'1615 UMU LAPORAN AKHlR
•
RI SET PEMBINAAN I PTE KDOK 2011
Kadar P selectin, ADAMTS 13 dan Faktor
Von Willebrand
�
pada gangguan hemostasis penderita leptospirosis dengan perdarahan
... I
Ill
;...:..R
Pene!iti:
S pPD
Dr. Eko Adhi Pangar sa
O r . N ur F arhana h S p PD
Wiwik Lestari
Desember, 2012
...
LAPORAN AKHIR RISET PEMBI NAAN IPTEKDOK 2011
Kadar P selectin, ADAMTS 1 3 dan Faktor
Von Willebrand
pada gangguan hemostasis penderita leptospirosis dengan perdarahan
Peneliti: Dr. Eko Adhi Pangarsa SpPD Dr. Nur Farhanah SpPD Wiwik Lestari
Desember, 2012
...
--·--··--�---···�---·-----------,
SUSUNAN TIM PENELITI
Peneliti Utama
Gelar
Eko Adhi Pangarsa
Dr. SpPD
Peneliti pertama
Gelar
Nur Farhanah
Dr. SpPD
Peneliti kedua Wiwik Lestari
KEJ\·IENTERIAN KESEHATAN
Bt\D/\N PFNELfTii\N I.M N PI',NCiE\113/\N(iAI'J KF:· SFHAr/\N ,J:dar� P�rrctabn Nug.••r:t N<>. ?CJ J:tkt>!1:I I 05NJ Kr)!:tk l'os 1226 Tclcpon: (071) 4:?61 Ol'S F:tksinuh:: (0.:! I) 4243\13.1
E·mwl. �c,b:tn'!'·litb:.:ug d.:pk<.:�.�n td II d,,,,,. . http> "\1 ,,.,\
}nh:mg.d.:pk.:s.ct11.1J
KEPUTUSAN KEPALA BADAN PENEUTIAN DAN PENGEMBANGAN KESEHATAN NOMOR: HK.03.05/2/1273/2012 TENTANG PENETAPAN TIM PELAKSANA RISET PEMBINAAN ILMU PENGETAHUAN DAN TEKNOLOGI KEDOKTERAN TAHUN 2012 KEPALA BADAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KESEHATAN, Menimbang
:
a. bahwa
untuk
ka pasitas
meningkatkan di
peng embangan
bidang
penelitian
kesehatan
perlu
dan
dilakukan
pembinaan kepada para penelili muda; b.
bahwa
peneliti
dalam muda
rangka pembinaan dan menggal1 potens:
perlu
diiakukan
Rrset
Pembinaan
llmu
Pengetanuan dan Teknologi Kedokteran. c
bahwa berdasarkan pertimbangan sebagaimana dimaksud pada huruf a dan b perlu ditetapkan Keputusan Kepala Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan tentang PembentlJkan
Tirn
Pelaksana
R1set
Pembinaan
P engelah uan dan Teknologi Kedokteran Tahun
Mengingat
2012,
llrnu
1. Undang-Undang Nomor 18 Tahun 2002 ten tang Sistem Penerapan llrnu
Nasional Penelitian, Pengembangan dan
Pengetal1uan dan Teknologi (Lembaran Negara Republik Indonesia
Tat11.m
2002
Nomor
!34, Tambat1an l .embaran .
Negara Hepublil< lndones1a Nomor 421 9); 2. Undang-Undang Nomor 36 Tahun (lembaran
Negara Tah un
Lembaran Negara Nomor 3.
Peraturan Penelittan Neg ara
Pernenntah dan
Republik
2009 5063).
Nomor
Indonesia
Nomor
39
Pengembangan
Tambahan I emba ran
2009 tentang 144,
Tahun
1995
Kesehatan
Tah un
Kesehatan Tambahan
1995
tentang
(Lembaran Nomor
67.
Negara Republik lndonesrn Nomor
3609): 4.
Peraturan Presiden Nornor 76 Tahun 2011 Perubu�lan atas Peraturan
Presiden
N omor
47
Tahun
2009
Pembentukan dan Organisasi Kementena n Negara.
Tentang
J:d:ill P.:orc..:w�a11 Nl:�ara N,,_ 29 Jak1nta 10561.1 Ko1ak Pus 122o
Tekplln: t021) -+26101\l\ Fabimik. (0.21 i -1�4.\l.l3.>
!·."·"""! ,c,ban(u1!iih:mg.dc:pJ..es.!;\O.id, H't'h.,irt·· hup: \1·\vw.lubang.lkpk..:,.gn.it!
5
Keputusan
Menlen
Penyelenggaraan
Nomor
Kesehatan
791/Menkes/SK/VII/1999
ten tang
Penelitian
dan
Koordinasi Pengembangan
Kesehatan;
6. Peraturan
Menteri
Kesehatan
1144/Menkes/Per/VIII/2010
tentang Organisas1
Nomor dan
Tata
Kerja Kementerian Kesehatan Rl: MEMUTUSKAN:
Menetapkan
KEPUTUSAN
KEPALA
BADAN
DAN
PENELITIAN
PENGEMBANGAN f<ESEHATAN TENT,..\NG TIM flELAKSANI\
RISET PEMBINAAN ILMU PENGETAHUAN DAN TEKNOLOGI KEDOKTERAN TAHUN 2012: KESATU
Tim
Pelaksana
Riset
Pemb1naan
llmu
Pengetahuan dan
Teknologi Kedokteran Tarwn 2012 (selanjutnya disebut Risbin lptekdok
2012)
sebagaimana
tercantum
dalam
lampiran
keputusan ini bertugas:
1.
2.
Melaksanakan penelitian sesuai kaidah ilrniah dan etika
dengan waktu yang telah diletapkan; Mempertanggungjawabkan penggunaan
anggaran
sesuai
peraturan yang berlaku:
3.
Membuat dan menyampaikan laporan kemajuan dan laporan
4
Mernbuat ringkasan eksekutif berdasarkan has1l ponelltian
akhir penelitian: sebaga1 bahan masukan kepadtl
pengarnb1lan keputusan
dan pengelola progr<.�m yang terkalt c!enq:.�n ha s il penc:lillfm
KEDUA
Tim
Pelaksana
R1sbin
lptekdok
Tahun
2012 sebaga1rnona
dimaksud pada diktum kesatu diberikan honor sesuai dengan
ketentuan yang berlaku: KETIGA
Dalam melaksanakan tugasnya, Tim· Pelaksana �·!1Sb1n lptekdok
Tahun 2012 berpedoman pada pera1uran perundann-undangan yang berlaku, KEEMPAT
Dalam melaksanakan tugasnya. Tim Pelaksana Risbin lptekdok Tahun 2012 dapat berkonsultasi dan berkoordinasi dengan Tim Panel Pakar dan Tim Pengeloia Administrasi Risb1n lptekdok.
KELIMA
Biaya kegiatan Tim Pelaksan<:1 Risbm lpt ek dok Tr�hun 2012 dibebankan pada DIPA Sekrelanat Badan Litbangkes tahun anggaran 2012 Nomor
Desember 2011 �
0682/024-11 1 01/0012012 Tanggal 9
KEi\tfENTERI:\N KESEHAfAN
BADAN PENEL!Tii\N OAI'\ PE\Cii::VIBr\NGA:.J KFSr·ll:\1"\:'4 Jnlan P�·!\.:eraJ .. dH N\.·_�4\rH i\'(t
i:'·l!hlll.
KEENAM
."')
J.eharlr� l t)�hO i\..itlak Pos 12.!6
t t:!\.?ptH1" ((}= l l . .1.._ �(, II•;"� l it� ... lllllk" {il� i 1: �L�-l �\13_�
:�r.;shan:,,.;li.il.'�,;n!� �kpkc'.�d.i,J. ff()\,;;1.'
Dengan Badan
l�itp: '\\''.\\\·.hHx-�n!:'.d(:p k t'' t!'-1.1d ..
berlakunya Keput usan ini, maka Keputusan Kepala Penelitian
dan
HK.03.05/11393/2011
Pengembangan
Tanggal
19
Kesehatan
Janua ri
2011
Nomor
ten!ang
Penetapan Tim Pelaksana Riset Pembinaan llmu Pengetahuan
dan Teknologi K edokteran Tahun 2011 dinyalakan tidak bedaku lagi: KETUJUH
Keputusan ini berlaku sejak tanggal ditetapkan.
j
Oitetapkan di Jakarta Pa d
tan gal17 FEBRUARI2012
Kep�
-' ';7 /
E:
T
LAMPiRAN KEPUTUSAN KEPALA BAOAN LITBANG KESEHATAN NOMOR : HK 03.05/V1273/2012 TANGGA1. : 17 Februarf 2012 SUSUNAN TIM PELAKSANA RISET PEMBINAAN ILMU PENGETAHUAN DAN TEKNOLOOI KEOOKTERAN (RISBIN IPTEKDOK) 2012
·:, J
BALAI LITBANG, BP2 GAJ
Sri Nuryani Wa'>y�nrngrum. SSi R
Agus
W;tJ
Caturw,ayan:. AMd
Pengar.Jh Suplementas• M•kro2lgae
.l
:1
149.883,500
Sp•roi�"Ja tcmadap Status Klin>S GAKI dan
Fongsi Timd
BAlli.! LITBANG, F292 BANJARNEGARA Dyah 'l>1irJ
3
FK UNIVERSITAS ANDALAS, f'ADANG
2
�
s
MSc
FK
B1na ika·�vctt SKM MY..es
Desmaw�t1. dr
Rcny Y
Eka Nof�a c·
Nora Harr�:aa.... o.
UNJVERSITASATMAJAYA, JAKARTA
S�ef2r:us L.ernbdt :jr 5pPI\
U�am: �h;lyan·ngl1Jr-, cr MSc
J·
SpP0
Endang Setyan i
Yv�ia� Lestar:, dr. 'vlK�s
Jom
Marta !!lo�agoa1ena Ma1r'i
Fnra Mautoo·
MB•cmeJ
Kaisar
';.l)IS. SpP/!,
.ShBe!!a R
SpPK
SSo
Borormg dr
,A.!>A�.K
Hem;an. SE
SSos
Rcmana�
Pro�uksj Antit>oa• Monok!o�a! Spesifik
1�0 �21.000
Pengaruh Retriksi Natrium dan Ekspresi
1�8.780.000
Mma�.gkao<�u
•de';tif!kasi Subbpe Blaslo...--ysts pada
1'34 514 ()5('
S:ud• Prote•n Oisulftcle Isomerase Fam11;' A
'04,627,C.O()
LeptOSPII'
Gen AGT M235T terhadap Tekanan Darah pada Pendenta H1per:ens• Etnik
indilm:!u dengan
Q,are dar, Taopa O;are �e:1gan Mergguna�an PGR Memtle' 4
[PDIA4) paoa Karsmoma
Msmm3;, ldantJI
Jnd1kator paaa Deteksi Din! Karstr;oma Ma.-nm3e
MetastasiS
FK UNIVERSITAS BRAWIJAYA. MALANG tu=aq \Nip tJ:am1.
T't�n A.odr= MKes
SK:J WK��
v�'lhdswt: SKr'
Nl'r.'"< Agust•O
$"" 'h?'s [N,; SetyQflr
Satuman s�;� .•vtKt��
SK�� Ners
Nov� 1\h:ii� f'ira!"•. 0', MKe�
Ana lut';a. S Sos
Oyah Caw�n1. fo\M\.1
Respcn •mvn slgA "'ote�u• aMesin Sh�ga�a
jysen;enae 7.9 kOa dan 49.8 kDa terhadap
sek�esr cairan usus
rnartCit
O�ti�r.alisasi dan u,, ?o<ensi Mesenchymal s�em Ci:lli
P.ad.a
{MSC) unluk Perbaikan Pankreas
Ti�us
Mode! Diabetes Melntus yang
Di;n.du'l:;• S:rep:ozotccyn
P��� � o�c.
1:}8400000
110.000.000
Aktovas.
MK'3"s
MS,o.rned
Set Dendntik dan Jumla/1
Sel Th17 pada
Pasien Lupus Entematosu; SiStemil<
9
FK UNIVERSITAS DIPONEGORO. SEMARANG ·1 Nuwng Rose 01ana K. dr, SpA. Adciyan Pramono SGz MSi
Labbaika Maul1da Fauzani
MSiMed
10
2
Adrt'/O Agu�g W tx;wr)
Suo Romadhofla. MSiMed
Ga:�Jt"" H;rcamngs:n dt
SpA
Pengaruh lnteNensi Diet pada Fibrosis Cirrhosis Index (FCI) Pe�derita Non Al::chclic Fatty UYer Q,sease (NAFLO) Par.garuh Suplementasll
Ekstrak
tkan Gabus (Ophiooeptla/us s1ria!us ;
1d5.228.000 150.Cl)f) JC-G
Oioandr t .gkan lnfus Human Alb(lll1!!"• pada
j1
3
Cahyant1
o1
MSt�Aed SpOG
'2
13
Ratnasan Dw1
F·K:. 1'.\�h� P:1:�;arsa. c;r
5
P.:r�t?.i P=-ase:�o dr
Sr.:T:·rf M:
Putn Sekar W1yatr dr
Nt�r Zant Aya
S dr
!'itn Sul;styan•ngrum. SE
MKes.
Nt::: f art1 anna� or
Huo�ngan Kadar V1tamin 0 dan Vascular
1�7.484,425
Endothelial Growth F�tcto; (VEGF) dalam
SpOG
SpPO
Sin
Memi;;u Progreslfltas dar• SC'PD
He.r.r:y Kanika>Nati cr MKes. SpTHT·K�.
Preeklampsla
Berat
... ;�o t"lk • lestari v
Dyah Kusuma,irgrum
Vega Kari
Se�t' Be�!• Pa�ca Putn
�
S!:
�.':Sifvtea. SpPA
Lestari. SPd
Kada; P Se ecti::m. ADAMTS ;3 dan fakt0r "on W!lebrat'd. pada gaogguan llemost2s's
1<17 920.00'J
Perbandingan Faktor Reso>w. Titer Anbboo;
\30,925.COO
penderita L.eptospo•os•s dengan pendaraha'l
Serum Epstern 8ar 'l!rus, Ekspresi LMP·; dar. CD 99 anat ra Pendenta Nasofarlng
dengan lndividu Sahat Beresikc '4
1:)
FK UNIVERSI1AS GADJAH MADA. YOGYAKARTA ....,:; . ...·; �\'!hd£::-:;�:iyata""
\1Sc
')rh
N3�e:-'.1'�l '!··;a �-H:�('IOi�ti.J Sr M3io:;ecn
R.z� hu,ra"C!e...a�;m:
Asd'e. ;;:, SpPD·KPTf R..
0�"
Ludhang P�a·:l:�ta f{t:'-
M8101€C!"
E:tt \;Vida1a�� S�
EJ: S:Jpnyar,
S�t; Hal;n)lr,:� ()CN ··�tKe�
s,:jiy2�!u
Mi3K>tect:
Pengembargan protoi•PI kit ::iiagnos;s Lep!ospfrcs > dengan 'T'e<>gguna�an
'T'e . tode ELISA oertlasrs pa:la D!Otein <ekombman Upl32 Peng2rnbangan m\.litlr��ex dtpstiK
untuk
deteksi dini HIV-1 dan HBV beebasis
kombinas• multipl ex Reverse Transcript Loop Media ted lsotrermB: Arnp:ification
(mRT-LAMP) dan Lateral flow D's!ick tLFD>
'.tr," .1 ::-· 6
150 000.0-X.
·s.; oco.oc.o
:7
18
19
20
/)
Shant! Listy<Jwall. SS1. MS1
Pengembangon sonyawa MPHKA sebaga· agen ko-�emolerapt P3d3 set KanKer Payudara tang Resisten Dvxorubicm
N1ta Etikawah SS, MS1
FK UNIVERSITAS HASANUDOIN, MAKASAR Na!l•rah ::
3
And: Yasmin SyauJ\1, dr. MSc
d:
Anang S . dr MPPM
Nu: As�ari cr
Marc:ana. dr
V1!di Harta1110
Ufy Tnsrawa:y,ar
d Ety. .ll.M
Abdul Salam. SKM MKes
Mut: Nur H asa n Syan.
Ni Made frm As!: Lestan
dr
Potensi ekstrek etanot ternu �unci (Bcesenbergia pandur;Jt a) sebagai agen kemcprovensJ kankor kuli! lerinduksi UVB
H\i�ungan Ama: Kaoac Hepcid�, dan Status Ses, c!engar- tnr amasi pada Anak Obesotas Pengaruh P emberien Tepur.g Daun Kelor
SGz
Kepada !bu Hemlllerhadap Pencegahan
Emma. AMd
Peng�ruh pemberian kombinasi Fish Orl
100,000.000
95178000
149.090)50
Kerusakan DNA lbu dan Berat Lahir Bayi
dan kuri
145 l%.0(;0
tnsu•in penderr.a prediabetes 21
22
23
FK UNIVERSITAS INDONESIA, JAKARTA F.'rf Prafianttni, dr. MKes
2
3
fos•�1�a oe-...,asty.
Rat-)cssa!;"" or
dr SpPD
SpO.(KJ
��urc:t
R�lna. or MG:o:1
·-<.:. wtror o Hariml.�! Or
SpPD T"':
KL"f!"":an�i'. SS1
RR. Dyah Purnamasan. dr. SpPO
Purv;anto
PenJaruh Pemlli!rran Ma�anan Uj1 :t350 Ka!orr terhadap Kadar Harmon GLP-1
E��1ogen oada Subjek DM Tipe 2 dan Non
Srtf Rrzny Filnona Sald1. Apt ,/ii;�-:Jn Mafl arant SE. ry;Sc -'mi
Diana F1111. dm
149.990,000
JJwany3i
SE
DM
D;stmuso
Serotype SlreptococaJs
;:>ne•;moniae oada Pasien H!V di RSCM
145 309.64<
JaKarta
!der.tifli
De!ek Vertebra Spondrto!IS TB Kefinci yang
149 996,568
dit
24
r-��1·�:: Ay'....
perr:bemukan fulang baru
M:Jlcmsan. d' .)r.P:)
P·JM·ar:to
;:r;.t;�s:s-.� Hardi ·j1
Pert8PC
nga� antlbocli 30� glikoprcteon
.cer!�luY,al:ln t_.ornbosil dan antl �HLt.. pada ....ra ttOin�sitopen.a t-"Tl:.Jn prtmer �;... :·� dE-r:;.an �:orr-l.'O$I�Opema pad.a 1r.feks· ",t'U$
t=e�a:!;:a C
P:,S'-" '! r-� 'i
;a<; 895.0('::'
[:I if]1 1, :1
gon Ma11gonoae supcroxrde dlsmutse (MnSOD) pada sel punca kanker payudara . dampaknya
26
8
Wu'f'J �a,atlto dr, Sr:-PD
L:S:1i1Wat•. dr.
SpPA\K)
Adi
Sul)la Kamala. dr
Pu.'Wa�:o
terhadap stres o �s •datif dan plutipotens•
Kaitan Ekspres• Receptor Activator of
N!JCiear
Fac\or·k� (RANK) dan
74,387.956
Osteoprotegenn pada Set-Sel Kanker Payudara Pra-Terapi serta Trombos•tosis Pra-Terapi dalam kaitannya denga�
Ke;ad:an Met3S!as•s Tulang FK UNIVERSITAS JEMBER, JF.MBER A.zl"
27
C�ndra B:.:m. tr MS·
(�:<>& a f Shr"l:a. 1· MK�
.':):_,::��t:i
4\Mc
Perar
E�strak Buat> Pare (f.\omord•ca
chal3n!lal terhadap Rege'>Crasr Set EndoU>-1 Pernbu!u�\ Darah pada Obesita s· Swd1 pada
;�g 996 100
Ttk�os W1sa t r Jantan dengan Du•t
A!!-.e•ogem�
28
FK UNIVERSITAS LAMBUNG MANGKURAT, BANJARMASIN
29
FK UNIVERSITAS MULAWARMAN. SAMARINOA
Tr!B'Wii11tl Or MKes
EKo Su haito M .
Nu,,. �a�-nah ftr. t,J,"<.es
Yun an
FK UNIVERSITAS PAOJAOJARAN. BANOUNG 30
�
Su0··.-1ri1n' MKe�
Of?.. ·Yf
dr ScPO-KR.
M Adm SSos
Drs MS
dr. Mt<es
Lazuarot Gw1pa
dr. SpPD
Y.:f'<e Saftr>. SS·
iC.eu D1113s Ku:su.tl"l dr
SpPD
�estu Pudjanr
Paran Creb d31am proses Adipogeneso&
melaiU1 aktivasr P7Cs6kr Oleh
mammalian
target of Rapamycin CQfl1plesx l (mTORC1)
Po:ensi EY.strak Etanoi 83tang
Dracontomelon dao sebagal Anliba!nen Antioksldan. dan lmunotimula\or
Hubung(jn
antara lndeks Massa T!lbuh
100.000 000
•!i:) ()1)0_1)J()
13� 4,;') 000
(iMT) dan lntlamasi Kronik Sistemik dengan
Kepadatan Massa Tulang pada Laki-lakl usia lan;ut !lengsn penyal\11 pan: oostrukbf
l<.ronik 31
2
Sll\'i:a ::,:r· R:s•.-.FHI
-ar t-.4Kes
P..:'l
Ycvi:<' Hanantn
::•
S�PG
:-.it .&.·.·:.
