KEMENTERIAN KEHUTANAN BADAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KEHUTANAN BALAI PENELITIAN TEKNOLOGI PERBENIHAN TANAMAN HUTAN

BUKU 1

KEMENTERIAN KEHUTANAN

BADAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KEHUTANAN BALAI PENELITIAN TEKNOLOGI PERBENIHAN TANAMAN HUTAN Jl. Pakuan Ciheuleut, PO Box 105 BOGOR 16001 Telp/Fax : 0251 8327768 E mail : [email protected]

BOGOR 2014

PEDOMAN UJICEPAT VIABILITAS BENIH TANAMAN HUTAN (Acacia mangium, Gmelina arborea, Paraserianthes falcataria, Pinus merkusii, Swietenia macrophylla)

Oleh : Muhammad Zanzibar Nanang Herdiana Insan Novita Enok Rohani K Adang Muharam Endang Ismiati Hasan Royani Achmad Suprayogi

BUKU 1

KEMENTERIAN KEHUTANAN

BADAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KEHUTANAN BALAI PENELITIAN TEKNOLOGI PERBENIHAN TANAMAN HUTAN Jl. Pakuan Ciheuleut, PO Box 105 BOGOR 16001 Telp/Fax : 0251 8327768 E mail : [email protected]

BOGOR 2014

KATA PENGANTAR Kegiatan pengujian benih merupakan hal yang penting dalam produksi semai dan pemasaran bibit. Standardisasi metode pengujian dan mutu benih yang telah dihasilkan oleh Balai Litbang Teknologi Perbenihan sebelumnya memuat uji perkecambahan (langsung). Sehingga untuk penyempurnaannya perlu dilengkapi dengan teknologi uji cepat viabilitas, agar para pengguna memiliki alternatif lain dalam melakukan pengujian benih. Buku ini berisi standar prosedur uji cepat viabilitas benih berdasarkan uji tetrazolium topografis, uji hidrogen peroksida, uji eksisi embrio dan uji belah untuk 5 jenis benih tanaman hutan (Acacia mangium, Gmelina arborea, Paraserianthes falcataria, Pinus merkusii dan Swietenia macrophylla) serta kunci interpretasi benih hidup dan benih mati berdasarkan uji cepat yang digunakan. Diharapkan informasi ini dapat membantu dan mempermudah para peneliti, akademisi dan laboran dalam melakukan aktivitas pengujian benih, serta pengguna lainnya dalam rangka memperoleh kepastian informasi kualitas benih dengan cepat. Ucapan terima kasih disampaikan kepada semua pihak yang telah membantu, baik tenaga maupun pikirannya sehingga buku ini dapat tersusun.

Bogor, September 2003 Kepala Balai Litbang Teknologi Perbenihan

Ir. Darmawan Budiantho, MP NIP. 080052517

i

KATA PENGANTAR CETAKAN KEDUA Dalam rangka penyebarluasan hasil penelitian dalam bentuk yang lebih praktis, Balai Penelitian Teknologi Perbenihan Tanaman Hutan (BPTPTH) telah menerbitkan buku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan yang memuat informasi tentang standar prosedur uji cepat viabilitas benih berdasarkan Uji Tetrazolium Topografis; Uji Hidrogen Peroksida; Uji Eksisi Embrio dan Uji Belah untuk 5 jenis benih tanaman hutan, serta kunci interpretasi benih hidup dan benih mati berdasarkan uji cepat yang digunakan. Teknologi uji cepat viabilitas benih merupakan alternatif lain dalam melakukan pengujian benih. Informasi tersebut dikemas dalam bentuk praktis, lengkap, informatif dan mudah diaplikasikan untuk mengetahui kualitas benih secara cepat. Buku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan memperoleh respon yang positif dari: instansi pemerintah; swasta; maupun masyarakat umum. Berkaitan dengan hal tersebut mengakibatkan banyaknya permintaan terhadap buku ini. BPTPTH secara bertahap melakukan pencetakan ulang buku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan, yang didalam buku cetakan ke dua tersebut telah dilakukan penyempurnaan antara lain nama Balai Litbang Teknologi Perbenihan diubah menjadi Balai Penelitian Teknologi Perbenihan Tanaman Hutan; perbaikan redaksional sebagaimana tercantum pada ralat cetakan sebelumnya; serta penyempurnaan lainnya. Ucapan terimakasih disampaikan kepada semua pihak yang telah berperan dalam penyusunan Buku Pedoman Uji Cepat Viabilitas Benih Tanaman Hutan cetakan ke dua ini, sehingga buku ini dapat disusun dan dicetak ulang kembali. Semoga buku ini bermanfaat.

Bogor, Desember 2014 Kepala Balai,

iii

DAFTAR ISI KATA PENGANTAR ........................................................................

i

KATA PENGANTAR CETAKAN KEDUA ................................................

iii

DAFTAR ISI ................................................................................

v

DAFTAR TABEL ............................................................................

ix

DAFTAR GAMBAR .........................................................................

xi

DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................... xiii I.

II.

III.

PENDAHULUAN ...................................................................

1

1.1. 1.2. 1.3. 1.4. 1.5.

Mutu Benih ................................................................ Viabilitas ................................................................... Pengujian Viabilitas .................................................... Uji Cepat Viabilitas ..................................................... Standardisasi Uji Cepat Viabilitas .................................

1 1 1 2 2

METODE UJI CEPAT VIABILITAS .............................................

5

2.1. 2.2. 2.3. 2.4.

Tetrazolium Topografis ............................................ Hidrogen Peroksida................................................. Eksisi Embrio ......................................................... Belah....................................................................

5 6 6 7

UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Acacia mangium .........................

9

3.1. 3.2.

3.3.

3.4.

3.5.

Uji Uji Uji Uji

Umum ....................................................................... Uji Tetrazolium Topografis ............................................ 3.2.1. Standardisasi Prosedur..................................... 3.2.2. Kunci Interpretasi ............................................ Uji Hidrogen Peroksida................................................. 3.3.1. Standardisasi Prosedur ..................................... 3.3.2. Kunci Interpretasi ............................................ Uji Eksisi Embrio ......................................................... 3.4.1. Standardisasi Prosedur ..................................... 3.4.2. Kunci Interpretasi ............................................ Uji Belah.................................................................... 3.5.1. Standardisasi Prosedur ..................................... 3.5.2. Kunci Interpretasi ............................................

9 9 9 11 12 12 13 13 13 14 15 15 16

v

IV.

UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Gmelia arborea ........................... 19 4.1. 4.2.

4.3.

4.4.

4.5.

V.

5.3.

5.4.

5.5.


29 29 29 31 33 33 34 34 34 35 36 36 36

UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Pinus merkusii ............................ 39 6.1. 6.2.

6.3.

6.4.

6.5.

vi

19 19 19 21 21 21 23 23 23 25 25 25 26

UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Paraserianthes falcataria .............. 29 5.1. 5.2.

VI.



39 39 39 40 41 41 43 43 43 44 44 44 45

VII.

UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Swietenia mecrophylla ................. 49 7.1. 7.2.

7.3.

7.4.

7.5.


49 49 49 51 52 52 53 53 53 54 55 55 56

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................ 59 LAMPIRAN

................................................................................ 61

vii

DAFTAR TABEL No.

Teks

Hal.

1.

Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih A. mangium ........ 11

2.

Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih A. mangium ..... 15

3.

Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih A. mangium ................ 16

4.

Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih G. arborea .......... 22

5.

Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih G. arborea ....... 25

6.

Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih G. arborea .................. 27

7.

Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih P. falcataria ........ 32

8

Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih P. falcataria ...... 35

9.

Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih P. falcataria ................ 37

10. Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih P. merkusii .......... 41 11. Kunci Interpretasi Uji Eksisi Embrio untuk Benih P. merkusii ........ 44 12. Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih P. merkusii ................... 46 13. Kunci Interpretasi Uji Tetrazolium untuk Benih S. macrophylla ..... 51 14. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi untuk Benih S. macrophylla .... 55 15. Kunci Interpretasi Uji Belah untuk Benih S. macrophylla ............. 56

ix

DAFTAR GAMBAR No.

Teks

Hal.

1.

Sketsa Struktur Benih A. manglum ..........................................

2.

Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih A. mangium .......................................................................... 11

3.

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih A. mangium ................................................................ 17

4.

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih A. mangium ........................................................ 17

5.

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untuk Benih A. mangium ................................................................. 17

6.

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih A. mangium ................................................................. 17

7.

Sketsa Struktur Benih G. arborea ............................................ 19

8.

Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih G. arborea ........................................................................... 22

9.

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih G. arborea .................................................................. 28

9

10. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih G. arborea ......................................................... 28 11. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untuk Benih G. orborea .................................................................. 28 12. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih G. arborea ............................................................................ 28 13. Sketsa Struktur Benih P. falcataria .......................................... 29 14. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih P. falcataria ......................................................................... 32 15. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih P. falcataria.................................................................. 38

xi

16. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih P. falcataria ........................................................ 38 17. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untuk Benih P. falcataria ................................................................. 38 18. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih P. falcataria ......................................................................... 38 19. Sketsa Struktur Benih P. merkusii ........................................... 35 20. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih P. merkusii .......................................................................... 41 21. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih P. merkusii ......................................................... 47 22. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih P. merkusii ......................................................... 47 23. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untuk Benih P. merkusii .................................................................. 47 24. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih P. merkusii ................................................................... 47 25. Sketsa Struktur Benih S. macrophylla ...................................... 49 26. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih S. macrophylla ..................................................................... 51 27. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih S. macrophyila ............................................................ 57 28. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih S. macrophylla .................................................... 57 29. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Eksisi Embrio untuk Benih S. macrophylla ............................................................. 57 30. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih S. macrophylla ............................................................. 57

xii

DAFTAR LAMPIRAN No.

Teks

Hal.

1.

Bahan dan Alat yang Digunakan untuk Uji Cepat Viabilitas Benih (a). Uji Tetrazolium, (b). Uji Hidrogen Peroksida, (c). Uji Eksisi Embrio dan (e). Uji Belah .................................... 61

2.

Prosedur Pengambilan Contoh Benih untuk Pengujian ................ 62

3.

