Fehérjéket és izomrendszert érintő laboratóriumi vizsgálatok Vajdovich Péter és Kungl Krisztina
TP – az összes szérum (plazma) fehérje
1 .
–
A vérszérum a fibrinogén és a V+ VIII véralvadási faktorokon kívül minden plazmafehérjét tartalmaz
–
A szérum összfehérje gyakorlatilag az ALBUMINt és a GLOBULINokat jelenti
–
Az ALBUMIN a májban képződik
–
A GLOBULINok főleg a májban és a Blymphocytákban képződnek: α, β és γ frakciók ismertek
Dr. Kungl Krisztina munkája
2
2
A szérumfehérjék feladatai – Onkotikus nyomás biztosítása (albumin) – Pufferhatás (~20%, főleg albumin) – Transzport (pl. lipidek, hormonok, fémek) – Véralvadás (fibrinogén, stb) – Immunfeladatok (globulinok) – Gyulladási folyamatok (pl. akut fázis fehérjék – APP, citokinek) Dr. Kungl Krisztina munkája
3
3
Dr. Kungl Krisztina munkája
TP – refraktometria
TP ≠ total solids
• A hematokrit cső eltörése buffy coat felett (plazma) vagy minta centrifugálása után (plazma vagy szérum) – 1 csepp refraktométerre
Digitális zseb – plazma TP 0 – 140 g/L, pontosság +/- 1g/L (€ 360.00 £310.00) Madarak esetében magasabb értéket ad, mint spektrofotometriás Biuretmódszer
Vizuális kézi – plazma TP 0 – 120 g/L, pontosság +/- 2g/L ( € 59.99 - £48.00)
Téves emelkedés okai: nem homogén csepp, zavaros, nem friss minta, haemolysis, lipaemia, (icterus)
TP - spektrofotometria • Az alap biokémiai panel része • Biuret módszer (Cu+fehérje kelát) – a legtöbb biokémiai automata képesek elvégezni, alkalmas olyan folyadékok vizsgálatára alkalmas, ahol a TP 20-100 g/l közötti (vér, szabad testűri folyadék) • Fals magas: ++/+++ lipaemia, haemolysis • Fals alacsony: ++/+++ icterus • Minta stabilitás: szérumban 2-8 oC 3 nap, lefagyasztva 6 hónap (az ennél érzékenyebb TP módszereket (turbidimetria, ultraszenzitív TP) más biológiai mintákban használjuk – vizelet, liquor Dr. Kungl Krisztina munkája
Dr. Kungl Krisztina munkája
Összfehérje (TP): életkor-függés TP (g/l)
58 – 73
69 - 79
• TP kevés az újszülöttben: 60-80%-a a felnőtt állatokénak, főleg a kevés globulin miatt • Nő a kolosztrumhatásra – a TP alkalmas a kolosztrumfelvétel ellenőrzésére • Csökken 1-5 hetes korra, majd alacsony, mert a plazma volumen gyorsabban nő, mint a máj fehérjetermelési kapacitása • Felnőttkori értéket 6-9(-12) hónapos korban éri el • Időskorban ↓ (kevesebb albumin termelődik) • Vemhesség – TP ↓ (transzferrin ↑, többi ↓) 6
6
A. HYPERPROTEINAEMIA
A/G arány élettani
1.
TP frakciónként arányos emelkedés: dehydratio
2.
Emelkedés a globulin frakcióban: gyulladásos folyamatok
A/G arány csökken
B. HYPOPROTEINAEMIA A/G arány élettani
1.
Minden frakció arányosan: Hyperhydratio, oedemával járó szívelégtelenség, polydipsia (pseudo-hypoproteinaemia haemodilutio miatt)
2.
A/G arány csökken
Minden frakció, de nem arányosan – szelektív (főként Alb)/nem szelektív (minden frakció) fehérjevesztés: PLE/malabsorptio, PLN, vérzés, égési sérülés után
A/G arány élettani
3.
Fiatal állatok – alacsony referencia érték
4.