R��tu Pud)aru
Pangembangan alai Ufi ELISA be.rb&srs 19M
untuk mendeteksl inleksl VIrUS· Chikungunya
'49942 400
32
1
KusmadeWt Eka
Oamayanu. dr
Y�llana
Erma Oamayanlo" AMd
Han Suselo or
Anahsos Geoetok
Matnptose-2
Usaha Manum Penyebab
sebagao
149.914,000
Ketida�..berhasilan Suplem entasi Besi pada
33
FK UNIVERSITAS SYIAH KUALA, ACEH 1
i
Trist a RinaC>da, dr. MSi
lbuHamil
Yuni;a Anrny. dr, SpP,
R;ma RIS\Ianli. SS•
MKes
i ens• ls:miazio A�alisis Molekuler Resst Rifampisin. PJrazinamid, Etamoutol dan S:reptomic•� dari .solat Mycobacterium
tuberculo&os pada penaenta pam reSlsten gande di
FK UNIVERSITAS UOAVANA, OENPASAR :l�
1
I Waya�
s�ardara.
drll MS•
'<:o:n3cg JaGcart11CI PJtra
P1f'lt=W:1
dr MK.es
N L'.J!i K�tutAyu Ratrawat1 N; Ks:iJ: ?tlrt:N ·
-··
Aceh
te<sangka TB
Pcogemnargan Probe 0Jagnosfik Berbasos
Klomng Gen umuk Oeteksi Shiga Uke Toxu1· ?
Prol)llcmg
12� 011.000
150.000.COC.
Esct1enrA11a coli sebagai Ager
Z:oonosis Penyebab Gaga! GinJal
35
2
Ma<Je A�<�s Heooraya"la or
Za:riw t..lutta�J 1
MKeo
Ors
;-JI Made Ach TanrH df
sr,MK
Lu!'i Putu V.rt3 l'l':ah
Perd
Karakle<•sasi mofekuler molekul adheS!O
Jie!JCObacter pylon mengguna�ar. kur.ut se
14� 340.000
lambu,1g rrenc.: (tAus muscu�Js) :Jan set Caco-2
36
FKIK UNIVERSITAS JEND. SOED IRMAN, PURWOKERTO
Agung S apras e\ya Dwo La�sana V;tasac; indr;ar" .;lr
dr.
37
MScPH
Pv::lld
S.a�od�o. dr
Sr: Lestar'l,
Pengarun Polim orfisme Gen
SSt MS1
Ase o2. Reseptor Vitamin
N2.../K� ATP
D serta o-AU\D
136 000.000
H?rhadap Kejad 1an Hipertensi Akiba� Pana;ar. Pb pada Awa� Angxuian Kota
ScDO
PLN··oke:rto
J(li\(; Set)'O"'� dr MSr
T!e� T.S"'�OV.'2L; SP
Pohmorf!s!T"e
Gena Traf\Scription Factor 7 ·
L:l<.e? (TCF7L2). Fat M ass and ot>esoty
140.363 �·
Asso�
Obcs
:;8
F ;t•<.n!o ,.:,r,�ci. dr. MK•Js
S(! e!vj(�·n
'A1.11. SS .. MS1
A!fi Muntaftatt. dr
T1Uk !ndrawa:·
AMd
Pengidap DM npe 2
f:fek po!•rno
n•:rit· oks;da
soma;.e3 (NOS3) da n rnatnliS
me\a:Oprcteonase-9 (MMP·9J terhadap penio'lgka:an
resoko aterosklerosis paea
pas,en dengan h oertens•
;--.t� co. cf'
11s221
s;,c
Lt1h .4-1-? W•l;.n Knsrta '\4Kcd
39
40
2
P�yc BJOI P�;rwono. d•
Lal<sm• Wulandan dr
A>J•se Mareta Nssn SKM
Zer.o Ram�D SE
��O<:.t;:;� mad Am1n, SS:
V\1}��-
SpP:K ) Renora B;amanth;, dr
Eksp<esl C095 dan Apoptos•s pada Set
yang TennlekS• Virus Influenza A subhpe
124.453 500
H1N1 dan HSN1 (Studi lnvilro)
Utamt
Studl Atlalisis Molekuler GenoUpe dan SubTipe sena Vaccine escape Mutant virus
144,930,000
Hepalitis 6 pasca Program lmunisasi anal<
d• SOfong, Indonesia
LPPM UNIVERSITAS SEBELAS MARET, SURAKARTA t,1
1
Yul•a Sar
SS1. MS1
Sl,yatmi
dr,
MSiomt>a
L � y Saotawati. dr SpMK
Sari Filriam, AMd
Protem Rekombinan Virus hepatit;s S Core berpo:ensi membenl\Jk Virus (VLP)
4<'
RSU KUPANG >
Sirr::·�n
Penggoarn, SS•
Marsc1Jn1..� Lag a Nur
150.000,000
(HBc} ·Virus Hepatitis C-Core ya<1g
SK:M T'':I;!OUvs Rengga, SSt
D.v•
D•ana Sari
!i�e parti�e
Pendonln TB dengar. MDR MTB <j' Kupoang d<Jr. distribusi be rbagai polin;crph!sn; pada
gon TLR2. VOR2, NRAM1, IFN.TNf-.lNFGR dalam panet infeksi-immunoiCYJi metode PCR Beads
RI�ONO
;;-at"='� or (-
149.54.1.000
KATA PENGANTAR
Assalamu'alaikum Wr.Ww Puj i syukur penulis haturkan ke hadirat Allah SWT, karena atas ijinnya penulis dapat menyelesaikan penelitian ini. Seperti kita ketahui, leprospirosis merupakan salah satu penyakit infeksi yang sering diderita . Perubahan cuaca, iklim dan lingkungan sanitasi yang buruk, diduga menjadi salah satu penyebab banyaknya kesakitan akibat penyakit leptospirosis. Hal lain tentunya angka kematian yang timbul akibat penyakit ini, apabila menderita leptospirosis berat , dengan manifestasi utama salah satunya perdarahan, gangguan ginjal dan gangguan hepar, masih tinggi. Disamping masih kurangnya pengetahuan tentang penanganan dini yang cepat dan tepat pada penyakit ini, jug adisebabkan masih banyak patofisiologi komplikasi penyakit ini yang belum diungkapkan.Semoga hasil penelitian ini dapat digunakan sebagai salah satu jawaban dari banyak pertanyaan tentang penyakit leptopirosis. Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih kepada Badan Riset Pembinaan iptekdok Kementrian Kesehatan Indonesia yang telah memberikan pembiayaan pada penelitian ini, tak lupa penulis juga mengucapkan terimakasih kepada Direktur rumah sakit umum pusat Dr kariadi, tempat penelitian in berlangsung, .dr. SpPD-KPTI
dan
dr.
C
Suharti,
PhD,
SpPO-KHOM
M
Hussein Gassem, PhD,
yang
telah
memberikan
bimbingannya,Kepala lab mikrobiologi FK Undip/RSUP Dr Kariadi Semarang , Prof DR Dr Sultana
MH
Faradz atas dukungannya dan ijinnya melakukan pemeriksaan di lab
CEBIOR, serta seluruh pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu yang telah memberikan bantuan yang tak ternilai dalam penelitian ini. Akhir kata penulis berharap agar penelitian ini dapat bermanfaat bagi penanganan penderita Jeprospirosis berat dengan perdarahan. Wassalammu'alaikum Wr.Ww
Ill
Kadar P
selectin, ADAMTS13 dan Faktor Von Willebrand
Pada Gangguan
Hemostasis Penderita Leptospirosis dengan Perdarahan
Eko Adhi Pangarsa 1, Nur Farhanah 1, C Suharti
1,
MH Gassem 1
1Departemen Ilmu Penyakit Dalam, Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro I RSUP Dr.Kariadi Semarang ABSTRAK
Latar Belakang
:
Leptospirosis a.dalah penyakit infeksi akut yang menyerang manusia
maupun hewan (zoonosis). Disebabkan oleh Lepto::,pira interrogans. Indonesia adalah negara dengan insidens leptospirosis tinggi dan angka mortalitasnya menduduki peringkat ke
tiga dunia. Angka kematian pasien leptospirosis berat antara 1 5-30
%,
perdarahan
adalah salah satu penyebab terbanyak. Tujuan : Mengetahui adanya aktivasi endothel , perubahan kadar ADAMTS 13 dan vWF
pada subyek leptospirosis dengan perdarahan di Semarang, Indonesia. Metoda: Penelitian ini merupakan penelitian deskriptif dengan pendekatan studi cross sectional. Dilakukan selama satu tahun (20 1 1 -20 1 2) di RS DR Kariadi Semarang. Sampel
berjumlah 60 kasus leptopsirosis dengan perdarahan dan 20 kasus leptospirosis tanpa perdarahan. Hasil
:
Penderita leptospirosis adalah pria (56 penderita), tinggal di daerah urban (65
penderita) Pemeriksaan menggunakan plasma heparin, menggunakan metoda pemeriksaan ELISSA. Tidak ada perbedaan bermakna ADAMTS- 1 3 antara kelompok Kasus (Rerata 401.85 ; SB ==201.853) dengan kelompok Kontrol (Rerata 427.55;SB =20 1 .3 8 1 ). Tidak ada perbedaan bermakna antara pSelectin kelompok Kasus (Mean Rank 40.01) dengan kelompok Kontrol (Mean Ranks 41 .98) p=0.743. Meskipun begitu, ada perbedaan antara YWF kasus (Mean Rank 43.93) dengan kelompok Kontrol (Mean Rank 30.20) p=0.022. Uj i hubungan antara trombosit dan masing-masing parameter, semakin rendah trombosit, berhubungan dengan tingginya kadar VWF:antigen. R= - 0.349; p=0.002, Semakin rendah trombosit, semakin rendah kadar ADAMTS 1 3 r=0.389 ; p=O.OOO.
lV
Kesimpulan : ADAMTS 1 3 dan P selektin tidak berhubungan dengan kejadian perdarahan
pada penderita leptopirosis.
ADAMTS 1 3
dan VWF berhubungan dengan kejadian
ttOmbositopenia pada penderita Leptospirosis. Kata kunci : Leptospira, ADAMTS 13, Von Willebrand Factor
v
DAFTAR lSI
1.
Susunan Peneliti
2.
Surat Perjanjian Kerjasama
II
_).
Kata Pengantar
Ill
4.
Abstrak
IV
5.
Daftar lsi
VI
6.
Daftar Tabel
VII
7.
Daftar Gambar
8.
Pendahuluan
..,
Vlll
9. Tinjauan Pustaka
4
10.
Hipotesis, Tujuan, Manfaat
13
11.
Kerangka Teori dan Kerangka Konsep penelitian
14
12.
Metode
16
1 3 . Hasil Penelitian
19
14.
Pembahasan
22
15.
Kesimpulan dan Saran
24
16. Ucapan Terimakasih
25
17. Daftar Pus taka
26
v
DAFTART ABEL
1.
Tabel
1
Demografi subyek menurut jenis
2.
Tabel 2. Karateristik perdarahan
3 . Tabel3. Uji beda
rerata
kelamin dan asal
berdasarkan ada tidaknya
ADAMTSl3 an tara 2
tro mbosi tope nia
kelompok
4. Tabel 4. Uji hubungan ADAMTS 13 dan trombositopenia 5. Tabel5. Uji hubungan VWF dan trombositopenia
Vl
19 19
20 20 21
DAFTAR GAMBAR
l.
Gbr l .Model Patogenesis Kaskade inflamasi dan Koagulasi Pada Sepsis
6
2.
Gbr 2. Peran dan Fungsi ADAMTS
pada individu normal
9
3.
Gbr 3. Peran dan Fungsi P SE!ectin dalam pemecahan VWF
11
4.
Gb 4. Peran dan Fungsi ADAMTS 13 terganggu
12
13
Vll
BABI PENDAHULUAN
Leptospirosis adalah penyakit infeksi akut yang menyerang manus a maupun 1 bewan (zoonosis). Penyakit ini disebabkan oleh Leptospira interrogans, kuman aerob · International termasuk !!.pirochaeta) yang berbentuk spiral dan bergerak aktif 1 .
Lepiospirosis Sociely menyatakan Indonesia sebagai negara dengan insidens leptospirosis yang tinggi dan menduduki peringkat ke tiga di dunia dalam angka mortalitasnya 2. Angka ··ematian pasien leptospirosis berat antara
l 5-30 %
3•4•
Kejadian luar biasa (outbreaks)
leptospirosis di sejumlah negara di dunia dalam dekade lalu telah menjadikan leptospirosis sebagai salah satu dari the emerging infectious diseases 5. Menurut derajat penyakitnya, leptospirosis dibagi menjadi ringan
(umumnya anikterik) dan berat (ikterik) untuk
pendekatan diagnosis klinisnya1•6. Leptospira interrogans serovar icterohaemorhagiae merupakan penyebab tersering leptospirosis berat tetapi penyakit ini tidak secara spesifik berkaitan atau disebabkan oleh serovar Leptospira tertentu7•8. Manifestasi klinis leptospirosis ringan tidak spesifik dan bisa
mmp dengan
penyakit dcmam lain seperti demam dengue, influenza, malaria ringan, infeksi hanta virus, demam
tifoid
dan
sebagainya
dan
jarang
menunjukkan
manifestasi
perdarahan5·9.
leptospirosis berat mempunyai gambaran klinis yang ditandai oleh demam akut, ikterus,
conjunctival suffusion, gaga! ginjal akut, tanda-tanda perdarahan (ptekiae, ekimosis, hematemesis dan hemoptisis mas it), gangguan irama jantung, miokarditis atau perikarditis,
acwe respirat01y distess syndrome (ARDS), pancreatitis akut dan kegagalan multiorgan5·10. lJntuk skrining dan tatalaksana pasien digunakan tes diagnostik cepat Dri-DoT atau •2
lateral:flow 11 1 . Konfirmasi diagnosis dengan tes MAT (microagglutination test) yang merupakan tes referensi (gold standard) untuk diagnosis leptospirosis12·13. Perdarahan merupakan salah satu komplikasi utama dan fatal pada leptosprosis berat 14•15• Dari studi autopsi pada
52
pasien leptospirosis yang meninggal di sebuah RS di
India dilaporkan bahwa terdapat perdarahan pada berbagai organ tubuh yang merupakan penyebab utama kematian terutama perdarahan di paru 16. Walaupun potensi perdarahan pada leptopirosis sudah menjadi perhatian Weil leptospirosis
(1886),
patofisiologi
perdarahan pada
terutama sebab dan mekanisme perdarahannya belum diketahui. Secara teori,
perdarahan adalah akibat dari ketidakseimbangan antara gangguan pada hemostasis primer, atau karena gangguan protein pembekuan pada sekuder hemostasis, atau karena gangguan 1
fibrinol isis.
14
Pasien leptospirosis berat
sering mengalami trombositopenia, penurunan
prothrombin serum dan gangguan faktor koagulasi.
I.IO.I4
Tetapi trombositopeni pada
leptospirosis tidak berhubungan langsung dengan t ingginya insidensi perdarahan pada . 14 Ieptosptrosts. .
Banyak mekanisme kelainan koagulasi yang diduga terjadi pada leptospirosis . .
Infeksi dapat mengaktivasi kaskade koagulasi, dapat mengakibatkan spektrum klinik sindrom thrombo haemorrhagic beral, seperti Disseminated lntaravascular Coagulopathy {OIC), Thrombotic Tthrombocytopenic Purpura (TTP), Haemolytic Uremic Syndrome 7 (HUS) atau vaskulitis. 1 TTP atau HUS jarang dilaporkan terjadi pada leptospirosis. Studi besar menunjukkan bahwa trombositopenia pada leptospirosis bukan disebabkan karena DIC,karena
kadar fibrinogen pada
subyek
leptospirosis justru terjadi peningkatan.
14
Gangguan set endotel dan vaskulitis, secara umum diterima sebagai patofisiologi utama leptospirosis, d imana terjadi inflamasi luas dinding pembuluh darah. Trombositopenia juga sering terjadi pada leptospirosis, namun mekanisme yang mendasari belum jelas, diduga penyebabnya adalah penurunan trombopoiesis, peningkatan konsumsi trombosit karena . . . . proses tmun dan non tmun, atau trom b OSltopatJ.
14 ·1 8
P selectin adalah biomarker dari aktivasi atau kerusakan sel endothel akibat lerpapar endotoksin atau sitokin pro inflamasi. P selectin terletak di Weibel Palade bodies WPb) pada sel endotel dan platelet
a
granul
19.
P selectin juga berfungsi untuk mengikat
Faktor Von Willebrand (vWF) pada permukaan endothel dalam struktur yang memanjang, sehingga dapat dipecah oleh A disintegrin-like and metalloprotease with thrombospodin
type 1 repeats-] 3 (ADAMTS 1
3) . 20
vWF terdapat pada platelet endotel dan
a
granul dan Weibel Palade bodies (WPb) pada sel
meningkat kadarnya pada keadaan inflamasi akut atau kronik. vWF yang
terkandung dalam WPd berukuran besar (Ultralarge v\VFI ULVWF), dimana
U L VWF
ini bersifat hiperaktif karena mampu berikatan dengan matrik ekstrase luler dengan lebih baik. ADAMTS
13
menghambat adhesi trombosit dengan segera memotong ULvWF
biperaktif yang keluar dari WPb. Akumulasi ULYWF aktivitas atau jumlah ADAMTS
13.
dapat disebabkan oleh penurunan
Penurunan ini dapat ditemui pada penyakit TTP,
malaria, sepsis atau DIC. Patogenesi s defisiensi ADAMTS 1 3 pada TIP sudah banyak
2 •22 diungkapkan. 1 . Pada leptospirosis, ditemukan peningkatan kadar TNFa., dimana hal ini
berhubungan dengan berat penyakit dan mortalitas. TNFa meningkatkan kadar U L VWF sehingga te�jadi
kekurangan/penurunan fungsi ADAMTS 1 3 2
14 23 · • Pada sebuah
studi
diungkapkan bahwa, penurunan kadar
ADAMTS 1 3
pada subyek
DIC
juga berhubungan
eengan peningkatan kejadian gaga! ginjal dan peningkatan serum kreatinin. 24
Pada penelitian ini kami ingin mengetahui apakah pada subyek leptopirosis dengan perdarahan terjadi aktivasi endothe! lewat perubahan kadar P selektin, apakah terjadi perubahan kadar
ADAMTS 1 3
dan kadar vWF. Diharapkan hal ini akan membantu .
:nemberikan
manfaat dalam pengelolaan pasien leptospirosis dengan perdarahan.
3
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
�1.
Leptospirosis
3.1.1. Definisi Leptospirosis adalah penyakit infeksi zoonosis yang disebabkan oleh Leptospira sp yang bersifat patogen. Adolf Weil melaporkan pertama kali pada tahun
1 886
dengan
karakteristik klinis berupa demam, hepatomegali, splenomegali , ikterus dan tanda-tanda kerusakan ginja1.
25
3.1.2. Etiologi Leptospira sp termasuk ordo Spirochaetales, famili Leptospiraceae dan genus Leptospira. Kuman yang memiliki
2
lapis membran, berbentuk spiral, tipis dan lentur
�engan ukuran panjang I 0-20 mikron dan ketebalan
0, 1
mikron. Kedua uj ungnya memiliki
kait berupa flagel periplasmik yang berputar pada sumbu panjangnya. Kuman leptospira oersifat obligat aerob yang tumbuh optimal pada suhu 1eridentifikasi
3.1.3.
24
serogrup yang terdiri dari
200 serovar.
28-30 ° C.
Hingga saat ini telah
25·26
Epidemiologi Leptospirosis memiliki distribusi penyebaran yang cukup luas, namun insiden secara
pasti belum diketahui. lnsiden pertahun diperki rakan sedang dan
lebih dari
leptospirosis diperkirakan
I 0-1 001100.000
1 OOOx
di daerah
0 , 1 - 1 I I 00.000 tropis.
Di
d i daerah beriklim
negara
tropis insidcn
lebih tinggi dibandingkan dengan subtropik dengan lebih
banyak kejadian berat. Insiden dipengaruhi banyak faktor seperti sosial ekonomi, budaya, peke1j aan, perilaku dan lingkungan. Beberapa negara di South East Asia Region adalah daerah endemik insiden penyakit
2
7·1
3
Semarang merupakan daerah endemis di Indonesia dengan perkiraan
1 .21100.000
dan angka kematian mencapai
1 6.7% 27
3.1.4. Patogenesis Hewan yang terinfeksi leptospira dapat menularkan penyakit leptospirosis kepada manusia. Leptospira hidup dalam ginjal hewan penjamu dan dikel uarkan melalui urin. Hewan penjamu utama leptospira adalah roden, dan beberapa hewan peli haraaan yang
4
Oa.pat menjadi penjamu antara lain anjing, kucing, kambing, babi, lembu dan unggas. Hewan liar yang dapat menjadi hewan penjamu antara lain ular, bajing, dan tikus. 25•26 Leptospira masuk ke dalam tubuh lewat abrasi kulit atau luka iris, konjungtiva atau lapisan mukosa utuh yang melapisi mulut, faring, esophagus, bronkus, alveolus, dan dapat melalui minuman yang terkontaminasi , serta inhalasi droplet infeksius. 25 .
Leptospira yang virulen bermultiplikasi di darah dan jaringan , sedangkan yang non virulen akan dimusnahkan oleh sistem kekebalan tubuh. Leptospira pun merusak dinding pembuluh darah kecil dan menimbulkan vaskulitis disertai dengan kebocoran dan ekstravasasi. Organ utama yang terinfeksi leptospira adalah hati dan ginjal. Pada hati didapatkan nekrosis sentrilobulus dengan proliferasi sel kupffer, sedangkan di ginjal leptospira bermigrasi ke interstitium, tubulus dan lumen tubulus menyebabkan nefritis imerstitial dan nekrosis. Organ lainnya seperti mata dapat terjadi dilatasi pembuluh darah, uveitis, iritis, iridosiklitis, paru dapat terjadi inflamasi interstitial hingga perdarahan, serta 25 di jantung menyebabkan miokarditis. Patogenesis leptospirosis hingga saat
ini
belum
sepenuhnya dimengerti.
Patogenesis sccara umum sesuai mekanisme penyakit infeksi bakteri gram negatif yang melibatkan mekanisme sistem imun innate
.
