., .
.;
., .
.
,
.
I..."
.
,. .
. . . _ . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .,._ . -. ,
.
.
PENGANTAR I'
I'
,
t
Kegiatan penelitian merupakan bagian dari darma perguruan tinggi, di samping j2ndidikan dan pengabdian kepada masyarakat. Kegiatan penelitian ini I~arusdilaksanakan olch : 6 niversitas Negeri Padang yang dikerjakan oleh staf akademikanya ataupun tenaga fmgsion~il , binnya dalam rangka meningkatkan mutu pendidikan, melalui peningkatan mutu staf akademik. 1 :ik sebagai dosen maupun peneliti. F F
Kegiatan penelitian mendukung pengembangan ilmu serta terapannya. Dalarn ha1 ini, Universitas Negeri Padang berusaha mendorong dosen untuk mel'akukan bagian yang tidak terpisahkan dari kegiatan mengajarnya, baik yang secara ung dibiayai ole11 dana Universitas Negeri Padang maupun dana dari sumber lain yang a sama dengan instansi terkait. Oleh karena itu, peningkatan mutu tenaga an hasil penelitiannya dilakukan sesuai dengan tingkatan serta kewenangan Kami menyambut gembira usaha yang dilakukan peneliti untuk menjawab berbagai alahan pendidikan, baik yang bersifat interaksi berbagai faktor yang mempengaruhi kependidikan, penguasaan materi bidang studi, ataupun proses pengajaran dalam kelas lah satunya muncul dalam kajian ini. Hasil penelitian sepcrti ini jelas menamball n dan pemahaman kita tentang proses pendidikan. Walaupun hasil penelitian ini masih menunjukkan beberapa kelemahan, namun kami yakin hasilnya dapat dipakai agiail dari upaya peningkatan i n ~ t upendidikan pada umumnya. Kami menghal-apltan ang akan datang semakin banyak penelitian yang hasilnya dapat langsung diterapkan ingkatan dan pengembangan teori dan praktek kependidikan. Hasil penelitian ini telah ditelaah oleh tim pereviu usul dan laporan penelitian Lembaga tian Universitas Negeri Padang, yang dilakukan secara "blind reviewing'. Kemudian tujuan diseminasi, hasil penelitian ini telah diseminarkan yang melibatkan dosenltenaga i Universitas Negeri Padang sesuai dengan fakultas peneliti. Mudah-mudahan penelitian anfaat bagi pengembangan ilmu pada umumnya, dan peningkatan mutu staf akademik tas Negeri Padang. Pada kesempatan ini kami ingin mengucapkan terima ltasih kepada berbagai pihak yang laksananya penelitian ini, terutama kepada pimpinan lembaga terkait yang menjadi litian, responden yang menjadi sampel penelitian, tim pereviu Lembaga Penelitian dan or pada setiap fakultas di lingkufigan Universitas Negeri Padang yang menjadi utama dalam seminar penelitian. Secara khusus kami menyampaikan terima kasih yek Due-Like dan Rektor Universitas Negeri Padang yang telah berkenan memberi danaan bagi penelitian ini. Kami yakin tanpa dedikasi dan kerjasama yang terjalin ma ini, penelitian ini tidak akan dapat diselesaikan sebagaimana yang diharapkan dan ama yang baik ini akzn menjadi lebih baik lagi di masa yang akan datang.
Padang, Desember 2000 Ketua Lembaga Penelitian Universitas Negeri Padang,
Prof. Drs. Kumaidi, MA., Ph.D.
NIP130605231
ABSTRAK . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . KATA PENGANTAR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . DAFTAR IS1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . DAFTAR TABEI, . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . .................................... DAFTA R GAM BA R .............................................................. I
.
PENDAHULUAN ............................................................... A . Latar Relakang . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . B . Batasan Masalah . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . C . Perurnusan Masalah ........................................................... D. Tujuan dan Manfaat Penelitian . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
11. KERANGKA TEORlTlS ..................................................... A . Vinblastin Sulfat . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . B . Perkembangan Embrio Mencit Tahap Praimpiantasi ..................... C . Teratogenesis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
.
