GOLD IMMUNOCHROMATOGRAPHIC ASSAY (GICA) SEBAGAI IMUNOSENSOR MENDETEKSI ANTIBODI Bacillus Anthracis PENYEBAB PENYAKIT ZOONOSIS

GOLD IMMUNOCHROMATOGRAPHIC ASSAY (GICA) SEBAGAI IMUNOSENSOR MENDETEKSI ANTIBODI Bacillus Anthracis PENYEBAB PENYAKIT ZOONOSIS

Gunarti, Yunan Jiwintarum, Awan Dramawan, Lale Budi Kusuma Dewi

Abstract: The purpose of this study was to identify patterns of protein antigens full / secretory antigens may be antigenic protein (PA) of Bacillus anthracis by the use of SDS-PAGE method (Laemmli) which can be used as bioreseptor on the test device fabrication method for detecting antibodies GICA of Bacillus anthracis , identify patterns of proteins that are antigenic protein (PA) or indicate the nature of the reactivity of Bacillus anthracis by using Western blotting and Determining the specificity and sensitivity of the test method to detect antibodies GICA Bacillus anthracis when using the results of the ELISA method as a reference. This study is a descriptive observational study. Research variable antigenic protein of Bacillus anthracis as bioreseptor and Antibodies from Bacillus anthracis as imunosenssor. The test prototype test device made using 20 sample with ELISA as a reference for calculating the sensitivity and specificity. The results of this study were identified band – band of 92 kDa, 68 kDa, 54 kDa, 43 kDa, 29 kDa and 18 kDa that can be used as bioreseptor on GICA, identified a pattern of proteins that are antigenic or indicate the nature of the reactivity of the Bacillus anthracis 68 kDa by Western blotting using the method, extract secretory antigen (SA) Bacillus anthracis can be used as a test device bioreseptor on GICA method for the detection of IgG antibodies against Bacillus anthracis and sensitivity and specificity of the test method to detect antibodies GICA Bacillus anthracis when using the results of the ELISA method as a reference each is 100% and 87.5%. Kata Kunci : Immunosensor, Bacillus anthracis, Gold Immunochromatographic Assay (GICA). antraks dari bangkai hewan yang mati karena

LATAR BELAKANG Antraks

merupakan

penyakit

antraks. Spora-spora ini dapat tetap hidup selama

prototipe

puluhan tahun pada pH 6,5 pada suhu yang sesuai.

dalam sejarah mikrobiologi yang disebabkan oleh

Hewan merumput yang terinfeksi melalui luka pada

Bacillus anthracis. Antraks terutama merupakan

selaput lendir menjadi penyambung rantai terus

penyakit pada biri-biri, sapi kuda dan hewan lainnya.

menerus. Kontak dengan hewan yang terinfeksi atau

Infeksi pada manusia biasanya dengan masuknya

dengan kulit dan bulunya merupakan sumber infeksi

spora melalui luka pada kulit atau selaput lendir dan dengan inhalasi spora kedalam paru-paru. tumbuh

pada

jaringan

tempat

masuk,

pada manusia (Jawetz,1996). Ada tiga bentuk klinis

Spora

antraks pada manusia, yaitu, pertama, antraks

dan

cutaneus (kulit). Sekitar 95 % antraks pada manusia

pertumbuhan organisme vegetatif mengakibatkan

merupakan antraks kulit. Kulit yang terkena akan

pembentukan edema gelatinosa dan kongesti. Bakteri

lecet, menjadi papula kecil berwarna merah dan

kemudian menyebar melalui getah bening ke dalam

menimbulkan rasa gatal, yang kemudian menjadi

aliran darah dan berkembang biak dengan bebas

gelembung yang berisi cairan (vesikel), kemudian

dalam darah dan jaringan segera sebelum dan

pecah dan bagian tengahnya berwarna hitam. Luka

sesudah kematian hewan. Tanah tercemar oleh spora

___________________________________________________________________________ Gunarti, Lale Budi Kusuma, Yunan Jiwintarum : Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Mataram, Jl. Prabu Rangkasari Dasan Cermen Sandubaya Mataram

1419

JURNAL KESEHATAN PRIMA VOL. 9 NO. 1, PEBRUARI 2015

ini tidak nyeri. Kuman dapat menjalar ke kelenjar

dan Sulawesi Tenggara; Nusa Tenggara Barat dan

getah bening regional. Apabila penyakit berlanjut

Nusa Tenggara Timur masih erupakan daerah yang

menimbulkan kuman beredar dalam aliran darah dan

mempunyai kecenderungan muncul wabah antraks

menyebabkan kematian. Kedua, antraks inhalasi

secara periodik. Seringnya terjadi wabah penyakit,

(saluran pernafasan). Antraks inhalasi dapat terjadi

memerlukan usaha pengendalian penyakit yang

karena orang menghirup udara yang mengandung

terencana, termasuk cara diagnosa penyakit yang

spora antraks. Sering terjadi pada pekerja pengumpul

cepat dan tepat agar penyakit dapat segera diatasi

wool. Dimulai setelah masa inkubasi 1 - 6 hari

(Siregar,E.A,2002;Depkes R.I,2003). Salah satu cara

dengan gajala yang tidak khas seperti lesu, lelah,

untuk pencegahan timbulnya prevalensi antraks

nyeri otot dan demam. Mungkin juga batuk yang

adalah pada daerah bebas antraks,

kering dan rasa tidak nyaman pada dada. Kemudian

karantina berupa pelarangan masuknya hewan dari

disusul dengan sesak nafas dan nyeri dada yang

daerah tertular ke daerah bebas antraks. Tindakan

hebat. Kematian dapat terjadi secara mendadak

preventif lainnya adalah hewan yang akan masuk ke

karena lumpuhnya otot pernafasan oleh toksin

dalam suatu wilayah bebas antraks diperiksa dahulu

antraks. Angka kematian akibat antraks inhalasi

sebelum

sekitar 75 %. Bahkan antraks jenis ini sering terjadi

(Priyonggo dan Budiono, 2007). Test diagnostik

pada daerah perang yang menggunakan antraks

laboratorium

sebagai senjata biologis untuk melawan musuh.

indentifikasi adanya

Ketiga, antraks gastrointestinal (saluran pencernaan).

