Havarijní plán pro práci s geneticky modifikovanými mikroorganismy Mikrobiologický ústav AV ČR

Mikrobiologický ústav AV ČR

Příloha 6 Havarijní plán

1/5

Havarijní plán pro práci s geneticky modifikovanými mikroorganismy Mikrobiologický ústav AV ČR a) Adresa pracoviště Mikrobiologický ústav AV ČR (dále MBÚ) Vídeňská 1083, 14220 Praha 4, IČO 61388971 Statutární orgán: Prof. RNDr. Blanka Říhová, DrSc., ředitelka ústavu, tel.: 44472272, e-mail: [email protected], Odborný poradce pro GMO - mikroorganismy Ing. Miroslav Pátek, CSc. Bydliště: Zimova 625/3, 14200 Praha 4 Kontaktní adresa: Mikrobiologický ústav AV ČR, Vídeňská 1083, 142 20 Praha 4 Telefon: 24106 2398, 24106 2354, Fax: 241722257, e-mail: [email protected] Osoby odpovědné za likvidaci havárie (podle č. oddělení): Č. L. 111 112 115 116 121 122 123 124 125

Jméno Ing. Jiří Janata RNDr. Sylva Pažoutová. Ing. Miroslav Sobotka RNDr. Pavel Kyslík RNDr. Jaroslav Weiser RNDr. Ivana Malcová Ing. Miroslav Pátek Ing. Alena Pichová Ing. Peter Šebo

127 128 141

RNDr. Pavel Branny Dr. Leoš Valášek RNDr. Ladislav Homolka prom. biol. Karel Novák experimentální mykologie RNDr. Pavla Binarová biologie hub specifické imunity RNDr. Milada Šírová humorální imunity přirozené buněčné imunity RNDr. Karel Bezouška architektury proteinů

142 143 151 152 156 158

Laboratoř Tel fyziologie a genet. mikroorganismů 2370 fyziologie a genetiky vláknitých hub2352 fermentačních technologií 2244 enzymové technologie 2777 mikrobiální proteomiky 2378 reprodukce buňky 2769 molekulární genetiky bakterií 2398 buněčné biologie 2526 molekulární biologie bakteriálních 2566 patogenů buněčné signalizace 2658 genové exprese 2188 biochemie dřevokazných hub 2397

e-mail [email protected] [email protected] [email protected] [email protected] [email protected] [email protected]

[email protected] [email protected] [email protected] [email protected] [email protected] [email protected]

2339 [email protected] 2130 [email protected] [email protected] 2383 [email protected]

b) Popis prostor, kde probíhá nakládání s GMO: Místnosti MBÚ určené pro uzavřené nakládání s GMO jsou v budovách C, L, Xa a Xb. Budova C Laboratoře: Suterén: S 07, zvěřinec (suterén B) Přízemí: 015, 016, 020, 021, 024 1. patro: 112, 117, 118, 127, 129, 147, 150 2. patro: 216, 221, 236, 237, 238, 241, 242, 244, 246, 248A, 249, 250 3. patro: 306, 309, 312, 315, 321, 323, 326A, 327, 328, 329, 329A 331, 332, 338, 339, 340, 346, 347A, 348, 349 Chladové místnosti: 2. patro: 243, 245



