Univerzita obrany Brno Fakulta vojenského zdravotnictví v Hradci Králové. 8. fakultní konference studentů doktorských programů

Univerzita obrany Brno Fakulta vojenského zdravotnictví v Hradci Králové

8. fakultní konference studentů doktorských programů

Hradec Králové dne 7. října 2014

Organizační informace Pořadatel konference: Fakulta vojenského zdravotnictví Univerzity obrany v Hradci Králové Organizační zabezpečení: Ivana Šáchová (OdVP), tel.: 973253147, e-mail: [email protected] Ústní sdělení: Doba trvání přednášky 10 minut, dalších 5 minut je vyhrazeno pro diskusi. Dobu vyhrazenou pro prezentaci je nutné dodržet. Složení hodnotících komisí: Hlavní koordinátor konference: prof. MUDr. Pavel Boštík, Ph.D. 1. sekce – Epidemiologie, Lékařská mikrobiologie, Infekční biologie, Vojenská radiobiologie: předseda: členové:

plk. prof. MUDr. Roman Chlíbek, Ph.D. doc. RNDr. Vanda Boštíková, Ph.D. prof. MUDr. Jiří Stulík, CSc. pplk. doc. RNDr. Zuzana Šinkorová, CSc.

2. sekce – Preventivní medicína a ochrana veřejného zdraví, Vojenská chirurgie, Vojenské vnitřní lékařství: předseda: členové:

prof. MUDr. Ladislav Jebavý, CSc. pplk. doc. PharmDr. Daniel Jun, Ph.D. prof. MUDr. Miroslav Špliňo, DrSc. mjr. doc. MUDr. Zdeněk Šubrt, Ph.D.

3. sekce Toxikologie: předseda: prof. MUDr. Jiří Kassa, CSc. členové: pplk. prof. Ing. Jiří Cabal, CSc. pplk. doc. RNDr. Miroslav Pohanka, Ph.D., DSc. doc. MUDr. Jiří Bajgar, DrSc. Hodnotící kritéria vystoupení a jejich bodové ohodnocení: hodnotící kritéria odborná úroveň přínos práce pro obor úroveň prezentace a úroveň vystoupení v diskusi formální úprava maximální počet bodů

2

bodová stupnice 0 – 10 0–5 0 – 10 0-5 30

Program 8. fakultní konference studentů doktorských programů konané dne 7. října 2014 od 8.00 hodin na Fakultě vojenského zdravotnictví Univerzity obrany v Hradci Králové Třebešská 1575, 500 01 Hradec Králové 1 08.00-08.30

Prezentace studentů, zápis do 2. a vyššího ročníku studia (posluchárna č. VI)

08.30-09.00

Zahájení konference, představení hodnotících komisí, rozdělení studentů do sekcí (posluchárna č. VI) – prof. MUDr. Pavel Boštík, Ph.D.

1. sekce – Epidemiologie, Lékařská mikrobiologie, Infekční biologie, Vojenská radiobiologie (posluchárna VI) DSP Epidemiologie: 09.00-09.15

MUDr. Jan Machač (3. ročník) – Epidemiologie pertuse v dospělé populaci v ČR

DSP Lékařská mikrobiologie: 09.15-09.30 09.30-09.45

09.45-10.00

MUDr. Lucie Bareková (2. ročník) – Monitorování antibiotické rezistence u vybraných původců nozokomiálních infekcí Ing. Monika Coufalová (3. ročník) – Detekce mykobakterií a prověření fenotypového projevu rezistence u Mycobacterium tuberculosis molekulárně biologickými metodami z klinického materiálu Mgr. Radek Sleha (3. ročník) – Sledování incidence Mycoplasma hominis a Ureaplasma urealyticum v průběhu asistované reprodukce

DSP Infekční biologie: 10.00-10.15 10.15-10.30 10.30-10.45 10.45-11.00

Mgr. Veronika Hostýnková (2. ročník) – Identifikace imunogenních epitopů mikroba Francisella tularensis Mgr. Daniela Putzová (3. ročník) – Molekulární mechanismy patogeneze mikroba Francisella tularensis Mgr. Ivo Fabrik (4. ročník) – Mapování intracelulárních pochodů primárních dendritických buněk v časné fázi interakce s F. tularensis Mgr. Iva Šenitková (4. ročník) – Charakterizace vztahu struktury a funkce domén proteinu FTS_1067 bakterie Francisella tularensis

DSP Vojenská radiobiologie: 11.00-11.15 11.15-11.30

MUDr. Aleš Hlávka (2. ročník) – Význam IGRT v léčbě karcinomu prsu Mgr. Kamila Ďurišová (2. ročník) – Využití inhibice DNA reparačních kináz v radiosenzibilizaci nádorových buněk

3

2. sekce – Preventivní medicína a ochrana veřejného zdraví, Vojenská chirurgie, Vojenské vnitřní lékařství (posluchárna VII) DSP Preventivní medicína a ochrana veřejného zdraví: 09.00-09.15 09.15-09.30 09.30-09.45

MUDr. Pavel Hyšpler (3 ročník) – Vliv vnějších faktorů na změnu barvy dentice a možnosti prevence Mgr. Hana Zmrzlá (3. ročník) – Nadváha a obezita u dětí MUDr. Jan Psutka (4. ročník 5. rokem studující) – Vybrané hygienické aspekty zdravotnického zabezpečení v AČR při zahraničních operacích v Afghánistánu

DSP Vojenské vnitřní lékařství: 09.45-10.00 10.00-10.15

kpt. MUDr. Tomáš Kupsa (4. ročník) – Analýzy vybraných prognostických faktorů u akutních myeloidních leukémií mjr. MUDr. Martin Jakl (4. ročník 5. rokem studující) – Dlouhodobý dopad selhání protidestičkové léčby u pacientů s akutním koronárním syndromem

DSP Vojenská chirurgie: 10.15-10.30 10.30-10.45 10.45-11.00

11.00-11.15

pplk. MUDr. Daniel Kovář (4. ročník) – Přínos CT navigace v chirurgii VDN pro zlepšení čichu, snížení recidiv nosní polypózy a komplikací mjr. MUDr. Radek Doležel (4. ročník 5. rokem studující) – Efekt učení perorální endoskopické myotomie během prvního roku ověřování metody v České republice mjr. MUDr. Radek Pohnán (4. ročník 5. rokem studující) – Srovnání operační zátěže laparoskopické oproti konvenční distální pankreatektomii v experimentu na velkém laboratorním zvířeti MUDr. Aleš Fibír (4. ročník 5. rokem studující) – Biomechanika nervus medianus před a po dekompresi karpálního tunelu

