4
TINJAUAN PUSTAKA Asal-usul Tanaman Semangka Tanaman semangka Citullus vulgaris (sekarang lebih dikenal dengan nama C. lanatus) berasal dari wilayah kering Afrika Utara dan sekarang dibudidayakan di hampir seluruh wilayah dunia sebagai buah yang memiliki nilai ekonomi yang tinggi (Mohr 1986). Citrullus lanatus var. lanatus (Thunb.) Matsum & Nakai adalah tetua dari semangka yang umumnya dibudidayakan. Citrullus lanatus merupakan salah satu dari empat spesies diploid (n = x = 11) yang telah dikenal baik, dimana spesies ini termasuk ke dalam genus Citrullus Schrad. Ex Eckl. & Zeyh (Simmonds 1976). Seperti halnya tanaman timun, labu, blewah, pare, tanaman semangka juga termasuk ke dalam famili Cucurbitaceae (famili dengan sekitar 90 genus dan mungkin 700 spesies). David Livingstone pada tahun 1850 menetapkan bahwa Afrika sebagai daerah asal (center of origin) tanaman semangka. David menemukan areal pertanaman semangka yang sangat luas di Gurun Kalahari dan wilayah subtropis Afrika. Beberapa bukti juga menunjukkan kemungkinan tanaman semangka berasal dari Amerika. Tanaman semangka diintroduksi pertama kali di Cina sekitar abad ke-10 sesudah Masehi (Sackett 1975). Pusat keanekaragaman tanaman semangka adalah Afrika Selatan, meskipun kerabat liar tanaman ini ditemukan juga di Afrika Barat. Cina adalah negara kedua pusat keanekaragaman tanaman semangka. Negara ini sekaligus sebagai produsen terbesar di dunia dengan 3/4 produksi semangka dunia berasal dari Asia. Genus Citrullus sendiri berdasarkan studi taksonomi terbaru dibagi kedalam empat spesies : C. lanatus (sinonim C. vulgaris), C. ecirrhosus, C. colocynthis, dan C. rehmii. Pada tahun 1930, L.H.Bailey membagi semangka budidaya C. vulgaris kedalam 2 varietas botani: lanatus dan citroides. Varietas citroides meliputi semangka citron atau semangka yang biasa dijadikan manisan yang memiliki tekstur daging buah yang keras dan biji berwarna coklat atau hijau (Wehner et al. 2007). Citrullus lanatus var. citroides (semangka Afrika) dibudidayakan di Gurun Sahara Afrika terkenal dengan bijinya yang dikeringkan yang kaya nutrisi (Minsart & Bertin 2008).
5
Botani Tanaman Semangka Spesies C.vulgaris merupakan tanaman semangka yang memiliki ciri daun hijau yang lebar, berbentuk bulat datar, segitiga sampai oval dan memiliki 3 sampai 5 jari daun dengan lekuk yang dalam dan terkadang hanya dijumpai lekukan yang sederhana. Bunga tanaman semangka pada umumnya bersfiat monoecious, meskipun pada varietas lama dan kerabat liar biasanya bersifat andromonoecious. Bunga berukuran kecil dengan warna yang kurang atraktif dibandingkan dengan bunga tanaman Cucurbiataceae lainnya. Buah memiliki bentuk bundar sampai lonjong. Buah normal berukuran sedang sampai besar, dengan kulit buah yang tebal dan daging buah yang padat dengan kandungan air yang tinggi. Daging buah berwarna merah, kuning atau putih. Daging buah semangka merupakan endokarp (plasenta) berbeda dengan daging buah melon yang merupakan mesokarp. Berat buah bisa mencapai antara 4 sampai 16 kg, meskipun kultivar semangka dengan berat 1-4 kg lebih populer di Asia. Bentuk biji oval, tipis sampai lonjong dengan kulit biji berwarna putih atau cokelat. (Basset 1986; Wehner et al. 2007). Kultivar semangka yang populer dibudidayakan untuk produksi komersil hampir seluruhnya merupakan hibrida dan hanya beberapa yang merupakan kultivar
bersari
bebas
(open-pollinated)
(Maynard
2001).
