informační magazín číslo

informační magazín číslo 3 - 2006

ANALYZÁTORY BUNĚK A ČÁSTIC AKTIVINY A INHIBINY V KLINICKÉM VÝZKUMU I PRAXI SOUPRAVY PSA FREE IRMA A PSA TOTAL IRMA NAKALIBROVÁNY NA MEZINÁRODNÍ STANDARD

V roce 1953 zakládají bratři Wallace a Joseph Coulterovi rodinnou, brzy velmi úspěšnou, společnost Coulter Electronics pro výrobu a distribuci čítačů částic.

Odkaz zakladatelů společnosti Úvodník minulého čísla našeho časopisu byl věnován Dr. Arnoldu Beckmanovi. Stejnou pozornost bychom chtěli věnovat i zakladatelům Coulter Corporation, druhé společnosti, z níž vznikla současná korporace Beckman Coulter, bratrům Wallaceovi a Josephu Coulterovým.

Wallace Henry a Joseph Richard se narodili v rodině Josepha Coultera staršího, který byl výpravčím a drážním telegrafistou. V mládí se bratři Joseph a Wallace Coulterovi (na snímku zleva doprava) vyznačovali oduševnělým výrazem. Wallace Henry Coulter (1913 – 1998) byl těmi, kdo ho znali, popisován jako mimořádně všestranný člověk, inženýr, vynálezce a vizionář i úspěšný podnikatel, a také jako génius a podivín vybavený velkou dávkou pokory a soucitu. Wallace H. Coulter prožil velmi bohatý život plný zvratů. S mimořádným zaujetím se celý život věnoval možnostem využití fyzikálních principů ve vědeckém výzkumu. Tento zájem ho přivedl k vynálezu Coulterova principuTM, referenční metodě pro stanovení počtu a velikosti částic suspendovaných v kapalině. Vedle toho ho velmi zajímala různorodost kultur národů, které poznal během svých mnoha dlouhodobých, během 2. světové války i nedobrovolných, pobytů v různých koutech světa (pobýval v Manile, Hong Kongu, Macau, Cantonu, Šanghaji, Singapuru, do USA se vracel přes Afriku a Jižní Ameriku). Čínská kultura a umění ho doslova fascinovaly a byly impulsem pro založení jeho pověstné sbírky uměleckých předmětů z jadeitu. Převratný objev volumetrické impedance - a vynález spočívající ve využití měření elektrického odporu ke stanovení počtu a velikosti mikroskopických částic - se zrodil v r. 1948 v domácí laboratoři, když hledal postup pro zjišťování velikosti částic a napadlo ho použít vzorek vlastní krve.

2


Pokusy o přihlášení patentu byly zprvu neúspěšné, když několik právníků považovalo za nemožné patentovat „otvor“, vyhrála však Wallaceova houževnatost a v 1953 mu byl patent konečně přiznán. V témže roce zakládají bratři Wallace a Joseph Coulterovi rodinnou, brzy velmi úspěšnou, společnost Coulter Electronics pro výrobu a distribuci čítačů částic. Podíl druhého z bratrů Josepha (1924 – 1995) na úspěchu firmy byl zcela rovnocenný; byl presidentem firmy, autorem a spoluautorem prvních patentů a spolutvůrcem celkové filosofie společnosti a jejího poslání „věda sloužící humanitě“. Ucelené pojetí firmy (výzkum, vývoj, výroba, prodej a servis přístrojů spolu s nabídkou reagencií a kontrolních materiálů a odborným zaškolením) bylo doslova novátorské a nemělo nikde obdoby. Spektrum přístrojů se kromě hematologických analyzátorů rozšířilo o průtokové cytometry a analyzátory částic pro řadu odvětví od plynárenského, přes kosmetický až po potravinářský průmysl. Využití Coulterova principu se tak, aniž si to uvědomujeme, dotýká mnoha stránek našeho každodenního života. Joseph Coulter jako nadaný technolog a organizátor se zasloužil o praktické aplikace, o tvorbu projektů jednotlivých výrobních řad a v pozdějších letech se zaměřil na výzkum a léčbu nádorových onemocnění a AIDS. Wallace Coulter zůstal přes veškeré úspěchy a mimořádné zásluhy i nadále sám sebou, soustředěně se věnoval svému oboru a výsledek byl mimořádný: celkem mu bylo uděleno 82 patentů, mnoho z nich za vynálezy z pozdějších let. Byl nositelem řady ocenění a vyznamenání (nejvýznamnější John Scott Award for Scientific Achievement – udělované od roku 1816 geniálním mužům a ženám za vynálezy, které měly revoluční význam pro lidstvo), získal čestný doktorát a byl významným členem vědeckých společností. Posmrtně byl uveden do Národní síně slávy vynálezců (National Inventor´s Hall of Fame). BĚLA ŘÍČAŘOVÁ E-MAIL: [email protected]

Obsah Analyzátory buněk a částic

4

V roce 1953 Wallace Coulter (1913-1998), zakladatel a bývalý prezident společnosti COULTER Corporation, patentoval tzv. Coulterův impedanční princip, metodu pro stanovení počtu a velikosti částic v kapalině.

Nové rotory

6

Pro stolní ultracentrifugy a vysokovýkonné centrifugy Beckman Coulter

Aktiviny a inhibiny v klinickém výzkumu i praxi

7

Inhibiny spolu s opačně působícími aktiviny jsou glykoproteiny, které se řadí do rodiny transformujícího růstového faktoru α (TGF α) Oba typy molekul ovlivňují prostřednictvím zpětné vazby hypofyzární produkci FSH.

Imunochemie – stanovení BNP

9

Reagencie umožňující stanovení natriuretického peptidu typu B – BNP na imunochemických analyzátorech Beckman Coulter: Access, Access 2 a UniCel DxI 800

Časopis vydává a distribuuje IMMUNOTECH a.s., Radiová 1, 102 27 Praha 10

Časopis připravují Mgr. Jiří Moos, CSc. Mgr. Patrik Šaf RNDr. Helena Kurzweilová, RNDr. Běla Říčařová, CSc Ing. Petr Suchan Mgr. Markéta Krupařová Ing. Roman Šandrik, PhD Monika Lahodová

BIOSITE Triage BNP na Beckman Coulter UniCel DxI 800

9

Natriuretický peptid typu B patří mezi hormony regulující krevní tlak. Jeho zvýšená tvorba provází městnavé srdeční selhání (srdce nedodává dostatečné množství krve), hypertrofii stěny levé komory srdeční, systolickou a/nebo diastolickou dysfunkci LK, ischemickou chorobu srdeční (zejména její akutní formy), přetížení krevního oběhu aj.

Soupravy PSA free IRMA a PSA total IRMA

12

nakalibrovány na mezinárodní standard

Do časopisu přispěli RNDr. Běla Říčařová, CSc Mgr. Pavel Kružík Mgr. Jiří Moos, CSc. RNDr. Helena Kurzweilová Ing. Petr Matějka RNDr. Zdeněk Veškrna, OKB Nemocnice Znojmo Mgr. Patrik Šaf Dr. Mária Gavelová, CSc. Ing. Tichomír Torda, CSc. Mgr. Markéta Krupařová Ing. Petr Suchan – titulní foto

Grafická podoba Nina Nováková

Tiskárna REPRO servis s. r. o. Starochuchelská 15/195, 159 00 Praha 5

Boli sme pri tom

14

Dňa 21. apríla 2006 prvé súkromné laboratórium na Slovensku ADL s.r.o. so sídlom v Prešove si pripomínalo 10.výročie svojho vzniku.

Prenatálna diagnostika

15

Dňa 30. marca 2006 sa v Žiline uskutočnil pracovný deň na tému Prenatálna diagnostika

Prezentácia firmy na podujatí

15

V. Martinské dni imunológie, ktoré sa konali: 29. marca – 1. apríla 2006 v Kine Strojár, Vajanského námestie 2 v Martine.

