Proteiny Homoproteiny – – – –
histony globuliny prolamin skleroproteiny
Heteroproteiny – chromoproteiny • rhodopsin • barevná nebílkovinná složka
– metaloproteiny – fosfoproteiny • kasein
– glykoproteiny – lipoproteiny – nukleoproteiny
Celková bílkovina - cca 100 - 120 proteinů Poločas:
prealbumin transferin albumin, IgE
12-24 hodin 8 dní 20 dní 2 dny
Syntéza - játra, lymfocyty, plasmocyty (Ig, složky komplementu) Degradace - exkrece, endogenní katabolismus Fyz. význam - koloidně osmotický tlak, transportní funkce, enzymy, protilátky, hormony a receptory, hemostáza a koagulace nutrice pufr
Indikace k vyšetření bílkovin ²
edém ² polyúrie ² krvácení ² chronické onemocnění ledvin ² chronické průjmy ² chronické nemoci jater ² chronické choroby pojiva ² bolesti kostí ² lymfoproliferativní nemoci ² častý výskyt infekcí ² patologický nález - vysoké FW, proteinurie
Vztah diagnózy a biochemických testů ü ztráty bílkovin nedostatecná syntéza retence vody a solí ü dehydratace ü akutní a chronické zánety ü monoklonální gamapatie ü anémie z nedostatku železa ü anémie chron. chorob ü Wilsonova nemoc ü hemochromatoza ü malnutrice
• CB, albumin ELFO
• Imunoelfo • transferin, feritin, solubilní Trf receptor • ceruloplasmin, Cu • transferin, CVK, feritin • Trf, alb, prealb
Celková bílkovina Snížení - malabsorbce - jaterní nemoci - zvýšené ztráty Ø střevo, moč, popáleniny
- zvýšený katabolismus Ø zánět, malignita Ø chron. nemoci
- diluce - katabolismus Ø hladovění
Zvýšení + hypergamaglobulinémie + hypovolémie
Albumin Snížení
- malnutrice - malabsopce - zvýšená spotřeba při graviditě - porušená syntéza cirhoza - zvýšený rozpad - ztráty - diluce - zánět
Zvýšení + dehydratace + i. v. podání albuminu
γ - globuliny v polyklonální – nejčastější : chron. hepatopatie, kolagenozy, chron. infekce v monoklonální gamapatie – maligní myelom v dysgamaglobulinémie a aglobulinémie
Akutní zánět má 2 fáze : Ø včasná - haptoglobin, orosomukoid, ceruloplasmin, α-1-antitrypsin, fibrinogen, CRP, C3 Ø snížení - negativní reaktanty ak. fáze albumin, prealbumin, transferin
Ø pozdní - zvýšení γ-globulinů,
Proteiny • rychle produkované - orosomukoid,
ceruloplasmin, α-1-antichymotrypsin, α-1-antitrypsin, haptoglobin, CRP, fibrinogen
• beze změn – α-2-makroglobulin, C3 • rychleji odbourávané - transferin, prealbumin, albumin
Transferin 676 AA, Fe3+, Mr 81 000, glykoprotein syntéza v játrech, kostní dřeň, uzliny, 2-3,7 g/l transport Fe - anémie, malnutrice, hemochromatóza § negativní reaktant akutní fáze CDT transferin
§ § § §
é anémie Fe (anémie chron.chorob nižší)
Feritin § zásoby Fe, Mr 450 000, § s věkem stoupá 20-300 µg/l
4-200 µg/l
ê nemoci jater, ca. jater, ê anémie Fe
obstrukční ikterus,
é leukémie, zánět, hemochromatóza
Ceruloplasmin - Mr 140 000, 6 atomu Cu, α-2 frakce - 90% sérové mědi - ženy vyšší, - 0,2 - 0,6 g/l
ò m. Wilson, nefrotický syndrom ñ cholestáza intrahepatální, záněty, AIM