Berdasarkan
terbentuknya biji, varietas semangka dibedakan ke dalam tiga kelas: bersari bebas (open-pollinated), hibrid F1 dan triploid (non-biji). Varietas bersari bebas dikembangkan melalui beberapa generasi seleksi, memiliki benih true-to-type (benih tetap memiliki karakter yang sama dari generasi ke generasi) dan harganya lebih murah. Hibrida F1 dikembangkan melalui persilangan dua galur murni, memiliki keseragaman bentuk dan waktu panen yang tinggi serta hasil yang lebih baik (20-40% lebih tinggi dari varietas bersari bebas pada kondisi yang sama). Kelemahan benih hibrida F1 adalah ketersediaan benih dan biaya yang besar dalam pengembangan varietasnya. Tipe yang ketiga adalah semangka non-biji (triploid). Varietas ini dikembangkan dengan menyilangkan tetua yang telah digandakan kromosomnya (tetraploid) dengan tetua yang normal (diploid). Varietas ini lebih mahal dari hibrida F1 (Boyhan et al. 1999).
6
Pemuliaan Tanaman Semangka Di dalam pemuliaan tanaman, kehilangan satu sifat utama (misalnya warna daging merah tua) dapat menyebabkan kultivar semangka dengan buah yang tidak laku di pasar tertentu. Hal ini membuat pemuliaan untuk perbaikan kultivar tanaman semangka cukup sulit dilakukan, mengingat harus mempertahankan beberapa sifat utama sekaligus. Akan tetapi hal ini dapat diatasi dengan memulai program pemuliaan menggunakan kultivar unggulan yang kemudian disilangkan dengan kultivar elit lainnya, sehingga memungkinkan untuk mempertahankan level ekspresi sifat-sifat penting di saat memperbaiki satu atau lebih sifat lainnya. Sasaran pemuliaan tanaman semangka saat ini diantaranya adalah karakter produksi, panjang batang rambatan, kualitas bagian luar maupun dalam buah, tipe (bentuk dan ukuran) buah, ketahanan terhadap penyakit, biji maupun non-biji (Wehner 2007). Produsen semangka menginginkan produksi per hektar dengan ukuranukuran buah yang diterima pasar. Pada umumnya pemulia semangka melakukan seleksi untuk karakter produksi, meskipun kemajuan yang diperoleh belum signifikan. Karakter ukuran, bentuk, warna dan corak lurik serta warna daging buah juga penting didalam program pemuliaan semangka, mengingat sebagian konsumen maupun pemasok cenderung menyukai penampilan buah tertentu. Ketahanan terhadap penyakit juga merupakan tujuan penting didalam pemuliaan semangka. Pengujian didalam rumah kaca dilakukan terhadap beberapa penyakit penting seperti layu fusarium, antraknosa, embun tepung dan nekrosis kulit buah (Wehner 2008). Koleksi dan pemilihan calon tetua yang tepat adalah langkah yang sangat penting dilakukan ketika pemulia sudah menentukan sasaran didalam program pemuliaan. Pemulia harus tahu tetua mana yang akan mampu menyumbangkan karakter yang diinginkan beserta metode pemuliaannya. Oleh karena itu, pemulia mengumpulkan sebanyak-banyaknya aksesi berupa galur-galur murni, kultivar, dan individu hasil pemuliaan lainnya. Karakter penting seperti kualitas buah dan ketahanan terhadap penyakit seharusnya diintrogresikan kepada galur berdaya hasil tinggi sebelum membentuk kultivar baru. Hal ini sekaligus meningkatkan diversitas genetik di antara kultivar modern (Gusmini & Wehner 2005).