Kde se můžeme setkat (červen - září 2006)

16

Konference/seminář s účastí společnosti Immunotech, a.s. formou stánku

Náklad čísla 1000 výtisků


3

Analyzátory buněk a částic V roce 1953 Wallace Coulter (1913-1998), zakladatel a bývalý prezident společnosti COULTER Corporation, patentoval tzv. Coulterův impedanční princip, metodu pro stanovení počtu a velikosti částic v kapalině. ato technologie navždy změnila klinickou diagnostiku a lékařský výzkum a stala se základem hematologických analyzátorů. Coulterův princip je v současnosti nejrozšířenější metodou pro stanovení počtu a velikosti částic v kapalině v lékařských a průmyslových aplikacích. Po patentování principu zahájil Wallace společně se svým bratrem Josephem výrobu prvních přístrojů Coulter Counter pro počítání částic a buněk. Po úspěšném startu v roce 1958 bratři Coulterové společně založili společnost Coulter Electronics, Inc. v Miami na Floridě.

COULTER princip Metoda COULTER počítá a stanoví velikosti buňky zjištěním a změřením změn elektrického odporu, když částice (např. buňka) ve vodivé kapalině prochází malou aperturou. Každá buňka suspendovaná ve vodivé kapalině (ředícím roztoku) funguje jako izolátor. Průchod každé jednotlivé buňky aperturou zvyšuje v daném okamžiku elektrický odpor mezi dvěma ponořenými elektrodami, umístěnými na obou stranách apertury. To vyvolá elektrický impuls, který lze načítat a měřit jeho velikost. Zatímco počet impulsů indikuje počet částic, velikost elektrického impulsu je úměrná buněčnému objemu. Společnost Beckman Coulter nabízí ucelenou řadu analyzátorů pro měření fyzikálních vlastností částic. Součástí této koncepce jsou také analyzátory počtu a velikosti částic nebo buněk COULTER Z1, Z2 a Multisizer. Tyto přístroje nachází široké uplatnění v biologických laboratořích, potravinářství a pivovarnictví, výrobě kosmetiky a dalších průmyslových oborech např. ve výrobě cementu, tonerů, atd. Analyzátory série Z jsou plně automatizované přístroje s jednoduchou kalibrací, které jsou ovládány pomocí klávesnice s LCD displejem. Jsou obzvlášť vhodné jako náhrada pracných a nepřesných postupů manuálního počítání buněk pod mikroskopem. Vyznačují se jednoduchou obsluhou a zanedbatelnými provozními náklady. Přístroje měří buňky a/nebo částice o velikosti 1 až 120 µm. Analyzátory serie Z pracují samostatně bez PC pracovní stanice, u typu Z2 je možno použít připojení k PC a vyhodnocovat data pomocí externího software. COULTER Z2 je nejnovější v řadě analyzátorů Z. Je určen pro měření velikosti buněk včetně zobrazení distribuční křivky velikosti. Volitelně je možno pro zobrazení a vyhodnocování dat použít připojení k PC pracovní stanici se software AccuComp. V biologických laboratořích přístroj umožňuje analyzovat buněčné linie, řasy, krevní buňky, plankton, spermie, kvasinky …

4


COULTER Multisizer je nejflexibilnější analyzátor částic ve své třídě a je určen pro stanovení velikosti a počtu částic o velikosti 0,4 až 1200 µm. Kromě biologických laboratoří přístroj nachází uplatnění ve farmaceutickém průmyslu, ve výrobě polymerů, barviv a tonerů a v potravinářství. Přístroj je ovládán pomocí specializovaného software, který umožňuje ukládání dat a jejich off-line analýzu a práci s grafy.

Vi-Cell XR - analyzátor životnosti a velikosti buněk Analyzátor Vi-Cell pracuje na principu analýzy obrazu a kromě velikosti, distribuce velikosti, počtu a koncentrace buněk automaticky stanovuje i životnost buněk pomocí barvení trypanovou modří. Trypanová modř barví cytoplazmu, ale neprochází skrze intaktní buněčnou membránu - barví se tedy pouze mrtvé buňky. Tato metoda je používána při monitorování buněčných linií v kultuře, pro kontrolu přežití po rozmražení nebo např. v buněčné toxikologii.

Průtokové cytometry CELL LAB QUANTA a CELL LAB QUANTA SC

Obraz buněčné populace je snímán CCD kamerou v ploché průtočné cele a vyhodnocen pomocí obrazové analýzy ve stupních šedi. Výsledkem měření je stanovení koncentrace buněk, koncentrace a procentuální zastoupení živých buněk, distribuce velikosti buněk v populaci, vyhodnocení cirkularity buněk a analýza shluků buněk – clusterů. Vi Cell XR umí vyhodnotit buňky velikosti od 2 µm do 70 µm, tj. od velikosti kvasinek až po shluky několika set buněk. Výsledky analýzy tělísek o velikosti až několika set buněk byly velmi konzistentní a byly pro nás milým překvapením. Vi Cell XR analyzuje suspenze buněk v rozmezí koncentrací 5×104 to 1×107 /mL. V tomto rozmezí je korelace koncentrace naměřené a koncentrace skutečné velmi dobrá a závislost je lineární. Pro analýzu dynamiky populace je v software obsažena možnost „bioprocess“, umožňující sledovat dynamiku populace. Přístroj je vybaven autosamplerem na 12 pozic. Na jednu analýzu spotřebuje pouze 0,5 ml vzorku, analýza je plně automatická („walk away“) a trvá méně než 3 minuty včetně „úklidu“ a přípravy přístroje pro další analýzu. Přístroj nevyžaduje žádnou denní údržbu, celková údržba je minimální. Pokročilá zobrazovací technologie je vybavena automatickým zaostřováním, CCD kamerou o rozlišení 1394 x 1040 a dodatečným zoomem k rozlišení detailů jednotlivých buněk a jejich shluků. Systém je vybaven uživatelsky příjemným a intuitivním software, který umožňuje kvantitativní zpracování dat, statistické vyhodnocení, 3D grafy či sledování trendů. Data mohou být exportována jako soubor v MS Excel. Software vyhovuje požadavkům 21 CFR Part 11.

Průtokový cytometr QUANTA je určen především pro výzkumné aplikace. Kombinuje měření objemu buněk Coulterovou metodou a fluorescencí na dvou fotonásobičích s použitím více zdrojů světla. Na měření objemu nemá vliv tvar, barva a optické vlastnosti částic. Volitelně je možno použít argonový laser (488 nm) nebo rtuťovou výbojku (excitace při 366, 405 a 435 nm). Analyzátor je vhodný pro měření absolutních počtů buněk a stanovení buněčného cyklu, apoptózy, životnosti buněk, měření povrchových a intracelulárních znaků apod. Pro přístroj jsou k dispozici kompletní postupy pro značení buněk, nastavení přístroje, měření a hodnocení. Pro měření různých typů buněk (např. kvasinek nebo bakterií) lze použít tři volitelné průtokové kyvety 125, 70 a 25 µm.) Analyzátor CELL LAB QUANTA SC je navíc vybaven detektorem pro pravoúhlý rozptyl světla (Side Scatter) a třemi detektory pro fluorescence. Snadno vyměnitelné optické filtry umožňují použít široké spektrum fluorochromů jako např. DAPI, Hoechst, FITC, PE, propidium jodid, 7-AAD, LDS751, PC5 a PC7 a fluorescenční proteiny CFP, GFP a YFP. Proliferaci buněk je možné měřit pomocí 5-(6-) karboxyfluorescein diacetát sukcinimidyl esteru (CFSE). K měření buněčného cyklu je možné využít kombinace stanovení exprese cyklinu A2-FITC a obsahu buněčné DNA pomocí 7-AAD po permeabilizaci ledovým metanolem. Měření pravoúhlého rozptylu světla je ideální při měření heterogenních populací buněk a pro jejich odlišení podle granularity. V analyzátorech QUANTA je použita patentovaná trojúhelníková průtoková komora, která zajišťuje hydrodynamickou fokusaci a stabilní osvětlení procházejících buněk. Při použití průtokové komory o velikosti 125 µm lze analyzovat částice o velikosti 3 - 40 µm. Stanovení koncentrace buněk ve vzorku je zajištěno pomocí přesného mechanizmu aspirace do průtokové komory bez použití referenčních částic. K ovládání přístroje a k analýze naměřených dat je určen specializovaný software, který umožňuje nastavení kompenzací překryvů emisních spekter fluorochromů. Data jsou ukládána ve formátu FCS 2.0 a v pracovních skupinách je lze dále analyzovat v cytometrickém software (CxP Analysis, EXPO32 a další) na dalších počítačích. Tyto přístroje společnosti Beckman Coulter jsou důležitou součástí širokého spektra výrobků pro výzkum v oblasti Life Science, které zahrnuje centrifugaci a ultracentrifugaci, sekvenování a fragmentační DNA analýzu, analýzu genové exprese a SNP analýzy, proteomiku, průtokovou cytometrii, laboratorní automatizaci, kapilární elektroforézu, HPLC, analyzátory částic, scintilační měření, spektrofotometry, fluorimetry a luminometry. PEVEL KRUŽÍK, E-MAIL: [email protected] JIŘÍ MOOS, E-MAIL: [email protected] ROMAN VLČEK, E-MAIL: [email protected]


