SKRIPSI. Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

EFEK NEFROPROTEKTIF PEMBERIAN JANGKA PANJANG EKSTRAK ETANOL BIJI Persea americana Mill. TERHADAP KADAR KREATININ DAN GAMBARAN HISTOLOGIS GINJAL PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh : Rotua Winata Nopelia Silitonga NIM : 108114013

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013

i


ii


iii


HALAMAN PERSEMBAHAN “Sebab TUHAN, Dia sendiri akan berjalan di depanmu, Dia sendiri akan menyertai engkau, Dia tidak akan membiarkan engkau dan tidak akan meninggalkan engkau ; janganlah takut dan janganlah patah hati.” Ulangan 31: 8

Hati raja seperti batang air dalam tangan TUHAN, dialirkan-Nya ke mana Ia ingini (Amsal 21:1)

Karya ini kupersembahan untuk : Tuhan Yesus Kristus, Bapaku yang setia, Sumber harapanku Bapak, Mama, Irna dan Angri, Opung serta keluarga besarku Sahabat-sahabatku yang telah hadir di saat susah dan senang Serta Almamaterku Universitas Sanata Dharma iv


v


vi


PRAKATA

Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Pemurah atas segala penyertaan, kasih dan berkatNya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Efek Nefroprotektif Pemberian Jangka Panjang Ekstrak Etanol Biji Persea americana Mill. terhadap Kadar Kreatinin dan Gambaran Histologis Ginjal pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida ” dengan baik. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) program studi Farmasi Universitas Sanata Dharma. Penulis menyadari bahwa dalam pembuatan skripsi ini tidak terlepas dari bantuan dan dukungan dari berbagai pihak. Oleh sebab itu, penulis mengucapkan terima kasih kepada : 1.

Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dosen Pembimbing skripsi atas perhatian, kesabaran, bimbingan, masukan dan motivasi kepada penulis dalam proses penyusunan skripsi ini.

2.

Ibu dr. Fenti, M.Kes., Sp.K sebagai dosen penguji yang telah memberikan kritik dan saran yang membangun selama proses pembuatan skripsi.

3.

Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si. sebagai dosen penguji yang telah memberikan kritik dan saran yang membangun selama proses pembuatan skripsi.

4.

Ibu

Rini

Dwiastuti,

M.Si.,

Apt.

selaku

Kepala

Penanggungjawab

Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam penggunaan fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian ini.

vii


5.

Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si. yang telah menyediakan waktu untuk memberikan bantuan dalam determinasi tanaman P.americana.

6.

Pak Kayat, Pak Heru, Pak Parjiman, Pak Wagiran, Pak Parlan, Pak Kunto, dan Pak Bimo selaku laboran laboratorium Fakultas Farmasi yang telah membantu penulis dalam proses pelaksanaan penelitian di laboratorium.

7.

Keluargaku Bapak Dolok Silitonga, Mama Masdiana Sirait, Irna Marsaulina dan Angri Jwita, yang selalu memberikan doa, perhatian, dan menjadi motivasi terbesar penulis.

8.

Beasiswa Unggulan Kementrian Pendidikan dan Kebudayaan Republik Indonesia atas kontribusinya dalam membiayai proses perkuliahan dan penelitian ini.

9.

Teman-teman seperjuangan dalam tim alpukat Ayu, Ita, Cilla, Ike kiting, Lydia, Ike Kum, Dian, Dion, Iren, Liana, Obet, Angel, Dara dan Yudhita atas kerjasama, bantuan, dan semangat yang selalu di bagikan dalam proses penyusunan skripsi ini dari awal hingga akhir.

10. Kawan-kawan “sariayuers” Kak Sari Tambunan, Devi Sinaga, Jolina Bitti, Mauryn Marpaung, Yoestenia, Metta Maurilla, Mariana, Novie Imoliana, Melisa Dharmawan dan Anna Sofiana atas kebersamaan, kecerian, dukungan, semangat dan masukan yang diberikan selama pembuatan skripsi ini. 11. Yudi Theo Lumy yang selalu memberikan dukungan doa dan semangat selama proses pembuatan skripsi ini.

viii


ix


DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL............................................................................................................

i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING..................................................................

ii

HALAMAN PENGESAHAN..............................................................................................

iii

HALAMAN PERSEMBAHAN...........................................................................................

iv

PERNYATAANKEASLIAN KARYA..............................................................................

v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS.............................................................

vi

PRAKATA...........................................................................................................................

vii

DAFTAR ISI........................................................................................................................

x

DAFTAR TABEL................................................................................................................

xv

DAFTAR GAMBAR...........................................................................................................

xvi

DAFTAR LAMPIRAN.......................................................................................................

xviii

INTISARI............................................................................................................................

xx

ABSTRACT..........................................................................................................................

xxi

BAB I. PENGANTAR........................................................................................................

1

A. LatarBelakang..................................................................................................................

1

1.

Perumusan masalah.................................................................................................

4

2.

Keaslian penelitian...................................................................................................

4

3.

Manfaat penelitian....................................................................................................

5

B. Tujuan Penelitian.............................................................................................................

5

x


BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA.................................................................................

6

A. Persea americana Mill....................................................................................................

6

1. Taksonomi................................................................................................................

6

2. Sinonim....................................................................................................................

6

3. Nama lain.................................................................................................................

6

4. Morfologi..................................................................................................................

7

5. Kandungan kimia.....................................................................................................

7

6. Khasiat dan kegunaan..............................................................................................

7

B . Ginjal 1. Anatomi dan fisiologi ginjal...................................................................................

8

2. Fungsi ginjal.............................................................................................................

14

3. Kerusakan ginjal.......................................................................................................

16

C. Kreatinin........................................................................................................................

17

D. Nefrotoksisitas..............................................................................................................

18

1. Faktor penyebab nefrotoksisitas..............................................................................

18

2. Nefrotoksikan..........................................................................................................

20

E. Karbon Tetraklorida......................................................................................................

21

F. Antioksidan...................................................................................................................

22

G. Ekstraksi........................................................................................................................

23

H. Landasan teori...............................................................................................................

25

I.

Hipotesis........................................................................................................................

26

BAB III. METODE PENELITIAN.....................................................................................

27

A. Jenis dan Rancangan Penelitian....................................................................................

27

xi


B. Variabel dan Definisi Operasional................................................................................

27

1. Variabel utama.........................................................................................................

27

2. Variabel pengacau....................................................................................................

27

3. Definisi Operasional.................................................................................................

28

C. Bahan Penelitian...........................................................................................................

29

1. Bahan utama.............................................................................................................

29

2. Bahan kimia..............................................................................................................

29

D. Alat dan Instrumen Penelitian.......................................................................................

30

1. Alat ekstraksi............................................................................................................

30

2. Alat uji nefroprotektif...............................................................................................

30

E. Tata Cara Penelitian 1.

Determinasi serbuk biji P. americana...................................................................

31

2.

Pembuatan serbuk..................................................................................................

31

3.

Pengumpulan bahan..............................................................................................

31

4.

Penetapan kadar air serbuk P. americana..............................................................

31

5.

Pembuatan ekstrak etanol biji P. americana..........................................................

32

6.

Penetapan konsentrasi pekat ekstrak.....................................................................

33

7.

Penetapan dosis ekstrak etanol biji P. americana..................................................

33

8.

Pembuatan larutan karbon tetraklorida..................................................................

34

9.

Pembuatan suspending agent CMC-Na 1%..........................................................

34

10. Uji Pendahuluan.....................................................................................................

34

11. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji..............................................................

34

12. Pembuatan Serum..................................................................................................

35

xii


13. Penetapan kadar serum kontrol, kadar kreatinin serum.........................................

36

F. Tata Cara Analisis Hasil................................................................................................

36

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN............................................................................

38

A. Penyiapan Bahan ..........................................................................................................

38

1. Hasil determinasi serbuk biji P.americana............................................................

38

2. Penetapan kadar air serbuk biji P. americana........................................................

39

3.

Hasil pembuatan dan penimbangan ekstrak etanol biji P. americana...................

39

B. Uji Pendahuluan............................................................................................................

41

1. Penentuan dosis nefrotoksik karbon tetraklorida...................................................

41

2. Penentuan waktu pencuplikan darah......................................................................

42

3. Penetapan lama pemejanan ekstrak etanol biji P. americana................................

44

4. Penetapan dosis ekstrak etanol biji P. americana..................................................

44

C. Hasil Uji Efek Nefroprotektif Ekstrak Etanol Biji P.americana..................................

45

1. Kontrol negatif olive oil dosis 2 mL/kgBB ...........................................................

48

2. Kontrol nefrotoksin karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB...................................

51

3. Kontrol ekstrak etanol biji P. americana dosis 1400mg/kgBB............................

53

4. Perlakuan ekstrak etanol biji P.americana dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB…………………..

55

Rangkuman Pembahasan...........................................................................................

60

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN..............................................................................

63

A. Kesimpulan...................................................................................................................

63

B. Saran..............................................................................................................................

63

DAFTAR PUSTAKA..........................................................................................................

64

D.

xiii


LAMPIRAN.........................................................................................................................

70

BIOGRAFI PENULIS.........................................................................................................

94

xiv


DAFTAR TABEL

Tabel I.

Senyawa-senyawa yang bersifat nefrotoksikan.............................................................................

20

Tabel II.

Komposisi dan konsentrasi reagen serum kreatinin..................

30

Tabel III.

Purata kadar kreatinin tikus pada jam ke 0, 24, 48 dan 72........................................................................................

Tabel IV.

42

Hasil uji Scheffe kadar kreatinin serum tikus pada jam ke 0,24, 48 dan 72 setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2mL/kgBB........................................

43

Tabel V.

Kadar kreatinin serum tikus pada enam kelompok...................

46

Tabel VI.

Hasil uji Scheffe kadar kreatinin serum tikus pada enam kelompok.................................................................

Tabel VII.

Hasil pemeriksaan histologis ginjal pada keenam kelompok perlakuan...................................................

Tabel VIII.

47

48

Purata kadar kreatinin serum tikus setelah pemejanan olive oil dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0 dan 48 jam............................................................................

Tabel IX.

Hasil rendemen ekstrak etanol biji P.americana...............................................................................

Tabel X.

Tabel XI.

49

89

Pengeringan ekstrak etanol biji P.americana hingga terbentuk ekstrak kental.................................................

89

Hasil validitas dan reliabilitas..................................................

90

xv


DAFTAR GAMBAR

Gambar 1.

Struktur ginjal.............................................................................

9

Gambar 2.

Nefron ginjal..............................................................................

10

Gambar 3.

Sel-sel tubulus kontortus proksimal dan distal...........................

12

Gambar 4.

Perbedaan bentuk sel tubulus proksimal dan distal...................

13

Gambar 5.

Gambaran mikroskopik ductus colligens..................................

14

Gambar 6.

Mekanisme biotransformasi dan oksidasi karbon tetraklorida................................................................................

Gambar 7.

21

Diagram batang rata-rata kadar kreatinin tikus padajam ke 0, 24, 48 dan 72 setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB........................................

Gambar 8.

Diagram batang rata-rata kadar kreatinin serum tikus pada enam kelompok.................................................................

Gambar 9.

42

47

Diagram batang kadar kreatinin setelah pemejanan olive oil pada selang waktu 0 dan 48 jam...................................

49

Gambar 10. Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok perlakuan kontrol negatif olive oil yang mengalami Intratubular Hialin Cast (ITC)........................................................................

50

Gambar 11. Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok perlakuan kontrol negatif olive oil

yang mengalami

Degenerasi Hidropik Epitel Tubulus (DHET)........................... Gambar 12. Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok

xvi

50


perlakuan nefrotoksin karbon tetraklorida 2mL/kgBB dengan kondisi ginjal yang normal...........................................

52

Gambar 13. Gambaran mikroskopik ginjal pada kelompok perlakuan ekstrak etanol biji P.americana dosis 350mg/kgBB yang mengalami perivaskulitis...........................

xvii

57


DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1.

Foto serbuk biji P.americana................................................

71

Lampiran 2.

Foto ekstrak kental biji P.americana.....................................

71

Lampiran 3.

Foto larutan ekstrak etanol biji P.americana.......................

71

Lampiran 4.

Surat pengesahan determinasi serbuk biji P.americana........

72

Lampiran 5

Hasil determinasi serbuk biji Persea americanaMill...........

73

Lampiran 6.

Surat pengesahan Medical and Health Research Ethics Committee (MHREC)...........................................................

Lampiran 7.

75

Analisis statistik kadar kreatinin serum pada uji penentuan waktu pencuplikan darah tikus setelah diinduksi karbon tetraklorida 2mL/kgBB..................

Lampiran 8.

76

Analisis statistik kadar kreatinin serum pada enam kelompok perlakuan ekstrak etanol biji P.americana setelah induksi karbon tetraklorida 2mL/kgBB.....................

Lampiran 9.

80

Analisis statistik kadar kreatinin serum pada perlakuan kontrol negatif olive oil dosis 2mL/kgBB.............

84

Lampiran 10. Perhitungan efek nefroprotektif(%).......................................

85

Lampiran 11. Perhitungan penetapan peringkat dosis ekstrak etanol biji P.americana kelompok perlakuan................................................................................

86

Lampiran 12. Perhitungan konversi dosis untuk manusia..........................

87

Lampiran 13. Penetapan kadar air serbuk biji P.americana........................

88

xviii


Lampiran 14. Hasil rendemen ekstrak etanol biji P.americana...........................................................................

89

Lampiran 15. Bobot pengeringan ekstrak etanol biji P.americana hingga terbentuk ekstrak kental.........................................................

89

Pengukuran validitas dan reliabilitas.....................................

90

Lampiran 17. Surat pengesahan hasil pemeriksaan histologis.....................

91

Lampiran 16

xix


INTISARI

Penelitian ini bertujuan membuktikan adanya efek nefroprotektif pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji Persea americana Mill. (P.americana) terhadap penurunan kadar kreatinin serum dan gambaran histologis ginjal pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dan memperoleh besar dosis efektifnya. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Dalam penelitian ini digunakan tiga puluh ekor tikus jantan galur Wistar, umur 2-3 bulan, berat badan ±150-250 gram. Tikus dibagi dalam enam kelompok yaitu kelompok kontrol negatif diberi olive oil dosis 2 mL/kgBB, kelompok kontrol nefrotoksin diberikan karbon tetraklorida 2 mL/kgBB secara ip, kontrol ekstrak etanol biji P.americana dengan dosis 1400 mg/kgBB, dan kelompok empat hingga enam merupakan kelompok perlakuan yang diberi ektrak etanol biji P.americana dosis 350, 700, dan 1400mg/kgBB. Pemberian ekstrak etanol biji P. americana dilakukan secara peroral, sekali sehari selama enam hari berturut-turut kemudian pada hari yang ketujuh semua tikus pada kelompok perlakuan diberi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB secara ip. Empat puluh delapan jam setelah diberikan karbon tetraklorida, darah diambil melalui sinus orbitalis mata tikus untuk diukur kadar kreatinin serum dan pengambilan organ ginjal untuk pemeriksaan histologis. Data kadar kreatinin dianalisis dengan analisis ANOVA satu arah dan dilanjutkan dengan uji Scheffe atau uji T-berpasangan untuk dua kelompok sampel berpasangan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji P.americana memiliki efek nefroprotektif dengan penurunan kadar kreatinin serum dan gambaran mikroskopis ginjal yang normal pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida. Tidak terdapat kekerabatan antara dosis dan respon yang dihasilkan. Ekstrak etanol biji P.americana dosis 350, 700, dan 1400 mg/kgBB memiliki efek nefroprotektif berturut-turut sebesar 133,3; 133,3; dan 85,7%. Dosis efektifnefroprotektif ekstrak etanol biji P.americana adalah 350 mg/kgBB. Kata kunci : Persea americanaMill., etanol, nefroprotektif, karbon tetraklorida

xx


ABSTRACT The aim of this research wasto determine about nephroprotective effect of ethanol extract Persea americana Mill. (P.americana) seeds by reducing creatinine serum level in rats induced by carbon tetrachloride and get the effective dose. This research was an experimental research with direct sampling design. This research used Wistar male rats, age 2-3 months, and weight ± 150-250 g. The rats were divided into six treatment groups. The first group (negative control) was givenolive oil 2 mL/kgBW. Then, the second group (nephrotoxin control) was given carbon tetrachloride 2 mL/kgBW i.p. Third group (extract control) was given ethanol extract of P.americanaseed 1400mg/kgBW.The fourth until sixth group (treatment) were given ethanol extract of P. americana seed dose 350, 700 and 1400mg/kgBW orally once a days for six days successively and then in the seventh day all of the treatments group were given carbon tetrachloride 2 mL/kgBW by i.p. Fourty eight hours later, blood was collected from the orbital sinus eye to be measured creatinine serum level and examined the histological figure of kidney. It was analyzed statistically with One Way Anova and Scheffe test or T-test for paired sample. Based of the result of the research, ethanol extract P. americana seed gave nephroprotective effects by reducing creatinine serum level and a relatively normal histological figure of kidney in rats induced by carbon tetrachloride. There was no relation between dose and response which were seen from the greater dose of ethanol extract P. americana seed given, thus the nephroprotective was not higher. Nephroprotective effect with dose of 350, 700 and 1400mg/kgBW successively were 133.3; 133.3; and 85.7%. The effective dose of ethanol extract P.americana seed was 350mg/kgBW. Keywords : Persea americana Mill. seed, ethanol, nephroprotective, carbon tetrachloride

xxi


BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Ginjal merupakan sepasang organ bersimpai yang berfungsi menyaring darah dan terletak di daerah retroperitoneum pada dinding posterior abdomen. Ginjal menyaring darah untuk membersihkan zat-zat sisa terutama urea dan senyawa yang mengandung nitrogen serta mengatur elektrolit ekstravaskular dan volume intravaskular.Kategori penyakit ginjal didasarkan pada letak lesi, misalnya glomerulopati dan penyakit tubulo interstisium atau berdasarkan sifat faktor yang menyebabkan penyakit ginjal, misalnya imunologik, metabolik, infiltratif, infeksi, hemodinamik, atau toksik (McPhee dan Ganong, 2007). Fungsi homeostatik pada keadaan gagal ginjal kronik atau gagal ginjal akut akan terganggu yang kemudian menyebabkan terjadinya abnormalitas komposisi dan volume cairan tubuh yang berat dan cepat (Guyton dan Hall, 2006). Penyakit ginjal menjadi masalah kesehatan, baik di negara maju maupun negara berkembang. Selama satu dekade terakhir terjadi peningkatan insidensi dan prevalensi penyakit ginjal di seluruh dunia (Hamer dan Nahas, 2006). Menurut laporan World Health Report (WHO) (2002) dan proyek

Global Burden of

Disease (GDB), penyakit ginjal dan saluran kemih telah menjadi salah satu penyakit global yang mematikan. Penyakit ini menyebabkan rata-rata 850.000 kematian setiap tahun dan 15.010.167 mengalami kecacatan seumur hidup (WHO,2002).