Invasi leptospira (exogenous injury)
mengawali aktifasi inflarnasi dan koagulasi. Proses diawali dengan
inflamasi yang
menginduksi aktifasi koagulasi. Sitokin berperan penting dalam aktifasi koagulasi yang menyebabkan ketidakseimbangan antara faktor koagulasi dan fibrinolisis. 2829
---•
: Inhibitors
Tcell
Gam bar 1: Model Patogenesis Kaskadc inflamasi dan Koagulasi Pada Sepsis
28
2.1.5. Gambaran Klinis 7-12
hari dengan rata-rata I 0 hari.
�1anifestasi k!inik bervariasi mulai dari leptospirosis
ringan sampai berat dengan
Masa inkubasi leptospirosis berkisar antara
kegagalan multi organ. Berdasarkan berat ringannya, leptospirosis dibagi menjadi ringan dan berat atau leptospirosis anikterik dan leptospirosis ikterik.
25•30· 3 1
3.1.5.1. Klasifikasi Leptospirosis a. Leptospirosis anikterik (Leptospirosis ringan)
Se bagian besar manifestasi klinik leptospirosis adalah anikterik. Leptospirosis anikterik dikategorikan sebagai leptospirosis derajat ringan berupa manifestasi influenza like illness dengan onset mendadak ditandai demam ringan atau tinggi (>=38° C) bersifat remitten, nyeri kepala, menggigil, dan mialgia, nyeri retroorbita dan fotofobia, nyeri otot terutama betis.
25•31
Pemeriksaan fisik yang khas adalah conjungtival suffusion dan nyeri tekan m. gastrocnemeus. Pada sebagian pasien, penyakit ini dapat sembuh sendiri. Gambaran 6
k.liniknya mirip dengan penyakit demam akut lainnya, maka diagnosis banding mencakup influenza,
HIV
serokonversi, infeksi virus dengue, infeksi hantavirus, hepatitis v1rus,
infeksi mononukleosis, demam tifoid, bruselosis, malaria, dan ricketsiosis. b.
2531
Leptospirosis lkterik (Leptospirosis Berat)
Gaga! ginjal akut, ikterus dan manifestasi perdarahan merupakan gambaran khas penyakit weil. Ikterus umumnya dianggap sebagai indikator utama leptospirosis berat. Demam dapat persisten sehingga fase imun tidak jelas atau tumpang tindih dengan fase leptospiremia. Keterlibatan paru-paru umumnya ringan berupa batuk, nyeri dada, hemoptisis dan acute respiratory distress syndrome (ARDS). Manifestasi kardiovaskular umumnya berupa miokarditis, gagal jantung kongestif dan gangguan irama jantung. Karakteristik
Leptospirosis berat adalah ditemukannya ikerik, gaga! ginjal akut dan
manifestasi perdarahan. Komplikasi pada leptospirosis berat berupa miokarditis hemoragik, gaga! multi organ, perdarahan masif, ARDS, koma uremikum, syok septik, gaga! kardiorespirasi dan syok hemoragik. 3.1 .6.
25•31
Diagnosis Laboratorium
3.1.6. 1 . Tes diagnostik yang cepat dan mudah (Rapid Diagnostik Test)
Tes ini menggunakan metode dipstick assay , lateral flow assay dan latex based agglutinaiion test. Pemeriksaan ini untuk mendeteksi Leptospira-specific Immunoglobulin .\1.
Pemeriksaan menggunakan dispstick assay memerlukan waktu
2,5
sampai 3 jam,
Lateral-flow assay hasilnya dapat terbaca dalam 1 0 men it, dan Latex based agglutination
32 test (LEPTO Dri Dot) hanya dalam waktu 30 detik. 25·31•
3.1 .6.2. Microscopic Agglutination test (MAT) 33·34
MAT merupakan tes referensi utama. MAT mendeteksi antibodi pada tingkat serovar sehingga dapat mengidentifikasi strain Leptospira . Pemeriksaan ini memerlukan sejumlah strain dan sepasang sera pasien pada periode akut dan 7-14 hari sesudahnya. Pemeriksaan MAT dikatakan positif jika terjadi serokonversi berupa titer negatif menjadi positif atau kenaikan titer 4 kali lipat atau titer� 400 pada sampel tunggal.
7
25· 3 1 . 32
3.1.6.3. Polymerase chain reaction (PCR)
Metode PCR saat ini telah dikembangkan meski be!um direkomendasikan menjadi res
referensi utama. Quantitative real-time PCR (qPCR) assay sangat bermanfaat untuk
di� onosis awal leptospirosis. Leptospira ditemukan pada rninggu pertama, oleh karena itu les
sebaiknya menggunakan sampel darah setidaknya 2 hari setelah pemberian antibiotik,
karena antibiotik dapat mengeliminir keberadaan leptospira. qPCR (SYBR green and TaqMan chemistries) dengan target gen secY, ljbl, and lipL32 telah dikembangkan untuk res
diagnostik leptospirosis. 35 WHO SEARO, Chem1ai (2009) mengeluarkan konsensus untuk mempermudah
magnosis kasus leptospirosis adalah sebagai berikut : 1 3 - Suspect case adalah demam akut >=38 ° C dan atau nyeri kepala hebat dengan mialgia , prostration dan atau conjunctival suffusion dan riwayat terpapar leptospira. - Probable case (primary health care level) adalah suspek kasus dengan dua dari gejala
aerikut : nyeri gastoknemeus, batuk dengan atau tanpa hemoptoe, ikterik, manifestasi perdarahan, meningitis, anuria/oliguria dan atau proteinuria, sesak nafas, aritmia kordis, stin rash.
-Probable case (secondary or tertiary health care level) adalah : suspek kasus dengan tes
diagnostik cepat lg M leptospira yang positif dan atau MAT titer 200 pada sampel tunggal dan
atau tiga dari temuan berikut : urin didapatkan proteinuria, lekosit dan darah, netrofil
SOO/o
dengan limfopenia, trombosit <1 00.000/mmJ, bilirubin serum >2mg% dengan
peningkatan sedang nilai enzim (serum alkali fosfatase, CPK, amilase) - Confirmed case adalah : su.spek atau probable case dengan positif dari salah satu
pemeri ksaan berikut : isolasi spesimen leptospira , PCR, serokonversi pemeriksaan MAT dari >=
negatif menjadi positif atau terjadi peningkatan titer empat kali lipat , atau titer MAT
400 pada pemeriksaan tunggal. Pada leptospirosis berat, seringkali terjadi manifestasi perdarahan. Kelainan
perdarahan yang terjadi, dapat berupa perdarahan ringan sampai berat. Selain itu pada leptospirosis dapat disertai dengan trombositopenia. Penyebab trombositopenia sendiri belum jelas. Secara umum diterima bahwa hal ini disebabkan oleh proses imun yang
disebabkan antibodi antitrombosit. Studi lain menduga hal ini disebabkan oleh gangguan :!gregasi, adhesi dan aktivasi trombosit, karena gangguan endothel. Adanya kerusakan �othel menyebabkan terjadinya penurunan prostasiklin, sehingga terjadi peningkatan 8
agregasi dan adhesi trombosit, sehingga menyebabkan penurunan jumlah trombosit pada sirkulasi. 1
4 Normal
Subject
� � -·� --· ··-!Ji2 X .. --..� . ,":, .. .. ... �... : · · · � .. ·:-- � · - - - �
Cleaved unusually large multimars of von
Willebrand factor
\
�DAMT�...-� �3-�(��-�. .
�
.....
� .... ... ... .......-... .:.:� ;: � -:. - .- ... .. :
.. .•
)
Endothelial cell
Secretion of multimers from Weibel-Palade body
A
Gambar 2. Peran dan Fungsi adamts l3 pada individu normal 36
Gangguan sel
endotel
dan
vaskulitis,
diterima sebagai
patofisiologi
leptospirosis, dimana terjadi inflamasi luas dinding pembuluh darah. akhirnya
adalah
endotel
kehilangan
fungsinya
sebagai
utama
Sebagai hasil
antitrombosis,
terjadi
k.etidakscimbangan hemostasis, sehingga terjadi trombosis intravaskuler, infark organ dan organ disfu ngsi. Jejas langsung pada sel endothel dapat mempengaruhi hemostasis. Kerusakan pembuluh darah yang luas ini dapat menyebabkan terj adinya perdarahan paru, 4.18 iskemia korteks ginjal, nekrosis sel epitel tubulus dan kerusakan hepar. 1 Berdasarkan temuan patologis pendcrita leptospirosis, vaskulitis dengan kerusakan endotheL infiltrasi inflamasi terdiri dari sel monosit, plasma sel, histiosit menjadi temuan khas pada leptospirosis manusia maupun binatang.
5
dan neutrofil
Perdarahan intra
alveolar yang unik terjadi pada leptospirosis, dengan morfologi adanya infiltrasi inflamasi intersisiil dan ekstravasasi sel darah merah dari jaringan kapiler , yang tidak tampak pada sindrom ekstravasasi pada dengue haemorhagic fever dan virus hanta
9
37
Sel endotel memainkan peran penting dalam berbagai fenomena biologis yang penting, termasuk hemostasis, kontrol tonisitas pembuluh darah, peradangan, angiogenesis, dan penyembuhan luka. Awal proses ini membutuhkan respon akut, sehingga pengkajian mendalam dilakukan pada bagian dimana zat molekul bioaktif tersimpan. Bagian tersebut adalah badan Weibel-Palade (WPBs).
38
Salah satu prote in utama yang dihasilkan dari
WPBs adalah protein hemostasis von Wil lebrand Factor (VWF). VWF adalah multi domain besar multimerik glikoprotein yang mengikat Gplib I Gpiiia reseptor pada rrombosit, serta kolagen, heparin dan faktor V l l l .. Eksositosis dari WPBs dalam sel endotel diaktifl
memainkan peran penting dalam membentuk surnbat hemostatik. VWF
yang besar (ultralarge) sangat pro-trombotik dan kemudian dengan cepat dikurangi menjadi normal melalui pemecahan oleh plasma metalloprotease ADAMTS 13. tx!nelitian
De Brito dkk, pada pembuluh darah hewan coba,
38
Pada
terjadinya kerusakan
pembuluh darah, menunjukkan adanya inj ury pembuluh darah dan nekrosis sel endothel.
39
Beckmeyer dkk melakukan penelitian pada penderita perawatan ruang intensif, ULVWF ditemukan pada 75% pasien dengan SIRS - disfungsi organ, pada hari evaluasi saat dilakukan pemeriksaan
ulang, ULVWF menetap pada kelompok non survivor, dan
LLVWF menghilang pada kelompok survivor. Pada kelompok non survivor terdapat penurunan aktivitas ADAMTS13 dan peningkatan kadar IL-6. Hilangnya ULVWF disertai dengan peningkatan aktivitas ADAMTS13
40
Pada penelitian Hong LiangYang dkk pada
?fnderita leptopsirosis , dengan melakukan pemeriksaan terhadap aktivasi koagulasi, marker aktivasi
endotel dan pemeriksaan mikroskop electron, secara studi
patologi
disimpulkan bahwa kejadian trombositopenia pada leptospirosis adalah karena adanya suatu agregasi trombosit dan fagositosis sel kupffer. Tidak terdapat thrombus trombosit atau fibrin pada hepar, paru maupun ginjal. Terdapat peningkatan
II
dehydrogenate
nomboxane B2 (11-DH-TXB2) dan Thrombomodulin (TM) sebagai tanda adanya proses �'tivasi terhadap trombosit dan aktivasi endothel 4 1 Trombosit teraktivasi tersebut dapat .
:::tenyebabkan proses inflamasi karena adanya sekresi badan Weibei-Palade (WPBs) dan P selectin platelet yang menyebabkan proses rolling leukosit.
42
Mekanisme pemecahan UL VWF oleh ADAMTS 13 secara
m
vivo dan pada
tondisi yang bagaimana agar kondisi ini bisa optimal, bel u rn banyak diketahui. Sitokin pro inflamasi mempunyai peran cukup penting pada pemecahan UL VWF. Pada penelitian 10
Bernardo dkk disebutkan bahwa sitokin pro inflamasi TNFa, IL -6 dan
IL- 8
berpengaruh
terhadap j umlah ataupun pemecahan UL VWF, jumlah dan fungsi ADAMTS 1 3 . Sitokin proinflamasi
IL-8
dan TNFa menstimulasi keluamya
menghambat pemecahan
UL VWF
UL VWF
,
sedangkan IL-6
oleh ADAMTS 1 3 , sehingga terjadi akumulasi dalam
plasma dan sel endotel, kemudian terjadi agregasi trombosit dan proses adhesi pada endotel pembuluh darah. 23 Pada leptospirosis terjadi peningkatan kadar TNFa Peningkatan kadar TNFa berhubungan dengan mortalitas dan beratnya penyakit pada pasien leptospirosis, sehingga peningkatan kadamya mempunyai prognosis buruk.43
iv
CICIM'e ��� l'i!k-cl � V'�
l;.
_.,1.
r
'"
-
a.
"'t
f ·l
/J
'?
""" 4J.·l•W��� � ·-
Gb.3.Peran P Selectin dan ADAMTS13 dalam pemecahan U LVW F 20
Dugaan P selectin sebagai salah satu sebab terjadinya ikatan antara
UL VWF
dan
sel endotel karena beberapa alasan: Pertama, karena P selectin bersama dengan VWF
dalam Weibel-Palade bodies sel endotel ataupun a granul trombosit. Kedua, keduanya terekspresi dalam
sci
endotel atau sekresinya akibat penyebab yang sama. Dalam penelitian
Padilla dkk dilaporkan bahwa interaksi UL VWF dan P-selectin dapat mengikat benang UL VWF pada permukaan sel endotel yang teraktivasi 20
11
Saat UL VWF tersebut kemudian terikat pada sel endotel, P selectin mempunyai peran yang penting karena P selectin akan memfasilitasi pemecahan UL VWF oleh ADAMTS 1 3 . Pada saat plasma mengalir, kecepatan pemecahan oleh ADAMTS 1 3 ini I 000 kali lebih cepat dibanding dengan saat aliran tersebut dalam keadaan statis. Hal ini membuat dugaan bahwa terjadinya proses tersebut pada permukaan sel endotel. 20 Dalam . keadaan normal, proses ini harus berjalan seimbang, antara jumlah ULVWF yang dihasilkan dan proses proteolisis-nya oleh ADAMTS 1 3 . Adhesion and aggregation of platelets --·· -· -. ··
� t.
· '1\f '!·�
'i-.\.
.
•.
Uncleaved unusually "' •. la rge multimers of von ----.,.,-.....,..,.. Willebrand factor
; ADAMTS 13
\.,
Endothelial cell
}
Secretion of multirners from Weibei-Palade body
B
Gambar 4. Gangguan pada penurunan jumlah atau fungsi ADAMTS13
36
lnteraksi antara glikoprotein transmembran reseptor platelet (GP) Ib dan protein plasma multimerik faktor von Willebrand (VWF) adalah salah satu penentu utama adhesi trombosit ke dinding pembuluh yang cedera dalam kondisi shear stress.
12
44
BAB III TUJUAN DAN MANFAAT Tujuan umum Mengetahui aktivasi endothel , perubahan kadar ADAMTS 13 dan vWF pada subyek . leptospirosis dengan perdarahan di Semarang, Indonesia Tujuan khusus I.
Mengetahui kadar P-selectin pada leptospirosis dengan perdarahan
2. Mengetahui perubahan kadar ADAMTS 1 3 pada subyek dengan leptospirosis dengan perdarahan
3. Mengetahui perubahan kadar vWF pada pasien leptospirosis dengan perdarahan �1anfaat :
�1engetahui faktor-faktor yang berperan dalam patofosiologi perdarahan pada kasus leptospirosis berat, sehingga diharapkan dapat memperbaiki penanganan penderita .
13
BAB IV KERANGKA TEORI DAN KERANGKA KONSEP PENELITTAN
3. 1 . Kerangl<.a Tcori arahan/ Trombosis Sitokin Pro !nllamasi IL-6
,.\kti vasi Koagulasi
IL-l
TNF
a
Aktivasi Enclothel
\
l) ll
/
o.
Grcmule
Wcihd Palad..: Bodies
\V i l lebrand F<1ktor
P SckTlin
']
ADAMTS 1 3
.,
Aktivasi
(agregasi)
Trombosit
14
Aktivasi Lcukosit
3.2. Kerangka Konsep
Aktivasi Endothel
a
Granule
Wl!ibel Palade Bodies
Willebrand Faktor
ADAMTS 13 P
Selectin
Trom bos itopen ia
Perdarahan I Trombosis
3.3. Hipotesis Mayor Terkadi aktivasi endotel dan perubahan hemostasis pada penderita leptospirosis dengan perdarahan. 3.4. 1.
Hipotesis Minor
Terdapat perubahan kadar ADAMTS 1 3 pada penderita leptospirosis dengan perdarahan.
2. Terdapat
perubahan kadar Von Willbrand Faktor pada penderita leptospirosis dengan
perdarahan. 3 Terdapat
perubahan kadar P Selectin pada penderita leptospirosis dengan perdarahan.
15
BAB V M ETODE P E N L LI T I A N �-
I.
Ruang Lingkup Pcnelitian
Penclitian ini mcncakup bi cl ang studi infeksi dan hematologi-or; kologi m edi k ( t h rombosis-hemostasis).
�- 2. Lol
Pcnelitian ini d i lakukan eli bangsal pe n yak i t dalam RSUP Dr Kariadi dan laboratorium
C E B I O R (Cenlerfor Biomedical Research) Fak u l tas Kcdokteran U n i versitas D i ponegoro.
-t. 3. Waktu Pcm:litian l}cnclitian i n i clilaksan�d-:an s-:l8ma saru l
(20 1 1 -20 1 2 ).
-t�. Desain Penclitian
Penel i tian i ni m e ru p a kan penel i tian desk ri pti f dengan pendek a tan studi cross
sectional.
-tS. Populasi dan S a rn p c l Pcnelitian -t.S. I . Populasi Target
Populasi dalam pcnelitian ini udalah s u b ye k l e p tosp iros i s
-t5.2.
.
Populasi Tt'rj a n g k a u Pasie11 leptospimsis yang clir8wat d i ban gsa l pe n y ak i t clalam R S U P Dr Kariadi ycmg tc l a h
d i kontirm�1si
cleng
v � 1AT dan m e nga l am i scclikitnya
smu
ma n i fcstasi perdarahan.
-1.5.3. Sampel Penclitian Sam pe l yang nkan cliteliti mla lah subyck p e nde r i ta
eksk l us i :
l e pto s p i rosis perc!arahan d a n kOiltrol
lep t o s pi ro s i s non perclarahan yang
16
memenuhi k r i [eria inklusi dan
-.5.3.1 . Sampel subyek leptospirosis Kriteria inklusi sebagai- berikut : - Pasien klinis leptospirosis dengan tes diagnostik cepat lg M anti leptospira positif pada saat masuk RS. Konfirmasi dengan MAT.
•
- Pasien mengalami sedikitnya satu manifestasi perdarahan.
- Setuju untuk diikutsertakan dalam penelitian ini (menandatangani informed consent)
Kriteria ekslusi adalah sebagai berikut : - Subyek atau keluarga subyek tidak bersedia mengikuti penelitian. - Subyek dengan riwayat penyakit perdarahan - .3.2.
Sampel kontrol Kriteria Inklusi sebagai berikut : - Pasien klinis leptospirosis dengan tes diagnostik cepat lg M anti leptospira positif pada saat masuk RS. Konfirmasi dengan MAT - Pasien terdapat manifestasi perdarahan - Bersedia mengikuti penelitian dengan menandatangani informed consent
�s.3.3. Bcsar Sampel
.l'-mlah sampel pada penelitian i n i direncanakan sebanyak 60 kasus pasien leptospirosis dengan rdarahan
17
-15.3.4.
Alur Penelitian Pasien Klinis Leptospirosis
lgM leptospirosis (+) Data Dasar Koagulasi: Trombosit, PPT/PTTK, Fibrinogen
Perdarahan (-)
Perdarahan ( +)
Pemeriksaan Lab : ADAMTS 1 3 antigen VWF antigen P selectin
18
BABVI 1-IASIL PENELITIAN
Tabel l . Demografi subyel<. menurut jenis kelamin dan asal Karakteristik
Kontrol (N=20)
Kasus (N=60)
Kelompok Umur 1 6- 40 tahun
1 4 (1 7.5%)
7 (8.8%)
4 1 - 6 0 tahun
34 (42.5%)
1 0 (12.5%)
>60 tahun
12 (15.0%)
3 (3.8%)
Laki-laki
43 (53.8%)
13 (16.2%)
Perempuan
1 7 (21.2%)
7 (8.8%)
Swasta
35 (43.8%)
8 (1 0.0%)
Ibu Rumah Tangga
12 (15.0%)
6 {7.5%)
Belum bekerja/Pelajar
13 (16.2%)
6 (7.5%)
Urban
46 (57.5%)
1 7 (21.2%)
Rural
14 (17.5%)
3 (3.8%)
Jenis
Kelamin
Pekerjaan
Daerah asal
Dari data tersebut , dari 80 s ubyek leptospirosis perdarahan dan non perdarahan, jenis ke lami n pria sebanyak 56 subyek (70 %), sedangkan wanita hanya 24 subyek (30%). Sedangkan menurut tempat tinggalnya, , mayoritas tinggal di daeral1 urban , yaitu sebanyak 70 subyek (75%), sedangkan sebagian kecil tinggal di darah rural (25 %).