III METODOLOGI PENELITIAN ............................................. A . Tempat dan Waktu Penelitian . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . B . Bahan dan Mat Penelitian .................................................. C. Tata Kerja . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . D . Analisis Data ................................................................
.
IV HASIL DAN PEMBAHASAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A . Hasil ............................................................................ B . Pembahasan ................................................................
.. ... II
111
iv v vi 1 1 3 3 3
4 4 6 7
10 10
10 II
13 14 14 18
V. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................. A . Kesimpulan . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . B . Saran ..........................................................................
21 21 21
DAFTAR KEPUSTAKAAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .......................
22
LAM PI RAN . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
24
DAFTAR TABEI,
Halaman Tabel I . Keadaan perkembangan ernbrio praimplantasi yang diamati pada umur kebuntingan 3,5 hari dari intluk ~nencityang diberi perlakuan vinblastin sulfat pada umur kebuntingan 0 liari
15
Tabel 2. Jumlah sel penyusun blastosista akhir pada pcrlakuan vinblastin sulfat pada umur kebuntingan no1 hari yang diamati pada umur kebuntingan 3,s hari.. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
17
DAFTAR GAMBAR
I-lnlaman Gambar 1. Rumus bangun cincin alkaloid indol dari vinblastin ..............
4
Gambar 2. Rumus bangun vinblastin
5
..........................................
Gambar 3. Rerbagai tahap perkembangan embrio praimplantasi . . . . . . . . . . . . .
I6
Gambar 4. Embrio praimplantasi yang mengalami kelainan perkembangan
16
Gambar 5. Sel-sel penyusun blastosista akhir dari induk yang diberi perlakuan vinblastin sulfat pada periode praimplantasi, setelah didisagregasi dan diwarnai dengan aseto-orsein 2% ...............
17
I. PENDAHULUAN A. Latar Belakang
Vinblastin merupakan salah satu dari 200 alkaloid yang sadah diidentifikasi, dan merupakan salah satu jenh alkaloid indol yang tennasnk dalam jenh alkaloid vinka yang berasal dari ekshak Cei!i!mmthus mseus (L.) G. Don. Vinblastin merupakan bahan alami yang telah terbukti dapat memperpanjang umw mencit yang menderita leukemia (Svoboda ef al, 1956 dalam Supriyanto ef al, 1997hal. 359). Senyawa vinblastin memiliki peranan penting dalam bidang kedokteran dan dapat d.rgnnakan sebagai anti tumor pada mannsia. Vmblastin juga digunakan a n i d mengobati tumor pada berbagai jenis hewan. Sedangkan kombinasi vinblastin dengan d a t diganakan sebagai obat kanker testis, kanker payndara, kanker kandung kemih dan kanker sen& (Reynold, 1993 dalam Supriyanto et d,1997haL 359 ). Vhblastin bersifat genotoksik yang mampti mengindaksi terja h y a aberasi kromosom, anenploidi dan nnlcleus menjadi mampat
Vinblastin dapat memak
kromosom pada segsel tubtih fetus yang akan mengakiiatkan malformasi atau k h a n perkembangan setelah lahir (Segawa et al, 1997 dalam Supriyanto et al 1997 hal. 359). Supriyanto ef a1 (1997 h d 64) menemukan bentuk malformasi pada fetus mencit setelah diberi pedakuan vinblastin milfat dengan do& 0,425; 0,625; dan 0,825 mg/kg b.b. melahi penyuntikan secara intraperitoneal pada umur kebuntingan 7, 9 atati 11 hari Bentak malforrnasi yang ditemtikan antara lain akrania, eksensefdtt
hernia otak, omfalosel, ekor bergelung, "club foottt, hematoma dan "cleft palate" (langit-langitbe~elah).Selain itu ditemulcan juga kelainan ginjal hrpoplasiit.