1


2

Insidensi dan prevalensi gagal ginjal kronik terminal di Indonesia belum diketahui dengan pasti. Namun diperkirakan besarnya insidensi gagal ginjal kronik terminal di Indonesia adalah sebesar 100-150 orang tiap 1 juta penduduk pertahun. Sedangkan besarnya prevalensi gagal ginjal kronik terminal di Indonesia diperkirakan sebesar 200–250 orang tiap 1 juta penduduk pertahun (Bakri,2005). Berdasarkan tingginya angka kejadian gagal ginjal, maka dibutuhkan adanya alternatif pengobatan untuk penyakit ini. P. americana merupakan tanaman yang dikenal mempunyai kemampuan mengobati hipertensi (Anaka, Ozolua, dan Okpo, 2009), juga sebagai anti radang dan menghilangkan rasa sakit (Haryanto,2009). Biji P.americana mengandung antioksidan larut air dan dapat menangkap radikal bebas yaitu flavonoid (Arukwe, Amadi, Duru, Agomuo, Adindu, dan Odika, 2012). Flavonoid mampu mencegah kerusakan oksidatif sel, memiliki aktifitas perlindungan dan anti kanker yang kuat dalam melawan tahap-tahap karsinogenesis (Salah, Miller, Pangauga, Bolwell, Rice, dan Evans, 1995). Selain itu, Malangngi, Sangi, dan Paendong (2012) melaporkan ekstrak etanol biji P. americana menunjukkan aktivitas antioksidan melalui penangkapan radikal bebas DPPH. Karbon tetraklorida merupakan salah satu senyawa model yang dapat menginduksi terjadinya kerusakan oksidatif sel pada beberapa fungsi fisiologis hewan uji (Ivor dan Schneider, 2005). Karbon tetraklorida akan mengalami metabolisme oleh enzim sitokrom P-450 membentuk radikal bebas triklorometil (•CCl3) dan triklorometilperoksida (•OOCCl3) yang lebih reaktif. Radikal bebas yang dihasilkan dapat menyebabkan peningkatan peroksidasi lipid di hati dan


3

jaringan ginjal (Manna, Sinha, dan Sil, 2006). Terbentuknya ikatan kovalen antara radikal bebas dengan makromolekul jaringan ginjal terutama menimbulkan kerusakan pada bagian tubulus proksimal ginjal (Cotran dan Robbins, 1997). Kosinska, Karamac, Estrella, Hernandez, Bartolome, dan Dykes (2012) melaporkan kandungan fenolik yang tinggi serta kapasitas antioksidan dari ekstraksi biji P.americana dengan menggunakan pelarut metanol.

Aktivitas

antioksidan in vitro diperoleh dari hasil ekstraksi biji P.americana menggunakan pelarut etil asetat, asetone dan metanol (Javier, David, María, Petri, dan Mario, 2011). Pada penelitian ini digunakan sediaan dalam bentuk ekstrak menggunakan pelarut etanol. Hal ini didasarkan pada penelitian Marlinda, Sangi, dan Wuntu (2012) yang memperoleh kandungan metabolit sekunder P. americanayaitu alkaloid, triterpenoid, tanin, flavonoid dan saponin melalui ekstraksi dengan pelarut etanol 70%.

Selain itu, pemilihan pelarut etanol dilakukan untuk

memperoleh senyawa yang dapat berperan sebagai antioksidan menggunakan pelarut yang memiliki tingkat kepolaran berbeda dengan metanol. Penelitian mengenai khasiat bagian buah maupun daun tanaman P. americana telah banyak dilakukan. Namun penelitian terkait biji P. americana yang umumnya dianggap kurang bermanfaat atau hanya sebagai limbah masih terbatas terutama terkait kemampuannya sebagai nefroprotektif. Berdasarkan hal tersebut maka perlu dilakuan penelitian untuk membuktikan kemampuan nefroprotektif ekstrak etanol biji P. americana tetraklorida.

pada tikus terinduksi karbon


4

1. Perumusan masalah : Berdasarkan latar belakang diatas, dapat diuraikan permasalahan sebagai berikut : a. Apakah pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P.americana mempunyai efek nefroprotektif terhadap kadar kreatinin dan gambaran histologis organ ginjal pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida? b. Berapa besar dosis efektif nefroprotektif ekstrak etanol biji P. americana pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida? 2. Keaslian penelitian Sejauh pengamatan penulis, penelitian terhadap P. americana pernah dilakukan oleh Idris, Ndukwe, dan Gimba (2009) yang melaporkan kemampuan biji P. americana sebagai antimikroba. Penelitian Anaka, dkk. (2009) melaporkan pengaruh ekstrak biji P.americana sebagai penurun tekanan darah pada tikus Sprague-Dawley. Arukwe, dkk. (2012) melaporkan kandungan kimia biji P. americana yaitu saponin, flavonoid, alkaloid dan fenol. Malangngi, dkk.(2012) juga melaporkan kandungan tanin dan aktivitas antioksidan ekstrak etanol biji P. americana dalam menangkap radikal bebas DPPH. Kosinska, dkk. (2012) melaporkan kandungan fenolik yang tinggi serta kapasitas antioksidan pada ekstrak metanol kulit dan biji P. americana terhadap radikal bebas DPPH dan ABST. Sepanjang pengetahuan peneliti, efek nefroprotektif ekstrak etanol biji P. americanaterhadap kadar kreatinin dan gambaran histologis organ ginjal pada


5

tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida belum pernah dilakukan. 3.

Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis. Penelitian ini diharapkan dapat memberikan

sumbangan ilmu pengetahuan mengenai pengaruh pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P. americana terhadap fungsi ginjal dengan parameter kadar kreatinin dan gambaran histologis organ ginjal tikus yang terinduksi karbon tetraklorida. b. Manfaat praktis. Penelitian ini dapat dijadikan bahan pertimbangan masyarakat untuk menggunakan biji

P.americana sebagai proteksi terhadap

organ. B. Tujuan Penelitian 1. Tujuan umum Membuktikan adanya efek nefroprotektif pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P.americanapada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida. 2. Tujuan khusus Mengetahui dosis efektif ekstrak etanol biji P.americana sebagai nefroprotektif pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Persea americana Mill. 1. Taksonomi Kingdom

: Plantae (Tumbuhan)

Subkingdom

: Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super Divisi

: Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Divisi

: Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas

: Magnoliopsida (berkeping dua / dikotil)

Sub Kelas

: Magnoliidae

Ordo

: Laurales

Famili

: Lauraceae

Genus

:Persea

Spesies

: Persea americana Mill.

(Proseanet, 2012)

2. Sinonim Laurus persea L, Persea drymifolia Schlecht. and cham, Persea gratissima C.F. Gaertn. Persea edulis Raf., Persea nubigena, Persea steyermarkii C.K. Allen (Lim, 2012). 3. Nama lain Adpukat, avokad (Indonesia), avocado (Filipina), Avocado (Amerika), alligator pear, avocado, avocado-pear, butter fruit (Inggris), avocat, avocatier, zabelbok,

zaboka

(Prancis),

Alligatorbirne,

6

Avocadobirne

(Jerman),


7

apukado, avokado, buah mentega (Malaysia), aguacate, pagua (Spanyol), awokado (Thailand) (World Agroforestry Centre, 2002). 4. Morfologi P.americana merupakan jenis pohon berkayu menahun (perennial) dan memiliki ukuran sedang sampai besar, dengan tinggi mencapai 20 m. Tumbuhan ini memiliki daun tunggal dan memiliki tepi daun rata. Daun berbentuk elips hingga lanset, bulat telur hingga bulat telur sungsang, dengan panjang daun 5-40 cm dan lebar 3-15 cm, permukaan atas daun terdapat selaput lilin. Bentuk bunga berupa tongkol majemuk yang muncul di ujung cabang. Bunga dari P.americana ini tergolong bunga banci tersusun atas 3 daun mahkota. Buah besar berdaging dan berair, berbiji tunggal, permukaan buah halus, panjang 7-20 cm. Buah besar dan bulat, dilapisi dua lapisan dan dua kotiledon besar yang melindungi embrio kecil (Proseanet, 2012). 5. Kandungan kimia Kandungan fitokimia pada tanaman alpukat (P.americana) memiliki kadar yang berbeda-beda pada setiap bagiannya. Beberapa kandungan fitokimia penting yang ditemukan dalam tanaman ini antara lain, kandungan saponin, flavonoid, tanin, alkaloid, glikosida sianogenik, steroid dan fenol (Arukwe dkk, 2012). 6. Khasiat dan kegunaan Di Nigeria, ekstrak biji P. americana digunakan untuk mengobati hipertensi. Penelitian Anaka, dkk. (2009) melaporkan bahwa ekstrak biji P. americana dapat menurunkan tekanan darah. Sedangkan ekstrak kulit kayunya


8

digunakan secara tradisional sebagai pengobatan penyakit kulit yang disebabkan oleh parasit di Nigeria (Owolabi, Jaja, dan Coker, 2005). Penelitian Idris, dkk. (2009) melaporkan ekstrak biji P. americana memiliki kemampuan sebagai antimikrobia. Daun P. americanamemiliki kemampuan menyembuhkan penyakit diabetes melitus, sedangkan biji P. americanasebagai anti radang dan menghilangkan rasa sakit (Haryanto, 2009). Menurut penelitian yang dilakukan Malangngi, dkk. (2012), dilaporkan ekstrak etanol biji P.americana memiliki kandungan antioksidan yang dapat menangkap radikal bebas DPPH. Alpukat diketahui memiliki kegunaan sebagai tanaman obat yaitu untuk menyembuhkan luka dan menstimulasi pertumbuhan rambut, sebagai aprodisiaka, dan mengobati disentri serta diare (DerMarderosin dan Beutler, 2002).

B. Ginjal 1.

Anatomi dan fisiologi ginjal Ginjal merupakan sepasang organ bersimpai yang berfungsi menyaring

darah dan terletak di daerah retroperitoneum pada dinding posterior abdomen. Ginjal dialiri sekitar 25% curah jantung. Ekskresi produk sisa metabolisme, pengendalian air dan garam, pemeliharaan keseimbangan asam dan basa, serta sekresi berbagai hormon dan autokoid merupakan fungsi penting dari ginjal (Robbins dan Cotran, 2007). Ginjal memiliki sisi medial cekung, yaitu hilus yang memiliki permukaan lateral cembung yang dilapisi oleh suatu simpai fibrosa tipis. Hilus berfungsi sebagai tempat masuknya syaraf, keluarnya ureter serta masuk dan keluarnya


9

pembuluh darah dan pembuluh limfe. Ginjal memiliki korteks di bagian luar dan medula di bagian dalam. Medula ginjal terdiri dari 8-15 struktur berbentuk kerucut yang disebut piramida ginjal. Piramida ginjal ini dipisahkan oleh penjuluran korteks yang disebut columna renalis. Setiap piramida medula dan jaringan korteks di dasarnya dan sepanjang sisinya membentuk suatu lobus (Gambar 1) (Mescher, 2011). Pada orang dewasa berat ginjal mencapai 150 gram dan kira-kira seukuran kepalan tangan. Kapsul fibrosa keras melingkupi ginjal untuk melindungi struktur dalamnya yang rapuh (Guyton dan Hall, 2006).

Gambar 1. Struktur Ginjal (Mescher, 2011 )

Satuan anatomis fungsi ginjal adalah nefron. Nefron tersusun atas korpuskulus ginjal, tubulus kontortus proksimal, segmen tebal dan tipis ansa Henle, tubulus kontortus distal, serta ductus colligens (Gambar 2) (Junqueira, Carneiro, dan Kelley, 2005). Glomerulus berfungsi sebagai tempat darah disaring, sedangkan tubulus ginjal berfungsi sebagai tempat air dan garam dalam filtrat diserap kembali (McPhee dan Ganong, 2007). Tubulus kontortus distal


10

merupakan tempat dimana sekitar 80% elektrolit dan air diserap kembali. Ansa henle dan tubulus kontortus distal serta ductus colligens merupakan tempat pemekatan urin dan tempat terjadinya perubahan pada elektrolit dan air sebagai respon terhadap pengaturan hormonal (McPhee dan Ganong, 2007).

Gambar 2. Nefron ginjal (Mescher, 2011)

Bagian-bagian dari nefron yaitu korpuskel ginjal, tubulus kontortus proksimal, segmen tebal dan tipis ansa Henle, tubulus kontortus distal, serta ductus colligens, akan dijelaskan sebagai berikut : a. Kospuskel ginjal dan filtrasi darah.

Pada setiap nefron terdapat sebuah

korpuskel ginjal dengan diameter sekitar 200µm dan mengandung seberkas kapiler yang disebut glomerulus. Glomerulus ini dikelilingi oleh simpai (Bowman) glomerular (Gambar 2) (Mescher, 2011).


11

Glomerulus tersusun atas arteriol aferen dan eferen serta suatu berkas kapiler diantaranya yang dilapisi oleh sel endotel. Glomerulus ini dibungkus oleh sel epitel yang membentuk suatu lapisan yang berhubungan dengan lapisan yang membentuk simpai Bowman dan tubulus ginjal. Ruang antara kapiler-kapiler di glomerulus disebut mesangium. Di antara sel epitel dan kapiler terdapat zat yang membentuk suatu membran basal (McPhee dan Ganong, 2007). Glomerulus berhubungan dengan kapsula Bowman di bagian dalam melalui lapisan viseral. Lapisan viseral ini tersusun oleh modifikasi sel-sel epitel yang disebut podosit. Ruang Bowman dikelilingi oleh dinding luar yang tersusun oleh sel-sel epitel skuamous simpleks yang membentuk lapisan parietal (Gartner dan Hiatt, 2007). b.

Tubulus kontortus proksimal. Epitel skuamosa pada lapisan parietal simpai

Bowman berhubungan langsung dengan epitel kuboid pada tubulus kontortus proksimal (Gambar 3). Tubulus berlekuk ini lebih sering tampak pada potongan korteks ginjal karena berukuran lebih panjang dari tubulus kontortus distal. Sel tubulus proksimal berfungsi mereabsorpsi sebanyak 60-65% air yang disaring dalam korpuskel ginjal, beserta hampir semua nutrien, ion, vitamin dan protein plasma kecil. Dinding tubulus akan mengangkut air dan dan zat terlarut secara langsung dan segera diambil olehkapiler peritubular( Mescher, 2011). Adanya

sejumlah

besar

mitokondria

pada

tubulus

proksimal

menyebabkan sel-sel pada tubulus proksimal memiliki sitoplasma asidofilik. Kemampuan mereabsorbsi dari tubulus kontortus proksimal didukung oleh adanya banyak mikrovili berukuran panjang, yang membentuk suatu brush border. Pada sediaan histologis rutin, brush border ini tampak tidak teratur dan lumennya


12

tampak terisi serabut. Kapiler dan komponen mikrovaskular lain banyak dijumpai pada jaringan ikat sekitar ( Mescher, 2011).

Gambar 3. Sel-sel tubulus kontortus proksimal (P)dan distal (D) ( Mescher, 2011) Sel-sel epitel tubulus sangat peka terhadap anoksia dan mudah mengalami efek toksik. Hal ini disebabkan beberapa faktor diantaranya adalah permukaan yang luas untuk reabsorbsi tubulus, sistem transpor aktif untuk ion dan asam organik, dan kemampuan melakukan pemekatan secara efektif. Selain itu kadar sitokrom P450 yang tinggi untuk mendetoksifikasi atau mengaktifkan toksikan juga menjadi faktor penyebab efek toksik yang dialami oleh epitel tubulus(Robbins dan Cotran, 2007; Katzung, 2002). c.

Gelung nefron (ansa Henle). Setelah tubulus kontortus proksimal akan

tampak adanya tubulus lurus yang lebih pendek dan memasuki medula membentuk gelung nefron. Ansa Henle merupakan struktur berbentuk U dengan segmen desendens dan asendens. Gelung nefron ini tersusun

atas selapis


13

epitelkuboid di dekat korteks, namun berupa epitel skuamosa di dalam medula (Mescher, 2011). d. Tubulus kontortus distal dan aparatus jukstaglomerulari. Saat memasuki korteks, segmen tebal asendens gelung nefron menjadi lurus dan kemudian berkelok-kelok membentuk tubulus kontortus distal. Selapis sel kuboid tubulus kontortus distal berbeda dengan tubulus kontortus proksimal. Sel kuboid tubulus ini lebih kecil dan tidak memiliki brush border (Gambar 4) ( Mescher, 2011).