dengan : Pewarnaan sediaan kering dengan teknik

Terjadi bila orang mengonsumsi daging yang

pewarnaan immunofluoresensi akan terlihat bakteri

terkontaminasi kuman antraks. Masa inkubasi 2-5

berbentuk batang dengan penataan berantai. Bahan

hari. Pasien akan merasa sakit tenggorokan, demam,

pemeriksaan yang diperlukan untuk pewarnaan ini

nyeri menelan, mual dan muntah kemudian menjadi

adalah lesi lokal atau darah hewan yang mati. Test

nyeri perut yang sangat hebat yang dapat disertai

ini cepat dan mudah tapi membutuhkan ketrampilan

muntah darah dan diare. Angka kematian pada

dan pengalaman dari pemeriksa. Bahan pemeriksaan

antraks gastrointestinal sampai 60 % (Priyonggo dan

berupa cairan atau nanah dari lesi lokal, darah dan

Budiono,

daerah

dahak dibiakkan dalam media yang sesuai dalam

endemik antraks, menurut laporan Depkes R.I tahun

masa inkubasi tertentu. Setelah dibiakkan, biakan

2003

tercatat 11 provinsi endemis anthraks pada

Bacillus anthracis disuntikkan pada marmot atau

binatang, sedangkan 5 provinsi (Jabar, Jateng, NTB,

kelinci secara intraperitoneal untuk mengetahui

NTT dan DI Yogyakarta) tercatat telah terjadi kasus

virulensinya. Cara ini sangat akurat mengingat hasil

antraks pada manusia. Siregar (2002), Sumatera

yang dikeluarkan bisa sampai pada virulensi bakteri

(kecuali provinsi Jambi), Jawa Barat, Jawa Tengah,

dan sensitivitasnya terhadap obat. Test serologi

Sulawesi Selatan, Sulawesi Tengah, Sulawesi Utara,

menggunakan prinsip reaksi antara antigen dan

2007).

Indonesia

merupakan

1420

diberi

ijin

yang

masuk

biasa

wilayah

tindakan

tersebut

digunakan

untuk

Bacillus anthracis

adalah

Gunarti, Prinsip Gold Immunochromatographic Assay

antibodi spesifik. Reaksi antara antibodi pada hewan

kemampuan yang khusus atau peralatan mahal dan

atau manusia yang terinfeksi atau divaksinasi dengan

dapat digunakan untuk mendeteksi adanya antigen

antigen yang sesuai akan memperlihatkan presipitasi

atau antibodi secara cepat dan yang paling penting

atau hemaglutinasi. Metode ini mudah tetapi mahal

dapat digunakan oleh semua golongan masyarakat.

dan cenderung sulit diterapkan di lapangan karena

Protein antigenik yang baik dan terbukti mampu

reagensia yang digunakan harus dalam suhu tertentu

berikatan secara spesifik dengan antibodi Bacillus

o

(4-8 C) (Jawetz, 1996). Berdasarkan kelemahan –

anthracis

kelemahan dari teknik diagnostik Bacillus anthracis

polysaccharide yang merupakan komponen dari

maka perlu dipikirkan membuat suatu perangkat uji

dinding sel Bacillus anthracis, dari hasil presipitat

sederhana yang sensitif dan selektif dapat mendeteksi

Bacillus anthracis yaitu dalam ekstrak guanidine,

keberadaan antibodi terhadap Bacillus anthracis

yang dicuci 2 kali dengan 1 volume aquadest dan

sangat diperlukan oleh masyarakat, terutama di

dikering bekukan didapatkan hasil analisa SDS-

daerah Nusa Tenggara Barat yang masyarakatnya

PAGE menunjukkan berat molekul 91 kDa dan

banyak peternak Sapi, Kambing, Kuda, Kerbau dan

proten antigenik yang menentukan virulensi Bacillus

komsumsi daging hewan – hewan tersebut pada

anthracis terdapat pada kapsul yaitu toksin anthraks

masyarakat

Pemeriksaan

dan poly-γ-D-Glutamic acid (PGA) kapsul (Lyli N

serologi, baik untuk mendeteksi antiodi maupun

dan Rahmat SA,2008). Penelitian ini bertujuan

antigen, masih merupakan pilihan diagnostik yang

membuat sebuah perangkat uji berdasarkan prinsip

sangat penting di bidang kedokteran, kedokteran

Gold Immunochromatographic Assay (GICA) untuk

hewan dan ilmu – ilmu biologi. Salah satu teknik

mendeteksi antibodi (imunosensor) dari Bacillus

yang sangat berkembang pesat dan paling banyak

anthracis dengan menggunakan antigen penuh dari

diterapkan adalah tes imunokromatografi yang salah

Bacillus anthracis sebagai bioreseptor yang diujikan

satunya

Gold

pada serum hewan coba Sapi. Pemilihan hewan coba

Immunochromatographic Assay (GICA). Format

ini karena banyak terdapat diseluruh wilayah NTB,

pemeriksaan deteksi antibodi atau antigen yang baru

merupakan sumber penularan penyakit Anthrax ke

Gold Immunochromatographic Assay (GICA) adalah

manusia (penyakit zoonosis) dan banyak dikomsumsi

merupakan sebuah teknik imunokromatografi baru

oleh masyarakat.

yang menggunakan membrane selulose sebagai

onservasinal analitik. Analisa data untuk mengetahui

pembawa dan koloidal emas berlabel antigen atau

sensitivitas dan spesifitas perangkat uji GICA dengan

antibodi digunakan sebagai tracer. Teknologi ini

pembanding menggunakan hasil pemeriksaan ELISA

memiliki banyak keuntungan dibandingkan dengan

sebagai referensi. Hasil penelitian ini diharapkan

imunoassay yang lain,

yang

bermanfaat bagi masyarakat luas karena dapat

sedehana, operasional yang cepat, hasil yang cepat,

menghasilkan perangkat uji yang sederhana, spesifik

harga murah, tidak membutuhkan teknisi dengan

dan sensitif untuk identifkasi antibodi Bacillus

umum

adalah

adalah

tinggi.

metode

seperti prosedur

1421

adalah

galactose/N-acetylglucosamine

Jenis penelitian ini adalah


anthracis yang dapat digunakan sebagai metode

Tween (TBST), Tris-buffered saline (TBS) bovine

alternatif terhadap antibodi Bacillus anthracis.

serum

albumin,

alkaline phospatase-conjugated

antihuman IgG Fab spesific (anti-human IgG METODE PENELITIAN Penelitian

ini

conjugated, merupakan

Sigma),

5-bromo-4-chloro-3-

indolylphosphate (BCIP-AP), nitroblue tetrazolium,

penelitian yang

alkaline phospatase substrate buffer. 3). Reagen

menggambarkan kemampuan imunosenssor dari

yang digunakan dalam pembuatan perangkat uji

ekstrak antigen penuh / sekretori antigens dari

adalah Tris-buffered salin-Tween, protein A – koloid

Bacillus

emas, goat anti mouse, protein membrane Bacillus

observasional

deskriptif

anthracis

yaitu

dapat

penelitian

digunakan

sebagai

bioreseptor pada pembuatan perangkat uji metode

anthracissebagai bioreseptor.