Uji teratogenisitas vinblastln membtiktikan, bahwa senyawa tersebut dapat menyebabkan malfonnasi eksternal. Pemberian vinblastin stilfat secara mtramuskalar pada tikus dengan do& 0,025 mg/kg b.b, pada umur kebuntingan 8 hari dapat menyebabkan
malfonnasi sistem saraf pusat, muh, dan anggota tubth fetus
Supriyanto ef a/, 1997 ha1 359). Penelitian lain dengan menggunakan hamster, dimana vinblastin diberikan secara intravena dengan dosis 0,l; 0,2; 0,5;dan 2,5 mdkg b.b, pada umur kebuntingan 8 hari dapat meningkatkan kematian fetus, malformasi mata, spina bifida, dan malformasi rangka (Ferm, 1963 dalam Supriyanto e/ (11, 1997 ha1 3 59). Russel dan Russel (1 954) dalam Nagao el 01 (1 986 Iial. 93) meriyatakan, baliwa jika suatu teratogen yang bereaksi pada etnbrio tahap praimplatasi (zigot, tahap pembelahan 1 - 8 sel, blastosista) atau sebelum tahap organogenesis awal akan menyebabkan organisme
itu rnati atau berkembang secara normal menu n ~hukum t "all or not hing7'. Penelitian dengan menggunakan beberapa senyawa teratogen, seperti mitomisin C yang didedahkan secara intraperitoneal pada mencit dengan umur kebuntingan 0, 1, 2, atau 3 hari mengakibatkan malformasi eksternal dan umbilikal hernia (Nagao ef al, 1986 hal. 93). Setiorini el al(1991 hat. 93) menemukan, bahwa 150 pmol/kg b.b. zink klorida atau Spmolkg b.b. merkuri klorida yang didedahkan secara intraperitonial pada mencit yang bunting 3 hari menyebabkan adanya morula mampat dan blastosista abnormal, sedan~kan25 pmol/kg b.b. kadmium menyebabkan banyaknya embrio 1
- 8 sel dan blastosista yang abnormal. Senyawa
adriamisin dengan dosis 10pVg b.b. yang diinjeksikan pada mencit dengan umur kebuntingan 3 hari menyebabkan umbilikal hernia dan langit-langit bercelah (Nagao P / a1 1997 hal. 21).
Sedangkan 0,9 mgkg b.b. rubratoksin B yang didedahkan secara intraperitoneal pada mencit dengan umur kebuntingan 0 atau 2 hari dapat meyebabkan penurunan jumlah sel blastosista akhir dan masih dapat menyebabkan malformasi eksternal fetus mencit (Sumarmin e/ nl,
1 999 hal. 105). Sejauh ini belum ada laporan mengenai pengan~li vinblastin sulfat terhadap perkembangan embrio mencit tahap praimplantasi serta jumlah sel penyusun blastosista akhir. Berdasarkan uraian di atas, maka perlu dilakukan petielitian mengenai penganlh vinblastin sulfat terhadap perkembangan embrio tahap praimplantasi dan jumlah sel penyrsun blastosista akhir mencit.
B. Bataaan Maealah Perkembangan embrio tahap praimplantasi rang akan diamati dilaknkan semai dengan penelitlan yang dilakukan oleh Setiorini et al, (1991) dan Stunannin et
d(1998) yaitn : 1. Embrio tahap 1 - 8 sel 2. Embrio tanpa zona pelnsida normal atan abnormal 3. Morula tidak mampat atau rnorwh mampa t
4 Bhstoeista (blastosista a w l , blastosista sedang, dan blastosista akhir). Pengamatan juga &kukan terhadap jumlah sel penytlsun blastosista akhir.
.
C Perurnusan Masalah
Berdasarkan latar belakang masalib dan batasan masalah d i atas, maka rumusan masalah dalam penelitian ini adalah : "Apakah terdapat pengaruh vinblastln d a t terhadap perkembangan embrio tahap praimplantasi dan jumlah sel penynsun blastosista akhir mencit (Musmusculus L.) Swhs Webster.
