34
Lampiran 1 Diagram alir penelitian Sampel basah
Determinasi
Dikeringkan dan dihaluskan
Serbuk kering
Kadar air & kadar abu
Maserasi dengan n-heksana Disaring
Diuapkan
Residu
Ekstrak n-heksana
Maserasi dengan etilasetat Disaring
Diuapkan
Residu Maserasi dengan metanol
Ekstrak etilasetat
Disaring Diuapkan Residu Ekstrak metanol
Maserasi dengan air Disaring
Diuapkan
Residu
Ekstrak air Rendemen, total penol, uji fitokimia, uji akfivitas antioksidan & inhibitor α- glukosidase Ekstrak terbaik
35
Lampiran 1 (lanjutan)
Ekstrak teraktif
Pemilihan eluen terbaik Fraksinasi dengan romatografi kolom
Fraksi A
Fraksi B
Fraksi C
Fraksi nx
Rendemen Uji fitokimia Uji aktivitas antioksidan Uji akfivitas inhibitor α-glukosidase
Fraksi teraktif
Fraksinasi dengan KLTP
Fraksi Ax
Fraksi Bx
Fraksi Cx
Fraksi n
Rendemen Inhibitor enzimα-glukosidase Uji aktivitas antioksidan Fraksi teraktif
Identifikasi senyawa (UV-VIS, IR)
36
Lampiran 2 Hasil determinasi tanaman andaliman
37
Lampiran 3 Hasil penentuan rendemen ekstrak kasar No
Ekstrak
Bobot awal (g)
Bobot ekstrak (g) 15,3637
Kadar air (%)
Rendemen (%) 1,7866
951,15
22,1139
9,59
2,5716
1
n-heksan
2
Etil asetat
3
Metanol
36,3187
4,2234
4
Air
42,2086
4,9083
Contoh Perhitungan: Rendemen
Bobot ekstrak X 100% Bobot kering 1 kadar air
Rendemen
15,3637g X 100% 951,1537g 1 0,0959
Rendemen
15,3637g X 100% 859,9381 1,7866%
38
Lampiran 4 Penentuan total fenol Sampel
Ekstrak n-heksana
Ulangan
Absorban
1
0,334
2
0,335
3
0,335
Rata-rata
Total fenol mg asam galat/ 100 g ekstrak
38,7500
0,335
Ekstrak etilasetat
1
1,505
2
1,505
3
1,503
Rata-rata
184,9125
1,5043
Ekstrak metanol
1
3,068
2
3,01
3
3,01
Rata-rata
375,5375
3,0293
Ekstrak Air
1
3,612
2
3,612
3
3,913
Rata-rata
460,9125
3,712
Contoh perhitungan:
Kurva standar (asam galat) Absorban
1.5 y = 0,008x + 0,025 R² = 0,995
1 0.5
Series1 Linear (Series1)
0 0
50
100
150
Konsentrasi (ppm) Y = 0,008x + 0,025 0,335 = 0,008x + 0,025 X = 38,7500, jadi total fenol = 38,7500 mg asam galat /100 g ekstrak
39
Lampiran 5 Contoh perhitungan IC50 ekstrak kasar buah andaliman untuk uji aktivitas antioksidan dan inhibitor α-glukosidase 1.
Antioksidan
Konsentrasi
Abs.
%
(ppm)
sampel
Inhibisi
800
0,165
81,0563
700
0,2
77,0379
600
0,236
72,9047
500
0,329
62,2273
400
0,374
57,0609
300
0,517
40,6429
200
0,622
28,5878
blanko
0,871
IC50 (ppm)
390,92
Ekstrak metanol 100 % Inhibisi
80 60
y = 0,087x + 15,99 R² = 0,950
40
Series1
20
Linear (Series1)
0 0
200
400
600
800
1000
Konsentrasi (ppm)
Abs. blanko Abs. sampel x 100% Abs. blanko 0,871 0,165 % Inhibisi x 100% 0,871 % Inhibisi 81,0563 Contoh perhitungan IC50 : Y= 0,087x + 15,99 50= 0,087x + 15,99 X = 390,9195 ppm % Inhibisi
40
Lampiran 5 (lanjutan) 2.