Cara Pembuatan Larutan Tetrazolium ...................................... 63

4.

Cara Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida ............................ 64

5.

Glosari ................................................................................ 65

xiii

I. PENDAHULUAN 1.1.

Mutu Benih

Keberhasilan penanaman terutama dalam skala yang besar sangat dipengaruhi oleh interaksi antara faktor-faktor biotik, klimatik, edafik, teknik maupun manajemen. Secara tidak langsung faktor teknik seringkali dinyatakan sebagai penyebab utama kegagalan, misalnya karena rendahnya mutu benih. Untuk membedakan suatu benih bermutu atau tidak, secara visual sangat sulit. Apabila benih ditanam tanpa melalui proses pengujian mutu, maka perbedaan baru akan terlihat setelah benih tumbuh di lapangan atau setelah tanaman berproduksi, sehingga konsumen benih akan dirugikan karena kehilangan waktu, biaya dan kemungkinan harus melakukan penanaman ulang (Sadjad, 1980). Informasi yang diperoleh dari pengujian benih akan bermanfaat bagi produsen, penjual maupun konsumen benih, karena mendapat keterangan yang dapat dipercaya tentang mutu atau kualitas dari suatu benih. Pengujian benih adalah penilaian secara objektif tentang mutu benih yang diproduksi atau diedarkan. Pengujian benih terdiri dari: pengujian karakteristik fisik benih dan pengujian karakteristik biologis benih. Pengujian karakteristik benih meliputi : Kemurnian benih, kadar air benih dan berat 1000 butir. Sedangkan karakteristik biologis benih meliputi: pendugaan viabilitas dan vigor benih. Secara garis besar pengujian kualitas suatu kelompok benih dapat dilakukan berdasarkan metode indikasi viabilitas benih. 1.2.

Viabilitas

Viabilitas benih merupakan refleksi dari mutu benih, yang dapat didefinisikan sebagai daya hidup benih yang ditunjukkan oleh fenomena pertumbuhan benih atau gejala metabolismenya dan dapat pula ditunjukkan oleh keadaan organel sitoplasma atau kromosom. Sementara Gordon (1992), menyatakan bahwa viabilitas adalah kemampuan yang dimiliki oleh benih untuk berkecambah, sedangkan perkecambahan adalah keberhasilan proses di dalam benih untuk menghasilkan semai yang baik di persemaian. 1.3.

Pengujian Viabilitas

Viabilitas benih dapat dideteksi melalui beberapa pendekatan, pendekatan yang paling lazim dilakukan adalam melalui pendekatan fisiologis. Metode pendekatan fisiologis ini dibagi menjadi metode langsung dan tidak langsung. Metode langsung yaitu apabila pengamatan dilakukan pada setiap individu benih, sedangkan metode tidak langsung jika deteksi viabilitas tersebut dilakukan terhadap sejumlah benih sekaligus. Deteksi viabilitas benih dari gejala pertumbuhannya disebut penilaian dengan indikasi langsung, sedangkan penilaian viabilitas benih dari gejala metabolisme, bentuk fisik yang kesemuanya tanpa memperlihatkan gejala pertumbuhan disebut pendekatan dengan indikasi tidak langsung. Pada pengujian viabilitas benih dengan menggunakan indikator pertumbuhan kecambahnya sering disebut dengan indikasi langsung, di mana yang dinilai

1

adalah kenormalan pertumbuhan kecambah dan dilakukan dalam jangka waktu tertentu. Sedangkan metode pengujian yang didasarkan pada proses metabolisme benih yang merupakan indikasi tak langsung atau sering disebut juga dengan uji cepat. 1.4. Uji Cepat Viabilitas Pendugaan potensial perkecambahan dari suatu kelompok benih dengan mengecambahkannya langsung merupakan suatu metode yang hampir relevan dalam praktek bidang kehutanan. Tetapi pengujian tersebut akan membutuhkan waktu yang lama, seperti yang diungkapkan oleh Zanzibar (1996), bahwa pelaksanaan pengujian viabilitas benih dengan menggunakan indikator gejala pertumbuhan kecambah biasanya memerlukan waktu yang relatif lama. Untuk jenis pohon hutan, waktu yang diperlukan berkisar antara 7- 30 hari tergantung pada jenis benihnya. Dalam beberapa keadaan, jenis-jenis tertentu secara normal akan berkecambah secara lambat atau menunjukan gejala dormansi sehingga informasi mengenai viabilitas benih tidak dapat segera diperoleh. Keadaan ini akan berpengaruh terhadap benih yang diuji dan keputusan tentang pengadaan benih untuk keperluan yang bersangkutan misalnya untuk penanaman. Sehingga diperlukan metode pengujian viabilitas benih yang dapat menduga secara akurat namun lebih cepat dari pada pengujian perkecambahan secara langsung. Dalam hal ini maka dikembangkan uji cepat viabilitas benih. Tujuan dari uji cepat viabilitas benih menurut Manan (1976) dan Willan (1985), adalah: (a). Untuk menentukan secara cepat viabilitas benih suatu spesies yang berkecambah normal secara lambat atau menunjukkan dormansi di bawah perkecambahan normal. (b). Untuk menentukan viabilitas dari suatu sampel yang pada akhir uji perkecambahan menyatakan suatu persentase yang tinggi dari yang tidak berkecambah (hard seed). Beberapa metode uji cepat yang dapat digunakan dalam menduga viabilitas benih, antara lain: uji belah (cutting test), uji tetrazolium, uji hidrogen peroksida, metode radiografi, uji eksisi embrio, uji daya hantar listrik dan uji indigo carmine. 1.5. Standardisasi Uji Cepat Viabilitas Penilaian secara objektif dapat dilaksanakan dengan baik dalam melakukan uji cepat viabilitas bila ditetapkan adanya pembakuan dalam segala segi, mulai dari benih yang diuji, metode pengujian, alat pengujian, skill atau keahlian tenaga penguji sampai dengan parameter yang digunakan untuk menilai hasil pengujian tersebut. Standarisasi uji cepat viabilitas benih tanaman hutan mencakup standar prosedur pengujuan dan kunci interpretasi. Pedoman standarisasi uji cepat viabilitas ini diharapkan dapat membantu mempermudah aktivitas berbagai pihak yang berkepentingan dalam pengujian benih. Dengan adanya pedoman

2

standar ini maka hasil pengujian lot benih akan seragam jika dikerjakan oleh pihak lain, informasi data hasil pengujian diharapkan mempunyai keakuratan yang cukup baik dan dapat digunakan sebagai acuan dalam rangka penerapan aspek legalitas perbenihan. Metode uji cepat viabilitas benih tanaman hutan yang terdapat dalam pedoman ini meliputi : (1). Uji Tetrazolium Topografis (Tetrazolium Topography Test), (2). Uji Hidrogen Peroksida (Hidrogen Peroxida Test), (3). Uji Eksisi Embrio (Exicion Embryo Test) dan (4). Uji Belah (Cutting Test). Sedangkan jenis benih tanaman hutan yang diuji meliputi : (1). Akasia (Acacia mangium), (2). Gmelina (Gmelina arborea), (3). Sengon (Paraserianthes falcataria), (4). Pinus (Pinus merkusii) dan (5). Mahoni (Swietenia macrophylla). .

3

II. METODE UJI CEPAT VIABILITAS 2.1.

Uji Tetrazolium Topografis

Metode ini merupakan salah satu dari sejumlah metode uji secara biokimia yang telah dikembangkan dan merupakan teknik pengujian yang cukup tepat untuk menduga viabilitas benih. Dengan mengunakan metode ini, dalam waktu kurang lebih 24 jam viabilitas dari suatu kelompok benih telah dapat diduga. Walaupun metode uji tetrazolium telah dinyatakan oleh ISTA sebagai metode resmi untuk beberapa jenis kayu daun lebar dan konifer pada tahun 1976, tetapi sampai saat ini metode dan standar pengujian dengan cara tetrazolium untuk benih tanaman hutan masih sangat sedikit yang telah dibakukan dalam peraturan pengujian internasional/ISTA. Metode uji tetrazolium menggunakan prinsip bahwa setiap sel hidup akan berwarna merah oleh reduksi dari suatu pewarnaan garam tetrazolium dan membentuk endapan formazan merah sedangkan sel-sel yang mati menunjukan warna putih. Dengan merendamnya terlebih dahulu selama semalam, kemudian dibelah dan direndan dalam larutan garam selama beberapa jam, telah dapat menunjukan reaksi yang jelas dan dapat membedakan antara sel yang masih hidup dengan yang sudah mati. Reaksi tesebut diringkas sebagai berikut:

N – N – C6H5

N – N – C6H5 + 2H+

C6H5 – C N – N – C6H5

C6H5– C

+

HCl

N = N – C6H5

Cl

2, 3, 5 trifenil tetrazolium chlorida

2, 3, 5 trifenil formazan

Enzim yang mendorong terjadinya proses ini adalah dehidrogenase dan kegiatan ini berkaitan dengan respirasi. Faktor-faktor yang mempengaruhi reaksi tetrazolium menurut Byrd (1983) adalah suhu, pH larutan, perlakuan terhadap benih, konsentrasi larutan dan tekanan udara tempat pengujian dilakukan. Menurut Sutopo (1998), beberapa kelebihan dan kekurangan uji tetrazolium antara lain:

5

(a).

(b). (C).

(d).

(e). (f).

2.2.