7
Korelasi Antar Karakter Kuantitatif dan Parameter Genetik Seleksi yang dilakukan berdasarkan pada karakter fenotipik, merupakan teknik utama di dalam program pemuliaan tanaman. Evaluasi terhadap hibridahibrida untuk satu karakter tertentu biasanya melibatkan banyak karakter di dalam pengamatannya. Meskipun karakter produksi lazim menjadi fokus utama di dalam program seleksi atau program lain pemuliaan, namun karakter-karakter lain harus tetap diukur. Analisis koefisien korelasi mengukur hubungan mutualisme di antara berbagai karakter tanaman dan menentukan karakter mana yang digunakan untuk meningkatkan produksi (Hallauer 1981; Joshi 2005). Variasi genetik sangat penting artinya bagi para pemulia, tanpa adanya variasi genetik tersebut maka tidak akan ada perbaikan genetik terhadap karakter tanaman yang dapat diwariskan (Poehlman 1979). Apabila suatu karakter memiliki keragaman genetik cukup tinggi, maka hasil setiap individu dalam populasi akan tinggi pula, sehingga seleksi akan lebih mudah untuk mendapatkan sifat-sifat yang diinginkan. Oleh sebab itu, informasi keragaman genetik sangat diperlukan untuk memperoleh varietas baru yang diharapkan (Helyanto et al. 2000). Keanekaragaman genetik tidak saja mampu mengurangi resiko ‘patah’nya ketahanan tanaman oleh patogen ras baru, namun pada saat yang bersamaan juga dapat mempercepat perbaikan karakter agronomi seperti peningkatan produksi (Cui et al. 2001). Variasi fenotipik yang terdapat di dalam populasi muncul karena efek genotip dan lingkungan. Variabilitas fenotipik merupakan variasi terukur yang muncul di suatu karakter di dalam sebuah populasi; variasi ini terdiri dari variasi genotipik dan lingkungan sehingga akan memunculkan perbedaan pada kondisi lingkungan yang berbeda. Variasi genotipik, di sisi lain, merupakan komponen variasi yang disebabkan oleh perbedaan genotipik di antara individu-individu di dalam populasi atau antar populasi didalam satu spesies, dan merupakan fokus perhatian para pemulia. Fenotipe berdasarkan karakter kuantitatif dan memiliki dasar genotipik kuat meski seringkali tidak dapat dikaitkan secara langsung dengan genotipe (Loos 1993; Vaylay & Santen 2002). Jika pengamatan fenotip dilakukan terhadap jumlah sampel yang cukup besar dan karakter yang terukur
8
menunjukkan perbedaan nyata di antara populasi, maka nilai fenotip cukup mewakili keseluruhan penampilan genetik (Humphreys 1991). Tujuan utama di dalam pengukuran heritabilitas dan parameter genetik penyusunnya adalah untuk membandingkan dugaan perolehan hasil dari seleksi berdasarkan strategi seleksi alternatif. Seorang pemulia dapat menggunakan perhitungan heritabilitas untuk memprediksi kemajuan hasil yang diperoleh dari seleksi (Hoi et al. 1999). Analisis Komponen Utama Metode pengelompokkan dan variabilitas genetik perlu dilakukan seiring meningkatnya jumlah sampel di dalam materi dan plasma nutfah pemuliaan yang digunakan untuk merakit suatu kultivar. Pemanfaatan algoritma statistik multivariat yang tepat adalah strategi yang penting di dalam pengelompokkan plasma nutfah, menghitung variabilitas unutk jumlah aksesi yang besar atau menganalisa hubungan genetik di antara materi pemuliaan (Mohammadi & Prasanna 2003). Analisis gerombol, Analisis Komponen Utama (AKU), Analisis Koordinat
Utama
(AKoU)
dan
Skala
Multidimensi
(Multidimensional
Scaling/MDS) saat ini merupakan analisis multivariat yang paling sering dipakai. Analisis Komponen Utama (AKU) merupakan suatu metode reduksi data untuk memperjelas hubungan dua atau lebih karakter dan membagi ragam total seluruh karakter awal ke dalam satu atau beberapa set komponen utama berisi variabel-variabel yang tidak berkorelasi (Wiley 1981). Reduksi data diperoleh melalui transformasi linear dari variabel-variabel awal menjadi satu set baru terdiri dari variabel-variabel yang tidak berkorelasi yang disebut Komponen Utama (KU). Langkah pertama AKU adalah menghitung eigenvalue, yang merupakan jumlah total variasi yang ditampilkan pada sumbu-sumbu KU. Sementara, eigenvector mencirikan hubungan sumbu komponen tersebut dengan data (variabel) awal. Komponen Utama 1 mencirikan hampir seluruh keragaman dari data awal, sementara KU 2 mencirikan keragaman selain yang telah dicirikan oleh KU1, begitu seterusnya. Oleh karena bersifat independen satu dengan lainnya, masing-masing KU mencirikan karakter (properties) yang berbeda-beda dari data awal dan seharusnya diinterpretasikan secara independen Mohammadi & Prasanna 2003).