3. sekce – Toxikologie (Purkyňův salonek) 09.00-09.15 09.15-09.30 09.30-09.45 09.45-10.00 10.00-10.15 10.15-10.30

13.00

Mgr. Ondřej Benek (3. ročník) – Deriváty frentizolu jako nové modulátory mitochondriálního enzymu ABAD pro léčbu Alzheimerovy nemoci RNDr. Alžběta Kračmarová (3. ročník) – Biochemické aspekty neurodegenerativních poruch MVDr. Michal Pavlík (3. ročník) – Využití SIA při studiu otrav nervověparalytickými látkami – in vivo laboratorní model Mgr. Irena Voborníková (3. ročník) – Stanovení glutathionu Ellmanovou metodou Mgr. Zuzana Křenková (4. ročník) – In vitro testování nových reaktivátorů butyrylcholinesterasy pro přípravu „pseudokatalytického scavengeru“ Mgr. Filip Zemek (4. ročník) – Vazba reaktivátorů a inhibitorů AChE na albumin

Zhodnocení průběhu konference a vyhlášení výsledků – posluchárna č. VI.

4

Příspěvky soutěžících jsou řazeny v jednotlivých sekcích podle ročníků. Za obsah práce, gramatickou a slovesnou úroveň zodpovídají autoři. U některých příspěvků byly provedeny pouze formální úpravy textů.

1. sekce – Epidemiologie, Lékařská mikrobiologie, Infekční biologie, Vojenská radiobiologie DSP Epidemiologie: Hodnost, jméno a příjmení: MUDr. Jan Machač Školitel: plk. prof. MUDr. Roman Chlíbek, Ph.D. Téma sdělení: Epidemiologie pertuse v dospělé populaci v ČR Anotace práce: Cíl práce: Cílem projektu je určit seroprevalenci infekce Bordetella pertussis v dospělé populaci v ČR. Určit věkově specifickou seroprevalenci specifických anti-PT IgG u subjektů 4 věkových kategorií (18-29, 30-44, 45-49, 60+). Určit rozdíly v seroprevalenci podle věku, pohlaví, kontaktu s pertussí, anamnézy dlouhotrvajícího kašle v uplynulých 12 měsících, historie očkování proti pertussi. Identifikovat subjekty s asymptomatickým průběhem pertuse v uplynulých 12 měsících. Použitá metodika: Stanovení hladin IgG protilátek proti pertusovému toxinu (PT) komerčním ELISA testem (Pertusscan PT-G, EuroDiagnostica AB, Švédsko), v souladu s pokyny výrobce v Národní referenční laboratoři pro difterii a pertussi. Statistické zpracování dat získaných z dotazníků bylo provedeno standardními statistickými nástroji programů XLSTAT a SPSS. Dosažené výsledky: Podíl 0,4% (95% CI 0,17 - 0,79%) z celkového počtu subjektů s anti-PT na úrovni alespoň 62,5 ESEN jednotek / ml vede k odhadované incidenci infekce B. pertussis v roce předcházejícím roku získání sér 699 případů na 100000 obyvatel. Podíl hlášených případů dle srovnání s epidemiologickými daty tvoří 0,164% nebo 1: 610. Závěr: Výsledky naší studie potvrzují předpokládanou výraznou podhlášenost pertuse v České republice. Předpokládaná incidence pertuse v ČR je 200-800 x vyšší než hlášená.

5

DSP Lékařská mikrobiologie: Hodnost, jméno a příjmení: Školitel: Téma sdělení:

MUDr. Lucie Bareková RNDr. Irena Hanovcová, CSc. Monitorování antibiotické rezistence u vybraných původců nozokomiálních infekcí

Anotace práce: Cíl práce: Popsat spektrum bakteriálních původců nejvýznamnějších nozokomiálních infekcí, zmapovat úroveň bakteriální rezistence a výskyt multirezistence u vybraných bakteriálních druhů. Použitá metodika: Bakteriální rezistence a multirezistence byla monitorována u původců nozokomiálních infekcí krevního řečiště (NIKR). Tyto infekce sice nepatří mezi nejčastěji se vyskytující nozokomiální infekce, ale jejich význam je dán tím, že jsou spojeny s vysokou mortalitou a významnými náklady na zdravotní péči. Monitorování navázalo na celonemocniční sledování NIKR, které probíhá v Pardubické krajské nemocnici a.s. (PKN) od začátku roku 2008. Do sledování byly zařazeny kmeny izolované z hemokultur od pacientů s mikrobiologicky potvrzenými případy infekce krevního řečiště, kteří byli hospitalizováni v PKN. Citlivost k antibiotikům byla vyšetřována pomocí fenotypových metod. Dosažené výsledky: Od začátku roku 2008 do konce roku 2013 bylo celkem izolováno 741 bakteriálních kmenů. Nejčastějšími původci byly koaguláza-negativní stafylokoky, Klebsiella pneumoniae a Staphylococcus aureus. 27 % kmenů Staphylococcus aureus bylo MRSA, 46 % kmenů Klebsiella pneumoniae bylo producenty širokospektrých betalaktamáz typu ESBL. Závěr: Monitorování bakteriální rezistence u původců NIKR potvrdilo vysokou úroveň rezistence především u kmenů Staphylococcus aureus a Klebsiella pneumoniae, která vyplývá z lokální epidemiologické situace na některých odděleních nemocnice.