Jika diperlukan keterangan segera tentang viabilitas dari suatu kelompok benih tertentu, maka uji tetrazolium akan dapat memberikan keterangan lebih cepat dibanding uji perkecambahan secara langsung. Tetapi untuk pelaksanaan uji tetrazolium diperlukan waktu yang lebih lama dari pada uji Perkecambahan secara langsung. Untuk benih-benih yang sangat dominan atau yang lambat berkecambah lebih menguntungkan bila menggunakan uji tetrazolium. Kadangkala suatu kelompok benih gagal berkecemabah atau mungkin berkecambah lebih lambat dari biasanya disebabkan oleh tipe dormansi after ripening. Untuk menentukan viabilitas benih tersebut secara cepat maka dapat digunakan uji tetrazolium. Efek phytotoxic dari fungisida, insektisida atau fumigasi dengan metyl bromide yang telah diperlakukan pada benih tidak dapat diketahui dengan uji tetrazolium. Uji tetrazolium tidak selalu dapat memberikan keterangan tentang kerusakan pada benih yang disebabkan oleh proses pengeringan. Uji tetrazolium memerlukan lebih banyak kecakapan dan keputusan dari pada yang biasa diperlukan dalam uji perkecambahan secara langsung. Seringkali diperlukan beberapa kali pembesaran untuk dapat mempelajari dengan seksama pola noda dan lokasi daerah nekrotik yang tidak ternoda. Uji Hidrogen Peroksida

Hidrogen peroksida (HZOZ) merupakan suatu larutan yang dapat merangsang perkecambahan benih, sehingga dapat digunakan untuk uji perkecambahan terhadap beberapa benih jenis konifer di Amerika Barat (Willan, 1985). Menurut Leadem (1984), metode pengujian benih dengan menggunakan hidrogen peroksida merupakan satu-satunya uji cepat viabilitas benih yang dapat merangsang perkecambahan benih dan dapat digunakan untuk mempercepat perkecambahan. Namun uji ini memerlukan waktu selama satu minggu penuh dan pengujiannya agak sulit untuk benih-benih yang berukuran kecil. Keuntungan penggunaan metode hidrogen peroksida sebagai uji cepat viabilitas benih antara lain: tidak mahal dan alat-alat yang dibutuhkan cukup sederhana, bersifat objektif dan sederhana dalam penyiapannya. Sedangkan kekurangan dari metode pengujian ini antara lain: tidak praktis untuk benih yang berukuran kecil, pengujiannya bersifat merusak dan relatif lambat (memerlukan waktu 7 – 8 hari sampai memberikan hasil pengujian yang memuaskan). 2.3.

Uji Eksisi Embrio

Merupakan uji viabilitas benih yang mempunyai nilai yang khusus karena digunakan terutama untuk mendeterminasi viabilitas benih yang bisanya berkecambah lambat atau memperlihatkan dormansi karena kulit benih dan/ atau embrio. Viabilitas benih tersebut dapat dideterminasi secara cepat 5 – 14 hari melalui pengamatan terhadap perilaku embrio dalam kondisi jaringan setelah pemotongan dan inkubasi selanjutnya. Embrio yang viabel akan memperlihatkan warna hijau, tumbuh atau tetap segar sementara embrio yang non viabel akan rusak. Meskipun uji ini bersifat labour intensif dan memerlukan keterampilan

6

serta kesabaran dalam memotong embrio benih secara utuh, tapi merupakan alternatif yang dapat diterima untuk uji viabilitas benih, terutama untuk benihbenih yang memerlukan waktu yang lama jika diuji dengan metode pengujian yang umum, biasanya mencapai 60 hari. Menurut Bonner et al. (1994), keuntungan penggunaan metode eksisi embrio sebagai uji cepat viabilitas benih antara lain: peralatan yang dibutuhkan untuk pengujian cukup sederhana, yang diuji merupakan kondisi benih sebenarnya dan mudah untuk dievaluasi. Sedangkan kekurangan dari metode ini antara lain: bersifat labour intensive dan memerlukan waktu yang panjang dalam mempersiapkan benih sebelum diuji, pengujiannya bersifat merusak dan relatif lambat (memerlukan waktu 10 - 14 hari sampai memberikan hasil pengujian yang memuaskan). 2.4.

Uji Belah

Uji belah (cutting test) merupakan suatu metode uji cepat yang biasanya digunakan untuk menguji viabilitas benih dalam jumlah yang banyak. Uji ini dapat digunakan di lapangan untuk memperkirakan benih yang telah masak atau kualitas kumpulan benih (seed lot) dalam kegiatan pengumpulan benih. Metode ini merupakan salah satu metode pengujian viabilitas benih yang paling sederhana, yang dilakukan dengan cara melihat secara langsung dengan mata terhadap benih yang telah dibelah dengan pisau atau skapel. Jika endospermnya mempunyai warna normal dengan embrio yang baik, maka benih tersebut mempunyai kemungkinan untuk berkecambah, sehingga pengujian ini bersifat sangat subjektif. Dengan hanya melihat penampilannya secara langsung, benih tersebut seperti hidup padahal kalau dikecambahkan mungkin tidak akan berkecambah. Sehingga hasil dari pengujian ini akan memberikan nilai perkecambahan yang lebih besar dibanding keadaan sebenarnya. Menurut Boner et al. ( 1994), keuntungan uji cepat viabilitas benih dengan metode belah antara lain: merupakan metode uji viabilitas benih yang cepat dan murah, dapat digunakan di lapangan untuk memeriksa kualitas benih yang dikumpulkan pada saat pemanenan dan hasil pengujian cukup akurat untuk benih-benih yang masih segar. Sedangkan kekurangan dari metode pengujian ini antara lain: sulit dilakukan untuk benih-benih yang berukuran kecil, memberikan hasil pengujian yang tidak tepat untuk benih-benih yang telah mengalami penyimpanan dan merupakan uji yang merusak.

7

III. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Acacia mangium 3.1.

UMUM

Benih A. mangium memiliki kulit benih yang keras dan sulit ditembus air. Bila benih tersebut dikecambahkan secara konvensional dengan metode uji di atas kertas (UDK) maupun di rumah kaca diperlukan waktu lebih kurang 21 hari. A. mangium, termasuk kedalam famili Leguminosae, umumnya memiliki 3 bagian dasar benih yaitu embrio, jaringan penyimpan cadangan makanan dan pelindung biji. Jaringan penyimpan cadangan makanan berupa kotiledon, sedangkan embrio terdiri dari radikel dan plumula. Pengamatan terhadap benih yang akan diuji dengan menggunakan metode uji cepat viabilitas difokuskan pada struktur tumbuh benihnya berupa radikel, plumula dan kotiledon (Gambar 1).

Gambar 1. Sketsa Struktur Benih A. mangium 3.2. UJI TETRAZOLIUM TOPOGRAFIS 3.2.1. Standardisasi Prosedur 3.2.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5,– triphenil tetrazolium chlorida), Na2HPO2.2H2O, KH2PO4, etanol 70%, kertas merang dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset silet, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangan dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazolium dapat dilihat pada Lampiran 1. 3.2.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian, Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih.

9

3.2.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, saringan, kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 3.2.1.4. Pembuatan Larutan Tetrazolium Cara pembuatan larutan tetrazolium disajikan pada Lampiran 3. 3.2.1.5. Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Pengkondisian, perendaman dalam larutan tetrazolium dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan gunting kuku. Pada saat melubangi kulit, jangan sampai terkena kotiledon, karena akan mempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk.

(2)

Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam di dalam gelas piala.

(3)

Kupas kulit dan belah benih menjadi keping benih dengan silet, Pengupasan dan pembelahan benih harus dilakukan secara hati-hati, jangan sampai terjadi cacat. Pada saat membelah, kondisi radikel, plumula, dan kotiledon harus terbagi dua.

(4)

Rendam salah satu keping benih dalam larutan tetrazolium 1% yang ditempatkan dalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnya dengan aluminium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).

(5)

Masukkan gelas piala tersebut ke dalam oven dengan suhu 40 °C selama 2 jam.

(6)

Tempatkan benih dalam saringan, lalu bilas dengan aquades selama 30 60 detik.

(7)

Tempatkan benih pada cawan petri yang beriz)i 2 lembar kertas merang lembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada radikel, plumula dan kotiledon.

(8)

Amati intensitas dan luas pewarnaan yang terbentuk. Intensitas pewarnaan dibagi menjadi warna merah (M), merah muda (Mm) dan putih (P), sedangkan penghitungan luas pewarnaan (%) dilakukan dengan membandingkan masing-masing warna yang terbentuk terhadap luas keseluruhan permukaan bagian dalam keping benih. Pola pewarnaan yang terbentuk dicocokkan dengan kunci interpretasi.

10

3.2.2. Kunci Interpretasi Viabilitas benih A. mangium yang diuji dapat diketahui dengan melihat persentase pola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunci interpretasi pada Tabel 1 dan Gambar 2, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 3. Tabel 1. Kunci Interpretasi Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih A. mangium

Gambar 2. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih A. mangium

11

Berdasarkan Tabel 1 dan Gambar 2, secara umum kunci interpretasi uji tetrazolium untuk benih A. mangium adalah sebagai berikut: (1).

Benih viabel

:

a. Radikel dan plumula berwarna merah sampai merah muda tanpa putih. b. Kotiledon berwarna merah sampai 50 % putih (terletak jauh di atas/ tidak di sekitar poros embrio) dan memiliki 3 50% merah. (2).

Benih non viabel

:

a. Terdapat warna putih pada radikel dan plumula. b. Pada kotiledon terdapat > 50 % putih dengan warna merah < 50 % merah. 3.3.

UJI HIDROGEN PEROKSIDA

3.3.1. Standardisasi Prosedur 3.3.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, larutan hidrogen peroksida, benomil, etanol 70%, kertas merang dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, penggaris, oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Lampiran 1. 3.3.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 3.3.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat 3.3.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, alat pengaduk, kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 3.3.1.3.2. Sterilisasi dengan Benomil Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam benomil selama 1 jam, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji. 3.3.1.4. Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida Cara pembuatan larutan hidrogen peroksida disajikan pada Lampiran 4.

12

3.3.1.5. Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Pengkondisian, perendaman dalam larutan hidrogen peroksida dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Sterilkan benih A. mangium dengan benomil (lihat 3.3.1.3.2.).

(2)

Potong ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan gunting kuku.

(3)

Rendam benih tersebut dalam larutan H2O2 0,5% (volume larutan H2O2 = 3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminium foil.

(4)

Masukkan gelas piala tersebut ke dalam inkubator atau ruangan gelap pada suhu 20 - 30 °C. Pengujian dilakukan selama 7 hari.

(5)

Ganti larutan HZOz dengan larutan HzOz yang baru pada hari ke-1 dan ke-4.

(6)

Bilas benih dengan aquades, kemudian tempatkan benih tersebut dalam cawan petri yang berisi 2 lembar kertas merang lembab.