2/5

3. patro: 336A, 344 Kultivační místnosti: přízemí: 013, 014 Autokláv: přízemí: 001, 024, 3. patro 301 Budova L Laboratoře: Přízemí: 008, 014, 016, 022, 024 1 .patro: 112, 113, 114, 116, 117A, 118, 119A, 120, 121, 122 2. patro: 205, 209, 212, 213A, 214A, 215, 216, 219, 220A, 222, 223, 224, 225 Ostatní místnosti spadají do kategorie 1. Chladová místnost 023B Pro nakládání s GMO 2. kategorie jsou určeny laboratoře L008 a L014. Budova Xa: Laboratoře: 1. patro: 205, 206, 207, 208, 210, 215, 216, 217, 218 Umývárna: přízemí: 102 Centrifugovna: 104 Budova Xb (732/OER/05, všechny místnosti jsou určeny pro nakládání s GMO 2. kat.): Laboratoře: v přízemí a prvním patře: 115 (BTH) 142, 235, 236, 237, 238, 239, 242 Plány budov a plánky všech místností a jejich bezpečnostní prvky jsou v příloze 7 Vybavení laboratoří: digestoře, laminární boxy, mrazáky, chladničky, PCR cyclery, zařízeni pro elektroforézy, třepačky, centrifugy, spektrofotometry, termostaty, inkubátor, homogenizátory. Rozvod elektrické energie: Budova C – v suterénu rozvodna napájená z hlavní rozvodny v budově E Budova L – nemá vlastní rozvodnu, hlavní přívod je z rozvodny v budově E do rozvaděče v přízemí Budova Xa – v suterénu je rozvodna napájená z areálové rozvodny Budova Xb – hlavní rozvaděč u vchodu do BTH Zásobování vodou: hlavní uzávěr vody je u hlavní vrátnice, dále na stoupačkách v každé budově Rozvod plynu: Hlavní uzávěry plynu pro jednotlivé budovy jsou umístěny na fasádě každé budovy. Hasicí přístroje: zakresleny v pláncích pater i jednotlivých laboratoří, velké pojízdné hasicí přístroje jsou v budově C v suterénu. . c) Plán pracoviště Plán pracoviště je v Příloze č. 7. Jsou v nich vyznačeny místnosti, ve kterých probíhá nakládání s GMO, umístění bezpečnostních prvků uzavření prostoru, hlavní ovladače přívodu elektřiny, plynu a vody a umístění hasicích přístrojů. d) Popis havárie, která může vzniknout v prostorách nebo místě, kde probíhá nakládání: Havárie je závažná nekontrolovaná kontaminace pracovního prostoru nebo únik GMO mimo uzavřený prostor. V takovém případě je třeba neprodleně učinit opatření k likvidaci havárie. Za havárie ve vlastním slova smyslu se nepovažují malé úniky GMO, při nichž jsou GMO spolehlivě zlikvidovány v rámci uzavřeného prostoru. V případě nakládání s GMO první kategorie rizika při úniku GMO větší nebezpečí nehrozí a uniklé GMO je možno likvidovat připravenými prostředky, jak je uvedeno dále. V prostorách MBÚ určených pro práci s GMO může vzniknout havárie hlavně rozlitím většího objemu mikrobiální kultury nebo rozbitím skleněné či jiné kultivační nádoby s kulturami GMO v místnosti určené pro práci s GMO (v uzavřeném prostoru). Zasažené místo je třeba s použitím ochranných rukavic vysušit, odpad