6

Hodnost, jméno a příjmení: Školitel: Téma sdělení:

Ing. Monika Coufalová pplk. MUDr. Jan Smetana, Ph.D. Detekce mykobakterií a prověření fenotypového projevu rezistence u Mycobacterium tuberculosis molekulárně biologickými metodami z klinického materiálu

Anotace práce: Cíl práce: Porovnání molekulárně-biologické detekce mykobakterií a jejich rezistentních forem získaných z klinických vzorků od pacientů z Thomayerovy nemocnice s kultivačními metodami. Použitá metodika: testována multiplex real-time PCR souprava k detekci Mycobacterium tuberculosis (MTB) a atypických mykobakterií (NTM) z klinických materiálů s následnou detekcí rezistence na první řadu antituberkulotik (isoniazid, rifampicin) v případě pozitivity na MTB. 2) použita multiplex PCR souprava k detekci první (isoniazid, rifampicin) a druhé řady antituberkulotik (fluorochinolony a injekčně aplikovaná léčiva) z vykultivovaných kmenů MTB. Současně byly vzorky kultivovány na půdách Löwenstein / Jensen, Ogawa a na BD BBL™ MGIT™. Vykultivované kmeny mykobakterií byly dále kultivovány na pevných půdách obsahujících základní antituberkulotika k získání jejich citlivostí na tato antituberkulotika. Dosažené výsledky: První molekulárně biologickou metodou bylo analyzováno 22 klinických vzorků pozitivních na MTB. Druhou molekulárně biologickou metodou bylo otestováno 22 kmenů MTB. Z důvodu malého počtu vlastních pozitivních vzorků budou dále analyzovány další vzorky a klinické kmeny spolupracujícím pracovištěm. Závěr: Zatím nebyla dokončena analýza vzorků z obou pracovišť. Hodnost, jméno a příjmení: Školitel: Téma sdělení:

Mgr. Radek Sleha doc. RNDr. Vanda Boštíková, Ph.D. Sledování incidence Mycoplasma hominis a Ureaplasma urealyticum v průběhu asistované reprodukce

Anotace práce: Přítomnost Mycoplasma hominis a Ureaplasma urealyticum v lidském urogenitálním traktu představuje rizikový faktor pro vznik zánětlivých změn, které mohou negativně ovlivnit reprodukční schopnost obou partnerů. Cílem práce je stanovit incidenci M. hominis a U. urealyticum u partnerských dvojic léčených v Centru asistované reprodukce SANUS Pardubice. Průkaz mykoplazmat jsme prováděli kultivací na selektivně-diagnostických PPLO půdách. Výsledky jsme ověřovali molekulárně biologickou metodou - polymerázovou řetězovou reakcí. Současně jsme testovali citlivost izolovaných mikroorganismů na ciprofloxacin, doxycyklin, erythromycin a azithromycin mikrodiluční bujónovou metodou. Celkově jsme vyšetřili klinické vzorky od 111 partnerských dvojic. Ve vzorcích vyšetřených žen jsme potvrdili přítomnost M. hominis v 9 (8,1 %) a U. urealyticum v 44 (39,6 %) případech. U mužů se M. hominis vyskytovalo pouze v 5 (4,5 %) případech a U. urealyticum ve 34 (30,63 %) vyšetřených vzorcích. V naší studii jsme zjistili častější výskyt U. urealyticum oproti M. hominis. V závislosti na pohlaví jsme prokázali vyšší frekvenci výskytu urogenitálních mykoplazmat u žen.

7

DSP Infekční biologie: Hodnost, jméno a příjmení: Školitel: Školitel specialista: Téma sdělení:

Mgr. Veronika Hostýnková prof. MUDr. Jiří Stulík, CSc. Ing. Marek Link, Ph.D. Identifikace imunogenních epitopů mikroba Francisella tularensis

Anotace práce: Cíl práce: Cílem práce je identifikace imunoreaktivních peptidů F. tularensis vázaných v komplexu s MHC II glykoproteiny na povrchu dendritických buněk. Metodika: V první řadě byla provedena příprava modelu infekce dendritických buněk F. tularensis LVS, ΔFTL_1096. Pro ověření zvýšené exprese MHCII molekul na povrchu dendritických buněk byla použita metoda průtokové cytometrie. Dále jsme se věnovali přípravě imunoafinitní kolony pro purifikaci těchto MHCII molekul, za uplatnění metody afinitní chromatografie. Ověření účinnosti separace bylo provedeno pomocí jednorozměrné elektroforézy a western blotu. Dosažené výsledky a závěr: Byla provedena příprava modelu infekce primárních kostnědřeňových dendritických buněk (BMDC) F. tularensis kmenem LVS a mutantním kmenem ΔFTL_1096. Na základě výsledků analýzy pomocí průtokové cytometrie jsme ověřili, že bylo dosaženo zvýšené exprese MHCII molekul na povrchu BMDC. Dále byla optimalizována metodika kultivace hybridomu a afinitní separace protilátek, které byly využívány pro přípravu imunoafinitní kolony. Pomocí imunoafinitní separace byly izolovány první MHCII molekuly. Tato metodika bude dále rozvíjena a aplikována na vzorky infikovaných BMDC.


Mgr. Daniela Putzová prof. MUDr. Jiří Stulík, CSc. Molekulární mechanismy patogeneze mikroba Francisella tularensis

Anotace práce: Cíl práce: Cílem práce je charakterizace intracelulárních signálních kaskád, které ovlivňují produkci interferonu ß (IFN ß) v průběhu časné imunitní odpovědi hostitele vůči infekci divokým kmenem Francisella tularensis LVS nebo oslabeným mutantním kmenem se specifickou delecí DsbA genu. Metodika: Pro popis stavu buněčné signalizace byly provedeny in vitro experimenty. Primární kostně-dřeňové makrofágy pocházely z kříženců myší nesoucích IFN ß luciferázový reportérový systém a myší knock-outovaných pro geny, které jsou složkami signálních kaskád stimulujících produkci IFN ß. Hladiny IFN ß byly určeny stanovením luciferázové aktivity. Detekce prozánětlivých cytokinů a cytokinů, jejichž produkce je závislá na přítomnosti IFN ß byla provedena metodou real-time PCR. Pro ověření aktivace zapojených signálních kaskád byl využit western blot. Dosažené výsledky a závěr: Získané výsledky poukazují na supresívní efekt F. tularensis LVS na časnou imunitní odpověď hostitele. F. tularensis indukuje v porovnání s Listeria monocytogenes poměrně nízké hladiny IFN ß a ve srovnání s DsbA mutantem potlačuje prozánětlivou odpověď a také odpověď vyvolanou působením IFN ß. Předpokládá se, že inhibice je závislá na fagozomálním úniku bakterie do cytosolu a probíhá na úrovni signalizační kaskády zahrnující adaptorovou molekulu MyD88.