D. Tujuan dan Manfaat Penelitian
1. Tujuan Trjnan penelitian adalah antuk mengetahui :
a. Pengaruh
vinblastin
d a t
terhadap
perkembangan
embrio
tahap
praimplantasi mencit (Mugm d u s L.) Swies Webster.
b. Pengaruh vinblasth d a t teI'hadap jumlah sel penyusun blastosista akMr mencit (Musmuscdus L.) Swiss W ebster.
2. Madaat a. Sebagai informaei tentang &at dan karakter vinblastin snlfat yang memiliki
efek samping sebagai zat teratogenik pada embrio. b. Mormasibagipenelitilain.
A. Vinblastin Sulfa t
Vinblastin atau vinkaleukoblastin metupakan alkaloid indol dan termasuk dalam jenis alkoloid vinka yang diisolasi dari ekstrak i i r r / t t r t ~ c ~ ~ r ~r.o.sc~r~.v / ~ r ~ . \ (1,. . s j G.Don. Robinson (1 966 ) menyatakan, bahwa w~atusenyawa alkaloid mengandung nitrogen yang seringkali
terdapat dalam cincin heterosiklik, dan kebanyakan bersifat basa. Penggolongan alkaloid dilakukan berdasarkan sistem cincinnya. Alkaloid indol merupakan suatu cincin yang tampak seperti pada gambar 1 .
Gambar 1. Rumus bangun cincin alkaloid indol dari vinblastin (Robinson, 1966) .
Biosintesis alkaloid biindol, vinblastin berasal dari katarantin dan vindolin (Herbert,
R.B. 198 1 ha1 180). Senyawa vinblastin sulfat memiliki nimus kimia C46H58N409.HZS04 dengan berat molekul 909,l. Vinblastin memiliki sifat yang mudah larut dalam air dan benzen, tetapi tidak larut dalam eter dan aceton. Kristalisasi vinblastin akan terbentuk di dalam aIkohol90% (Meriad, 1979 hal. I).
Gambar 2. Rumus bangun vinblastin (Herbert, R . I3 I 98 I j
Vinblastin telah terbukti dapat memperpanjang umur niencit yang menderifit leukemia. Dalam bidang kedokteran, vinblastin digunakan sebagai obat anti tumor pada manusia dan dapat mengobati tumor pada berbagai jenis hewan
Sedangkan kombinasi
vinblastin dengan sulfat digunakan sebagai obat kanker seperti kanker testis, kanker hati, kanker payudara, kanker katidung kemih dan kanker scrvik. Hasil penelitian Segawa el a1dalam Supriyanto CI a1( I 997) memperlihatkan, bahwa vinblastin bersifat genotoksik, yaitu niampu mengititluksi tcrjadinya aberasi krotnosorn, menyebabkan aneuploidi dan nukleus menjadi mampat
Lebih lanjut adanya kenlsakan
kromosom pada sel-sel tubuh fetus yang ketnungkinan akan mengakibatkan munculnya malformasi perkembangan setelah lahir (Xing el 01, 1992 dalam Supriyanto el al, 1997) . Uji teratogenisitas membuktikan, bahwa vinblastin menyebabkan malformasi eksternal. Gabungan vinblastin dengan sulfat yang diberikan pada tikus bunting menyebabkan rnalformasi sistem saraf pusat,
muka dan anggota tubuh fetus. Pada
petielitian lain dengan mengunakan hamster, pemberian vinblastin sulfat pada induk yang
Rugh (1968) menyatakan, bahwa tahap prahnplantasi menclt terdhi atas pembelahan telur dan blastulad
a. Pembelahan telur Pembelahan telur pada mencit bertipe hohblastik anequal pada mikmlesital. Pembelahan pertama kali terjadi & ampula oviduk lebih kurang 24 jam setelah fertilisasi Setelah selama 2 3 hari embrio bergerak ke uterus. Pembelahan kedua (tmttik 4 sel) q a d i lebih kurang 37 jam setelah fertilbad Pembelahan ke tiga (untnk 8 sel) lebih h a n g 47 jam setelah fe&asi
Sedangkan pembelahan ke empat lebih