Tabel 2. Karateristik perdarahan berdasarkan ada tidaknya trombositopeuia Trombositopeni
(<
1 5 0rb)
Trombosit normal (> = 150rb)
Perdarahan Perdarahan
36 (45.0%)
8 (10 %)
Tidak perdarahan
22 (27.5%)
14 (17.5%)
p= 0.039 ;
RP
= 2,86
(CI I ,035
-
7 ,924 ) 19
Terdapat hubungan antara kejadian perdarahan pada penderita leptospirosis dan kejadian trombositopenia Pada penelitian ini tidak terdapat perbedaan yang bem1akna antara ADAMTS 1 3 antigen pada kelompok kasus, 60 penderita leptospirosis dengan perdarahan dan 20 penderita leptospirosis tanpa perdarahan. Tidak ada perbedaan bermakna ADAMTS-1 3 antara kelompok Kasus (Rerata 40 1 .85 ; SB =20 1 . 853) dengan kelompok Kontrol (Rerata 427.55;SB =201.381). Tabel 3. Uji Beda Rerata ADAMTS 1 3 antara dua kelompok Kelompok
Rerata
N
Simpangan Baku
kasus
60
401.85
201.853
kontrol
20
427.55
201.381
p
0.788
p=O. 788 ; t= - 0.493 Demikian juga tidak ada perbedaan bermakna antara pSelectin kelompok Kasus (Mean Rank 40.0 1 ) dengan kelompok Kontrol (Mean Ranh 41 .98) p=0.743. Meskipun begitu, ada perbedaan antara VWF kasus (Mean Rank 43.93) dengan kelompok Kontrol (Mean Rank 30.20) .P=0.022.
600.0
0
0
400.0
g
E
�00 0
0
0
0
0 0
0
0
0
0
0 0 0
0
0
RSq lh\eM"'O.t07
0.0 lOO
�00
€·00
'3()0
1000
ADAMTS13
Tabel 4. Uji Hubungan ADAMTS13 dan Trombositopenia Pada
uji hubungan antara kadar ADAMTS 1 3 antigen dan kadar trombosit , didapatkan
hubungan bahwa semakin rendah trombosit,semakin rendah kadar ADAMTS 1 3 r=0.389 ; p=O.OOO. Pada uji hubungan antara kadar VWF antigen dan kadar trombosit , didapatkan 20
hubungan bahwa semakin rendah trombosit, berhubungan dengan semakin tingginya kadar VWF:antigen.
r=
-
0.349; p=0.002 0
0
600.0
E 0 ...
400.0
<0
0
0
..
0 �0
oo c9
0
8
0
0 00 0.00
1.00
JOO
4.00
VWF
Tabel 5. Uji Hubungan VWF dan Trombositopenia
21
BAB VII PEMBAHASAN
Tujuan dari penelitian ini adalah membuktikan adanya perubahan kadar ADAMTS 13, perubahan kadar VWF dan perubahan kadar P Selektin pada pend e!·ita leptospirosis dengan perdarahan. Tujuan akhirnya adalah memperbaiki penatalaksanaan kasus leptospirosis dengan perdarahan. Pada penelitian ini dari 80 subyek leptospirosis didapatkan subyek dengan jenis �elamin pria lebih banyak dibanding wanita (70% : 30%). Hal ini mw1gkin karena laki-laki lebih banyak beke1ja di luar rumah, sehingga kemungkinan terpapar oleh kuman leptospira lebih besar. Mayoritas usia subyek adalah usia produktif (16-40 tahun) sebanyak 65 :;Jenderita (8 1,25%), hal ini menunjukkan bahwa sebagian besar subyek berada pada usia produktif. Sedangkan menurut tempat tinggalnya, mayoritas tinggal di daerah urban , yaitu sebanyak 63 subyek (78,7 %), dan hanya sebagian kecil yang tinggal di darah rural (22 %). Kemungkinan hal ini berkaitan dengan keadaan sanitasi lingkungan dan peluang terjadinya banj ir. Terdapat hubungan , antara kejadian trombositopenia dan resiko terjadinya perdarahan. Menurut Jirri dkk penelitian pada 52 pasien dengan leptopirosis berat, perdarahan terjadi pada 3 1 subyek (60%) , dimana 24 subyek dengan perdarahan ringan 45 dan 7 dengan perdarahan berat (22,6 %). Tidak ada perbedaan bermakna antara pSelectin kelompok Kasus (i\1ean Rank 40.0 I ) dengan kelompok Kontrol (Mean Ranks 41 .98) p=0.743. Meskipun begitu, ada perbedaan antara VWF kasus (Mean Rank 43.93) dengan kelompok Kontrol (Mean Rank 30.20) p=0.022. Pada penelitian Jirri dkk mengenai soluble E Selektin dan von willebrand yang menggunakan subyek penderita leptospirosis dengan perdarahan pada kelompok kasus dan penderita leptopsirosis non perdarahan pada kelompok kontrol, didapatkan hasil bahwa ndak terdapat perbedaan yang bermakna diantara penderita leptospirosis dengan perdarahan dan tanpa perdarahan.46 V W F merupakan protein fasa akut, dimana kadarnya akan meningkat pada keadaan infeksi (endotoksin) atau inflamasi
.
V\VF berperan besar
dalam proses adhesi trombosit. Hasil yang berbeda dimungkinkan karena VWF merupakan penanda aktivasi endotel dan berhubungan dengan tingkat keparahan penyakit. Marker 22
aktivasi endothel yang lain, P Selectin, tidak berbeda bermakna , karena P Selectin selain marker aktivasi endotel, kadarnya juga sangat dipengaruhi oleh ADAMTS 1 3 dan ULVWF. P Selectin terlibat secara aktif dalam pemecahan ULVWF oleh ADAMTS 13, sehingga kadar dari keduanya dan kemudian penggunaannya dalam pemecahan ULVWF menjadi bentuk VWF normal, dapat mempengaruhi kadar P Selectin plasma. .
P Selectin bukan
merupakan marker yang tepat untuk melihat semata-mata adanya proses aktivasi endothel. Pada penelitian ini tidak terdapat perbedaan bermakna antara ADAMTS 1 3 antigen pada kelompok kasus, (60) dan penderita leptospirosis tanpa perdarahan (20). Tidak ada perbedaan bermakna ADAMTS-13 antara kelompok Kasus (Rerata 401 .85 ; SB dengan kelompok Kontrol (Rerata
427.55;SB =201 .381 )
.
ADAMTS 1 3
20 1 853 )
=
.
deftsiensi
ditemukan pada kasus infeksi dan inflamasi berat. Pemeriksaan ADAMTS 1 J. sebaiknya juga disertai dengan pemeriksaan aktivitasi ADAMTS 1 3 . Pada penelitian kasus Malaria oleh Quirijn de Mast dkk , ADAMTS antigen dan aktivitasnya menurun, disertai 22 peningkatan ULVWF, menyebabkan terjadinya agregasi trombosit dan trombositopenia. • Kisjamijatun dkk melakukan penelitian pada kasus dengue berat, berhubungan dengan eksositosis
WPB dengan peningkatanVWF:Ag, disertai dengan penurunan aktivitas 47 ADAMTS-13 dan berperanan dalarn kejadian trombositopenia dalam kasus dengue.
23
BAB VIII KESIMPULAN SARAN
Kesimpulan Mayoritas penderita leptospirosis adalah laki-laki , usia produktif. Trombositopenia merupakan faktor resiko komplikasi perdarahan pada leptospirosis. Pada penderita leptospirosis perdarahan terjadi perbedaan bermakna kadar VWF dibanding kelompok kontrol. Kadar ADAMTS 1 3 dan P Selectin tidak berbeda bermakna pada kedua kelompok. ADAMTS 1 3 dan VWF berhubungan dengan kejadian trombositopenia pada
penderita leptopirosis perdara.�an. Kejadian trombositopenia merupakan salah
satu prognosis pada penderita leptosirosis. Saran : 1 . Perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk mengetahui penyebab perdarahan p�da kasus leptospirosis berat. 2.
Perlu dilakukan pemeriksaan aktivitas ADAMTS1 3 , aktivitas VWF dan VWF mutimer untuk mengetahui ukuran molekul YWF plasma tersebut.
24
UCAPAN TERIMA KASIH
I . Balitbangkes selaku penyandang dana dan pembinaan yang diberikan sehingga penelitian ini bisa kami selesaikan 2.
Dr M Hussein selaku pembimbing penelitian ini atas kesempatan dan bimbingan yang diberikan.
3. Dr C Suharti selaku pembimbing penelitian ini, atas kesempatan dan bimbingan yang diberikan. 4. Dr Mika L Tobing selaku ka sub bagian hematologi onkologi medik, atas kesempatan dan bimbingan yang diberikan. 5. Prof Sultana dan segenap Lab Cebior FK Undip , atas kesempatan kami bisa melakukan penelitian di labortaorium Cebior 6. Lab Mikrobiologi, atas semua bantuannya . 7. Semua pihak yang tidak bisa kami sebutkan satu persatu.
25
DAFTAR PUSTAKA
I . Farr RW. Leptospirosis. Clin Infect Dis, 1995; 2 1 : 1 -8 2.
3.
ILS wordwide survey.l 999. International Leptospirosis Society. W\V\\".LeptoNet.net Hadisaputro S, Karnadi E, Lestariningsih. Aspek klinik leptospirosis (Weil's disease). Dalam Hadisaputro S
ed.
Tropical diseases up date , Semarang, FK Undip,
1 99 1 : 1 - 1 6 4. Daher E, Zanetta DMT, Cavalcante MB, Abdulkader RCRM. Risk factors for death and changing patters in leptospirosis acute renal failure. Am J Trop Med 1999;61 :630-4 5. Levett PN. Leptospirosis. Clin Micobiol Rev 200 1 ; 296-326 6. Gasem MH. Gambaran klinik dan diagnosis Leptospirosis pada manusia. Kumpulan Maka!ah Simposium Leptospirosis. Badan Penerbit Universitas Diponegoro, 2002; 17-3 1 7. Farrar WE. Leptospira Species (Leptospirosis). In: Mandell GL et al (eds), Principle and Practice of lnfectious Diseases,
3 rd
Churchill Livingstone, New York, 1991 :3 1 7-
27 8.
Riyanto B, Gasem MI-l, Pujianto B, Smits
HL. Leptospira
serovars in patients with
severe leptospirosis admitted to the hospitals of Semarang. Buku Abstrak Konas V I I I PETRI, Malang, Juli 2002. 9. Gasem MH, Redhono D, Suhar1i C. Anicteric leptospirosis can be misdiagnosed as dengue infection Buku Abstrak Konas VUI PETRI, Malang, Juli 2002. 10. Nurmilawati, Gasem MH, Aziz
MN,
Riyanto B, Hadisaputro S. Clinical features of
severe complicated leptospirosis in the hospitals of Semarang. Buku Abstrak Kongres Nasional X Perhimpunan Peneliti Penyakit Tropik lnfeksi (PETRI), Palembang, 2004 1 1 . Smits HL, Chee HD, Eapen CK, Kuriakose M, Sugathan S, Gasem MH, Yersin C, Sasaki D, Lai-a-Fat RFM, Haartkeerl R, Liesdek B, Abdoel TH, Goris MGA, Gussenhoven GC. Latex based, rapid and easy assay for human leptospirosis in a single test format.
Trap J'vfed Int Health 2001, 6: 1 1 4 - 1 1 8
12. Smits HL, Hartskeerl RA, Terpstra WJ . International multi-center evaluation of a dipstick assay for human leptospirosis. Trop Med lnt Health 2000;3: 1 24 8 -
26
1 3 . World
Health Organization.
Human
leptospirosis:
Guidance
for
diagnosis,
surveillance and control. 2003 14. Wagenaar JFP, Mairuhu ATA, Goris M, Sakundamo MA, Gasem MH, Gorpvan ECM et al. What role do coagulation dissorder play in the pathogenesis of leptospirosis
? Trap
Med Int Health 2007; 12: 1 1 1-22
1 5 . Farrar WE. Leptospira species (Leptospirosis). In: Mandell GL et a! (eds). Principle and practice of infectious diseases. Jrd Churchill Livingstone, New York, 1 991 ; 3 1 727 16. Salkade HP, Divate S, Deshpande JR, Kawishwar V, Chaturvedi R, Kandalkar BM, Vaideeswar P. A study of autopsy findings in 62 cases of leptospirosis in a metropolitan city in fndia. JPGM 2005; 5 1 : 1 69073 1 7. van Gorp EC, Suharti C,ten Cate
H
et al. Review : Infectious diseases and
coagulation disorder. Journal of Infectious Disease1999; 180: 1 8. Gancheva
G,Ilieva
P,
Atanasova
M,
et
al.
1 76-86.
Haemorhagic
syndrome
m
leptospirosis.Trakia Joumals of Science 2005:4 (3 ); 10-2. 1 9. Blann AD,Amiral J,McCollum CN. Prognostic value of increased soluble thrombomodulin and incerased soluble E selectin in ischemic heart disease. Eur J Haematol 1997;59(2): 1 1 5-20 20. Padilla A,Moake JL,Bernardo A,Ball C, et al. P se\ectin anchors newly released ultralarge von Willebrand factor multimers to the endothelial cell surface. Blood 21.
2004; I 03:2 1 50-6. Chauhan A K, Kisucka J, Brill A, Walsh MT. ADAMTS 1 3 :a new link between thrombosis and inflammation.JEM 2008;205 (9):2065-74.
22. Mast de Quirijn, Groot E, Asih PB, et al.ADAMTS 1 3 deficiency with elevated levels of ultra-large and active von Willebrand factor in P.falciparum and P.Vivax malaria. Am J Trop Med Hyg 2009;80 (3):492-8. 23. Bemando A, Ball C,Nolasco L.Effect of inflamatory cytokines on release and cleveage of endothelial eel-derived ultralarge von Willebrand factor multimers under flow. Blood 2004; 1 : l 00-6. 24. Ono T, Mimuro Jun, Madoiwa S, et al. Severe secondary of von Willbrand factor cleaving protease (ADAMTS 13 ) in patients with sepsis-induced disseminated intravascular coagulation: its correlation with development of renal failure. Blood 2006;107 (2):528-34. 27
25. Speelman P. Leptospirosis, Fauci AS, editor, Harrison's Principle of Internal Medicine. 16th edition. Volume I . Me Graw Hill Companies Inc, New York, 2005: 988-91. 26. Widarso HS,
Wilfried
penanggulangan
P.
Kebijaksanaan
Leptospirosis di
kesehatan
departemen
dalam
Indonesia. Kumpulan makalah Simposium
Leptospirosis, Badan Penerbit UNDIP Semarang 2002 ( l )
:1-15.
27. World Health Organization -Regional Otlicer for South-East Asia. Informal Expert Consultation on Surveillance, Diagnosis and Risk Reduction of Leptospirosis. 2009. 28. Cine! I, Opal S. Molecular Biology of lnflamation and Sepsis: A Primer. Crit Care Med 2009 37 ( 1 ):291-303. 29. Viriyakosol S, Matthias MA, Swancutt MA, Kirkland T, Vinetz JM. Toll-Like Receptor
4
Protects
against
lcterohaemorrhagiae Infection
and
Lethal
Leptospira
interrogans
Serovar
Contributes to In Vivo Control of Leptospiral
Burden. Infect Immun. 2006 February; 74 (2) : 887-89 30. Higgins R. Emerging or re-emerging bacterial zoonotic diseases : bartonellosis, leptosirosis, Lyme borreliosis, plague. Rev. sci. tech.Off.int. Epiz, 2004, 23 (2), 569-81 31.
' Gasem MH . Gambaran Klinik dan Diagnosis Leptospirosis pada Manusia. Kumpulan
Makalah
Simposium
Leptospirosis
Badan
Penerbit Universitas
Diponegoro, 2002:1 7-29 32. Ahmad S, Shah S, Ahmad FMH. Laboratory Diagnosis of Leptospirosis. J Postgrad Med. 2005;5 1 (3): 1 95-200 33.
Jorde LB, Carey JC, Bamshad MJ, White RL. Genetic variation : its origin and detection. Chapter 3 page 29 Medical Genetics, Jrd ed,. Mosby Publisher 2006
34. Estravoyer JM, Racadot E, Couetdie G, Leroy J. Grosperrin
L.
Tumor necrosis factor
in patients with Leptospirosis. Reviews of Infectious Disease 1 9 9 1 ; 1 3 : 1 245-6 35. Ahmeed A, Engelberts MF, Boer KR, Ahmed N , Haartskeerl
RA.
Development and
Validation of Real-Time PCR for Detection of Pathogenic Leptospira Species in Clinical Materials. PloS ONE. 2009;4 (9) 36.
Moake J. Thrombotic microangiopathies. New England Journal of Medi-cine 2002.; 347 (8): 589-600.
28
37.
Pareira MM, Da Silva JJ, Pinto MA, Da Silva et al. Experimental leptospirosis in marmoset monkeys (Callithrix Jacchus): a new model for studies of severe pulmonary leptospirosis. Am J Trop Hyg
38.
2005 ;72 ( 1 ): 1 3-20
Metcalf DJ, Nightangle TO, Zenner HL, Cutler OF et al. Formation and function of Weibei-Palade bodies. Journal of Cell Science 2008;
39.
.
De Brito T,Bohm GM,Yasuda PH. Vascular damage in acute experimental leptospirosis of the guinea pig. J Pathol
40.
1 2 1 ( 1 ): 19-27 .
Bockmeyer CL, Claus
RA,
1979 1979,128: 1 77-82.
Budde Ulrich, et a!. Inflamation -associated A DAMTS 1 3
deficiency promotes formation o f ultra-large von Willebrand factor. Haematologica 2008;93 ( 1 ) : 1 3 7-40. 41.
Hong-Liang Yang, Xu-Cheng Jiang, Xian-Yan Zhang, et al. T rombocytopenia in the experimental leptospirosis of guinea pig is not related to disseminated intravascular coagulation. BMC Infectious Disease 2006, 6 ( 1 9).
42.
Dole S Vandana, Bergmeler W, Mitchell HA, et al. Activated platelets induced Weibei_Palade - body
Blood 43.
secretion and leukocyte roliing in vivo: role of P-Selectin.
2005; I 06: 2334-9
Tajiki MH, Salomao R. Association of plasma levels of tumor necrosis factor
a
with
severity of disease and mortality among patients with leptospirosis. Clinical Infectious Diseases 44.
1 996;23: 1 1 7 7-8.
Bender M. High VWF, low ADAMTS 13 puts women at risk. Bender M. Blood 20 1 2 ; 1 1 9 : 1 329-30.
45.
Wageenar JF. Coagulation disorder in patients with severe leptopsirosis are associated
46.
with
severe bleeding and mortality.
Wageenar JF. Bleeding in
patients
activation of endothelial cells. 47.
J
Travel Med
with severe
20 I 0, 1 5(2): 1 52-9
leptospirosis
is not association with
(Unpublished).
Kis Djamiatun, Andre J. A. M. van der Yen, Philip G . de Groot,et al. Severe Dengue Is Associated with Consumption of von Willebrand Factor and Its cleaving Enzyme ADAMTS - 1 3 . PLoS Neg! Trop Dis 6(5):
29
el 628.
amRSSR Y 8I0
.\1 P. D ! C
.'.
L A .S S .-\ Y
__ __ __ __ __ __ __ __
EUSi\ kit User Manuaf
Human Von Willebrand Factor (vWF)ELISA Kit
IW'MU#.!L��-$'m"<>'mit���
Catalog No.: 23645
96 T
For Research Use Only Not for Use In Diagnostic Procedures
Address:Room 605,KaiCheng Buildingl ,QingYuanXiLi,QingHe,HaiDian District,BeiJing , China Tel:+86-10-59871930
59871931
Fax:+86-10- 5987193 2
Website:www.biotechist.com E-mai l:[email protected]
3mRSSRY
-' 0
.\i E D ! C
.\
L .\ S S \ Y
Intended USe:
The ELISA Kit is to be used for quantitative determination of Human
Von Wiflebrand Factor (vWF) in serum, Plasma and other biological fluids. Kit is intended for research use only not for diagnostics.
1 . Principles of Method
The Human vWF ELISA Kit is an Vitro enzyme-linked imm unosorbent assay for the quantitative
measurement
of
Human
vWF
in
serum,
plasma.
tissue.cell
culture
supernatants and urine. The Human vWF polyclonal antibodies are precoated onto 96-well plate. Standard and samples are pipetted into the wells and Human vWF present in a sample is bound to the wells by the i mmobilized antibody. The biotinylated detection antibodies are added to the wells and then followed by washing with PBS or TBS buffer. After washing away unbound biotinylated antibody, Avidin-Biotin -Peroxidase Complex is pipetted to the wells. The wells are washed again,
a TMB substrate solution is added to
the wells and the color changes after adding acidic stop solution. The indensity is oroportional to the amount of Human vWF bound and measured at 450nm±10nm.
2.
Reagents and Materials Provided Quantity
Composition
Quantity
1
Sample Diluent Buffer
2 X 15ml
Standards
2
ABC Diluent Buffer
1 X 12ml
Detection Antibody
1 X 135ul
Antibody Diluent Buffer
1 X 12ml
Avidin-Biotin-Peroxidase
1 X 140 ul
TMB stop solution
1 X 10ml
TMB color developing reagent A
1 X 10ml
ELISA Special TBS Diluent
1 X 20ml
TMB color developing reagent B
1 X 1 . 5 ml
Instruction manual
1
Composition
Pre-coated Microliter plate,
96 wells
Complex(ABC) 1:100
()te: Standard : Frozen dried, TMB color developing reagent A : Avoid light
3. Materials Required But Not Provided Microliter plate reader in standard size.
�
Polypropylene tubes for diluting and aliquoting standard. Distilled or deionized water. Calibrated, adjustable precision pipettes. preferably with disposable plastic tips .
. Performance Characteristic ormal Range: :ansitivity:
<
0. 78ng/ml - 50 ng/ml 0.08 ng/ml
Soecificity: The ELISA Kit shows no cross reactivity with any of the cytokines.
Address Room 605,KaiCheng Building1.0ingYuanXili.QingHe,Hai0ian District, BeiJing , China Fax:+86-10-59871932 Website:www.biotechist.com Tei:+86-10-598719J0/59871931
3mRSSRY Bi
()
.\I ��!) ! C .\ l. .\ S :i .\ Y
5. Storage and stabil ity All the components in the kit can be stored up to 1 year at -20°( and 4 weeks at 2-8°(.
Please avoid repeated freeze-thaw cycles and do not mix reagents from different kits unless they have the same lot numbers.