Egyes frakciók csökkenése – lásd: HYPOALBUMINAEMIA és HYPOGLOBULINAEMIA
7
7
Dr. Kungl Krisztina munkája
Áttekintés • Plazmafehérjék alap paraméterei – TP
– Alb – Glob = TP – Alb – AFF: CRP, SAA
• Szénhidrát anyagcsere paraméterei – Glükóz – Fruktozamin, Glikált Hb – laktát Dr. Kungl Krisztina munkája
Izomműködés
Áttekintés Vizsgálati célok: 1. Izomsejt károsodás
2. Izomsejt működés
10
Izomsejt károsodás
Izomsejt károsodás Vérből végezhető vizsgálatokat jelent, amelyek a károsodott szívizomból valő kiszabadulással/szivárgással állnak kapcsolatban. - Enzimek: •CK – kcreatin-kináz • LDH – laktát-dehidrogenáz • AST – aszpartát amino-transzferáz - Egyéb kijutó metabolitok: • mioglobin • troponinok 12
KREATIN KINÁZ (CK) - Izomkár után 6-12 ó-val nő, T1/2: 2 ó - Agykárosodás a CSF-ben okoz CK-emelkedést - A tartósan emelkedett CK aktivitás izomkárosodásra utal -
Az izoenzimek (CK-B, CK-M) meghatározása lehetőséget adhat a lokalizációra (szívizom, harántcsíkolt izom, símaizom, agyvelő)
- Aktivitása nagyobb fiatal állatokban (< 1 hónapos - 4x több, mint felnőtt)
13
KREATIN KINÁZ (CK) - CK-BB (CK-1) - agy, lép, vese - CK-MB (CK-2) - belek, tüdő, lép, myocard - CK-MM (CK-3) – hcs izom, myocard - CK-Mt – többféle szövet mitokondr. Elkülönítés elektroforézissel - A vérben CK-MM, CK-BB főként, CK-MB kevés - Szérumban 2.5x több, mint a palzmában (thrombocytákból ki) - Stabilitás 1 hét -20 oC-on tárolva - Fals emelk.: hemolízis, icterus, izomszúrás vérvételkor - Extrém magas értékek lehetnek izomkárosodáskor (>100xURL)
14
KREATIN KINÁZ (CK) Emelkedés okai: Izomterhelés, im. inj., vagy károsodás, necrosis, ischemia, roham, trauma, szállítás. Toxin, rhanbdomyolysis, gyull. myopathia (bakt., vírus, parazita), veleszületett izomdisztrófia Hypothyreosis, hyperadrenocorticismus „Downer cattle” Szívizomkárosodás – ritkán emelkedik kifejezetten Símaizomkárosodás szm – endometritis Izomlebomlás éhező macskák, 2529-10000 IU/l 15
ASZPARTÁT AMINOTRANSZFERÁZ (AST) -Ugyancsak fokozódik májbetegségekben (nem specifikus) Cytopl., és mitokondr. Lassabban nő, és lassabban csökken, mint a CK. Izomkár után 24-36 órával nő, -Hosszabb T1/2 idő, mint a CK vagy LDH kutya: 4-12 ó, macska: 77 p, ló: 7-8 nap Alanin aminotarnszferáz (ALT) Nem izomspec., aktivitás a hcs. Izomban 5%-a, szívizomban 25%-a a májénak. ALT-emelkedés lehet izomkárosodáskor, mert nagy az izom tömeg a májhoz képest!!!!
16
180
160
140
120
100 AST CK
80
60
40
20
0 10
Akut izomkár
12 2
24 3
4 36
5
48
6
60 7
Aktív, nem rég izomkár Az izomkár megszűnt 2 napja
72
17
LAKTÁT DEHIDROGENÁZ (LDH) -Enyhe érzékenység, alacsony specificitás - sok sejt cytoplasmájában Négy komponens (M – izom, és H-heart alegység) -Többféle izoenzim ismert (szívizom-, vázizom) -Hemolízis növeli a plazmabeli aktivitását -Izomsérülés lokalizációjára alkalmas CK-val együtt LDH-1 (4H)—in the heart and in RBC (red blood cells), as well as the brain. LDH-2 (3H1M)—in the reticuloendothelial system L DH-3 (2H2M)—in the lungs LDH-4 (1H3M)—in the kidneys, placenta, and pancreas LDH-5 (4M)—in the liver and striated muscle
Fokozott CK és LDH1 = szívizomkárosodás Fokozott CK és LDH5 = harántcskolt izom károsodás
18
TROPONINOK (izom strukturális egysége)
19
TROPONINOK (izom strukturális egysége) Cardiac troponin I (cTnI), és T (cTnT) CK-MB helyett alkalmazható -Szívizomkárosodáskor koncentrációjuk a plazmában emelkedik -Humán tesztkészletek használhatók állatokban (kutya, macska, ló, szm) is Emelkedett értékek: Billentyű elégtelenség DCM Akut myocard. károsodás – GDV (gyomorcsavarodás) miatt Vesselégt., Nem szíveredetű dyspnoe
20
MIOGLOBIN -Kis molekulatömegű fehérje (17000 D), hamarabb szabadul ki a sérült izmokból, mint a CK, és azonnal filrálódik a glomeruluson -Váz- és szívizom károsodáskor megjelenik a vizeletben is A szérum színtelen, vagy sárgás. A vizelet barna, vöröses barna, a vizelet tesztcsíkon Hb-t jelez.
Vizelet tesztcsík Hb Szérum AST CK, AST
Haemolysishaemoglobinuria ++ pirosas ↑ ↔
Myoglobinemiamyoglobinuria ++ halvány sárga ↑↑ ↑↑ 21
2. AZ IZOMSEJTEK FUNKCIONÁLIS VIZSGÁLATA
TEJSAV
Az anaerob glikolízis végterméke 0,5-2 mmo/l Hypoxia során koncentrációja nő a plazmában Versenylovakban az állóképesség vizsgálatára alkalmas Tréning (verseny )után: 25x URL!!! A csökkenés (clearance) mértéke (gyorsasága) az edzettség fokmérője A vérminta kezelése NaF-os csőben napokig stabil
23