kurang 60 jam setelah fertilisasi yang menghasilkan embrio m o d a mampat (tampak selama perjalanannya ke uterus). Selarrjutnya pembelahan berlangsung semaldn cepat dan tefbentuk sel-sel yang tidak teratur. b. Blastdad Tahap mmala (dalam uterus), memjliki 34 - 64 seL Bidang pembelahannya tidak lagi berada d i p a t
Adanya rongga yang berbenttik celah berisi cairan
menandakan dimulai terbenttlknya blastosel dan proses blastulad Embrio akan bebas bebas ke lumen uterus pada 3 3 hari setelah fertilisasi dan kemudian dilanjutkan dengan pembahan itrner cellmass, blastosel dan tropoblas unttlk persiapan implantad C. Teratogenesis
Teratogenesis adalah pembentnkan cacat bawaan Kelainan
a
diketalmi
selama beberapa dasawarsa dan mernpakan penyebab ntama moibiditas dan mortalitas pada bayi yang barn lahir (LnF.C, 1994 hal 154) Cacat embrio bisa menyebabkan tidak serasinya kelangrmngan hidnp fetus, menyebabkan resorpsi, terjadinya aborei ~pontanatanpun kelahiran prematnr. Zat t e r a t o g d adalah zat nyang dapat menyebabkan cacat yang tidak bisa pulih kembali,
1. Cara kerja leratogen
Beberapa zat kimia telah terbukti bersifat tera togenik pada hewan irji. Beragamnya sifat zat-zat kimia mengakibatkan banyaknya mekanisme yang terlibat dalam efek teratogennya. Cara kerja kebanyakan teratogen bel~lnijelas Selain itu, teratogen berpotensi dapat menimbulkan efek teratogen atau tidak tergantung dari Oeberapa faktor seperti 0
mekanisme bioaktivasi, kes~abilanmetabolit reakrif, kemainpuan zat itu menembus sawar J _
plasenta dan kemampuan jaringan embrio menawarkan racun. Karena itu, pengujian yang tepat untuk teratogenisitas suatu toksikati sangat diperlukan (Lu, F.C, I994 hal. 157-1 59). Setiap toksikan yang masuk ke dalam tubuh dengan dosis tinggi dapat mengganggu keseimbangan fisiologis tubuh. Jika toksikan tersebut didedahkan pada induk yang sedang bunting, maka z a t tersebut dapat mengganggu perkembangan embrio, sehingga dapat menimbulkan kelainan perkembangan. Zat yang berkemampuan teratogenik sangat banyak macamnya, misalnya: obat-obatan, vitamin, hormon, mineral, %as dan bahan bioaktif seperti alkaloid. Cara pemberian zat dapat mencntukan cepat Iambatnya zat tcrsebut dimetabolisme
-
3
dan mencapai jaringan targetnya sehingga menentukan macam metabolit *yang terbentuk dalam satuan waktu tcrtentr~(Pficffcr, 1988 dalani Machmi~diti,1992 hal. 70).
2. Beberapa uji teratogeriisitas Suatu toksikan akan menimbulkan efek-efek yang kurang baik bagi fetus, walaupun toksikan tersebut tidak menyebabkan racun bagi induk. Efek yang ditimbulkan bisa berupa berkurangnya berat badan, hiperaktif, dan ayan. (Manson dan Kang, 1 989 hal. 320). Russel dan Russel (1954) dalam Nagao e / a/ (1986) menyatakan, hahwa suatu teratogen yang bekerja pada embrio tahap praimplantasi atau sebelum organogenesis awal akan menyebabkan organisme itu mati atau tumbuh secara normal. Selama tahap pradiferensiasi, embrio tidak rentan terhadap zat teratogen. Zat teralngeti dapat menyebabkan kematian enibrio dikarenakan sebagian besar sel embrio it11 mati, atau tidak memperlihatkan elkk yang
b
2. Beberapa uji terntogenisitas
Suatu toksikan akan menimbnlkan efek-efek yang h a n g bajk bagi fetus, walanpun toksikan tersebnt tidak menyebabkan r a m bagi indulc.