6. Reagents Preparation
CD
Plate washing
Discard the solution in the plate without touching the side walls. Blot the plate onto paper towels or other absorbent material. Soak each well with at least 0.35 ml PBS or TBS buffer for 1-2 minutes ,then discard the rinse solution. Repeat this process t for several times.
� Sample Preparation and Storage
Store samples to be assayed within 24 hours at 2-8°C. For long-term storage, aliquot and freeze samples at -20°C. Avoid repeated freeze-thaw cycles. Cell
culture
supernate,
tissue
lysate or body
fluids:
Remove particulates by
centrifugation, analyze immediately or aliquot and store at -20°C Serum: Allow the serum to clot in a serum separator tube (about 2 hours or 4°C) at room temperature. Centrifuge at approximately 1 000 X g for 1 0 min. Analyze the serum immediately or aliquot and store frozen at -20°C. Plasma: Collect plasma using heparin, EDTA, citrate as an anticoagulant. Centrifuge for
1 5 min at 1 000 x g within 30 min of collection. Analyze immediately or aliquot and store frozen at -20°C . Sample Dilution Guideline
User needs to estimate the concentration of the target protein in the sample and select proper dilution factor so that the diluted target protein concentration falls near the middle of the linear regime in the standard curve.
nore than 2 dissolve the
1000
,pg/mL
500
pg/ml
250
pg/ml
125
pg/ml
62.5
pg/ml
31.2
pglml
1S.6
pglml
Address: Room 605, KaiCheng Building1,QingYuanXili,QingHe,HaiOian District, BeiJing . China Tel:+86-10-59871930/59871931
Fax:+86-10-59871932
Website:'MW<. biotechist.com
3fflRSSRY .\i
S ; (;
E D I C .\ L .\ S S \ \"
25
50
ng/ml
ng/ml
12.5
ng/ml
6.25
ng/ml
3.125
ng.ml
1.56
ng/ml
0.78
ng/ml
B. Preparation of biotinylated anti-Human vWF antibody working solution: The solution should be prepared no more than 2 hours prior to the experiment. a.
The total volume should be: 0 . 1 ml/well x (the number of wells). (Allowing 0 . 1 -0.2 ml
more than total volume)
b Biotinylated anti-Human vWF antibody should be diluted in 1 :99 with the antibody
diluent buffer and mixed thoroughly.
C. Preparation of Avidin-Biotin-Peroxidase Complex (ABC) working solution: The solution should be prepared no more than 1 hour prior to the experiment. a.
The total volume should be: 0.1 mllwell x (the number of wells). (Allowing 0 . 1 -0.2 ml
MOre than total volume)
:�. Avidin-Biotin-Peroxidase Complex (ABC) should be diluted in 1 :99 with the ABC
c=lution buffer and mixed thoroughly.
:> Preparation of TMB working solution: transfer 9 volumes of TMB color developing
""eagent A in one volume of TMB color developing reagent 8 for 30 minutes in 37°( before ...sing to make TMB substrate, mixing thoroughly.
i. Assay Procedure �e
user should decide sample dilution fold by crude estimation of Human vWF
�ount in samples. Aliquot 0 . 1 ml per well of the grades Human vWF standard solutions into the precoated
96-well plate. Add 0. 1 ml of the sample diluent buffer into the control well .
Add 0.1 ml of each properly diluted sample of sera, plasma, body fluids, tissue lysates or cell culture supernatants to each empty well. Seal the plate with the cover and incubate at 3rC for 90 min. Remove the cover, discard plate content, and blot the plate onto paper towels or other absorbent material. Do NOT let the wells completely dry at any time, washing twice.
Add 0.1 m l of biotinylated anti-Human vWF antibody working solution into each well Address: Room 605,KaiCheng Building1,QingYuanXili,QingHe,HaiDian District, BeiJing , China Tel:+86-10-59871930/59871931
Fax. +86-10-59871932
Website:www.biotechist.com
3fflRSSR'I and incubate the plate at 3rC for 60 min.
®
Wash the plate three times with 0.01 M TBS or 0.01 M PBS, and each time let washing buffer stay in the wells for 1 min.
®
Add 0 . 1 ml of prepared ABC working solution into each well and incubate the plate at
(i)
Wash plate 5 times with 0.01 M TBS or 0.01 M PBS, and each time let washing buffer
®
3rC for 30 min.
stay in the wells for 1-2 min.
Add 0.09 ml of prepared TMB color developing agent into each well and incubate
plate at 3rC away from light, observe the color at all times, when shades of blue can be seen in the wells with the three-four most concentrated Human vWF standard solutions; the other wells show no obvious color, Add 0.1 ml of prepared TMB stop
solution into each well. The color changes into yellow immediately.
®
Read the 0.0. absorbance at 450nm in a microplate reader within 30 min after adding the stop solution.
@
The standard curve can be plotted as the relative 0.0.450 of each standard solution (Y) vs. the respective concentration of the standard solution (X). The Human vWF concentration of the samples can be interpolated from the standard curve.
Summary
Prepare reagents, samples and standards
�
Add prepared samples or standards and incubate the plate at 3rC for 90min, wash
plate twice with TBS
-l.
Add biotinylated antibodies and incubate the plate at 37"C for 60min, wash plate 3 times with TBS or PBS
!
Add ABC working so
on and incubate the plate at 3TC for 30 min, wash plate five
times with TBS or PBS Add TMB color dev
e!
ng agent and incubate at 37'C
-�
Add TMB stop solut1on
�
. " h "m 30 mm Read the 0.0. absorbance at 450nm w1t
�
Calculate the Human vWF concentration in the samples by plotting gragh between _oocentration and corresponding absorbances of Standard
Address:Room 605,KaiCheng Building1 . 0ingYuanXili,OmgHe,HaiDian District, BeiJing . China Fax +86-10-59871932 Website:www.biotechist.com Tei: +B6-10-59871930159871931
Tools for Cell Biology Research™
R�>
5� Y�t::"rJ�: �.-:� ... USA & Canada R&D Systems, Inc.
614 McKinley Place Nt
Minneapolis, MN 5.\41 J, USI<
TEl: !800) J4J-i47S (6121 379-2956 FAX: 1612) 656-4400
�
R&D Systems
- jl
�.
Quanti kine® ELISA
EMAIL: info(,;RnOSystems.com www.RnDSystems.com
Eu rope
R&D Systems Europe Lid. 19 Barton Lane, AbingdonScience Park Abingdon OX14 JNB, UK
TH: +44 (0)1 235 529449
FAX: +44 (0) 1235 533420 EMAIL: [email protected] www. RnDSystems.com
Human ADAMTS1 3
Cl1ill3 R&D Symms China Co.. ltd.
l4A 1
Hu• Min F.mpire Plm
726 West Yan An Road
Shanghai rRC 200050
Ttl: +86 (Zl) 5138037J fAX: +8Q 121 ) S2J71001 EMAIL: [email protected] www.RnDSystemsChina.com.cn
www.RnDSystems.com
Quanti kine® ELISA Human ADAMTS13 1mmunoassay
Catalog Number DADT130
For the quantitative determination of human A Disintegrin And Metalloproteinase with Thombospondin type 1 motif, 13 (ADAMTS 13) concentrations in cell culture supernates, serum, and plasma.
,I
This package insert must be read in its entirety before using this product. For research use only. Not for use in diagnostic procedures.
llfiiUIItlll l lllfl
A!JAM II:! I� (A Olllntoglln Ail� MotalloproliJinnse wltfl rt"ombospenuln tYJ'.lO 1 motif, , 3), olso known as von Willebrand factor (vWF)-cleaving protease, belongs to the ADAMTS superfamily
TABLE OF CONTENTS
PAGE
SECTION INTRODUCTION
of secreted multidomain zinc metalloproteases. Full-length human ADAMTS 1 3 contains 1 427 amino acid residues that are organized into the following domains: signal peptide, pro peptide, catalytic, disintegrin-like, thrombospondin type 1 (TS Pl ), cysteine rich, spacer, seven TSP1 repeats, and two CUB domains. The propeptide contains a furin cleavage consensus motif and
is most likely removed in the Golgi or at the cell surface, releasing the 1 9 0 kDa active enzyme (1-4). ADAMTS 1 3 is mainly produced by the liver and circulates i n the blood (5). vWF, the only known substrate for ADAM TS 13, is a large rnultimeric glycoprotein that is
required for platelet adhesion and thrombus formation ( 1 , 2, 6). The hemostatic potential of
vWF increases with its length. ADAMTS 1 3 cleaves the ultra-large multimeric vWF (UlvWF)
P RECA UTIO N
SAMPLE COLLECTION & STORAGE ............................. .... SAMPLE PREPARATION..............................
.................... ....
. .
REAGENT PREPARATION ....
ASSAY PROCEDURE
......... .....................4
...........................4
......... . . . . .
........... 5
within the A2 domain between Tyr1 605 and Met1 606, generating smaller, less adhesive multlmers (1, 7). Shear stress is required to induce a conformational change in the UlvWF fibers
to expose the cleavage site (8). I n addition to its role in platelet adhesion, ULvWF has been
shown to promote leukocyte adhesion and extravasation duri ng inflammation (9). By cleaving ULvWF, ADAMTS1 3 down-regulates not only thrombosis but also inflammation. As a result,
decreased ADAMTS1 3 activity accelerates inflammatory diseases and is associated with acute and chronic innammation (9, 1 0). ADAMTS 13 deficiency as a result of hereditary gene mutations or inhibitory autoantibodies to A DA MTS 13 is a cause of thrombotic thrombocytopenic purpura
(TTP),
which is a rare condition
of the blood-coagulation system. TTP is characterized by extensive formation of microthrombi
in the microvasculature and may be accompanied by neurological dysfunction and renal failure ( 1 1 · 1 5). Additional pathologies associated with decreased circulating ADAMTS1 3 include liver
10 10
cirrhosis, sepsis, alcoholic hepatitis, and acute pancreatitis (1 6-1 9). Low plasma ADAMTS 1 3 is a useful predictor of cardiac and cerebrovascular events in coronary artery diseases (20, 21). After acute myocardiill infarction, early decrease of ADAMTS 1 3 levels is a predictor offuture thrombotic events (22). In atrial fibrillation (AF). ADAMTS 1 3 level in patients after treatment with cardioconversion is useful for prediction of recurrence of AF (23). The Quantikine Human ADAMTS1 3 Immunoassay is a 4.5 hour solid-phase ELISA designed to
MANUFACTURED AND DISTRIBUTED BY:
USA & Canada I R&D Systems, Inc. 614 McKinley Place NE, Minneapolis, MN 5541 3, USA TEL: (800) 343-7475 (612) 379-2956 FAX: (612) 656·4400 E-MAIL: [email protected]
CHO cell-expressed recombinant human ADAMTS13 and has bee'n shown to accurately quantitate the recombinant factor. Results obtained using natural human ADAMTS1 3 showed linear curves that were parallel to the standard curves obtained using the Quantikine kit standards. These results indicate that this kit can be used to determine relative mass values for naturally occurring human ADAMTS1 3.
DISTRIBUTED BY:
UK & Emope I R&O Systems Europe, lid,
19 Barton Lane, Abingdon Science Park, Abingdon OX14 3NB, UK
TEL: +44 (0)1 235 529449
measure human ADAMTS 1 3 in cell culture supernates, serum, and plasma. It contains
FAX: +-44 (0)1 235 533420
\
'
E·MAIL: [email protected]
China I R&D Systems China Co., Ltd. 24A 1 Hua Min Empire Plaza, 726 West Yan An Road. Shanghai ?RC 200050
TEL: +86(21) 52380373
FAX: +-86{21)52371001
E-MAIL: [email protected]
for research use only. Not for use in diagnostic procedures.
MllltiiiAI \ I'IIIIVIJIIII Ill 'HUIII\lfHONIJIIION
Store the unopened kit at 2-s• C. Do not use past kit expiration date.
PRINCIPLE OF THE ASSAY This assay employs the quantitative sandwich enzyme immunoassay technique. A monoclonal antibody specific for ADAMTS1 3 has been pre-coated onto a microplate. Standards and samples are pipetted into the wells and any ADAMTS1 3 present is bound by the immobilized antibody. After washing away any unbound substances, an enzyme-linked polyclonal antibody specific for ADAMTS1 3 is added to the wells. Following a wash to remove any unbound antibody-enzyme reagent, a substrate solution Is added to the wells and color develops in proportion to the amount of ADAMTS1 3 bound in the initial step. The color development is stopped and the intensity of the color is measured.
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE · FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.
· The kit should not be used beyond the expiration date on the kit label.
· Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources. If samples generate values higher than the highest standard, further dilute the samples with
•
Calibrator Diluent and repeat the assay.
· Any variation in standard diluent, operator, pi petting technique. washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in binding.
•
This assay is designed to eliminate interference by enzymes, proteinS, and other factors present in biological samples. Until these factors have been tested 1n the Quantikine
••
�iitr, .,
;
,
,
.·
D E SCRIPTUiN
ST�]!�GE O.f,OPENED/
(12 stri ps of8 wells) coated with a mouse
the desiccant pack. Reseal along entireedge of zip·
0
ADAMTS13
' - PA RTf
894000
Microplate
.
96 wel l polystyrene microplate
monoclonal antibody against AOAMT51 3. Conjugate
894001
ADAMTSB
894002
Assay Diluent
895881
AOAMTS13
Standard
RD5·26 Concentrate
Wash Buffer
Concentrate Color Reagent A (oiQr Reagent 8 Stop Solution Plate Sea lers
Return unused wells to the foil pouch containing
seal. May be stored for up to 1 month at 2·8· C.'
ADAMTS1 3 conjugated to horseradish
R01·89
Calibrator Diluent
21 ml ofpolyclonal antibody against
RECQHSTITUTEO MATERIAl
peroxidase with preservatives.
100 ng of recombinant human ADAMTS 13
in a buffer with preservatives; lyoph1lized. 11 ml of a buffered protein base with
preservatim.
895525
895003 895000
21 ml of a concentrated buffered protein base with presmatives.
May b€ stored for up to 1 month at H' C. •
21 ml of a 2S·fold concentrated solution of buffered surfactant with pteservatives.
125 ml of stabilized hydrogen perox1de.
895001
12.5 ml of stabilized chromogen
895031
6 ml of l N sulfuric acid.
(tetramethylbenzidine).
N/A
sive stnps.
4 adhe
d1d thiS is within the e�prration date of the kit.
Immunoassay, the possibility of interference cannot be excluded.
TECHNICAL HINTS s, always avoid foaming. · When mixing or reconstituting protein solution between additions of each standard level, ·To avoid cross-contamination, change pipette tips s. Also, use separate reservoirs for addition between sample additions, and between reagent
•
each reagent. sealers during incubation steps is To ensure accurate results, proper adhesion of plate necessary.
second soak period following the ·When using an automated plate washer. adding a 30 degrees between wash steps may addition of Wash Buffer, and/or. rotating the plate 180
improve assay precision. to the plate. Keep Substrate Solution · Substrate Solution should remain colorless until added from colorless to gradations of blue. change should Solution protected from light. Substrate
same order as the Substrate Solution. The · Stop Solution should be added to the plate in the yellow upon addition of the Stop Solution. to blue from turn will wells the color developed in Solution has not mixed thoroughly with Wells that are green in color indicate that the Stop the Substrate Solution.
For research use only. Not for use in diagnostic procedures.
dum. For research use only. Not for use in diagnostic proce
OTHER SUPPLIES REQUIRED
REAGENT PREPARATION
Bring all reagents to room temperature before use.
· Microplate reader capable of measuring absorbance at 450 nm, with the correction wavelength set at 540 nm or 570 nm.
• Wash Buffer - If crystals have formed in the concentrate, warm to room temperature and mix
· Pipettes and pipette tips. · Deionized or distilled water. · Squirt bottle, manifold dispenser, or automated microplate wa she r. ·
•
500 ml graduated cylinder.
Horizontal orbital microplate shaker (0.1 2" orbit) capable of maintaining a speed of
500 ± 5 0 rpm.
· Test tubes for dilution of standards and samples. · Human ADAMTS1 3 Controls (optional; available from R&D Systems).
;
.
gently until the crystals have completely dissolved. Dilute 20 mL ofWash Buffer Concentrate into deionized or distilled water to prepare 500 ml of Wash Buffer.
Substrate Solution · Color Reagents A and B should be mixed togethe r in equal volumes within 1 5 minutes of use. Protect from light. 200 �-tL of the resultant mixture Is required per well. Calibrator Diluent RDS-26 (1 X ) · Dilute 1 0 ml of Calibrator Diluent RDS-26 Concentrate into
30 ml of deionized or distilled water to prepare 40 mL of Cal ibrator Diluent RDS·26 (1 X). ADAMTS1 3 Standard - Reconstitute the ADAMTS1 3 Standard with 1.0 mL deionized or
distilled water. This reconstitution produces a stock solution of 100 ng/mL. Mix the standard to ensure complete reconstitution and allow the standard to sit for a minimum of 5 minutes. Mix
PRECAUTION The Stop Solution provided with this kit is an acid solution. Wear protective gloves, clothing, eye, and face protection. Wash hands thoroughly after handling.
SAMPLE COLLECTION & STORAGE
Cell Culture Supernates · Remove particulates by centrifugation and assay immediately or
well prior to making d ilutions.
Pipette 500 J.ll of Calibrator Diluent RDS-26 (lX) into each tube. Use the stock solution to
produce a dilution series (below). Mix each tube thoroughly before the next transfer. The ..
50 ng/mL standard serves as the h igh standard. Calibrator Dtluent RDS-26 (1 X) serves as the
zero standard (0 ng/mL).
aliquot and store samples at s -20•C. Avo id repeated freeze-thaw cycles.
Serum · Use a serum separator tube (SST) and allow samples to clot for 30 minutes before
centrifugation for 1 5 minutes at 1 000 x g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at s -20• C. A void repeated freeze-thaw cycles. Plasma · Collect plasma using heparin, EDTA, or citrate as an anticoagulant. Centrifuge for
1 5 minutes at 1000 x g within 30 minutes of collection. Assay imm ediately or aliquot and store
samples at s -20• C. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
SAMPLE PREPARATION Serum and plasma samples require a 100-fold dilution. A suggested 1 00-fold dilution is 1 0 ).!L of sample + 990 1-1L of Calibrator Diluent RD5-26 (1 X).
4
For research use
only. Not to'(use in di gnosti procedures. a
c
(oo:!
500 !JL
�
500 !JL
500 Ill
soo Ill
5001Jl
� � � �
500 !Jl
�
�� A� N
.: ••
100 ng/ml
5 0ng/ml
, 25 ng/ml
125 og/ml
6.25 og/ml
3.13 og/ml
1.56 ng/ml
For research use only. Not for use in dlagno stic procedures.
0.781 ng/ml
HIIIIU
lll lltu t..tl 1••v..mt oml Uhtpl••' 'u ruu111 tlllnp•rilturo uofo r u Ulu. lt Is reco mmonded thl\l all samples, controls, and standards be a$f111yed In duplicate.
CALCULATION OF RESULTS
Average the duplicate readings for each stand average zero standard optical density (0.0.).
1 . Prepare all reagents, working standards, and samples as directed In the previous sections.
2. Remove excess microplate strips from the plate frame, return them to the foil pouch containing the desiccant pack, and reseal.
1.
3. Add 100 !J.L of Assay Diluent RD1-89 to each well. 4. Add 50 !J.l of Standard, control, or sample• per well. Cover with the adhesive strip provided. Incubate for 2 hours at room temperature on a horizontal orbital microplate shaker (0.12" orbit) set at 500 ±50 rpm.
5. Aspirate each well and wash, repeating the process three times for a total of four washes. Wash by filling each well with Wash Buffer (400 J..�L) using a squirt bottle, manifold dispenser, or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Buffer by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels. 6. Add 200 f!L of ADAMTS 13
Conj ugate to each
well. Cover with a new adhesive strip.
Incubate for 2 hours at room temperature on the shaker.
are capable of generating a the data using computer softw Create a star.dard curve by reducing standard curve by plotting a -fit. As an alternative, construct four parameter logistic (4-Pl) curve entration on the x-axls conc the st again s ndard on the y-axl the mea n absorbance for each sta may be linearized by the points on the graph. The data and draw a best fit curve through 0.0. and the best fit line the of log 1 3 concentrations versus the plotting the log of the ADAMTS adequate but less an uce prod will e edur proc analysis. This can be determined by regression precise fit of the data. the standard curve must be the concentration read from If samples have been diluted, multiplied by the dilution factor.
for demonstration on ly. A This stan dard curve is provided ed. assay fo each set of samples
TYPICAL DATA
at room temperature. 9. Add SO !J.l of Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color In the wells is green or the color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.
10. Determine the optical density of each well within 30 minutes, using a
microplate reader
set to 450 nm. If wavelength correction is available, set to 540 nm or 570 nm. l f wavelength correction is not available, subtract readings at 540 nm or 570 nm from the readings at
450 nm. This subtraction will correct for optical imperfections in the plate. Readings made di rectly at 450 nm without correction may be higher and less accurate.
rated standard curve should be gene
r
7. Repeat the aspiration/wash as in step 5, 8. Add 200 fll of Substrate Solution to each well. Protect from light. Incubate for 30 minutes
subtract the ard, control, and sample and
tnglmll 0
10 -r--
'Ll
•
0.01
0.1
/ 1
human AOAMTS13
10
Con<entrotlon (ng/ml)
3.1 3
0.055
o.oss
0.086
0.072
0.161
0.147
0.306
0.292
1.221
1.207
QW
0.302 Ol10 0.603 n � Q 1.212
6.25
12.5 25
so
0.054
�w 0.1 59
1.56
100
Av�rag� 0.014
om
0.761
.
1,ll0 2.l96
2.410
*Serum/plasma samples require dilution. See Sample Preparation section.
for research use only. Not for use in diagnostic procedures. For research use only. Not for
use in
Corrected
Q,Q. 0.01 3 Q.0}4
diagnostic' procedures.
