WIREC. Alkalmazott gázkromatográfia I Rikker Tamás WESSLING Nemzetközi Kutató és Oktató Központ Kh.Np. Kft

WIREC

Alkalmazott gázkromatográfia I. 2010. Rikker Tamás WESSLING Nemzetközi Kutató és Oktató Központ Kh.Np. Kft. [email protected] www.wirec.eu

Amiről szó lesz

 Az alkalmazás körülményei

 Gyógyszeranalitikai alkalmazások  Környezetanalitikai alkalmazások

WIREC

A mai nap programja Az alkalmazás körülményei 

Jogi elvárások



Szakmai elvárások



Felhasználói elvárások



Eszköztár



Elmélet és valóság (kompromisszumok)

Gyógyszeranalitikai alkalmazások

WIREC

Jogi elvárások  Törvények és rendeletek tartalmazzák a kijelölt célokat és az alkalmazandó szakmai irányt.

 A cél lehet konkrét paraméter koncentrációjának határértékre történő vizsgálata, vagy döntési elv.

 A szakmai útmutatás kijelölhet kötelezően, vagy ajánlottan alkalmazandó szabványt, illetve megjelölheti az elvárt műszaki hátteret, alkalmasságot.

WIREC

Műszaki elvárások

 Szabványok (MSZ, EN, ISO, DIN, EPA)  Gyógyszerkönyv (PhHg, PhEur, USP)  Élelmiszerkönyv (MÉ)  Ajánlások (MADEP, ISO TR)  Cikkek

WIREC

Felhasználói elvárások

 A legfontosabb szempont

 Alapvetően az a cél, hogy a – lehetőleg jól megfogalmazott – kérdésre kielégítő választ adjunk. IDŐ

és PÉNZ!!

WIREC

Eszköztár ÁLTALÁNOS ELVÁRÁSOK

 Hatékonyság

 Termelékenység

 Rugalmasság

WIREC

Eszköztár Fontos elvárások a korszerű gázkromatográffal szemben: -

elektronikusan vezérelt hőmérséklet- és nyomásszabályozás több zónában,

-

számítógépes vezérlés és adatgyűjtés,

-

moduláris felépítés,

-

automata mintabeviteli eszközök csatlakoztathatósága

WIREC

Eszköztár INJEKTOROK H T R  Split/Splitless

+ ++ +

 PTV (Programmed Temperature Vaporizer) ++ - ++

 On-column

++ -

WIREC

-

Eszköztár DETEKTOROK ÁLTALÁNOS ELVÁRÁSOK  Hatékonyság (szelektivitás)

 Termelékenység (érzékenység)

 Rugalmasság (univerzális)

WIREC

Eszköztár DETEKTOROK

U

SZ

É

 FID

++

-

+

 MS

++

+

++

 ECD

-

++

++

 TCD

+

-

-

 NPD

-

+

+

 PID

-(+)

+(-)

+

 ELCD

-

++

++

 PFPD

-(+)

+(+)

+

WIREC

Eszköztár ANALITIKAI OSZLOPOK

Az elválasztás kulcsa!!

Döntő a jó választás!

Gazdag választék Geometriában, fázisban Jellemző a kapilláris oszlopok használata, DE a gyógyszeranalitika és a gázanalitika még jellemzően töltetes oszlopokat használ.

WIREC

Eszköztár

WIREC

Eszköztár

Egy elhanyagolt „apróság” Inlet liner

WIREC

Eszköztár

Még két „apróság”:  Szeptum

 Vivőgáz

WIREC

Eszköztár Automata mintaelőkészítő/-adagoló rendszerek

WIREC

Elmélet és valóság (kompromisszumok)

WIREC

Elmélet és valóság

Az analitikai alkalmazások tervezésénél meg kell találni azt az elfogadható kompromisszumot, ahol a megfelelő válasz adható a feltett

kérdésre, elfogadható ráfordítások árán.

