etil asetat jamur endofit Cladosporium oxysporum dari aglaia

odorata

lour.

Fakultas

Farmasi

Universitas

Airlangga Departemen Farmakognosi dan Fitokimia. Madlan,

Eva.

2013.

Elucidation

Extraction,

of

Saponins

Isolation from

and

Herniaria

Structure incana.

Department of Chemistry Norwegian University of Science and Technology. Menteri Kesehatan RI. 2015. Peraturan Menteri Kesehatan Kepublik Indonesia

SKRIPSI

Nomor

8

Tahun

2015


Tentang

Program

ARMILA F.


84

Pengendalian Resistensi Antimikroba

Di Rumah Sakit.

Menteri Kesehatan RI. Ogórek Rafał, Agnieszka Lejman, Wojciech Pusz, Anna Miłuch, Paulina Miodyńska, 2012. Characteristics and taxonomy of Cladosporium fungi. Mikologia Lekarska 2012, 19 (2): 8085 Pavia, Donald L., Gary M. Lampman, George S. Kritz, Randall G. Engel. 2006. Introduction to Spectroscopy 4th Ed. Thomson Brooks/Cole. pp. 418-420. Pratiwi, Risma. 2015. Skripsi: Isolasi Metabolit Sekunder dari Fraksi 3 dan Fraksi 12 Ekstrak Etil Asetat Jamur Endofit Cladosporium oxysporum dari Aglaia odorata Lour. Fakultas Farmasi Universitas Airlangga Departemen Farmakognosi dan Fitokimia. Pratiwi, sylvia utami tunjung. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Erlangga. Hal 38-42 Prihatiningtias, W., 2005. Senyawa bioaktif Fungi Endofit Akar kuning (Fibraurea chloroleuca Miers) sebagai senyawa antimikroba. Tesis. Sekolah Pascasarjana UGM. Puji Astuti1, Wahyono1, Octavian Ashido Nababan2, 2014. Antimicrobial and cytotoxic activities of endophytic fungi

SKRIPSI


ARMILA F.


85

isolated from Piper crocatum Ruiz & Pav. Asian Pac J Trop Biomed, 4(suppl 2): S592-S596. Putri, gusti ayu anom suartha. 2014. Skripsi: Purifikasi dan Karakterisasi Metabolit dari fraksi no. 101-149 dan 210213 ektrask etil asetat jamur endofit Cladosporium oxysporum dari aglaia odorata lour. Fakultas Farmasi Universitas Airlangga Departemen Farmakognosi dan Fitokimia. Qi Shu-Hua, Ying Xu, Hai-Rong Xiong, Pei-Yuan Qian, Si Zhang, 2008. Antifouling and antibacterial compounds from a marine fungus Cladosporium sp. F14. World J Microbiol Biotechnol (2009) 25:399–406 DOI 10.1007/s11274-0089904-2 Raj K. Gokul, R. Manikandan, C. Arulvasu, M. Pandi, 2014. Antiproliferative

effect

of

fungal

taxol

extracted

from

Cladosporium oxysporum against human pathogenic bacteria and human colon cancer cell line HCT 15. Molecular and Biomolecular Spectroscopy 138 (2015) 667–674. DOI 10.1016/j.saa.2014.11.036 Restinia, Mita. 2012. Tesis : Evaluasi Klinik Penggunaan Antibiotik pada Pasien Infeksi Di Hospital Universiti Sains Malaysia Kelantan. Universitas Andalas.

SKRIPSI


ARMILA F.


86

Roopa G., M.C. Madhusudhan, K.C.R. Sunil, N. Lisa, R. Calvin, R. Poornima, N. Zeinab, K.R. Kini, H.S. Prakash, N. Geetha, 2015. Identiﬁcation of Taxol-producing endophytic fungi Salacia oblonga isolated from through genomic mining Journal

approach.

of

Genetic

Engineering

and

Biotechnology. DOI: 10.1016/j.jgeb.2015.09.002 Sarker, S. D., Latif, Z., Gray, A. I., 2006. Methods in Biotechnology : Natural Products Isolation 2 nd. Humana Press Inc., p. 19-21. Sarrocco S dan Moretti A, 2015. Fungi. Encyclopedia of food and health 162-168.

http://dx.doi.org/10.1016/B978-0-12-

384947-2.00341-X Diakses pada 5 Desember 2015 Schulz Barbara, Christine Boyle, Siegfried Draeger, Anne-Katrin Rommert, 2002. Endophytic Fungi: a source of novel biologically active secondary metabolites. Mycological Society

106

(9):

996-1004.