Inhibitor α-glukosidase
Konsentrasi
Ekstrak metanol
(%)
Abs
S1
S1-S0
% Inhibisi
(S0)
U1
U2
U1
U2
U1
U2
1
1,349
1,736
1,695
0,387
0,346
87,1981
88,5544
0,5
0,784
1,224
1,222
0,44
0,438
85,4449
85,5111
0,25
0,435
0,976
0,993
0,541
0,558
82,1039
81,5415
0,125
0,281
1,082
1,128
0,801
0,847
73,5031
71,9815
0,0625
0,181
1,526
1,565
1,345
1,384
55,5078
54,2177
0,0313
0,158
1,744
1,804
1,586
1,646
47,5356
45,5508
0,093
3,266
2,966
3,173
2,873
Blanko
Rerata blanko = 3,023 Rerata IC50 = 0,0323 % Keterangan : S1= campuran dengan penambahan enzim S0= campuran tanpa penambahan enzim
Contoh Perhitungan: % Inhibisi
3,023 0,387 x 100% 3,023
% Inhibisi
87,1981%
Ekstrak metanol
% Inhibisi
100
y = 12,23ln(x) + 93,08 R² = 0,907
50
Series1
y = 13,13ln(x) + 93,97 R² = 0,928
0 0
0.5 1 Konsentrasi (%)
Y = 12,23 ln(x) + 93,08 50 = 12,23 ln(x) + 93,08 Ln(x) = -3,5225 X = anti ln (-3,5225) = 0,0295 ,
,
Jadi IC50 rata-rata Jadi IC50 rata-rata = 0,0323 %
0,0323
series 2 Log. (Series1) 1.5
Log. (series 2)
41
Lampiran 6 Nilai Rf setiap tabung hasil fraksinasi ekstrak metanol dengan kromatografi kolom Jlh
Jarak
spot
spot(cm)
1-31
1
32-45
Tabung
Jarak eluen
Rf
Fraksi
Warna
8
0.93
A
Hijau muda
1
4.5
0.52
B
Hijau tua
46-150
1
2.5
0.29
C
Hijau
151-185
1
2
0.23
D
Coklat
186-238
2
1;0.6
0.12; 0.07
E
Kuning
239-358
1
0.3
0.035
F
Coklat muda
(cm)
8.3
Contoh perhitungan: Jarak tempuh spot dari garis awal Jarak tempuh eluen dari garis awal 8 cm 8.6 cm 0.93
42
Lampiran 7 Nilai Rf dan penentuan rendemen setiap fraksi hasil penggabungan setiap tabung dari fraksinasi dengan kromatografi kolom a. Nilai Rf Fraksi
Jumlah spot
Jarak spot(cm)
A
1
B
Jarak eluen (cm)
Rf
Warna
6,5
0,8072
Hijau muda
2
1,6; 4
0,1928; 0,4819
Hijau tua
C
2
1,6; 3,1
0,1928; 0,3855
Hijau
D
2
0,6; 1,7
0,0723; 0,3855
Coklat
E
1
0,6
0,0723
Kuning
F
1
0
0
Coklat muda
8.3
b. Contoh perhitungan rendemen fraksi hasil fraksinasi dengan kolom Fraksi
Bobot (g)
A
0.5274
6,1275
B
1.0557
12,2655
C
0.4724
D
2.3276
27,0428
E
0.6426
7,4659
F
0.8785
10,2067
Contoh perhitungan: Rendemen
Bobot fraksi g Bobot ekstrak g
Rendemen
0.5274 g x 100% 8.6071 g
Rendemen
6.1275 %
Bobot ekstrak (g)
8.6071
Rendemen (%)
5,4885
43
Lampiran 8
a.
Contoh perhitungan IC50 fraksi hasil fraksinasi ekstrak terbaik dengan kromatografi kolom untuk uji aktivitas antioksidan dan inhibitor α-glukosidase.
Antioksidan Fraksi E
Konsentrasi (ppm)
Absorban
% Inhibisi
800
0,121
78,3929
700
0,137
75,5357
600
0,171
69,4643
500
0,266
52,5
400
0,316
43,5714
300
0,498
11,0714
200
0,473
15,5357
100
0,553
1,25
50
0,72
-28,5714
25
0,722
-28,9286
blanko
0,56
IC50
444,7716 ppm
% Inhibisi
0,56 0,121 x 100 % 0,56
%Inhibisi
78,3929
% Inhibisi
100
y = 32,80ln(x) - 150,0 R² = 0,910
50
Series1
0 -50 -100
0
200
400
600
Konsentrasi (ppm)
Y = 25,43 Ln(x) – 120,6 Ln x 6,7 x anti Ln 6,7 812,4 ppm Jadi IC50 = 812,4 ppm
800
1000
Log. (Series1)
44
Lampiran 8 (lanjutan) b. Inhibitor α-glukosidase Fraksi C Konsentrasi
S
S0
(%)
U1
U2
0,26
3,711
3,71
0,13
2,417
0,065
S-S0
% Inhibisi
U1
U2
U1
U2
3,611
0,1
0,099
95,5556
95,6
2,464
2,196
0,221
0,268
90,1778 88,0889
1,628
1,595
1,251
0,377
0,344