5

Nové monoklonální protilátky pro průtokovou cytometrii CD85d (ILT4)-PE obj.číslo A22334, 100 testů Molekula CD85d je exprimována na monocytech, makrofázích a dendritických buňkách. CD136 (RON)-PE obj.číslo A22363, 100 testů Antigen CD136 je exprimován na keratinocytech, makrofázích, erytroblastech a plicních epiteliálních buňkách. Anti-Cyclin A2-FITC Obj. číslo A22327, 100 testů Tato monoklonální protilátka je určena pro studium exprese cyklinu A2 v průběhu buněčného cyklu, zvláště pak v průběhu S fáze, ve které dochází ke zvýšení exprese, a s vrcholem v G2 fázi.Takto lze odlišit buňky v mitotické fázi (cyklin A2 negativní) od buněk v G2 fázi (cyklin A2 pozitivní). Cyklin A2 je znakem proliferujících buněk. Stanovení exprese cyklinu A2 je vhodné kombinovat se značením obsahu buněčné DNA pomocí 7-AAD (obj. číslo A07704). K permeabilizaci buněčné membrány lze použít ledový metanol nebo reagencii IntraPrep (obj. číslo A07803). CDw125 –PE, Anti-IL-5Rα Obj. číslo A31894, 100 testů Tato nová monoklonální protilátka detekuje α řetězec receptoru pro IL-5 (IL5Rα) Ten spolu s β řetězcem (CD131) tvoří vysokoafinitní receptor pro IL5. β řetězec je společný pro receptory pro IL5, IL3 a GM-CSF. IL-5Rα je exprimován na bazofilech a eozinofilech a jejich prekurzorech. Neutrofily, monocyty a lymfocyty tuto molekulu neexprimují.

ZAP-70 Zvýšená exprese proteinu ZAP-70 v lymfocytech B u pacientů s B-chronickou lymfatickou leukemií je prognosticky nepříznivým faktorem. Pro průtokovou cytometrii jsou dodávány dva klony s výběrem z několika fluorochromů. klon 1367F12 AlexaFluor647 0,5 ml obj. č. A24071 klon SBZAP FITC 0,1 mg obj. č. 731895 FITC 0,025 mg obj. č. 731896 PE 0,1 mg obj. č. 731901 PE 0,025 mg obj. č. 731902 biotin 0,1 mg obj. č. 731899 biotin 0,025 mg obj. č. 731900

Nové rotory pro stolní ultracentrifugy a vysokovýkonné centrifugy Beckman Coulter MLA-55 – rozšíření možností stolních ultracentrifug Stolní ultracentrifugy Optima MAX a Optima TLX jsou prostorově i finančně úspornou alternativou k sálovým ultracentrifugám. Parametr, který musíte obětovat jejich úspornosti není rychlost (Optima MAX dosahuje přetížení až 1 019 000 g), ale kapacita rotoru. Rotory stolních ultracentrifug mají typicky kapacitu v rozmezí 10 až 60 ml, rotor MLA-55 tuto hranici posunuje výrazně dále – rotor má kapacitu 108 ml (8 pozic po 13.5 ml) a je určen pro ultracentrifugy Optima MAX. Max RPM 55 000, MAX g 287 000, K faktor 53 Objem zkumavel 8 x 13.5 mL, Objem rotoru 108 mL AllSpin JS-5.3 – rotor „Nomen Omen“ pro vysokovýkonné centrifugy Nový výkyvný rotor pro centrifugy Avanti J26XP a Avanti J-E, který najde uplatnění v každé laboratoři. Zde je několik příkladů aplikací: Buněčná analýza: kapacita až 2L (4 x 500 mL) Adaptery pro kónické zkumavky (15 - 500 mL) pro separaci buněk, buněčných membrán, tkáňových homogenátů, krevních buněk … Analýza DNA/RNA: kapacita až 24 mikrotitračních destiček (4 x 6) Vhodné pro všechny aplikace na 96-jamkových destičkách, např. izolace a purifikace DNA, čištění produktu po PCR a sekvenčních reakcích … Proteinová analýza: Kapacita na 72 (4 x 18) 15 mL a 28 (4 x 7) 50 mL kónických zkumavek. Vhodné pro čištění proteinových lyzátů, precipitaci či filtraci proteinů. Max RPM 5 300, MAX g 6 870, Objem rotoru 2 L JIŘÍ MOOS E-MAIL: [email protected]

Současně jsou v nabídce soupravy vyrobené v rámci CUSTOM DESIGN SERVICE pro přístroje s jedním nebo dvěma lasery: CD5-FITC/ZAP-70-PE/CD19-PC5/CD(3+56)-PC7 25 testů obj. č. 772587 CD5-FITC/ZAP-70-PE/CD19-APC/CD(3+56)-PC7 25 testů obj. č. 7725887 PAVEL KRUŽÍK E-MAIL: [email protected]

6


nhibiny spolu s opačně působícími aktiviny jsou glykoproteiny, které se řadí do rodiny transformujícího růstového faktoru β (TGF β) Oba typy molekul ovlivňují prostřednictvím zpětné vazby hypofyzární produkci FSH. Existenci nesteroidního faktoru produkovaného gonádami, který inhibuje produkci FSH, předpověděl již v roce 1932 D.R.McCullagh. Další historie tohoto faktoru se začala psát až o téměř 50 let později, kdy byla jeho molekula izolována a charakterizována. Každá molekula inhibinu je tvořena jednou podjednotkou α (18 kDa) a jednou ze dvou podjednotek β (každá cca 14 kDa). Podjednotky jsou spojeny disulfidickými můstky. Podle typu podjednotky β se pak heterodimerní glykoprotein označuje jako inhibin A (α-βA) nebo inhibin B (β-βB). Podjednotky β tvoří současně také molekuly aktivinů A (βA-βA), B (βB-βB) a AB (βA-βB). Aktiviny a inhibiny se vyskytují také v komplexu s vazebnými proteiny folistatinem nebo α2-makroglobulinem. Vazba aktivinu s folistatinem ovlivňuje jeho biologickou i imunochemickou aktivitu. Podjednotky α a β jsou syntetizovány v různých tkáních, např. v mozku a v nadledvinkách. Tyto tkáně mohou být zdrojem aktivinů. Např. aktivin A byl nalezen v srdci, mozku, kostní dřeni a kosterních svalech. Aktiviny mají široký rozsah působení. Bylo zjištěno, že se uplatňují při embryogenezi, krvetvorbě, tvorbě kostí a apoptóze jaterních buněk. Naproti tomu pravděpodobně jediným zdrojem inhibinů jsou gonády. U žen jsou inhibiny produkovány granulózními buňkami folikulu. Inhibin B je syntetizován zejména malými antrálními folikuly. Inhibin A je produktem dominantního folikulu a po ovulaci je uvolňován žlutým tělískem. V těhotenství je pak jeho hlavním zdrojem fetoplacentární jednotka. U mužů se v séru nachází především inhibin B, jehož produkci zajišťují Sertoliho buňky varlat. Primární úlohou inhibinu B je kontrola gametogeneze pomocí regulace produkce FSH negativní zpětnou vazbou. V cirkulaci se vyskytuje také volná podjednotka α. Její molární koncentrace výrazně převyšují koncentrace inhibinů i aktivinů, nicméně její biologická funkce nebyla zatím objasněna.