Gambar 4. Perbedaan bentuk sel tubulus proksimal dan distal (Mescher, 2011)

e. Tubulus dan ductus colligens. Urin yang dihasilkan setelah melalui proses filtrasi dan reabsorbsi akan diekskresikan. Urin tersebut mengalir melalui tubulus kontortus distal hingga sampai ke tubulus colligens. Tubulus colligens merupakan bagian akhir setiap nefron yang saling bergabung membentuk ductus colligens yang berukuran lebih besar dan lebih lurus, berjalan di tepi piramidal ginjal dan bermuara ke dalam calyx minor (Gambar 2). Epitel kuboid berdiameter sekitar 40 µm melapisi tubulus colligens. Sel-sel ductus colligens yang berkonvergensi berbentuk kolumnar dan diameter ductus mencapai 200µm di dekat puncak piramida medula ginjal (Gambar 5) ( Mescher, 2011).


14

Gambar 5. Gambaran mikroskopik ductus colligens (CD) (Mescher, 2011)

2. Fungsi ginjal Ginjal menjalankan berbagai fungsi dalam homeostasis sebagai berikut: a. Ekskresi produk sisa metabolik, bahan kimia asing, obat, dan metabolit hormon.Ginjal akan membuang berbagai macam produk sisa metabolisme yang tidak dibutuhkan lagi oleh tubuh. Produk-produk tersebut antara lain urea (dari metabolisme asam amino), kreatinin (dari kreatin otot), asam urat (dari asam nukleat), produk akhir pemecahan hemoglobin (seperti bilirubin), dan metabolit berbagai hormon. b. Pengaturan keseimbangan air dan elektrolit.Fungsi homeostatis tubuh diatur oleh ginjal dengan mengatur ekskresi air dan elektrolit sesuai dengan asupannya. Asupan air dan banyak elektrolit terutama ditentukan oleh kebiasaan makan seseorang. Dengan demikian ginjal harus mengatur kecepatan ekskresi sesuai asupan berbagai macam zat. Pada saat terjadi kenaikan asupan kadar natrium


15

dalam tubuh, maka ginjal akan mengatasinya dengan meningkatkan ekskresi sampai keseimbangan antara asupan dan keluaran natrium tercapai kembali. c. Pengaturan tekanan arteri. Ginjal mengatur tekanan arteri jangka panjang dengan mengekskresikan sejumlah natrium dan air. Selain itu ginjal juga turut mengatur tekanan arteri jangka pendek dengan mengekskresikan faktor atau zat vasoaktif, seperti renin, yang menyebabkan pembentukan vasoaktif lainnya, misalnya angiotensin II. d. Pengaturan keseimbangan asam-basa. Pengaturan keseimbangan asam-basa oleh ginjal dilakukan bersama dengan paru dan sistem dapar cairan tubuh, dengan cara mengekskresikan asam dan mengatur penyimpanan dapar cairan tubuh. e. Pengaturan produksi eritrosit. Ginjal berperan dalam sekresi eritropoetin, yang merangsang pembentukan sel darah merah. Hipoksia merupakan salah satu rangsangan yang penting untuk sekresi eritropoetin oleh ginjal . f. Sintesis glukosa. Ginjal mensintesis glukosa dari asam amino dan prekursor lainnya selama masa puasa yang panjang, proses ini disebut glukoneogenesis. Kapasitas ginjal untuk menambahkan glukosa pada darah selama masa puasa yang panjang dapat menyaingi hati. g. Pengaturan produksi 1,25-dihidroksivitamin D3.Ginjal menghasilkan bentuk aktif vitamin D, yaitu 1,25-dihidroksivitamin D3(kalsitriol). Kalsitriol penting untuk deposit kalsium yang normal dalam tulang dan reabsorpsi kalsium oleh saluran cerna (Guyton dan Hall,2006).


16

3. Kerusakan ginjal Penyakit yang terjadi pada ginjal sangat kompleks, sehingga untuk memahaminya

dapat

disederhanakan

dengan

membagi

penyakit

ginjal

berdasarkan empat komponen morfologik dasar ginjal yaitu glomerulus, tubulus, interstisium dan pembuluh darah. Sebagian besar penyakit pada glomerulus disebabkan oleh proses imunologik, sedangkan penyakit pada tubulus dan interstisium sering disebabkan oleh bahan toksik atau infeksi. a.

Penyakit glomerulus. Glomerulonefritis kronis merupakan penyebab tersering

gagal ginjal kronik. Glomerulus dapat mengalami cedera sebagai akibat berbagai faktor dalam suatu perjalanan penyakit sistemik, misalnya lupus eritematosus, hipertensi, diabetes melitus. Penyakit glomerulonefritis dibagi menjadi sindrom nefrotik akut, glomerulonefritis progresif cepat, sindrom nefrotik, gagal ginjal kronik dan hematuria atau proteinuria asimtomatik. b.

Penyakit yang mengenai tubulus dan interstisium. Penyakit yang mengenai

kedua komponen ini yaitu cedera tubulus iskemik atau toksik yang menyebabkan Nekrosis Tubulus Akut (NTA) dan gagal ginjal akut serta reaksi peradangan di tubulus dan interstisium (nefritis tubulointerstisium). c.

Penyakit pembuluh darah. Adanya penyakit vaskular sistemik

dapat

mengenai pembuluh darah ginjal. Penyakit yang menyerang bagian pembuluh darah ginjal yaitu nefrosklerosis jinak, hipertensi maligna dan nefrosklerosis akseleratif, steanosis arteri renalis, serta mikroangiopati trombolitik (Robbin dan Cotran, 2007).


17

Gagal ginjal akut ditandai oleh naiknya kreatinin serum dengan cepat. Penyebab gagal ginjal akut dibagi menjadi prerenal, renal, dan postrenal. Aliran darah cukup tinggi terjadi pada ginjal yaitu 20% curah jantung, namun ginjal rentan terhadap iskemia. Faktor-faktor yang menyebabkan kerusakan sel ginjal iskemik atau akibat toksin termasuk kekurangan adenosin trifosfat seluler dan pembentukan radikal bebas. Penyebab gagal ginjal akut lainnya yaitu glomerulonefritis dan obat-obatan nefrotoksik (Rubenstein, Wayne, dan Bradley 2007). Pada penyakit gagal ginjal kronik atau gagal ginjal akut, fungsi homeostatik ginjal terganggu, dan kemudian terjadi abnormalitas komposisi dan volume cairan tubuh yang berat dan cepat. Dalam beberapa hari saja dapat terjadi akumulasi kalium, asam, cairan, dan zat-zat lainnya dalam tubuh sehingga menyebabkan kematian, kecuali ada intervensi klinis seperti hemodialisis untuk memulihkan (paling tidak sebagian) keseimbangan cairan tubuh dan elektrolit (Guyton dan Hall, 2006).

C. Kreatinin Kreatinin merupakan hasil metabolisme kreatin. Setiap hari kreatin disintesis terutama oleh hati dan sedikit oleh pankreas serta ginjal. Kreatin terdapat dalam hampir semua otot rangka dan terikat secara reversibel pada fosfat dalam bentuk fosfokreatin. Fosfokreatin ini merupakan senyawa penyimpan energi. Sebagian kecil dari kreatin secara irreversibel berubah menjadi kreatinin yang tidak mempunyai fungsi dan akan diangkut ke ginjal untuk diekskresikan (Widmann, 1992).


18

Kreatinin akan dilepaskan secara konstan dari otot dan ekskresi utamanya melalui filtrasi glomerulus. Pada kegagalan ginjal kronis, ketika terjadi penurunan kecepatan filtrasi glomerulus, kadar kreatinin akan meningkat berbanding terbalik dengan kecepatan ekskresi (Huether, McCance, Brashers, dan Rote, 2008). Setelah mengalami filtrasi pada glomerulus, kreatinin tidak akan direabsorpsi oleh tubulus ginjal. Serum kreatinin dapat digunakan sebagai metode untuk menentukan Glomerulus Filtration Rate (GFR) dan luasnya kerusakan ginjal secara tidak langsung pada kerusakan ginjal kronis (Porth dan Matfin, 2009). Macam metode pemeriksaan kreatinin darah yaitu : a. Jaffe reaction. Metode ini didasarkan pada adanya reaksi antara kreatinin dan asam pikrat dalam suasana basa akan membentuk senyawa kuning jingga. Warna yang dihasilkan akan dibaca oleh alat photometer. b. Kinetik. Prinsip dasar penggunaan metode ini relatif sama dengan metode Jaffe reaction, hanya dalam pengukuran dibutuhkan sekali pembacaan. Alat yang digunakan autoanalyzer. c. Enzimatik. Penggunaan metode ini didasarkan pada adanya substrat dalam sampel bereaksi dengan enzim membentuk senyawa enzim substrat dengan menggunakan alat photometer (Price and Wilson, 1985).

D. Nefrotoksisitas 1. Faktor penyebab nefrotoksisitas Beberapa faktor yang berkontribusi terhadap kerentanan ginjal pada senyawa toksik yaitu :


a.

19

Tingginya aliran darah pada ginjal.Aliran darah pada sebuah organ hanya

kurang dari 1% dari berat tubuh, tetapi ginjal menerima sekitar 25% aliran darah dari jantung. Oleh sebab itu ginjal akan menerima konsentrasi toksikan yang lebih tinggi (per gram jaringan) dibanding jaringan yang diperfusi lambat oleh darah seperti otot skelet, kulit dan lemak. Distribusi aliran darah renal tidak merata, dimana korteks menerima aliran darah tidak proporsional dengan yang diterima oleh medula dan papila. Karena itu, toksikan yang terbawa oleh darah akan lebih banyak tertuju pada bagian korteks dan berpotensi mempengaruhi fungsi kortikal lebih besar daripada medula dan papila. b. Konsentrasi senyawa kimia di cairan intraluminal. Proses pemekatan urin pada ginjal berpotensi menyebabkan terjadinya pemekatan senyawa toksik pada filtat glomerular. Proses reabsorpsi sepanjang nefron dapat meningkatkan konsentrasi intraluminal toksikan dari 10mM menjadi 50mM pada bagian tubulus proksimal ginjal, 66mM pada lengkung henle, 200mM pada tubulus distal, dan sebesar 2000 mM pada duktus pengumpul. Untuk senyawa toksik yang memiliki kelarutan rendah akan mengalami presipitasi intraluminal sehingga menyebabkan gagal ginjal akut sekunder bahkan obstruksi. Gradien konsentrasi berpotensi menimbulkan terjadinya difusi pasif toksikan kedalam sel-sel tubulus. c. Reabsorpsi dan /atau sekresi senyawa kimia melalui sel-sel tubulus. Proses transpor aktif di tubulus proksimal dapat menyebabkan peningkatan konsentrasi intraseluler dari suatu toksikan yang aktif untuk ditransportasikan. Selama proses sekresi aktif dan/ atau reabsorpsi, substrat secara umum diakumulasikan pada sel


20

tubulus proksimal dengan kadar yang sangat tinggi dibanding dengan yang berada di cairan luminal atau daerah peritubular. d. Biotransformasi dari pro-toksikan menjadi intermediet yang reaktif.Nefron memiliki kapasitas untuk memetabolisme pada segmen tertentu. Tubulus kontortus proksimal dan tubulus kontortus distal mengandung isoenzim dari sistem sitokrom P450 monooksigenase yang dapat memediasi bioaktivasi intrarenal

dari

beberapa pro-toksikan. Ditambah lagi

aktivitas

sintesis

prostaglandin di sel interstitial medula dan papila dapat turut andil dalam menyebabkan oksidasimenghasilkan kerusakan yang selektif pada papiler (Hodgson, 2010). 2.

Nefrotoksikan Banyak senyawa memiliki implikasi sebagai nefrotoksikan seperti

terlihat pada Tabel I. Tabel I. Senyawa-senyawa yang bersifat nefrotoksikan (Hodgson, 2010)

5.

Glomerulus

Tubulus Proksimal

1. Kompleks Imun 2. Antibiotik Aminoglikosida 3. Puromycin aminonukleosida 4. Adriamycin Penisilin

1. Antibiotik a. Sefalosporin b. Aminoglikosida 2. Agen Antineoplastik a. Nitrosourea b. Cisplantin dan analognya 3. Agen radiografi 4. Hidrokarbon terhalogenasi a. kloroform b. karbon tetraklorida c. trikloroetilen 5. Asam maleat 6. Citrinin 7. Logam a. Merkuri b. Phenacetin c. Acetaminophen d. Agen NSAID e. 2-bromoetilamin

Tubulus Distal /duktus pengumpul 1. Litium 2. Tetrasiklin 3. Ampoterisin 4. Flouride 5. Methoxyflurane

Papiler 1. 2. 3. 4. 5.

Aspirin Fenasetin Acetaminophen Agen NSAID 2-bromoetilamin


21

E. Karbon Tetraklorida Karbon tetraklorida merupakan suatu senyawa model nefrotoksik yang dapat menyebabkan Nekrosis Tubuler Akut (NTA). Radikal bebas yang dihasilkan dapat mengakibatkan kerusakan pada tubulus proksimal ginjal (Robbins dan Cotran, 1997). Kerusakan yang terjadi pada tubulus proksimal ginjal tidak disertai dengan kerusakan membran basalis sehingga memungkinkan untuk terjadinya regenerasi sel epitelnya. Karena itu, Nekrosis Tubular Akut (NTA) yang disebabkan karbon tetraklorida bersifat reversibel (dapat balik) (Underwood, 2000; Cotran dan Robbin, 1994).

Gambar 6. Mekanisme biotransformasi dan oksidasi karbon tetraklorida (Timbrell, 2008)

Dalam tubuh karbon tetraklorida akan mengalami proses metabolisme oleh enzim sitokrom P450 khususnya isoenzim CYP2E1. Enzim pemetabolisme ini dapat mempengaruhi aktivasi metabolit dari senyawa yang terbentuk, sehingga dapat meningkatkan atau mengurangi sifat toksik dari senyawa induk. Pada


22

metabolisme karbon tetraklorida, isoenzim CYP2E1 berfungsi sebagai agen pereduksi dan mengkatalis adisi elekron yang mengakibatkan hilangnya satu ion klorin sehingga terbentuk radikal bebas triklorometil (•CCl3) (Gambar 6) yang merupakan metabolit reaktif. Radikal bebas triklorometil ini akan berubah menjadi radikal bebas triklorometilperoksi (•OOCCl3) dengan adanya O2 (oksigen), dimana radikal bebas dalam bentuk ini menjadi lebih reaktif (Gregus dan Klaaseen, 2001). Phosgen yang terbentuk dari reaksi pada gambar 2 merupakan suatu intermediet yang sangat reaktif dan dapat bereaksi dengan makromolekul seluler untuk menginduksi terjadinya kerusakan sel (Hodgson, 2010). Karbon tetraklorida juga dapat mempengaruhi fungsi mitokondria ginjal, termasuk menyebabkan

efluks kalsium melintasi membran mitokondria

(Natarajan, Basivireddy, Ramachandran, Thomas, Ramamoorthy, dan Pulimood, 2006). Radikal reaktif yang terbentuk dapat berikatan kovalen dengan dengan makromolekul jaringan, yang menyebabkan jaringan mengalami kerusakan (Eaton, Gallogher, Bammler, dan Kunze, 1995). F. Antioksidan Antioksidan merupakan suatu senyawa kimia yang dapat mencegah oksidasi suatu substrat misalnya sel pada konsentrasi yang rendah (Halliwell, 1990). Berdasarkan sumbernya antioksidan dibagi dua yaitu antioksidan endogen dan antioksidan eksogen. Antioksidan endogen merupakan antioksidan yang dihasilkan oleh tubuh yang terdiri atas enzim-enzim superoksida dismutase, glutation peroksidase atau glutation reduktase serta enzim katalase dan


23

antioksidan non enzimatik seperti glutation (GSH) dan transferin. Antioksidan eksogen adalah antioksidan yang dibutuhkan dan diperoleh dari luar seperti senyawa-senyawa flavonoid, vitamin C, vitamin E dan karotenoid yang banyak ditemukan dalam sayur-sayuran dan buah-buahan (Heinonen dan Albanes, 1994). G. Ekstraksi Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair yang dibuat dengan menyari simplisia, diluar cahaya matahari langsung. Cairan penyari yang dapat digunakan dalam pembuatan ekstrak yaitu air, eter, etanol, atau campuran etanol dan air (Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2010). Pada akhir proses ekstraksi semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian rupa hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2005). Istilah maserasi berasal dari bahasa latin ”macerare” yang artinya mengairi, melunakkan (Voigt, 1994). Metode maserasi adalah salah satu metode ekstraksi sederhana yang dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari selama beberapa hari pada temperatur kamar dan terlindung dari cahaya sambil diaduk (Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2010). Rendaman tersebut disimpan dan harus terlindungi dari cahaya langsung untuk mencegah reaksi yang dikatalisis cahaya atau perubahan warna, sambil sesekali digojog. Penggojogan dilakukan untuk mencegah terjadinya keseimbangan antara larutan zat aktif yang terdapat dalam sel dengan larutan zat aktif yang terdapat diluar butir sel, sehingga perpindahan bahan aktif dapat terus berlangsung(Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik


Indonesia,

1986).

Keadaan

diam

tanpa

penggojokan

selama

24

maserasi

menyebabkan turunnya perpindahan bahan aktif. Semakin besar perbandingan simplisia yang diekstraksi terhadap cairan ekstraksi, akan semakin baik hasil yang diperoleh (Voight, 1994). Dengan metode ini, cairan penyari akan masuk ke dalam sel melewati dinding sel sehingga isi sel akan larut akibat perbedaan konsentrasi antara larutan di dalam sel dengan di luar sel. Larutan dengan konsentrasi tinggi akan terdesak keluar dan diganti oleh cairan penyari dengan konsentrasi rendah (proses difusi). Peristiwa tersebut terjadi secara berulang hingga terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel. Selanjutnya endapan dipisahkan dan filtrat dipekatkan (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 1986). Lamanya

proses

maserasi

adalah

berbeda-beda.