WIREC

Kompromisszumok

TPH környezeti mintából

WIREC

Gyógyszeranalitika Termékek vizsgálata 

Hatóanyag-tartalom



Tisztaság

Szermaradékok a biológiai környezetben (hatóanyag , ill. metabolitok követése a terméktől, a gyógyítandón át a környezetig)

WIREC

Gyógyszeranalitika

Hatóanyag-tartalom meghatározása

 Viszonylag egyszerű (gyakran nem korszerű) módszerek  Jól behatárolható kémiai környezet

 Szigorú minőségi (dokumentálási) kötelezettség

WIREC

Gyógyszeranalitika Hatóanyag-tartalom meghatározása „X”-tabletta Butil-hidroxi-anisol (BHA) tartalmi meghatározása Oldatok: 

Rendszeralkalmassági (BHA/BHT R>1,5),



Vak (aceton),



Referencia (BHA/aceton),



Minta (elporított tabletta acetonban).

WIREC

Gyógyszeranalitika Hatóanyag-tartalom meghatározása „X”-tabletta Butil-hidroxi-anisol (BHA) tartalmi meghatározása

Kromatográfiás paraméterek  Oszlop

HP-624 (30m x 0,53mm x 3µm)

 Kolonnatér hőmérséklete

175 °C

 Futásidő

10 min

 Injektor hőmérséklete

270 °C

 FID hőmérséklete

290 °C

 Vivőgáz (N2) áramlási sebesség

10 ± 1 ml/perc

 Segédgáz (N2) áramlási sebesség

20 ± 1 ml/perc

 Injektálás

1µl, split 1:50

WIREC

Gyógyszeranalitika

FID1 A, (U:\HPCHEM\2\DATA\050325\025F2501.D) Norm.

BHA Referencia 11.770

5900 5800 5700

FID1 A, (U:\HPCHEM\2\DATA\050325\002F0201.D) Norm.

5600

BHA RA

9500

12.153

5500

11.740

9000

8500

5400 5300 5200 11

8000

11.2

11.4

11.6

11.8

12

12.2

12.4

12.6 min

12

12.2

12.4

12.6 min

7500 FID1 A, (U:\HPCHEM\2\DATA\050325\005F0501.D) Norm.

7000

BHA Minta 10000

11.2

11.4

11.6

11.8

12

12.2

12.4

12.6

min

11.731

11

9000

8000

7000

6000

5000 11

WIREC

11.2

11.4

11.6

11.8

Gyógyszeranalitika Hatóanyag-tartalom meghatározása

WIREC

Gyógyszeranalitika Tisztaság Oldószer-maradékok meghatározása

(ICH Guideline for Residual Solvents)  Class 1. elkerülendő karcinogén oldószerek (pl.: benzol) QL: 1-10 mg/kg

 Class 2. korlátozott neurotoxin, ill. teratogén oldószerek (pl.: acetonitril) QL: 50-2000 mg/kg  Class 3. alacsony toxicitású oldószerek (pl.: 2-propanol) QL: >5000 mg/kg  Egyéb, a technológia során előforduló, nem bizonyítottan toxikus oldószerek

WIREC

Gyógyszeranalitika Oldószer-maradék meghatározása „X”-tabletta 2-propanol-tartalmának meghatározása QL: 125000mg/kg (Class 3. 50 mg/nap) Oldatok



Rendszeralkalmassági (DKM/2-propanol DMF-ban)



Referencia (2-propanol DMF-ban)



Vak (DMF)



Minta (darabolt tabletta DMF-ban)

WIREC

Gyógyszeranalitika FID1 A, (U:\HPCHEM\2\DATA\050406\001F0101.D)

FID1 A, (U:\HPCHEM\2\DATA\050331\003F0301.D)

1.343

counts 50000

counts

2-Propanol RA 250000

2-Propanol Referencia 1.215

40000 200000

1.220

30000 150000

20000

100000

10000

50000

1.2

1.3

1.4

1.5

1.6

1.7

1.8

1.9

min

1.2


1.3

1.4

1.5

1.6

1.7

1.8

1.5

1.6

1.7

1.8

1.9

min


counts

counts

18000

18000

2-Propanol Vak

14000

14000

12000

12000

10000

10000

8000

8000

6000

6000

4000 1.2

1.342

1.221

16000

1.3

1.216

2-Propanol Minta

16000

4000 1.4

1.5

1.6

1.7

1.8

1.9

min

1.2

1.3

1.4

WIREC

1.9

min

Gyógyszeranalitika Oldószer-maradék meghatározása Mérés paraméterei 

Analitikai oszlop: HP ULTRA-2 (30m x 0,2mm x 0,33µm)