3/5

zlikvidovat autoklávováním a místo ošetřit v dostatečném rozsahu dvěma typy dezinfekčních roztoků: např. Ajatinem a následně přípravkem SAVO nebo 2% roztokem chloraminu a poté ozařováním germicidní UV lampou (viz bod g). V případě havárie musí být uvědoměn odpovědný pracovník (viz seznam bod a), vedoucí pracoviště (Prof. RNDr. Blanka Říhová, DrSc.), případně odborný poradce. Havárie musí být do 24 h ohlášena na MŽP (viz bod m). e) Přehled možných následků havárie na zdraví lidí, zvířat, životní prostředí a biologickou rozmanitost, včetně způsobů zjišťování těchto následků a účinné ochrany před nimi: Práce s GMO v MBÚ se provádí s nepatogenními kmeny bakterií, kmeny nepatogenních kvasinek a s buněčnými liniemi. Vkládané geny pocházejí ve všech případech z nepatogenních organismů a nesouvisí s patogenitou, toxicitou ani jinými negativními účinky na zdraví lidí či zvířat ani na biologickou diverzitu (viz též Hodnocení rizika). Používají se též běžné selekční geny pro rezistenci k antibiotikům, avšak ani u nich nebyly prokázány škodlivé účinky na zdraví lidí, zvířat či přírodní prostředí. Riziko spojené s jejich použitím je uvedeno v Hodnocení rizika. Ve všech případech se jedná o nakládání s GMO 1. kategorie, při němž riziko škodlivých účinků na zdraví člověka a zvířat, životní prostředí a biologickou rozmanitost, které by mohly nastat jako možné následky havárie při nakládání s GMO, jsou minimální. Přesto je nezbytné preventivně dodržovat zásady práce s mikroorganismy a nakládat s jejich kulturami jako s infekčním materiálem. Při manipulacích s GMO je třeba používat sterilní uzavíratelné nádoby, pipety, očkovací kličky a k sterilizaci využívat otevřený oheň. Vědečtí pracovníci mají k dispozici nukleotidové sekvence inzertů, s nimiž pracují, přístrojové vybavení a metody k analýze bakterií, která umožňuje mapovat a eliminovat jejich rozšíření a následně tuto eliminaci zkontrolovat. Podle potřeby mohou podle pokynů odpovědného pracovníka, případně odborného poradce, přistoupit k asanaci kontaminovaného místa dle bodů d) a f). f) Validované postupy detekce přítomnosti geneticky modifikovaných organismů Zjišťování kontaminace vzduchu Metoda slouží k monitorování úniku GMO do prostoru. Provádí se rozložením otevřených agarových misek v prostoru možné havárie. Půda v agarových miskách je svým složením specifická pro testované mikroorganismy, s nimiž se pracuje a u kterých hrozí riziko úniku, s antibiotikem (ampicilin, kanamycin, spektinomycin) selektujícím GMO s plazmidem nesoucím genetickou modifikaci, případně bez antibiotik, pokud není možné některou z modifikací tímto způsobem identifikovat. Misky s půdou se otevřené položí do prostor s potenciálním rizikem úniku. Po 15 minutách se opět přikryjí a nechají inkubovat v termostatu na 37 °C resp. 30 °C podle mikroorganismu po dobu 1–3 dnů. V případě nárůstu kolonií se genetická modifikace vylučuje resp. dokazuje polymerasovou řetězovou reakcí (PCR) s příslušnými primery. V případě pozitivní PCR reakce následují opatření na zneškodnění detekovaného geneticky modifikovaného mikroorganismu. Zjišťování kontaminace povrchů stěrovou metodou Metoda se provádí setřením povrchu monitorovaného objektu sterilní gázou a následným rozetřením na agarové misky uvedené v metodě zjišťování kontaminace vzduchu. V případě nárůstu kolonií se pokračuje podobně jako v předešlé metodě, metodou PCR a následnými opatřeními na likvidaci havárie. Detekce GMO pomocí polymerasové řetězové reakce (PCR) Základní metodou detekce GMO je amplifikace úseku genu, ohraničeného zvolenými oligonukleotidy (primery) pomocí PCR. V případě pochybnosti se provádí sekvenování amplifikovaného úseku a porovnání se známou sekvencí genu. Vzor testu přítomnosti rekombinantní DNA s využitím PCR: Složení reakční směsi (50 µL):



Složka Extrakt testovaného vzorku 10× konc. pufr pro Taq polymerasu dNTP (20 mM) Oligonukleotid 1 Oligonukleotid 2 Taq polymerasa voda destilovaná