GICA untuk mendeteksi antibodi dari Bacillus

Cara pembuatan perangkat uji metode GICA

anthracis

untuk

dan

menentukan

spesifisitas

dan

mendeteksi

antibodi

dari

Bacillus

sensitivitas perangkat uji metode GICA untuk

anthracis:

mendeteksi

1. Komponen penting dalam pembuatan GICA :

antibodi

Bacillus

anthracis

bila

menggunakan hasil pemeriksaan metode ELISA

a) Membran Nitrocellulose  sebagai tempat

sebagai referensi. Populasi dan sampel dalam

immobilisasi antigen dan Goat anti-Mouse

penelitian ini adalah menggunakan serum koleksi

IgG membentuk garis tes dan garis kontrol,

Unit Riset Biomedik RSUP NTB. Jumlah sampel

dengan Spesifikasi Immunopore FP (Ref.

yang digunakan adalah 20 serum koleksi.

78336403) 1 Rolle/Roll.R : II/4. Ukuran : 25

Bahan Penelitian : Protein antigenik dari whole sel

mm x 50 mm, dengan ukuran pori : 5 µm,

/

yang

dengan persyaratan daya kapilaritas 110 – 150

didapatkan dari koleksi isolat Unit Riset Biomedik

s / 4 cm2, warna putih bersih (tidak ada bercak

RSUP NTB, Serum coba (serum negatif dan serum

atau noda) dan bersifat Hidrofilik.

sekretori

antigens

Bacillus

anthracis

Pipet

b) Signal Reagent Pad/Polyesther  tempat

mikro, sonicator, centrifuge, mikroskop, BioJet

dilekatkannya Signal Reagent (SR) berupa

TM

cutter kinematic automation PS-360,

protein A-Colloidal Gold, dengan spesifikasi

oven, apparatus mini-gel (Bio-Rad, Richmond,

Rapid 24 (Cat. No. 8131.1750) , ukuran 17

California). Reagen Penelitian : 1). Reagen yang

mm x 50 mm, ukuran maximal pori : 22 µm,

digunakan untuk preparasi antigen adalah PBS.2).

ketebalan : 340 µm, kapasitas penyerapan : 55

Reagen yang digunakan untuk elektroforesis dan

mg/cm,

western blott adalah Tris-HCL pH 6,8, SDS, β-

penyerapan : 55 mg/cm, persentase Gold-

mercaptoethanol (ME), marker BM, bromphenol

Conjugate yang dilepaskan setelah 90 detik :

blue

89 % serta daya kapilaritas : 38 s/4 cm2.

kontrol positif).

3000,

dye,

Instrumen Penelitian :

comassie

brilliant

blue,

aquades,

acrylamid, APS, TEMED, Tris-buffered saline-

1422

dengan

persyaratan

kapasitas


c) Absorbent Paper  Menyerap sisa – sisa

dikonjugasikan

untuk

molekul

Absorbent type CF6 (Cat. No. 81162750),

polypeptida,

ukuran 27 mm x 50 mm dengan ketebalan

polysakarida, enzim, dan asam nukleat.

1370 µ. Persyaratannya Daya kapilaritas 65

Memberikan sensitifitas yang tinggi (≥ 90%).

2

protein

/

macam

sampel dan buffer / larutan dapar. Spesifikasi

2

seperti

berbagai

karbohidrat,

antibodi, polymer,

h) Kartu  Kertas dengan ketebalan ± 0,05 cm,

s/4 cm . Daya serap air 128 mg/cm dan bersifat hidrofilik.

yang permukaanya sedikit mengkilap, terdiri

d) Buffer  Larutan dapar (penyangga pH),

dari 2 lapisan yang direkatkan, ukuran

pencuci, menghilangkan ikatan non spesifik.

panjang 13 cm, lebar 7,5 cm. Pada bagian

Spesifikasi adalah larutan penyangga pH

depan kartu terdapat jendela pengamatan

sekaligus

karena

berukuran 1,2 cm x 1,5 cm. Persyaratan

mengandung campuran Tween 20 dengan

memiliki daya rekat yang baik, memiliki

konsentrasi 1% dan tris 0,1 M. Persyaratan

ketebalan yang cukup (tidak melebihi 0,05

mampu meminimalisir ikatan – ikatan protein

mm) dan kuat/tidak mudah lapuk.

pembersih

(deterjen)

penganggu yang menghalangi berikatannya

i) Silica gel  Berbentuk butiran mirip kaca

Signal reagent dan antigen dengan antibodi

yang bersifat tidak elastis, dengan kemasan 1

spesifik.

gram.

e) Antigen  Merupakan Protein antigenik dari

Persyaratan

terbentuknya

mampu

kelembaban

yang

mencegah berlebih

whole sel / sekretori antigens Bacillus

hingga 50% tanpa merubah kondisi zatnya.

anthracis. Persyaratan merupakan antigen

Kejenuhannya dapat diamati langsung dengan

spesifik,

melihat perubahan warna butiran yang semula

berupa

larutan

antigen

yang

mengandung kadar protein 2,5 µg/µl.

biru/ungu menjadi merah muda.

f) Goat Anti-Mouse  Antibodi sekunder yang mengikat

sejumlah

rantai

HDPE berdiameter ± 1,5 cm. Berwarna putih

mampu

dan ringan, dengan lubang tetes berdiameter

berikatan baik dengan Signal Reagen (SR) ≥

0,3 cm. Persyaratan kuat namun sedikit

90%.

lentur,praktis,ringan. Aliran buffer keluar

Immunoglobulin

G.

besar

j) Botol Buffer  Terbuat dari bahan plastik

Persyaratan

g) Signal Reagen (SR)  Merupakan suspensi dari

partikel

emas

dengan

protein

dalam bentuk tetesan, sehingga volume dapat

A,

terukur 30 µl. k) Aluminium Foil  Lembaran metal yang

berukuran 10 – 50 nm dan diameter 15 nm. Pada

keadaan

basa,

suspensi

ini

akan

tipis, nampak mengkilap, dan ringan, dengan

mengalami perubahan warna menjadi merah,

ketebalan ± 0,006 mm. Persyaratan tidak

o

dengan suhu penyimpanan yang baik 4 C.

robek, tidak berlubang dan praktis.

Persyaratan tidak bersifat toxic/beracun, dapat

1423


dapat digunakan sebagai bioreseptor pada

2. Format test dalam pembuatan perangkat uji

GICA.