(Jolliffe 1986;
9
Analisis Kekerabatan Analisis gerombol dapat memperlihatkan pola yang rumit, multidimensi dari keanekaragaman, sementara analisis Koordinat dan Komponen Utama terbatas pada dua dimensi saja. Kelemahan analisis gerombol adalah tidak mampu menjelaskan lebih detail mengenai pembentukan pola gerombol, meskipun analisis ini baik untuk menjelaskan pola keanekaragaman. Sementara di sisi lain, Analisis Komponen Utama dapat menginterpretasi pola data mutivariat melalui analisis magnitud dan skor nilai eigenvector (Sneller 1994). Jarak genetik dalam kultivar dapat digunakan untuk mengukur divergensi genetik rata-rata antar kultivar. Informasi mengenai hubungan genetik antara genotipe-genotipe dalam satu spesies sangat bermanfaat untuk seleksi tetua dalam program hibridisasi. Program pemuliaan suatu spesies hendaknya dimulai dengan memilih tetua-tetua yang memiliki jarak genetik yang jauh, tetapi dengan sifatsifat agronomis yang baik (Machado 2000). Analisis gerombol bertujuan untuk mengelompokkan individu-individu atau objek berdasarkan karakter-karakter yang mereka miliki, sehingga individu-individu dengan deskripsi yang sama akan dikumpulkan ke dalam gerombol yang sama secara matematis (Hair et al. 1995). Ada dua tipe penggerombolan: metode berbasis jarak dan metode berbasis model. Metode berbasis jarak (distance-based method) menggunakan matriks jarak berpasangan sebagai input untuk analisis algoritma penggerombolan tertentu sehingga memunculkan gambar grafik seperti dendogram (Johnson & Wichern 1992). Sementara metode berbasis model adalah metode yang berlandaskan beberapa model parametrik dimana observasi dari masing-masing gerombol diasumsikan bersifat acak dan menginferensi parameter-parameter yang berhubungan dengan masing-masing gerombol serta pengelompokkan masingmasing individu dilakukan dengan menggunakan metode statistik standar seperti metode maximum-likelihood atau Bayes. Algoritma penggerombolan lazim mengadopsi metode aglomeratif hierarki UPGMA (Unweighted Paired Group method using Arithmetic averages) (Sneath & Sokal 1973). Informasi yang dihasilkan dari analisis gerombol (cluster analysis) bermanfaat bagi pemulia dalam kaitannya dengan keanekaragaman genetik (genetic
diversity).
Secara
teori,
perbedaan
fenotipik
umumnya
juga
10
mencerminkan perbedaan (keanekaragaman) genetik. Beranjak dari konsep ini, Autrique et al. (1996), van Beunigen dan Busch (1997) dan Johns et al. (1997) menggunakan karakter tumbuh kembang, fisiologi dan morfologi untuk menghitung jarak dan keanekaragaman genetik dari sejumlah besar koleksi tanaman budidaya. Beberapa studi memperlihatkan keberhasilan dan konsistensi metode UPGMA (Unweighted Paired Group Method using Arithmetic averages) dalam membentuk gerombol berdasarkan data karakter morfologis dan agronomis (Ajmone-Marsan et al. 1992; Mohna et al. 1992; Mumm et al. 1994), meskipun metode jenis single clustering ini tidak selalu mampu menjelaskan hubungan genetik secara optimal dan efektif (Mohammadi & Prasanna 2003).
Penyakit Layu Fusarium Cendawan patogen penyebab penyakit layu fusarium, F. oxysporum, termasuk
dalam
Deuteromycotina,
phylum kelas
Plantae,
divisi
Deuteromycetes,
Amastigomycota,
subkelas
subdivisi
Hypomycetidae,
ordo
Moniliales, famili Tuberculariae, genus Fusarium, spesies Fusarium oxysporum (Alexopoulos & Mims 1979). Identifikasi positif dengan menggunakan mikroskop 100 x atau lebih sangat dibutuhkan untuk mengidentifikasi cendawan seperti Fusarium atau Phytophthora. Selain itu, menumbuhkan cendawan pada media buatan sangat penting untuk mengkonfirmasi cendawan. Diagnosa gejala yang paling baik dan paling konsisten adalah melihat perubahan warna jaringan pembuluh pada irisan melintang batang utama atau batang akar dari tanaman semangka. Layu fusarium ditandai dengan adanya lingkaran berwarna coklat di bagian tengah pembuluh, sementara lapisan luar pembuluh tetap terlihat hijau (Roberts et al. 2006) Patogen F. oxysporum f.sp. niveum memiliki warna keunguan dengan bentuk koloni berkelompok dan agak tipis. Klamidospora berbentuk bulat, terbentuk pada hifa dan konidia, terminal dan intercaler. Mikronidia berlimpah, berbentuk oval dan berukuran (3-12) x (1.5-3) μm. Makrokonidia hampir lurus, basal cell pendek, bersekat 3-7 dan berukuran (18-36) x 1.65 μm. Mikrokonidia dan makrokonidia terbentuk pada konidiofor yang pendek (Budiasti 2005).
