VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION

FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE LABO: FLVVM

SECTIE - SECTION: Biologische analyses

VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode

Bepaling van het aantal Pseudomonas aeruginosa in water

Méthode d’analyse

I-MET-042

Techniek

Filtratietechniek – aflezen platen – bevestiging

Technique

ISO 16266:2006

Matrix / matrixgroep

water

Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / 21/10/2014 Date du dernière adaption

FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE LABO: FLVVM




Overzicht van de prestatiekenmerken : De herhaalbaarheid bedraagt 0.20 log. De meetonzekerheid bedraagt 0.25 log en de intralabreproduceerbaarheid 0.35 log..



De validatie voldoet aan de procedure LAB 00 P180



De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn: Deelnemen aan een ringtest met het bekomen van goede resultaten. Behalen van een herhaalbaarheid van 0.50 log en intralabreproduceerbaarheid van 1 log



Inhoud:

Versie

Herziening

Reden

Wijzigingen

door / datum 1

EH / 21-102014

Herwerking volgens nieuwe template, instructie en aanvulling met gegevens

Volledig

FAVV – BESTUUR LABORATORIA / AFSCA – ADMINISTRATION DES LABORATOIRE LABO: FLVMM


VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode

Bepaling van het aantal Pseudomonas aeruginosa in water

Méthode d’analyse

I-MET-042

Techniek

Filtratietechniek – aflezen platen – bevestiging

Technique

ISO 16266:2006

Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de

Water

matrices Type validatie Type de validation

Verificatie

Verantwoordelijke (Naam

Elly Harnie

en functie)

Sectieverantwoordelijke biologische analyses

Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door

Naam – Nom Elly Harnie

Rédaction par

Functie - Fonction:

Handtekeningen - Signatures: get.

Sectieverantwoordelijke biologische analyses Datum - Date: 20/10/2014 Medewerkers

Analisten microbiologie

(Naam en functie)

Liesbeth Stas, Kristof De Greif, Sandra De Cocker, Anja Van Beversluys, Stefanie

Collaborateurs

Vanbiesbrouck, Conny De Schepper, Chantal Focquet, Mieke De Mits

(Nom et fonction) Periode van validatie

Start - Début:

Période de validation

Einde - Fin: Dit rapport is een herwerking van het originele rapport opgesteld in 2009-2010, naar aanleiding van de nieuwe template.

Methode goedgekeurd en Naam – Nom Ronny Martens geschikt bevonden door

Handtekeningen - Signatures: get.

Functie - Fonction: QAM Datum - Date: 21/10/2014

Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par

Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P 00 180.

LAB 00 P 180 F 003 validatiedossier pseudomonas v.01 2014-02-24 1/11



VALIDATIERAPPORT – RAPPORT DE VALIDATION ................................................................................. 1 MATRICES : ..................................................................................................................................................... 3 1.

INLEIDING ................................................................................................................................................ 3

2.

INITIËLE PROEVEN: BESMETTEN VAN WATER MET PSEUDOMONAS ........................................... 4

3.

BEPALEN VALIDATIEPARAMETERS .................................................................................................... 5 3.1

JUISTHEID BESMETTE MONSTERS ............................................................................................................... 6

3.2

HERHAALBAARHEID BESMETTE MONSTERS ................................................................................................... 8

3.3

INTRALABREPRODUCEERBAARHEID EN MEETONZEKERHEID BESMETTE MONSTERS .............................................. 8

3.4

KOELING BESMETTE MONSTERS.................................................................................................................. 9

4.

RINGANALYSE ......................................................................................................................................... 9

5.

BESLUIT .................................................................................................................................................. 10

6.

FOTO’S .................................................................................................................................................... 10




Samenvatting validatiegegevens – Résumé des données de validation Overzicht matrices/ validatieparameters/ criteria Matrices : Water (gebruikt in bereidingen van levensmiddelen, tafelwater, behandeld leidingwater,…) Volgende parameters werden bepaald : -

Herhaalbaarheid

-

Intralabreproduceerbaarheid (en meetonzekerheid)

-

Relatieve juistheid

Criteria : Volgende criteria werden vooropgesteld : -

Voor de juistheid van de besmette monsters  0.35 log

-

Voor de herhaalbaarheid 0.22 log

-

Voor de intralabreproduceerbaarheid 0.47 log

Overzicht validatietesten

1.

Inleiding

Dit dossier bevat een herwerking van het oorspronkelijke validatiedossier (2009-2010) van de bepaling van Pseudomonas aeruginosa in water, aangevuld met nieuwe gegevens. In punt 2 van het dossier worden de initiële proeven beschreven en onder punt 3 de validatieproeven. In punt 4 wordt de ringtest beschreven.



2.