Farmakope

mencantumkan 4-10 hari, namun pada umumnya 5 hari. Setelah waktu tersebut keseimbangan antara bahan yang diekstraksi pada bagian dalam sel dengan luar sel telah tercapai. Remaserasi merupakan metode ekstraksi dengan melakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserat pertama, dan seterusnya. Pelarut kedua ditambahkan sebanyak penambahan pelarut pertama (Depkes RI, 2000). Etanol dipertimbangkan sebagai penyari karena lebih selektif, kapang dan bakteri sulit tumbuh dalam etanol 20% ke atas, tidak beracun, netral, absorbsinya baik. Etanol dapat dicampur dengan air pada berbagai perbandingan. Dengan menggunakan pelarut etanol, panas yang diperlukan untuk pemekatan


25

akan lebih sedikit. Untuk meningkatkan penyarian, biasanya digunakan campuran antara etanol dan air dalam berbagai perbandingan tergantung pada bahan yang akan disari (Voight, 1994).

H. Landasan Teori Ginjal merupakan organ

yang berfungsi menyaring darah.

Fungsi

penting ginjal antara lain dalam ekskresi produk sisa metabolisme, pengendalian air dan garam, pemeliharaan keseimbangan asam dan basa, serta sekresi berbagai hormon dan autokoid (Robbins dan Cotran, 2007).Ginjal menerima sekitar 20% aliran darah dari jantung, namun ginjal rentan terhadap iskemia. Beberapa penyebab kerusakan sel ginjal yaitu terjadinya iskemik, adanya toksin, kekurangan adenosin trifosfat seluler(ATP seluler), dan pembentukan radikal bebas. Penyebab gagal ginjal akut lainnya yaitu glomerulonefritis dan obat-obatan nefrotoksik (Rubenstein dkk., 2007). Pengukuran kuantitatif kerusakan ginjal dapat dilakukan dengan mengukur kadar kreatinin yang pada kegagalan ginjal akan ditahan bersama unsur nitrogen non-protein darah (Baron,1992). Karbon tetraklorida akan dimetabolisme oleh enzim sitokrom P-450 menjadi

radikal

bebas

triklorometil

(•CCl3)

dan

triklorometilperoksida

(•OOCCl3) yang lebih reaktif. Radikal reaktif yang terbentuk dapat berikatan kovalen dengan makromolekul jaringan, yang menyebabkan jaringan mengalami kerusakan (Eaton dkk., 1995). Pemberian antioksidan dapat melindungi jaringan dari pengaruh radikal bebas, ROS(Reactive Oxygen Species) dan peroksidasi lipid sehingga dapat


26

memperlambat proses perjalanan penyakit kronis seperti gagal ginjal kronis (Lai, Chou dan Chao, 2001 ; Gulcin, Oktay, Kirecci dan Aslam, 2003). Senyawa tanin yang yang diperoleh dari ekstraksi biji P. americana dengan pelarut etanol oleh Malangngi dkk. (2012) menunjukkan kemampuan sebagai antioksidan yang dapat menangkap radikal bebas DPPH. Selain itu, pada penelitian yang dilakukan Kosinka dkk. (2012) dengan melakukan ekstraksi biji P. americana dengan pelarut metanol diperoleh aktivitas antioksidan dari kandungan fenolik dalam menangkap radikal bebas DPPH dan ABST. Penelitian ini dilakukan untuk membuktikan kemampuanproteksi P. americana terhadap kerusakan ginjal akibat adanya radikal bebas yang dihasilkan oleh karbon tetraklorida.

I. Hipotesis Pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P. americana memiliki efek sebagai nefroprotektif dengan menurunkan kadar kreatinin serum dan gambaran histologis ginjal yang normal pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.


BAB III METODE PENELITIAN A.

Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. B. 1.

Variabel dan Definisi Operasional

Variabel utama a. Variabel bebas. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah dosis

ekstrak etanol biji P. americana. b. Variabel tergantung. Variabel tergantung penelitian ini adalah kadar kreatinin serum dan gambaran histologis ginjal akibat pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P.americanapada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida. 2.

Variabel pengacau a. Variabel pengacau terkendali. Variabel pengacau terkendali dalam

penelitian ini adalah kondisi hewan uji, yaitu tikus jantan galur Wistar dengan berat badan 150-250 gram dan umur 2-3 bulan. Frekuensi pemberian ekstrak etanol biji P. americanasatu kali sehari selama enam hari berturut-turut dengan waktu pemberian yang sama, cara pemberian senyawa pada tikus dilakukan secara peroral dan intraperitonial, dan bahan uji yang digunakan berupa serbuk biji

27


28

P.americana yang diperoleh dari daerah Padang, Sumatera Barat, diambil pada bulan Januari 2013. b. Variabel pengacau tak terkendali. Variabel pengacau tak terkendali dalam penelitian ini adalah kondisi patologis dari tikus jantan galur Wistar yang digunakan. . 3. Definisi operasional a. Biji P.americana. Biji yang diambil dari tanaman P.americana adalah yang berwarna kuning segar, tidak bercacat dan diambil dari buah yang telah matang. b. Ekstrak etanol biji P.americana. Ekstrak etanol biji P.americana adalah ekstrak kental yang diperoleh secara maserasi dengan merendam serbuk kering biji P.americana seberat 40,0 g dalam 200 mL pelarut etanol 70% selama lima hari, lalu diremaserasi selama dua hari. Kemudian disaring menggunakan corong Buchner, dievaporasilalu diuapkan dengan waterbath selama 10 jam pada suhu 800 C, hingga diperoleh selisih bobot penimbangan adalah 0. c. Dosis ekstrak etanol biji P. americana.Didefinisikan sebagai jumlah (mg) ekstrak kental tiap kilogram (kg) berat badan tikus. d. Kadar kreatinin(mg/dL). Didefinisikan sebagai jumlah kreatinin (mg) dalam tiap satu desiliter (dL) darah subjek uji. e. Penurunan kadar kreatinin serum. Didefinisikan sebagai kemampuan ekstrak etanol biji P. americanapada dosis tertentu untuk menurunkan kadar kreatinin serum pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.


29

f. Pemberian jangka panjang. Didefinisikan sebagai pemberian ekstrak etanol biji P. americana satu kali sehari selama enam hari berturut-turut secara peroral. g. Gambaran

histologis

ginjal.

Didefinisikan

sebagai

gambaran

mikroskopik sel-sel ginjal tikus setelah perlakuan.

C. Bahan Penelitian 1. Bahan utama a. Hewan uji yang digunakan yaitu tikus jantan galur Wistar dengan umur 2-3 bulan dan berat badan 150-250 gram yang diperoleh dari Laboratorium Imono Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. b. Serbuk biji P.americanayang diperoleh dari daerah Padang, Sumatera Barat pada bulan Januari 2013.

2. Bahan kimia a. Bahan nefrotoksin yang digunakan adalah karbon tetraklorida yang diperoleh dari laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. b. Etanol 70% yang digunakan sebagai cairan penyari dalam proses ekstraksi serbuk biji P.americanayang diperoleh daritoko kimia Aldrich. c. Bahan untuk pembuatan preparat histologis ginjal adalah larutan fisiologis NaCl 0,9% (normal saline) dan formalin 10%.


30

d. Aqua bidestilata untuk blanko pengujian kadar kreatinin, yang diperoleh dari

Laboratorium

Kimia

Analisis

Instrumental

Fakultas

Farmasi

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. e. Kontrol serum Kreatinin Cobas® (PreciControl ClinChem Multi 2) Roche/Hitachi analyzer f. Reagen serum kreatinin Komposisi dan konsentrasi dari reagen serum kreatinin adalah sebagai berikut : Tabel II. Komposisi dan konsentrasi reagen serum kreatinin Reagen I Reagen II

Sodium Hidroxide Picric Acid

0,2mol/L 20 mmol/L

g. Olive oil Bertolli ®

D. Alat atau Instrumen Penelitian 1. Alat ekstraksi Seperangkat alat gelas berupa bekker glass, erlenmeyer, gelas ukur, labu ukur, cawan porselen, corong Buchner, pipet tetes, batang pengaduk (Pyrex Iwaki Glass®). Ayakan No. 40 Electric Sieve Shaker Indotest 28 Multi Lab®, alumunium foil, timbangan analitik Mettler Toledo®, rotary vacuum evaporator IKAVAC®, waterbath dan desikator.

2. Alat uji nefroprotektif Seperangkat alat gelas berupa Bekker glass, tabung reaksi, labu ukur, batang pengaduk (Pyrex Iwaki Glass®), pipet gondok, glass firn. Timbangan elektrik Mettler Toledo®, sentrifuge Centurion Scientific®, vortex Genie


31

Wilten®, spuit per oral dan syringe 3 mL Terumo®, spuit ip. dan syringe 1 mL Terumo®, pipa kapiler, tabung Eppendorf, Microlab 200 Merck®.

E. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi serbuk bijiP. americana Determinasi serbuk bijiP. americana dilakukan dengan mencocokan ciriciri organoleptis dan mikrokopis serbuk biji yang diperoleh dari Padang dengan serbuk biji dari sampel otentik tanaman P. americana yang dibuat secara mandiri di Laboratorium Farmakognosi Fitokimia. 2. Pembuatan serbuk Biji P. americana dicuci bersih menggunakan air mengalir dan bagian kulit ari biji alpukat tersebut dibuang. Biji yang telah dicuci kemudian dipotong kecil-kecil dan diangin-anginkan hingga biji tidak tampak basah. Kemudian dilanjutkan dengan pengeringan menggunakan oven pada suhu 50˚C selama 24 jam, lalu diblender. Serbuk inilah yang akan dibandingkan dengan serbuk yang diperoleh dari daerah Padang. 3. Pengumpulan bahan Bahan uji yang digunakan adalah biji P. americana yang sudah dalam bentuk serbuk berwarna kecoklatan, diperoleh dari wilayah Padang,Sumatera Barat. 4. Penetapan kadar air serbuk biji P. americana Penetapan kadar air dilakukan dengan alat moisture balance Halogen moisture analyser Mettler Toledo®menggunakan metode gravimetri. Serbuk


32

ditimbang dan dihitung sebagai bobot sebelum pemanasan. Sebanyak 5 g serbuk biji P.americanadimasukkan ke dalam alat moisture balance, kemudian diratakan. Serbuk dipanaskan pada suhu 1050C selama 15 menit. Kemudian serbuk ditimbang ulang dan dihitung sebagai bobot sesudah pemanasan. Selisih bobot sebelum pemanasan dan sesudah pemanasan merupakan kadar air dari serbuk yang diteliti. 5. Pembuatan ekstrak etanol biji P. americana Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi yaitu dengan merendam 40 g serbuk biji P. americana dalam 200 mL pelarut etanol 70 % selama 5 hari terlindung dari cahaya matahari, sambil sesekali digojog. Lalu hasil maserasi disaring untuk memisahkan maserat dari serbuk dengan menggunakan corong Buchner yang dilapisi kertas saring. Kemudian serbuk hasil penyaringan tersebut diremaserasi dengan pelarut baru sebanyak 200 mL selama 2 hari lalu disaring kembali ( Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2010). Maserat kemudian dicampur dan dievaporasi dengan rotary evaporator. Prinsip kerja alat vaccum evaporator adalah menguapkan pelarut pada suhu rendah dengan adanya tekanan yang menyebabkan titik didih pelarut menjadi lebih rendah dan mudah diuapkan. Ekstrak yang sudah diuapkan pada vaccum evaporator lalu ditempatkan dalam cawan petri dan diuapkan kembali di atas waterbath selama 10 jam dengan suhu 80oC hingga diperoleh selisih bobot penimbangan adalah 0. Kemudian ekstrak kental yang diperoleh disimpan di dalam desikator. Menghitung rata-rata rendemen lima replikasi ekstrak etanol biji P.americana kental yang telah dibuat.


33

Rendemen ekstrak = berat cawan ekstrak kental – berat cawan kosong −

.1 +

=

.2 +

6. Penetapan konsentrasi pekat ekstrak

5

.3+

.4 +

.5

Konsentrasi yang dapat digunakan adalah konsentrasi pekat yang dapat dibuat, dimana pada konsentrasi tersebut suspensi ekstrak dapat dimasukkan serta dikeluarkan dari spuit oral dengan mudah. Cara pembuatannya adalah dengan melarutkan ekstrak kental dengan CMC Na 1%, dengan melakukan kenaikan konsentrasi secara bertahap hingga pada konsentrasi dimana campuran ekstrak dengan CMC Na% sudah tidak dapat dikeluarkan dengan mudah dari spuit oral. 7. Penetapan dosis ekstrak etanol biji P. americana Penetapan peringkat dosis didasarkan pada perhitungan dengan bobot tikus paling besar yaitu 250 gram, konsentrasi ekstrak etanol biji P.americana yang dapat dimasukkan dan dikeluarkan melalui spuit oral yaitu 7% atau 70 mg/mL, serta volume maksimal pemberian oral yaitu 5 mL. Maka dosis tertinggi dapat ditentukan sebagai berikut : BB x D = C x V Berat badan (kg) x dosis(mg/kgBB) = konsentrasi (mg/mL) x volume pemberian (mL) 0,250 kg x D

= 70mg/mL x 5 mL

D = 1400 mg/kgBB Dosis tengah dan dosis rendah ditentukan dengan menurunkan dua dan empat kelipatan dari dosis tertinggi sehingga diperoleh dosis 700 dan 350 mg/kgBB.


34

8. Pembuatan larutan karbon tetraklorida Karbon tetraklorida dibuat dalam konsentrasi 50%, dengan cara memasukkan 50 mL karbon tetraklorida ke dalam labu ukur 100 mL, lalu ditambahkan olive oil hingga tanda batas (Janakat dan Al-Merie, 2002). 9. Pembuatan suspending agent CMC-Na 1% Suspending agent CMC-Na 1% dibuat dengan cara mendispersikan lebih kurang 1,0 g CMC-Na yang telah ditimbang seksama ke dalam air sampai volume 100,0 mL. CMC-Na 1% ini akan digunakan untuk membuat suspensi ekstrak etanol biji P.americana. 10. Uji pendahuluan a. Penetapan dosis nefrotoksin karbon tetraklorida dan waktu pencuplikan darah. Pemilihan dosis karbon tetraklorida dilakukan untuk mengetahui pada dosis berapa karbon tetraklorida mampu menyebabkan kerusakan ginjal tikus yang ditandai dengan peningkatan kadar kreatinin dalam serum darah. Dosis nefrotoksik yang digunakan dalam penelitian ini mengacu pada penelitian yang dilakukan oleh Moneim dan El-Deib (2012) dan hasil orientasi, dimana pada dosis karbon tetraklorida 2 mL/kgBB dapat menyebabkan kerusakan ginjal dengan kenaikan kadar kreatinin serum. Penentuan waktu pencuplikan darah didasarkan pada hasil orientasi yaitu pada jam ke 48 setelah induksi karbon tetraklorida, dimana terjadi peningkatan kreatinin paling tinggi. 11. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji Sejumlah tiga puluh ekor tikus dibagi secara acak ke dalam enam kelompok perlakuan masing-masing sejumlah lima ekor tikus.

Kelompok I


35

(kontrol negatif) diberi olive oil dosis 2 mL/kgBB secara i.p. Kelompok II (kontrol nefrotoksik) diberi larutan karbon tetraklorida : olive oil (1:1) dosis 2 mL/kgBB secara i.p. Kelompok III (kontrol ekstrak) diberi ekstrak etanol biji P. americana dosis 1400 mg/kgBB selama enam hari berturut-turut secara per oral, tanpa diinduksi karbon tetraklorida. Kelompok IV, V dan VI merupakan kelompok perlakuan yang diberi ekstrak etanol biji P. americana dengan dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB. Pada hari ke tujuh kelompok IV-VI diberi larutan karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB secarai.p. Setelah 48 jam diambil darahnya melalui sinus orbitalis mata, lalu diukur kadar kreatinin serum. Setelah pengambilan darah untuk pengukuran kadar kreatinin serum, tikus dikorbankan dan diambil organ ginjalnya. Organ ginjal tersebut kemudian dicuci pada larutan saline (NaCl 0,9%) dan diawetkan dengan direndam dalam formalin 10% untuk dibuat preparat histologis lalu diamati penampakan mikroskopisnya. Pemeriksaan histologis dilakukan di Laboratorium Patologi Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Hasil pemeriksaan dibuat fotomikroskopik sebagai data kualitatif penunjang. 12. Pembuatan serum Darah diambil melalui bagian sinus orbitalis mata tikus lalu ditampung dalam tabung Eppendorf. Darah didiamkan selama kurang lebih 15 menit, kemudian disentrifugasi selama 15 menit dengan kecepatan 10000 rpm dan bagian supernatannya diambil. Supernatan yang diambil adalah serum yang akan diukur kadar kreatininnya.


36

13. Penetapan kadar serum kontrol, serum kreatinin Alat yang digunakan untuk menganalisis kadar kreatinin serum adalah Mikrolab 200 Merck®. Kadar kreatinin dinyatakan dalam satuan mg/dL. Pengukuran kadar kreatinin serum dilakukan di Laboratorium Biokimia-Fisiologi Manusia, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. a.