GICA : Format test  Gold Immunochromatographic

2)

Pemisahan fraksi protein dengan SDS-

Assay (GICA), sampel yang diuji berupa serum,

PAGE (Laemmli)

luas strip : 1,25 cm2 (0,5 cm x 2,5 cm), hasil atau

Protein yang diperoleh dipisahkan menurut

garis yang terbentuk dapat langsung diamati

bobot

dengan makroskopis. Terdiri dari 3 komponen

SDS_PAGE dalam apparatus mini-gel (Bio-

penting yaitu Strip antigen, Signal reagent Pad/

Rad,

Polyesther, Absorbance Paper. Pada strip antigen

dilakukan elektroforesis, protein dan marker

(membrane Nitrocellulose) terdapat 2 garis, salah

dipanaskan pada suhu 100oC selama 5 menit

satunya dilekatkan cairan Goat Anti-Mouse pada

dalam buffer Tris-HCL pH 6,8 yang

penanda garis tes. Penambahan Signal Reagent

mengandung

(SR) pada Signal Reagen Pad dan pemberian

mercaptoethanol (ME). Konsentrasi gel

buffer pada bantalan sampel dan Signal reagent

yang digunakan adalah 4,5% untuk stacking

Pad.

gel dan 11% untuk separating gel, protein

3. Tahapan

–

tahapan

kerja

Sonikasi

Protein

Richmond,

2%

menggunakan

California).

SDS

dan

Sebelum

5%

β-

yang dipisahkan sebanyak 20µl. Satu sumur

pembuatan

diisi dengan 10 µl marker BM (SDS-PAGE

perangkat uji GICA : 1)

molekulnya

membrane

molecular weight standards, brood range,

Bacillus

anthracis.

Bio-Rad). Migrasi protein dilakukan di

Isolat murni Bacillus anthracis yang telah di

dalam tegangan listrik 30 volt hingga

tanam pada media BAP sebanyak 10 plate

bromphenol blue dye mencapai tepi gel.

dipanen dalam larutan PBS, selanjutnya

Kemudian dilakukan pengecatan dengan

dilakukan sonikasi dengan alat sonicated

comassie brilliant blue selama 24 jam.

sambil

digetarkan

untuk

mendapatkan

3)

protein membrane antigenik. Hasil sonikasi

Western blotting Protein yang telah menjadi fraksi protein,

o

dipusingkan pada 4000 rpm 4 C selama 15

dipindahkan ke membran polyvinylidene

menit. Supernatan diambil dan dilakukan

difluorida (PVDF) menggunakan semi-dry

pencucian dengan cara pellet disuspensi

blotter dalam arus konstan 100 volt selama

ulang dengan PBS dan disentrifus 10000

60 menit. Membran blot kemudian dicuci

rpm selama 1 jam. Pencucian dilakukan

dengan Tris-buffered salin-Tween (TBST)

sebanyak

pellet

0,05% dengan agitasi selama 10 menit, dan

diresuspensi dengan PBS, disimpan sebagai

diblocking dengan blocking buffer TBST

protin antigenic membrane sel

0,1%

3

kali.

Setelah

itu,

Bacillus

yang mengandung bovine serum

albumin 1 % semalam pada suhu 4oC.

anthracis untuk uji selanjutnya sehingga

1424


Setelah itu membran dicuci 3x dengan

dapat memberikan hasil positif terhadap

TBST 0,05% masing-masing selama 10

serum

menit agitasi. Membran blot diinkubasi

negative terhadap serum negative atau

dengan serum studi pengenceran 1:100

memberikan hasil negative pada kontrol

selama 1 jam pada suhu kamar dengan

negative yaitu immunodot assay tanpa

agitasi pelan, kemudian dicuci 3 kali dengan

antigen,

TBST 0,05% masing-masing selama 10

digunakan

menit dengan agitasi. Selanjutnya membran

perangkat uji GICA. Adapun

blot diinkubasi dengan alkaline phospatase-

kerjanya adalah sebagai berikut :

conjugated antihuman IgG Fab spesific

Diteteskan 5 µl protein membrane antigenic

(anti-human

/ sekretori antigen Bacillus anthracis pada

IgG

conjugated,

Sigma)

dan

maka

memberikan

antigen

sebagai

hasil

tersebut

dapat

bioreseptor

pada teknik

pengenceran 1:5000 selama 2 jam pada suhu

permukaan

kamar dengan agitasi pelan, kemudian

kemudian

dicuci 3 kali dengan TBST 0,5% dilanjutkan

inkubator selama 1 jam pada suhu 37oC.

1 kali dengan TBS selama 10 menit dengan

Sebanyak 10 µl serum diteteskan pada

agitasi. Langkah selanjutnya, membran blot

sumuran,

dibiarkan

yang telah berisi hibridisasi antigen-antibodi

kemudian

diteteskan

dideteksi

dibiarkan

hingga

dengan

indolylphosphate

5-bromo-4-chloro-3(BCIP-AP)

membran

nitroselulose,

dikeringkan

menggunakan

hingga 2

µl

meresap,

meresap bufer

dan

selanjutnya

sebagai

diteteskan 5 µl signal reagent (Gold

substrat dan nitroblue tetrazolium sebagai

coloidal) dan diamati pembentukan spot

indikator

berwarna merah (Peng rt all, 2007).

kromogenik

dalam

alkaline

phospatase substrate buffer pada ruangan

5)

Rancangan

alat

yang

dibuat

sebagai

gelap, suhu kamar, dengan agitasi pelan

mapping pemuatan perangkat uji Bacillus

selama 1-10 menit sampai muncul pita

anthracis adalah menggunakan rancangan

pertama. Reaksi dihentikan dengan cara

yang ada di Laboratorium PT Bioramp di

menuang BCIP-AP substrate buffer dan

Mataram yang digambarkan sebagai berikut:

mencuci membran dengan aquabidest dalam agitasi pelan selama 5 menit. 4)

positif

Immunodot assay Immunodot

assay

merupakan

uji

pendahuluan sebelum antigen digunakan sebagai bioreseptor pada perangkat uji dengan prinsip GICA. Apabila dengan ekstrak antigen sekretori antigens (SA)

1425


Automation

PS-360.

nitroselulosa,

absorben

Membran paper

dan

poliester dirakit pada kartu tes seperti pada gambar rancangan alat. Diteteskan Antigen Bacilllus anthracis

sebanyak 10 µl larutan gold coloidal pada poliester di atas jendela pengamatan dan dikeringkan dengan menggunakan oven pada suhu 37oC selama 30 menit sampai dengan 1 jam, kartu dipotong – potong selebar

5

mm

ditempelkan

bentuk

pada

kartu

strip, tes.

dan Kartu

diletakkan dengan posisi terbuka di atas

Gambar 1 : Rancangan alat perangkat uji Bacillus anthracis

tempat yang datar. Sebanyak

20 µl

Mekanisme kerja perangkat uji adalah :

sampel serum diteteskan pada bantalan

Mula – mula disiapkan kartu sepanjang

poliester di dekat zona kontrol. Sebanyak

300 nm yang terdiri atas membran

1 tetes larutan buffer diteteskan pada

nitroselulose

digunakan

bantalan yang sama dan 2 tetes buffer

sebagai tempat aplikasi antigen dan

pada bantalan poliester tempat signal

kontrol,

reagen

pada

yang

sisi

akan

atas

dan

bawah

gold

coloidal,

selanjutnya

membran ditempeli poliester dengan lebar

diinkubasi beberapa saat sampai sampel

1 cm, dengan sedikit menutupi membran

dan buffer meresap sampai garis batas.

