DAFTAR PUSTAKA
Aoki T, Matsumoto H, Asako Y, Matsunaga Y, Shimomura K.1997. Variation of alkaloid productivity among several clones of hairy roots and regerated plants of Atropa belladonna transformed with Agrobacterium rhizogenes 15834. Plant Cell Rep 16. 282-286. Anwaruddin MJ, Soetarto I, Soegito Y. 1991. Stimulasi pertumbuhan semai manggis (Garcinia mangostana L.). J Hort 2 : 8-12. Armitage P, Walden R, Draper J. 1987. Plant genetic transformation and gene expression. University of Leicester. p 1-38 Bassil NH, Proebsting WM, Moore LW, Lightfoot DA. 1991. Propagation of Hazelnut Stem Cutting Using Agrobacterium rhizogenes. Hort Sci 26(8) : 1058-1060. Brandl M, Clark EM, Lindaow SE. 1996. Characterization of the indole-3-acetic acid (IAA) biosynthetic pathway in an epiphytic strain of Erwina herbicola and IAA production in vitro. Can. J. Microbiol. 42:586-592. Caboni E, Lauri P, Tonelli M, Falasca G, Damiano C. 1996. Root induction by Agrobacterium rhizogenes in walnut. Plant Sci 118:203-208. Campbell NA, Reece JB, Mitchell LC. 2000. Biologi. Jilid II. Penerbit Erlangga. Castillo CO, Chalmers KJ, Waugh R, Powell W. 1994. Detection of genetic diversity and selective gene introgression in coffee using RAPD markers. Theor. Appl. Genet. 87 : 934-938. Charity JA, Holland L, Donaldson SS, Grace L, Walter C. 2002. Agrobacterium-mediated transformation of Pinus radiata organogenic tissue using vacuum-infiltration. Plant Cell, Tissue and Organ Culture. Vol 70 (1). 51-60. Chriqui D, Anne SE, Walter SE, Els P, Henry VO. 1996. Rol Genes and Root Initiation and Development. J. Plant and Soil 187:47-55. Churiyah. 2005. Protein bioaktif dari bagian tanaman dan akar transgenik Cucurbitaceae dan aktivitas antiproliferasi galur sel kanker in vitro. [Disertasi]. Program Pascasarjana. IPB. Cox JEK. 1988. Garcinia mangostana-Manggosteen. p 361-375. In Gardner, R.J and S.A. Chaudori (eds.). The Propagation of Tropical Fruit Trees. FAO and CAB, England.
Cruz FSD. 2001. status report on genetic resources of mangosteen (Garcinia mangostana L) in Southeast Asia. IPGRI. India Cutter EG, Feldman LJ. 1970. Trichoblasts in Hydrocharis, origin, differentiation, dimensions and growth. Am. J. Bot. 57: 190-201. Damiano C, Archilletti T, Caboni E, Lauri P, Falasca G, Mariotti D, Ferraiolo G. 1995. Agrobacterium-mediated transformation of almond: in vitro rooting through localized infection of A. rhizogenes. W.t. Acta Hort 392:161-169. Damiano C, Monticelli S. 1998. In vitro fruit trees rooting by Agrobacterium rhizogenes wild type infection. Plant Biotechnol Vol 1 No 3. Davies PJ. 2004. Plant hormones Biosynthesis, signal transduction, action. Kluwe Academic Publishers. de la Riva G, Gonzàlez-Cabrera R, Vázquez-Padrón R. 1998. Agrobacterium tumefaciens: a natural tool for plant transformation. Electronic Journal of Biotechnology Vol.1 No.3. Departemen Pertanian. 2005. Ekspor komoditas utama subsektor hortikultura. Pusat Data dan Informasi Pertanian. http//www. deptan.go.id. Ergűn N, Topcuoğ ŞF, Yildiz A. 2002. Auxin (Indole-3-acetic acid), gibberellic acid (GA3), Abscisic Acid (ABA) and cytokinin (Zeatin) production by some species of mosses and lichens. Turk J Bot (26) : 13-18. Ermayanti TM, Imelda M, Tajuddin T, Kubota C, Kozai T. 1999. Growth promotion by controlling the in vitro environment in the micropropagation of tropical plant species. Proceedings of the Tokyo International Forum on Conservation and Sustainable Use of Tropical Bioresources. November 9-10. NED, JBA. Japan. p 10-25. Ermayanti TM, Al Hafiizh E, Rahmawati S, Aryanti. 2002. Transformasi Artemisia cina dan Artemisia annua dengan Agrobacterium rhizogenes. Makalah Seminar MIPA III. FMIPA-ITB. Bandung. 21-22 Oktober 2002. Fahn A.1995. Anatomi tumbuhan. Gadjah Mada University Press. Gelvin SB, Schilperoort RA, Verma DPS. 1988. Kluwer Academic Publishers. Dordrecht.