83,2444 84,7111
0,0325
1,103
1,097
0,72
0,383
0,377
82,9778 83,2444
0,01625
0,863
0,846
0,407
0,456
0,439
79,7333 80,4889
0,00812
0,984
0,978
0,278
0,706
0,7
68,6222 68,8889
0,00406
1,322
1,354
0,194
1,128
1,16
49,8667 48,4444
2,428
2,326
0,127
Blanko
Abs.blanko rata-rata = 2,25 IC50 rata-rata = 0,0016 % K
S1 S0 x 100% K 2,25 0,1 x 100% 2,25
% Inhibisi % Inhibisi % Inhibisi
95,5556
120
y = 9,464ln(x) + 111,0 R² = 0,867
% Inhibisi
100 80 60
Ulangan 1
y = 9,485ln(x) + 111 R² = 0,837
40
Ulangan 2
20
Log. (Ulangan 1)
0
Log. (Ulangan 2) 0
0.1
0.2
Konsentrasi (%) Y = 9,464 Ln (x) + 111 IC50 = anti Ln ( 6,445 , , IC50 rata-rata =
0,0016 0,0016 %
0.3
45
Lampiran 9 Nilai rendemen dan Rf fraksi C dan E dari hasil KLTP Fraksi C (0,2503 g)
Fraksi E (0,2178 g)
Bobot
Rendemen
Jlh
(g)
(%)
spot
FC1
0,0136
5,43
FC2
0,0158
FC3
0,0058
Fraksi
Bobot
Rendemen
Jlh
(g)
(%)
spot
FE1
0,0481
22,08
1
0,0811
0,2439
FE2
0,0162
7,44
1
0,1216
0,3171
FE3
0,0088
4,04
1
0,2027
Rf
Fraksi
1
0,1219
6,31
1
2,32
1
Rf
0,1622; FC4
0,0187
7,47
1
0,4268
FE4
0,0059
2,71
2
0,4729
FC5
0,0116
4,63
1
0,5366
FE5
0,0035
1,61
1
0,5135
FC6
0,0100
3,99
1
0,6341
FE6
0,0021
0,96
1
0,6351 0,5;
FC7
0,0090
3,59
1
0,7073
FE7
0,0037
1,69
2
0,7027
FC8
0,0053
2,12
1
0,8049
FE8
0,003
1,38
1
0,8108
FC9
0,0010
0,39
1
0,8902
-
-
-
-
-
FC10
0,0058
2,32
1
0,9268
-
-
-
-
-
Contoh Perhitungan: Bobot fraksi X 100 % Bobot ekstrak 0,0136 X 100 % 0,2503 5,43 %
46
Lampiran 10 Perhitungan nilai IC50 fraksi yang diperoleh dari hasil KLTP sebagai antioksidan dan inhibitor α-glukosidase a. Antioksidan FE2 Konsentrasi
Absorbansi sampel
(ppm)
U1
U2
U1
U2
500
0,143
0,138
79,2453
79,9709
400
0,176
0,181
74,4557
73,7300
300
0,187
0,186
72,8592
73,0044
200
0,193
0,189
71,9884
72,5689
100
0,476
0,432
30,9144
37,3004
50
0,532
0,523
22,7866
24,0929
25
0,707
0,733
-2,6125
-6,3861
blanko
0,715
0,663
Blanko rata-rata IC50 (ppm)
0,689 122,2034 143,7821
% Inhibisi
Abs. blanko Abs. sampel x 100% Abs. blanko
% Inhibisi
0,689 0,143 x 100% 0,689
% Inhibisi
% Inhibisi
79,2453
Rerata = 132,9928
47
Lampiran 10 (lanjutan)
FE2 DPPH 100 y = 28,54ln(x) - 91,96 R² = 0,950
% Inhibisi
80 60
Series1
40
series 2
y = 28,39ln(x) - 91,05 R² = 0,943
20
Log. (Series1) Log. (series 2)
0 -20 0
100
200 300 400 Konsentrasi (ppm)
500
600
Y = 29,54 Ln(x) – 91,96 50 = 29,54 Ln(x) – 91,96 Ln x
141,96 29,54
Ln x
4,806
x
anti Ln 4,806
ppm
IC50 = 122,2034 ppm IC50 rata-rata =
,
,
IC50 rata-rata = 132,9928 ppm b Inhibitor α-glukosida Konsentrasi (ppm)
S1
S0
S1-S0
% Inhibisi
500
0,453
0,436
0,017
90,8602
250
0,31
0,276
0,034
81,7204
125
0,27
0,195
0,075
59,6774
62,5
0,229
0,152
0,077
58,6022
31,25
0,216
0,13
0,086
53,7634
15,625
0,221
0,121
0,1
46,2366
7,8125
0,26
0,112
0,148
20,4301
Blanko
0,296
0,11
0,186
48
Lampiran 10 (lanjutan)
K
% Inhibisi
S1 K
S0
x 100%
0,186 0,017 x 100% 0,186
% Inhibisi
90,8602%
% Inhibisi
% Inhibisi
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
y = 14,84ln(x) - 2,643 R² = 0,924 Series1 Log. (Series1)
0
100
200
300
400
Konsentrasi (ppm)
Y = 14,84 Ln(x) – 2,643 50 = 14,84 Ln(x) – 2,643 Ln(x) = 3,5474 X = anti ln (3,5474) = 34,7219 ppm.
500
600