selulose. Antigen di aplikasikan secara

Kartu test segera ditutup dan diamati hasil

linear di atas membran nitroselulose

pemeriksaan dari jendela pengamatan 15

sebagai garis tes menggunakan BioJet

sampai 20 menit kemudian. Hasil positif

TM

3000 dengan konsentrasi 2,5 ug/ul

jika muncul 2 garis berwarna merah pada

dengan ketebalan 1 ul/mm membentuk

garis kontrol dan garis test. Hasil negatif

garis sepanjang 280 mm (garis tes = garis

jika muncul 1 garis berwarna merah pada

line). Sejajar dengan garis tes, goat anti

garis kontrol. Hasil invalid jika tidak

mouse-IgG

dengan

muncul garis sama sekali atau hanya

disemprotkan berjarak 5 mm dari garis tes

muncul garis pada tes (Bioramp,2009).

dan akan membentuk

Hasil SDS PAGE dan Western – Blooting

Selanjutnya

diaplikasikan

membran

garis kontrol. nitroselulosa

disajikan

dalam

bentuk

deskriptif.

tersebut dipotong berbentuk strip dengan

Sensitivitas

lebar 5 mm menggunakan Kinematic

pemeriksaan Antibodi terhadap Bacillus

1426

dan

spesifisitas

hasil


anthracis menggunakan perangkat uji

yang

metode GICA dibandingkan dengan hasil

menunjukkan reaktivitas dengan antisera serum

pemeriksaan

Bacillus

kontrol Bacillus anthracis. Adapun hasil dari Analisa

anthracis menggunakan metode ELISA

Western blotting metode dari Towbin dari protein

sebagai referensi diukur berdasarkan :

antigenik Bacillus anthracis yang pertama adalah :

Cara

IgG

terhadap

menghitung

sensitivitas

diharapkan

sebagai

bioreseptor

yang

adalah

proporsi antara hasil uji positif terhadap sampel

positif

GICA

dengan

menggunakan hasil

uji

metode positif

92 kDa

1

68 kDa

2

menggunakan metode ELISA. Spesifisitas adalah proporsi antara hasil uji negatif terhadap sampel negatif menggunakan GICA

dengan

hasil

uji

negatif

menggunakan metode ELISA (Budiarto, 2004).

Gambar 2. Hasil dari Analisa Western blotting metode dari Towbin dari protein antigenik Bacillus anthracis yang pertama

HASIL DAN PEMBAHASAN

Gambar 2. menunjukkan hasil Western blotting a. Hasil 1.

pertama. Hasil ini menunjukkan terdapat dua pita protein

Hasil SDS-PAGE (Laemmli). Hasil

analisa

protein

SDS

yang

diharapkan

bersifat

reaktif

dan

diharapkan dapat digunakan sebagai bioreseptor

–PAGE

dalam perangkat uji metode GICA untuk mendeteksi

menunjukkan bahwa hasil Analisa SDS – PAGE

antibodi dari Bacillus anthracis. Satu pita meragukan

protein yang menunjukkan pofil pemisahan protein

terlihat tebal (1) pita 92 kDa yang diperkirakan

yang terbaik adalah perbandingan antara Protein

galactose/N-acetylglucosamine polysaccharide dari

Antigenik (PA) dari Bacillus anthracis dengan

dinding sel Bacillus anthracis dan satu pita protein

reducing Sampel Buffer (RBS) dengan perbandingan

yang jelas (2) pita 68 kDa yang diperkirakan poly-γ-

1: 1. Pita – pita protein yang terbentuk masih utuh

D-glutamic

dan jelas dengan urutan 92 kDa, 68 kDa, 54 kDa, 43

acid

(PDA)

dari

kapsul

Bacillus

anthracis. Kedua protein antigenik yang muncul ini

kDa, 29 kDa, dan 18 kDa sehingga dapat digunakan

dapat digunakan untuk kandidat bioreseptor dalam

sebagai bioreseptor pada GICA.

perangkat uji. Untuk mendapatkan hasil yang lebih 2.

Hasil Western blotting metode dari Towbin.

baik dari protein yang dinginkan untuk protein

dari

antigenik dalam perangkat uji maka dilakukan

Towbin bertujuan untuk mendapatkan jenis protein

analisa Western blotting kedua. Adapun hasil uji

Analisa

Western

blotting

metode

Western blotting kedua adalah sebagai berikut :

1427


bioreseptor pada perangkat uji dengan prinsip GICA. Apabila dengan ekstrak antigen sekretori antigens (SA) dapat memberikan hasil positif terhadap serum positif dan memberikan hasil negative terhadap 68 kDa

serum negative atau memberikan hasil negatif pada kontrol negatif yaitu immunodot assay tanpa antigen,

Gambar 3. Hasil dari Analisa Western blotting metode dari Towbin dari protein antigenik Bacillus anthracis yang kedua

maka antigen tersebut dapat digunakan sebagai bioreseptor pada perangkat uji GICA.

Gambar 3. menunjukkan hasil Western blotting kedua yang lebih jelas yang memperlihatkan satu pita

4.

protein yang jelas yaitu pita 68 kDa reaktif yang

Hasil optimalisasi kadar antigen yang ditempelkan pada perangkat uji Bacillus anthracis metode GICA

bersifat antigenik, diperkirakan poly-γ-D-glutamic Optimalisasi dilakukan pada jumlah dan

acid (PDA) dari kapsul Bacillus anthracis yang dapat digunakan

untuk

kandidat

bioreseptor

kadar

dalam

Bacillus

anthracis

yang

akan

ditempelkan pada perangkat uji dengan cara larutan

perangkat uji.

antigen 3.

antigen

Hasil Immunodot assay

yang

telah

dipreparasi

diencerkan

menggunakan buffer carbonat pH 9,6 sehingga dengan

diperoleh serial kadar protein 1,0; 1,5; 2,0 ; 2,5 dan

menggunakan ekstrak sekretorik antigen (SA),

3,0 ng/ul. Antigen ditempelkan pada membran

memberikan reaksi positif dengan serum positif yang

nitrosellulosa menggunakan mesin dispenser Biodot

ditandai dengan tebentuknya warna merah atau spot

(USA) yang akan membentuk garis tes. Sedangkan

merah pada membran nitroselulosa dan sampel

garis kontrol berisi goat-anti-mouse IgG. Membran

negatif memberikan hasil negatif yang ditandai

nitrosellulosa kemudian dikeringanginkan untuk

dengan tidak terbentuknya warna/spot merah pada

kemudian dipotong membentuk strip. Adapun hasil

membra nitroselulosa. Immunodot assay merupakan

Optimalisasi tersebut adalah seperti terlihat pada

uji pendahuluan sebelum antigen digunakan sebagai

tabel 1.