Plant molecular biology.
Gilroy S, Jones DL. 2000. Through form to function: root hair development and nutrient uptake. Trends in plant science. Reviews. Vol. 5 No. 2 : 56 -60. Giri A,
Narasu ML. 2000. Transgenic hairy root : Recent trends and applications. Biotechnology Advances 18 : 1-22.
Goh HKL, Rao AN, Loh CS. 1990. Direct shoot bud formation from leaf explants of seedings and mature mangosteen (Garcinia mangostana L) trees. Plant Sci 68:113-121. Gunawan LN. 1988. Teknik kultur jaringan. PAU Bioteknologi, IPB. Bogor. Hamill JD, Rounsley S, Spenser A, Todd G, Rhodes MJC. 1991. The use of polymerase chain reaction in plant transformation studies. Plant Cell Reports. 10 : 221-224. Han KH, Gardon MP, Strauss SH. 1997. High-Frequency Transformation of Cottonwoods (Genus Populus) by Agrobacterium rhizogenes. Can. J. For. Res. 27:464-470. Harahap F. 2005. Induksi variasi genetik tanaman manggis (Garcinia mangostana L.) dengan radiasi sinar gamma. [Disertasi] Bogor. Sekolah Pasca Sarjana. Institut Pertanian Bogor. Harran S, Tjondronegoro PD. 1992. Dasar-dasar fisiologi tumbuhan. Antar Universitas Ilmu Hayat. IPB. 427 p.
Pusat
Hidayat EB. 1995. Anatomi Tumbuhan Berbiji. Penerbit ITB Bandung. 275 p. Hidayat R, Poerwanto R, Yahya S, Winata LW. 1999. Studi aplikasi IBA dan Triakontanol terhadap pertumbuhan bibit semai manggis dan fukugi. Comm. Ag. 4(2): 74-79. Hidayat R. 2003. Kajian ritme pertumbuhan tanaman manggis (Garcinia mangostana L.) dan faktor-faktor yang mempengaruhi. [Disertasi]. Bogor. Program Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor. Hiei Y, Komari T, Kubo T. 1997. Transformation of rice mediated by Agrobacterium tumefaciens. Plant Mol. Biol. 35:205-218. Him KWR, Rudi JS, Gary AS. 1987. Factors influencing root formation in dicot by Agrobacterium rhizogenes. Can. J. Bot. Vol. 66 : 642-644. Jacobsen S. 2003. Molecular and in situ characterization adventitious of root development in pinus contorta. Thesis Ph.D. http://www.mcdb.ucla.edu /research /Jacobsen/ AVH % 200124. html (20/8/2003). Jeng-Sheng H. 2001. Plant pathogenesis and resistance. Kluwer Academic Publishers. London. 261-265 Klee H, Horsch R, Rogers S. 1987. Agrobacterium mediated plant transformation and its further application to plant biology. Plant Physiol 38 : 467-486 Lakitan B. 1995. Fisiologi pertumbuhan dan perkembangan tanaman. PT Raja Grafindo Persada. Jakarta. p 218
Lambert C, Tepfer D. 1991. Use of Agrobacterium rhizogenes to Create Chimeric Apple Trees Through Genetic Grafting. Biotechnology. Vol 9. January 1991. Leuschner C, Hertel D. 2003. Pelatihan fisiologi tumbuhan bagi dosen PTN dan PTS se-Jawa, Sumatera dan Sulawesi. Kerjasama antara FMIPA-IPB dan Bagian Proyek Peningkatan Kualitas Sumberdaya Manusia. Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi. Departemen Pendidikan Nasional. Bogor, 1-11 Oktober 2003. Leyval C, Berthelin J. 1989. Influence of acid-producing Agrobcterium and Laccaria laccata on pine and beech growth. Nutrient uptake and exudation. Agr. Ecosys. Environ. 