Prealbumin § Mr 21 000 , kombinace s TBG, poločas 1-2 dny § 0.1-0.4 g/l
§ nutrice, proteosyntéza, RAF
é steroidy ê jaterní nemoci, nekróza, RAF
RBP - Retinol binding protein - 50-70 mg/l, plocas 12 hod - nutrice, deficit vitaminu A
TBG - 10-20 mg/l, vyšší gravidita a novorozenci
Fibrinogen § Dimer 3 retezcu, Mr 340 000 § 2-4 g/l, polocas 2-4 dny § reaktant akutní fáze koagulace, é zánět, stav po operaci, malignity, RA, AIM, nefrotický syndrom, obstrukce žlucových cest ê DIC, hyperfibrinolýza, těžké postižení jater, fibrinolytická léčba
CRP §
β-frakce, Mr 110 000 - 140 000
§
Váže C polysacharid z pneumokoků
§
Citlivý, ale nespecifický
§
fyziol. hodnoty do 10 mg/l (8, 5) stanovení - supersenzitivní CRP
§
ñ při zánětu, FW, kontrola imunosupresivní terapie
Haptoglobin 0,3 – 2,0 g/l, alotypy – dríve vyšetření paternity n
haptoglobin váže uvolněný hemoglobin 1:1
n
při silné hemolýze nulové hodnoty
ê nemoci jater - intravazální hemolýza, hemolytická anemie, cirhóza, é zánět, operace i trauma CAVE - zánet + hemolýza - normální hodnota !!
Hemopexin n
0,5 – 1,0 g/l
ò závažná hemolýza (není výrazne ovlivnen zánetem)
Kyselý α-1-glykoprotein = orosomukoid § 45 % sacharidu (kyselina sialová) § Funkce nejasná § 0,5 – 1,2 g/l, Mr 44 000 § RAF, pozdější nástup než CRP (monitorace prubehu – vztah CRP a orosomukoid) é zánět, perinatální infekce, chronické zánety, malignity, SLE
α-2-makroglobulin • 1,5–3,0 g/l, Mr 725 000 - proteázový inhibitor, inhibitor koagulčních faktorů
ñ nefrotický syndrom, cirhóza, ò DIC, akutní pankreatitida
α-1-antitrypsin Ø inhibitor serinových proteáz, Ø 1,0 – 2,0 g/l, Mr 53 000 Ø Ruzné genetické variace napr. ZZ (10% aktivita Ø záněty, nádory, hepatopatie ê Primární plicní emphysém, neonatální hepatitidy, cystická fibróza, exudativní enteropatie
Inter-α-trypsinový inhibitor Ø inhibice proteáz
ñ zánět
α-1-antichymotrypsin v serinová proteináza s katepsinem G, v 26 % sacharidů v 0,3 – 0,6 g/l é zánět, RAF
β-2-mikroglobulin • neglykovaný polypeptid 100 AA, Mr 11 000 • 0,8 – 2,4 mg/l součást HLA systému - Tu marker – NHL, CLL, myelom - tubulární poškození
Lysozym q q q q
bazická bílkovina, Mr 14 500 tvorba v lymfocytech, bakteriolýza, 5 - 10 mg/l β-2 frakce
Amyloid §Sérový amyloid A (malé lipoproteiny) §fibrily amyloidu AL - L řetězce - sekundární řetězce AA §kyselina neuraminová §prekurzoroý protein SAA zdroj depozit amyloidu v orgánech § meze 50-300 mg/l
Složky komplementu • Nejčastěji stanopvení C3 a C4 složky • pokles - spotřeba při tvorbě imunokomplexů • vzestup - zátěž
Nové ukazatelé zánětu • Elastáza z granulocytů (60-110 ug/l) – reakce na bakteriální zánět
• Prokalcitonin (do 0.5 ug/l) • 116 AK, Mr 13 000 – stimulace bakteriální a mykotickou infekcí
• Neopterin (2-7 nmol/l) – produkován makrofágy po stimulaci INF-γ – vylučován T lymfocyty – měřítko buněčné imunity