Efek yang
ditimbulkan bisa bernpa berknrangnya berat badan, lriperaktif, dan ayah (Manson dan Kang, 1989 ha1 320).
Russel dan Russel (1954) dalam Nagao ef al (1986)
menyatakan, bahwa matu teratogen yang bekerja pada embrio tahap praimplantasi atan sebelum organogenesis a w l akan menyebabkan organisme itu mati atan tumbnh eecara normal
Selama tahap pradiferemiaei, embrio tidak rentan terhadap zat
teratogen. Zat teratogen dapat menyebabkan kematian embrio dikarenakan sebagian besar sel embrio ita mati, atan tidak mernperlihatkan efek yang nyata. Jika tejadi efek yang agak berbahaya, sel yang ma& hidup akan menggantikan kernsakan tersebnt dan membentuk embrio normal (lnF. C, 1994 ha2 156).
Had dari berba gai penelitian terbnkti, bahwa zat yang bemifa t tera togen yang diberikan pada hewan uji yang sedang bunting eaat embrio dalam tahap praimpkntasi menyebabkan berbagai macam kelainan pada fetus. Macam-macam kelainan yang ditemukan setelah kelahiran antara lain : hematoma, spina bifida, aksensefali, ekor b e q ~ h g langit-langit , bercelah, mata terbuka dan omfdosel,
Sedangkan pada
pengamatan embrio tahap praimplantasi, zat teratogen yang diberikan pada indnk yang sedang bunting, saat embrio tahap praimplantasi ditemukan antara lam blastosista abnormal, mornta mampat dan permrunan jumlah sel penyusnn blastosista
akhir.
1
III. bdETOD OLOG I PENELITIAN A . Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Stcuktar Perkembangan dan Sistematik Hewan Biologi FMlPA UNP pada bualan Agustas sampai dengan November 2000.
B . Bahan dan Alat Penelitian 1. Bahan
Bahan yang diganahin dalam penelitian ini adalah : a. Hewan Hewan yang digunakan adalah mencit (Mum d u L.) S ~ ~ E Webster. JB Bahan untnk memeljhara yaitu pelet pakan mencit, sekam padi untnk alas kandang dan air ledeng untnk minuman mencit b. Bahan kimia Bahan kimia yang dignn.&n adalah Vinblastin &t,
akuabidesthta, aeeto-
onein, sodium dtcat 0,7 %, larntan Hank's, Tymde pH 3, NaQ 0,9 %, lamtan f b a t i f etjl-alkohol : aeam asetat (3 :I), kertae pH mdikator dan Canada balsem. 2. Alat
Alat yang digunakan adalah: botol mirmman mentit, syringe tnberkdlin 26G, Hand cannter, kaca arbi, baekom plastik, alat bedah, pipet hisap, gelas ukur, kaca
objek, kaca penutnp, jarnm fh~hing,nxikroskop stereo, mikroskop listrik, dan labn Erlenmeyer, W a n g a n analitik. Perhgkapan lain : film slide, film print, label, kertas tism, dan kertas saring.
