A calprotectin és egyéb biomarkerek szerepe a gasztrointesztinális gyulladásos betegségek differenciál diagnosztikájában 1Halmainé
Kiss Ilona, 2Rutka Mariann, 1Földesi Imre Szegedi Tudományegyetem 1Laboratóriumi Medicina Intézet, 2I. Belgyógyászati Klinika
MLDT 58. Nagygyűlése Szeged, 2016. augusztus 25-27.
Intesztinális betegségek Funkcionális elváltozás
Organikus elváltozás
IBS
IBD
(Irritable Bowel Syndrome)
(Inflammatory Bowel Disease) Crohn betegség Colitis ulcerosa Mikroszkópos colitis: • Kollagén colitis • Limfocitás colitis
Crohn betegség vs. Colitis ulcerosa Crohn betegség:
Colitis ulcerosa:
• A tápcsatorna teljes hosszán előfordulhat • Bélfal minden rétege érintett
• A tápcsatorna egy részén fordul elő • Csak a mucosa réteg érintett
• Remissziók/relapszusok váltakozása
• Remissziók/relapszusok váltakozása
Calprotectin
Mátrix metalloproteináz-9 (MMP-9)
S100A8/S100A9 heterodimer szerkezet
Az MMP-9 szerkezeti felépítése
(forrás: www.uscnk.com)
(forrás: www.rcsb.org)
Anti-neutrofil citoplazmatikus antitest (ANCA)
S. cerevisiae ellenes antitest (ASCA)
Kimutatás: ELISA és IIF módszerek
ELISA alapján: anti-PR3 és anti-MPO antitestek IIF alapján: c- ANCA
p-ANCA
atípusos p-ANCA
(forrás: http://laboratory-manager.advanceweb.com/Magazine/References/References-for-Autoimmune)
(forrás: microbewiki.kenyon.edu/index.php)
Célkitűzés • Két POCT típusú calprotectin teszt összehasonlítása:
Easy Card Calprotectin Quant, Sentinel Diagnostics, Milan, Italy Quantum Blue, Bühlmann Laboratories, Schönenbuch, Switzerland
• Calprotectin és MMP-9 vizsgálat székletből IBD gyanús betegek esetében • A már differenciál diagnózissal rendelkező betegeknél a nyomonkövetés, monitorizálás lehetőségeinek felmérése (relapszus/remisszió) • ANCA és ASCA markerek vizsgálata IBD gyanús betegek szérumából (első megjelenéskor)
Vizsgálati módszerek Easy Card Calprotectin Quant
Quantum Blue®
(Qualitatív mérés)
(Semi-quantitatív mérés)
MMP-9, ANCA, ASCA meghatározás Standardok (ng/ml) 0 0,3 0,6 1,25 2,5 5,0 10 20
Az IBD megoszlása a vizsgált betegek között
12 10 8 6
Nők
4
Férfiak
2 0
CD
CU
nIBD
CD
CU
nIBD
Összesen
Átlag életkor (év)
Férfi
10
1
3
14
33,6
Nő
11
4
11
26
32,4
Összesen
21
5
14
40
CD: Crohn-betegség CU: Colitis ulcerosa nIBD: nem IBD
Eredmények Eltérések a két gyorsteszt értékelésében • Összességében a vizsgált 40 eset közül 7 esetben (17,5%) találtunk eltérést a két teszt között. • Mind a 7 alkalommal a Crohn betegek között volt a diagnosztikailag jelentős különbség. A 7 esetből kettőben a pozitív Easy Card teszthez negatív Quantum Blue eredmény társult. A maradék 5 esetben a negatív Easy Card teszthez pozitív Quantum Blue eredmény társult.
Diagnózis Cut off értékek CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CD CU CU CU CU CU nem igazolódott IBD nem igazolódott IBD nem igazolódott IBD nem igazolódott IBD nem igazolódott IBD nem igazolódott IBD nem igazolódott IBD nem igazolódott IBD nem igazolódott IBD nem igazolódott IBD nem igazolódott IBD nem igazolódott IBD nem igazolódott IBD nem igazolódott IBD
Easy Calprotectin teszt 50 μg/g 200 μg/g negatív negatív negatív negatív pozitív negatív pozitív pozitív pozitív pozitív negatív negatív pozitív negatív pozitív pozitív negatív negatív negatív negatív pozitív negatív negatív negatív pozitív negatív pozitív pozitív pozitív negatív negatív negatív negatív negatív pozitív pozitív pozitív negatív pozitív negatív pozitív negatív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív pozitív negatív pozitív pozitív negatív negatív negatív negatív negatív negatív negatív negatív negatív negatív negatív negatív negatív negatív pozitív pozitív negatív negatív negatív negatív negatív negatív negatív negatív pozitív negatív negatív negatív
Quantum Blue 300 μg/g <30,0 <30,0 470 33 3000 <30,0 214 500 67 49 246 <30 219 266 800 <30 <30 610 880 1690 1460 610 860 850 138 3000 <30,0 76 31 38 33 <30 80 840 <30 41 <30 <30 <30 <30
MMP-9 eredmények a bélbetegségek függvényében 18
17
16
14
14 12 10 8 6 4
5
4
2
0
0
Crohn betegség
0
Colitis ulcerosa MMP-9 negatív
MMP-9 pozitív
non-IBD
Quantum Blue Calprotectin és MMP-9 eredmények összehasonlítása QB pozitív
QB negatív
QB határeset
13 12
8 6
1 0 MMP-9 pozitív
MMP-9 negatív
Következtetések • A CD betegségben szenvedők calprotectin eredménye 67 %-ban, CU betegség fennállásakor 100 %-ban azonos eredményt mutatott a két teszt összehasonlításakor. • Az MMP-9 teszt CD esetében 76 %-ban, CU betegek esetében 80 %ban mutatott összefüggést a calprotectin eredményekkel. Ugyanakkor nIBD páciensek esetében mindvégig 0,5 ng/ml alatti MMP-9 értékeket kaptunk. • A már differenciáldiagnózissal rendelkező és kezelésben részesülő betegek mintáinak eredményében mindkét calprotectin teszt alkalmasnak bizonyult a kezelés hatékonyságának követésére. • Az ANCA és ASCA vizsgálatok, mint kiegészítő markerek, hasznosnak bizonyultak a diagnózis megerősítésében, mindamellett önmagukban nem elegendőek a differenciál diagnózis felállításához.
Köszönöm a figyelmet!