Hasil

Immunodot

assay

Tabel 1. Hasil Optimalisasi kadar antigen yang ditempelkan pada perangkat uji GICA Jumlah Antigen (Ag) yang ditempelkan (ng/ul)

Sampel

Garis Kontrol

Garis tes

3,0

Blanko (Tris buffer)

+

+/-

2,5

Blanko

+

-

2,0

Blanko

+

-

1,5

Blanko

+

-

1,0

Blanko

+

-

1428

Tabel 1. menunjukkan hasil optimalisasi perangkat

uji

terhadap

kadar

antigen

5.

yang

Optimalisasi pada volume serum dilakukan

ditempelkan. Hasil tersebut memberikan gambaran

dengan menggunakan variasi volume serum 5 ul, 10

bahwa kelebihan jumlah antigen akan menimbulkan

ul, 20 ul dan 30 ul. Untuk test menggunakan volume

garis artefak sehingga menjadi positif palsu. Kadar

serum yang masih terbatas pada serum koleksi orang

antigen 2,5 ng/ul adalah kadar maksimal dari antigen

normal untuk panel serum negatif sebanyak 5 tabung

yang ditempelkan yang akan digunakan.Sedangkan dari

haasil

optimalisasi

kadar

yang

Hasil Optimalisasi pada volume serum panel serum negatif dan panel serum positif.

dan serum kontrol positif untuk panel serum positif

terbaik

sebanyak 5 tabung. Adapun hasil optimalsasi

memberikan hasil adalah kadar 1 ug/ul.

perangkat uji terhadap volume serum sebagai sampel seperti terlihat pada tabel 2. Tabel 2. Hasil Optimalisasi volme serum yang digunakan pada perangkat uji GICA No. Serum N1

N2

N3

N4

N5

K1

K2

K3

K4

Volume serum 5 10 20 30 5 10 20 30 5 10 20 30 5 10 20 30 5 10 20 30 5 10 20 30 5 10 20 30 5 10 20 30 5 10 20 30

Garis kontrol -/+ + + + + + + -/+ + + + + + + + + + + + + + + -/+ + + + + + + + + + + -/+

Garis tes -/+ -/+ + + + -/+ -/+ + + + + + -/+ -/+ + + + -/+


1429


K5

5 10 20 30

+ + + -/+

+ + -/+ -/+

Keterangan : N 1-5 Serum normal 1-5, K1-5 Serum kontrol positif 1-5 Tabel 2. menunjukkan hasil optimalisasi perangkat

6.

uji terhadap volume serum/ volume sampel. Hasil tersebut memberikan gambaran bahwa volume yang

Hasil uji coba protipe perangkat uji metode GICA untuk mendeteksi antibodi dari Bacillus anthracis. Uji coba protipe perangkat uji pada pada 20

terlalu sedikit menyebabkan garis kontrol tidak

serum uji (serum negatif dan serum kontrol positif)

muncul. Sebaliknya kelebihan volume sampel serum

yang dirandom dari 30 serum uji (serum negatif dan

menyebabkan garis artefak pada garis test, sehingga

serum kontrol positif) dengan pemeriksaan ELISA

menyebabkan hasil positif palsu. Volume serum

sebagai referensi untuk menghitung Sensitifitas dan

optimal yang digunakan adalah 10 ul.

Spesifitas dari perangkat uji perangkat uji ekstrak antigen penuh/ sekretorik antigen dari Bacillus anthracis metode GICA. Adapun hasil uji tersebut dapat dilihat pada Tabel .3. Tabel 3. Data hasil uji coba protipe perangkat uji metode GICA untuk mendeteksi antibodi dari Bacillus anthracis. No 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20.

Kode Serum 01-11 02-11 09-11 23-11 26-11 30-11 11-11 15-11 18-11 21-11 03-11 07-11 13-11 24-11 27-11 29-11 06-11 04-11 28-11 22-11 Jumlah

Hasil ELISA Pos. (+) (+)

Neg.

(-) (-) (+) (+) (+) (+) (-) (+) (-)

Hasil ICT Bacillus anthracis metode GICA Pos. Neg. (+) (+) (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (-) (+) (-)

(+) (+) (-) (-) (+) (+) (+) (-) (-) 8

12

1430

(-) (-) (+) (+) (+) (+) 13

(-) 7

Tabel 3 menunjukkan hasil bahwa dari 20

sampel positif menggunakan metode GICA dengan

serum yang di periksa dengan menggunakan metode

hasil uji positif menggunakan metode ELISA.

ELISA, 12 sampel serum (60%) dinyatakan positif

Spesifisitas adalah proporsi antara hasil uji negatif

dan 8 sampel serum (40%) dinyatakan negatif.

terhadap sampel negatif menggunakan GICA dengan

Sampel serum yang dilakukan pemeriksaan dengan

hasil uji negatif menggunakan metode ELISA

perangkat uji metode GICA menunjukkan hasil 13

(Budiarto, 2004). Adapun hasil perhitungannya dari

sampel serum (65%) dinyatakan positif dan 7 sampel

hasil uji protipe adalah :

serum (35%) dinyatakan negatif. Diantara 8 sampel serum yang dinyatakan negatif engan ELISA, 2

12 Sensitivitas =

diantaranya dinyatakan positif dengan perangkat uji GICA.

Teknologi

ELISA

digunakan

x 100 = 100 % 12

sebagai 7

referensi dalam penelitian ini, karena teknologi

Spesifisitas =

x 100 = 87.5 %

ELISA merupakan teknologi diagnosis paling utama

8

digunakan dewasa ini dalam pemeriksaan serologis. B. Pembahasan

Hal ini disebabkan tidak hanya sensitivitas dan

Penyakit

spesifisitas yang lebih tinggi dibanding teknik lain

sudah

utama dari ELISA adalah tidak mampu mendeteksi

maupun

rekombinan.