Initiële proeven: besmetten van water met Pseudomonas

Omdat waterstalen nauwelijks besmet zijn met Pseudomonas werden stalen besmet om te testen. Het filtratiesysteem werd getest bij de opstart van Enterococcen (zie desbetreffende validatiedossier). Werkwijze Er werd gebruikgemaakt van Quanti-cults voor het besmetten van stalen. Werkwijze oplossen Quanti-cult Pseudomonas aeruginosa: -

Neem een vial (A) met een blauw dekseltje en plaats het in een broedstoof bij 37 °C om de vloeistof op te warmen gedurende 5 tot 10 minuten

-

Neem een vial (B) met een rood dekseltje en laat het op kamertemperatuur komen

-

Neem vial A uit de broedstoof en verwijder het blauwe deksel en plaats het rode deksel van vial B op vial A.

-

Plaats vial A in het blauwe rekje, aanwezig in de doos

-

Draai het blauwe rek om en plaats het in een broedstoof op 37°C gedurende 15 minuten

-

Na incubatie: meng door de vial verschillende keren om te draaien Opgelet: niet schudden

Controleer of alle bacteria opgelost zijn. Indien er nog zwarte partikeltjes te zien zijn op het rode deksel, plaats de vial terug in de broedstoof voor 1 tot 2 minuten Werkwijze besmetting (verwacht aantal < 100 cfu): -

Breng 400 µl van de opgeloste Quanti-cult in 400 ml drinkwater en meng goed

-

Filtreer hiervan 100 ml en leg de filter op CN-agar en incubeer.

Doe dit tweemaal per persoon. Analyseer ook het blanco monster drinkwater (100 ml filtreren). Plaat 100 µl van de Quanti-cult uit op CN-agar om de concentratie te tellen. Tel de platen na 44 tot 48 h en controleer ze na 2 dagen koeling (aantal en uitzicht kolonies). Bevestig 5 kolonies per positieve plaat. De analysereeks ziet er als volgt uit: -

besmet water: 1 plaat

-

besmet water duplo: 1 plaat

-

blanco water: 1 plaat

-

telling Quanti-cult = 1 plaat (100 µl)




Resultaten De proef werd door SDC en AVB uitgevoerd op 17/03/09. Een samenvatting van de resultaten is aanwezig in onderstaande tabel. Tabel Resultaten proef 1 Pseudomonas aeruginosa Monster

AVB

SDC

cfu/100ml cfu/100ml

AVB

SDC

Log cfu/100ml

Log cfu/100ml

1a

16

5**

1.21

0.70

1b

14

8**

1.15

0.90

2a

7**

11

0.85

1.04

2b

11

10

1.04

1

blanco

<1

<1

** geschatte aantallen

In 100 µl bleken 5 - 10 cfu’s terug te vinden te zijn (= gemiddeld 7.5 cfu/ml of 0.88 log *) De stam Enterococcus faecalis gaf een goede groei op plaat (geel, fluorescerende kolonies). De kolonies, afkomstig van de quanti-cult gaven blauw-groene kolonies. Op beide soorten werden alle bevestigingstesten uitgevoerd, met een goed resultaat tot gevolg. King B agar bleek na 2 dagen koeling nog altijd goed af te lezen. Besluit De juistheden en duploverschillen zijn goed, ook al gaat het soms om geschatte aantallen. Bij een volgende proef zal er op een iets hoger niveau worden besmet.

3.

Bepalen validatieparameters

De proef, beschreven onder 1. werd uitgevoerd met steeds verschillende koppels en op verschillende tijdstippen om de validatieparameters te bepalen. De proef werd iets aangepast omdat op een hoger niveau werd besmet (800 µl opgeloste Quanti-cult toevoegen aan 400 ml water i.p.v. 400 µl). -

Breng 800 µl van de opgeloste Quanti-cult in 400 ml drinkwater en meng goed



-


Filtreer hiervan 100 ml en leg de filter op CN-agar en incubeer 44-48°C bij 36°C±2°C

Doe dit tweemaal per persoon. Analyseer ook het blanco monster drinkwater (100 ml filtreren). Plaat 100 µl van de Quanti-cult uit op CN-agar om de concentratie te tellen. Tel de platen na 44 tot 48 h en controleer ze na 2 dagen koeling (aantal en uitzicht kolonies). Bevestig 5 kolonies per positieve plaat. De analysereeks ziet er als volgt uit: -

besmet water: 1 plaat

-

besmet water duplo: 1 plaat

-

blanco water: 1 plaat

-

telling Quanti-cult = 1 plaat (100 µl)

AVB en SDC gaven de praktische uitleg aan de analisten. Er werden verschillende types van drinkwater getest.