8


Mgr. Ivo Fabrik RNDr. Pavel Řehulka, Ph. D. Mapování intracelulárních pochodů primárních dendritických buněk v časné fázi interakce s F. tularensis

Anotace práce: Infekce F. tularensis je charakterizována opožděnou a nedostatečnou odpovědí adaptivní imunity. Dendritické buňky (DC) jakožto hostitel této bakterie a zároveň nejdůležitější antigen-prezentující buňky sehrávají nezastupitelnou úlohu v průběhu formování suboptimální adaptivní odpovědi. Cílem této práce je mapování buněčného chování Francisellou-napadených primárních DC na globální proteinové úrovni se zaměřením na časné interakce. Pro kvantifikaci změn v hostitelském proteomu bylo využito shotgunového LC-MS přístupu stavícího na SILAC metodě kvantifikace proteinů. DC byly infikovány virulentním kmenem F. tularensis subsp. holarctica FSC200 a/nebo jeho atenuovaným mutantem, přičemž infekční proces byl zastaven již 10 minut p.i. Vzorky byly poté zpracovány za účelem analýzy změn v proteomu membránových raftů DC a na ně navazujících signalizačních kaskád (fosfoproteom). Raftové proteiny byly izolovány ultracentrifugací na sacharózovém gradientu a fosfopeptidy pomocí kombinace separačních technik HILIC-TiO2. Peptidy membránových raftů/fosfopeptidy byly identifikovány a kvantifikovány LC-MS/MS přístupem. Výsledky byly vyhodnoceny s využitím bioinformatických přístupů čerpajících informace z protein-protein interakčních databází, databází kinázových motivů a anotačních databází. Získaná data ukazují mimo jiné na konkrétní rozdíly mezi virulentním a atenuovaným kmenem F. tularensis v regulaci IFNdependentní buněčné signalizace.

Hodnost, jméno a příjmení: Mgr. Iva Šenitková Školitel: RNDr. Petra Špidlová, Ph.D. Téma sdělení: Závěrečné výsledky disertační práce Anotace práce: Cíl práce: Charakterizace vztahu struktury a funkce domén proteinu FTS_1067 bakterie Francisella tularensis Použitá metodika: Funkce N-koncové FKBP_N-like a C- koncové DSBA-like domény proteinu FTS_1067 byla charakterizována pomocí několika přístupů. Prvním z nich byla příprava mutantního bakteriálního kmene s delecí DSBA-like domény a jeho následná in vivo a in vitro charakterizace. Pozměněný fenotyp byl srovnán s fenotypem mateřského kmene. Druhým přístupem byla příprava rekombinantního proteinu s delecí DSBA-like domény. S tímto proteinem byla provedena série testů zaměřená na identifikaci funkcí domén. Výsledky byly opět porovnávány s výsledky získanými testováním rekombinantního proteinu obsahujícího obě funkční domény. Dosažené výsledky: Při in vivo testech s mutantním kmenem se prokázala ztráta jeho virulence, schopnost vyvolat dostatečnou imunitní odpověď potřebnou k navození protekce proti infekci mateřským kmenem a pozměněná orgánová distribuce bakterií v průběhu infekce. In vitro testy odhalily sníženou schopnost replikace uvnitř myších makrofágů. Funkční testy provedené s rekombinantním proteinem pomohly přiblížit funkci jednotlivých domén. Závěr: Předpokládanou funkcí proteinu FTS_1067 je tvorba a udržování správné konformace u sekretovaných proteinů, k čemuž využívá svých funkcí oxidoreduktázy, isomerázy a chaperonu.

9

DSP Vojenská radiobiologie: Hodnost, jméno a příjmení: MUDr. Aleš Hlávka Školitel: prof. RNDr. Jiřina Vávrová, CSc. Téma sdělení: Význam IGRT v léčbě karcinomu prsu Anotace práce: Cíl práce: Pro správné ozáření je nutné zajistit přesné nastavení polohy pacienta. Standardně používané značky na kůži vyžadují široký bezpečnostní lem. Cílem práce je zjištění možné redukce bezpečnostního lemu při použití IGRT bez rizika poddávkování cílového objemu a tím zajištění šetření okolních tkání (plíce, srdce, druhý prs). Použitá metodika: Měříme rozdíl v nastavení pacientek na ozařovači (jejich polohu těla vůči svazku lineárního urychlovače) při použití standardních značek na kůži a při provedení 2D/2D ortovoltážních snímků zobrazovacím zařízením lineárního urychlovače. Dosažené výsledky: Máme dokončen sběr dat, v současné době probíhá digitalizace naměřených hodnot (více než 6.500 měření získaných od více než 200 pacientů). Tyto výsledky budeme postupně vyhodnocovat. Závěr: Předem lze podle naměřených hodnot usuzovat, že standardně užívaný bezpečnostní lem 1cm (k expanzi z CTV na PTV) je u některých pacientek zářených bez použití IGRT nedostatečný. Z toho důvodu jsme na našem pracovišti zařadili IGRT u pacientek léčených s karcinomem prsu jako standardní metodu.


Mgr. Kamila Ďurišová mjr. doc. PharmDr. Aleš Tichý, Ph.D. Využití inhibice DNA reparačních kináz v radiosenzibilizaci nádorových buněk

Anotace práce: Cíl práce: Více než polovina onkologických pacientů je léčena ionizujícím zářením (IZ). Zvýšeného účinku IZ se dosahuje tzv. radio-senzibilizací. Jednou z možností je zablokování reparace poškození DNA, které vede k buněčné smrti. Proto jsme porovnali účinky inhibitorů 3 hlavních reparačních kináz: ATM (inhibitor KU55933), DNA-PK (inhibitor NU7441) a ATR (inhibitor VE-821). Metodika: V práci byly použity normální lidské plicní fibroblasty (p53-wildtype) ve srovnání s buňkami plicního karcinomu (p53-negativní). Ke stanovení proteinu γH2AX (marker poškození DNA), byla využita fluorescenční mikroskopie, pro analýzu buněčného cyklu průtoková cytometrie a ke stanovení DNA reparačních proteinů Western blotting. Dosažené výsledky: Kombinace inhibitoru DNA-PK s IZ vedla k největšímu poškození DNA normálních buněk a k zástavě buněčného cyklu v G2-bloku. Naopak inhibitor ATM spolu s IZ působil G1-blok. Inhibitor ATR v kombinaci s IZ vyvolal největší poškození DNA nádorových buněk a současně jsme pozorovali nejmenší množství buněk v G2-bloku. Závěr: Inhibice ATR v kombinaci s IZ způsobuje nejvyšší poškození DNA a snižuje G2-blok nádorových buněk po ozáření, což tlumí DNA reparaci, zatímco u normálních buněk zůstává tato schopnost zachována. Inhibice ATR tedy vede u p53-negativních nádorových buněk k efektivní radio-senzibilizaci.