0.608 2.403
0.041
0.594
2.389
>�••111)1 l'�tu htutt (J'I•••IIII.III \,•ttlllll rtii iii•IIY ) I hrcc $l'ltn ples of known conccntrotlon were tested
l1111"
twenty times on one plate to assess Intra·
assay precision.
Inter-assay Precision (Precision betwe en assays) Three samples of known concentration were tested assay p recision.
- ---l< � � �•.;�;;;._<-�1- · Sample
n
Mean (ng!mL)
I I
·' · �::.; lntra·ASjl s f.f�CisJoi) 2 I I 20 I 20
- --·
Standard deviation
CV(%)
:- ;J, W
_, , . ·
I
· ·
.
W
13.8
29.7
0.177
0.364
0.685
0.256
2.3
5.7
2.6
4.51
-
W
14.2
I
o.m 5. I
with values within the dynamic range of the assay. ..
� -Assar � e
I
LINEARITY To assess the linearity of the assay, samples containing and/or spiked with high concentrations of ADAMTS 1 3 were serially diluted with Calibrator D iluent RDS-26 (1 X) to produce samples
in twenty separate assays to assess inter·
4.78 3.7
.I
W
30.2 1.08
36
RECOVERY The recovery of ADAMTS1 3 spiked to levels throughout the range of the assay in various matrices was evaluated.
«�""- . . . �':i: ¥� jf.& P,,� � �. ';f\";:_='" W.tf@fi � � ·
•
..
Cell culture media (n=8}
� - �
..
·. . •.
•
.
.
.
.
-.:
.��vera·ge '*' Recovery -
Serum• (n=4)
Heparin plasma• (n=4) .,._- .l
·.
97
Aplasma• (n=4) T EO
_ Citrate plasma* (n=4)
·- .
100
Sample Preparation.
.Ra�ge_ .
91-111% 85·106%
97
89-109%
97
85·115%
97
87-114%
SENSITIVITY Twenty assays were evaluated and the minimum detectable dose (MOD) ranged from 0.010-0.260 ng/ml. The mean MOO was 0.104 ng/ml. The M O D was determined by adding two standard deviations to the mean optical density
value of twenty zero standard replicates and calculating the corresponding concentration.
CALIBRATION This immunoassay in calibrated against a highly purified CHO cell-expressed recombinant human ADAMTS\3 (amino acids Gln34-Thr1427; Accession II Q76LX8}.
SAMPLE VALU ES Serum/Plasma - Sam ples from apparently healthy volunteers were evaluated for the presence
of ADAMTS13 in this assay. No medical histories were available for the donors used in this study.
;::sV�'PI:�)y)le): Serum (n,3Sl
for research use only. Not for use in diagnostic procedures.
.,J '->:M,ea6.'(n�t1iJL) ;; ; , 985
.
·.
·1.'· ... )' ' i'''"l<•-- "' ' ·�- --·· �.,,..';l. .,. , , "1 a' �h ; �; ,: §t � a.•;. D.�Yl�!!q� ln!il.llJ�:. ,.'1:: \;,, � �(!ii!.�,/19!roJ 515·1644
EOTA plasma (n::35)
758
401-1271
915
472·1729
Citrate plasma (n::35)
797
370-1403
Heparin plasma (n==35)
8
·
I
107
166
216 179
Cell Culture Supernates • Aliquots of cell culture supernates from 16 various cell lines were assayed for levels of natural ADAMTS1 3. All samp les measured below the lowest standard, 0.781.ng/ml.
�nr r o�ra!llrl'h rt cA nn lv
�nt fnr II (P in rliannn
tJ• U!l l l Y
1 Ilia IIUI!y rtcounlnl rttornblnllnl nnd nnlutul hurntln ADAMI!II J. 1ho ltlctorJ llsrtld below
were prepared at 500 ng/ml In Calibrator Diluent RD5-26
(l X) a nd assayed for cross-reactivity.
Preparations of the following factors at 500 ng/ml in a mid-range recombinant human
ADAMT$13 control were assayed for interference. No significant cross-reactivity or interference was observed.
Recombinant human:
ADAMT$1
ADAMTS12
ADAMTS4
ADAMTS15
ADAMT$5
TIMP-3
ADAMT$1 0
Natural proteins:
human von Wlllebrand Factor (vWF)
vWF-A2
This immunoassay also recognizes a tru ncated version of recombinant human ADAMTS13 (amino acids Gln34-Trp688; Accession # NP_620594).
REFERENCES
1. Furlan, M. eta/. (1 996) Blood 87:4223.
2. Fujikawa, K. eta/. (2001) Blood 98:1662. 3. Gerritsen, H.E. era/. (2001) Blood 98:1 654.
4. Zheng, X. era/. (2001 ) J. Bioi. Chern. 276:41 059. 5. Soejlma, K. et a/. (2001 ) J. Blochem. 1 30:475.
6. Sadler, J.E, er a/. (1 998) Annu, Rev. Biochem. 67:395. 7. Tsai, H.M. et a/. (1 996) Blood 87:4235. 8. Tsal, H.M. er a/. {1 994) Blood 83:21 71 . 9. Chauhan, A.K. et a/. (2008) J. Exp. Med. 205:2065. 10. Claus, R.A. eta/. {201 0) Curr. Mol. Med. 10:236.
1 1 . Upshaw, J.D., Jr. (1 978) N. Engl. J. Med. 298:1 350.
12. Moake, J.L. er a/, (1 982) N. Engl. J. Med. 307:1432. 13. Furlan, M. eta/. (1998) N. Engl. J, Med. 339:1578.
14. Levy, G.G. eta/. (2001 ) Nature 41 3:488.
15.Tsal, H.M. et a/. (1 998) N. Engl. J. Med. 339:1 585. 16. Uemura, M. era/, (201 0) Int. J. Hematol. 91 :20.
_
17. Beckmeyer, C.L. era/. (201 1 )Thromb. Haemost. 105:145. 18. Uemura, M. eta/. (2008) Curr. Drug Abuse Rev. 1:188.
19. Morioka, C. et a/. (2008) Scand. J. Gastroenterol. 43:1 387.
20. Chion, C.K.N.K. et a/. (2007) Blood 1 09:1 998.
21, Miura, M. eta/. (2010) Thromb. Haemost. 103:623.
22. Matsukawa, M, eta/. (2007) Am. J. Cardiol. 100:758.
23. Freynhofer, M.K. et a/. (201 1) Thromb. Haemost. 1 05:435. 0201 1 R&O Systtms.lnc. 06.1 1
10
7529710
For research use only. Not for use in diagnostic procedures.
6/11
abeam® d;scover more
d;scover more
UK, EU and ROW
Email: [email protected] Tel: +44 (0)1223 696000 www.abcam.com
US, Canada and latin America
Email: [email protected] Tel: 888-77-ABCAM (22226) www .abcam.com
ab1 00631 CD62P. Human ELISA Kit
China and Asia Pacific Email: [email protected] Tel: 108008523689 ('P�I!Wii!J) www.abcam.cn
Japan
Email: [email protected] Tel: ...81 -(0)3-6231-0940 www.abcam.co.jp
Instructions for Use For the quantilative measurement of Human
CD62P
concentrations in serum, plasma, cell
culture supernatants and urine This product is lor research use only and is ·not
Cooy"Q"> 02'012 .A�m- Aft R;qttl� Resei'Y'ed
� Abeam 1oqo !S. a reg.�te-e-d tr.}C)('"'h.a.r•
inlended lor diagnostic use.
.u ...tormahO't 1 O.tltil k conoc1 at \lrrle 01 qotng 10 pnnt
\
10.
Troubleshooting ea..-
Problem
POOf standan:l
loaccuca�e
...._ ..,. s>atlda
CU<\10
low signal
Latge
cv
�
Too brief JOCubalioo limes
Low sensitivity
o1 •em C and cissolve1he
powder lho
�......_
Ensu<e sullicieoc incubiolion orne: assay
ptocedure �ep 2 cf\ange lo .,...... night
lnaccu
Cl>ed< p;p.ues
pipening
Ptale is insulficiendy washed
High bad
Ensuoe bde4ly spin-.e llial
lnadequaJ.e reagenr
¥Oiumes "' WI\O
.
Solution
CMckp;peu...
Conlarnioaled wash buller
imp
Slop solution
CMck p;peues and
oapr epwalion on:ue coo
Re'"-1he manuaiiO<
ptOp<W ""'sh. 11 usedc lhal al ports ate unobstructed.
t.lalle lmsh wash bulle<
Slcxe your stanclar
Slop sclution - ba added 1o each -belcxe
measure For lu.-o-
tedlnJc.l questlofls please do
"contKt u•" on
your region).
no� hesitate to
([email protected] 0< phone laelect www.abcam.com '"' the phone number lor
contact us by emaU
14
'
\
I
9. Specificity
Table of Contents
Ctoss Rcactivily Th•s ELISA 1<.11 shcw.-s no s�ruhanl c
cross·reachv•1iy
woth any ot the tolklwong Cyto�ones tested· human Angoogenrn. BDNF. BLC. CNTI'. EGF
ENA-78. EOT FGF-4. FGF-5 rGr-7. Il-Ia
fl-11}. ll-4. ll 5. fl 11. IL-12 p70 ll-12 p40 fl-13. ll-309. IP-10.
M·CSF IFN-y. MCP-t MIP-10
MCP-2. MCP-3. MDC. MIP-1o. MIP-1 J3
PARC. POGf RANTFS SCF. TARC. TIMF 1
TIMP-2
TPO. VEGF
I.
Introduction
3
2
Assay Summary
4
3
Kot Contents
5
4.
St01age and liandlrng
6
5
Additional Materials Requrfed
6
6
Preparation of Reagents
7
7.
Assay Method
9
6.
Data Analysis
11
9.
Specificity
13
tO.
"':"roubfeshoo1ir.g
14
2
13
\
1 . Introduction
C.
abt00631 Human CD62P ELISA (Enzyme·Lonl<ed lmmu11oso•bent
C062P
Recovery
Recove1y was detcrmoned by spol
AssayJ kil •s an in vitro enzyme-linked
tmmunosorbcnl .assay for tne
quanlitatovc measurement ol Human C062P ,, seoum. plasma.
cell
into Humao1 serum. plasma and ceU
recove1 1es dle:t as follow-s
cultUJC media. Mean
culture supernalanls and urine.
Sample T ypo
Average% Recovery
Range (%)
Tn.s assay employs an ant•bod y spccil1c lor Human C062P coaled
StHUO'l
74.98
6!>-86
and C062P present it1 a sample s i bound 10
Plasm&
66.29
60·78
Cell cuhu•e n>edla
72.51
63·85
on a S6·well plate Standaros and samples are p.pencd omo the well>
•mmob•lized antibody. Tne
the weUs by the
wells are washed and btOtinylated a nt• ·
Human CD62P anhbody 1s added. Alter washing away ombound boohnylalf:d
Mlibody. HI=IP·contugaled strep
wells. The wells are agaon washed. a TMB substrate solutJOr> •s added 10 the wells and color develops in propon
of
CD62P bound. The Stop SolutiOn changes lhe color !rom blue to
D.
Linearity
Sample
Type
Se1un1
Plasma
Cell Culture Media
yellow. and tile intenslly ul lhe colo< is measured al 450 nm.
l
2
t •
Av�
102
108
104
Rangel%)
91·113
94·115
92·116
Average % ol Expected Ranye(%1
E.
lOS
94-1t0
1 10
106
95·119
92 1 1 7
Reproducibility
lnt•a·Assay CV
t2
\
2. Assay Summary
8. Data Analysis Calculate the mean absorbance 101 controls and samples
and
each set of duplicate
subtract the average
standards.
optical density. Plot the standard curv� on log-log graph
lJSing $1gma plo1 sottwere.
Draw the
best-tit straight line through
Add l001JI standard O< sampt� to each well. Incubate 2.5 hours at room tempefature or over mghl a1 4 �
the standard po;,t<_ A.
Typical Data
These sland�rd curveg ar� lor demonstration only. A standard mus1 be run with each assay.
samples an<1 standards as 1nstructed.
paper or
wi1h s1andard conccnltation on lhe �·axis
and absorbance on the v·axrs.
Prepare all ,.agents.
zero standard
Add
curve
100�1 pre,pared biotm antib<Xly to each well. room
temperrltur�.
Incubate I
hour al
Adri tOOtJI p<epared Slreplavodrn solufron. Incubate 45 m.outes
at
room temperature.
Add 1 001Jl TMS Onc·Step
.. · 1··:"1 ..,,., .• �.. ,,.,..,. •rf ""''
B.
20
C062P rs typrcany less than
Dl)i
Add 501JI Stop
lncuba�e
room temperature
D
Sensitivity
The minimum detectable dose of
Substrate Reagent to eact1 w"ll.
30 minutc!i a1
"'••"""�"
Solvtion to each well.
11
\
Read at 450 nm i mmediately.
3. Kit Contents
5.
CD62P Microplate (llern A). 96 welts ( I 2 s!lips x a wells) co-ated
wtth anti-Human CD62P. Wash BuMer
Concentrate
(20•)
(hem
Bt:
25 ml ot 20•
Assay Diluent A (llem 0)sod1um
azide
as
recombinant Hum3n C062P.
30
ml ot ammaJ serum wnn
presetva!lve.
(serum/plasma) diluent.
Assay Diluent 8 {Item E): t5 ml ol
For
5• conce ntrat$<1 buller. for
Ad
Reagents step 7) to each well. Incubate lor 45 minutes at room Discard the soluuon. Repoat the wash as n i step 3,
Add I00 !JI ol TMB One-StE!f) Subs1rate Reagent (Item H) to eacl1 well. Incubate 101 30 minutes at toom dark w1t11 gentle shal<1ng. Ensure
0.09'1.
Stanoard/San>ple
Discard the solution. Repeat the- wash as 1n step 3.
temperature wtlh gentle shaJ
7. 8.
concenlrated solullon
Standards (Item q - ? �1als.
6.
9,
the dark Add
duri11g storage.
50 jJI
tempe
that TM8 solution os
the
kept in
ol Stop Solution (Item I) to each well. Read at 450 nm
1mrnediat�ly.
Standard/Sample (cell culture medium/urine) diluent. Dcteclion Anlibody C062P (hem an11-Human
microplate).
CD62P
HRP-SIIcptavidll1
{each
v1al
Conccntrale
F)-
is
(Item
2 vials ol brollnylated .
enough lO assay
G)
200
tJI
ot
hall
800x
concentrated HAP-conJugated streplavidu"l
TMB
One-Step Subsllnte
Aeage111
(Iter"
H)'
12
3_3".5.5"-tetrametr.ylbenzidine (TMB) i" bulletcd solulron.
ml
ol
Slop Soluhon (Item I) 8 ml ol 0.2 M sullunc ac1d.
5
10
\
ror example. Bncfly spm tne vial
down 10 m•x gonlly
(Item Gl and pipette
up and
Add 15 111 of HRP-$treptav•din co11cenrrate
into a tube will• 12 ml lx Assay DJiuefll B lo prepa•e an BOO-fold
dduted HRP Strep/avidin sotutron (don-, Sf(J(e !he dilute-d solutlOn for next day uSI>. •I must be used on the same day).
Add 100 �I ol each slandard (see Preparation of Reagents slcp
and sample onto appropriale w9lls. Covet well and incubate
3.
1\Qurs
al room temperature or over nighl at d '{; with
gentle shaking.
Discard Ihe solul ion and
wash 4
limes with 1 < Wash Solution.
each welt with Wash Buffer (300 pi) using a
Wash by fill,ng
mutri-channet popelle or aulowasher. Complete removal of liquid at each slep
is
essenlial to good pe•iormance. After lhe last
wash. remove any remaining Wash Suffer by aspiraling or
decanting . lnvcl'l the plale and blot •t against clean DaPe• rowels.
4.
Add
tOO
�I
ol
1x
ptepared
P•cparallon ot Reagents slep hour at
o• -80'C
at 2 10 8'C. Return
be run al least in duplicate.
for 2.5
·20'C
pack. reseal
Bring aU reagents and samples 10 room tcmpe•alure {18 · 25'C)
4)
6)
biotinylated
anlibody
6 months
al 2 to 8'C lro.r. the
(recommended
at
b'l srored
-OO'C) aile• •econsldulion
Opened Moc•oplare Wells or reagents may be sro•e lOt up to I month
belore use. It os recommended thai all standards and samples 2.
ab100631 may be stored lor up to
aate 01 shtpmcnL Standard (recombinant protein) should
ar
7. Assay Method t.
4. Storage and Handling
(sec
year of the
unused weUs lo lhe pouch coot;urung desoccant
along entore edge.
Note· the kit can be used Wlthon onr
whole kot os stored at ·20'C.
Avoid repealed lrecze-thaw
cycles
5. Additional Materials Required t Mrcroplare reade• capable ol measwing absorbance al '"SOnm
Precis•on p•petles to dehve� 2 �I to 1 ml vo lumes.
Adjustable 1-25 ml pipeltes for reagenl preparat
6 Tubes 10 prepare standard or samp1e d1lutions.
10 each well. Incubate lor 1
•oom 1e1nperature w1th gentle shaking.
6
9
\
slandatd solution to produce a diluli011 series (shown
6. Preparation of Reagents 1.
Briog al reagents and samples to room
2.
Sample dilutoon:
before use.
II your
temperature {18
•
1 x Assay Oilucflt 8 serves as the zeta standatd
25"C)
standard solulioos 011 ice during peparation.
samples need to be diluted. Assay
Assay O�uent
B
("em
-
•Please note that levels ot the target protein may
vary
betw""n different specimens. Optimal dilution factors tor each sample must be dete<mi� by the investigator.
Assay Oduent
8
0
E) is used for
supe
.•.
5.
should be diluted 5-fold with deioru2cd 01
Preparation ot standard· Brielly spin the vial ol Item
C and then
add 400 iJl Assay [);\)en� A (for serutntplasma samples) or ' "
6.
a lObe wilh 466.7 11f Assay Diluent A or tx AsSay Diluent
8 to
prepate a 3() ngfml stock slalldatd solution. Piperte 400 IJI Assay Diluent A 01 t x Assay Diluent B into each tube. Use the stod<
If the Wash Concentrate
"Y""'
;
II;
-
,.., ··-/· v:uJ
()
-
-
,......_.
.... _
·......
oJ:-
ml
•1¥h ���
C) I�II.J
(20x) (11cm 6) conta.n� visrble crystals.
drssolvcd. Dilute
water to yield 400 ml of 1x Wash
BoNe<.
Brielly spin the Detection Afltbody vial (Item
F) beiO<e
use. AdO
100 jJI ol 1x Assay Diluent B into the vial to p<epasc a detection
days).
(lt1e
lhe detection
aniJbody concentrate should be ddute
1he powder thofougnly Dy a gentle mi� and inven tube to ensura
protein. Add 200 1.11 C062P standard from 1he vial of l!em C. r
" ""
G3>
0
conc8<11tate can be S!O<ed at 4 "'C IO< 5
wall!<) n i to Item C voal to pepare a tOO nglml standard. Orssotve
not vortex as this wiM destabilize the
,..
-
,.--... ...._, .
anlibody concenlrate. Pipene up and dOwn lo rnix genUy
Diluent 8 should be d�uted 5-fold wnh deionized or drsblled
diSSolved. Do
�/
20 m1 of Wash BuMer Concentrate into de10nae
Ass4y Diluent 8 (IO< ceU culture mcdrum and urine. Assay
all powder
... ..
-
,-...
warm to room temperature and mix genUy until
distiUcd water 4.
(O nglml). Keep
Ooluool A (Uem 0) IS vsed for dWtion of serunvp(a.sma samples
(we recommeode
3.
below). MU:
each 1iJbe lllo
------- --------
Diluenl B and used on step 4 of Part 7 Assay Method. Once
7.
reconstituted. use wilhin 2 days
Briefly spin the HRP·Sireptavidin concentrate vial
{llem G) and
1"4Jene up and down to mix gently before use. HRP·Sireptavidin
concentrate should be diluted 80
8
\
Protocol Description e:
C:\KC4 3.03 Rev 4\vWF\dr. eko adi. prt
�der :
Elx:300
VVavelength :
450 n m
: Time :
00:00:00
Mode :
Normal
96 V\!ELL PLATE
\Neils:
t e Type
Assay Description C:\KC4 3.03 Rev 4\vVVF\dr_ Eko Adi.pla
""! N ame:
Reader Report Date:
0211 61201 3 1 2:08:32 .pt #1 :
Prompt #4 :
pt #2:
Prompt #5:
pt #3:
Prompt
1
--:::�
�-�
.......;: �
�
-
I
I
:.>:
STD1
js:o.orm
Ip:s.coa
&TD2
i j12500
STC•3
!
I;T[I4
-1500 I' "·
! I
�
STtrO:
I P- p.1�D Ij1.st>""OO
STD6
�-
�
!
ST07
jo.?eca I
Ia ,.
STD S
4
s I
I Ii I !
1 I I
I I
!
f.Pll
SPU
I
I
SPL3
f.PL4
oPLS
SP!£.
SPL7
f.PG
J I l
1 l I
I
l !
SPIS
f.PUIJ
b
II
S:-Pli7
SPLit::
�
I I
t.PL25
E-PL.:..""t.
l
7 SPL33
E-PL:-t4
!I
021161201 3 1 2:27:01
#6:
s
a
iO
SPL41
SPLAS
SPL S7
SPL41
!E-PLSD
SPLSS
1i
I
SPi.ES
SPl£6
i2
l J I i i I I
oPU�
f.Pli�
t;PL. I'
f.PL <s
SPL43
C:PI.£ �1
l!;PL5�
f.PL12
E-Pl.20
�PL2S
'CPL<E-
f.PL44
&PL52
f.PL g Q
f.Pl£7
I I l I
<-Plf'..S .