C .Tata Kerja 1. Persiapan dan pemeliharaan mencit
Hewan yang d.lgnnakan adalah m e m t (Mim d m L.) Swiss Webster yang dipemleh dari Jnrnean Biologi FMIPA UNAND Padang. Selanjutnya mencit ditempatkan di rnang pemeliharaan hewan L a b o r a t o m Straktur Perkembangan dan Sistematik Hewan Jnrnsan Biologi F'MIPA UNP Padang. Mencit ditempatkan pada kandang bernpa baskom plastik yang dibatasi dengan kawat dan diberi alas sekam yang diganti 2 kali dalam seminggn. Mencit diberi pakan dan minum secara ad
Bib, clqisahkan antara yang jantan dan betina sebelnm mencapai umur dewasa seksud Semdah mencapai nmnr dewasa sekmal yaitu nmnr 10 minggu nntnk mencit betina dengan rata-rata berat badan 2530 gram dan 12 minggn nntnk mencit jantan dengan rata-rata berat badan 3035 gram, maka mencit tersebut siap nntnk dikawinkan Mencit betina yang sedang dalam fase estrus yang ditandai dengan warna vagina yang kemerahan dan terlihat lembab dikawinkan pada pnkdl 17.00 WTB dengan mencit jantan dengan cara dipasangkan dalam satn kandang. Keesokan harinya jika ditemnkan snmbat vagina (vagina plug), maka mencit dinyatakan bunting no1hari (Taylor, 1986 )
2. Perlalcnan dan pengamatan Terhadap mencit yang telah dinyatakan bunting no1 hari terselmt diberikan perlaknan vinblastin d a t dengan doeis tunggal 0,4; 0,6 atan 0,8 mg/kg b.b. pada
nmnr kebuntingan 0 hari secara intraperitoneal V o h e irjeksi adalah 0,l m1/10 gr b.b. m d t .
Sedangkan nntnk kelompok kontrol diberikan ahabides yang
mernpakan pelarut dari vinbhstin &at
Semua kelompok perlakuan dan kontrol
dilaknkan nlangan atau replilraei sebanyak 6 inddk
2. I. Pengaruh vinblastin sillfat terhadap perkembangan ernbrio taliap praimplantasi.
Untuk mengetahui penganlh virlblastin sull'a~~crliatlapperkellibangat1 cnlbrio taliap .praimplantasi, dilakukan pengamatan dan pengatnbilan data terhadap mencit yang telah diberi perlakuan vinblastin sillfat umur kebuntingan 3,5 hari. Mencit dibunuh dengan cara dislokasi leher, kemudian ernbrio dikoleksi dcngan cara membilas (flushing) uterus dan oviduk den2a.n lamtan Hank's, menggunakan jaruni/kanul ukuran 26G yang ditumpulkan dan dipasangkan pada syringe tuberkulin. Hasil bilasan ditampung pada gelas arloji. Embrio yang berada dalam gelas arloji diseleksi di bawah mikroskop bedah dan dipindahkan k e dalam cekungan objek gelas bercekungan dengan pipet hisap khusus. Kemudian dilakukan pengamatan terhadap keadaan perkembangan embrio. Klasifikasi perkembangan embrio yang diamati dilakukan tnenurut Setiorini ef nl (1991) dan Sumarmin ef nl (1998) yaiti~:embrio tahap satu sel (zigot) sampai pembelahan delapan delapan sel, embrio tanpa zona pelusida normal atau abnormal, monlla tidak mampat, m o n ~ l amampat, blastosista awal, blastosista sedang dan blastosista akhir. Pengamatan juga dilakukan terhadap jenis dan jumlah etnbrio yang mengalami kelainan lainnya. Hasil pengamatan dicatat dan untuk beberapa data (spesimen) difoto untuk dokumentasi penelitian.
2 2. Pengaruh vinblastin sulfat terhadap jrimlah sel penyusun blastosista akhir Pengamatan dan pengambilan data tentarig pengan~hvinblastin sr~lfatterhadap jumlah sel penyusun blastosista akhir dilakukan pada utnur kebutitingan 3,5 liari. Mencit dibunuh dengan cara dislokasi leher, kemudian embr-io dikoleksi dengan cara tnembilas (flushing ) uterus dan oviduk densan larutan Hank's Hasil bilasan ditampung dengan kaca arloji. Kemudian diseleksi hanya embrio yang berada pada taliap blastosista akhir saja yang diambil dan diletakkan di atas permukaan kaca objek gelas Untuk menghitung jutnlah sel penyilsun blastosista akhir dilakukan disagr-egasi sel dengan mengikuti metoda disayregasi sel oleh Tarkowski ( 1 966) yai ti] dengan mengpnakan
Untuk menghitang
jtunlah eel penyusnn bkstosista akhir dilakukan
disagregasi eel dengan m e n g h t i metoda disagregasi sel oleh Tarkowski (1966) yaitu dengan menggunakan beberapa tetes enzim p m a s e dan sodium sitrat hipotonik (0,7%) d m setelah sel-sel memisah dan menyebar diwarnai dengan aseto-mein.