Penetapan kadar serum kontrol. Analisis dilakukan dengan cara

mencampur 1000 μL reagen I dengan 50 μL serum kontrol, divorteks selama lima detik lalu didiamkan selama dua menit. Setelah itu, ditambahkan 250 μL reagen II, divorteks selama lima detik dan dibaca resapan setelah satu menit. b. Penetapan kadar kreatinin serum. Analisis serum kreatinin dilakukan dengan cara mencampur 1000 μL reagen I dengan 50μL serum darah tikus, divorteks selama lima detik, lalu didiamkan selama dua menit. Setelah itu, ditambahkan 250μL reagen II, divorteks selama lima detik dan dibaca resapan setelah satu menit. F. Tata Cara Analisis Hasil Data kadar kreatinin serum diuji dengan Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui distribusi data dan analisis variansi dengan Levene’s Testuntuk melihat homogenitas antar kelompok perlakuan sebagai syarat analisis parametrik. Data terdistribusi normal dan variansi homogen maka dilanjutkan dengan analisis variansi pola searah (ANOVA one way) dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan masing-masing kelompok. Kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe untuk melihat perbedaan antar kelompok bermakna (signifikan) (p<0,05) atau tidak bermakna (tidak signifikan) (p>0,05). Bila data terdistribusi


37

normal dan terdiri dari dua kelompok yang berpasangan, maka dilakukan uji tberpasangan untuk melihat kebermaknaan perbedaan pada dua kelompok tersebut. Penentuan % efek nefroprotektif dilakukan melalui perhitungan dengan rumus sebagai berikut : (

(

)–(

)

)x 100


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan adanya efek nefroprotektif pada pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P. americana terhadap penurunan kadar kreatinin serum dan gambaran histologis ginjal pada tikus terinduksi karbon tetraklorida serta memperoleh besar dosis efektifnya. Dalam penelitian ini dilakukan beberapa tahapan yaitu determinasi serbuk P.americana, penetapan kadar air serbuk, pembuatan ekstrak, penetapan dosis ekstrak etanol biji P. americana, pengukuran kadar kreatinin serum, dan pemeriksaan histologis ginjal.

A. Penyiapan Bahan 1. Hasil determinasi serbuk biji P.americana Tujuan dilakukan determinasi serbuk P.americana adalah untuk memastikan bahwa serbuk yang digunakan adalah benar berasal dari biji tanaman P.americana. Determinasi dilakukan dengan mencocokkan ciri-ciri organoleptis dan mikrokopis serbuk biji P.americana yang diperoleh dari daerah Padang dengan serbuk biji yang dibuat secara mandiri di Laboratorium Farmakognosi Fitokimia (Lampiran 5). Hasil determinasi yang dilakukan menunjukkan bahwa serbuk

yang

digunakan

adalah

38

benar

berasal

dari

tanaman


39

P.americana berdasarkan kemiripan secara organoleptis yaitu kemiripan warna, rasa dan aroma serbuk yang dibandingkan. Selain itu juga berdasarkan pengamatan mikroskopik serbuk, diperoleh adanya kemiripan fragmenfragmen antara kedua serbuk yang dibandingkan yaitu amilum dan parenkim endosperm. 2.

Penetapan kadar air sebuk biji P.americana Penetapan kadar air serbuk biji P.americana bertujuan mengetahui

kadar air dalam serbuk yang akan digunakan. Kadar air dalam serbuk harus kurang dari 10% untuk memenuhi persyaratan kadar air serbuk yang baik (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995). Kadar air dalam serbuk penting dilakukan dan harus memenuhi persyaratan untuk menjamin serbuk bebas dari kemungkinan pertumbuhan mikroorganisme karena air merupakan media pertumbuhan yang baik bagi mikroorganisme. Penetapan kadar air serbuk P.americana dilakukan menggunakan alat moisture balance dengan metode gravimetri. Pada penetapan kadar air ini digunakan suhu 1050 C selama 15 menit. Hasil perhitungan rata-rata selisih bobot sebelum dan sesudah pemanasan pada ketiga replikasi menunjukkan bahwa kadar air dalam serbuk biji P.americana yaitu sebesar 7,40%. Kadar air pada serbuk yang digunakan telah memenuhi persyaratan kadar air serbuk yang baik. 3. Hasil pembuatan dan penimbangan ekstrak etanol biji P.americana Pembuatan ekstrak etanol biji P.americana dilakukan dengan metode maserasi. Dalam proses maserasi dilakukan perendaman serbuk dalam cairan


40

penyari sambil sesekali digojok untuk menarik zat aktif dari dalam serbuk ke dalam cairan penyari. Cairan penyari yang digunakan adalah etanol 70%. Pemilihan cairan penyari didasarkan pada penelitian Malangngi, dkk. (2012) yang memperoleh kandungan dan aktivitas senyawa antioksidan pada serbuk biji P.americana menggunakan penyari etanol. Proses maserasi dilakukan dengan merendam serbuk biji P.americana pada cairan penyari selama 5 hari sambil sesekali digojog. Penggojogan dilakukan untuk mencegah terjadinya keseimbangan antara larutan zat aktif yang terdapat dalam sel dengan larutan zat aktif yang terdapat diluar butir sel (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 1986). Keadaan diam tanpa penggojogan selama maserasi menyebabkan turunnya perpindahan bahan aktif dari dalam bahan yang diekstraksi ke dalam cairan penyari (Voigt,1994). Kemudian hasil maserasi disaring dan dilakukan remaserasi. Remaserasi ini dilakukan untuk menarik sisa zat aktif yang belum tertarik sempurna pada cairan penyari. Remaserasi dilakukan dengan merendam serbuk yang telah disaring menggunakan pelarut baru lalu direndam selama 2 hari sebelum disaring kembali. Maserat yang diperoleh kemudian diuapkan hingga diperoleh selisih bobot pengeringan adalah 0. Hal ini bertujuan menghitung sisa ekstrak kental setelah dilakukan pengeringan pada suhu 800C dan menjamin tidak ada lagi cairan penyari pada ekstrak kental yang diperoleh. Ekstrak dalam cawan dipanaskan dengan suhu 800C menggunakan waterbath dan ditimbang setiap dua jam hingga diperoleh selisih bobot antar penimbangan adalah nol.


41

Berdasarkan hasil pengeringan yang telah dilakukan, didapatkan selisih bobot adalah 0 yaitu pada jam ke 8 dan 10 dimana antara penimbangan jam ke 8 dan jam ke 10 tidak ada perubahan bobot ekstrak kental. Hal ini menunjukkan bahwa cairan penyari sudah tidak terdapat pada ekstrak kental yang diperoleh. Hasil proses ekstraksi menunjukkan bahwa sebanyak 320 gram serbuk kering biji P.americana menghasilkan 13 cawan ekstrak kental. Rata-rata rendemen setiap cawan adalah 4,45 gram ekstrak kental, sehingga dari 320 gram serbuk kering P.americana menghasilkan 57,85 gram ekstrak kental dengan rendemen 18,08%. B. Uji Pendahuluan 1.

Penentuan dosis nefrotoksik karbon tetraklorida Penentuan dosis nefrotoksik karbon tetraklorida dilakukan untuk

menetapkan dosis karbon tetraklorida yang dapat menyebabkan kerusakan fungsi ginjal dengan parameter kenaikan kadar kreatinin serum. Dalam penelitian ini, dosis karbon tetraklorida yang digunakan mengacu pada jurnal penelitian dan hasil orientasi. Pada penelitian yang dilakukan Moneim dan ElDeib (2012), dengan pemberian karbon tetraklorida 2 mL/kgBB terjadi kenaikan kadar kreatinin serum tikus hingga satu setengah kali dibanding kadar kreatinin kontrol. Hasil orientasi yang telah dilakukan juga menunjukkan bahwa dosis karbon tetraklorida yang menyebabkan kenaikan kadar kreatinin serum tikus adalah pada dosis 2 mL/kgBB.


2.

42

Penentuan waktu pencuplikan darah Tujuan dilakukan penentuan waktu pencuplikan darah adalah

mengetahui waktu dimana karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB memberikan efek nefrotoksik paling besar dengan kenaikan kadar kreatinin serum paling tinggi dalam selang waktu tertentu. Penentuan waktu pencuplikan darah melalui sinus orbitalis tikus jantan dilakukan pada jam ke 0, 24, 48, dan 72 setelah

pemberian

karbon

tetraklorida

dosis

2

mL/kgBB

secara

intraperitoneal. Hasil pengukuran kadar kreatinin serum tikus pada jam ke-0, 24, 48, dan 72 setelah pemejanan karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB tersaji dalam tabel III dan gambar 7. Tabel III. Purata kadar kreatinin tikus pada jam ke 0, 24, 48 dan 72 setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB (n=4) Selang waktu (jam) 0 24 48 72

Mean (mg/dL)± SE 0,35 ± 0,03 0,53 ± 0,05 1,00 ± 0,07 0,45 ± 0,03

keterangan : Mean= Rerata kadar kreatinin (mg/dL) SEM= Standar Error

Gambar 7. Diagram batang rata-rata kadar kreatinin tikus pada jam ke 0, 24, 48 dan 72 setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB


Hasil

pengujian

menggunakan

metode

43

Kolmogorov-Smirnov

menunjukkan kadar kreatinin pada jam ke 0, 24, 48 dan 72 masing-masing terdistribusi normal. Dengan demikian analisis dapat dilanjutkan dengan variansi satu arah (One Way ANOVA). Nilai signifikansi yang diperoleh adalah 0,000 (p<0,05). Hasil ini menunjukkan bahwa terdapat perbedaan antara keempat kelompok selang waktu pencuplikan darah yang dilakukan. Kemudian dilanjutkan analisis untuk melihat kebermaknaan perbedaan antar kelompok tersebut dengan uji Scheffe. Berdasarkan analisis dengan uji Scheffe diperoleh hasil yang tertera pada tabel IV. Tabel IV. Hasil uji Scheffe kadar kreatinin serum tikus pada jam ke 0,24, 48 dan 72 setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB Selang Waktu 0 24 48 72 0 TB BB TB 24 TB BB TB 48 BB BB BB 72 TB TB BB Keterangan : BB = Berbeda bermakna (p < 0,05) TB = berbeda tidak bermakna (p>0,05)

Nilai normal kadar kreatinin serum tikus putih adalah 0,2-0,8 mg/dL (Malole dan Pramono, 1989). Pada tabel III, menunjukkan kadar kreatinin serum pada jam ke 0 dan ke 24 tergolong normal dan meningkat paling tinggi pada jam ke 48 setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB yaitu dengan purata kadar sebesar 1,00 ± 0,07 mg/dL. Pada jam ke 48 ini terjadi peningkatan kadar kreatinin yang berbeda bermakna terhadap jam ke 0, 24 dan jam ke 72 (tabel IV). Kadar kreatinin serum tikus kemudian mengalami penurunan pada jam ke 72 (0,45 ± 0,03), dimana hasilnya menunjukkan berbeda tidak bermakna terhadap jam ke 0 (0,35 ± 0,03) dan jam ke 24 (0,53 ±


44

0,05). Hal ini menunjukkan bahwa kadar kreatinin pada jam ke 72 sudah kembali normal. Berdasarkan hasil yang diperoleh tersebut, maka dalam penelitian ini waktu pencuplikan darah tikus ditentukan pada jam ke 48 setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB. 3.

Penetapan lama pemejanan ekstrak etanol biji P.americana Pada penelitian ini dilakukan pemejanan ekstrak etanol biji

P.americana secara jangka panjang yaitu selama enam hari berturut-turut dan pada hari yang ketujuh diberikan karbon tetraklorida. Pemilihan jangka waktu selama enam hari berturut-turut didasarkan pada penelitian yang dilakukan oleh Windrawati (2013), untuk melihat kemampuan hepatoprotektif ekstrak daun Macaranga tanarius. Berdasarkan hal tersebut, pada penelitian ini juga digunakan model pemberian jangka panjang selama enam hari berturut-turut untuk melihat adanya kemampuan nefroprotektif ekstrak etanol biji P.americana. 4.

Penetapan dosis ekstrak etanol biji P. americana Penetapan dosis ekstrak etanol biji P.americana bertujuan untuk

menentukan peringkat dosis ekstrak etanol biji P.americana yang akan digunakan. Penetapan dosis didasarkan pada dosis tertinggi ekstrak etanol biji P.americana yang dapat diberikan pada tikus. Dosis tertinggi ekstrak etanol biji P.americana

diperoleh dengan cara menentukan terlebih dahulu

konsentrasi tertinggi ekstrak etanol biji P.americana yang dapat dimasukkan dan dikeluarkan dengan mudah melalui spuit oral.


45

Berdasarkan hasil orientasi yang telah dilakukan, diperoleh bahwa konsentrasi tertinggi ekstrak etanol biji P.americana yang dapat diberikan secara oral pada tikus adalah sebesar 70 mg/mL. Dari konsentrasi pekat ekstrak yang telah ditentukan tersebut, selanjutnya ditentukan dosis tertinggi pemberian ekstrak etanol biji P.americana yaitu sebesar 1400 mg/kgBB. Setelah itu ditentukan dosis tengah dan dosis rendah ekstrak etanol biji P.americana dengan menurunkan dosis tertinggi sebesar dua dan empat kelipatan sehingga diperoleh dosis 700 dan 350mg/kgBB. C. Hasil Uji Nefroprotektif Ekstrak Etanol biji P. americana Penelitian ini bertujuan membuktikan adanya efek nefroprotektif dari pemberian ekstrak etanol biji P.americana jangka panjang yaitu selama enam hari terhadap kadar kreatinin dan gambaran histologis organ ginjal tikus setelah terinduksi karbon tetraklorida. Adelman, Spangler, Beasom, Ishizaki, dan Conzelman (1981) menyatakan bahwa

kadar kreatinin serum merupakan

penanda yang reliabel untuk mengukur status fungsi ginjal. Hal ini disebabkan kadar kreatinin yang relatif normal, dimana kadarnya terkait fungsi massa otot yang sedikit sekali mengalami perubahan. Selain itu, dibandingkan dengan ureum, kreatinin hampir tidak dipengaruhi oleh intake protein (Baron, 1992). Karena itulah dalam penelitian ini kadar kreatinin dijadikan parameter utama yang akan dievaluasi untuk melihat kemampuan nefroprotektif dari ekstrak etanol biji P.americana.Kemudian sebagai data pendukung akan diamati gambaran histologis organ ginjal tikus.


46

Pemberian praperlakuan ekstrak etanol biji P. americana dilakukan selama enam hari berturut-turut secara peroral, kemudian pada hari ketujuh tikus dipejani dengan karbon tetraklorida 2 mL/kgBB secara intraperitoneal. Data kadar kreatinin kelompok kontrol nefrotoksin, kontrol olive oil, kontrol ekstrak, serta kelompok dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB masing-masing diolah menggunakan

metode

Kolmogorov-Smirnov untuk menentukan

distribusi data. Hasil pengolahan data menunjukkan bahwa data dari setiap kelompok terdistribusi normal dan memiliki variansi yang homogen sehingga pengolahan data dilanjutkan menggunakan analisis varian satu arah (One Way ANOVA) untuk menentukan perbedaan antar kelompok perlakuan. Analisis menggunakan variansi satu arah menunjukkan nilai signifikansi 0,000 (p<0,05). Nilai signifikansi yang diperoleh menunjukkan bahwa paling tidak, terdapat perbedaan yang bermakna pada dua kelompok. Kemudian, dilanjutkan dengan uji Scheffe untuk mengetahui kebermaknaan perbedaan antar kelompok. Hasil pengujian berupa data Mean ± SE kadar kreatinin dengan uji Scheffe dapat dilihat dalam tabel V dan gambar 8. Tabel V. Kadar kreatinin serum tikus pada enam kelompok (n=5) Kelompok

Perlakuan

Mean (mg/dL) ± SE

I II

Kontrol negatif olive oil 2mL/kgBB Kontrol nefrotoksin karbon tetraklorida 2mL/kgBB Kontrol EEPA 1400 mg/kgBB EEPA 350 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2mL/kgBB EEPA 700 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2mL/kgBB EEPA 1400 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2mL/kgBB = Ekstrak Etanol biji P. americana = Purata kadar kreatinin (mg/dL) = Standar Error

0,58 ± 0,02 1,00 ± 0,05

III IV V VI Keterangan :

EEPA Mean SE

0,56 ± 0,02 0,44 ± 0,02 0,44 ± 0,02 0,64 ± 0,04


47

Gambar 8. Diagram batang rata-rata kadar kreatinin serum tikus pada enam kelompok

Tabel VI. Hasil uji Scheffe kadar kreatinin serum tikus pada enam kelompok Kelompok Perlakuan

Kontrol nefrotoksin karbon tetraklorida 2mL/kgBB Kontrol Olive oil 2mL/kgBB Kontrol EEPA dosis 1400mg/kgBB EEPA 350mg/kgBB + karbon tetraklorida 2mL/kgBB EEPA 700 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2mL/kgBB EEPA 1400 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2mL/kgBB

Kontrol nefrotoksin karbon tetraklorida 2mL/kgBB

Kontrol Olive oil 2mL/kgBB

Kontrol EEPA dosis 1400mg/kgBB

BB

BB

BB

EEPA 350mg/kgBB + karbon tetraklorida 2mL/kgBB BB



TB

TB

TB

TB

TB

TB

TB

TB

BB

BB

TB

BB

TB

TB

BB

TB

TB

TB

BB

TB

TB

BB

BB

BB

Keterangan : BB = Berbeda bermakna (p<0,05) TB = Berbeda tidak bermakna (p>0,05) EEPA = ekstrak etanol biji P.americana


48

Hasil pengamatan gambaran histologis ginjal digunakan sebagai data pendukung untuk menggambarkan keadaan ginjal secara mikroskopis pada kelompok kontrol nefrotoksin, kontrol negatif olive oil, kontrol ekstrak etanol biji P.americana, serta kelompok dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB. Hasil pemeriksaan tersebut digambarkan pada tabel VII.