10

2. sekce – Preventivní medicína a ochrana veřejného zdraví, Vojenské vnitřní lékařství, Vojenská chirurgie DSP Preventivní medicína a ochrana veřejného zdraví: Hodnost, jméno a příjmení: Školitel: Téma sdělení:

MUDr. Pavel Hyšpler doc. MUDr. Pavol Hlúbik, CSc. Vliv vnějších faktorů na změnu barvy dentice a možnosti prevence

Anotace práce: Cíl práce: Požadavkem pacientů je samozřejmě co nejsvětlejší chrup. Cílem této práce je stanovit hranice bělení, při kterých dochází k minimalizaci poškození zubu. Použitá metodika: Tmavnutí zubů v průběhu života je způsobeno jak faktory vnějšími (potravní pigmenty, znečištění zubů etc.), tak vnitřními faktory(apozice dentinu, ukládání odpadních látek do dentinu). Pro odlišení vnějších a vnitřních vlivů jsme zvolili metodu komparativního měření barevnosti zubů, které jsou ve styku s okolním prostředím (horní střední řezáky) a zubů, které jsou izolovány od okolního prostředí (retinované zuby moudrosti). Dosažené výsledky: V průběhu práce jsme navrhli a zhotovili sondu a software pro měření barevnosti pomocí vláknového spektrometru. Navrhli jsme model změn barvy zubů způsobený jak vnějšími tak vnitřními faktory v závislosti na věku pacienta. Závěr: Výzkum pomůže stanovit fyziologické hranice bělení zubů. V závěrečné fázi výzkumu vytvoříme jednoduchý, klinicky použitelný vzorník , který usnadní práci a edukaci pacientů v ordinaci.

Hodnost, jméno a příjmení: Mgr. Hana Zmrzlá Školitel: Ing. Hana Střítecká, Ph.D. Téma sdělení: Nadváha a obezita u dětí Anotace práce: Obezita dětí je v oblasti veřejného zdraví závažným celosvětovým problémem. Z české i světové odborné literatury vyplývá, že se počet dětí s nadměrnou hmotností (nadváhou i obezitou) za posledních deset let téměř zdvojnásobil. Nejvyšší nárůst byl zaznamenán v USA, ale ani evropské státy v této nepříznivé statistice „nezaostávají“, a přestože některé země začínají vykazovat stagnaci, v celosvětovém měřítku počet dětí s nadměrnou hmotností přibývá. Dietní chování, fyzická aktivita a sedavý životní styl, ke kterému patří sledování televize, práce či hraní her na počítači jsou nezávislými rizikovými faktory nárůstu BMI (hmotnosti). Obezita je obecně významným rizikovým faktorem řady dalších metabolických a kardiovaskulárních onemocnění, u obézních dětí je pak spojována i s poruchou růstu a vývoje. Cílem práce je posoudit vliv nadměrné hmotnosti u dětí na výskyt dalších zdravotních komplikací, celkovou nemocnost, četnost hospitalizací, na spektrum diagnóz a na délku hospitalizace ve srovnání s dětskou populací o normální hmotnosti. Stále probíhá vyhodnocování dat ve formě retrospektivní studie. Hodnotí se antropometrická data a anamnestické údaje dětí ve věku 4-18 let hospitalizovaných v roce 2011 na dětském oddělení okresní nemocnice (celkem 911 dětí, 465 chlapců a 446 dívek) s ohledem vlivu vyšší hmotnosti na typ a průběh onemocnění a délku hospitalizace.

11


pplk. MUDr. Jan Psutka doc. MUDr. Pavol Hlúbik, CSc. Vybrané hygienické aspekty zdravotnického zabezpečení v AČR při zahraničních operacích v Afghánistánu

Anotace práce: Cíl práce: Dle vybraných hygienických aspektů jsem se pokusil zhodnotit zdravotnické zabezpečení příslušníků jednotlivých kontingentů Armády České republiky polní nemocnice a chemické jednotky ISAF působících na základně KAIA v Afghánském Kábulu, v období let 2007 až 2008. Při hodnocení jsem se zaměřil především na změny stravovacích a pohybových zvyklostí a získané výsledky měření, provedených v polních podmínkách polní nemocnice, jsem analyzoval, porovnal a vyhodnotil. Použitá metodika: Sběr dat formou pravidelných měření reprezentativního vzorku příslušníků jednotlivých kontingentů mise v průběhu zahraničního pobytu v Afghánském Kábulu a vyplnění stravovacích dotazníků na konci každé mise. Dosažené výsledky a závěr: Provedeno statistické vyhodnocení výsledků jednotlivých měření, které ukazuje změny v oblasti zásad zdravého stravování a návyků stavování při pobytu v zahraniční misi.

DSP Vojenské vnitřní lékařství: Hodnost, jméno a příjmení: Školitel: Téma sdělení:

kpt. MUDr. Tomáš Kupsa pplk. doc. MUDr. Jan M. Horáček, Ph.D. Analýzy vybraných prognostických faktorů u akutních myeloidních leukémií

Anotace práce: Naše činnost je zaměřena na ověření a detailnější popis prognostické role hladin cytokinů a adhezních molekul u pacientů s akutní myeloidní leukémií. Vstupní vzorky séra jsou odebírány a skladovány v hluboce zmraženém stavu a rozmraženy těsně před stanovením hladin celkem 17 cytokinů a 5 solubilních adhezních molekul. Ke stanovení analytů využíváme Biochip Array technologie firmy Randox. Z dosud provedených vyšetření vyplývá, že sérové koncentrace interleukini 1-beta a adhezních molekul VCAM-1 (Vascular Cell Adhesion Molecule-1), ICAM-1 (Inter-Cellular Adehesion Molecule-1), E-selectinu a P-selectinu v době diagnózy onemocnění korelují s přežíváním pacientů. Začlenění těchto faktorů do vstupního prognostického modelu by mohlo zpřesnit odhad prognózy u pacientů s akutní myeloidní leukémií.