Aktiviny a inhibiny v klinickém výzkumu i praxi zvýší úspěšnost detekce trisomie 21 ze 69 % na 76 %, při zachování 5 % úrovně falešně pozitivních záchytů. Použití inhibinu A v integrovaném testu, který představuje stanovení PAPP-A a měření nuchální translucence v prvním trimestru a stanovení všech čtyř parametrů v druhém trimestru, zvyšuje míru detekce až na 94 % při stejné úrovni falešně pozitivních záchytů (obr. 1). Sledování hladin inhibinu A během těhotenství může přispět k predikci a diagnostice i dalších komplikací. Jednou z nich je preeklampsie, která ohrožuje zhruba 5 % těhotenství. Preeklampsie je charakterizována zejména vysokým krevním tlakem a proteinurií. Často se vyskytují otoky dolních končetin, případně i jiných částí těla. Pokud by těhotná nebyla léčena, mohla by se poměrně rychle vyvinout eklampsie – záchvat křečí, který může přejít až do komatu. Jedná se o stav, který ohrožuje život matky zejména krvácením do vnitřních orgánů a život plodu nedostatkem kyslíku. Těhotenství je v takovém případě předčasně ukončeno císařským řezem. Bylo provedeno několik klinických studií, jejichž výsledky poukazují na možnosti využití inhibinu A a aktivinu A při predikci preeklampsie. Jejich zvýšené hladiny v pozdějším stadiu těhotenství (30 týdnů) by mohly být využity pro screening tohoto onemocnění. Změny v sérových hladinách aktivinu A signalizují některé další potíže provázející těhotenství. Významný nárůst koncentrace aktivinu A byl pozorován 2 dny před tím, než byl na základě klinických příznaků diagnostikován předčasný porod. Počet nedonošených novorozenců je stále hodně vysoký, pohybuje mezi 5 až 10 %. Intenzivní péče, která je těmto dětem věnována, zvyšuje jejich šance na přežití a normální vývoj. Časná a spolehlivá diagnostika předčasného porodu by však umožnila zahájit včas terapii směřující k udržení těhotenství po dobu potřebnou k normálnímu vývoji plodu. Z tohoto důvodu je dále intenzivně studována možnost využití aktivinu A pro tuto diagnostiku. Vedle nejrůznějších komplikací souvisejících s těhotenstvím se také intenzivně ověřují možnosti uplatnění inhibinů a aktivinů v problematice neplodnosti. Neplodnost neboli sterilita je vždy posuzována jako problém páru, nikoliv jedince. Je jí postiženo asi 15 % všech párů. Příčiny jsou z 30 – 35 % pouze na straně muže a v podobném rozsahu pouze na straně ženy. Problém se vyskytuje současně u obou partnerů asi ve 25 % případů. Zbývajících několik procent zůstává neobjasněno.

Obr 1: Míra detekce trisomie 21 pro různé typy testů

Výsledky klinických testů prokazují, že inhibin A je dalším vhodným markerem v prenatálním screeningu trisomie 21. Jeho hladina v mateřském séru je v případě Downova syndromu průměrně dvakrát vyšší než u těhotných bez toho problému. Studie potvrdily, že zařazení inhibinu A jako čtvrtého parametru do prenatálního screeningu ve druhém trimestru k AFP, hCG a nekonjugovanému estriolu


7

Obr 2: Hladina inhibinu B 5. den po stimulaci (OHSS = ovariální hyperstimulační syndrom)

Obr 3: Hladiny inhibinu A po in vitro fertilizaci (IVF)

Převzato z: Frawzy et al., Human Reprod., 17: 1535 - 1543 (2002)

Převzato z: Lockwood et al., Biol.Reprod., 57: 1490-1494 (1997)

produkován přímo Sertoliho buňkami, marker sperNa tomto poli se prosazuje zejména inhibin B, který je produkován přímo matogeneze. Jeho sérová hladina nepodléhá u mumalými vyvíjejícími se folikuly. Z tohoto důvodu představuje jeho sérová hladižů cyklickým výkyvům tak, jako je tomu u žen. na citlivý indikátor aktuálního počtu folikulů, tzv. ovariální rezervy. Fertilita Nicméně při studiu různých příčin mužské neplodženy je závislá na funkci ovarií, tedy na ovariální rezervě. Počet folikulů s věkem nosti bylo zjištěno, že koncentrace inhibinu B je ženy klesá. V době narození se odhaduje až na 2 miliony, kdežto na počátku v séru těchto mužů významně nižší než je hladina fertilního období je jejich počet již jen asi 300 000. Při poklesu počtu folikulů naměřená u zdravých jedinců (obr. 5). na přibližně 25 000 je další snižování jejich počtu významně urychleno, takže Pubertální vývoj a jeho monitorování představují za zhruba 13 let je jejich počet jen asi 1 000, což signalizuje počátek menopaudalší oblast pro uplatnění inhibinů. Správné načazy. Stanovení ovariální rezervy má značný význam v případě, kdy neplodný pár sování i průběh jednotlivých fází puberty jsou uvažuje o využití in vitro fertilizace. V případě malé šance na úspěch díky nedůležitými předpoklady pro získání normální reprodostatečnému počtu oocytů lze pacientku ušetřit zbytečné farmakologické dukční schopnosti. Pro posouzení stavu pubertálzátěže a následného stresu z neúspěšného pokusu. K odhadu ovariální rezervy ního vývoje u dívek se jako užitečný pomocník naslouží sérová hladina inhibinu B stanovená 3. až 5. den cyklu. Znalost ovariální bízejí oba inhibiny. U prepubertálních chlapců se rezervy také umožňuje lépe stanovit míru farmakologické stimulace. Příliš silná k hodnocení funkce varlat používá hCG stimulační stimulace zvyšuje riziko vzniku ovariálního hyperstimulačního syndromu test. Bylo zjištěno, že hladiny inhibinu B korelují (OHSS). Zvýšená hladina inhibinu B stanovená 5. den po stimulaci pomáhá invelmi dobře s výsledky tohoto stimulačního testu. dikovat zvýšené riziko vyvinutí tohoto syndromu (obr. 2). Nabízí se tedy možnost nahradit časově náročný Odpověď na otázku, zda byl pokus o fertilizaci úspěšný, může pomoci zodpotest, který zatěžuje pacienta opakovaným odběrem vědět inhibin A. Jeho sérová hladina A je přímo ovlivněna aktivitou fetoplacenkrve, jednoduchým stanovením. tární jednotky. Bylo zjištěno, že se jeho koncentrace v séru významně zvyšuje Inhibiny a aktiviny zřejmě naleznou své uplatnějiž 13 dní po přenosu embrya a že je navíc úměrná počtu úspěšně implantovaní i v onkologii. Kombinací CA 125 a koncentrace ných embryí. Přetrvávající nízká hladina inhibinu A naopak signalizuje neúcelkového inhibinu v séru lze spolehlivě detekovat spěšný pokus o oplodnění (obr. 3). až 95 % ovariálních tumorů s 95 % specifitou. Oba Inhibin B by se mohl uplatnit i v případě diagnostiky předčasné menopausy, tzv. předčasného ovariálního selhání. Tento problém postihuje 1 až 3 % žen ve věku do 40 let. Pro syndrom je charakteristická zvýObr 4: Schéma zpětnovazebné regulace produkce FSH inhibinem šená hladina FSH v séru. V důsledku poklesu Zdravá mladá žena Starší žena nebo mladá žena funkce ovarií klesá i hladina estrogenů a ins předčasným ovariálním selháním hibinu B, což zpětnovazebně ovlivňuje prohypofýza dukci FSH (obr. 4). K určení funkčního stavu hypofýza ovarií lze s výhodou využít sérovou hladinu inhibinu B, který je ovarii přímo produkován a nepodléhá velkým výkyvům mezi cykly. Předčasné ovariální selhání představuje pro ženu všechna rizika spojená s poklesem proFSH inhibin B dukce estrogenů, ke kterému dochází po inhibin B menopause. Uvádí se, že jejich míra je v těchto případech ale 1.6 až 2krát vyšší. Spolehlivá diagnostika tak umožní včasné aplikování substituční terapie, která výrazně omezuje zdravotní komplikace plynoucí z tohoto stavu. ovarium ovarium U mužů představuje inhibin B, který je

8


FSH

Obr 5: Hladiny inhibinu B u zdravých mužů a u mužů s různými příčinami infertility

A B C D E

Zdraví muži (n = 16) Kallmanův syndrom (n = 7) Infertilní muži se zvýšenou hladinou FSH (n = 29) Klinefelterův syndrom (n = 9) Bilaterální orchidektomie (n = 10)

Převzato z: Analwalt et al., JCEM, 81: 3341 - 3345 (1996)

markery se navzájem dobře doplňují díky své odlišné specifitě. Celkový inhibin vykazuje vysokou specifitu pro tumory granulózních buněk ovaria a pro mucinózní ovariální karcinomy. CA 125 je charakteristický spíše pro ostatní typy ovariálních karcinomů. Další možnost využití stanovení celkového inhibinu se nabízí při dlouhodobém sledování pacientek po operaci.