(7)

Ukur panjang radikel yang muncul dengan penggaris, kemudian hasil pengukuran tersebut dicocokkan dengan kunci interpretasi.

3.3.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi untuk benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida didasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatan. Benih viabel memiliki panjang radikel > 0,5 mm, sedangkan benih non viabel memiliki panjang radikel < 0,5 mm atau tidak terjadi pemunculan radikel. Contoh benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Gambar 4. 3.4. UJI EKSISI EMBRIO 3.4.1. Standardisasi Prosedur 3.4.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, benomil, etanol 70% dan kertas saring. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven, inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihat pada Lampiran 1. 3.4.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih.

13

3.4.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat 3.4.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas saring dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 3.4.1.3.2. Sterilisasi dengan Benomil Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam benomil selama 1 jam, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji. 3.4.1.4. Pengkondisian, Pemotongan Embrio dan Pengujian Pengkondisian, pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Sterilkan benih A. mangium dengan benomil (lihat 3.4.1.3.2.).

(2)

Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan gunting kuku.

(3)

Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam dengan suhu perendaman 25 °C.

(4)

Ganti air perendam 2 x sehari guna mencegah terakumulasinya eksudat yang dikeluarkan oleh benih.

(5)

Belah benih dan keluarkan embrionya dengan menggunakan silet. Ketika membelah, kondisi plumula dan radikel harus utuh (tidak boleh ikut terbelah atau cacat). Untuk menjamin kondisi aseptik selama kegiatan pemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminar flow atau di tempat yang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaan steril.

(6)

Letakkan embrio pada cawan petri yang berisi media berupa 2 lembar kertas saring lembab.

(7)

Masukkan cawan petri tersebut ke dalam inkubator atau ruang kamar pada suhu konstan (20 - 25 °C) selama 5 hari dengan periode pencahayaan minimal 8 jam per hari.

(8)

Amati setiap hari kondisi embrio dan buang embrio yang busuk dan berjamur. Apabila media mulai kering, semprotkan aquades secukupnya.

(9)

Kondisi radikel dan plumula yang diperoleh pada akhir pengamatan, dicocokkan dengan kunci interpretasi.

3.4.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benih A. mangium dapat dilihat pada Tabel 2, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabel hasil uji eksisi embrio dapat dilihat pada Gambar 5.

14

Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70% dan kertas merang. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, semprotan tangan, lup, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran 1. Tabel 2. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih A. mangium

3.5. UJI BELAH 3.5.1. Standardisasi Prosedur 3.5.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70% dan kertas merang. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, semprotan tangan, lup, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran 1. 3.5.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 3.5.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas merang dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 3.5.1.4. Pengkondisian, Pembelahan dan Pengujian Benih Pengkondisian, pembelahan dan pengujian benih dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Lubangi ujung kulit benih (berlawanan dengan arah radikel) dengan gunting kuku.

(2)

Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam dalam gelas piala.

(3)

Kupas kulit benih dan belah benih searah keping (memanjang) dengan menggunakan silet. Radikel, plumula dan kotiledon harus terbagi dua.

15

(4)

Amati warna dan penampakan radikel, plumula dan kotiledon dengan mata telanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapat ditentukan benih tersebut viabel atau non viabel, sesuai dengan kunci interpretasi.

3.5.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji belah untuk benih A. mangium dapat dilihat pada Tabel 3, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji belah dapat dilihat pada Gambar 6.

Tabel 3. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih A. mangium

16

17

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) H a s i l U j i Te t ra z o l i u m u n t u k Benih A. mangium

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih A. mangium

Gambar 3.

Gambar 5.

Gambar 6.

Gambar 4.

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih A. mangium

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih A. mangium

IV. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Gmelina arborea 4.1. UMUM G. arborea yang dikenal dengan jati putih, termasuk ke dalam famili Verbenaceae. Jenis ini merupakan salah satu jenis komersil yang banyak ditanam dalam program pembangunan HTI meskipun jenis ini termasuk jenis pohon asing (exotic). Untuk mengetahui viabilitas benih G. arborea secara konvensional dengan mengecambahkannya di persemaian pada media campuran tanah dan pasir (1 : 1) memerlukan waktu lebih kurang 30 hari. Buah G. arborea termasuk buah basah, panjangnya sekitar 20 - 35 mm dan mengkilap, pericarp keras dan beraroma manis, mempunyai mesocarp yang lunak (pulpy) dan endocarp keras dengan panjang sekitar 10 - 25 mm. Biji umumnya terdiri dari empat ruang embrio (poliembrio), terkadang lima embrio. Benih G. arborea memiliki struktur tumbuh yang terdiri dari extreme tip of radicle, embryonic axis dan kotiledon. Bagian-bagian benih tersebut akan menjadi fokus pengamatan pada uji cepat viabilitas. Struktur tumbuh benih G. arborea dapat dilihat pada Gambar 7.

Gambar 7. Sketsa Struktur Benih G. arborea

4.2. UJI TETRAZOLIUM TOPOGRAFIS 4.2.1. Standardisasi Prosedur 4.2.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5-triphenil betrazolium chlorida), Na2HPO4.2H2O, KH2PO4, etanol 70%, natrium hipoklorit, kertas merang, lembaran plastik dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, ragum, martil, pinset, silet, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangan dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazolium dapat dilihat pada Lampiran 1.

19

4.2.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 4.2.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat 4.2.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, pinset, silet, alat pengaduk, saringan, kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan cara menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 4.2.1.3.2. Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit Benih-benih yang telah dikeluarkan dari endocarp-nya, disterilkan dengan cara merendamnya dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1: 5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap diuji. 4.2.1.4. Pembuatan Larutan Tetrazolium Cara pembuatan larutan tetrazolium disajikan pada Lampiran 3. 4.2.1.5. Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Pengkondisian, perendaman dalam larutan tetrazolium dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Keluarkan benih G. arborea dari endocarpnya dengan menggunakan ragum dan martil secara hati-hati. Kondisi benih jangan sampai cacat atau rusak, karena akan mempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk.

(2)

Ambil salah satu benih dalam satu endocarp untuk mewakili satu biji G. arborea.

(3)

Sterilkan benih-benih tersebut dengan natrium hipoklorit (lihat 4.2.1.3.2).

(4)

Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang lembab selama 24 jam. Kertas merang lembab yang berisi benih tersebut dimasukkan ke dalam plastik atau cawan petri untuk mencegah penguapan.

(5)

Kupas kulit benih dan belah benih menjadi keping benih dengan menggunakan silet. Pengupasan dan pembelahan benih harus dilakukan secara hati-hati, jangan sampai terjadi cacat. Pada saat membelah, kondisi extreme tip of radicle, embryonic axis dan kotiledon harus terbagi dua.

(6)

Rendam salah satu keping benih dalam larutan tetrazolium 0,5% yang ditempatkan dalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnya dengan aluminium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).

20

(7)


(8)

Tempatkan benih dalam saringan, lalu bilas benih dengan aquades selama 30 - 60 detik.

(9)

Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas merang lembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada extreme tip of radicle, embryonic axis dan kotiledon.

(10)


4.2.2. Kunci Interpretasi Viabilitas benih G. arborea yang diuji dapat diketahui dengan melihat persentase pola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunci interpretasi pada Tabel 4 dan Gambar 8, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 9. 4.3. UJI HIDROGEN PEROKSIDA 4.3.1. Standardisasi Prosedur 4.3.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, larutan hidrogen peroksida, natrium hipoklorit, etanol 70%, kertas merang dan aluminium foil. alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, ragum, martil, pinset, penggaris, oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada lampiran 1. 4.3.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 4.3.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat 4.3.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, pinset, alat pengaduk, kertas merang dan aluminium

21

foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 4.3.1.3.2. Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit Benih-benih yang akan diuji dan telah dikeluarkan dari endocarp-nya, disterilkan dengan cara merendamnya dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran) Tabel 4. Kunci Interpretasi Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih G. arborea

Gambar 8. Skeksa Pola Penawaran Hasil Uji Tetrazolium pada Benih G. arborea

22

1:5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji. 4.3.1.4. Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida Cara pembuatan larutan hidrogen peroksida disajikan pada Lampiran 4. 4.3.1.5. Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Pengkondisian, perendaman dalam larutan hidrogen peroksida dan pengujian diakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Keluarkan benih dari endocarp-nya dengan menggunakan ragum dan martil secara hati-hati. Kondisi benih jangan sampai retak atau cacat, karena benih akan cepat terkontaminasi oleh jamur.

(2)


(3)

Sterilkan benih-benih tersebut dengan natrium hipoklorit (lihat 4.3.1.3.2.).

(4)

Rendam benih tersebut dalam larutan H2O2 2% (volume larutan H2O2 = 3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminium foil.

(5)


(6)

Ganti larutan H2O2 dengan larutan H2O2 yang baru pada hari ke-1 dan ke-3.

(7)


(8)

Ukur panjang radikel yang muncul dengan penggaris, kemudian hasil pengukuran dicocokkan dengan kunci interpretasi.

4.3.2. Kunci Interpretasi kunci interpretasi untuk benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida didasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatan. Benih viabel memiliki panjang radikel > 2 mm dan atau kotiledon terbuka, sedangkan benih non viabel memiliki panjang radikel < 2 mm atau tidak terjadi pemunculan radikel. Contoh benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Gambar 10. 4.4. UJI EKSISI EMBRIO 4.4.1. Standardisasi Prosedur 4.4.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70%,

23

kertas saring, kertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, ragum, martil, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven, inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihat pada Lampiran 1. 4.4.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 4.4.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat 4.4.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, pinset, silet, kertas saring dan kertas merang dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 4.4.1.3.2. Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit Benih-benih yang akan diuji dan telah dikeluarkan dari endocarp-nya, disterilkan dengan cara merendamnya dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1 : 5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji. 4.4.1.4. Pengkondisian, Pemotongan Embrio dan Pengujian Pengkondisian, pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut: (1)

Keluarkan benih G. arborea dari endocarp-nya dengan menggunakan ragum dan martil secara hati-hati. Kondisi benih jangan sampai retak, cacat atau rusak, karena benih akan mudah terkontaminasi oleh jamur.