6PL73
H'L 74 SPL7S
f.PL76
I
'
f.PU3
f.PU1
SPU9
EPL37
SPL45
SPt£3
f.Pl£1
oPU4
f.PlL'
SPUO
SP�:
SPL'li>
;pt£.4
�PL.t. L
'gPL15
SPL23
f.Pl31
SPL: -c9
;PL47
::.PLSS
SPLI>.:I
SPL 71
EPL�S
;PU4
SPL32
t:PL4!J
5PL48
SPL56
�PL£4
E-PL n
!':-PL£g
SPL70
II !
f.PL n
S-Pl78
SPL79
E-PL�:Q
II I
j
I
JI I
!
I I I i II
I
KC4 Page 2 J 3
:mcol Name:
C :\KC4 3.03 Rev 4\vWF\dr. eko adi.prt
:-A Narne:
C:\KC4 3.03 Rev 4\v\.t\fF\dr. Eko AdLpla Repor1 Dateffime:
-::din{l Dateffime: 02/16/2013 ·t2:08:32
�
2
l!
"'
I>
6
7
8
8
:...-zb
3.73:3
0.12!�
0.135
O.i2£i
Cl.130
Cl.134
Cl.115
0 232 .
D14
3.D1S
t:l.�22
0.11}
0.111:3
0.13::!
OmB
0.131
0.130
i.:H1
0.124
0.1B4
0.123
0.134
0.220
!1.134
n.1zs
0.14�
;.31''3 ..;;Eo;
I
ilJ:;:S
·� O-" ' l .;:<
0.143
�1S'
o.=�n
0.14S'
0.1:15
0.111
0.130
::311
OB7
!l.Hi
O.i36
O.i!IZ
0.12€
1:1.1:13
0.142
0.132
0.132
0.10-"9:
0.156
0.157
0.16il
::.:D1 • .::F'
J
:.J.u.·
0.05!]
I
I i
I
0.130 0.12D 0.1Z7
I I !
0.127 0.133 0.1:ID
0.268 0.15<1
I I
0.129
0.24S
0.13"3 0.1)7
I
I i
I! l
0.221 0.134
0.176 0.142
l
I I I ! i
! I
0211 6120"1 3 "1 2:29:04
10
11
12
0.137
0.124
0.22S
0.122
0.143
0.190
0.226
0.118
0.1:33
ll.14S
0.12'5
1!.1;z$
11.14S
0.163
0.19$
0.141
0.149
0.142
0.::!23
0249
0.13'5
!1.147
0.15 6
0.1:13
�·=�D CURVE
--------4'
I
l
I I � � � -----1----� � ? - --�---� ----+------+ l ------� ..
� ___-
, "",""
\
--� -
i
I
.
--
l
il I
I -------+-+-------+---,•--� -' -----r------r-� ------�I
I I �------��------�---------L--------�--------L-------�I--�---�/ "'-
I
I
10 ra1\t1
1
i
10
!iV
v• �)J(I+(:="-t;t'il) +d
i!"'s:lll"'l' b·i� �l4'J d-�_\ fi' [ll..J � lt'•O�Ii� uPIODI�iJ
''r
®
KC4 Page 3 I 3
ocoi Name:
C:\KC4 3.03 Rev 4\vVVF\dr. eko adi.prt
:a Name:
C:\KC4 3.03 Rev 4\vWF\dr. Eko Adi.pla
-jjng Datemme: o·H-16/20 1 3 1 2:08:32
Report Date/Time:
021161 201 3 1 2:30: 1 3
--n-�;ti:ms 1
2
s
4
6
8
7
....137 .
4'3-SJ. �
0.4-'b"tl
0.51�4
0_31;:'3
llA>S4»
051l30
25.312
0.3e41
o:;:-gso
o.r-*'7
0.5435
12.4:3 2
0.4047
lJ.S223
0.3:344
C.Sil30
0�77
0�
� L �i
-"='
....53 !:�1 .J#i> -=-� '":
I
6.2)17 3ll244
l
i
1.639>5
li
! I I
0.36$2 <0
iI
i
!
! 1
ll.4 149
l' I
I
I l
I
DSSS7
0.4143
0.�13
!JS21S
0.14!13
0.42511
0.46]
ll57S7
0.433"3
0.4339
D.224D
0.6'584
0.706 7
0.7317
0.6035 0.4743
!
lI
0.�
!
I I ;
s
9
10
1.6 332
1..269:3
llS311
0.4743
1.453)
0.3e4i
0.4646
i .1&>1
o.so:;-o
1 .22
D.3<>�
i.37SO
0.4543
1544"9
15121
n.43Sil
o.onSD
I D.S41D I
I
0.4>54>5
I
11
!I
I
0.4)47
i2
!
�.n1�
05-�7
0.967$
0.3414
iJ.9:9ID
0.6233
0.4149
0.�311
1.1331
0.6293
!l.7S64
i.IJZi4
IJ.71S1
0.50: <1]
0.5>577
0.6386
05757
I U.543S
. llS604
124;!1
1.3853
il.SiZ4
!J.S311
O.S:7S7
0.6211
0.6984
0.49:?5
L
I i II
I
KC4 Protocol Description
"De :
C:\KC4 3.03 Rev 4\ADAM\dr. eko adi.prt
-ader :
ELx800
VVavelength :
450 ! �40 n m
= Time :
00:00:00
Mode :
Nom1al
-e Type
96 WELL PLATE
�/\Jells:
A1-H12
Assay Description
3 Name:
C:\KC4 3.03 Rev 4\ADAPv1\dr. eko adi . pla
-=din9 Type:
Reader
o:din�J Date:
02t15/2013 "1 4 :24:28
Report Date: Prompt
02/15/20 1 3 1 4 :30:54
#4:
Prompt #5: Prompt
#6:
:ments:
1 ....·
-
...,...,...
�
-
I
�
.....,...
--=�
...:::::!:
--..;,5 3:
-:!f
-
i--=-
--=�
2 STD1
SIJ.DIJIJ :: m s
I
:ZS.OOD
STCI3
12Silll
STD4
e..zsoo
STOS 3.1300 ST06 1S&JD
OID7
0.7810
lo
STOS
!
j l !
SPL1
SPU
.
I i Ij l
�Pt3
SPL4
I
:OPLS
I I
SPL£
i l
l
I
f.PL7
�-PLt:
! l Ii j !
I
1 I
I I I'
8
1
f.PU7
f.P�S
SPL33
SPUD
C:PLiJ.::
C:P�e.
I: .PL"34
l5PL11
�PL19
l>P�7
SPL 'E·
c:P�e
t-PL �
l5PL29
SPG7
4 C:Pl9
"6PL12
C:PL13
C:PL14
I
SPL15
!
t.P\.16
!
lI
i I I
I
l
SPLE
<;PL21
I
i
I
I
I
I
!I I I
I
5PI..30
l
!:-FU:!<
SPL24
I
!
I II
C:PL41
SPL31
SPL32
I
I
SPI..3-S C:PL"'E<
S!'L4!J
SPL49
C:PL4Z
EPLS D
I
f.PL43
SPL51
I
C:PL44
II !
I
1 !
I
!
SPt.n
I
I
C:P�
6Pl.53
C:PlA€
SPLS4
f.PL47
SPLSS
SPL 4e
t.Pl5f.
i
I
I
I
l
I
SPl52
10
11
l
SP!.E-7
SPL£S
i
l5PLSB
SPL6-6-
C:Pl.£.9
C:Pl.£7
SPW l
SPL€-3
i:;PLS1
SPL£9
C:PL£<
SPL70
!
EPLS3
SPL 71
I I
SPL7�
j
I
S?l£4
SPL72
! i
I
SPL8D
i
l I t
_I ! I
I I
! I I
I I
I
l
I !
i
!
I
i
I I! I
I! I
SPL73
C:PL74
C:PL75
SPL7�
< -PL i"7
SPi.7B
I I
C:\KC4 3.03 Rev 4\ADA.M\dr.
Page 2 1 3
eko adi.prt
C:\KC4 3.03 Rev 4\.ADi•,M\dr. eko acli.pla �ding Date!Time:
�
�
'.375
J.S�
I
3 1.387
0.1S4
0£67
0.1'30
!1.335
0.161
:..175
0.163
0.1D'J
:.m.
o.a::n
0.155
:.155
O.ll53
0.145
:.:DS
UID4
0.073
:..m
D.Oi:3
0230
:.:m
I
0211512013 14:24:28
! I !
1 i
l I'
! !
I
Q.i3i
0.129 0.157
0.105
0.325
0.00:>0
O.i17
0.!1: 3:3
U.Ll€3
0.133
!1.120
0.1=-8
ll.043
. 0.1U1
0.060
0.13'3
8 0.095
!
0.[]94
I I I !
I
0.0-'S.i;
0.143
0.072
0.202
0.20-5
0.1�7
o.zo>r
0.133
I
11.1�-S
0.2113
0.1:31
l
IHJ61
0.1167
0.101
l
O.U59
0.16::0
0.1.<10
0.144
i
li l l
i
l l i I I !
0.471
{ !
l
I
1
O.U7
I I
II
O.ll91
!J,Dg
IJ.062
0.1}�3
oms
[]�
01l61
0.137
0.129
0 131
oms
0.110
0.141
O.EJ.S>;
O.D€"3
.
I I
!
2
u
--
:
ID -.--•ir:a y• �..QJili+(IJ:)'t)+d: .. aafWJ'" . b•ID 7� �?a-e� d-&?;a �in® ff'"'lDDD rr!WIOMtr �;
.
__ -
-
-
-'-------41�.- ---
�-
..-
.
_ __
,...
_
JD
0.122
0.113
{
!
0.104
0.07 9
..::-'\RD CURVE ·�
02!1512013 14:30:54
11
9
'
0.1164
0.097
I
I
!!.!l91
O.ll5S
I
Report Datemme:
iQ
0.087
0.073 0.11:;1
I
I I
I I I I I
0.157
O.D:>'"3 !lll€'� El.195
ll.ll37 0.045 0.137 El.20S
!
II
KC4 ocoi Name:
C:\KC4 3.03 Rev 4\ADAM \dr.
Page 3 I 3
eko acii.prt
rn Name:
C:\KC4 3.03 Rev 4\ADP,�,1\clr. eko adLpla
�ding Date/Time:
0211 5120·13 1 4:24:28
Repor1 Datemme:
021"151201 3 1 4 : 30:54
.. -Fd rat i on<; 2
ll
�.783
50.:<:1:<:
5.6094
::S-531
24..i31
6.3963
1:!.4:<6
5.8all7
S.S5:31
).60i3
Z47 .;zog
I
S.64SZ
....D9S
3.19"1
'
i:
1545i
S.2S33
•
·m1
0.7�41)
2.3830
..:!34S
-:{}
8.5165
�
.t
G
4.6327
4.7114
i I 5.725$
3.6913
I l! I
i ! !
1:Z.Il66
2.bil17
4.1589
3ID73
22175
7 .34DO
42m
5.7€-45
1.3738
3.5111
1.8415
5.il250
l I
l I l I I I I
a 3 .2198
l
1
8
9
w
11
1" 2
2.3155
5.1S13
17.416
4.941:;7
3.6413
S.7Z5-3
<:.6297
400!12
4.3568
1 i'l» (4
3.1183
S.:;"'S61
2.9561
2.17"60
3.2395
3.11$3
z.a:m
1.6302
2.3417
7.4544
3.3604
7.S6Sb
4S54D
1.:3255
31137)
0.294S
7.1874
5.0641
"H:l.J.E S
4.7SS3
lli3Z7
1.S.S�
4.9467
33ffi4
5.7645
7.4325
4.6327
4.7114
).44]8
i .2009
i .31"55
2.1344
7 .75-38
S.i4l1
2.3:330
4.'34» 1
1.7334
6.18�
2.:3155
2.176. �
4.0002
7.5La;?
S.nln
7.034S 3.5211
l I
I
I
I
I
C:\KC4 3.03 Rev 4\P-SELECTIN\dr_ Eko Adi.prt
�der :
ELx800
VVavelength :
450 nrn
00:00:00
Mode :
Norma!
96 WELL PU\TE
\lVells:
A1-H12
Tlme :
·
e
Type
Assay Description
.a Name:
C:\KC4 3.03 . . .\P-SELECTIN\dr. Eko Adi.pla
-{iing Type: �ding D3te:
Reader 02J-18/20·J 3 •14 : 1 3:03
Report Date:
'Tlpt #1:
Prompt #4:
'llpt #2:
Prompt #5:
""lpt #3:
Prompt #6:
02118f2Q·J3 1 4:22:·17
ments:
SPL1 -SW2
1iJ.!liJO
S:TD3 j3.333U j
I
i m<:> ![!_](] ]]
l
'>TDf.
lo_j2-0 I
srcq
�
ftLJ41GO
!!
i I I
l I I I
l
SPL2
II
SPL9
<-PL1D
SPL11
SPL4
f.PLU
SPLS
SPLH
SPl£
SPL14
tPL 7
SPL1S
SPL1f
I
t
SPL17
SPUt=
l i
I
I I I
I
1I
I I Ii
SPL25
SPL4 1
f.PL33
SPL34
I
SPL4£
! I I i 1
I
8 S-f'l4 9
SPL2S
SPL21
5Pl29
SPLl:Z
SPL30
f.PLD
!
I
I
t::Pl31
6P L3€ S PL37 S PL38 S PL39 6PL40
I
I
I I l
i
I I I t.Pl4-B
i
j
I
10 I
SPi..::"ll
SPL "1
t:PL:-3
EPLS7
I II I'
SPLS9
SPL:�
1 1
I
11
F.-Pl£:.
SPL€1
I
I I
SPL f -€
i I
SPL67
-!
f.PI£..<:
f.Pl£2
SPl55
I
SPLSS
I
SPI.35
I
I
7
SPL€9 SPL 7[) SPL71
!
!
5PL 74 l5P l 75
I
!SPL 7!';
!I
SPL 77
i
!I !! I '
SPLT2
SPL 73
i
I
SPL78
SPL79
I
l i j !
I
I Ii I i
I!
I
i
I
KC4 C :\KC4 3.03 . . .\P-SELECTIN\dr. Eko Adi.prt
:tocol Name:
C:\KC4 3.03 ...\P-SELECTIN\dr. Eko Adi.pla
a Name:
ading Datemme: 02ttBJ2013 ·t4:·J3:03
2 W45 1.672
1J7i
I· ....,.,
�144 ::..u;
- m3 �
I I
I .
I
1Jl4S [].1;32
:'! 0.36 !l.199 [].13$
0.112 0 .10\) oms
Page 2 / 3
I !
l �
I
ilA£13 0.724
0.398 !l.S 21
l
0..;>32
!
1.022
i
I I
!
I l I
0.:300 []583
i
U.4S2
0.401
0.555
O.::i40
0.'154
0.2;,--;<
M7'7.., U.1 ' ""
0.541
0.439
os:n
0.495
0.:?17
ll.4 "3€
tDD
0.474
0$33
. I I
I i
7 0.753 0.635 0.601 [].391 0274
l
I
Report Date/Time:
1D71 o_g�
0.599
!r !
I II l
I I I
0.333
0.395
0.530
0.2%
0.�2
0.63ll
0.433
0.7311
0.333
0.537
f:L:323
0.4 57
0.304
ll.SS1
0.407
1.015
0.473
0.�
0.479
0.981
0.��
0.278
ll.4 S 7
0.73'1
I
o.seo 0.333
1.172 [].3i2
I
I .
0.2311
0.677 0.485
I
o.s:n
i
!
I
! l
i
lI !
I I
021"18/201 3 14:22: 1 7
11
12
iil
0.337
0.927
0.$75
i
O.Th !1.347
[].184
0.754
il.315
0.43:;;:
0256
0.327
0.516
fl3iS
0.491
I
0.331
I'JARD CURVE u
�----+1-----+t�/-/__/_?·r---- 1---- -� ----'� : ----� �----�' 1 1 �
-4
�
I
�--+ <1! '! ----,_-----+----�!� �----4I-� / �·/ � �----�l------+- --�I� ! ! I1 J;- I
! �--��--�----�----�---+-----r----+---� I I iii
l:a:a.:ae.W.m y• (a-d)i(l-+V:.t. i·�b)-+d
•110.10 ID i:!:•!JM:'i'�i' c- r t .? l d" 1 � !.:i "•t !100 1f'-tl ��"p I r,.QOO-m.IJ
,.
_,
i I
i
I
KC4 Page 3
ocoi Name:
C:\KC4 3.03 . . .\P-SELECTIN\cfr. Eko Adi.prt
ta Name:
C:\KC4 3.03 . . .\P-SELECTIN\dr. Eko .Adi.pia
-dini! Dateffime:
02/18/20·13 ·J4:"13:03
Repm1 Date/Time:
02/"18/20"1 3 "14:22:·1 7
ta-dr::ttions :;s3=3 3�15 ..35"'!7
'037 -�45 _a;;
--:3"3il �
! I
2
8
29.93$
3.86 :37
I i !I 3.32[!4 i I
I I I
10.162
1D289
C.352J C.1�
l
I l
_I !
I C.04SSS !I II <(}
J3
ii.SCS
3_7�
4
i ! I
b
.:.j,_i..i,.'j(
4.7034
6.:�273
21/£27
I
!
�
7
12.526
2.nSJ
I $.812Il
4.7;].4
1.6707
3.076)
13.217
8.S76D
3.6718
4.4313
634/J�
1.3551
sssoo
18.4>-s
=>31.�o(J{J
"14.356
S.SiiJO
2.63D1
:ZS.11Jl5
7.4319
5.1390
8.9211
7.37/6
;;.m)S m.46S Zl.W
i.�.lJ4 i
43347
!
6.4270
! ;
2.3613
1 !
I
Zl.234
5.2353 2.00S1
�
u
1()
11
12
3.737)
6.2755
18.110
Z3.794
;:,:3341
5.�35
8.6771
15.796
20.W3
1.4533
1334;
35423
:,!J1.�olHJ
17.347
:1.3330
15.613
S.DIJS:3
2.4734
IJ.SSSll
12562
I
1S.7C3
3.9�
2.1691
ZS1S8
43'571
5.1H::i
16.3il3
10.011
i.n16
2.�78
24A94
5.411!]
S.3S21
5.973"3
2.57" 27
II
4.8183
11.746:
6.31l!S
5.47!0
�-7�
i
I
Il I
I
I
! I I I
I
---
,.,...-
'
.
PERJANJIAN KERJASAMA ANTARA BADAN PENELfTIAN DAN PENGEMBANGAN KESEHATAN KEMENTERIAN KESEHATAN RI DAN FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS DI PQNEGORO TENTANG R!SET PEMBINAAN ILMU PENGETAHUAN & TEKNOLOGI KEDOKTERAN (R!SBIN I PTEKDOK)
A �
HK.06.0 1 / 1 / 1696/ 2 0 1 2 Nomor : l l 08J UN7.3.4/D/KS/20 l 2 Nomor :
bulan
Pada hari ini Kamis tanggal satu
Maret
tahun dua ribu dua betas,
kami yang bertandatangan di bawah ini :
1 . d r. Trisa Wahyuni Putri,
MKes :
Badan Pe nc l itian dan Pengembangan Kesehalan Kementerian Kesehatan Rl bcrkedudukan dan berkantor di Jalan Percetakan Ncgara Nomor 29 J aka rta 1 0 560, dal am hal ini Pejabat
Pembuat
Komitmen
bertindak dalam jabatannya untuk dan atas nama Badan Penelitian dan Pengembangan
2.
Kesehatan,
selanjutnya disebut PII-IAK
KESATU;
dr. Endang Ambarwati, Sp. KFR :
Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Diponcgoro,
berdasarkan surat pendelegasian dari Rektor Universitas Diponegoro ·Nomor 12 78jU N7. PfTU / 20 1 2 tanggal 29 Feb rua ri 20 1 2 dalam hal ini bertindak untuk dan atas nama Universitas Diponegoro yang d i tetapkan sebagai Badan Layanan Umum Penuh rnelalui Kepmenkeu Nomor 259/ KMK.OS/2008, tanggal 15 Se p te mbe r 2008 bcrkedudukan di Jalan Dr.Soetomo
No.
18
(Komplek
Semarang selanjutnya disebut
PIHAK KESATU PARA PIHAK, telah Badan Penelitian
Zona
Pendidikan
RSUP
Dr.
Kariadi)
PIHAK KEOUA.
PlHAK KEDUA selanjutnya bersama-sama disebut sepakat untuk mengada k an Perjanjian Kerjasama antara dan Pengembangan Kesehatan dan Fakultas Kedokteran dan
Universitas Diponegoro dengan ketentuan dan sya.rat-syarat sebagai berikut:
1
l
PASAL DASAR DAN TUJUAN ( 1 ) Perjanjian ini dibuat berdasarkan referensi yang meru pakan bagian yang tidak terpisahkan dari perj a njian ini, yaitu : a. Undang-Undang Nomor 18 Tahun 2002 tenl,ang Sistern Nasional Penelitian, Pengembangan dan Pencrapan llmu Pengetahuan dan Teknologi (Lem baran Negara Republik lndonesia tahun 2002 Nomor 84, Tambahan Lembaran Negara Republik Indonesia Nomor 4 2 1 9 ) ; b . Undang-Undang Nomor 2 0 Tahun 2003 tentang Sistem Pendidikan Nasion
Penelapan Tim Pelaksana
(2) Perjanjian 1111 bertujuan untuk mernperbaiki dan membina Indones� dengan menggerakkan, iptekdok pem bangu nan mendayagunakan, dan meningkatkan kemarnpuan ilmiah yang ada untuk ikut serta memanfaatkan, mengembangkan, dan menguasai ilmu pengetahuan dan teknologi yang diprioritaskan dalam bidang riset dan teknologi serta pencapaian sasaran pembangunan bidang kesehatan.