12


pplk. MUDr. Martin Jakl doc. MUDr. Luděk Haman, Ph.D. Dlouhodobý dopad selhání protidestičkové léčby u pacientů s akutním koronárním syndromem

Anotace práce: Cíl práce: Zhodnotit dlouhodobý význam selhání protidestičkové léčby u pacientů s akutním koronárním syndromem. Metodika: U 198 pacientů (132 mužů, 58 žen, průměrný věk 67.7 8.1 let)s akutním koronárním syndromem léčeným kyselinou acetylsalicylovou (ASA) byla měřena agregabilita trombocytů pomocí multidetektorové impedanční agregometrie. Jako aktivátor byl použit tromboxan A2 a adenosin difosfát s prostaglandinem E2. S odstupem 5 let byla hodnocena mortalita pacientů a recidiva akutního koronárního syndromu. Výsledky: Selhání léčby ASA i clopidogrelem je asociováno se zvýšenou mortalitou pacientů (selhání ASA 38.1 % vs. 19.2 %, p <0.01, selhání clopidogrelu 45.2 % vs. 17.3 %, p<0.001, selhání obou léčiv 50.0 % vs. 19.9 %, p<0.05). Zvýšeno bylo i riziko recidivy akutního koronárního syndromu (HR 4.0, 95 % CI 1.25-11.5, p<0.05 pro selhání ASA i clopidogrelu, HR 4.37, 95 % CI 1.51-12.77, p<0.01pro selhání ASA, HR 3.25, 95 % CI 1.11-9.36, p<0.05 pro selhání clopidogrelu). Podle multivariantní analýzy je selhání protidestičkové léčby spolu se systolickou dysfunkcí levé komory srdeční nezávislý prediktor pětileté mortality. Závěr: Selhání protidestičkové léčby ASA i clopidogrelem je spojeno se zvýšenou pětiletou mortalitou i rizikem recidivy infarktu myokardu.

DSP Vojenská chirurgie: Hodnost, jméno a příjmení: Školitel: Téma sdělení:

pplk. MUDr. Daniel Kovář prof. MUDr. Viktor Chrobok, CSc., Ph.D. Přínos CT navigace v chirurgii VDN pro zlepšení čichu, snížení recidiv nosní polypózy a komplikací

Anotace práce: Jedním z možných využití CT navigované chirurgie v ORL oblasti je chirurgie vedlejších nosních dutin. Vyhodnocovali jsme 2 soubory – s navigací a bez ní. Oba byly srovnatelné po diagnostické stránce, z hlediska operačních indikací i vzhledem k věkovému rozvrstvení a zastoupení obou pohlaví. Posuzovali jsme stav čichu v souvislosti s alergií a v závislosti na provedení navigované, nenavigované, primární nebo revizní operace. Všichni alergici byli náležitě vyšetřeni a léčeni. Stav čichu byl zjišťován dotazem a čichovou zkouškou pomocí parfémovaných fixů. Hodnocení pooperační kvality života bylo provedeno pomocí dotazníku SNAQ – 11. Oba soubory byly statisticky zpracovány pomocí korelace. Závěr - naše poznatky k přínosu CT navigace u chirurgie vedlejších nosních dutin Použití CT navigace nám umožňuje větší a bezpečnější radikalitu při revizních výkonech za minimalizace počtu a závažnosti komplikací. Dosahujeme lepších anatomických i funkčních výsledků, a zvl. u alergiků prokazujeme i výrazně lepší pooperační stav čichu.

13


mjr. MUDr. Radek Doležel plk. prof. MUDr. Miroslav Ryska, CSc. Efekt učení perorální endoskopické myotomie během prvního roku ověřování metody v české republice

Anotace práce: Cíl: Perorální endoskopická myotomie (POEM) je novou (v ČR experimentální) metodou léčby achalázie jícnu. Analyzovali jsme trénink lékařů a efekt účení POEM metody. Metoda: Prospektivní studie čítala 3 skupiny operantů (N=10). Operace provedl endoskopista po observaci výkonů u experta (N=9) a vlastním tréningu na prasatech (N=10). Zlepšení definoval čas nutný k vytvoření 1cm myotomie, výskyt technických chyb (necílené poranění sliznice, extravazace CO2) a peroperační komplikace. Výsledky: POEM byl vždy úspěšně dokončen, bez závažné komplikace. Pacienti (ve věku 47,3±14,5 let) byli hospitalizováni 2,5±0,7 dne. Čas na 1cm myotomie byl 7,7±2,7 min. a s pořadím klesal (p<0,001). Výskyt neúmyslné mukozotomie (N=3, 10%) klesal (0,2; 0,1, 0) ale pokles nebyl signifikantní (p=0,75). Vynucená dekomprese kapnoperitonea (N=13, 43%) a výskyt podkožního emfyzému (N=7, 23%) nebyly ovlivněny učením (p=1). Křivka učení prokázala zvládnutí POEM metody od 13. klinického výkonu. Závěr: Během 1. roku POEM v klinice (v ČR) byl významný efekt učení (od 13. procedury). Snížil se čas nutný k 1cm myotomie. Technické chyby nebyly primárně ovlivněny. Před klinickým použitím (POEM) doporučujeme tréning na prasatech a observaci experta.


mjr. MUDr. Radek Pohnán plk. prof. MUDr. Miroslav Ryska, CSc. Srovnání operační zátěže laparoskopické oproti konvenční distální pankreatektomii v experimentu na velkém laboratorním zvířeti