28: 313-319. Li M, Leung DWM. 2003. Root induction in radiate pine using Agrobacterium rhizogenes. Plant Biotechnol Vol 6 No 3. Lukman R. 1996. Pengaruh kinetin, lama induksi dalam IBA dan konsentrasi sukrosa terhadap pertumbuhan dan perkembangan akar eksplan tunas manggis (Garcinia mangostana L.) dalam kultur in vitro. [Skripsi] Bogor. Jurusan Budidaya Pertanian. IPB. p 59 McAfee BJ, White EE, Pelcher LE, Lapp MS. 1993. Root induction in pine (Pinus) and Larch (Larix) spp. Using Agrobacterium rhizogenes. Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 34:53-62. Macrae S, Staden JV. 1993. Agrobacterium rhizogenes mediated transformation to improve rooting ability of eucalypts. Tree Physiol 12: 411-418. Manulis S, Chesner AH, Brandl MT, Lindow SE, Barash I. 1998. Differential involvement of indole-3-acetic acid biosynthetic pathways in pathogencity and epiphytic fitness of Erwinia herbicola pv. Gypsophilae. Molec. PlantMicrobe Interac. 11:623-642. Masri M, Azizah H, Razi IM, Mamat AS. 1998. Arbuscular mycorrhiza enhances growth and reduces the nursery period of mangosteen (Garcinia mangostana L.) seedlings. J Trop Agric and Fd Sc 26 (1) :7-15 McAfee BJ, White EE, Pelcher LE, Lapp MS. 1993. Root inducion in pine (Pinus) and larch (Larix) spp. Using Agrobacterium rhizogenes. Plant Cell Tissue Organ Cult 34: 53-62. Mihaljević S, Stipković S, Jelaska S. 1996. Increase of root induction in Pinus nigra explants using agrobacteria. Plant Cell Reports 15: 610-614. Muas I, Anwaruddin MJ, Herizal Y. 2002. Pengaruh inokulasi cendawan mikoriza arbuskula terhadap pertumbuhan bibit manggis. J Hort 12 (3):165-171.
Nakamura. 1995. Method for cell and tissues observation. P 15-21. In T. Hasiba and K. Hinata (Eds). A Manual Experiment for Plant Biology. Tokyo:Soft science publication. Nakasone HY, Paull RE. 1999. Tropical Fruits. Crop Production Science in Horticulture. p 359 – 369. Nilson O, Olsson O. 1997. Geeting to the root : The role of Agrobacterium rhizogenes rol genes in the formation of hairy roots. Physol Plant 100 : 463-473. Owens LD, Smigocki AC. 1988. Transformation of soybean cell using mixed strains of Agrobacterium tumefasciens and phenolic compounds. Plant Physiol 88 : 570 – 573. Patena L. Sutter EG, Dandekar AM. 1988. Root induction by Agrobacterium rhizogenes in a difficult-to-root woody species. Acta Hort. 227: 324-329. Pertamawati. 1994. Pengaruh IBA dan Phloroglucinol terhadap pertumbuhan dan perkembangan pucuk manggis (Garcinia mangostana L.) dalam kultur in vitro. [Tesis]. Program Pascasarjana IPB. p 74. Pertamawati. 2003. Kajian pertumbuhan planlet manggis (Garcinia mangostana L.) yang dikulturkan secara in vitro dan semiaseptik dalam keadaan fotoautotrof. [Ringkasan Disertasi]. Program Pascasarjana. IPB. 27 p. Poerwanto R, Inoue H, Kataoka I. 1989. Effect temperature on the morphology and physiology of root of trifoloate orange budded with satsuma mandarin. J. Japan. Soc. Hort. Sci. 58(2) : 267-274. Poerwanto R, Darusman LK, Sari CID. 1998. Screening of mycorrhizae to enhance the growth rate of mangosteen seedling. Paper presented in the symposium and 1998 spring meeting of Japanese Society for Horticultural Science in Commemoration of 75th Universary, Tokyo, Japan. 