2
PAS!\L :2 l�UANG LINGKUP Ruang lingkup perjanjian meliputi pelaksanaan kegiatan penelitian, pembiayaan, jangka waktu pelaksanaan, tata cara pembayaran, hak dan kewajiban, pcngadaan barangjjasa, laporan, hak atas kekayaan inlclektual, sa.nksi, keadaan rnemaksa, dan penyelesaian persclisihan. PASAL 3 KEGIATAN PENEL!TIAN ( 1} Pcnelilian Riset Pcm binaan Llmu Pcngetahuan dan Teknologi T<edokteran diarahkan untuk peningkatan kesehatan ibu, bayi dan balita, pcrbaikan status gizi masyarakat, pengendalian penyakit menular serta penyakit tidak menular, diikuti penyehatan lingkungan. (2) Protokol penelitian yang dibiayai oleh PIHAK KESATU merupakan protokol yang telah lulus dalam seleksi panel. (3) Protokol penelitian sebagaimana dimaksud pacta ayat (2) tercanlum dalam lampiran perjanjian ini dan merupakan bagian yang tidak terpisahkan. (4) Tim penelili sebagaimana tercanturn dalam lampiran perjanjian ini tidak diperkenankan untuk diganti/ diu bah tanpa persetujuan PIHAK J<ESATU, dan merupakcm bagian yang tidak terpisahkan dari perjanjian 1111.
(5) Pengganlian dan atau perubahan tim peneliti sebagaimana dimaksud pada ayat (4) harus di ajukan secara Le rtulis dengan melampjrkan persetujuan tenulis dari kctua panel pakar dan amandemen etik. PASAL 4 PEMBlA YAAN ( 1 ) Bantuan dana diberikan dalam bentuk swake lola . (2) Biaya pclaksanaan kegiatan yang diberikan oleh PIHAK KESATU kepada PIHAK KEDUA dengan rincian sebagaimana tercantum dalam lampiran perjanj ian ini dan merupakan bagian yang tidak terpisahkan. (3) Biaya pelaksanaan kegiatan penelitian sebagaimana dimaksud pada ayat { 1 ) sebesar Rp. 7 2 1 .599.000,- (Tuju h Ralus Dua Puluh Satu Juta Lima I�alus Sembilan Puluh Sembilan Ribu Rupiah) sudah termasuk PPh dan PPN, yang dibebankan pada DIPA Sekretariat Badan Penelitian dan Pengembangan Keschatan Tahun 2 0 1 2 . (4) Biaya sebagaimana dimaksud pada ayat (3) meliputi segala pengeluaran dalam pclaksanaan kegiatan penelitian termasuk pajak-pajak, materai
3
7
dan b iaya biaya lainny<J l w rus Jilm_yar- .olcll t >f t l A K K I � D U /\ sesum de ngan kcte ntuan ya ng bcrla k u {5) Peneliti sebagaimana lercanlum dalam la m p ira n perjanjian ini tidal< diperkenankan unluk me ngaj u kan pe mb iayaa n kepada pihak lain dalam rangka pe ne l i ti a n yang sama. (6) P lf-!A [( I<EDUA tidak cliperkenankan untuk m e n gali hk a n dan atau meminclahtangankan se ba gian maupun seluruh k'egialan penelitian s e ba gaim ana ter-cantum dalam la rn pi ran perjanjian ini ke pad a pihak lain ta n pa perselujuan P ! H A K r<ESATU. -
.
PASAL
5
JANGKA WAKTU
( 1) Pelaksanaan kegiatan penelitian scbagaimana terse but dalam perj anj ian ini dil ak uka n selama 1 0 { se p ul u h) bula n kale nder terhit u ng sejak penandatanganan perj a nji a n in i {2) Ap a b i l a pelaksanaan kegiatan p e ne li tian ini tidak se le sai dalam waktu yang telah ditetapkan scbagaimana disebut pacta aya t { 1 ) , malca sisa dana clikembalikan ke Kas Negara. .
PASAL
6
TATA CARA PEMBAYARAN
( 1 ) Pe nya l u ran dana oleh PIHAK KESATU kepada Pll i AK KEDUA dilaku ka n melalui transfer kc rekening resmi insti tu si PARA PIHAK ya itu : Nama f<eke n i n g : Penampungan TDPT Nomor Rc ke n ing : 0 1 1 3 1 47606 Bank : BNf : UNDI P Cabang (2) Ta ta cara pcn cai ran dana pe ne li ti a n sesuai dengan ketentuan yang berlaku dan Pedoman Administrasi K euan gan R isb in l ptekdok 2 0 1 2 . (3) Penyaluran dana se ba ga iman a dimaksud pacta ayat ( 1) tidak bedak u untuk belanj a sewa dan b clanj a bahan habis pakai yang mekanisme me la lui Panitia d an j atau Pejabat Pe ngadaan pelaksanaannya Baran g/ J asa (4) Pe nya l u ra n dana sebagaimana dimaksud pacta ayat (3) dilakukan melalui rekening pe nye dia barangjjasa. (5) Pe n gg u na an dana p e nel i tian harus disetuj u i j diketahui olch P£HAK .
KEDUA.
{6) PIH AK
KESATU
pencairan
mengirimkan
bukti-bukti
KEDUA setelah
penyaluran
bukti-bukti pajak yang telah disetor proses pencairanj p e m baya ra n se le s a i .
se rta
4
danajb ukti
kepada
PIHA K
� ;y
�
PASAL 7 HAK DAN KEWAJlBAN ( 1 ) PIHAK KESATU
a.
Hak :
1 ) Memperoleh l apo ran a kh i r abs tra k da n t;asil pelaksanaan pene litia n dari PIH.AK KEDUA da lam bentuk h a rdc op y dan s oftco py ; 2) Mempe roleh raw data (data mcnlah) hasil penelitian dari PI H A K K ED UA ; 3) Me m pe ro le h semua d ok u me n asli yang be rka itan dengan pertanggungjawaban ke ua ngan dari PIHAK KEDUA s elam bat lambatnya awal bu lan Desembcr 2 0 1 2 . b. Kewajiban: M el aku kan pe m bay a ra n pelaksanaan kegiatan penelitian kepada PIHAK KEDUA me la lui rckening resmi institusi sesuai dengan usulan yang telah diterima oleh PIHAK KESAT U . ,
-
(2)
PIHAK KEDUA
a . H ak
:
Menerima pembayaran atas pclaksanaan kegiatan peneli tian dari PIHAK KESATU sesuai dengan usulan yang Lelah diserahkan oleh PlHAK KEDUA. b.
Kewajiban: 1) M el akukan pcmantauan dan evaluasi in ternal atas pelaksa n aan penelitian di i n sti tu s i ny a dan bertanggung jawab penuh atas hasil pe nel itia n ; 2) Menyampaikan laporan akhir pe n eli tia n dan abstrak kepada PIHAK KESATU sesuai de n ga n j a ngka waktu yang di sepaka ti; 3) Me nyera hka n raw data (data menlah) hasil penelitian kepada PIHAK KESATU;
scmua dokumen yang b erhu bungan dengan pelak sanaa n pe n elitian ; 5) Menyelesaikanj menyerahkan semua benluk pertanggungjawaban keuangan kep ada PIHAK KESATU sesuai kctcntuan yang berlak u
4)
Menyimpan
salinanjcopy
.
PASAL 8
PENGADAAN BARANG/JASA (1)
Pro ses Pejabat
pengadaan barangjjasa dilaksanakan oleh Panitia danjatau Pengadaan B arangj Jas a yang ditunjuk oleh PIHAK KEDUA.
5
7 ·�
/
(2) Panitia
danj a ta u
Pejabal Pengaclaan 1.:3arang/Ja::;e� se!x.tgairnana dimaksud pada ayat ( 1 ) h a t·us m emil iki serlifikat k et� h l i
9
LA PO RAN
( 1 ) PIHAK KEDUA wajib membuat dan menyampaikan la p o ra n kemajuan penelitian kepada PTHAK KESATU (minggu kedua bulan September 20 1 2 ) sebanyak 3 (tiga) rangkap.
(2) PIHAK
(3)
KEDUA waj ib mcmbuat clan menyerahkan laporan akhir penclitian kepada PIHAK KESATU selambat-lambatnya mmggu ketiga bulan Desember 2 0 1 2 sebanyak 3 ( tiga) ranglcap. Penulisan ·Laporan Akhir h a rus mengikuli ketcntu a n dalam Buku
Panduan Penyusunan Laporan Akhir Penclitian Badan Litbangkes yang diterbitkan oleh
Komisi
Ilmiah Penelitian Keschatan Badan Litba ngke s . PASAL
10
KEPEMILIKJ\N HASIL PENELITIAN
Kcpemilikan hasil penelitian yang dimaksud adalah: ( 1 ) Hak Kelayakan Intelektual, teknologi tepat guna, temuan lainnya yang di pero lah sebagai hasil pclaksanaan kcgiata n penelitian ini dan menjadi milik bersama para pi ha k (2) Dalam hal lerjacli tuntutan dari pihak lain aLas penggunaan suatu ala l atau te k no logi tertentu ak ibat penelilian ini, P!HAK KEDUA dalam rangka pekerjaan berdasarkan pcrjanjian ini akan membebaskan PIHAK KESATU dari segala tuntutan hukum pihak la i n terse bu t . PASAL 1 1
PERTUKARAN INFORMASI (1)
PARA PIHAK sepakat untuk saling bertukar data dan informasi mengenai hal-hal yang berhubungan dengan pelak sanaa n Perjanjian ini dan semata-mata hanya digunakan unluk kepentingan yang sesuai dengan maksud dan tuj uan Pe rj anjian Ke rjasam a Penelitian ini. (2) PARA PIHAK sepakat untuk menjaga kerahasiaan seluruh data dan informasi sebagaimana dimaksud pada ayat ( 1 ) dan tidak akan m e m be rikan kepada pihak ketiga tanpa pe rse tujuan tertu lis dari PARA PlHAK.
6
'
IJASJ\L 1 2 SANKS I
( 1 ) Bilamana PIHAK KEDUA clalam pelaksanaan kegiatan dan penggunaan dana tidak sesuai dengan syarat dan ketentuan yang te1·cantum dalam perjanjian ini danjatau melanggar ketentuan Peraturan Perundangan yang berlaku, PIHAK I<ESATU memberikan sanksi. berupa peringatan tertulis mulai peringatan pertama sampai dengan peringatan ketiga. (2) Pemberian sanksi sebagaimana dimaksud pacta ayat ( l ) dilakukan apabila P!HAK KEDUA berdasarkan hasil evaluasi dan verifikasi terbukli melakukan kekeliruan, baik dalam me laksanakan kegiatan maupun pengelolaan keuangan yang dapat menimbulkan kerugian Negara. (3) Apabila PI I-IAK KEDUA tidal< mengindahkan pcringatan tertulis dari PIHAK KESATU scbanyak 3 (tiga) kali sebagaimana dimaksud pada ayat ( 1 ) , maka PIHAK KESATU dapat memberlakukan sanksi kepada PIHAK KEDUA berupa: a. Menarik kembali danjatau menghentikan bantuan dana dan/atau meminta kembali bantuan dana yang telah disalurkan sesuai dengan perJanjian ini; b. Mcmasukkan PIHAK KEDUA ke dalam daftar sebagai lernbaga yang tidak rnemenuhi syarat sebagai pencrima bantuan dana Risbin Jptekdok. c. Melaporkan PIHAK KEDUA kepada lcmbaga/ instansi yang berwenang untuk proses tindak lanju t. PASAL
13
KEADAAN MEMAKSA (FORCE MAJEURE)
Keterlambata.n pelaksanaanjpenyelesaian pckerjaan yang diakibatkan oleh keadaan memaksa (force majeure) dapat membebaskan PIH AK KEDUA dari sanksijdenda scbagaimana tersebut dalam pasal 1 2 Perjanjian Kerjasarna ini. ( 1 ) Yang dimaksud keadaan rnernaksa (force majeure) adalah: a. Bencana alam (gernpa bumi, tanah longsor, banjir) dan keadaan cuaca yang tidak mernungkinkan pekerjaan dilaksanakan; b. Adanya perang, huru-hara, pemberontakan, kekacauan, kebakaran dan epidemi; c. Kejadian lain diluar kekuasaanjkemampuan manusia dan kejadian tersebut dapat dipahami/ d i setujui oleh PIHAK KESATU. (2) Apabila terjadi keadaan rncrnaksa, maka PIHAK KEDUA harus rnernberitahukan secara tertulis kepada PIHAK KESATU selambat lambatnya dalam waktu 14 (ernpat belas) hari sejak terjadinya keadaan
7
lllClll<.tk:sa cli::;crlai
mcmaks<.l bernkhir.
l>ukli
yang
sah,
pula
clcmiki;nt
kclil
keaclaan
(3) Alas pcrnberitahuan PIHAK KEDUA, maka PIHJ\K KESATU dapal menyeluj u i alau m en o lak secara tertulis keadaan memaksa itu dalam waktu 3 x 24 jam sejak terjadinya pemberitahuan keadaan memaksa terscbu l dari P!HAK KEDUA. (4)
Jika dalam waktu 3 x 24 j a m sejak diterimanya pemberitahuan PIHAK KCDUA kepacla PII-fAK KESATU tenlang keaclaan me m ak sa tersebut ti da k ada jawaban dari PIHAK I<ESATU, maka PIHAK KESATU d ian ggap mcnyelujui akibat terjadinya kcadaan memaksa tcrsebut. PASAL
14
PENYELESAIAN PERSELISIHAN ( 1 } A pabi la
tc1jadi
per se l i s ihan
akan diselesaikan sr:: cara
antara PARA mu syawarah.
PIHAK,
maka pada dasarnya
dimaksud pada ayat ( 1 ) tid ak dapat diselesaikan dengan cara musyawarah, maka perselisihan tersebut akan di selesa ika n melalui Badan Arbitrasc Nasional Indonesia atau akan dibentuk Panitia Penyelesaian Perselisihan yang terdiri dari 3 (tiga)
(2) Apabila pcrselisihan sebagaimana
orang, yaitu:
a. seorang wakil dari PIHAK KESATU; b . seorang wakil dari PfHAK KEDUA; c. dan seorang wakil y a ng d i tu nj uk dan di se tuju i (3) Apabi J a basil
oleh PARA PIHAK
keputusan terhadap pe rse l isi ha n sebagaimana dimaksud
pacta ayal (2) tidak diterima oleh PARi\ PIHAK, maka penyelcsaian masalah tet-scbut akan diselcsaikan s ecara hu.kum dengan domisili hukum di Pengadilan Negeri Jakarta Pu sat. PASAL
15
PENUTUP
te rdapa t pe rubahan dalam perj anj ia n 1111 akan perubahan (ad de n du m) atas kcsepakatan PARA PIHAK.
( 1 ) Apab i la
(2)
Ketcntuan lain yang ditetapkan ke m u di an , dari petjanjian ini.
belum
tercantum
8
pe rj anj ian ini akan yang tidak terpisahkan
dalam
dan rnerupakan bagian
dilakukan
'
(3) Pc.:rj ; t J Jj i ; t r l i r 1 r d i t ; m d ; t tn r q�; t l l i o lc i l PAI �A P l l-1/\ K, cl i b u �t l dal arn ran gka p 3 (Lig ;t) < b n l><:r rn ; l !cn t i c u k u p scr ta rn e rn p u n y a i k e k u a tan h u k u m yan
g
S<-l ! l l ; \ _
PIH AK KE DU A,
P ! H A K KE:SATU,
Badan Pcnclitian dan
Fakultas Kedokteran
Pengern bangan Keseha tan
Universitas Diponegor o
dr. Endang Ambarwati, Sp.KFR NIP
9
19560806 198503 2 00 r�
lampiran Pe1janjian Kerja Sarna :
Nomor
·--
No I
1l.
-
---·· -·----
Peneliti
�
I
3.
1 Eko Adhi
l'vlaret 2 0 1 2
---· ---··..····-'·------- -···-
.
--
130,925,000
·-·
-· -----
1 45 , 2 2 8 ,000
I --
Kadar P selectin, ADAMTS 1 3 d an factor
-
_j
147,962,000
von Witlebrand - pada ganggu111 hemostasis penderita lcptospi OSlS dcngan perdarahan · ----
4. I Ratnasari DC, dr,Msi.Med,SpOG
Hardaningsih, dr
Anggaran (Rp .)
--
. ---. -·-
I Galuh
----�-------
Judul Penelitian
NinuniRose----·-- -P�ngaruh lntervensi Diet pacla [:<'j brosis Index (FCI) Penderita Non-alec holic Fntly Diana, : dr,K,.!VlSi.Med.SpA Liver Disease (NAFLD)
Pangarsa, dr. SpPD
5.
: l
Tangga!
Analisis Korelasi antara Fakto r Risiko, Titer Antibodi Serum Epstein Barr Virus, Ekspresi LMP-1 dan CD 99 de ngan Tipe Histopatologik Kar�inoma Nas:)faring
Awal Prasetyo, dr, M.Kes, Sp.THT-KL
2.
HK.06 . 0 1 / l / 1696/2012
l l0 8 / U N 7 . 3 . 4 / D / K S / 2 0 1 2
Nomor
!
I
Pengaruh kadar vitamin D dar Vasculer Endothelial Growth Factor (VE GF) dalam memacu p rogre si fi tas dari pre :klamsia berat ------·---------
Pengaruh Suplementasi Kapsu 1 Ekstrak Ikan Gabus (Ophiocephalus S ia tus) di bandingkan Infus Albumin pa la Sindroma Nefrotik
I '
I
·-
147,484,000
1 50,000,000
7 2 1 ,599,000
1
K E M E N T E R IAN P E N D I D I KAN DAN K E B U DAYA A N
U N I V E RS ITAS D I P O N E G O R O Jalan Prof H . Soedarto, SH Tembalang Semarang Kotak Pos 1269 Telp : (024) 74600 1 2 Fax. : (024) 7460013 email : [email protected], [email protected]
SURAT KUASA
� f.$ /YH-T-: f!TYfJo iJ.
Nomor : ' -
-
-
.
Yang bertanda tangan di bawah ini : Nama
Prof Sudharto P. Hadi,
NIP
195403091980031003
Pangkat/Gol Jabatan
MES,
Ph. D
Pembina ·utama I IV/e
Rektor Universitas Dip on ego ro
Memberikan kuasa kepada : dr. Endang Ambarwati, Sp. KFR(K)
Nama N1P
19560806 198503200 1
Pangkat/Gol Jabatan Untuk l.
Pembina I IV/a
Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Dipo negoro
:
D e1i indak dalam jabalannya unluk dan atas nama Fakultas Kedokteran Universitas Dip onegoro, menan datangani
Perjanjian Kerjasama (PKS) Risbin lptekdok
2012
dengan Badan Litbang Kesehatan. 2.
Betianggung jawab atas pclaksanaan penelitan Risbin lptekdok 20 1 2 sesuai dengan PKS terscbut di atas.
Dern i kian surat kuasa ini dibuat untuk digunakan sebagaimana mestinya. Semarang, 29 Februari 2 0 1 2 : · ::
#
Hadi,
MES.,
Ph.D
•
--
-
-�- ••
(3) Perjanjian ini ditandatangani oleh PARA I�I I IAK, dibual dalam rangkap 3 (tiga) dan bermaterai cukup scrla mcmpunyai kekuatan hukum yang sam a.
PIHAK KEDUA, F'a!
PIHAK KESATU, Badan Penelitian dan Pengcm ba nga n Keseha tan
�1--r w � r �\
d r . T nsa NIP. .
. h unt Putn, MK e s
dr. Endang Am barwati, Sp.KF'R NIP oo(.:::>
.
19560806 198503 2
l963��f 2 1 989032001
Mengetahui, Kepala Badan Litbangkcs
��
01- r. Trihono, M.Sc NIP. 195402 14 1980 1 2 1 00 1
9
(3) Perjanjian ini ditanclalanga ni olch PARA PIHAK, dibual dalam rangkap 3 (tiga)
sam a .
clan
berma terai cukup
serta mempunyai kekualan h u k u m yang
PIHAK KESATU,
PlHAK KEDUA,
Badan Penelitian dan
Fakultas Kedokteran
Pengembangan Kesehatan
dr.
U niyersi tas Diponego ro
={-
'J,i Putri, MI<es Trisa W a:t
dr. Endang Am barwati, Sp.KFR
NIP. 1 9 6 30� );:11 98 903200 1
NIP 1 9 560806 198503 2 00 1 ---;::>
Mengetahui,
I<epala Ba
itbangkes
�
Dr. d
�
Trihono, M . Sc . N I P . l95402 14 1 9 8 0 1 2 1 0 0 1
9
(3)
Perjanjian ini ditandatangani oleh PARA PIHAK, dibuat dalam rangkap 3
(tiga)
sa rna
.
clan berrnaterai cukup serta mempunyai kekuatan hukum yang
PlHAK KESJ\T U ,
PIHAK KEDUA,
Badan Penelitian dan
Fakultas Kedokteran
Pengembangan Kesehatan ..
'·
.... �-_· . 1//-:· \. (' ...·. ·: �··.
��11M!/f��i lk!,...1i .r ::f £-
402EFAA�72�����
�\j:� ;Wiinlt.¥,.,��
1-
1} li NA M tl ll l U I\UI'I./\1
.
-r-
«@'ID i\\� :-}�1,;4.;:& 1.ir:�:.t \� ....l ""'�� :. \ \ ...
•'
'�< __
·,
.
Universitas D i ponegoro
·:-. . "., ", . ' .
• ,
:-
:
: ,
:
.... . : � :.: �:: j
.
d��:��������?���j;2��es :
.-.-:M�:nget�hui, ��"
',..
l:
:
Kpp·al;a· 'Badarl.' . -- · tb.angkes :.
'
.
. ,
..
'
.,
.,
�
. !
.
' • ' tr
' • ,
.
.
..
�
,'• '•
'
'•
:·
.
' ,·,
·o_r:
J 4
Trihonq, M.Sc o
I
•/
N I P . 1 9 54021..4 -1980 1 2 1 00 1 -·-
9
