INSTITUUTVOOR BIOLOGISCHENSCHEIKUNDIG ONDERZOEK VAN LANDBOUWGEWASSEN
Wageningen
Verslagennr.37,1965
VOORSCHRIFTVOOR HETONDERZOEKVANLIPIDENIN RUWVOEDER EN INFAECESVANRUNDEREN
dr.W.B.DeljsenH.J. Immink
-1-
I. Devoorbewerking v a nhetteonderzoeken materiaal Het materiaal Indien nodig drogen In e e nvacuiïmdroogstoof boven sillcagel b i j60°C. Daarna m a l e n door e e nkruisslagmolen. In,_het aldus gedroogde e ngemalen produkt hetgehalte a a ndroge stof bepalen door o droging b i j 1 0 5Ctotconstant gewicht. Jill. Debepaling v a nh e ttotale gehalte aanhogere vetzuren 2 gram v a nhetluchtdroge gemalen materiaal gedurende 5m i n .a a n een-'"opstijgende koeler koken m e t4-0mlaethanol (waarin 0,4 %amylalcohol! Daarna 10ml33 %KOHtoevoegenenverzepen {één uurkokenaaneenopstijgende koeler). Naafkoelingaanzurenmet 17mlHCl (25 %)enuitschudden met 50mlpetroleumaether (4o-6ö C). Eengedeeltevandepetroleumaetherlaag (30â4-0ml)ineenwaterbad afdampen.HetresiduopnemenIn4-0ml geneutrali'seerdeaethanolentitrerenmetbutylalcoholische KOH(ca. 0,1 n ) .Indicator: thymolblauw.Voornaderebijzonderheden: ZieJaarboek I.B.S.1965,.IO3-IO7.
III. Schema voordebepalingvanverschillende fractiesvanhetruwevet a)Hogerevetzuren (totaal) b)Ruwvet (extractiemet CCl^,.naontsluitingmet HCl)
koudeaceton
-^ oplosbaar:
i
c)was-enfosfatlde-vrljellpiden
onoplosbaar: (b-c)wassen+fosfatlden
verzepen
! extractiemet petr.aether
^ oplosbaar inpetr.aether: onverzeepbare llpiden
aanzuren
i
extractiemet petr.aether: d)glycerlde-vetzuren
bromeren
K)
e) J - g e t a l v . d . glycerlde-vetzuren f)gem.aeq.gew.v.d.glycerlde-vetzuren
titreren
g) me glycerlde-vetzuren per kg ds h) meI
per me glycerlde-vetzuren
k) meF ~ (van glycerlden) per kg ds
x) Deglycerldenvangrassenenanderebladerenbestaan voornamelijk uit galactosyl-glyceriden. Weenink,R.0. :Acetone solublelipidsofgrassesand otherforage plants,J.Scl.Pood Agric.12 (1961)34-38. Shorland,P.B.: J.Scl.Pood Agrlc. XZ (I96D 39-^3.
- 3
IV. De bepaling van de l l p i d e - f r a c t i e s 1. Ruw vet Uitgaanvantenminste 5gluchtdroge stof.Bijdeanalysevanhooi ofrundermestvan10gluchtdroge stof.Debepalingwordtverricht volgens NEN3148vanhetNederlands Normalisatie-instituut.NaontsluitingdoorkokenmetHCl (3n)wordthetruwevetuitgeschud in100 mltetrachloorkoolstof.Zoveelmogelijkvandegefiltreerde oplossing inCCli,(b.v.80ml)afdampenineenwaterbad.Hetresidudrogenin vacuümbijkamertemp.totconstantgewicht. HetkokenmetHCl (3n ) , hetafkoelenenhetafdampenvanCCI4 geschiedenonderstikstof. .,,, 2.Deverwijderingvanwassenenfosfatiden Hetgedroogdeen'gewogenruwevet (zieIV-1)oplossenin50ml aceton (kokenaanopstijgendekoeler onderstikstof).Deoplossingwordt één uurgeplaatst ineendiepvriesruimte.Daarnadeafgescheidenwassen enfosfatidenaffiltrerendooreenfiltreerpapiertje.Hetfiltraatopvangen ineengewogenkolfjemetkooksteentje.Hetneerslag H-maal uitwassenmet intotaal 35m l koudeaceton (uitdiepvriesruimte).Onder stikstofdeacetonafdampen,hetresidudrogeninvacuümbijkamertemp. tot constantgewicht. 3.Deverwijderingvande onverzeepbare lipiden DesubIV-2geïsoleerde Lipidenonder stikstofverzepen (1uur kokenmet kOmlaethanolwaarin0,4 %amylalcohol)en10mï.K0H (33$). Afkoelenonderstikstofenuitschuddenmetpetroleumaether (4-0-6o°C), eerstmet 50ml,vervolgensmet telkens25mltotdatdepetr.aetherlaagslechtsweiniggeelgekleurd is.Deextracten inpetr.aether wordennietverderonderzocht. Denogalkalischewater-laagaanzurenmet17ml HCl (25# ) . Na afkoelengedurende 2minutenschuddenmet50ml petr.aether (4o-60°C) ineencyllndrischescheitrechtermetgoed sluitende stop.Vande petr.aether-laagzoveelmogelijk (b.v.10ml)onderstikstofafdampen ineengewogenkolfjemetkooksteentje.Hetresidudrogeninvacuüm bijkamertemp.tot constantgewicht.