10 p. Poerwanto R. 2000. Teknologi Budidaya Manggis. Makalah. Diskusi Nasional Bisnis dan Teknologi Manggis. Bogor. 15-16 Nov. Powell BS, Morel P, Huang Y, Kado C. 1989. An Agrobacterium positif regulatory DNA-binding protein is phosphorylated in vitro. In Molecular Biology Plant Pathogen. 14 p. Purnamaningsih R. 2006. Intoduksi gen DefH9-iaaM dan DefH9-RI-iaaM melalui vektor Agrobacterium tumefaciens untuk meningkatkan produksi tanaman tomat. [Disertasi] Bogor. Sekolah Pascasarjana. IPB. 156 p. Rais M, Mansyah E, Lukitariati S, Anwaruddin MJ. 1996. Peningkatan efisiensi teknologi usahatani manggis. Pusat Penelitian Buah. Pusat Penelitian dan Pengembangan Pertanian, Departemen Pertanian. 40 p.
Ramlan MF, Mahmud TM, Hasan BM, and Karim MZ. 1992. Studies on photosynthesis on young mangosteen plants grown under several growth conditions. Acta. Hort. 321: 482-489. Riva GA, González-Cabrera J, Vázquez-Padrón R, Ayra-Pardo C. 1998. Agrobacterium tumefaciens: a natural tool for plant transformation. EJB Electronic Journal of Biotechnology Vol. 1. No. 3. Roostika I, Sunarlim N, Mariska I. 2005. Mikropropagasi tanaman manggis (Garcinia mangostana). J. AgroBiogen. 1(1) : 20-25. Rugini E, Pellegrineschi A, Mencuccini M, Mariotti D. 1991. Increase of rooting ability in the woody species kiwi (Actinidia deliciosa A. Chev.) by transformation with Agrobacterium rhizogenes rol genes. Plant Cell Rep. 10:291-295. Salisbury FB, Ross CW. 1995. Fisiologi tumbuhan. Penerbit ITB. Bandung. 343 p Sambrook JE, Frits T, Maniatis. 1989. Molecular cloning. A Laboratory Manual. New York. Siswanto, Budiani A, Chaidamsari T, Darussamin A. 1997. Ekspresi gen transien GUS pada tahap awal transformasi genetik tanaman kopi melalui Agrobacterium tumefaciens. Prosiding Seminar Perhimpunan Bioteknologi Pertanian Indonesia. Surabaya. Hal : 149 -157. Slightom JL, Durand-Tardif M, Jouanin L, Tepfer D. 1986. Nucleotide sequence analysis of the TL-DNA of Agrobacterium rhizogenes agropin type plasmid. J.Biol.Chem. 261:108-121. Strobel GA, Nachmias A. 1985. Agrobacterium rhizogenes promoter the initial growth of bare root stock almond. J. of General Microbiology 131, 1245 – 1249. Strobel GA, Nachmias A, Hess W M. 1988. Improvements in the growth and yield of olive trees by transformation with the Ri plasmid of Agrobacterium rhizogenes. Can. J. Bot. 66: 2581-2585. Suastuti. 1998. Pemanfaatan hasil samping industri pertanian (molase dan limbah cair tahu) sebagai sumber carbón dan nitrogen untuk produksi biosurfaktan oleh Bacillus sp. Galur comercial dan local. [Tesis] Bogor. Program Pascasarjana. IPB. 70 p Suhartono MT, Suwanto A, Likuma MY. 1994. Identification by pulsedfield gel electrophoresis of protease-producing bacteria isolated from liquid tofuwaste. Asia Facific Journal of Molecular Biol and Biotechnol. 2 (3): 193-199. Sutter EG, Luza J. 1993. Developmental anatomy of roots induced by Agrobacterium rhizogenes in Malus pumila ‘M26’ shoot grown in vitro. Int J Plant Sci 154:59-67.