11
Cendawan yang menyebabkan layu dapat bertahan pada benih hingga 2 tahun atau lebih, hidup dari musim ke musim pada batang rambatan yang tua, dan dapat hidup mandiri di dalam tanah yang terinfeksi. Cendawan Fusarium pada tanaman semangka dapat menginfeksi pada suhu 150 – 350C, tetapi suhu optimum infeksi fusarium adalah 230 – 280C. Kerusakan yang paling parah pada tanaman semangka dan melon bisa terjadi pada suhu di bawah 260C (Babadost 1988). Fusarium melakukan penetrasi melalui ujung akar dan celah/luka pada akar. Selanjutnya, cendawan tumbuh di dalam pembuluh angkut (xylem) dimana cendawan ini kemudian menghambat aliran air ke bagian atas tanaman sehingga tanaman menjadi layu (Wehner 2007). Layu fusarium pada semangka memiliki tingkat keparahan paling serius. Kecambah yang terkena penyakit ini akan mengalami damping off dan mati. Tanaman yang dewasa akan terlihat layu di siang hari, kemudian segar kembali. Ujung daun mengering dan akan mati pada beberapa hari berikutnya. Selama periode musim kering dan hangat, keparahan penyakit akan meningkat. Pengendalian terbaik adalah dengan rotasi jangka panjang dengan tanaman yang bukan satu famili, membuang bekas-bekas pertanaman semangka serta fumigasi tanah. Cendawan Fusarium juga dapat menyerang pada stadia pembentukan buah, yang menyebabkan buah menjadi kecil dan tidak dapat dijual. Tanaman semangka tahan fusarium, akan tumbuh lambat dan kerdil jika terinfeksi penyakit ini. Akar tampak normal pada awalnya, tetapi akan berubah menjadi coklat kemerahan dan mati (Babadost 1988; Sikora 2004). Efektifnya sistem ketahanan suatu inang sangat tergantung kepada penyebaran ras-ras spesifik patogen dan tingkat inokulum di tanah. Pengetahuan tentang ras-ras dan kepadatan inokulum F. oxysporum f.sp. niveum di lahan komersil dapat mem-fasilitasi pengembangan strategi-strategi manajemen regional pengendalian penyakit layu fusarium pada tanaman semangka (Zhou & Everts 2003). Pada awalnya, Flor dan Oort mengajukan konsep gene for gene dalam sistem ketahanan tanaman terhadap penyakit, dimana satu alel dari patogen hanya akan cocok (kompatibel) untuk satu alel ketahanan pada tanaman. Namun, fenomena ‘patah’nya ketahanan tanaman menunjukkan bahwa terdapat variasi alel pada patogen (Basset 1986).
12
Russel (1978) menyatakan bahwa variabilitas cendawan penting bagi pemulia tanaman sehubungan dengan perkembangan dan penyebaran ras-ras fisiologis baru yang memiliki kemampuan untuk menyerang varietas-varietas yang sebelumnya merupakan varietas tahan. Ras-ras fisiologis baru ini disebut dengan ras yang ‘mematahkan’ sifat ketahanan. Hal yang perlu ditekankan adalah bahwa satu ras fisiologis tertentu dapat meliputi banyak genotip yang berbeda. Genotip-genotip ini hanya punya satu kesamaan yakni gen virulensi yang dapat menimbulkan penyakit, dikontrol dengan gen yang terkait gen pada tanaman inang. Sehingga ras fisiologis bisa terdiri dari individu-individu yang memiliki gen virulen yang sama tetapi akan menunjukkan morfologi, fisiologis dan virulensi yang berbeda jika menyerang tanaman inang yang lain dengan gen ketahanan yang berbeda.