Anotace práce: Cíl práce: Srovnání operační zátěže konvenční distální pankreatektomie s laparoskopickou distální pankreatektomií pomocí hladiny proteinů zánětlivé odpovědi v experimentu na praseti domácím. Použitá metodika: U 10-ti zvířat byla provedena standardní distální pankreatektomie a ve skupině 10-ti zvířat byla provedena laparoskopická distální pankreatektomie. Zvířata byla do skupin zařazena randomizací. V obou skupinách byly sledovány peroperační a pooperační komplikace, bowel transit time, operační čas, krevní obraz a sérové hladiny pankeratické amylázy. Pooperační stres byl hodnocen pomocí stanovení sérových hladin interleukinu 1 a 6 a CRP. Dosažené výsledky: Po vyhodnocení obou souborů nebyl zjištěn statisticky významný rozdíl v délce operace, bowel transit time ani v hladinách interleukinu 1 a 6 a CRP u jednotlivých výkonů. Soubor laparoskopické distální pankreatektomie měl signifikantně nižší výskyt infekčních komplikací v místě výkonu. Závěr: Při hodnocení operační zátěže nebyl v tomto experimentu zjištěn signifikantní rozdíl mezi laparoskopickou distální pankreatektomií a konvenční otevřenou distální pankreatektomií.

14


MUDr. Aleš Fibír doc. MUDr. Leo Klein, CSc. Biomechanika nervus medianus před a po dekompresi karpálního tunelu

Anotace práce: Cíl: Cílem práce je popsat biomechaniku nervus medianus u pacientů se syndromem karpálního tunelu a její případné ovlivnění po otevřené dekompresi karpálního tunelu včetně zhodnocení případné klinické významnosti. Metodika: Vyšetřili jsme celkem 72 pacientů s klinickými příznaky a elektromyografickým průkazem SKT ultrazvukem před a 3 měsíce po otevřené dekompresi medianu. Pacienti byli randomizováni do dvou skupin. Ve skupině A byla použita dorzální dlaha po dobu dvou týdnů po operaci. Ve skupině B nebylo použito žádné dlahování. Změny v příčné a podélné pohyblivosti nervu a ostatní parametry byly popsány a statisticky zhodnoceny. Výsledky: Ve skupině B bylo možno pozorovat zvýšení amplitudy transverzálního pohybu oproti pacientům zařazeným do skupiny A. Tyto změny však neměly vliv na subjektivní obtíže pacienta. U longitudinálního pohybu medianu jsme nenašli významný rozdíl v pohyblivosti před a po operaci, ani mezi oběma skupinami. Závěr: Rozdílná pooperační péče nemá vliv na longitudinální pohyblivost nervu ani na subjektivní obtíže pacienta. Pacienti léčení po operaci bez použití dlahy mají mírně větší transverzální mobilitu nervu, ale tyto změny nemají klinický význam.

3. sekce – Toxikologie Hodnost, jméno a příjmení: Školitel: Téma sdělení:

Mgr. Ondřej Benek doc. PharmDr. Kamil Musílek, Ph.D. Deriváty frentizolu jako nové modulátory mitochondriálního enzymu ABAD pro léčbu Alzheimerovy nemoci

Anotace práce: Cíl práce: Design a syntéza sloučenin modulujících aktivitu mitochondriálního enzymu amyloid-vázající alkoholdehydrogenasy (ABAD) resp. bránících interakci mezi ABAD a beta-amyloidem (Aβ). Použitá metodika: Nové sloučeniny byly připraveny běžnými metodami organické syntézy ve dvou až pěti krocích. Finální produkty byly charakterizovány pomocí 1H a 13C NMR, hmotnostní spektrometrie a elementární analýzy. In vitro byla stanovena jejich schopnost modulovat aktivitu ABAD. U vybraných sloučenin byla stanovena jejich cytotoxicita pomocí MTT metodiky. Dosažené výsledky: Z první série 28 sloučenin vykázaly 4 z nich výrazný inhibiční účinek na aktivitu ABAD. Na základě jejich SAR studie pak byla navržena a připravena další série 12 látek, z nichž jedna inhibovala ABAD srovnatelně s nejlepšími sloučeninami první série. V současné době probíhá syntéza a testování 3. série sloučenin. Závěr: V rámci přípravy a testování potenciálních modulátorů ABAD byly nalezeny nové inhibitory tohoto enzymu, které by mohli posloužit jako vzorové struktury pro vývoj léčiv na Alzheimerovu nemoc.

15

Hodnost, jméno a příjmení: RNDr. Alžběta Kračmarová Školitel: pplk. doc. RNDr. Miroslav Pohanka, Ph.D., DSc. Téma sdělení: Biochemické aspekty neurodegenerativních poruch Anotace práce: Cíl práce: Předkládaná práce je zaměřená na imunomodulační účinky vybraných léčiv založené na ovlivnění cholinergní protizánětlivé dráhy jejich vliv na oxidační stres. Cílem práce bylo objasnit, zda mají vybraná léčiva schopnost ovlivňovat produkci prozánětlivých cytokinů myšími a lidskými makrofágy. Použitá metodika: Myší makrofágová linie j774.2 a lidské makrofágy připravené z leukemických monocytů THP-1 byly kultivovány za standardních podmínek. Buňky vystaveny působení agonistů nikotinových receptorů (acetylcholin, nikotin), selektivního antagonisty alfa7 nikotinového receptoru (methyllycaconitin), atypického antipsychotika (klozapin) a inhibitorů acetylcholinesterasy (takrin, galantamin). Zánětlivá odpověď byla vyvolána přidáním lipopolysacharidu (LPS) z Escherichia coli. Metodou ELISA byla stanovena hladina cytokinů uvolněných do média. Dosažené výsledky: Produkce prozánětlivých cytokinů buňkami vystavenými klozapinu signifikantně poklesla. Hladina IL6 produkovaná buňkami, jež byly vystaveny klozapinu a zároveň MLA se však nelišila. U buněk vystavených takrinu a galantaminu nedošlo k signifikantním změnám. Závěr: Podařilo se potvrdit protizánětlivé působení vybraných léčiv.