Taiz L, Zeiger E. 2002. Plant physiology. Sinauer Associates, Inc. Sunderland, Massachusetts. Tan F. 1997. Transformasi kentang kultivar Atlantic dengan gen protein selubung potato virus y dan kloning gen protein selubung potato virus x. [Disertasi] Bogor. Program Pascasarjana. IPB. Tirtawinata MR, E Wijaya , Tuherkih. 2000. Pembibitan dan pembudidayaan manggis. Penebar Swadaya. Jakarta. Te-chato S. 1997. Tissue culture of mangosteen (Garcinia mangostana L) Pawa (G. speciosa Wall) and Somkhag (G. atroviridis Griff.) Songklanakarin. J Sci. Technol. 19(2) : 147-155. Triatminingsih R. Karsianah dan E Nazir. 1995. Pertumbuhan dan perkembangan beberapa macam eksplan manggis (Garcinia mangostana L.). Prosiding seminar hasil penelitian Bioteknologi II. Puslitbang Bioteknologi LIPI, Cibinong. Bogor. 84–90 p. Valpuesta V. 2002. Fruit and vegetable biotechnology. CRC Press. Boca Raton Boston New York Washington, DC. 338 p. van der Salm T P M, Hänisch ten Cate C H, Dons H J M.1996. Prospects for application of rol genes for crop improvement. Plant Molecular Biology Reporter 14: 207-228. Verheij EWM. 1992. Garcinia mangostana L. p: 177-181 in E W M Verheij dan R E Coronel (Edt.) Edible fruit and nuts. PROSEA 2. Bogor. 446 p. Waisel Y, Eshel A, Kafkafi U. 2002. Plant roots : the hidden half. Marcel Dekker, Inc. New York. Wattimena GA. 1988. Zat pengatur tumbuh tanaman. Pusat Antar Universitas. Institut Pertanian Bogor. 145 p Wattimena GA. 2006. Kecendrungan marjinalisasi peran kultur jaringan dalam pemuliaan tanaman. Orasi Purnabakti, Guru Besar Fakultas Pertanian. Institut Pertanian Bogor. Bogor. Werbrouck SPO, Debergh PC. 1994. Apllied aspect of regeneration. 6A. Micropropagation. Di dalam: Dixon RA, Gonzales RA, editor. Plant cell culture. A practical approach. Oxford University Press. 127-135 p. White FF, Taylor BH, Huffman GA, Gordon MP, Nester EW. 1985. Molecular genetic analysis of the transferred DNA regions of the root inducing plasmid Agrobacterium rhizogenes. J Bacteriol 164 (1) : 33-44. Whiteman RH, Scheffer R, Strobel GA. 1988. Foctors influencing root formation in dicots by Agrobacterium rhizogenes. Can. J. Bot. 66 : 642 – 644.
Wible J, Chacko EK, Downtown WJS. 1992. Mangosteen (Garcinia mangostana L.) A Potential Crop for Tropical Northern Australia. Acta Hor 321:132137. Winans SC. 1992. Two-way chemical signaling in Agrobacterium-plant interaction. Microbiologcal Reviews 56 (1): 12-31 Yaacob O, Tindall HD. 1997. Mangosteen cultivation. Diterjemahkan oleh Anwarudin MJ, Muas I dan Mansyah E. Balai Penelitian Tanaman Buah Solok. 100 p. Yusnita. 2003. Kultur jeringan cara memperbanyak tanaman secara efisien. Agromedia Pustaka. 105 p. Zambryski P, Tempe J, Schell J. 1989. Transfer and function of T-DNA genes from Agrobacterium Ti and Ri plasmid in plants. Cell 56:193-201. Zhu LH. 2001. Transformation of the apple rootstocks M.9/29 with the rolB gene and its influence on rooting and growth. Plant Sci. 160:433-439.