3.1

Juistheid besmette monsters

De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De relatieve juistheden werden uitgerekend aan de hand van een referentiewaarde, bepaald in elke reeks. Alle resultaten voldoen aan het vooropgestelde criterium van  0.35 log, met uitzondering van de reeksen uitgevoerd op 23/04/2009 en 16/6/2009 (te wijten aan geschatte aantallen van de Quanticult zelf).




Tabel Overzicht relatieve juistheid d (log) Datum 17/03/2009

Monster

Analist

cfu / 100 ml

d

1a

SDC

5

-0,18

AVB

16

0,32

SDC

8

0,02

AVB

14

0,27

SDC

20

0,04

LS

15

-0,08

SDC

26

0,15

LS

24

0,12

AVB

22

0,18

SV

16

0,04

AVB

17

0,07

SV

19

0,12

LS

27

0,06

KDG

34

0,16

LS

26

0,04

KDG

27

0,06

5a

SDC

21

0,22

SV

23

0,26

5b

SDC

27

0,33

SV

20

0,20

LS

14

0,15

KDG

15

0,18

LS

18

0,26

KDG

14

0,15

LS

16

0,50

MDM

15

0,48

1b 31/03/2009

2a 2b

31/03/2009

3a 3b

6/04/2009

4a 4b

6/04/2009

10/04/2009

6a 6b

23/04/2009

8a 8b

16/06/2009

9a 9b

LS

11

0,34

MDM

15

0,48

CDS

20

0,42

SDC

23

0,48

CDS

23

0,48

SDC

21

0,44

Blanco’s < 1 cfu / 100 ml ; a en b = duplo’s



3.2


Herhaalbaarheid besmette monsters

De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De herhaalbaarheid bedraagt 0.20 log. Daarmee voldoet ze aan het eigen criterium van 0.22 log. Tabel Gegevens herhaalbaarheid (cfu/100ml) Datum

Analist

17/03/2009

SDC

5

8

AVB

16

14

SDC

20

26

LS

15

24

AVB

22

17

SV

16

19

LS

27

26

KDG

34

27

SDC

21

27

SV

23

20

31/03/2009 31/03/2009 6/04/2009 6/04/2009 14/04/2009 23/04/2009 23/04/2009 16/06/2009 22/09/2009

3.3

Resultaat 1 Resultaat 2

LS

14

18

KDG

15

14

KDG

33

26

CDS

30

25

LS

16

11

MDM

15

15

CDS

20

23

SDC

23

21

MDM

21

17

LS

18

18

Intralabreproduceerbaarheid en meetonzekerheid besmette monsters

De meetonzekerheid werd bepaald conform de instructie LAB P 507 Microbiologie – Schatting van de Meetonzekerheid. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De meetonzekerheid bedraagt 0.25 log en de intralabreproduceerbaarheid 0.35 log.




Tabel Gegevens meetonzekerheid (drinkwater)

3.4

Staal nummer

Datum

Resultaat A (kve/ 100ml)

Resultaat B (kve/ 100ml)

1

17/03/2009

5

16

2

31/03/2009

20

15

3

31/03/2009

22

16

4

06/04/2009

27

34

5

06/04/2009

21

23

6

10/04/2009

14

15

7

23/04/2009

33

30

8

23/04/2009

16

15

9

16/06/2009

20

23

10

22/09/2010

21

18

Koeling besmette monsters

Tijdens de validatietesten werd in verschillende reeksen de koeling uitgetest van platen (controle uitzicht en hoeveelheid kolonies ; controle koeling bevestigingstesten ; resultaten). Een overzicht wordt gegeven in onderstaande tabel.

Datum reeks

Analist

17/03/09

AVB

31/03/09

Tabel Samenvatting testen koelen Test

OK/NOK

2 d koelen King B

OK

LS

2 d koelen CN-agar na incubatie

OK

31/03/09

SV


OK

06/04/09

LS


OK

06/04/09

KDG


OK

1 d koelen NA agar water na incubatie De ISO norm 8199 laat toe om platen te koelen indien ze niet dadelijk kunnen afgelezen worden indien er geen veranderingen optreden. Bovenstaande tabel toont aan dat het koelen van platen na incubatie geen problemen geeft.

4.

Ringanalyse

Op 13/10/2009 werd deelgenomen aan een ringtest (KWR). Er werden 4 stalen geanalyseerd en de resultaten werden als ‘Goed’ beoordeeld door de organisator.



5.


Besluit

De herhaalbaarheid bedraagt 0.20 log. De meetonzekerheid bedraagt 0.25 log en de intralabreproduceerbaarheid 0.35 log. Daarmee voldoen ze aan de vooropgestelde criteria.

6.

Foto’s

Hieronder zijn enkel foto’s van de methode aanwezig.

Filtratietoestel




CN agar (blanco en geënt)

Buisje King B agar (bevestiging)


VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION

Recommend Documents