(2)


(3)

Sterilkan benih-benih tersebut dengan natrium hipoklorit (lihat 4.4.1.3.2).

(4)

Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang lembab selama 24 jam. Kertas merang lembab yang berisi benih tersebut dimasukkan ke dalam plastik atau cawan petri agar benih tidak kering/mencegah penguapan.

(5)

Kupas kulit benih dengan silet dan untuk memisahkan extreme tip of radicle dan embryonic axis dari kotiledonnya, potong bagian kotiledon yang berada di sekitar embryonic axis dengan menggunakan silet membentuk potongan segitiga. Pengupasan kulit benih dan pemotongan extreme tip of radicle dan embryonic axis harus dilakukan secara hati-

24

hati, kondisi extreme tip of radicle dan embryonic axis harus utuh (tidak boleh terpotong atau cacat). Untuk menjamin kondisi aseptik selama kegiatan pemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminar flow di tempat yang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaan steril. (6)

Letakkan extreme tip of radicle dan embryonic axis yang telah dipisahkan tersebut pada cawan petri yang berisi media berupa 2 lembar kertas saring lembab.

(7)


(8)

Amati setiap hari kondisi extreme tip of radicle dan embryonic axis dan buang bila busuk dan berjamur. Apabila media mulai kering, semprotkan aquades secukupnya.

(9)

Kondisi embryonic axis dan extreme tip of radicle yang diperoleh pada akhir pengamatan, dicocokkan dengan kunci interpretasi.

4.4.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benih G. arborea dapat pada Tabel 5, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabel hasil uji embrio dapat dilihat pada Gambar 11. 5. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih G. arborea

4.5.UJI BELAH 4.5.1. Standardisasi Prosedur 4.5.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70%, natrium hipoklorit, kertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, ragum, martil, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran 1. 4.5.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian

25

Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 4.5.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat 4.5.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, pinset, silet dan kertas merang dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 4.5.1.3.2. Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit Benih-benih yang akan diuji dan telah dikeluarkan dari endocarpnya, disterilkan dengan cara merendamnya dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1 : 5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji. 4.5.1.4. Pengkondisian, Pembelahan dan Pengujian Benin Pengkondisian, pembelahan dan pengujian benih dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Keluarkan benih G. arborea dari endocarp-nya dengan menggunakan ragum dan martil secara hati-hati. Kondisi benih jangan sampai retak, cacat atau rusak, karena benih akan mudah terkontaminasi oleh jamur.

(2)


(3)

Sterilkan benih-benih tersebut dengan natrium hipoklorit (lihat 4.5.1.3.2.).

(4)

Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang lembab selama 24 jam. Kertas merang lembab yang berisi benih tersebut dimasukkan ke dalam plastik atau cawan petri agar benih tidak kering/mencegah penguapan.

(5)

Kupas kulit benih dan belah benih searah keping (memanjang) dengan menggunakan silet. Extreme tip of radicle, embryonic axis dan kotiledon harus terbagi dua.

(6)

Amati warna dan penampakan extreme tip of radicle, embryonic axis dan kotiledon dengan mata telanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapat ditentukan benih tersebut viabel atau non viabel sesuai dengan kunci interpretasi.

4.5.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji belah untuk benih G. arborea dapat dilihat pada Tabel 6, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji belah dapat dilihat pada Gambar 12.

26

6. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih G. arborea

27

28 Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) H a s i l U j i Te t ra z o l i u m u n t u k Benih A. arborea

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih A. arborea

Gambar 9.

Gambar 11.

Gambar 12. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih A. arborea

Gambar 10. Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih A. arborea

V. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Paraserianthes falcataria 5.1. UMUM P. falcataria yang dikenal dengan nama sengon laut, termasuk ke dalam famili Leguminosae. Uji viabilitas benih P. falcataria secara konvensional yang dilakukan dengan metode uji di atas kertas (UDK) memerlukan waktu lebih kurang 14 hari. Seperti benih-benih yang tergolong ke dalam famiii Leguminosae lainnya, benih P. falcataria juga memiliki 3 bagian dasar benih yaitu embrio, jaringan penyimpan cadangan makanan dan pelindung biji. Pengamatan terhadap benih yang akan diuji dengan menggunakan metode uji cepat viabilitas difokuskan pada struktur tumbuh benihnya berupa radikel, plumula dan kotiledon (Gambar 13).

Gambar 13. Sketsa Struktur Benih P. Falcataria 5.2. UJI TETRAZOLIUM TOPOGRAFIS 5.2.1. Standardisasi Prosedur 5.2.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5– triphenil tetrazolium chlorida), Na2HPO4.2H2O, KH2PO4, etanol 70%, kertas merang, lembaran plastik dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangan dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazolium dapat dilihat pada Lampiran 1. 5.2.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian

29

Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 5.2.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, saringan, kertas merang dan alumunium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 OC selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 5.2.1.4. Pembuatan Larutan Tetrazolium Cara pembuatan larutan tetrazolium disajikan pada Lampiran 3. 5.2.1.5. Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Uji tetrazolium pada benih P. falcataria dapat dilakukan dengan dua cara, yaitu 1) menggunakan keping benih yang direndam dalam larutan tetrazolium 0,5% selama 2 jam, atau 2) menggunakan benih utuh yang direndam dalam larutan tetrazolium 1% selama 3 jam. 5.2.1.5.1. Menggunakan Keping Benih Pengkondisian, perendaman dalam larutan tetrazolium dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan gunting kuku. Pada saat melubangi kulit benih, jangan sampai terkena kotiledon, karena akan mempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk.

(2)


(3)

Kupas kulit benih dan belah benih menjadi keping benih dengan menggunakan silet. Pengupasan dan pembelahan benih harus dilakukan secara hati-hati, jangan sampai terjadi cacat. Pada saat membelah, kondisi radikel, plumula dan kotiledon harus terbagi dua.

(4)

Rendam salah satu keping benih dalam larutan tetrazolium 0,5% yang ditempatkan dalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnya dengan aluminium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).

(5)


(6)


(7)

Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas merang lembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada radikel plumula dan kotiledon.

30

(8)

Amati intensitas dan Was pewarnaan yang terbentuk. Intensitas pewarnaan dibagi menjadi warna merah (M), merah muda (Mm) dan putih (P), sedangkan penghitungan luas pewarnaan (%) dilakukan dengan membandingkan masing-masing warna yang terbentuk terhadap luas keseluruhan permukaan bagian dalam keping benih. Pola pewarnaan yang terbentuk dicocokkan dengan kunci interpretasi.

5.2.1.5.2. Menggunakan Benih Utuh Pengkondisian, perendaman dalam larutan tetrazolium dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan gunting kuku. Pada saat melubangi kulit benih, jangan sampai terkena kotiledon, karena akan mempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk.

(2)


(3)

Kupas kulit benih dengan menggunakan silet. Pengupasan kulit benih harus dilakukan secara hati-hati, jangan sampai terjadi cacat.

(4)

Rendam benih tersebut dalam larutan tetrazolium 1% yang ditempatkan dalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnya dengan aluminium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).

(5)


(6)


(7)

Belah benih tersebut menjadi keping benih dengan menggunakan silet. Pada saat membelah, kondisi radikel, plumula dan kotiledon harus terbagi dua.

(8)

Ambil salah satu keping benih dan tempatkan pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas merang lembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada radikel, plumula dan kotiledon.

(9)


5.2.2. Kunci Interpretasi Viabilitas benih P. falcataria yang diuji dapat diketahui dengan melihat persentase pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunci interpretasi Pada Tabel 7 dan Gambar 14, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 15.

31

Tabel 7. Kunci Interpretasi Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih P. falcataria

Gambar 14. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih P. falcataria

32

5.3. UJI HIDROGEN PEROKSIDA 5.3. 1. Standardisasi Prosedur 5.3. 1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, larutan hidrogen peroksida, natrium hipoklorit, etanol 70%, kertas merang dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, penggaris, oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji hidrogen peroksida dapat dilihat Lampiran 1. 5.3.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 5.3.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat 5.3.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, alat pengaduk, kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 5.3. 1.3.2. Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1 : 5) selama 15 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji. 5.3.1.4. Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida Cara pembuatan larutan hidrogen peroksida disajikan pada Lampiran 4. 5.3.1.5. Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Pengkondisian, perendaman dalam larutan hidrogen peroksida dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Sterilkan benih P. falcataria dengan natrium hipoklorit (lihat 5.3.1.3.2.).

(2)

Potong ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan gunting kuku.

(3)

Rendam benih tersebut dalam larutan H2O2 0,5% (volume larutan H2O2 = 3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminium foil.

(4)


33

(5)

Ganti larutan H2O2 dengan larutan H2O2 yang baru pada hari ke-1 dan ke-4.

(6)


(7)


5.3.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi untuk benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida didasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatan Benih viabel memiliki panjang radikel > 1 mm, sedangkan benih non viabel memiliki panjang radikel < 1 mm atau tidak terjadi pemunculan radikel. Contoh benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Gambar 16. 5.4. UJI EKSISI EMBRIO 5.4.1. Standardisasi Prosedur 5.4.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70% dan kertas saring. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, lup, semprotan tangan, oven, inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihat pada Lampiran 1. 5.4.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (B-FP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 5.4.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat 5.4.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas saring dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 5.4.1.3.2. Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1: 5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji.

34

5.4.1.4. Pengkondisian, Pemotongan Embrio dan Pengujian Pengkondisian, pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Sterilkan benih P. falcataria dengan natrium hipoklorit (lihat 5.4.1.3.2.).

(2)

Lubangi ujung kulit benih (berlawanan arah dengan radikel) dengan gunting kuku.

(3)

Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam dengan suhu perendaman 25 °C.

(4)

Ganti air perendam 2 x sehari guna mencegah terakumulasinya eksudat yang dikeluarkan oleh benih.

(5)

Belah benih dan keluarkan embrionya dengan menggunakan silet. Ketika membelah, kondisi plumula dan radikel harus utuh (tidak boleh ikut terbelah atau cacat). Untuk menjamin kondisi aseptik selama kegiatan pemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminar flow atau di tempat yang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaan steril.

(6)

Letakkan embrio pada cawan petri yang berisi media berupa 2 lembar kertas saring lembab.