Hőmérsékletprogram: 45°C (6’), 25°C/perc 200°C



Injektálás: 180°C, split 1:100, 1cm3 gőztér



Vivőgáz: H2 5.0 1,4 cm3/perc állandó térfogatáram



Detektor: FID 270°C

WIREC

Gyógyszeranalitika Oldószer-maradék meghatározása

Mintaelőkészítés  0,2 cm3 DMF (oldat) + 1,8 cm3 H2O + 0,8 g Na2SO4 10 cm3-es HS edényben 

Inkubáció: 80°C, 20’



Transfer line hőmérséklete: 180°C



Hurok hőmérséklete: 105°C



Túlnyomás: 10 psi, 0,5’



Huroktöltés: 0,1’



Injektálás: 0,5’

WIREC

Gyógyszeranalitika

„Hurkos” HS működése

WIREC

Gyógyszeranalitika Oldószer-maradékok meghatározása II. Restek alkalmazás

WIREC

Gyógyszeranalitika Oldószermaradékok meghatározása III.

WIREC


WIREC


WIREC


WIREC


WIREC


WIREC

Gyógyszeranalitika

Micro Liquid/Liquid Extraction alkalmazás

FID1 A, (050127C\056F0301.D)

400

9.206 - Q3

8.721 - Q2

pA

8.192 - Q1

Nagy vízoldékonyságú alapanyag C7-C12 szénhidrogén-tartalmának meghatározása

350

300

250

HP ULTRA-2 (25 m x 0.2 mm x 0.33 µm)

Carrier gas:

Hydrogen 5.0

Flow rate

1.1 ml/min

Oven temperature: FID temperature Injector temperature: Injection volume:

200

150

4.555 - n-heptan

Column:

30 °C (4 min) 30 °C/min to 290°C (2min)

100

300 °C

280 °C 2 µl, pulsed split less

50

4

5

WIREC

6

7

8

9

10

11

12

13

min

Gyógyszeranalitika MLLE

WIREC

Gyógyszeranalitika MLLE

WIREC

Gyógyszeranalitika

Antibiotikum meghatározása állati

szövetben Cél: kiürülési (lehetséges hasznosítási) idő

meghatározása QL: 50 µg/kg!! Rendkívül összetett, zavaró kémiai

környezet!

WIREC

Gyógyszeranalitika Antibiotikum meghatározása állati szövetben

Megvalósítás: bonyolult mintaelőkészítés, GC-MS

25 lépés!: darálás-extrakciós standard hozzámérése-..-fehérjék kicsapása-..- SPE C18EC-..-acilezés-koncentrálás-..oldószercsere

GC-MS SIM üzemmódban

WIREC

Gyógyszeranalitika Antibiotikum meghatározása állati szövetben 50% alatti visszanyerések!

Lincomycin

Számítás az extrakciós standardra vonatkoztatva: CLIN = ALIN x CCLN x 200 x SCLN / mSamplex ACLN x SLIN Ahol: CLIN : Concentration of the Lincomycin in the sample [µg/kg] ALIN : Area of Lincomycin in the sample chromatogram CCLN : Concentration of the Clindamycin in the standard solution [µg/cm3]

mSample : weight of sample (g) SCLN : Slope of the calibration curve of Clindamycin [dm3/µg] ACLN : Area of Clindamycin in the sample chromatogram

SLIN : Slope of the calibration curve of Lincomycin [dm3/µg]

WIREC

Clindamycin

Gyógyszeranalitika

Tehén tőgy kromatogramja

Adagolt tehén tőgy kromatogramja

WIREC

Gyógyszer(?)analitika

WIREC

Gyógyszer(?)analitika

WIREC

WIREC. Alkalmazott gázkromatográfia I Rikker Tamás WESSLING Nemzetközi Kutató és Oktató Központ Kh.Np. Kft

Recommend Documents