Élelmiszerek mikroszennyezőinek nyomában DR. EKE ZSUZSANNA Elválasztástechnikai Kutató és Oktató Laboratórium
ALKÍMIA MA
2009. november 5.
Kémiai veszélytényezők — — — — — —
Természetesen előforduló mérgek Környezetszennyezésből eredő veszélyek Növényvédőszer-maradékok Állatgyógyászati szermaradékok Véletlen szennyeződések Technológiához köthető szennyezések ◦ Technológia során keletkező anyagok ◦ Technológia során szándékosan hozzáadott anyagok ◦ Technológiai hiba miatt keletkező anyagok
—
Tisztességtelen előnyszerzés érdekében felhasznált anyagok
Aflatoxinok —
Termelő fajok: ◦ Aspergillus flavus, ◦ Aspergillus parasiticus ◦…
—
Előfordulás: ◦ ◦ ◦ ◦ ◦
Gabonafélék Diófélék Fűszerek Szárított gyümölcsök ….
Aflatoxinok O Aflatoxin B1
O
O
O
O
O
Aflatoxin G2 O
O
OMe
O O
O
O
OMe
O
Aflatoxin M1 OH
O
O
O
OMe O
O
Aflatoxin B2 O
O
O
O
O
Aflatoxin G1 O
OMe
O
O
O
OMe
17/1999 (VI. 16) EüM rendelet Földimogyoró, dió, mogyoró, mandula, gesztenye, szárított gyümölcs (közvetlen emberi fogyasztásra)
Aflatoxin B1
2 µg/kg
Összes aflatoxin (B1, B2, G1, G2)
4 µg/kg
Aflatoxin B1 Dió, mogyoró, mandula, gesztenye, szárított gyümölcs(ha fogyasztás előtt Összes aflatoxin válogatással tisztítják) és fűszerek (B1, B2, G1, G2)
5 µg/kg 10 µg/kg
Aflatoxin B1
2 µg/kg
Összes aflatoxin (B1, B2, G1, G2)
4 µg/kg
Aflatoxin B1
1 µg/kg
Édesipari termékek
Összes aflatoxin (B1, B2, G1, G2)
1 µg/kg
Tej és tejtermékek
Aflatoxin M1
0,05 µg/kg
Gabonafélék, gabonaőrlemények
Fluoreszcencia magasabb energiájú, gerjesztett állapotok elnyelt gerjesztő fény
kibocsátott fluoreszcens fény
triplett állapotok foszforeszcencia
alapállapot
Jelintenzitás / önkényes egység
Kalibráció
Koncentráció / (µg/ml)
Elválasztástechnika Elválasztástechnika Elektroforetikus módszerek
Kromatográfia GC
HPLC TLC
OPLC
Extrakciós módszerek
… Dialízis
Szűrés
Centrifugálás Szitálás
Liofilizálás …
Kromatográfia Olyan módszerek, ill. folyamatok gyűjtőneve, melyekben a komponenseknek egy álló fázis és egy azon keresztül áramló mozgó fázis közötti megoszlása következtében megy végbe a komponensek térbeli elkülönülése (szétválása). Mozgó fázis
Állófázis
Kromatográfia Olyan módszerek, ill. folyamatok gyűjtőneve, melyekben a komponenseknek egy álló fázis és egy azon keresztül áramló mozgó fázis közötti megoszlása következtében megy végbe a komponensek térbeli elkülönülése (szétválása). Mozgó fázis áramlás
Állófázis
Kromatográfia A
B
C
D
A kezdet
1903 Varsói Természettudományi Társaság Biológiai Közleményei
M. S. Cvet (1872-1919)
Vékonyréteg-kromatográfia
Térbeli elválasztás
HPLC - Nagyhatékonyságú folyadékkromatográfia oldószer tároló előtét szűrő
oldószer szűrő
oldószer szűrő
pumpa
mintabeviteli szelep
oszlop
nyomás szabályozó
detektor
előtét oszlop
hulladék oldószer tároló
adatgyűjtő
HPLC - Nagyhatékonyságú folyadékkromatográfia oldószer tároló előtét szűrő
oldószer szűrő
oldószer szűrő
pumpa
mintabeviteli szelep
oszlop
nyomás szabályozó
detektor
előtét oszlop
hulladék oldószer tároló
adatgyűjtő
Aflatoxin kromatogram
Aflatoxin kromatogram —
Készülék: Agilent 1100, 1200 HPLC fluoreszcens detektálással
—
Oszlop: Supelcosil C18 (250 mm x 4.6 mm x 5 µm)
—
Eluens: desztillált víz / acetonitril / metanol (68:16:16), izokratikus
—
Áramlási sebesség: 1,2 cm3/perc
—
Detektálás:
gerjesztési hullámhossz: 365 nm emissziós hullámhossz: 450 nm
—
Analízis idő:
25 perc
—
Oszlop termosztát:
25 °C
—
Injektált térfogat:
100 µl
Mintaelőkészítés
?
? ?
? ?
Mintaelőkészítés Aprítás, homogenizálás 2. Extrakció 1.
– – –
3.
Rázógéppel Ultrahanggal segítve Nagy teljesítményű turmixgéppel
Szűrés
25 g minta, 5 g NaCl, 125 ml metanol-víz 70:30 arányú elegye
Mintaelőkészítés Szűrlet hígítása 5. Tisztítás immunaffinitás oszlopon 4.
Mintaelőkészítés 6.
Minta szárazra párlása nitrogénáram alatt
7.
Visszaoldás minimális mennyiségű, megfelelő oldószerben
8.
HPLC-s analízis
Mintavétel Legyen reprezentatív!!!
A penészesedés és így az aflatoxinok gócpontokban jelentkeznek!
Mintavétel
Azaz a teljes folyamat Mintavétel — Mintaelőkészítés —
◦ ◦ ◦ ◦ —
Homogenizálás Extrakció Szűrés Tisztítás
Kromatográfiás mérés
Egyéb lehetséges célvegyületek A mintában µg/kg ill. mg/kg koncentrációban előforduló szerves vegyületek. Így például: — — — — — — — — — —
Növényvédőszer-maradványok Állatgyógyászati szermaradványok Egyéb mikotoxinok Koleszterin Tartósítószerek Édesítőszerek Koffein, teobromin Színezékek Vitaminok ….
Köszönöm a figyelmet!