Imunochemie – stanovení BNP Reagencie umožňující stanovení natriuretického peptidu typu B – BNP na imunochemických analyzátorech Beckman Coulter: Access, Access 2 a UniCel DxI 800 byly uvedeny na trh v roce 2005. Jsou vyráběny na základě spolupráce s firmou Biosite a dodávány její distribuční sítí. Triage ® BNP je produkt kompletující nabídku panelu srdečních markerů do následující podoby: Accu TnI (Troponin I, cTnI) CK-MB Myoglobin Digoxin Triage ® BNP Ve vývoji jsou dále soupravy pro stanovení D-dimeru a Anti-β2GP1 (autoprotilátky proti β2-glykoproteinu 1). PETR MATĚJKA E-MAIL: [email protected]

Možnosti využití aktivinů a inhibinů v klinické praxi jsou nepochybně velmi široké. Některé z možných aplikací jsou již využívány v praxi, jako např. stanovení inhibinu A v druhém trimestru těhotenství pro detekci trisomie 21. Jiné si cestu k rutinnímu použití teprve hledají a množství dalších klinických aplikací je v současné době ověřováno v rámci klinických studií. Výběr z literatury Anawalt BD et al. J Clin Endocrinol Metab. 1996 Sep;81(9):3341-5. Fawzy M et al. Hum Reprod. 2002 Jun;17(6):1535-43. Florio P et al. Ultrasound Obstet Gynecol. 2003 Feb;21(2):165-9. Kwee J et al. Hum Reprod. 2004 Mar;19(3):590-5. Epub 2004 Feb 12. Lockwood GM et al. Biol Reprod. 1997 Dec;57(6):1490-4. Lockwood GM. Hum Fertil (Camb). 2000;3(2):86-92. McCullagh R. Science 1932;76:19-20. Robertson DM et al. Clin Chem. 1999 May;45(5):651-8. Thakur AN et al.J Exp Biol. 1981 Apr;19(4):307-13. Wald NJ et al. Semin Perinatol. 2005 Aug;29(4):225-35. Welt CK et al. J Clin Endocrinol Metab. 2005 Feb;90(2):826-30. Současná nabídka je uvedena v následujícím přehledu Kód Produkt DSL-10-28100-1 Inhibin A, ELISA DSL-10-28100-4 Inhibin A, ELISA (4 plates) DSL-10-84100 Inhibin B, ELISA DSL-10-56100 Total Inhibin ELISA DSL-10-85100 Free Activin A ELISA DSL-10-86100 Free Activin B ELISA DSL-10-86200 Free Activin AB ELISA DSL-10-87100 Follistatin 315 HELENA KURZWEILOVA E-MAIL: [email protected]

BIOSITE Triage BNP na Beckman Coulter UniCel DxI 800 Teorie a použití Natriuretický peptid typu B patří mezi hormony regulující krevní tlak. Jeho zvýšená tvorba provází městnavé srdeční selhání (srdce nedodává dostatečné množství krve), hypertrofii stěny levé komory srdeční, systolickou a/nebo diastolickou dysfunkci LK, ischemickou chorobu srdeční (zejména její akutní formy), přetížení krevního oběhu aj. BNP je produkován převážně mozkovými buňkami a buňkami srdečních komor. Z pre-proBNP se v kardiomyocytu uvolní proBNP a signální peptid. Molekula proBNP se na úrovni sarkolemmy kardiomyocytu štěpí na biologicky aktivní hormon BNP a inaktivní N-terminální fragment NT-proBNP. Hladina BNP v krvi je relativně stálá, protože jeho vyplavování z kardiomyocytů probíhá kontinuálně. Biologický poločas BNP je asi 22 minut, NT-proBNP má poločas 60 – 120 minut. Vyšetřování BNP se používá v následujících indikačních oblastech: 1) Diagnostika srdeční dysfunkce – uplatňuje se negativní prediktivní hodnota (89 – 99 %) stanovení. Nezvýšené hodnoty BNP v krvi prakticky vylu-


9

čují kardiální etiologii příznaků obvyklých při srdeční dysfunkci a dovolují upustit od dalších vyšetření (echokardiografie). Zvýšené hodnoty BNP však nemají význam v diferenciální diagnostice, jsou pouze dokladem existující srdeční dysfunkce. 2) Stratifikace onemocnění – stanovení BNP je účinnějším indikátorem závažnosti srdeční dysfunkce, než jsou funkční klasifikace NYHA a standardně používané kritérium LVEF. 3) Stanovení prognózy – BNP je účinným indikátorem prognózy kardiovaskulární morbidity a mortality, protože vzestup jeho koncentrace odráží nejen systolickou, ale – i když ne vždy a spolehlivě – i diastolickou srdeční dysfunkci. Jako prognosticky významná se udává hladina BNP stanovená 3. den po AMI – negativní výsledek svědčí o dobré prognóze onemocnění. 4) Sledování účinnosti léčby – pokles hodnot BNP indikuje účinnost léčby dokonaleji než dosud běžně používaná kritéria.

krevní obraz (Sarstedt Monovette EDTA K)

Souprava Hodnocení soupravy Biosite BNP je provedeno s ohledem na doporučení v článku B. Friedeckého, J. Kratochvíly: Biomarkery v diagnostice srdečních chorob, FONS 4/2005.

Činidla BIOSITE Triage BNP pro Beckman Coulter Immunoassay System, 2 x 50 testů. Souprava obsahuje paramagnetické částice s navázanou myší polyklonální protilátkou proti lidskému BNP, konjugát myší monoklonální protilátky proti lidskému BNP a alkalické fosfatázy. K blokování heterofilních protilátek je použit purifikovaný myší a kozí IgG v pufrovaném fyziologickém roztoku. Po prvním použití je sada činidel (tj. 50 testů) stabilní 28 dní. Pohled uživatele: Skutečná stabilita činidel je podle našich zkušeností dvojnásobná.

BNP stanovujeme na imunochemickém analyzátoru Beckman Coulter UniCel DxI 800 od dubna 2005. Zde jsou naše zkušenosti z ročního provozu.

Kalibrátor, kalibrace Analyzátor Beckman Coulter UniCel DxI 800, maximální výkon 400 testů za hodinu. Použivá chemiluminiscenční technologii a stejná činidla jako systémy Beckman Coulter Access a Access 2. Díky přípravě vlastních alikvotů jsou primární zkumavky velice rychle uvolňovány k dalším analýzám. Vlastní stanovení BNP trvá 16 minut. Pohled uživatele: Samostatně vložený vzorek je k dispozici do 1 minuty, obecně nepřesahuje doba uvolnění 5 minut. Díky stejným stojánkům mohou být vzorky ihned vloženy do biochemického analyzátoru Beckman Coulter Synchron LX20, takže analýzy probíhají paralelně. Na UniCel DxI 800 oceňujeme kromě rychlosti jednoduchou obsluhu a minimální údržbu. Zásoby jsou doplňovány za provozu bez nutnosti čekání na stav „Ready“, prázdné sady činidel jsou automaticky odhazovány do odpadu, kapalný odpad máme napojen přímo do kanalizace (nemocnice má vlastní čistírnu odpadních vod).