Pemuliaan Ketahanan terhadap Penyakit Layu Fusarium Salah satu alternatif
untuk menghindari pemakaian pestisida adalah
dengan mengembangkan ketahanan tanaman budidaya melalui program pemuliaan. Sejak seabad lalu, telah diketahui bahwa tanaman memiliki sistem ketahanan terhadap penyakit yang secara genetik dapat diwariskan, dan para pemulia memanfaatkan variasi genetik dari sifat tersebut untuk mengembangkan varietas tahan melalui persilangan-persilangan (Wretbald 2002). Ketahanan terhadap penyakit adalah karakter yang diwariskan yang dapat dilihat dari berkurangnya kejadian dan/atau keparahan penyakit. Sifat tahan biasanya merupakan hasil pemuliaan dan seleksi tanaman selama bertahun-tahun dalam upaya mengintrogresikan gen-gen ketahanan ke dalam varietas hortikultur yang disukai. Ketahanan utuh (complete resistance) merupakan ketahanan yang paling baik di mana tidak ada gejala penyakit yang muncul, bahkan jika tanaman tersebut ditanam berkali-kali pada lahan yang terinfeksi patogen layu fusarium. Namun, karena populasi patogen berubah secara konstan pada wilayah yang berbeda, ketahanan utuh mungkin tidak bisa efektif secara universal. Varietas yang menunjukkan ketahanan utuh terhadap strain patogen lokal suatu wilayah bisa jadi tidak tahan terhadap strain lokal di wilayah yang lain (Latin 2007).
13
Ketahanan terhadap penyakit terutama penyakit layu fusarium adalah salah satu aspek pemuliaan tanaman semangka. Untuk mengurangi serangan penyakit fusarium terhadap tanaman semangka, alternatif cara yang efektif adalah dengan pembentukan varietas yang tahan (Mohr 1986). Pemuliaan untuk sifat ketahanan terhadap layu fusarium telah menjadi problematika tersendiri dikarenakan interaksi yang kompleks antara inang, patogen dan lingkungan tanah. (Boyhan et al. 2003). Seringkali dilaporkan tanaman-tanaman budidaya menunjukkan sifat tahan terhadap penyakit pada suatu daerah, tetapi menjadi rentan jika dibudidayakan pada daerah lain. Kondisi seperti ini umumnya menunjukkan ketahanan tanaman bersifat spesifik ras.
Materi pemuliaan seharusnya diuji dengan sebanyak
mungkin ras patogen sehingga dapat diketahui genotipe-genotipe yang bersifat spesifik ras dalam pemanfaatannya bagi program pemuliaan (Russel 1978). Program pemuliaan ketahanan terhadap penyakit berpijak pada 2 tipe ketahanan, monogenik dan kuantitatif (poligenik). Bekerja dengan ketahanan monogenik lebih mudah, namun seringkali menghasilkan ketahanan yang tidak durable. Sebaliknya, bekerja dengan ketahanan poligenik lebih sulit, namun mampu menghasilkan ketahanan yang bertahan lebih lama (durable) (Keller et al. 2000). Gen Fo-1 adalah gen dominan untuk ketahanan terhadap cendawan penyebab penyakit layu fusarium Fusarium oxysporum f.sp. niveum ras 1 yang ditemukan pada varietas ’Calhoun Gray’ dan ’Summit’, sedangkan gen resesif fo1 ditemukan pada varietas ’New Hampshire Midget’. Namun, pada spesies liar, ketahanan terhadap penyakit ini dilaporkan bersifat poligenik. Ketahanan terhadap ras 2 ditemukan pada galur PI 296341 (Guner & Wehner 2004; Wehner 2007) Pengujian ketahanan terhadap penyakit yang dilakukan di dalam rumah kaca memiliki beberapa kelebihan dibandingkan di lapang, antara lain (1) inokulasi dapat terkontrol dengan baik dengan kondisi lingkungan relatif stabil dan optimal bagi pertumbuhan penyakit (2) kemungkinan adanya escape rendah (3) kontaminasi patogen kepada areal pertanaman dapat ditekan. Kelemahan pengujian yang dilakukan di rumah kaca adalah hasil evaluasi yang diperoleh umumnya kurang representatif dari apa yang sebenarnya terjadi di lapang (Niks & Landhout 2000).