4.Debepalingvanhet jodiumgetal vandegl.yceride-vetzuren De subIV-3geïsoleerde,drogevetzuren (bijvoorkeur 50-120_mg) wordengebromeerd.Hetkolfjemetdegoed overdewand verdeeldevetzurenwordt omgekeerd geplaatst opeenopenflesjemet eenweinig broom ineengeslotenexsiccator.Deduur.vanhetbromerenbedraagt liuur.Vervolgenswordteerstbijkamertemp.endaarna ineeabekerglas metwat.ervanSo Cdeovermaatbroomverwijderd met een luchtstroom (lucht doorzuigen). Nadrogenfaljkamertemp. invacuümde gebromeerde vetzurenwegen. (Enigszins gewijzigd,voorschrift vanM.Atmoreen F.Hawke,Joernaal vandieSuid Afrikaanse Chemiese Instituut,III-2 (1950)23-28.) 5.Hetgemiddelde aequivalentgewicht vande glyceride-vetzuren Degebromeerde vetzuren (zieIV-4)oplossen in40mlgeneutraliseerdeacthanol. (Kokenaaneenterugvloeikoker.)Deoplossingnog' warmtitrerenmetbutylalcohollscheKOH (ca.0,1 n). Indicator: thymoUblauw.. N.B.Wegingengeschieden'tot0,1 mgnauwkeurig.Titratiesmeteen micro-büret. V.Berekeningen AdII. Uitgegaanvan2gluchtdroge stof.Afgedampt:pmlvande50ml oplossing inpetr.aether,Getitreerd met-qml0,1nloog. Milliaequivalenten hogerevetzuren (toUaal)in1'kgluchtdrogestof: .p 2 z =blanco titratie : J 1,04=correctie-factor (zie Gorter endeGrSaff,Klinische diagnostiek, 7 e druk,deel II, Leiden1956,741-742.) Berekenhetgehalte inme in1kgds. (a) Ad IV-1 Uitgegaanvanu gram luchtdroge stof.Vande100mloplossingin CCl^wordenrmldrooggedampti Gewichtvanhetresidu:Smg.' • • • - - • • 100 1 . Ruw vet: xSx %indeluchtdrogestof. r 10u Berekenhetgehalte aanruwvetin $ vandeds.
(b)
Ad IV-2 Gevonden: t mg was- en fosfatide-vrije llpiden. 1°0 1 Gehalte: xtx %Indeluchtdroge stof. r 10u Berekenhetgehaltein%van deds b-c=gehalteaanwassenenfosfatlden in %van deds.
(c)
AdIV-3 Vande50mloplossingvanhetverzepingsproduktderwas-enfosfatidevrije lipidenwordt Q^mlafgedampt.Nadrogingishetgewichtvanhet residuvmg. 50 100 1 ve vx UH-x x r j x "" — Gehalte vJx..1.0^ x % glyceride-vetzuren in de luchtdroi <Xv 10 u stof. Berekenhetgehaltein#van deds. (d) Ad IV-4 Devmg,subIV-3geïsoleerde glyceride-vetzuren adderen /J mgbroom. Het jodiumgetalvan deglyceride-vetzurenisdan:e=158,8x fQ_ . v Ad IV-5 Benodigd voordetitratievandegebromeerdevmgglyceride-vetzuren (zie IV-4): wml 0,1 n loog. v Gem. aeq. gew. van de glyceride vetzuren: f = . wx0,1 Verdere berekeningen: 1.m.aequlvalenten glyceride-vetzurenperkgds: 10.000d g=
f
2.m.aequlvalenten dubbelebindingenper m.aequivalentglyceride-vetzuur:
h=rrr100 * 126,9' 3.m.aequlvalentendubbelebindingen (vanglyceriden)perkgds: k=gxh.
Wageningen,31december1965