Tabel VII. Hasil pemeriksaan histologis ginjal pada keenam kelompok Kelompok Perlakuan Kontrol negatif olive oil Kontrol Nefrotoksin Kontrol EEPA

Dosis EEPA 350 mg/kgBB

Dosis EEPA 700 mg/kgBB Dosis EEPA 1400mg/kgBB

Gambaran Histologis Ginjal Terdapat perubahan struktural berupa degenerasi hidropik epitel tubulus (DHET) dan intratubular hialin cast (ITC) Gambaran sel ginjal normal, tidak terdapat perubahan patologik spesifik Terdapat degenerasi hidropik epitel tubulus (DHET) pada satu tikus sedangkan pada satu tikus lainnya gambaran histologis ginjal normal (tidak ada perubahan patologik spesifik ) Terdapat degenerasi hidropik epitel tubulus (DHET) dan perivaskulitis sedangkan pada satu tikus lainnya menunjukkan gambaran histologis ginjal normal (tidak ada perubahan patologik spesifik ) Gambaran sel ginjal normal, tidak terdapat perubahan patologik spesifik Gambaran sel ginjal normal, tidak terdapat perubahan patologik spesifik

Keterangan : EEPA = ekstrak etanol biji P.americana 1. Kontrol negatif olive oil dosis 2 mL/kgBB Tujuan dilakukan pengukuran kadar kreatinin pada kelompok kontrol negatif olive oil yang merupakan pelarut dari karbon tetraklorida adalah membuktikan bahwa olive oil tidak memiliki potensi menyebabkan efek toksik pada organ ginjal. Pemberian olive oil pada tikus dilakukan dengan dosis dan rute yang sama dengan pemberian karbon tetraklorida yaitu dengan dosis 2mL/kgBB dan secara intraperitonial. Dengan demikian dapat dipastikan bahwa kenaikan kadar kreatinin pada kelompok kontrol nefrotoksin adalah


49

murni disebabkan oleh pemberian karbon tetraklorida dan bukan disebabkan oleh olive oil. Analisis data kadar kreatinin pada kelompok kontrol negatif olive oil diawali dengan menguji distribusi kadar kreatinin masing-masing pada jam ke 0 dan jam ke 48. Hasil pengujian memberikan hasil distribusi yang normal pada masing-masing kelompok. Selanjutnya pengujian dilakukan dengan uji T berpasangan untuk menentukan kebermaknaan dari kedua kelompok tersebut. Kadar kreatinin pada kelompok kontrol negatif ini tergolong normal yaitu pada range 0,2-0,8mg/dL (Malole dan Pramono, 1989).Berdasarkan pengujian dengan uji T berpasangan, diperoleh hasil bahwa kadar kreatinin tikus setelah pemejanan olive oil pada jam ke 0 berbeda bermakna dengan kadar kreatinin pada jam ke 48 (tabel VIII dan gambar 10). Namun purata kadar yang diperoleh masih masuk dalam range normal, sehingga perbedaan kadar pada jam ke 0 dan 48 ini tidak menunjukkan adanya efek toksik olive oil yang ditimbulkan terhadap ginjal. Tabel VIII. Purata kadar kreatinin serum tikus setelah pemejanan olive oil dosis 2mL/kgBB pada selang waktu 0 dan 48 jam (n=5) Selang waktu (jam)

Mean± SE (mg/dL)

0 48

0,46 ± 0,02 0,58 ± 0,02

Gambar 9. Diagram batang kadar kreatinin setelah pemejanan olive oil pada selang waktu 0 dan 48 jam


50

Hasil gambaran histologis ginjal tikus pada kelompok kontrol negatif olive oil dapat dilihat pada gambar 10 dan 11.

Gambar 10. Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok perlakuan kontrol negatif olive oil yang mengalami Intratubular Hialin Cast (ITC)

Gambar 11. Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok perlakuan kontrol negatif olive oil yang mengalami Degenerasi Hidropik Epitel Tubulus (DHET)

Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok perlakuan kontrol negatif olive oil

menunjukkan adanya perubahan pada sel-sel ginjal.

Perubahan tersebut berupa adanya intratubular hialin cast (Gambar 10) dan degenerasi hidropik epitel tubulus (Gambar 11). Degenerasi hidropik ditandai dengan adanya vakuola-vakuola berbatas kurang jelas pada sitoplasma sel-sel tubulus. Adanya vakuola berisi cairan ini menyebabkan sitoplasma tampak keruh (cloudy swealling). Perubahan jenis ini sifatnya masih reversibel (Reily, Bulger, Ruth, dan Kriz, 2007). Perubahan yang terjadi pada pengamatan


51

mikroskopis ginjal ini tidak menunjukkan kesesuaian dengan hasil pengukuran kadar kreatinin, dimana kadar kreatinin pada kelompok kontrol negatif olive oil adalah normal. Hal ini dapat disebabkan oleh faktor patologis dari hewan uji tikus, dimana sebelum perlakuan pemberian olive oil dosis 2 mL/kgBB telah dilakukan pengukuran kadar kreatinin jam ke 0, dan hasil yang diperoleh adalah kadar kreatinin tikus tergolong normal. Hal ini didukung dengan hasil kontrol nefrotoksin yang tidak menunjukkan adanya kerusakan struktural akibat pemberian karbon tetraklorida, sehingga perubahan berupa degenerasi hidropik dan intratubular hialin cast ini disebabkan oleh faktor patologis individu hewan uji. 2. Kontrol nefrotoksin karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB Pada penelitian ini dilakukan pengukuran kadar kreatinin serum pada kelompok kontrol nefrotoksin karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB yang bertujuan melihat pengaruh pemejanan karbon tetraklorida terhadap fungsi ginjal tikus. Karbon tetraklorida memberikan efek toksik pada ginjal namun sifatnya masih reversibel. Kadar kreatinin kelompok kontrol nefrotoksin ini akan dibandingkan dengan kadar kreatinin kelompok perlakuan lainnya untuk menganalisis efek proteksi ekstrak etanol biji P.americana terhadap organ ginjal. Tikus pada kelompok kontrol nefrotoksin dipejani dengan karbon tetraklorida secara intraperitonial lalu pada jam ke empat puluh delapan setelah pemejanan, tikus diambil darahnya melalui sinus orbitalis untuk diukur kadar kreatininnya dan diambil organ ginjalnya untuk pemeriksaan histologis. Hasil pengukuran kadar kreatinin ini dapat dilihat pada tabel V, dimana


52

terdapat perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol nefrotoksin (1,00 ± 0,05mg/dL) dan kelompok kontrol negatif olive oil (0,58 ± 0,02mg/dL). Hal ini menunjukkan bahwa karbon tetraklorida menyebabkan penurunan fungsi ginjal dalam mengekskresi kreatinin dari dalam tubuh tikus sehingga kadar kreatinin dalam serum menjadi tinggi. Hasil gambaran histologis ginjal tikus pada kelompok nefrotoksin dapat dilihat pada gambar 12.

Gambar 12. Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok nefrotoksin karbon tetraklorida 2mL/kgBB dengan kondisi ginjal yang normal

Gambaran mikroskopis ginjal pada kelompok perlakuan kontrol nefrotoksin dengan pemberian karbon tetraklorida 2 mL/kgBB menunjukkan keadaan normal pada sel-sel ginjal (Gambar 12). Hal ini terlihat dari tidak terdapatnya perubahan patologik spesifik pada glomerulus, tubulus dan interstisium ginjal. Tidak ditemukannya perubahan secara struktural pada organ ginjal ini dapat disebabkan kerusakan yang ditimbulkan oleh karbon tetraklorida belum sampai menimbulkan respon histopatologi dan perubahan struktural pada organ ginjal karena pemejanannya secara akut. Menurut Donatus (2001), perubahan biokimia yang timbul akibat pemejanan terhadap


53

racun akan ditanggapi tubuh dengan berbagai respon biokimia. Perubahan biokimia ini tidak langsung menunjukkan perubahan patologi organ dan sifatnya reversibel (terbalikkan). Sifat terbalikkan ini berarti bahwa apabila pemejanan senyawa toksik dihentikan maka efek toksik akan hilang. Berdasarkan hal tersebut dapat dijelaskan kemungkinan penyebab tingginya kadar kreatinin yang tidak disertai gambaran kerusakan pada sel-sel ginjal. Kenaikan kadar kreatinin pada kelompok kontrol nefrotoksin ini menandakan adanya perubahan dan respon biokimia akibat pemejanan karbon tetraklorida. Namun dengan

adanya perubahan biokimia

tersebut

belum

sampai

menimbulkan perubahan struktural yang nyata pada pemeriksaan histologis.

3. Kontrol ekstrak etanol biji P. americana dosis 1400mg/kgBB Pembuatan kontrol perlakuan ekstrak etanol biji P. americana dosis 1400 mg/kgBB bertujuan mengetahui pengaruh pemberian ekstrak etanol biji P.americana terhadap ginjal tikus yang dapat diamati melalui kadar kreatinin serum tikus tanpa dilakukan pemberian

karbon tetraklorida 2 mL/kgBB.

Perlakuan ini menggunakan dosis tertinggi dari ketiga peringkat dosis yaitu 1400

mg/kgBB,

dengan

tujuan

hasil

yang

diperoleh

sudah

dapat

menggambarkan efek perlakuan ekstrak etanol biji P.americana dengan dosis lebih rendah yaitu 350 dan 700mg/kgBB. Purata kadar kreatinin kelompok kontrol ekstrak etanol biji P.americana adalah sebesar 0,56 ± 0,02 mg/dL sedangkan pada kelompok kontrol olive oil adalah 0,58 ± 0,02 mg/dL (tabel V). Hasil analisis dengan


54

statistik menunjukkan bahwa ada perbedaan yang tidak bermakna antara kedua kelompok ini (tabel VI). Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa dengan pemberian ekstrak etanol biji P. americana selama enam hari berturut-turut dan tanpa pemejanan karbon tetraklorida, kadar kreatinin masih tetap pada kadar normal seperti yang terjadi pada kelompok kontrol olive oil. Namun apabila dibandingkan antara kelompok kontrol ekstrak dengan kelompok kontrol nefrotoksin, terdapat perbedaan yang bermakna (tabel VI).Berdasarkan hal ini dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak etanol biji P.americana tidak memberikan efek toksik bagi ginjal dengan parameter kadar kreatinin. Hasil pengamatan gambaran mikroskopis pada satu tikus kelompok kontrol ekstrak etanol biji P.americana menunjukkan adanya perubahan berupa degenerasi hidropik epitel tubulus (Gambar 11). Namun pada tikus lainnya menunjukkan kondisi normal dengan tidak adanya perubahan patologis yang teramati pada sel-sel ginjal (Gambar

12). Apabila dikaitkan dengan hasil

pengukuran kadar kreatinin yang normal,

ada kemungkinan bahwa lokasi

pencuplikan dan pengamatan histologis yang dilakukan belum menggambarkan keseluruhan kondisi ginjal. Ada kemungkinan bahwa pada lokasi lain pada organ ginjal menunjukkan kondisi yang normal. Selain itu dapat pula dikaitkan dengan kondisi patologis hewan uji yang kemungkinan telah mengalami kerusakan pada sel-sel ginjalnya sebelum diberikan perlakuan ekstrak etanol biji P.americana. Hal ini didasarkan pada hasil pengukuran kadar kreatinin sebelum perlakuan kontrol ekstrak etanol biji P.americana adalah pada range normal.


55

4. Perlakuan ekstrak etanol biji P.americana dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB Efek nefroprotektif pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P.americana

pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dapat dinilai dari

kemampuan ekstrak etanol biji P.americana

dalam menurunkan kadar

kreatinin serum tikus dan penampakan histologis ginjal yang normal. Berdasarkan hasil analisis secara statistik, tampak bahwa tidak ada hubungan kekerabatan antara dosis dan respon yang ditimbulkan, dimana semakin besar dosis perlakuan ekstrak etanol biji P.americana yang diberikan, tidak semakin meningkatkan efek nefroprotektif. Hal ini menunjukkan bahwa semakin tinggi dosis ekstrak etanol biji P.americana tidak diikuti dengan semakin besarnya kemampuan proteksi terhadap ginjal. Pada perlakuan kelompok dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB menunjukkan nilai Mean ± SE kadar kreatinin berturut-turut adalah 0,44 ± 0,02; 0,44 ± 0,02 dan 0,64 ± 0,04 (tabel V). Purata kadar kreatinin pada ketiga kelompok menunjukkan perbedaan yang bermakna secara statistik dengan kelompok kontrol nefrotoksin (Tabel V dan VI). Namun apabila dibandingkan dengan kelompok olive oil dan kelompok kontrol ekstrakberbeda tidak bermakna. Hal ini menunjukkan bahwa ketiga dosis perlakuan ekstrak etanol biji P.americana

memiliki efek sebagai nefroprotektif sehingga dapat

menurunkan kadar kreatinin kembali normal.


56

Ekstrak etanol biji P.americana pada dosis paling rendah (dosis 350mg/kgBB) sekalipun sudah menunjukkan kemampuan protektif terhadap ginjal. Namun kenaikan dosis tidak disertai kenaikan kemampuan protektif, dimana pada dosis 700mg/kgBB, efek yang ditimbulkan sama (konstan) dan pada dosis 1400mg/kgBB mengalami penurunan. Pada dosis 1400mg/kgBB terjadi penurunan efek proteksi, namun kadar kreatinin tikus pada kelompok ini masih tergolong normal. Penurunan kemampuan proteksi pada pemberian dosis 1400 mg/kgBB diduga akibat aktivitas pro-oksidan yang ditimbulkan dari penggunaan jangka panjang antioksidan dosis tinggi. Pada perlakuan dosis 350 dan 700mg/kgBB persen nefroprotektif yang dihasilkan konstan yaitu sebesar 133,3%. Hal ini dapat terjadi karena adanya kejenuhan pada sistem transpor aktif pada proses absorbsi, kejenuhan pada ikatan protein yakni pada proses distribusi obat dan sistem metabolisme (Hakim, 2011). Kadar senyawa antioksidan yang dapat terabsorbsi atau terdistribusi tidak mengalami peningkatan walaupun dosis yang diberikan semakin tinggi. Dengan demikian efek proteksi yang dihasilkan menjadi konstan. Kelompok IV (350 mg/kgBB ) dan V (700mg/kgBB) menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna secara statistik dengan kelompok VI (dosis 1400mg/kgBB) (Tabel VI). Hal ini dapat disebabkan efek nefroprotektif pada kelompok VI (dosis 1400mg/kgBB) tidak sebanding dengan kelompok IV dan V. Berdasarkan hasil analisis kadar kreatinin pada ketiga peringkat dosis dapat


57

ditentukan dosis efektif nefroprotektif ekstrak etanol biji P.americana adalah 350mg/kgBB. Hasil pemeriksaan mikroskopis organ ginjal pada kelompok perlakuan ekstrak etanol biji P.americana pada dosis 700 dan 1400 mg/kgBB menunjukkan kondisi sel-sel ginjal yang normal tanpa ada perubahan patologis yang spesifik (Gambar 12). Hal ini mendukung data biokimiawi berupa kadar kreatinin yang normal pada kelompok perlakuan dosis 700 dan 1400mg/kgBB. Pada kelompok dosis 350mg/kgBB terdapat perubahan pada sebagian tikus yaitu terjadi degenerasi hidropik (Gambar 11) dan perivaskulitis (Gambar 13). Namun tikus lainnya menunjukkan kondisi sel-sel ginjal yang normal dengan tidak ada perubahan patologi yang spesifik (Gambar 12).

Gambar 13. Gambaran mikroskopik ginjal pada kelompok perlakuan ekstrak etanol biji P.americana dosis 350 mg/kg yang mengalami perivakulitis

Degenerasi hidropik ditandai dengan adanya vakuola dengan batas kurang jelas pada sitoplasma serta sitoplasma tampak berkabut (cloudy swealling). Perivaskulitis merupakan gambaran adanya infeksi disekitar pembuluh darah. Hal ini ditunjukkan dengan adanya neutrofil di sekitar tepi


58

pembuluh darah. Dua perubahan yang timbul pada kelompok dosis 350mg/kgBB ini bersifat individual yaitu terkait kondisi patologis hewan uji. Hal ini didukung dengan hasil pemeriksaan histologis ginjal pada kontrol nefrotoksin, dimana pemberian karbon tetraklorida tidak menimbulkan perubahan struktural ginjal, sehingga dapat dikatakan bahwa perubahan berupa degenerasi hidropik dan perivaskulitis disebabkan oleh kondisi patologis individu hewan uji. Hasil pengukuran kadar kreatinin dan analisis statistik serta hasil pemeriksaan histologis organ ginjal pada enam kelompok perlakuan menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji P.americana memiliki kemampuan melindungi organ ginjal tikus yang terinduksi karbon tetraklorida.