Vzorky Lze použít pouze vzorky nesrážlivé krve s EDTA jako antikoagulantem. Do 2 hodin od odběru je nutno plazmu oddělit a uložit do lednice. Nebude-li analýza provedena do 4 hodin po odběru, vzorek zmrazit na – 20 °C. Pohled uživatele: Analýzu provádíme přímo z primárních 2,7ml zkumavek na

10


BIOSITE Triage BNP Calibrators, 6 lahviček (hladin). Jde o rekombinantní lidský BNP komplex v BSA matrici s návazností na pracovní kalibrátor výrobce. Skladování při – 20 °C do data exspirace, po otevření stabilní 1 měsíc při 2 – 10 °C. Kalibrace (v dubletu) je vyžadována každých 28 dní. Pohled uživatele: Stabilita kalibrace je podle našich zkušeností 3 měsíce.

Kontrolní materiál BIOSITE Triage BNP Controls, 3 hladiny (3 x 2 x 2,5 ml). Skladování při – 20 °C do data exspirace, po otevření stabilní 1 měsíc při 2 – 10 °C. Pohled uživatele: Kontroly jsou v praxi stabilní 2 měsíce po otevření. Uchováváme je v lednici v uzavřených plastových zkumavkách, ve kterých je vkládáme do analyzátoru a ihned po uvolnění je opět vracíme do lednice. Zjednodušuje se tím obsluha a eliminuje se mrtvý objem.

Analytické parametry Zkřížené reakce - Souprava nevykazuje zkřížené reakce s ANP, CNP, prepro ANP, prepro BNP, angiotenzinem, reninem, urodilatinem. Interference - Se stanovením neinterferuje hemoglobin do 5 g/l, triacylglyceroly do 35 mmol/l a bilirubin do 350 µmol/l. Rozsah měření - 0,29 – 1145 pmol/l (1 – 5000 ng/l) Referenční meze ≤ 29 pmol/l (100 ng/l)

Klinické zkušenosti

Opakovatelnost, reprodukovatelnost Údaje výrobce hladina

CV (%)

pmol/l

ng/l

v sérii mezi sériemi celková

7,08

24,5

2,7

5,3

5,9

11,8

40,8

3,1

4,5

5,4

22,3

77,2

2,6

3,2

4,1

388

1343

1,0

6,6

6,7

1146

3966

1,1

1,8

2,1

Naše dlouhodobá laboratorní přesnost z VKK, nejsou splněny podmínky reprodukovatelnosti: 1. soubor (n = 28, za období 5 měsíců) hladina

CV (%)

pmol/l

ng/l

25,4

87,9

5,1

118

408

6,1

625

2163

5,3

2. soubor (n = 16, za období 3 měsíců) hladina CV (%) pmol/l

ng/l

26,3

91,0

5,1

121

419

4,1

623

2156

4,7

3. soubor (n = 13, za období 2,5 měsíce) hladina CV (%) pmol/l

ng/l

23,4

81

4,4

112

388

4,0

566

1958

3,4

Naše měření potvrzují reprodukovatelnost uváděnou výrobcem. Dlouhodobá přesnost (CV) v oblasti referenčního intervalu se pohybuje kolem 5 %, což více než dostatečně splňuje požadavek ≤ 19 % uváděný ve výše zmíněném FONSu 4/2005.

MUDr. Zdeněk Monhart, JIP – interní oddělení Nemocnice Znojmo Kasuistika č. 1 85letá pacientka byla přijata pro levostranné srdeční selhávání NYHA IV na podkladě ICHS, oběhová kompenzace zhoršena fibrilací síní s rychlou odpovědí komor. RTG plic prokazuje městnání v malém oběhu, echokardiograficky těžká dysfunkce LK ( ejekční frakce 21% ), BNP 1. den více než 1334 pmol/l. Po diuretické léčbě srdečního selhávání a zpomalení srdeční frekvence dosaženo zlepšení oběhové kompenzace, pacientka ve funkční třídě NYHA II, rehabilituje do chůze po oddělení. BNP 6. den 29 pmol/l. Pacientka 11. den propuštěna do domácí péče. Závěr: v tomto případě je patrna velmi dobrá korelace klesajících hodnot BNP s dosažením oběhové kompenzace pacientky s akutním srdečním selháním na podkladě ICHS. Kasuistika č. 2 78letý pacient přijat pro zhoršení levostranného srdečního selhávání na podkladě ICHS, dlouhodobě ve funkční třídě NYHA III. Echokardiograficky prokázána středně těžká dysfunkce LK ( ejekční frakce 36% ). BNP 1. den 611 pmol/l. Po maximalizaci léčby srdečního selhávání jen mírné zlepšení stavu – pacient nadále ve funkční třídě NYHA II-III, 12. den propuštěn domů. BNP 6. den 229, 12. den 459 pmol/l. Závěr: přetrvávající zvýšené hodnoty BNP vykazují korelaci s klinickým stavem pacienta s chronickým srdečním selháváním na podkladě ICHS. Kasuistika č. 3 68letý pacient přijat pro nově zjištěné levostranné srdeční selhávání s týdenní anamnesou, při přijetí ve funkční třídě NYHA III, echokardiograficky prokázána těžká deprese systolické funkce LK ( ejekční frakce 25% ). BNP 1. den 116 pmol/ l. Po zahájení diuretické terapie zlepšení oběhové kompenzace, pacient 15. den přeložen ke koronarografickému vyšetření, na podkladě kterého byl nález uzavřen jako dilatační kardiomyopatie. Před překladem pacient ve třídě NYHA I-II. BNP 13. den 28 pmol/l. Závěr: v tomto případě pokles zvýšených hladin BNP koreluje se zlepšením oběhové kompenzace u pacienta se srdečním selháváním neischemické etiologie.

MUDr. Pavel Knopp, kardiologická poradna Kazuistika č. 4 75letý pacient prodělal v roce 2001 IM a plicní embolii, je dlouhodobě antikoagulován pro fibrilaci síní, 10 roků se léčí pro diabetes 2. typu, v posledních pěti letech hypertenze a hyperlipidemie. Vzhledem k dušnosti proveden před 2 měsíci perfúzní plicní san s negativním nálezem. Medikace: Tenormin, Isopelet, Tritace, Warfarin, Diaprel, Medostatin, Kornam V posledních týdnech si stěžuje na zhoršené dýchání, závratě, zvýšenou únavnost. Laboratoř (výběr): P-Glukóza 7,6, S-AST 0,20, S-ALT 0,32, S-CK 2,66, S-CRP 5,2, P-BNP 85,4 pmol/l. TRN konsilium: dušnost kardiální etiologie, z plicního hlediska bez doporučení. Závěr: dušnost přisouzena kardiální subkompenzaci. U nemocného změněn lék Tenormin na Dilatrend. Po měsíčním užívání zmírnění subjektivních potíží, kontrolní echo vyšetření prokazuje dobrou systolickou funkci levé srdeční komory. Pro zlepšení celkové stavu se pacient mohl nadále léčit u svého praktického lékaře.

MUDr. Roman Hrdina, plicní oddělení Nemocnice Znojmo Kazuistika č. 5 Žena, 66 let, hospitalizovaná na TRN odd. Anamnesa: řadu let sledována pro CHOPN, cor. pulm. chron., v posledních letech vývoj respirační insuficience (až GRI) s dlouhodobou domácí oxygenoterapií. Obj.: dušnost, otoky DKK, auskultačně bronchitické fen. i oj. chrůpky.