Cytokiny • Nízkomolekuární proteiny • Autokrinní, parakrinní, endokrinní účinek • krátký poločas sec-min • Interleukiny, interferony, faktory stimulující kolonie (CSF), růstové f. • IL-6, TNF, IL-8, srIL2
Elektroforéza bílkovin Frakce –
albumin α-1 α-2 β γ
55 - 68 1,6 - 5,6 5.9 - 11.1 7.9 - 13.9 11.4 - 18.4
ü zánět é α-frakce ü chron. zánět, DM é β-frakce ü stáří: ê albumin, é α-2 frakce, é β-frakce
Proteinové komponenty na acetátcelulóze
Normální vzorek Elektroforéza s vysokou rozlišitelností
OLYMPUS HITE SYSTEM
Nálezy kapilární elektroforézy normální sérum
-
PP komponenta M
biklonální PP
Nejdůležitější gamapatie
T Y P Y E L F O G R A M Ů
Referenční vzorek
Monoklonální vzestup
Deficit antitrypsinu
Nefrotický syndrom
Zánět
Cirhóza
Vzácné frakce v ELFO
Diagnostika nefrologických onemocnění • Chemické vyšetření moči
– hematúrie, glukóza, ketolátky, bilirubin, nitrity, leukocyty
• Mikroskopické vyšetření moči
– Erytrocyty, leukocyty, tubulární buňky, válce – Hamburgerův sediment
• Vyšetření funkce ledvin
- kreatinin, urea, další rutinní parametry – GFR – sběr, výpočty (Cocrofta a Gaulta, další), cystatin C - Tubulární funkce –odpady, beta-2-mikroglobulin
• Vyšetření proteinúrie
– Mirkoalbuminúrie (do 30 mg/den, do 2,5 g/mol kreat)
• Imunologická vyšetření
Glomerulární filtrace
Typy a markery proeteinurie Form
Causes
Marker
Selective glomerular
Diabetes Hypertension Early stage postural proteinuria, glomerulopathies fever, exercise Bact.Pyelonephritis Interstitial nephritis Toxic nephropaties DM, hypertensive nephropathy Burns, chronic pyelonephritis Intravascular hemolysis, rhabdomyolysis, myeloma
Albumin, transferin
Non-selective glomerular Tubular
Mixed Prerenal Postrenal
Postrenal hematuria (stones, tumors)
Albumin, IgG
a1 microglobulin, b2 microglobulin Albumin, total protein Hemoglobin, myoglobin, Ig- light chains IgG/albumin, a2 macroglobulin/ albumin
Proteinurie orientačně, kvantita GBM do 150 000 Mr, norma 120 mg/d tubulointersticiální poruchy většinou < 1.0 g/d tubulární proteinurie - β-2-mikroglobulin selektivní - albumin a transferin bez Ig; Mr < 100 000 neselektivní – i imunoglobuliny Mr > 100 000 glomerulární proteinurie - selektivní a neselektivní Typ proteinurie - index sektivity: IgG m IgG s Trf m Trf s < 0,1 selektivní, > 0.2 neselektivní 0,1 – 0,2 středně selektivní
Metody detekce poškození organismu volnými radikály
Přímá měření Ø elektronová spinová rezonance (ESR) Ø radikální trapping Ø pulsní radiolýza Ø chemiluminiscence
Metody detekce poškození organismu volnými radikály
Nepřímá měření Ø
antioxidační systémy – stanovení jednotlivých látek (enzymy, substráty, stopové prvky) – celková antioxidační kapacita
Ø
stanovení autoprotilátek
Ø
stanovení AGE a AOPP
Ø Stanovení látek vznikajících při radikálových reakcích • • • • • • • •
malondialdehyd konjugované dieny hydroperoxidy lipidů aldehydy (např. 4-HNE) pentan, etan poškozená DNA baze proteinové poškození modifikované aminokyseliny • oxLDL