DOI:

10.1017/

S0953756202006342 Setiawan Dalimartha, 2008. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia Jilid I. Jakarta: Tribus Agriwidya hal 96 Setiawati, W., Murtiningsih, R., Gunaeni, N., Rubiati, T., 2008. Tumbuhan

Bahan

Pembuatannya

Pestisida

untuk

Nabati

Pengendalian

dan

Cara

Organisme

Pengganggu Tumbuhan (OPT). Balai Penelitian Tanaman

SKRIPSI


ARMILA F.


87

Sayuran Pusat Penelitian dan Pengembangan Hortikultura Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian, hal. 136138. Sherma Joseph dan Bernard Fried. 2003. Handbook of Thin-Layer Chromatography Third Edition, Revised and Expanded. New york: Marcel Dekker, Inc Sitorus, M. 2009. Spektroskopi ( Elusidasi Struktur Molekul Organik). Graha Ilmu. Yogyakarta. Hal 78. Skoog Douglas A., F James Holler, Stanley R. Crouch, 2007. Principles of Instrumental Analysis sixth edition. Thomson Brooks/Cole, a part of The Thomson Corporation. p 389 Spangenberg Bernd, Colin F. Poole, Christel Weins. 2011. Quantitative Thin-Layer Chromatography A Practical Survey. New york: Springer-Verlag Berlin Heidelberg Strobel, G., Daisy, B., 2003. Bioprospecting For Microbial Endophyte and Their Natural Products. Microbiology and Molecular Biology Review, Vol. 67 No. 4, pp. 491 – 502. Subandi. 2010. Mikrobiologi. Bandung: PT. Remaja rosdakarya. Sugijanto NE, 2011. Produksi bahan bioaktif berkhasiat obat menggunakan jamur endofit. Pidato disampaikan pada Pengukuhan Jabatan Guru Besar dalam Bidang Ilmu Kimia

SKRIPSI


ARMILA F.


88

Farmasi pada Fakultas Farmasi Universitas Airlangga di Surabaya pada hari Sabtu, tanggal 22 Oktober 2011 Susilowati Ragil, Agus Sabdono, Ita Widowati, 2015. Isolation and Characterization of Bacteria Associated with Brown Algae Sargassum spp. from Panjang Island and Their Antibacterial Activities. Procedia Environmental Sciences 23 ( 2015 ) 240 – 246. DOI: 10.1016/j.proenv.2015.01.036 Tan, R. X., dan Zou, W. X., 2001. Endophytes : A Rich Source of Functional Metabolites. Nat. Prod. Rep., pp 448 – 459. Tasic S, Miladinovic Tasic N. Cladosporium spp. – cause of opportunisic mycoses. ACTA Fac Med Naiss. 2007; 24:1519.

twelfth

edition.

New

york:

The

McGraw-Hill

Companies, Inc Wang FW, Jiao RH, Cheng AB, Tan SH, Song YC, 2007. Antimicrobial potentials of endophytic fungi residuing in Quercus

variabilis

and

Brefeldin

A

obtained

from

Cladosporium sp. World J Microbial Biotechnol 23: 79-83 Yadav Manila, Amita Yadav, Jaya Parkash Yadav, 2014. In vitro antioxidant activity and total phenolic content of endophytic fungi isolated from Eugenia jambolana Lam. Asian Pac J Trop

Med

2014;

7(Suppl

1):

S256-S261.

DOI:

10.1016/S1995-7645(14)60242-X

SKRIPSI


ARMILA F.


89

Yang K, Liang J, Li Q, Kong X, Chen R, Jin Y. 2012. Cladosporium cladosporoides

XJ-AC03,

an

aconitine-producing

endophytic fungus isolated from Aconitum leucostomum. World J Microbial Biotechnol. DOI 10.1007/s11274-0121246-4 Yenny dan Elly Herwana. 2007. Resistensi dari bakteri enterik: Aspek global terhadap antimikroba. Universa medicina, Vol. 26, hal 46-56. Zhang ZB, Zeng QG, Yan RM, Wang Y, Zou ZR, Zhu D, 2011. Endophytic fungus Cladopsorium cladosporoides MD2. Current Microbiology 59: 227-232

SKRIPSI


ARMILA F.

ADLN-PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA SKRIPSI

Recommend Documents