11

Rtg s+p: bez zn. infiltrace plicní, masivní dilatace srdce oběma směry. Echokardiograf. vyš.:v r. 2001 EFLK 28% , vs.klidová plic. hypertenze. FVP: převaha obstruktivní ventilační poruchy těžkého stupně - FEV1 33% nál. hodnoty ABR(art.): pCO2 5,98kPa, pO2 5,04 kPa, CRP: 7,8 (během hospit. 20,8) BNP: vstupní (4.4.) 93,2, kontr. (11.4.) 72,6 pmol/l. Závěr: klinický stav, zobrazovací vyšetření a FVP svědčí pro kombinovanou etiologii dušnosti (CHOPN s vývojem cor. pulmonale chron., CHICHS), BNP koreluje s kardiální složkou. Kazuistika č. 6 Žena, 46 let, hospitalizovaná na TRN odd. v dubnu. Anamnesa negativní, dosud zdráva, poslední asi měsíc vývoj námahové dušnosti, poslední dny i noční dušnost

char. ortopnoe, tlak na hrudi, otékání rukou i nohou. Kašel 0, teploty 0. Obj.:dušnost i klidová, při řeči, auskultačně dých. alv. s polopřízvuč. chrůpky oboustranně bazálně, otoky DKK, nově zjištěná hypertenze. CT vyš.: difusnější bronchopneumonie vlevo, malý fluidothorax vpravo, obraz kardiopatie, susp. drobný fluidoperikard. Echokardiofraf. vyš.: nehomogenní porucha stažlivosti myokardu, EFLK 35% CRP: 89, BNP: vstupní (19.4.) 348 pmol/l Závěr: v popředí jednoznačně srdeční selhávání (infiltrace plicní zřejmě sekundární při městnání v malém oběhu), pacientka přeložena na interní JIP, kde zjištěna i pozitivita TnI.

Závěr Souprava BIOSITE Triage BNP ve spojení s Beckman Coulter Immunoassay System UniCel DxI 800 plně vyhovuje analytickým i klinickým požadavkům na toto vyšetření. RNDR. ZDENĚK VEŠKRNA OKB, NEMOCNICE ZNOJMO

Soupravy PSA free IRMA a PSA total IRMA nakalibrovány na mezinárodní standard souladu s ustanovením Directive 98/79/EC jsou nyní soupravy na stanovení celkového a volného PSA nakalibrovány na mezinárodní standard - souprava PSA free IRMA na standard 1st IS NIBSC 96/668 a souprava PSA Total IRMA na 1st IS NIBSC 96/670. V této souvislosti byla též provedena klinická studie, která měla prokázat schopnost souprav Immunotech rozlišit mezi karcinomem prostaty a benigními stavy na základě poměru koncentrací volného a celkového PSA. Tato retrospektivní studie byla provedena na vzorku 174 pacientů, u nichž se hodnota celkového PSA pohybovala v rozmezí 4-10 ng/mL, přičemž u 54 jedinců z daného souboru byl potvrzen karcinom prostaty. Průběh ROC křivky, jakož i plocha pod křivkou (0,821) svědčí o dobré schopnosti stanovení rozlišovat mezi karcinomem prostaty a benigními stavy na základě hodnoty poměru koncentrací celkového a volného PSA.

Následující tabulka poskytuje informaci o hodnotách cut off, pozitivních prediktivních hodnotách a negativních prediktivních hodnotách při 90 % a 95 % klinické senzitivitě, resp. 90 % a 95 % specificitě.

Cut off Free/total PSA

Specificita

Sensitivita

ppv

npv

13,1 %

95 %

49 %

80 %

82 %

16,3 %

90 %

63 %

72 %

86 %

23,0 %

38 %

90 %

37 %

90 %

25,9 %

26 %

95 %

35 %

94 %

12


Cut off - diskriminační hladina mezi pozitivními a negativními hodnotami Sensitivita - udává procento správně pozitivních výsledků ze souboru jedinců s karcinomem. Specificita - udává procento správně negativních výsledků ze souboru jedinců bez karcinomu. ppv (pozitivní prediktivní hodnota) - udává v procentech s jakou pravděpodobností bude mít pacient hledanou chorobu, když bude výsledek testu pozitivní npv (negativní prediktivní hodnota) - udává v procentech s jakou pravděpodobností nebude mít pacient hledanou chorobu, když bude výsledek testu negativní

Příklad: Pro cut off hodnotu poměru free/total PSA 16,3 %, což odpovídá druhé řádce tabulky, dostáváme následující informace: - 90 % specificita znamená, že 10 % pacientů nemajících karcinom prostaty má hodnotu Free/total PSA pod hladinou cut off, 90 % je nad cut off. Pokud bychom použili toto cut off, ušetřili bychom pacienty bez karcinomu prostaty zbytečné biopsie v 90 % případů. - 63 % sensitivita - 63 % jedinců s karcinomem prostaty má hodnotu Free/total PSA pod hladinou cut off, 37 % nad touto hladinou. Pokud bychom použili toto cut off, jsme schopni identifikovat 63 % pacientů s karcinomem a 37 % případů by zůstalo nediagnostikováno. - 72 % pozitivní prediktivní hodnota - pokud je výsledek pod hladinou cut off, pravděpodobnost že pacient má karcinom prostaty je 72 %. - 86 % negativní prediktivní hodnota - pokud je výsledek nad hladinou cut off, pravděpodobnost že pacient nemá karcinom prostaty je 86 %. V tabulce jsou uvedeny různé hodnoty cut off pro různé hladiny specificity a senzitivity. Ale která hodnota je vlastně ta pravá? Na tuto otázku není jednoznačná odpověď. Nadále probíhá diskuze o tom, v jakých případech je lékařská intervence nezbytná, a kdy je lepší nezasahovat. Uvádí se až 4 % prevalence karcinomu prostaty v populaci mužů nad 50 let, nicméně většina nakonec umírá ze zcela jiných příčin. Jakákoliv klinická intervence, počínaje biopsií prostaty, může představovat pro pacienta potenciální riziko, zejména ve starším věku. Při každém klinickém rozhodování je tedy zapotřebí pečlivě vážit mezi potenciálním přínosem a rizikem pro pacienta, a zvolit řešení optimální nejen z hlediska délky přežití, ale též kvality života. Lékař je tak postaven před dvě dilemata: 1. Při stanovení diagnózy - zda provést nebo neprovést biopsii prostaty. 2. Při pozitivním nálezu - zda provést chirurgický zákrok nebo ne.

Při každém klinickém rozhodování je tedy zapotřebí pečlivě vážit mezi potenciálním přínosem a rizikem pro pacienta, a zvolit řešení optimální nejen z hlediska délky přežití, ale též kvality života. Stanovení poměru free/total PSA může pomoci rozhodnout první dilema, přičemž v principu lze zvolit jeden ze dvou níže uvedených mezních přístupů, případně i jejich kombinaci. 1. přístup - minimalizace rizika falešně negativního výsledku Tento přístup umožňuje vyhledat jedince, u kterých je reálná potřeba biopsie velmi nízká, protože je u nich velmi malá pravděpodobnost karcinomu prostaty. Cílem je zde zejména minimalizovat možnost falešně negativního výsledku. Proto se hodnota cut off nastavuje na hladině 90 %, případně 95 % senzitivity. Pokud tento přístup aplikujeme na výsledky získané naší studií, mohli bychom se při použití cut off 23 % vyvarovat zbytečné biopsie u 38 % jedinců nemajících karcinom. Protože tato část je zpravidla ve skupině pacientů s hodnotou celkového PSA mezi 4-10 ng/mL početně výrazně více zastoupena, umožňuje nám již i tento přístup redukci počtu zbytečných biopsií u významného množství případů. Riziko falešně negativního výsledku zůstává přitom stále poměrně malé, u pacientů s hodnotami nad cut off je pravděpodobnost karcinomu pouze 10 %. Možné schéma postupu pro vyloučení zbytečných biopsií

2. přístup - minimalizace počtu zbytečných biopsií Tento přístup umožňuje vyhledat jedince, u kterých je pravděpodobnost karcinomu již natolik vysoká, že je zřejmá potřeba biopsie. Cílem je zde zejména minimalizovat počty zbytečných biopsií. Proto se hodnota cut off nastavuje na hladině 90 % případně 95 % specificity. Při tomto přístupu karcinom u jistého nezanedbatelného procenta pacientů zůstává nediagnostikován.. Pokud tento přístup aplikujeme na výsledky získané naší studií, jsme schopni při použití cut off 16,3 % odhalit karcinom u 63 % z celkového počtu jedinců s karcinomem. Zbytečné biopsie by pak byly provedeny pouze u 10 % ze všech jedinců bez karcinomu. Tento přístup tak umožňuje provádět biopsii jen v opravdu opod-