(7)


(8)


(9)

Kondisi radikel dan plumula yang diperoleh pada akhir pengamatan, dicocokkan dengan kunci interpretasi.

5.4.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benih P. falcataria dapat pada Tabel 8, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabel hasil uji embrio dapat dilihat pada Gambar 17.

Tabel 8. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih P. falcataria

35

5.6. UJI BELAH 5.5.1. Standardisasi Prosedur 5.5.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70% dan kertas merang Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran 1. 5.5.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 5.5.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas merang dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan cara menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 5.5.1.4. Pengkondisian, Pembelahan dan Pengujian Benih Pengkondisian, pembelahan dan pengujian benih dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Lubangi ujung kulit benih (berlawanan dengan arah radikel) dengan gunting kuku.

(2)

Rendam benih tersebut dalam aquades selama 24 jam dalam gelas piala

(3)

Kupas kulit benih dan belah benih searah keping (memanjang) dengan menggunakan silet. Radikel, plumula dan kotiledon harus terbagi dua.

(4)

Amati warna dan penampakan radikel, plumula dan kotiledon dengan mata telanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapat ditentukan benih tersebut viabel atau non viabel, sesuai dengan kunci interpretasi.

5.5.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji belah untuk benih P. falcataria dapat dilihat pada Tabel 9, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji belah dapat dilihat pada Gambar 18.

36

Tabel 9. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih P. falcataria

37

38 Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) H a s i l U j i Te t ra z o l i u m u n t u k Benih P. falcataria

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih P. falcataria

Gambar 15.

Gambar 17.

Gambar 18.

Gambar 16.

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih P. falcataria

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih P. falcataria

VI. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Pinus merkusii 6.1. UMUM P. merkusii yang dikenal dengan nama tusam, termasuk ke dalam famili Pinaceae. Uji viabilitas secara konvensional dengan mengecambahkan benih P. merkusii melalui metode uji di atas kertas (UDK) memerlukan waktu lebih kurang 24 hari. Fokus pengamatan pada uji cepat viabilitas benih P. merkusii dilakukan terhadap embrio dan endosperma (Gambar 19).

Gambar 19. Sketsa Struktur Benih P.merkusii 6.2. UJI TETRAZOLIUM TOPOGRAFIS 6.2.1. Standardisasi Prosedur 6.2.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5– triphenil tetrazolium chlorida), Na2HPO4.2H2O, KH2PO4, etanol 70%, kertas merang, lembaran plastik dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangan dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazolium dapat dilihat pada Lampiran 1. 6.2.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BT-P, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih.

39

6.2.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, saringan, kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 OC selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 6.2.1.4. Pembuatan Larutan Tetrazolium Cara pembuatan larutan tetrazolium disajikan pada Lampiran 3. 6.2.1.5. Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Pengkondisian, perendaman dalam larutan tetrazolium dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Kupas kulit benih P. merkusii dengan cara menggunting ujung kulit benih dengan gunting kuku atau pinset. Pengupasan kulit benih dilakukan secara hati-hati, jangan sampai endosperma cacat atau rusak.

(2)

Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang basah selama 24 jam. Tebarkan benih pada kertas merang basah, kemudian kertas digulung dan dimasukkan ke dalam plastik agar benih tidak kering.

(3)

Kupas kulit ari yang melekat pada benih dengan pinset. Selama kegiatan pengupasan kulit ari tersebut, benih harus selalu dalam keadaan lembab.

(4)

Rendam benih tersebut dalam larutan tetrazolium 0,5% yang ditempatkan dalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnya dengan aluminium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).

(5)


(6)


(7)

Belah benih tersebut dengan menggunakan silet. Pada saat membelah, kondisi embrio (radikel dan kotiledon) dan endosperma harus terbagi dua.

(8)

Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas merang lembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada embrio (radikel dan kotiledon) dan enclosperma.

(9)


6.2.2. Kunci Interpretasi Viabilitas benih P. merkusii yang diuji dapat diketahui dengan melihat persentase pola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunci interpretasi pada Tabel 10 dan Gambar 20, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 21.

40

6.3. UJI HIDROGEN PEROKSIDA 6.3.1. Standardisasi Prosedur 6.3.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, larutan hidrogen peroksida, Tabel 10. Kunci Interpretasi Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih P.merkusii

Gambar 20. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih P. merkusii

41

natrium hipoklorit, etanol 70%, kertas merang dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, penggaris, oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazolium dapat dilihat pada Lampiran 1. 6.3.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 6.3.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat 6.3.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, alat pengaduk, kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 6.3.1.3.2. Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1 : 5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji. 6.3.1.4. Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida Cara pembuatan larutan hidrogen peroksida disajikan pada Lampiran 4. 6.3.1.5. Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Pengkondisian, perendaman dalam larutan hidrogen peroksida dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Sterilkan benih P. merkusii dengan natrium hipoklorit (lihat 6.3.1.3.2.).

(2)

Potong ujung kulit benih P. merkusii dengan gunting kuku.

(3)

Rendam benih tersebut dalam larutan H2O2 1% (volume larutan H2O2= 3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminium foil.

4)


(5)

Ganti larutan H2O2 dengan larutan H2O2 yang baru pada hari ke-1, ke-3 dan ke-4.

(6)


(7)


42

6.3.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji hidrogen peroksida didasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatan. Benih viabel memiliki panjang radikel > 1 mm, sedangkan benih non viabel memiliki panjang radikel < 1 mm atau tidak terjadi pemunculan radikel. Contoh benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Gambar 22. 6.4.

UJI EKSISI EMBRIO

6.4.1. Standardisasi Prosedur 6.4.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70%, kertas saring, kertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, alat pengaduk, lup, semprotan tangan, oven, inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihat pada Lampiran 1. 6.4.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 6.4.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat 6.4.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, kertas saring dan kertas merang dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 6.4.1.3.2. Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1: 5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji. 6.4.1.4. Pengkondisian, Pemotongan Embrio dan Pengujian Pengkondisian, pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Sterilkan benih P. merkusii dengan natrium hipoklorit (lihat 6.4.1.3.2.).

(2)

Kupas kulit benih dengan pinset atau gunting kuku.

(3)

Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang basah selama

43

24 jam. Tebarkan benih pada kertas merang basah, kemudian kertas digulung dan dimasukkan ke dalam plastik agar benih tidak kering. (4)

Kupas kulit ari yang melekat pada benih dengan pinset. Selama kegiatan pengupasan kulit ari tersebut, benih harus selalu dalam keadaan lembab.

(5)

Belah sedikit bagian endosperma dengan menggunakan silet dan keluarkan embrionya secara hati-hati. Ketika membelah, kondisi embrio harus utuh (tidak boleh ikut terbelah atau cacat). Untuk menjamin kondisi aseptik selama kegiatan pemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminar flow atau di tempat yang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaan steril.

(6)

Letakkan embrio pada cawan petri yang berisi media 3 lembar kertas saring lembab.

(7)


(8)


(9)

Kondisi embrio (radikel dan kotiledon) yang diperoleh pada akhir pengamatan, dicocokkan dengan kunci interpretasi.

6.4.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benih P. merkusii dapat dilihat pada Tabel 11, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabel hasil uji eksisi embrio dapat dilihat pada Gambar 23. Tabel 11. Kunci Interpretasi Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih P. merkusii

6.5. UJI BELAH 6.5.1. Standardisasi Prosedur 6.5.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70%, natrium hipoklork kertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet, lup, semprotan tangan, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran 1.

44

6.5.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 6.5.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat Cawan petri, gelas piala, gunting kuku, pinset, silet dan kertas merang dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan cara menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 6.5.1.4. Pengkondisian, Pembelahan dan Pengujian Benih Pengkondisian, pembelahan dan pengujian benih dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Sterilkan benih P. merkusii dengan natrium hipokiorit (lihat 6.5.1.3.2.).

(2)

Kupas kulit benih dengan pinset atau gunting kuku.

(3)

Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang basah selama 24 jam. Kertas merang basah yang berisi benih tersebut dimasukkan ke dalam plastik atau cawan petri agar benih tidak kering/mencegah penguapan.

(4)

Kupas kulit ari benih dengan pinset dan belah benih dengan menggunakan silet. Embrio dan endosperma harus terbagi dua.

(5)

Amati warna dan penampakan embrio dan endosperma dengan mata telanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapat ditentukan benih tersebut viabel atau non viabel, sesuai dengan kunci interpretasi.

6.5.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji belah untuk benih P. merkusii dapat dilihat pada Tabel 12, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji belah dapat dilihat pada Gambar 24.

45

Tabel 12. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih P. merkusii

46

47

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) H a s i l U j i Te t ra z o l i u m u n t u k Benih P. merkusii

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih P. merkusii

Gambar 21.

Gambar 23.

Gambar 24.

Gambar 22.

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih P. merkusii

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih P. merkusii

VII. UJI CEPAT VIABILITAS JENIS Swietenia macrophylla 7.1. UMUM S. macrophylla yang dikenal dengan nama mahoni daun besar, termasuk ke dalam famili Meliaceae. Uji viabilitas benih S. macrophylla secara konvensional yang dilakukan di persemaian pada media pasir tanah (1 : 1) memerlukan waktu lebih kurang 30 - 40 hari. Fokus pengamatan pada uji cepat viabilitas benih S. macrophylla dilakukan terhadap struktur tumbuh benihnya yang terdiri dari mikrofil (titik tumbuh) dan kotiledon (Gambar 25).

Gambar 25. Sketsa Struktur Benih S. macrophylla 7.2. UJI TETRAZOLIUM TOPOGRAFIS 7.2.1. Standardisasi Prosedur 7.2.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, garam tetrazolium (2,3,5triphenil tetrazolium chlorida), Na2HPO4.2H2O, KH2PO4, etanol 70%, kertas merang, lembaran plastik dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, pinset, silet atau pisau tajam, oven, alat pengaduk, saringan, semprotan tangan, timbangan dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji tetrazolium dapat dilihat pada Lampiran 1.