Efek

nefroprotektif ini dibuktikan dengan adanya perbedaan yang signifikan antara kelompok kontrol nefrotoksin dengan kelompok perlakuan lainnya dan gambaran histologis ginjal yang normal pada kelompok perlakuan. Data gambaran histologis ginjal yang digunakan belum dapat menggambarkan kondisi ginjal secara representatif. Hal ini disebabkan pencuplikan terhadap bagian ginjal hanya dilakukan pada satu bagian. Karena itulah dibutuhkan penelitian lebih lanjut untuk mengamati gambaran histologis ginjal pada beberapa lokasi pencuplikan agar hasil yang diperoleh dapat menggambarkan kondisi ginjal secara representatif. Dalam tubuh, karbon tetraklorida akan mengalami proses metabolisme oleh enzim sitokrom P450 khususnya isoenzim CYP2E1 sebagai agen pereduksi dan mengkatalis adisi elekron yang mengakibatkan hilangnya satu


59

ion klorin sehingga terbentuk radikal bebas triklorometil (•CCl3) yang merupakan metabolit reaktif. Radikal bebas triklorometil ini akan berubah menjadi radikal bebas triklorometilperoksi (•OOCCl3) dengan adanya O2 (oksigen), dimana radikal bebas dalam bentuk ini menjadi lebih reaktif (Gregus dan Klaaseen, 2001). Menurut Tom, Fong, Woo, Prasongwatana, dan Boyde (1984), bermacam-macam sistem enzim dan non enzim dihasilkan oleh sel untuk menanggulangi kerusakan oksidatif yang disebabkan oleh Reactive Oxygen species (ROS) dan radikal bebas. Namun ketika kerusakan oksidatif menjadi sangat banyak, mekanisme pertahanan seperti antioksidan endogen menjadi tidak cukup (Symonik,

Czechowska,

Stryjecka,

Slomka, Madro, dan

Celinski, 2003). Tidak cukupnya antioksidan endogen yang dihasilkan tubuh dalam menetralkan radikal bebas yang dihasilkan karbon tetraklorida menyebabkan terjadinya gangguan fungsi ginjal yang tampak dari tingginya kadar kreatinin pada tikus kelompok nefrotoksin. Karena itulah dibutuhkan adanya antioksidan eksogen yang dapat menanggulangi dampak dari radikal bebas yang dihasilkan oleh metabolisme karbon tetraklorida. Di dalam tubuh, antioksidan eksogen tidak hanya mendonorkan elektron kepada radikal bebas, namun juga berperan dalam meningkatkan sistem pertahanan dan memelihara antioksidan endogen (Yordil, Pérez1, Matos dan Villares, 2012). Pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P.americana diduga dapat memacu sintesis enzim-enzim yang berperan dalam mekanisme pertahanan sebagai antioksidan endogen. Namun dalam penelitian ini belum


60

dapat ditentukan secara spesifik senyawa aktif dan mekanisme nefroprotektif dari biji P.americana. Karena itulah perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk menentukan senyawa yang berperan dalam proteksi terhadap organ ginjal dan bagaimana mekanismenya. Arukwe, dkk. (2012) melaporkan kandungan fitokimia yang penting ditemukan dalam biji P.americana yaitu kandungan saponin, tanin, flavonoid, alkaloid dan fenol. Kemampuan proteksi yang dimiliki oleh ekstrak etanol biji P.americana ini dapat disebabkan adanya kandungan antioksidan yang dapat mendonorkan elektron kepada radikal bebas triklorometil dan triklorometil peroksida yang dihasilkan dari metabolisme karbon tetraklorida. Kandungan antioksidan ini menurut Malangngi, dkk. (2012) dapat disari dengan menggunakan pelarut etanol dan menunjukkan kemampuan menetralkan radikal bebas DPPH. Pemberian antioksidan dapat melindungi jaringan dari pengaruh radikal bebas, reactive oxygen species(ROS), dan peroksidasi lipid sehingga dengan cara demikian dapat memperlambat berbagai penyakit kronis (Lai dkk, 2001 ; Gulcin dkk, 2003). Karena itulah dengan pemberian ekstrak etanol biji P.americana jangka panjang yang dilakukan pada perlakuan dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB menunjukkan adanya penurunan kadar kreatinin serum yang menunjukkan adanya kemampuan proteksi P.americana terhadap ginjal yang dimungkinkan karena adanya mekanisme antioksidan. D. Rangkuman Pembahasan Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian

jangka panjang

ekstrak etanol biji P.americana pada tiga peringkat dosis yaitu 350, 700 dan


61

1400 mg/kgBB memberikan efek proteksi terhadap organ ginjal dengan penurunan kadar kreatinin serum pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dan hasil pemeriksaan histologis ginjal yang relatif normal. Kemampuan proteksi ini dapat dilihat dengan hasil analisis statistik antara kelompok kontrol karbon tetraklorida yang berbeda bermakna dengan kelompok dosis ekstrak etanol biji P.americana. Berdasarkan hasil perhitungan terhadap nilai % nefroprotektif dapat dilihat bahwa tidak terdapat kekerabatan antara dosis yang diberikan dengan respon yang ditimbulkan. Hal ini dapat dilihat dari % nefroprotektif yang diperoleh pada dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB berturut-turut adalah 133,3; 133,3; dan 85,7%. Kadar kreatinin serum kelompok kontrol ekstrak etanol biji P.americana dengan dosis 1400mg/kgBB menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna dengan kelompok kontrol negatif olive oil. Dengan demikian dapat dikatakan bahwa ekstrak etanol biji P.americana tidak menimbulkan efek toksik pada organ ginjal , dimana kadar kreatinin pada kelompok ekstrak tetap pada keadaan normal seperti pada kelompok kontrol negatif olive oil. Hasil pemeriksaan histologis sebagai data pendukung menunjukkan gambaran mikroskopis ginjal yang relatif normal pada kelompok dosis 350,700 dan 1400mg/kgBB. Dosis yang paling efektif dalam menurunkan kadar kreatinin adalah dosis 350 mg/kgBB. Karbon tetraklorida yang diberikan pada tikus akan dimetabolisme dan membentuk radikal bebas triklorometil dan triklorometil peroksida yang


62

bersifat reaktif terhadap organ ginjal. Radikal bebas ini menyebabkan gangguan fungsi ginjal sehingga berpengaruh pada proses ekskresi kreatinin. Kemampuan proteksi ektrak etanol biji P.americana terhadap organ ginjal ini diduga karena adanya kandungan antioksidan yang dapat tersari pada pelarut etanol 70%. Antioksidan ini dapat melindungi ginjal dengan mekanisme mendonorkan elektron kepada radikal bebas triklorometil dan triklorometilperoksida yang terbentuk dari hasil

metabolisme karbon

tetraklorida, serta memacu dan memelihara sistem antioksidan endogen berupa enzim-enzim superoksida dismutase, glutation peroksidase atau glutation reduktase serta enzim katalase dan antioksidan non enzimatik seperti glutation (GSH) dan transferin (Heinonen dan Albanes, 1994).


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan

1.

Pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji P.americana dosis 350, 700 dan 1400mg/kgBB mempunyai efek nefroprotektif dengan penurunan kadar kreatinin dan gambaran histologis ginjal yang normal pada tikus terinduksi karbon tetraklorida .

2.

Dosis efektif ekstrak etanol biji P.americana sebagai nefroprotektif pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida adalah sebesar 350 mg/kgBB.

B. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang : 1.

Senyawa aktif yang berperan dalam aktivitas proteksi dari biji P.americana

2.

Mekanisme P.americana dalam memberikan efek proteksi pada ginjal.

3.

Pencuplikan pada beberapa bagian ginjal untuk pemeriksaan histologis agar diperoleh gambaran struktural ginjal yang representatif.

63


64

DAFTAR PUSTAKA

Adelman, R.D., Spangler,W.L., Beasom,F., Ishizaki,G., Conzelman,G.M., 1981, Frusemide Enhancement of Neltimicin Nephrotoxicity in Dogs. The Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 7(4), 433. Anaka, O.N., Ozolua, R. I., Okpo, S.O., 2009, Effect of the Aqueous Seed Extract of Persea americana Mill. (Lauraceae) on the Blood Pressure of Sprague-dawley Rats, African Journal of Pharmacy and Pharmacology, 3(10), 485-487. Arukwe, U., Amadi, B., Duru, M., Agomuo,E., Adindu, E., Odika, P., Lele,K.C., Egejuru,L., Anudike,J., 2012, Chemical Composition of Persea americana Leaf, Fruit and Seed, IJRRAS11(2), 347. Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2010, Acuan Sediaan Herbal, Edisi 1, Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, pp.6,7. Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2005, Standarisasi Ekstrak Tumbuhan Obat Indonesia, Salah Satu Tahapan Penting dalam Pengembangan Obat Asli Indonesia, Edisi 6, Badan pengawasan Obat dan Makanan RI, pp 5. Bakri, S., 2005. Deteksi dini dan upaya-upaya pencegahan progresifitas penyaki gagal ginjal kronik, Jurnal Medika Nusantara, 26(3), 36-39. Baron, D.N., 1992, A Short Textbook of Chemical Pathology, Edisi ke-4, EGC, Jakarta, pp. 113-116. Cotran,R.S., Robbins., 1994, Pathologic Basis of Disease, Edisi 5, Saunders Co, USA, pp. 16 -35. Cotran,R.S., dan Robbins., 1997, Basic Pathology, Edisi 6, Saunders Co, USA, pp. 439-441. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Edisi I, Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta. DerMarderosian, A., dan Beutler,J., 2002, The review of natural products: the most complete source of natural product information, Edisi 2, Lippincott Co, pp. 63-64.


65

Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 46. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 1989, Materia Medika Indonesia, Edisi V, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp 538. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 1986, Sediaan Galenik, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 6, 7-11. Donatus, I. A., 2001, Toksikologi Dasar, Universitas Gadjah Mada Press, Yogyakarta, pp. 141,142. Eaton, D.L., E.P, Gallogher., T.K, Bammler., K.L,Kunze., 1995, Role of Cytocrome P450IA2 in Chemical Carcinogenesis: Implication for Human Variability in Expression and Enzyme Acticity, Pharmacogenetics, 5, 259279. Frankel, E. N., dan Meyer, A. S., 2000, The problems of using one dimensional methods to evaluate multifunctional food and biological antioxidants , Food Agriculture, pp. 80, 1925–1928. Gartner, J. P., Hiatt, J. L., 2007, Color Text Book of Histology, Edisi 3, Elsevier Saunders, Philadelphia , pp. 437, 439. Gregus dan Klaaseen, C. D., 2001, Mchanism of Toxicity, in Klaaseen, C. D., Cassarett and Doull’s Toxicology: the Basic Science Poisons, 6th edition, McGraw-Hill, New York, pp.57-64. Gulcin, I., Oktay, M., Kirecci, E., Aslam, O., 2003, Screening of Antioxidant and Antimikrobial Activities of anise (Pimpinella anisum L.) seed extract, Food Chem, 83, 371-382. Guyton, A.C., dan Hall,J.E., 2006, Buku Ajar Fisiologi Kedokteran, Edisi 11, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 324-326. Hakim, L., 2011, Farmakokinetik, Bursa Ilmu, Yogyakarta, pp 357. Halliwell, B., dan Gutteridge, J., 1984, Oxygen toxycit, Oxygen radical, transition metals and disease, Biochem J, 219, 1-14. Halliwell, B., 1990, How characterize a biological antioxidant, Free Rad. Res, Vol. 9, pp. 8.


66

Halliwell, B. , dan Gutteridge,J., 1999, Free radical in biology and medicine, Edisi 3 , Oxford. Hamer, R.A., dan Nahas, A.M., 2006, The burden of chronic kidney disease, Br Med J , 332:563–564 Haryanto, S., 2009, Ensiklopedi Tanaman Obat Indonesia, Palmall, Yogyakarta, pp. 25-26. Heinonen,O.P., dan Albanes, D., 1994, The Effectof vitamin E and fJ-carotene on the Incidence of Lung Cancer and Other Cancer in Male Smokers, J. Med. Edisi 330, pp. 1029-1031. Hodgson, E., 2010, A textbook of ModernToxicology, Fourth Edition, John Wiley&Sons,Inc, Canada,pp. 292- 294. Huether, McCance, Brashers, dan Rote, 2008, Understanding Pathophysiology, Fourth Edition, Mosby Elseiver Inc, St. Louis, Missouri, pp 802. Idris,S., Ndukwe,G.I., Gimba,C.E.,2009, Preliminary Phytochemical Screening and Antimicrobial Activity of Seed Extracts of Persea america (Avocado Pear), Journal of Pure and Applied Science, 2(1), 173-176. Ivor, J.B., dan Schneider, M.D., 2005,Learning from failure : congestive heart failure in postgenomic age.review series introduction. J Clin Invest, 495499. Janakat, S., dan Al-Merie, H., 2002, Optimization of the dose and route of injection, and characterization of the time course of carbon tetrachlorideinduced hepatotoxicity in the rat, J. Pharm. Tox. Methods, 48, 41-44. Javier, G.R.C., David, M., María, J.A., Petri, K., and Mario, E., 2011, Avocado (Persea americana Mill.) Phenolics, In Vitro Antioxidant and Antimicrobial Activities, and Inhibition of Lipid and Protein Oxidation in Porcine Patties, J. Agric. Food Chem., 59, 5625–5635. Junqueira, L.E., Carneiro, J., Kelley, R.O., 2005. Basic Histology, Edisi 11, Mc Graw-Hill, Boston, pp. 373-90. Katzung, B. G., 2002. Farmakologi: Dasar dan Klinik, Buku 2. Edisi I, Salemba Medika, Jakarta , pp. 484-486. Kosinska, A., Karamac,M., Estrella, I., Hernandez, T., Bartolome, B., dan Dykes,G., 2012, Phenolic Compound Profiles and Antioxidant Capacity of Persea americana Mill Peels and Seed of Two Varieties,Journal of Agricultural and Food Chemistry, 60, 4613−4619.


67

Lai, L., Chou, S., Chao, W., 2001, Study of antioxidative activities of Hsian-tsao (Mesona procumbens Hemsl) leaf gum, J Agric Food Chem, 49, 963-968. Lim, T.K., 2012, Edible Medical and Non-Medical Plants, Books 3, Spingers Dordrecht Heidelbergh, London, New York, pp.79-81. Malangngi, L., Sangi, M., Paendong, J., 2012, Penentuan Kandungan Tanin dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Buah Alpukat (Persea americana Mill), Jurnal MIPA UNSRAT , 1 (1) 5-10. Malole, M.B.M., dan Pramono, C.S.U., 1989, Pengantar Hewan-Hewan Percobaan di Laboratorium, pusat antars Universitas Bioteknologi IPB, Bogor. Marlinda, M., Sangi,M., Wuntu, A., 2012, Analisis Senyawa Metabolit Sekunder dan Uji Toksisitas Ektrak Etanol Biji Buah Alpukat(Persea americana Mill,), Jurnal MIPA UNSRAT, 1(1) 24-28. Manna,P., Sinha,M ., Sil, P.C., 2006, Aqueous extract of Terminalia arjuna prevents carbon tetrachloride induced hepatic and renal disorder, BMC Complementary Alternative Med, 6, 33. McPhee, S., dan Ganong, W., 2007, Patofisiologi Penyakit: Pengantar Menuju kedokteran Klinis, edisi 5, EGC, Jakarta. Mescher,A.L., 2011, Histologi dasar Junqueira : teks &atlas, edisi 12, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp 325-334. Moneim, A.E., dan El-Deib, K.M., 2012, The possible protective effects of Physalis peruviana on carbon tetrachloride-induced nephrotoxicity in male albino rats, Life Science Journal, (3), 9. Natarajan, S., Basivireddy, J., Ramachandran,A., Thomas,S., Ramamoorthy,P., Pulimood, A., 2006,Renal damage in experimentally-induced cirrhosis in rats : role of oxygen free radicals, Hepatology, 43, 1248-1256. Okwu,D.E., Okwu,M.E., 2004, Chemical composition of SpondiasmombiaLinn plant parts, J.Sustain Agric.Environ, 6, 140-147. Owolabi, M.A., Jaja, S.I., Coker, H. A., 2005, Vasorelaxant action of aqueous extract of the leaves of Persea americanaon isolated thoracic rat aorta, Fitoterapia, 76, 567–573.


68

Porth, C.P., Matfin,G., 2009, Pathophysiology : Concept of Altered Health States, Eight Edition, Lippincott Williams & Wilkins, USA, pp 862. Price, S.A., and Wilson, L.M., 1985, Pathophysiology Clinical Concepts of Disease Processes, diterjemahkan oleh Dharma, A., Penerbit Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 5-7. Proseanet, 2012, Persea americana http://www.proseanet.org/prohati4/browser.php?keywords=persea+americ ana&do_search=Search+Now&pcategory=0, diakses tanggal 3 Maret 2013. Rechnagel, R.,Glende, E.,Dolak,J.,Waller,R., 1989, Mechanisms of carbon tetrachlorida toxicity, J Pharmacol Exp Ther, 43,139-154. Robbins dan Cotran, 2007, Pathologic Basis of Disease, Edisi 7, Elseiver Inc, New York, USA, pp. 976-981. Rubenstein, D., Wayne, D., Bradley,J., 2007, Kedokteran Klinis, edisi keenam, Erlangga Medical Series, Jakarta. Salah, W., Miller, N.J.,Pangauga, T., Bolwell,G.P., Rice, E., and Evans, C., 1995, Polyphenolic flavonols as scavengers of aqueous phase radicals as chainbreaking antioxidant, Arch. Biochem. Biorh,2, 339-346. Stray, F.,1988, The national guide to medicinal herbs and plants, Tiger Books International, London. pp.12-46. Symonik,L. S., Czechowska,G., Stryjecka, Z.M., Slomka,M., Madro,A., Celinski,K., dan Wielosz, M., 2003. Catalase, superoxide dismutase, and glutathione peroxidase activities in various rat tissues after carbon tetrachloride intoxication. Journal of Hepatobiliary and Pancreatic Surgery, 10, 309 – 315. Timbrell, J. A. 2008, Principles of Biochemical Toxicology, Edisi 4, Informa Healthcare, New York, pp.308-311. Tom,W.M., Fong, D., Woo,B., Prasongwatana,V., Boyde,T.R., 1984, Microsomal lipid peroxidation and oxidative metabolism in rat liver. Chemical and Biological Interactions, 50, 361 – 363. Underwood, 2000, Patologi Umum dan Sistematik, EGC, Jakarta, pp 639-80.


69

Voigt, R., 1994, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, Edisi ke-5, Gadjah Mada University Press,Yogyakarta. Widmann, F.K., 1992, Tinjauan Klinis atas Hasil Pemeriksaan Laboratorium, edisi 9, EGC, Jakarta, pp 519. Windrawati, T,G., 2013, Efek Hepatoprotektif Ekstrak Metanol:Air (50:50) Daun Macaranga Tanarius L. Terhadap Kadar Alt-Ast Serum Pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. World Health Organization (WHO), 2002, Burden of disease project, http://www3.who.int/whosis/menu.cfm?path=evidence, diakses tanggal 19 agustus 2013. World Agroforestry Centre, 2002, Botanic Nomenclature to Agroforestry trees: Perseaamericana,http://www.worldagroforestry.org/sea/products/afdbases/a f/asp/SpeciesInfo.asp?SpID=1274, diakses tanggal 3 Maret 2013


70

LAMPIRAN


LAMPIRAN

Lampiran 1. Foto serbuk biji P.americana

Lampiran 2. Foto ekstrak kental biji P.americana

Lampiran 3. Foto larutan ekstrak etanol biji P.americana

71


Lampiran 4. Surat pengesahan determinasi serbuk biji P.americana

72


Lampiran 5. Hasil Determinasi Serbuk Biji Persea americana Mill.