13

statněných případech. U pacientů s hodnotou poměru free/total PSA pod cut off je pravděpodobnost karcinomu již poměrně velká - 72 %. Na druhé straně ovšem značné množství karcinomů - 37 % - zůstává nediagnostikováno. Samozřejmě lze použít i jiný přístup, než jsou dva výše zmíněné, a svým způsobem, mezní možnosti. Nabízí se například použití šedé zóny s hranicemi odpovídajícími uvedeným hodnotám. V každém případě by výstup z laboratoře měl být ve schodě s požadavky příslušného klinického pracoviště, neboť to rozhoduje o provedení či neprovedení biopsie. Při tom je nutné zohledňovat další faktory, jako je například věk nebo celková kondice pacienta. PATRIK ŠAF E-MAIL: [email protected]

Boli sme pri tom

Dňa 21. apríla 2006 prvé súkromné laboratórium na Slovensku ADL s.r.o. so sídlom v Prešove si pripomínalo 10. výročie svojho vzniku. Z príležitosti tohto významného výročia sa v Prešove v Divadle Jonáša Záborského konala slávnostná vedecká konferencia na tému Imunológia: od teórie k praxi. V odbornej časti konferencie vystúpili so svojimi prednáškami poprední slovenskí imunológovia a odborníci v laboratórnej praxi Prof. Ing. Miroslav Ferenčík, DrSc., Prof. MUDr. Viera Štvrtinová, CSc., Prof. MUDr. Jozef Rovenský, DrSc., Ing. Ján Balla. Riaditeľka a majiteľka ADL s.r.o. RNDr. Anikó Kužmová oboznámila prítomných s históriou a súčasnosťou laboratória. Po odborných prednáškach bol urobený krst monografie Imunológia a alergológia v základných heslách a termínoch od autorov M. Ferenčík, J. Rovenský a Erika Jensen-Jarolím. V kultúrnej časti slávnostnej konferencie zazneli operetné melódie v podaní bratislavských umelcov. Po skončení kultúrnej časti sa v priestoroch Divadla Jonáša Záborského uskutočnila slávnostná recepcia pre zúčastnených.

A čo dodať na záver ? Prajeme Analyticko diagnostickému laboratóriu s.r.o., ktorého oddelenie imunológie získalo osvedčenie o akreditácií ako prvé na Slovensku, ďalšie úspechy v práci. MÁRIA GAVELOVÁ E- MAIL: [email protected]

14


Prezentácia firmy na podujatí

Prenatálna diagnostika Dňa 30. marca 2006 sa v Žiline uskutočnil pracovný deň na tému Prenatálna diagnostika, ktorý organizovala Slovenská spoločnosť lekárskej genetiky SLS, Nemocnica s poliklinikou Žilina, Ženská klinika Martinskej fakultnej nemocnice, Gynekologicko-pôrodnicke oddelenie NsP Žilina a Oddelenie lekárskej genetiky NsP Žilina. Usporiadateľom akcie bol MUDr.František Cisárik, CSc. z NsP Žilina. Cieľom pracovného dňa bolo vymeniť si skúsenosti a znalosti v oblasti skríningu I.trimestra, predimplantačnej genetickej diagnostike a skríningu II.trimestra. V prednáškach slovenských a českých autorov (16 prednášateľov) sa analyzovali najaktuálnejšie otázky prenatálnej diagnostiky : vyšetrenia biochemické a sonografické v I. trimestri možnosti získania medzinárodného certifikátu vyšetrenia nuchalnej translucencie a nosovej kosti možnosti skríningu I. trimestra na Slovensku výber skríningových stratégií z pohľadu kvality a efektivity prenatálny skríning a prenatálna diagnostika v II. trimestri predimplantačná genetická diagnostika prvé výsledky a postupy v súvislosti s rozvojom asistovanej reprodukcie

IV. Martinské dni imunológie, ktoré sa konali: 29. marca – 1. apríla 2006 v Kine Strojár, Vajanského námestie 2 v Martine. Organizátormi podujatia boli nasledovné spoločnosti: Slovenská lekárska spoločnosť, Slovenská spoločnosť pre alergológiu a klinickú imunológiu, Slovenská imunologická spoločnosť, Martinská fakultná nemocnica, Martin, Jesseniova LF UK, Martin, Spolok lekárov v Martine, Martinské centrum imunológie s.r.o., Martin. Hlavné témy, ktorým bolo venované podujatie: Imunodeficity, Autoimunitné ochorenia, Alergia a astma, Imunológia vo vzťahu k iným medicínskym odborom – neuroimunológia, Aktuálne problémy v odbore. Podujatie bolo organizované za predsedníctva: Doc. MUDr. Peter Pružinec, CSc. hlavný odborník MZ SR pre KIA Doc. MUDr. Vladimír Pohanka, PhD. predseda SSAKI Prof. Ing. Miroslav Ferenčík, DrSc. predseda SIS Doc. MUDr. Mojmír Vrlík, CSc. riaditeľ MFN Prof. MUDr. Ján Danko, CSc. dekan LF UK Prof. MUDr. Július Mazuch, DrSc. Predseda Spolku lekárov Martine IMMUNUTECH a Beckman Coulter Company, sa aktívne zúčastnil podujatia ako hlavný sponzor. Prezentovali sme svoje výrobky a výrobky spoločnosti The Binding Site na stánku lokalizovanom v susedstve významných farmaceutických firiem a pripravil sympózium pod názvom: „VYBRANÉ LABORATÓRNE METÓDY IMUNOLÓGII“ na ktorom odzneli prednášky: 1. Říčařová, B.: Nové možnosti laboratórneho stanovenia voľných ľahkých reťazcov – princíp a použitie metódy Freelite. 2. Kružík, P.: Meranie aktivácie bazofilov. Aj napriek tomu, že podujatie bolo adresované v hlavnej miere odborníkom z lekárskej praxe, obe prednášky sa stretli s patričným ohlasom, čomu nasvedčovala diskusia po ich skončení. Diskusie o významne využitia nami dodávaných výrobkov potom pokračovali aj v ďalších dňoch podujatia v priestoroch stánku našej firmy. Najväčší ohlas spôsobila prezentácia metódy Freelite pre rýchle a presné imunodinostické stanovenia voľných ľahkých reťazcov kappa a lambda v sére pacientov. TICHOMÍR TORDA E-MAIL: [email protected]

Omluva redakce:

Čim prispeje my k zisťovaniu vrodených vývojových vád? Naša spoločnosť Beckman Coulter a Immunotech ponúka imunodiagnostické súpravy pre screening vrodených vývojových vád v prvom trimestri na stanovenie PAPP-A, free beta-hCG a v druhom trimestri súpravy na stanovenie AFP, hCG a free Estriol .

V předchozím čísle časopisu došlo u článku Princip a využití metody Freelite TM k tiskové chybě tabulky Navrhovaný laboratorní protokol pro vyšetřování při podezření na mnohočetný myelom (str. 6, obrázek 6). Všem, kteří obdrželi neopravené verze časopisu se tímto velice omlouváme a uvádíme opravu.

MÁRIA GAVELOVÁ

VAŠE REDAKCE

Konferencia bola ohodnotená 5 kreditmi CME.

E- MAIL: [email protected]


15

Kde se můžeme setkat (červen - září 2006) Konference/seminář s účastí společnosti Immunotech formou stánku 31. 5. – 2.6. 2006

12. – 13. 6. 2006

Cechtuma 2006 (kongres) Praha

Seminář Moravskoslezského kraje Žermanice

31. 5. – 3. 6. 2006

12. – 16. 9. 2006

XX. Olomoucké hematologické dny Olomouc

XX. Biochemický zjazd Piešťany

7. – 9. 6. 2006

17. – 19. 9. 2006

XXIV. Setkání biochemiků Královéhradeckého, Pardubického a Jihočeského regionu Písek

FONS 2006 (konference) Pardubice MARKÉTA KRUPAŘOVÁ, E-MAIL: [email protected]

informační magazín číslo

Recommend Documents