4/5

Objem 1 µL 5 µL 1 µL 1 µL (100 pmol) 1 µL (100 pmol) 1 µL 40 µL

Program automatického cyklátoru: Číslo cyklu 1 2

Počet cyklů 1 30

3

1

Teplota (°C) 94 94 50 72 72

Čas (s) 120 30 30 60 300

10 µl produktu se pak podrobí elektroforetické analýze. g) Validované metody a postupy použitelné k likvidaci GMO a k dekontaminaci prostoru Pro zneškodnění geneticky modifikovaných organismů a dekontaminaci uzavřeného prostoru není nutná izolace prostor zasažených havárií. Únik bakterií je třeba likvidovat dezinfekčními prostředky, Ajatinem a následně přípravkem SAVO, 2% roztokem chloraminu nebo kys. peroctovou. Jednotlivé drobné předměty, které byly únikem zasaženy, je nutno autoklávovat, pokud tímto postupem nedojde k jejich poškození. V takovém případě jsou použity chemické dezinfekční prostředky. V případě zjištění GMO i po této dekontaminaci je nutno dezinfekci provádět na větší ploše alternativním dezinfekčním prostředkem. Po dezinfekci prostor je vhodné přistoupit k plošnému ozařování prostoru a ploch germicidní UV lampou nejméně po dobu 1 h ze vzdálenosti nejdále 2 m. Dle potřeby je prostor ozařován UV lampou přes noc. h) Metody izolace prostor a zařízení zasažených havárií, včetně metod kontroly účinnosti izolace Do provedení kontroly přítomnosti GMO mimo prostor pro uzavřené nakládání a do provedení případné dekontaminace je okolní prostor v přiměřeném rozsahu uzavřen. V případě podezření šíření mimo určenou místnost budou uzavřena okna a vstupní dveře a provede se úplná dekontaminace celého pracoviště (chemicky a germicidní UV lampou). Kontrola izolace se provádí metodami detekce GMO popsanými v bodě f), v případě zjištění GMO jsou likvidovány postupy dle bodu g). i) Popis a nákres uložení asanačních prostředků použitelných k likvidaci geneticky modifikovaných organismů a dekontaminaci zasaženého prostoru. Asanační prostředky: Ajatin, SAVO 2%, chloramin, kys. peroctová a germicidní UV lampa jsou umístěny na viditelných, označených místech v prostorách určených pro práci s GMO. j) Postupy na ochranu zdraví lidí, zvířat, životního prostředí a biologické rozmanitosti Vzhledem k tomu, že z hodnocení rizika nevyplývá nebezpečí okamžitého ani dlouhodobého škodlivého účinku uniklých GMO na zdraví lidí, zvířat, na životního prostředí a biologickou



5/5

rozmanitost, nejsou nutná žádná zvláštní opatření na ochranu zdraví v případě havárie, mimo ochrany souvisejí s vlastní podstatou havárie (např. požár), nebo s postupy dekontaminace (ochrana před dráždivými účinky při expozici aktivnímu chlóru ze SAVO, ochrana před účinky germicidního UV záření. Součástí ochrany před účinky GMO je důsledná inaktivace kultur, dekontaminace zasažených prostor a její kontrola. k) Popis postupu zajištění následného monitoringu prostor po ukončení asanace Kontrola přítomnosti geneticky modifikovaných organismů v prostoru, na plochách a zařízení se provádí postupy detekce popsanými v bodě f). l) Obce, případně osoby, kterým je havarijní plán předkládán podle § 20 odst. 3 zákona Havarijní plán bude zaslán na magistrát hl. m. Prahy, odbor krizového řízení, František Janich, [email protected], telefon: 236 002 902, a dále na Hasičský záchranný sbor hl.m. Prahy, odbor ochrany obyvatelstva a plánování, Sokolská 62, 121 24 Praha 2. m) Způsob vyrozumění správních orgánů uvedených v § 27 zákona v případě havárie V případě havárie budou informováni pracovníci odboru environmentálních rizik Ministerstva životního prostředí: 1) telefonicky: Ing. Zuzana Doubková (vedoucí Oddělení - sekretariátu České komise pro nakládání s GMO a produkty), tel. 267122922, fax 267126922 2) elektronickou poštou: [email protected] (vedoucí Oddělení - sekretariátu České komise pro nakládání s GMO a produkty), [email protected], [email protected] 3) písemně poštou: MŽP, Odd.- sekretariát České komise pro nakládání s GMO a produkty, Vršovická 65, 100 10 Praha 10 Vzhledem k povaze a vlastnostem GMO a rozsahu nakládání s nimi na pracovišti MBÚ se varování občanů nepovažuje za účelné. Havarijní plán vypracovali: Ing. Václav Kobliha (vedoucí technicko-hospodářské správy MBÚ) a Ing. Miroslav Pátek, CSc. n) Vyjádření odborného poradce: Havarijní plán odpovídá požadavkům zákona 78/2004 Sb. ve znění zákona č. 346/2005 Sb. a vyhlášce 209/2004 Sb. Datum: 10. 10. 2006

Podpis:

Ing. Miroslav Pátek, CSc. odborný poradce pro GMO

Havarijní plán pro práci s geneticky modifikovanými mikroorganismy Mikrobiologický ústav AV ČR

Recommend Documents