73


74


Lampiran 6. Surat pengesahan Medical and Health Research Ethics Committee (MHREC)

75


Lampiran 7. Analisis statistik kadar kreatinin serum pada uji penentuan waktu pencuplikan darah tikus setelah diinduksi karbon tetraklorida 2mL/kgBB

NPar Tests Descriptive Statistics Std. N

Mean

Deviation

Minimu Maximu m

m

jam_0

4

.3500

.05774

.30

.40

jam_24

4

.5250

.09574

.40

.60

jam_48

4 1.0000

.14142

.90

1.20

jam_72

4

.05774

.40

.50

.4500

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test jam_0 jam_24 jam_48 jam_72 N

4 a

Normal Parameters Mean Std. Deviation

.3500

4

4

4

.5250 1.0000

.4500

.05774 .09574 .14142 .05774

Most Extreme

Absolute

.307

.283

.260

.307

Differences

Positive

.307

.217

.260

.307

Negative

-.307

-.283

-.240

-.307

Kolmogorov-Smirnov Z

.614

.567

.520

.614

Asymp. Sig. (2-tailed)

.846

.905

.949

.846

a. Test distribution is Normal.

76


77

Descriptives Kreatinin 95% Confidence Interval for Mean N

Mean

Std. Deviation

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Min

Max

CCl4 dosis 2ml/kgBB jam

4

.3500

.05774

.02887

.2581

.4419

.30

.40

4

.5250

.09574

.04787

.3727

.6773

.40

.60

4

1.0000

.14142

.07071

.7750

1.2250

.90

1.20

4

.4500

.05774

.02887

.3581

.5419

.40

.50

16

.5812

.27134

.06783

.4367

.7258

.30

1.20

ke 0 CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke 24 CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke 48 CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke 72 Total

Test of Homogeneity of Variances Kreatinin Levene Statistic 1.100

df1

df2 3

Sig. 12

.387


78

ANOVA Kreatinin Sum of Squares

df

Mean Square

Between Groups

.997

3

.332

Within Groups

.108

12

.009

1.104

15

Total

F

Sig.

37.093

.000

Post Hoc Tests Multiple Comparisons Kreatinin Scheffe (I) kelompok

(J) kelompok

Mean Difference (I-J) Std. Error

95% Confidence Interval Sig.

Lower Bound

Upper Bound

CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke 0 24

-.17500

.06693

.132

-.3916

.0416

CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke 48

-.65000*

.06693

.000

-.8666

-.4334


-.10000

.06693

.546

-.3166

.1166


.17500

.06693

.132

-.0416

.3916


-.47500*

.06693

.000

-.6916

-.2584


.07500

.06693

.743

-.1416

.2916


.65000*

.06693

.000

.4334

.8666


.47500*

.06693

.000

.2584

.6916


.55000*

.06693

.000

.3334

.7666


.10000

.06693

.546

-.1166

.3166


-.07500

.06693

.743

-.2916

.1416


-.55000*

.06693

.000

-.7666

-.3334

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.


Homogeneous Subsets Kreatinin Scheffe Subset for alpha = 0.05 kelompok CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke 0 CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke 72 CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke 24 CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke 48 Sig.

N

1

2

4

.3500

4

.4500

4

.5250

4

1.0000 .132

1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

79


80

Lampiran 8. Analisis statistik kadar kreatinin serum pada enam kelompok perlakuan ekstrak etanol biji P.americana setelah induksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB

NPar Tests

Descriptive Statistics N

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

kontrol_oliveoil

5

.5800

.04472

.50

.60

kontrol_karbontetraklorida

5

1.0000

.12247

.90

1.20

kontrol_ekstrak

5

.5600

.05477

.50

.60

dosis350

5

.4400

.05477

.40

.50

dosis700

5

.4400

.05477

.40

.50

dosis1400

5

.6400

.08944

.50

.70

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

kontrol_oliveoil N Normal Parametersa

Mean Std. Deviation

Most Extreme Differences

Absolute Positive Negative

Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) a. Test distribution is Normal.

kontrol_karbont etraklorida kontrol_ekstrak

dosis350

dosis700

dosis1400

5

5

5

5

5

5

.5800

1.0000

.5600

.4400

.4400

.6400

.04472

.12247

.05477

.05477

.05477

.08944

.473

.300

.367

.367

.367

.349

.327

.300

.263

.367

.367

.251

-.473

-.207

-.367

-.263

-.263

-.349

1.057

.671

.822

.822

.822

.780

.214

.759

.510

.510

.510

.577


81

Oneway Descriptives kreatinin

95% Confidence Interval for Mean N kontrol olive oil kontrol nefrotoksin karbon

Std. Deviation

Mean

Std. Error Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum

5

.5800

.04472

.02000

.5245

.6355

.50

.60

5

1.0000

.12247

.05477

.8479

1.1521

.90

1.20

5

.5600

.05477

.02449

.4920

.6280

.50

.60

5

.4400

.05477

.02449

.3720

.5080

.40

.50

5

.4400

.05477

.02449

.3720

.5080

.40

.50

5

.6400

.08944

.04000

.5289

.7511

.50

.70

30

.6100

.20401

.03725

.5338

.6862

.40

1.20

tetraklorida kontrol ekstrak EPA dosis 350mg/kgBB dosis 700mg/kgBB dosis 1400mg/kgBB Total

Test of Homogeneity of Variances kreatinin Levene Statistic .993

df1

df2 5

Sig. 24

.443

ANOVA kreatinin Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

Mean Square

1.071

5

.214

.136

24

.006

1.207

29

F

Sig. 37.800

.000


82

Post Hoc Tests Multiple Comparisons kreatinin Scheffe

(I) kelompok

(J) kelompok

kontrol olive oil

kontrol nefrotoksin karbon tetraklorida


kontrol ekstrak EPA

dosis 350mg/kgBB

dosis 700mg/kgBB

dosis 1400mg/kgBB

95% Confidence Interval

Mean Difference (I-J)

Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

-.42000

*

.04761

.000

-.5923

-.2477

kontrol ekstrak EPA

.02000

.04761

.999

-.1523

.1923

dosis 350mg/kgBB

.14000

.04761

.166

-.0323

.3123

dosis 700mg/kgBB

.14000

.04761

.166

-.0323

.3123

dosis 1400mg/kgBB

-.06000

.04761

.897

-.2323

.1123

kontrol olive oil

.42000

*

.04761

.000

.2477

.5923

kontrol ekstrak EPA

.44000*

.04761

.000

.2677

.6123

dosis 350mg/kgBB

.56000*

.04761

.000

.3877

.7323

dosis 700mg/kgBB

.56000*

.04761

.000

.3877

.7323

dosis 1400mg/kgBB

.36000

*

.04761

.000

.1877

.5323

kontrol olive oil

-.02000

.04761

.999

-.1923

.1523


-.44000

*

.04761

.000

-.6123

-.2677

dosis 350mg/kgBB

.12000

.04761

.309

-.0523

.2923

dosis 700mg/kgBB

.12000

.04761

.309

-.0523

.2923

dosis 1400mg/kgBB

-.08000

.04761

.726

-.2523

.0923

kontrol olive oil

-.14000

.04761

.166

-.3123

.0323

.000

-.7323

-.3877 .0523


*

-.56000

.04761

kontrol ekstrak EPA

-.12000

.04761

.309

-.2923

dosis 700mg/kgBB

.00000

.04761

1.000

-.1723

.1723

dosis 1400mg/kgBB

-.20000

*

.04761

.016

-.3723

-.0277

kontrol olive oil

-.14000

.04761

.166

-.3123

.0323


*

-.56000

.04761

.000

-.7323

-.3877

kontrol ekstrak EPA

-.12000

.04761

.309

-.2923

.0523

dosis 350mg/kgBB

.00000

.04761

1.000

-.1723

.1723

dosis 1400mg/kgBB

-.20000*

.04761

.016

-.3723

-.0277

.06000

.04761

.897

-.1123

.2323

*

-.36000

.04761

.000

-.5323

-.1877

kontrol ekstrak EPA

.08000

.04761

.726

-.0923

.2523

dosis 350mg/kgBB

.20000*

.04761

.016

.0277

.3723

dosis 700mg/kgBB

.20000*

.04761

.016

.0277

.3723

kontrol olive oil kontrol nefrotoksin karbon tetraklorida

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.


Homogeneous Subsets kreatinin Scheffe Subset for alpha = 0.05 kelompok

N

1

2

3

dosis 350mg/kgBB

5

.4400

dosis 700mg/kgBB

5

.4400

kontrol ekstrak EPA

5

.5600

.5600

kontrol olive oil

5

.5800

.5800

dosis 1400mg/kgBB

5

kontrol karbon tetraklorida

5

Sig.

.6400 1.0000 .166

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

.726

1.000

83


84

Lampiran 9. Analisis statistik kadar kreatinin serum pada perlakuan kontrol negatif olive oil dosis 2 mL/kgBB

NPar Tests

Descriptive Statistics N

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

kreatinin_0

5

.4600

.05477

.40

.50

kreatinin_48

5

.5800

.04472

.50

.60

selisih

5

.1200

.04472

.10

.20

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test kreatinin_0 N Normal Parameters

a

Mean Std. Deviation Absolute

Most Extreme Differences

kreatinin_48

selisih

5

5

5

.4600

.5800

.1200

.05477

.04472

.04472

.367

.473

.473

Positive

.263

.327

.473

Negative

-.367

-.473

-.327

Kolmogorov-Smirnov Z

.822

1.057

1.057

Asymp. Sig. (2-tailed)

.510

.214

.214

a. Test distribution is Normal.

T-Test Paired Samples Statistics Mean Pair 1

N

Std. Deviation

Std. Error Mean

kreatinin0

.4600

5

.05477

.02449

kreatinin48

.5800

5

.04472

.02000


85

Paired Samples Test Paired Differences 95% Confidence Interval of the Difference

Std. Error Mean Pair 1

Std. Deviation

Mean

Lower

Upper

t

df

Sig. (2-tailed)

kreatinin0 -.12000

.04472

.02000

-.17553

-.06447

-6.000

4

kreatinin48

Lampiran 10.Perhitungan efek nefroprotektif (%)

Rumus perhitungan efek nefroprotektif : (

)–(

(

)x100%

)

Perhitungan efek nefroprotektif kreatinin serum : 1.

Perlakuan dosis 350mg/kgBB (po)+ induksi karbon tetraklorida : =

=

(1,00 − 0,58) − (0,44 − 0,58) 1,00 − 0,58 ,

( ,

,

)

100 % = 133,3%

100%

.004


2.

86

Perlakuan dosis 700mg/kgBB (po) + induksi karbon tetraklorida : (1,00 − 0,58) − (0,4400 − 0,58) 100% = 133,3% 1,00 − 0,58

3.

Perlakuan dosis 1400 mg/kgBB (po) + induksi karbon tetraklorida : (1,00 − 0,58) − (0,6400 − 0,58) 1,00 − 0,58

100% = 85,7%

Lampiran 11. Perhitungan penetapan peringkat dosis ekstrak etanol biji P.americana kelompok perlakuan

Penetapan peringkat dosis didasarkan pada :  Bobot tikus paling besar = 250 gram  Konsentrasi ekstrak etanol biji P.americana yang dapat dimasukkan dan dikeluarkan melalui spuit oral yaitu 7% atau 70mg/ml  Volume maksimal pemberian oral yaitu 5 mL Maka dosis tertinggi dapat ditentukan sebagai berikut : BB x D = C x V Berat badan (kg) x dosis(mg/kgBB) = konsentrasi (mg/ml) x volume pemberian (ml) 0,250 kg x D D

= 70mg/mL x 5 ml

= 1400 mg/kgBB

 Dosis rendah dan dosis tengah ditentukan dengan menurunkan dua kelipatan dari dosis tertinggi sehingga diperoleh dosis 700dan 350mg/kgBB  Perhitungan konversi dari tikus 200 gram ke manusia 70kg = 56,00  Dosis untuk tikus = 1400mg/kgBB = 1,400 g/kgBB = 0,0014 g/gBB tikus = 0,2800 g / 200gBB tikus  Dosis untuk manusia 70 kg = 56,00 x 0,2800 g


87

= 15,68 g  Dosis untuk manusia 50 kg =

,

= 11,2 g

50

Lampiran 12. Perhitungan konversi dosis untuk manusia  Angka konversi tikus 200 g ke manusia 70kg = 56,00

Maka penetapan dosis ekstrak etanol biji P.americana sebagai berikut :  Ekstrak etanol biji P. americana dosis 350 mg/kgBB atau 0,350 g /kgBB tikus: 0,350 g /kgBB = 0,00035 g/gBB = 0,07 g/ 200gBB maka dosis konversi untuk manusia 70kgBB = 0,07 g/200gBB x 56,00 = 3,92 g /70kgBB = 2,8 g /50kgBB  Ekstrak etanol biji P. americana dosis 700mg/kgBB atau 0,700 g /kgBB tikus: 0,700 g /kgBB = 0,0007 g/gBB = 0,14 g/ 200gBB maka dosis konversi untuk manusia 70kgBB = 0,14 g/200gBB x 56,00 = 7, 84 g /70kgBB = 5,6 g /50kgBB  Ekstrak etanol biji P. americana dosis 1400mg/kgBB atau 1,4 g /kgBB tikus : 1,4 g /kgBB = 0,0014 g/gBB = 0,28 g/ 200gBB maka dosis konversi untuk manusia 70kgBB = 0,28 g/200gBB x 56,00 = 15,68 g /70kgBB = 11,2 g /50kgBB


88

Lampiran 13. Penetapan kadar air serbuk biji P.americana Penetapan kadar air serbuk dilakukan dengan metode gravimetri menggunakan alat moisture balance. Pemanasan serbuk biji P.americana dilakukan pada suhu 1050 C selama 15 menit. Bobot

Replikasi I

Replikasi II

Replikasi III

Sebelum pemanasan

5,000

5,000

5,000

Setelah pemanasan

4,624

4,636

4,630

Kadar air Rata-rata kadar air

7,52%

7,28 %

7,40 %

7,40 %

Kadar air = − Replikasi I =

Replikasi II = Replikasi III =

,

,

, , ,

100% = 7,52% ,

, ,

ℎ

,

100%

100% = 7,28 %% 100% = 7,40 %

Rata-rata kadar air dari ketiga replikasi =

,

%

,

%

,

%

= = 7,40 % Kadar air serbuk adalah 7,40 %. Kadar air ini sudah memenuhi persyaratan kadar air serbuk yang baik yaitu kurang dari 10%.


89

Lampiran 14. Hasil rendemen ekstrak etanol biji P.americana Tabel IX. Hasil rendemen ekstrak etanol biji P.americana

Cawan kosong Cawan + ekstrak Rendemen

Cawan 1 61,07 65,38 4,31

Rata-rata rendemen

Cawan 2 61,68 66,45 4,77

Cawan 3 66,74 71,10 4,36

Cawan 4 69,83 74, 02 4,19

Cawan 5 59,42 64,05 4,63

= =

,

,

= 4,45 % rendemen ektrak kental = =

,

,

,

gram ,

18, 08 %

100%

Lampiran 15. Bobot pengeringan ekstrak etanol biji P.americana hingga terbentuk ekstrak kental Tabel X. Pengeringan ekstrak etanol biji P.americana hingga terbentuk ekstrak kental

Berat cawan Jam ke kosong 61,07 berat 61,68 ekstrak 66,74 (gram)

0 08.00 121,62 124,03 118,079

2 10.00 90,73 93,7 89,72

4 12.00 75,68 76,3 75,09

6 14.00 66,72 65,59 74,06

8 16.00 66,45 65,38 71,1

Lampiran 16. Pengukuran validitas dan reliabilitas

10 18.00 66,45 65,38 71,1


Tabel XI. Hasil validitas dan reliabilitas Serum kontrol (range 1,09-1,71mg/dL) x (mg/dL) 1,7 1,7 1,7 1,7 1,6

(

SD =

(

,

=

)

)

= 0,04 Range x ± SD = 1,68 ± 0,04 = 1,64- 1,72 CV = =

, ,

100%

= 2,38 %

1,68

x0,02 0,02 0,02 0,02 -0,08

(x- )2 0,0004 0,0004 0,0004 0,0004 0,0064 Σ = 0,008

90


Lampiran 17. Surat Pengesahan Hasil Pemeriksaan Histologis

91


92


93


94

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi dengan judul “Efek Nefroprotektif Pemberian Jangka Panjang Ekstrak Etanol Biji Persea americana Mill. terhadap Kadar Kreatinin dan Gambaran Histologis Ginjal pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida” memiliki nama lengkap Rotua Winata Nopelia Silitonga. Penulis lahir di Jayapura pada tanggal 27 November 1991, merupakan anak pertama dari tiga bersaudara. Pendidikan formal yang pernah ditempuh yaitu TK YPPK Kristus Raja (1996-1998), SD YPPK Kristus Raja (1998-2004), SMP Negeri 1 Jayapura (2004-2007), SMA Negeri 5 Jayapura (2007-2010), kemudian melanjutkan pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta di tahun 2010. Semasa menempuh kuliah, penulis aktif dalam berbagai kepanitiaan. Penulis pernah menjadi anggota divisi perlengkapan kegiatan Hari Anti Tembakau (2011), koordinator kesekretariatan acara TITRASI (2011), bendahara dalam kegiatan Desa Mitra (2012). Penulis pernah menjadi asisten praktikum Botani Farmasi (2012 dan 2013).

SKRIPSI. Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Recommend Documents