MVDr. Michal Pavlík prof. Ing. Kamil Kuča, Ph.D. Využití SIA při studiu otrav nervově-paralytickými látkami – in vivo laboratorní model

Anotace práce: Pro real time sledování aktivity krevních cholinesteráz byla na katedře toxikoloxie vyvinuta metoda SIA (sekvenční injekční analýza). Tato metoda zpřesní pohled na dynamiku celého procesu inhibice cholinesteráz nervově-paralytickými látkami (NPL), ale i jinými inhibitory. Laboratorní zvířatav experimentu jsou inhalačně anestezována a poté jsou cestou a. femoralis napojena na odběrové zařízení, které odebírá 20 mikrolitrů krve a mísí ho s 60 mikrolitry roztoku substrátu. Tato směs projde dialyzátorem, který odfiltruje makročástice krve a na sekundární straně dialyzátoru je dále zpracováván jen rozštěpený acetythiocholin. Ten je pro fotometrické stanovení vizualizován reakcí s Ellmanovým činidlem a absorbance je měřena při 412 nm. Vzhledem k tomu, že jeden měřící cyklus trvá cca 20 – 25 sekund, lze toto monitorování otravy považovat za blízké reálnému času. Ze zaznamenané závislosti absorbance na čase lze odvodit aktivitu cholinesteráz a tím i závažnost probíhající otravy. V příspěvku jsou komentovány dosažené výsledky, postup optimalizace metody a limity její použitelnosti. Tato metoda otevírá nový pohled na průběh otrav NPL a může zefektivnit jejich terapii.

16

Hodnost, jméno a příjmení: Mgr. Irena Voborníková Školitel: pplk. doc. RNDr. Miroslav Pohanka, Ph.D., DSc. Téma sdělení: Stanovení glutathionu Ellmanovou metodou Anotace práce: Glutathion je nízkomolekulární tripeptid. Je zásobní sloučeninou síry, působí jako antioxidant ( -SH skupiny). Podílí se na udržení redoxní rovnováhy v buňce, na metabolismu cizorodých látek (xenobiotika), vyskytuje se v buňce intracelulárně v redukované nebo oxidované podobě. Cílem mé práce je stanovení glutathionu pomocí voltametrických technik, v konečné fázi pak stanovení v biologických vzorcích. Jako srovnávací metoda byla vybrána metoda založená na reakci glutathionu s Ellmanovým činidlem (5,5´-dithiobis (2-nitrobenzoová kyselina). Vzorky byly měřeny při 412nm. Byla provedena kalibrace vodného roztoku glutathionu o koncentraci 0 - 1 mmol/l. Byl sledován rušivý vliv albuminu o koncentraci 0,75 a 1,5 mmol/l a jeho snížení pomocí síranu amonného. Dále budou studovány interference ostatních látek (kyselina askorbová, TROLOX, kyselina močová, N-acetylcystein). Tyto výsledky budou výchozí výběr úpravy vzorků a následovat budou již originální analytické postupy jako je např. voltametrie.


Mgr. Zuzana Křenková pplk. doc. PharmDr. Daniel Jun, Ph.D. In vitro testování nových reaktivátorů butyrylcholinesterasy pro přípravu „pseudokatalytického scavengeru“

Anotace práce: Cílem práce bylo nalézt reaktivátory butyrylcholinesterasy (BChE; EC 3.1.1.8), které v dostatečné míře obnoví aktivitu enzymu inhibovaného širokým spektrem organofosforových sloučenin z řad pesticidů a nervově paralytických látek. Oximy s vysokou reaktivační schopností budou použity pro konstrukci tzv. „pseudokatalytického scavengeru“, kdy exogenně aplikovaná BChE vychytá v krevním oběhu molekuly organofosforových sloučenin a její enzymová aktivita bude kontinuálně obnovována společně podaným oximem. Ke stanovení aktivit cholinesteras byla použita upravená Ellmanova metoda (spektrofotometrické stanovení). Na základě počítačové modelace a znalosti struktur běžných, komerčně dostupných reaktivátorů byly navrhnuty, syntetizovány a testovány nové reaktivátory BChE. Reaktivátory se lišily v počtu kvarterních dusíků, délce a typu spojovacího řetězce mezi aromatickými jádry, v počtu aldoximových skupin a typu funkční skupiny, navázané na pyridinové jádro. Jako modelový inhibitor jsme zvolili cyklosarin. V porovnání s komerčně dostupnými oximy se nám podařilo nalézt několik struktur, které se vyznačují výrazně vyšší reaktivační účinností při obnově aktivity BChE a mohou tak tvořit účinnou složku pseudokatalytického scavengeru. U těchto látek jsme dále vyhodnotili parametry reaktivační kinetiky kmax (maximální rychlostní konstanta), Km (disociační konstanta komplexu oxim-inhibovaný enzym) a kr (katalytická účinnost).

17

Hodnost, jméno a příjmení: Školitel:

Mgr. Filip Zemek prof. Ing. Kamil Kuča, Ph.D. PharmDr. Jana Ždárová Karasová, Ph.D. Vazba reaktivátorů a inhibitorů AChE na albumin

Téma sdělení: Anotace práce: Modulátory acetylcholinesetrasy (AChE, EC 3.1.1.7) jsou látky, jejichž hlavní farmakodynamický účinek je již delší dobu znám. Avšak některá základní farmakokinetická data zatím stále nejsou zjištěna a proto je stále velmi obtížné definovat chování těchto látek v lidském organismu jak po stránce kvalitativní tak i kvantitativní. Jedním z důležitých farmakokinetických parametrů je také vaznost na plasmatické proteiny. Cílem této práce bylo zjistit schopnost vybraných sloučenin vázat se na plasmatické proteiny, se zaměřením na albumin. Schopnost vazby byla hodnocena pro jednotlivé oximy v odpovídajících Cmax. Do této studie byly zahrnuty sloučeniny strukturálně rozdílné pro odhalení případných strukturálních závislostí a jejich dopad na vazbu na albumin. Výsledky jsou vyjádřeny v procentech plasmatické koncentrace měřených látek. Obecně lze definovat, že oximy mají nízkou schopnost vázat se na plasmatické proteiny, respektive albumin. Velkým překvapením jsou výsledky inhibitorů AChE, u kterých vaznost na albumin dosahovala až 50 %. Nicméně se jedná a první výsledky toho to druhu a hlubší zkoumání interakcí mezi albuminem a inhibitory AChE bude potřeba.

18

Univerzita obrany Brno Fakulta vojenského zdravotnictví v Hradci Králové. 8. fakultní konference studentů doktorských programů

Recommend Documents