Kemampuan

manusia.

dan

Indonesia

anthraks pada binatang, sedangkan 5 provinsi (Jabar,

cepat

Jateng, NTB, NTT dan DI Yogyakarta) tercatat telah

imunokromatografi dengan menggunakan ekstrak protein

keselamatan

ekonomi

Depkes R.I tahun 2003 tercatat 11 provinsi endemis

jaringan. Pengembangan yang lebih sederhana saat uji

kerugian

merupakan daerah endemik antraks, menurut laporan

dalam jumlah yang kecil pada serum maupun

dikembangkan

menyebabkan

mengancam

antigen atau antibodi terhadap Bacillus anthracis

telah

penyakit

Bacillus anthracis. Penyakit antraks di Indonesia

tujuan cukup memadai. Salah satu keterbatasan

juga

merupakan

bakteri akut atau per akut yang disebabkan oleh

tetapi juga keluasan aplikasi aplikasi untuk berbagai

ini

antraks

terjadi kasus antraks pada manusia. Siregar (2002),

uji

Sumatera (kecuali provinsi Jambi), Jawa Barat, Jawa

serologis yang berbasis pada teknik ELISA tersebut

Tengah,

dilaporkan memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang

Sulawesi

Selatan,

Sulawesi

Tengah,

Sulawesi Utara, dan Sulawesi Tenggara; Nusa

setara dengan teknik ELISA secara umum. Walaupun

Tenggara Barat dan Nusa Tenggara Timur masih

demikian kelemahan dari teknik imunokromatografi

merupakan daerah yang mempunyai kecenderungan

adalah tidak bersifat kuantitatif seperti ELISA

muncul wabah antraks secara periodik. Seringnya

(Subekti dkk., 2005). Cara menghitung sensitivitas

terjadi

adalah proporsi antara hasil uji positif terhadap

wabah

penyakit,

memerlukan

usaha

pengendalian penyakit yang terencana, termasuk cara


1431


diagnosa penyakit yang cepat dan tepat agar penyakit

perangkat uji metode GICA untuk mendeteksi

dapat

(Siregar,E.A,2002;Depkes

antibodi dari Bacillus anthracis. Mengidentifikasi

R.I,2003). Usaha pengendalian dan pengawasan

pola protein yang bersifat protein antigenik (PA) atau

penyakit

membahayakan

menunjukkan sifat reaktivitas dari Bacillus anthracis

kesehatan masyarakat, harus diusahakan dibuat suatu

dengan menggunakan metode Western Blotting. Dan

perangkat uji yang mampu mendeteksi anthraks

Menentukan spesifisitas dan sensitivitas perangkat

dengan cepat. Metode isolasi dan identifikasi

uji metode GICA untuk mendeteksi antibodi Bacillus

Bacillus anthracis dengan media biakkan, uji

anthracis bila menggunakan hasil pemeriksaan

biokimia, uji Ascoli precipitin test dan uji biologis

metode ELISA sebagai referensi. Analisa Western

menggunakan marmot atau mencit tidak praktis.

blotting pertama dari penelitian ini menunjukkan

Kelemahan uji tersebut diperlukan waktu yang cukup

terdapat dua pita protein yang diharapkan bersifat

lama untuk mengetahui hasil uji. Seringkali juga

reaktif dan diharapkan dapat digunakan sebagai

pada usaha isolasi dan pembiakan Bacillus anthracis

bioreseptor dalam perangkat uji metode GICA untuk

di laboratorium mengalami kegagalan walaupun

mendeteksi antibodi dari Bacillus anthracis. Satu pita

gejala klinis pada hewan atau manusia sudah tampak

meragukan terlihat tebal (1) pita 92 kDa yang

jelas. Bacillus anthracis tidak dapat diisolasi atau

diperkirakan

ditumbuhkan (terutama pada manusia) jika bakteri

polysaccharide dari dinding sel Bacillus anthracis

sudah

sudah

dan satu pita protein yang jelas (2) pita 68 kDa yang

–

diperkirakan poly-γ-D-glutamic acid (PDA) dari

keunggulan

kapsul Bacillus anthracis . Kedua protein antigenik

immunofluorescence assay, yang didasarkan pada

yang muncul ini dapat digunakan untuk kandidat

pembatan antibodi poliklonal terhadap antigen

bioreseptor dalam perangkat uji.

permukaan sel Bacillus anthracis,adalah mampu

komponen protein antigenik ini di perkuat oleh

mengidentifikasi isolat – isolat,dan juga mampu

penelitian Lyli N dan Rahmat SA tahun 2008 yang

secara langsung mengidentifikasi Bacillus anthracis

mengidentifikasi adanya protein antigenik pada

dari hewan yang terinfeksi. Namun keterbatasan

dinding sel Bacillus anthracis

dalam uji yang telah dikembangkan,yaitu adanya

acetylglucosamine polysaccharide yang digunakan

reaksi silang dengan kelompok bakteri Bacillus

untuk membuat antibodi yang akan digunakan dalam

cereus (Helgason et al,2000).

pembuatan

segera

diatasi

antraks

mati

yang

karena

sangat

terhadap

penderita

diberikan

pengobatan

antibiotika.

Penelitian

penelitian

terdahulu

menunjukkan

Penelitian ini


perangkat

uji

Keberadaan

yaitu galactose/N-

Cell

wall-

Direct

bertujuan mengidentifikasi pola protein antigen

Fluorescent Assay (CW-DFA)

penuh / sekretori antigen yang dapat bersifat protein

glutamic acid (PDA) dari kapsul Bacillus anthracis.

antigenik (PA) dari Bacillus anthracis dengan

Yang digunakan dalam perangkat uji Capsule-Direct

menggunaan metode SDS- PAGE (Laemmli) yang

Fluorescent Assay (CAP- DFA). Berat molekul dari

dapat digunakan sebagai bioreseptor pada pembuatan


1432

dan poly-γ-D-

polysaccharide


sedikit berbeda dengan hasil penelitian yaitu 91 kDa.

yang virulen membentuk kapsul in vivo dalam

Selisih dari berat molekul ini mungkin terjadi karena

kondisi

perkiraan berat molekul berdasarkan perkiraan yang

mengandung 5% CO2 atau media yang mengandung

didasarkan

yang

bikarbonat. Sel vegetatif akan mensekresikan kapsul

galactose/N-

polipeptida (PGA) dan membentuk koloni yang

acetylglucosamine polysaccharide yang terdapat

bersifat mukoid. Antigen ini bersifat spesifik karena

pada dinding sel Bacillus anthracis bersifat sebagai

keberadaanya dapat membedakan Bacillus anthracis

antigen spesifik, menurut Choudhury et al,2006

dengan bacilli lainnya yang tidak menghasilkan

bahwa struktur dari polisakarida utama dinding sel

polimer kapsul ini.