Setelah preparat kerjlng (dikeringkan pada suhu ruang), kemudian dilaktilcan penghitungan Jnmlah sel blastosista akhir dengan bantuan "hand cotmteli' d i bawah mikroekop cahaya. Untdk membuat preparat awet h a d disagregasi blastosista a W yang mdah kering ditetesi dengan canada balsem dan ditutup dengan cover glass.
Beberapa preparat h a d disagregasiblastosista akltir difoto untuk d o h e n t a d
D. Analisis Data S e l d data yang diperoleh dari penelitian ini kemndian dianalisis secara
statist&. Data yang bersifat non parametrik dmji dengan 'Wikoxon rank sum test" (W&oxon B Wilcox, 1965), sedangkan data parametrik diuji dengan uji t-Student dan dibandingkan dengan kelompok kontroL Data yang bersifat non parametrik yaitu, persentase blastosista akhir, persentase embrio yang terganggu perkembangannya (total embrio yang mengalami hambatan perkembangan dan embrio abnormal). Data
parametrik yang dinji adalah jamlah sel yang menyum blastosista akhir.
IV. HASIL DAN PERIUAI-IASAN
A. Hasil 1 . Hasil pengamatan terhadap perkembangan embrio tali;~plvainiplalitasi
I-Iasil pengamatan mengenai pengaruh vinbii~stin sulfat terhadap perkembangan ernbrio tahap praimplantasi disajikan pada tabel I . Dari Tabel 1 ditemukan embrio yang terhambat perkembangannya, biastosista akhir dan embrio yang mengalami kelainan perkembangan (Gambar 3 dan Gambar 4). Embrio y a y mengalami hambatan perkembangan terdiri dari embrio 1-8 sel, m o n ~ l atidak mampat, morula mampat, blastosista awal dan blastosista sedang. Sedangkan embrio yang mengalami kelainan perkembangan ditemukan dalam bentuk enibrio abnormal tanpa zona pelusida, enibrio berdegenerasi, dan zona pelusida tanpa embrio. Pada Tabel 1 terlihat bahwa persentase jumlah embrio yang mencapai tahap blastosista akhir menurun nyata sejalan dengan kenaikan dosis yang didedahkan. Bahkan pada perlaktran 0,8 m g k g b.b. tidak ditemukan lagi embrio pada tahap blastosista akhir. Embrio yang ditemukan didominasi oleh embrio abnormal dan embrio yang terhambat perkembangannya: Persentase embrio yang mengalami gangguan perkembangan (embrio yang terhambat perkembangannya dan embrio abnormal) meningkat nyata dan sejalan dengan kenaikan dosis yang diberikan. Hal ini terkecuali pada perlakuan 0,8 m a g b.b. dimana embrio abnormal dan embrio yang terhambat perkembangannya mendominasi hasil pengamatan terhadap embrio praimplantasi.
Gambar 3. Berbagai tahap perkemhangan cnibrio praimplantasi : a: embrio I - 8 sel; b. morula tidak mampat; c. morula mampat;. d. blastosista awal; e. blastosista sedang; f. biastosista akhir; zp. zona pelusida; bl. blastorner; bls. blastosel; rp. rongga perivitelin; tf trofoblas; icm. inner cell mass.
Gambar 4. Embrio praimplantasi yang mengalami kelainan perkembangan. a. embrio yang berdegenerasi ;b.embrio abnormal tanpa zona pelusida