49

7.2.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 7.2.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat Cawan petri, gelas piala, pinset, silet atau pisau tajam, alat pengaduk, saringan, kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 7.2.1.4. Pembuatan Larutan Tetrazolium Cara pembuatan larutan tetrazolium disajikan pada Lampiran 3. 7.2.1.5. Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Pengkondisian, perendaman dalam larutan tetrazolium dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Kupas kulit benih secara hati-hati dengan menggunakan silet. Pada saat mengupas kulit benih, silet tidak boleh mengenai benih, karena akan mempengaruhi pola pewarnaan yang terbentuk.

(2)

Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang basah selama 24 jam. Kertas merang basah yang berisi benih tersebut dimasukkan ke dalam plastik untuk mencegah penguapan.

(3)

Belah benih menjadi 2 bagian melalui titik tumbuhnya dengan silet atau pisau tajam. Pada saat membelah benih, usahakan tidak sampai terputus.

(4)

Rendam benih dalam larutan tetrazolium 0,5% yang ditempatkan dalam gelas piala yang telah ditutup dan dilapisi seluruhnya dengan aluminium foil (volume larutan tetrazolium = 3 x volume benih).

(5)


(6)


(7)

Tempatkan benih pada cawan petri yang berisi 2 lembar kertas merang lembab untuk dianalisis pola pewarnaan yang terbentuk pada titik tumbuh dan kotiledon.

(8)


50

7.2.2. Kunci Interpretasi Viabilitas benih S. macrophylla yang diuji dapat diketahui dengan melihat persentase pola pewarnaan yang terbentuk dan mencocokkannya dengan kunci interpretasi pada Tabel 13 dan Gambar 26, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji tetrazolium dapat dilihat pada Gambar 27. Tabel 13. Kunci Interpretasi Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih S. macrophylla

Gambar 26. Sketsa Pola Pewarnaan Hasil Uji Tetrazolium pada Benih S. macrophylla

51

7.3. UJI HIDROGEN PEROKSIDA 7.3.1. Standardisasi Prosedur 7.3.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, larutan hidrogen peroksida, natrium hipoklorit, etanol 70%, kertas merang dan aluminium foil. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, pinset, silet, penggaris, oven, alat pengaduk, inkubator dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Lampiran 1. 7.3.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 7.3.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat 7.3.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, pinset, silet, alat pengaduk, kertas merang dan aluminium foil dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 7.3.1.3.2. Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1: 5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji. 7.3.1.4. Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida Cara pembuatan larutan hidrogen peroksida disajikan pada Lampiran 4. 7.3.1.5. Pengkondisian, Perendaman dan Pengujian Pengkondisian, perendaman dalam larutan hidrogen peroksida dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Kupas kulit benih secara hati-hati dengan menggunakan silet. Pada saat mengupas kulit benih, silet tidak boleh mengenai benih.

(2)

Sterilkan benih tersebut dengan natrium hipoklorit (lihat 7.3.1.3.2.).

(3)

Rendam benih tersebut dalam larutan H2O2 1% (volume larutan H2O2 = 3 x volume benih) dalam gelas piala yang ditutup dengan aluminium foil.

52

(4)


(5)

Ganti larutan H2O2 dengan larutan H2O2 yang baru pada hari ke-1 dan ke4.

(6)


(7)


7.3.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi untuk benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida didasarkan pada panjang radikel yang muncul pada akhir periode pengamatan. Benih viabel memiliki panjang radikel >1 mm, sedangkan benih non viabel memiiiki panjang radikel < 1 mm atau tidak terjadi pemunculan radikel. Contoh benih viabel dan non viabel hasil uji hidrogen peroksida dapat dilihat pada Gambar 28. 7.4. UJI EKSISI EMBRIO 7.4.1. Standardisasi Prosedur 7.4.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, natrium hipoklorit, etanol 70%, kertas saring, kertas merang dan lembaran plastik. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, gelas piala, pinset, sifet, lup, semprotan tangan, oven, inkubator, laminar flow dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji eksisi embrio dapat dilihat pada Lampiran 1. 7.4.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 7.4.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat 7.4.1.3.1. Sterilisasi dengan Oven/Etanol Cawan petri, gelas piala, pinset, silet, kertas saring dan kertas merang dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan.

53

7.4.1.3.2. Sterilisasi dengan Larutan Natrium Hipoklorit Benih yang akan diuji disterilkan dengan cara merendamnya di dalam larutan natrium hipoklorit (pengenceran 1: 5) selama 5 menit, kemudian dibilas dengan aquades dan benih siap untuk diuji. 7.4.1.4. Pengkondisian, Pemotongan Embrio dan Pengujian Pegkondisian, pemotongan embrio dan pengujian dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Sterilkan benih yang akan diuji dengan natrium hipoklorit (lihat 7.4.1.3.2.).

(2)


(3)

Lembabkan benih tersebut pada 6 lembar kertas merang basah selama 24 jam. Kertas merang basah yang berisi benih tersebut dimasukkan ke dalam plastik untuk mencegah penguapan.

(4)

Potong bagian di sekeliling titik tumbuh dengan menggunakan silet sehingga membentuk potongan segitiga. Kondisi titik tumbuh harus utuh (tidak boleh cacat atau terpotong). Untuk menjamin kondisi aseptik selama kegiatan pemotongan, lakukan kegiatan di dalam laminar flow atau di tempat yang steril. Peralatan yang digunakan harus selalu dalam keadaan steril.

(5)

Letakkan embrio (titik tumbuh) pada cawan petri yang berisi media 2 lembar kertas saring lembab.

(6)


(7)


(8)

Kondisi embrio (titik tumbuh) yang diperoleh pada akhir pengamatan, dicocokkan dengan kunci interpretasi.

7.4.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji eksisi embrio untuk embrio benih S.macrophylla dapat dilihat pada Tabel 14, sedangkan contoh embrio viabel dan non viabel hasil uji eksisi embrio dapat dilihat pada Gambar 29.

54

Tabel 14. Kunci Interpretasi S. macrophylla

Hasil

Uji

Eksisi

Embrio

untuk

Benih

7.5. UJI BELAH 7.5.1. Standardisasi Prosedur 7.5.1.1. Bahan dan Alat Bahan-bahan yang digunakan adalah aquades, etanol 70% dan kertas merang. Alat-alat yang digunakan adalah cawan petri, silet atau pisau tajam, lup, semprotan tangan, oven dan alat pembagi benih. Gambar bahan dan alat yang digunakan untuk uji belah dapat dilihat pada Lampiran 1. 7.5.1.2. Pengambilan Contoh Benih Pengambilan contoh benih dimaksudkan agar mutu benih yang diperoleh benarbenar mewakili kelompok benih (seed lot) yang hendak diuji. Prosedur pengambilan contoh dilakukan berdasarkan Pedoman Standarisasi Pengujian Mutu Fisik dan Fisiologis Benih Tanaman Hutan (BTP, 2000), yang selengkapnya disajikan pada Lampiran 2. Jumlah benih yang diperlukan untuk pengujian ini adalah 4 x 100 butir benih. 7.5.1.3. Sterilisasi Bahan dan Alat Cawan petri, pinset, silet atau pisau tajam dan kertas merang dipanaskan dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam. Sterilisasi dapat juga dilakukan dengan menyemprotkan etanol 70% secara merata ke seluruh bagian alat tersebut dengan menggunakan semprotan tangan. 7.5.1.4. Pengkondisian, Pembelahan dan Pengujian Benih Pengkondisian, pembelahan dan pengujian benih dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)


(2)

Belah benih menjadi 2 bagian melalui titik tumbuhnya dengan silet atau pisau tajam.

(3)

Amati warna dan penampakan titik tumbuh dan kotiledon dengan mata telanjang atau menggunakan kaca pembesar (lup), sehingga dapat ditentukan benih tersebut hidup atau mati, sesuai dengan kunci interpretasi.

55

7.5.2. Kunci Interpretasi Kunci interpretasi hasil uji belah untuk benih S. macrophylla dapat dilihat pada Tabel 15, sedangkan contoh benih viabel dan non viabel hasil uji belah dapat dilihat pada Gambar 30. Tabel 15. Kunci Interpretasi Hasil Uji Belah untuk Benih S. macrophylla

56

57

Gambar 29.

Gambar 27.

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Eksisi Embrio untuk Benih s. macrophylla

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Tetrazolium untuk Benih s. macrophylla

Gambar 30.

Gambar 28.

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Belah untuk Benih s. macrophylla

Benih Viabel (a) dan Non Viabel (b) Hasil Uji Hidrogen Peroksida untuk Benih s. macrophylla

DAFTAR PUSTAKA Bhodthipuks, J., P. Pukkitayacame, B. P. S. Wang, S. Saelim and S. L. Yu. 1994. Rapid Viability Testing of Tropical Tree Seed. Training Course Proceeding No. 4. ASEAN Forest Tree Seed Centre Project. Thailand. Bonner, F. T, J. A. Vozzo, W. W. Elam and S. B. Land Jr. 1994. Tree Seed Technology Training Course: Instructor's Manual. United State Departemen of Agriculture, Forest Service, Southern Forest Experiment Station. New Orleans. Byrd, H. W. 1988. Pedoman Teknologi Benih (Terjemahan). State College. Mississipi. Gordon, A. G. 1992. Seed Testing in Seed Manual for Forest Trees. Forestry Commision. London. ISTA. 1985. Seed Science and Technology. International Seed Testing Association. Zurich, Switzerland. _________. 1991. Buku Pegangan Benih Pohon dan Belukar, Terjemahan dari Tree and Shrub Seed Hand Book. Indonesia Forest Seed Project, Directorate of Forest Seed Ministry of Forestry and Estate Crops, Danish International Development Assiatance. Indonesia - Denmark. Laloup, M. 1955. Seed Testing. FAO of United Nation. Rome. Leadem, C. L. 1984. Quick Test for Tree Seed Viability. Management Report No. 18 ISSN. 0702 - 9861. B. C. Ministry Forest Land Research Branch. Manan, S. 1976. Silvikultur. Proyek Pengembangan Peningkatan Mutu Perguruan Tinggi IPB. Bogor. Mugnisjah, W. Q. dan A. setiawan. 1990. Pengantar Produksi benih. Rajawali Press. Jakarta. Sadjad, S. 1980. Panduan Pembinaan Mutu Benih tanaman Hutan. Kerjasama Proyek Pusat Perbenihan Kehutanan Direktorat Reboisasi dan Rehabilitasi Direktorat Jenderal Kehutanan dengan Lembaga Afiliasi Institut Pertanian Bogor. Bogor. ________. 1993. Dari Benih Kepada Benih. PT Gramedia Widiasarana Indonesia. Jakarta. Sutopo, L. 1993. Teknologi Benih. CV Rajawali Pers. Jakarta. Willan, R. L. 1985. A Guide to Forest Seed Handling. DANIDA Forest Seed Centre Hunlebaek Denmark- FAO. Zanzibar, M. 1996. Aplikasi Uji Cepat Viabilitas pada benih Tanaman Hutan. Prosiding Ekpose Program dan Hasil-Hasil Penelitian Perbenihan Kehutanan. Balai Teknologi Perbenihan, Badan Penelitian dan Pengembangan Departemen Kehutanan. Bogor.