Bacillus anthracis adalah species specific. Secara

menggunakan kandidat protein antigenik dari antigen

keseluruhan, dinding sel Bacillus anthracis terdiri

penuh Bacillus anthracis berdasarkan hasil analisa

atas

Western blotting terdeteksi satu pita 92 kDa yang

digunakan.

dari

perbandingan

Protein

peptidoglican,

antigenik

suatu

marker

kompleks

anaerobik,

atau

lingkungan

yang

Hasil uji coba perangkat uji

heterepolisakarida yang terbuat dari rantai glycan

diperkirakan

yang dihubungkan oleh peptida – peptida kecil.

polysaccharide dari dinding sel Bacillus anthracis

Bahan ini membentuk suatu jaringan yang menutupi

dan satu pita protein yang jelas yaitu pita 68 kDa,

seluruh bakteri, dan merupakan 40% dari seluruh


masa sel. Rantai glycan terdiri atas unit N-

kapsul Bacillus anthracis

yang digunakan dalam

acetylglucosamine

pembuatan

uji

dan

N-acetylmuramic

acid.


perangkat

menggambarkan

Rantai glycan terhubung oleh peptida – peptida kecil

kemampuan imunosenssor dari ekstrak antigen

membentuk bagian glycan dalam dinding sel.

penuh/sekretori antigens dari Bacillus anthracis

Komposisi utama dari polisakarida dinding sel

sebagai bioreseptor metode GICA yang berguna

Bacillus anthracis terutama terdiri atas Galactose-N-

untuk mendeteksi antibodi dari Bacillus anthracis

acetylglucosamine polisaccharide yang sangat unik

menunjukkan hasil Sensitivitas dan spesifisitas

untuk galur – galur Bacillus anthracis dan tebukti

perangkat uji metode GICA untuk mendeteksi

sangat potensial untuk membedakan dari spesies

antibodi Bacillus anthracis bila menggunakan hasil

bacilli lainnya (Choudhury et al,2006).

pemeriksaan metode ELISA sebagai referensi masing

Hasil

– masing adalah 100 % dan 87,5 %.

Analisa Western blotting kedua dari penelitian ini yang lebih jelas memperlihatkan satu pita protein yaitu pita 68 kDa reaktif yang bersifat antigenik,

KESIMPULAN DAN SARAN


Kesimpulan

kapsul Bacillus anthracis yang dapat digunakan

1.

Teridentifikasi

–

pita

protein

utuh

dan

jelas

dengan

SDS-PAGE,

dengan

Pita

yang

untuk kandidat bioreseptor dalam perangkat uji. Hal

terbentuk

ini di dukung oleh pendapat Fouet et al tahun 1999

menggunakan

dan Mesnage et al tahun 2000 Bacillus anthracis

urutan 92 kDa, 68 kDa, 54 kDa, 43 kDa, 29

1433

masih

analisa


kDa, dan 18 kDa sehingga dapat digunakan

Fouet,A,.S. Mesnage,E.Tosi-Couture,P.Gounon and M. Mock.1999. Bacillus anthracis surface: capsule and S layer.J.Appl.Microbiol.87:251-255.

sebagai bioreseptor pada GICA. 2.

Teridentifikasi satu pola protein yang bersifat antigenik atau menunjukkan sifat reaktivitas

Helgason,E.D, H. Caugant,A.Johansen,M.Fouet and M.Mock,2000. Bacillus anthracis, Bacillus cereus and Bacillus thuringensis – one species on the basis of genetic evidence.Appl Environ. Microbio.66:26272630.

dari Bacillus anthracis yaitu 68 kDa dengan menggunakan metode Western Blotting. 3.

Ekstrak

sekretorik

antigen

(SA)

Bacillus

anthracis dapat digunakan sebagai bioreseptor pada pembuaan perangkat uji metode GICA untuk

mendeteksi

IgG

terhadap

Jawetz, Melnick dan Adelberg, 1996, Mikrobiologi Kedokteran, Edisi 20, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, Hal. 194-196.

Bacillus

anthracis. 4.

Lily N dan Rahmat SA,2008. Identifikasi Cepat Bacillus anthracis dengan Direct Flourescent Antibody Assay yang menggunakan Componen dinding sel dan kapsul. Balai Besar Penelitian Veteriner Bogor.Dalam Jornal JITV volume 13 no.2.

Sensitivitas dan spesifisitas perangkat uji metode GICA untuk mendeteksi antibodi Bacillus anthracis bila menggunakan hasil pemeriksaan metode ELISA sebagai referensi masing – masing adalah 100 % dan 87,5 %.

Mesnage,S.,T. Fontaine,T.Mignot,M.Delepierre,M.Mock and A. Fouet.2000. Bacterial SLH domain proteins are noncovalently anchored to the cell surface via a conserved mechanisms involving wall polysaccharide pyruvylation. EMBO J.19:4473-4484.

Saran Perlu

penelitian

lanjutan

mengenai

kestabilan dan daya tahan perangkat uji metode GICA pada Suhu dan kelembaban yang bervariasi.

Priyonggo, Budiana, www.indomedia.com/poskup/2007/05/edisi 28/opini.htm, sitasi tanggal 25 Oktober 2005.

DAFTAR PUSTAKA Bioramp,2009. Manual Test Immunokromatografi Bio M Pylori,Mataram.

Sacher, Mc Pherson, 2004, Tinjauan Klinis Hasil Pemeriksaan Laboratorium, Edisi 11, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, Hal.

Budiarto,E.2004. Metodologi Penelitian Kedokteran. Sebuah pengantar.EGC, Jakarta. Choudrury,B.,C.Leoff,E.Saile,P.Wilkins,C.P.Quinn, E.L.Kannenberg and R.W.Carlson.2006. The structure og major cell wall polysaccharide of Bacillus anthracis is species specific. J.Biol.Chem.10:1074.

Siregar,E.A,2002. Anthraks: Sejarah masa lalu, situasi pada saat ini, sejarah diagnosa dan kecenderungan perkembangan ilmu di masa depan. Simposium sehari Penyakit Anthraks: Anthraks di Indonesia, masa lalu, masa kini dan masa depan. Balitvet,Bogor, 17 Juli 2002.

Depkes R.I,2003. Pedoman Tata Lausana Kasus dan Pemeriksaan Laboratorium Penyakit Ántrax di Rumah Sakit. Dirjen Pemberantasan Penyakit Menular dan Penyehatan Lingkungan. Depkes R.I.

1434


Subekti,D.T.,W.T.Artama dan T. Iskandar,2005. Perkembangan Kasus dan diagnosis Zoonosis. Lokakarya Nasional Pnyakit Zoonosis.

gold-immunochromatographic assay for the detection of antibodies againt avian influenza virus with hemagglutination inhibition and agar gel immunodiffusion assays. Veter Immunol Immunop 117;17-25.

Peng,D.P.S.S, Hu,Y.Hua,Y.C.Xiao,Z.L.Li,X.L. Wang and D.R. Bi.2007. Comparison of a new

1435

GOLD IMMUNOCHROMATOGRAPHIC ASSAY (GICA) SEBAGAI IMUNOSENSOR MENDETEKSI ANTIBODI Bacillus Anthracis PENYEBAB PENYAKIT ZOONOSIS

Recommend Documents