59

Lampiran 1. Bahan dan Alat yang Digunakan untuk Uji Cepat Viabilitas Benih (a). Uji Tetrazolium, (b). Uji Hidrogen Peroksida, (c). Uji Eksisi Embrio dan (e). Uji Belah

(a)

(b)

(c)

(d)

61

Lampiran 2. Prosedur Pengambilan Contoh Benih Untuk Pengujian (BTP, 2000)

1.

Contoh kirim dan komposit dihamparkan, kemudian dibagi menjadi 4 bagian, yaitu 1, 2, 3 dan 4.

2.

Bagian 1 dan 3 dicampur, kemudian dihamparkan dan selanjutnya dibagi menjadi 4 bagian yaitu 5, 6, 7 dan 8.

3.

Langkah 2 selanjutnya hingga diperoleh contoh kerja sesuai dengan ketentuan.

62

Lampiran 3. Cara Pembuatan Larutan Tetrazolium Pembuatan larutan tetrazolium dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Larutan I

: Larutkan 9,078 gram KH2PO, dalam aquades 1000 ml

(2)

Larutan II

: Larutkan 11,876 gram Na2HP04.2H20 dalam aquades 1000 ml

(3)

Larutan Penyangga

: Campurkan 400 ml Larutan I dengan 600 ml Larutan II (2 : 3)

(4)

Larutan Tetrazolium 1%

: Masukkan 10 gram garam tetrazolium (2,3,5 triphenil tetrazolium chlorida) ke dalam 1000 ml Larutan Penyangga

(5)

Larutan Tetrazolium 0,5% : Masukkan 5 gram garam tetrazolium (2,3,5 triphenil tetrazolium chlorida) ke dalam 1000 ml Larutan Penyangga

(6)

Larutan Tetrazolium harus dihindarkan dari cahaya langsung, yaitu dengan cara menempatkan larutan tersebut ke dalam gelas piala yang telah dilapisi aluminium foil. Pencampuran benih dengan larutan tersebut dilakukan dalam kamar gelap. Selain itu, apabila tidak digunakan, larutan tersebut disimpan dalam lemari es.

63

Lampiran 4. Cara Pembuatan Larutan Hidrogen Peroksida Larutan H2O2 yang dijual di pasaran umumnya memiliki konsentrasi yang masih tinggi, yaitu 35%, sedangkan yang digunakan untuk uji H2O2 ini berkisar antara 0,5 - 2%. Oleh karena itu larutan H2O2 35% harus diencerkan terlebih dahulu. Rumus yang digunakan untuk reaksi pengenceran adalah sebagai berikut : C1xV1=CZxVZ dimana :

CI = konsentrasi larutan asli C, = konsentrasi larutan yang diinginkan V, = volume larutan asli yang diperlukan untuk memperoleh larutan yang diinginkan V, = volume larutan yang diinginkan

Pembuatan larutan hidrogen peroksida dilakukan dengan cara sebagai berikut : (1)

Larutan H2O2 0,5% : Campurkan 14,29 ml larutan H2O2 35% ke dalam 985,71 ml aquades sehingga diperoleh 1000 ml larutan H2O2 0,5%.

(2)

Larutan H2O2 1%

: Campurkan 28,57 ml larutan H2O2 35% ke dalam 971,43 ml aquades sehingga diperoleh 1000 ml larutan H2O2 1%.

(3)

Larutan H2O2 2%

: Campurkan 57,14 ml larutan H2O2 35% ke dalam 942,86 ml aquades sehingga diperoleh 1000 ml larutan H2O2 2%.

64

Lampiran 5. Glosari Benih (botanis)

:

Biji tumbuhan yang digunakan manusia untuk tujuan pertanaman.

Benih (perundang- : undangan

Semua bahan tanaman baik yang dihasilkan secara generatif maupun vegetatif.

Benih ortodoks

:

Watak/sifat dapat disimpan lama (tidak cepat menurun viabilitasnya) pada kondisi kadar air benih yang rendah (4 8 %) dalam penyimpanan.

Benih rekalsitran

:

Watak/sifat benih benih cepat menurun viabilitasnya dan memerlukan kadar air yang tinggi (20 - 50 %) dalam penyimpanannya yang mendekati atau sama dengan kadar air benih segar.

Contoh benih

:

Sejumlah benih, baik dalam ukuran volume atau berat yang ditarik dari masing-masing lot benih dengan cara acak, untuk kepentingan pengujian benih.

Contoh kerja

:

Sebagian contoh kiriman yang akan diuji

Contoh kiriman

:

Sebagian atau seluruh contoh komposit yang dikirim ke laboratorium pengujian.

Contoh komposit

:

Campuran semua contoh primer yang diambil dari lot benih.

Contoh primer

:

Sejumlah benih yang diambil dari satu titik di dalam lot benih.

Dormansi

:

Proses beristirahatnya suatu tanaman, bagian tanaman atau jaringan yang dalam kondisi petumbuhan yang op timum tidak menunjukan pertumbuhan sewajarnya.

Embrio

:

Satu tanaman baru yang terjadi dan bersatunya gamet jantan dan gamet betina pada proses pembuahan.

Garam tetrazolium :

Merupakan suatu senyawa kimia dengan rumus 2,3,5 triphenyl tetrazolium clorida atau bromida yang digunakan sebagai pewarna untuk menbedakan sel hidup dengan sel mati pada uji tetrazoliurn,

Germinator

:

Alat pengecambah yang memenuhi syarat optimum dalam faktor tumbuh, yaitu kelembaban udara, suhu dan cahaya yang optimum.

Hidrogen peroksida (HzOz)

:

Suatu larutan yang tidak stabil dan tidak berwarna, larutan ini dapat larut dalam air dan alkohol serta mudah didekomposisikan dalam air dan oksigen bila disimpan pada suhu yang terlalu tinggi/rendah atau di bawah cahaya langsung.

65

Kecambah normal

:

Kecambah benih yang tumbuh normal sesuai ketentuan baku dalam pengujian viabilitas benih, untuk mensimulasikan pertumbuhan normal tanaman di lapangan.

Kotiledon

:

Bagian dari struktur tumbuh benih yang berfungsi sebagai jaringan cadangan makanan.

Lot

:

Sejumlah benih yang akan diuji mutunya.

Plumula

:

Bagian dari struktur tumbuh benih yang akan membentuk organ batang.

Radikel

:

Bagian dari struktur tumbuh benih yang akan membentuk organ akar.

Ragum

:

Uji daya berkecambah benih, di mana contoh kerja diletakan di antara substrat kertas yang telah dilembabkan.

Sterilisasi

:

Kegiatan pembebasan/pembersihan suatu objek (alat, bahan atau media) dari organisme yang tidak diinginkan, seperti fungi, bakteri, virus atau yang lainnya.

UAK

:

(uji antar kertas)

Uji daya berkecambah benih, di mana contoh kerja diletakan di antara substrat kertas yang telah dilembabkan.

UDK : (uji di atas kertas)

Uji daya berkecambah benih, di mana contoh kerja diletakan di atas substrat kertas yang telah dilembabkan.

Uji belah (cutting test)

:

Merupakan salah satu uji cepat viabilitas benih dengan cara melihat langsung penampakan struktur tumbuhnya yang menunjukan kondisi yang baik (hidup).

Uji cepat viabilitas

:

Metode pengujian viabilitas benih yang didasarkan pada proses metabolisme benih yang merupakan indikasi tak langsung.

Uji eksisi embrio

:

Merupakan salah satu uji cepat viabilitas benih yang dilakukan dengan mengamati perilaku embrio dalam kondisi jaringan setelah pemotongan dan inkubasi selanjutnya, di mana embrio yang viabel akan memperlihatkan warna hijau, tumbuh atau tetap segar sementa ra embrio yang non viabel akan rusak.

Uji hidrogen peroksida

:

Merupakan salah satu uji cepat viabilitas benih dengan memanfaatkan sifat larutan hidrogen peroksida yang dapat merangsang perkecambahan benih dan dapat digunakan untuk mempercepat perkecambahan.

66

Uji tetrazolium

:

Merupakan salah satu uji cepat viabilitas benih secara biokimia yang didasarkan kepada pewarnaan yang dihasilkan setiap sel hidup dengan garam tetrazolium yang membentuk endapan formazan merah sedangkan sel-sel yang mati menunjukan warna putih

Viabel

:

Hidup

Viabilitas benih

:

Kemampuan benih untuk hidup, yang ditunjukan oleh gejala pertumbuhan atau gejala metabolismenya dan dapat pula ditunjukkan oleh keadaan organel sitoplasma atau kromosom.

Viablitas potensial

:

Viabilitas benih yang menunjukkan kemampuan benih tumbuh normal dalam kondisi optimim menghasilkan tanaman normal yang berproduksi normal.

Viabilitas total

:

Mencerminkan daya hidup benih yang hanya ditunjukkan oleh sekedar gejala hidup benih melalui metabolisme benih, misalnya kemampuan benih mengambil oksigen pada saat tertentu.

Vigor benih

:

Viabilitas benih yang menunjukkan kemampuan benih

67

KEMENTERIAN KEHUTANAN BADAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KEHUTANAN BALAI PENELITIAN TEKNOLOGI PERBENIHAN TANAMAN HUTAN

Recommend Documents