Lampiran 1. Metode Perhitungan Anatomi Akar Bibit Manggis
Strain A. rhizogenes
(1)
(2)
(3)
(4)
Rata-rata diameter pembuluh xilem*) (µm)
Jumlah total pembuluh xilem pada sayatan melintang*)
Luas serapan permukaan sayatan melintang (µm 2)
Total luasan sayatan melintang**)
Rasio = (3) (4)
Perhitungan :
Luas serapan = permukaan sayatan melintang (3)
rata-rata diameter xilem
2
x π x total pembuluh pada sayatan penampang melintang (2)
2
Total luasan sayatan melintang (4) =
2
πr
à π = 3.14 r = jari-jari sayatan melintang
Rasio =
perhitungan (3) Total luasan sayatan melintang
Keterangan :
*)
Perbesaran 40X
**)
Perbesaran 10X
Lampiran 2. Pembuatan larutan Scanning Electron Microscop (SEM)
Pembuatan larutan stok bufer cacodilat 0.2 M Melarutkan sebanyak 42 8 g sodium cacodilat trihidrat (Na (CH,)2As2O3 dengan akuades sehingga volume larutan menjadi 1000 ml Pembuatan working solution Sebanyak 50 ml larutan stok + 5,4 ml 0 1 M HCI dan ditambahkan akuades sehingga volume menjadi 200 ml, sehinga, didapat larutan ber pH 7,4. Formula Larutan Glutaraldehid 2%. 9 ml tarutan bufer sodium cacodilat + I ml glutaraldehid Larutan glutaraldehid harus dibuat segar, dari larutan stok glutaraldehid 20%. Formula Larutan Tannic Acid 2% Ditimbang 2 g tannic acid kemudian ditambahkan bufer sodium cacodilat sehingga volume larutan menjadi 100 ml Larutan tannic acid harus dibuat dalam keadaan segar
Lampiran 3. Komposisi larutan dan bahan-bahan yang digunakan untuk isolasi DNA, PCR dan elektroforesis (Sambrook et al. 1989). I. Ekstraksi/isolasi DNA 1. Larutan CTAB 10 % NaCl 4,1 gr. CTAB 10 gr Larutkan dengan aquades hingga 100 ml. 2. Buffer tris-Hcl 1 M pH 8,0 Tris base 12,11 gr HCl pekat 4,2 ml Akuades 80 ml Atur pH larutan hingga 8,0 volume total 100 ml dan sterilisasi (otoklaf) 3. Larutan EDTA 0,5 M pH 8,0. EDTA 18,61 ml NaOH 2,0 ml Akuades 80 ml Atur pH larutan hingga 8,0 volume total 100 ml dan sterilisasi (otoklaf) 4. NaCl 5 M NaCl 29,22 gr Larutkan dengan aquades hingga volume 100 ml dan sterlisasi dengan otoklaf. 5. Etanol 70% Etanol 70 ml Akuades 30 ml Simpan dalam lemari es. 6. Isopropanol dingin. 7. Buffer ekstrak (Doyle dan Doyle, 1987) Larutan CTAB 10 % 5 ml Larutan EDTA 0,5 M pH 8,0 = 1 ml. Buffer tris-HCl 1 M pH 8,0 = 2,5 ml NaCl 5 M = 7,5 ml. Akuades steril = 8,35 ml Mercaptoetanol = 0,75 ml 8. Kloroform : isoamil alkohol ( 24 : 1) Kloroform 48 ml Isoamil alkohol 2 ml. 9.Natrium asetat
3 M pH 5,2
10. Buffer phenol. 0,2 gr hidroquinon dalam 20 ml phenol, Kloroform : isoamil alkohol (24 : 1) Kedua bahan dicampur dengan perbandingan 1 : 1
II. Pembuatan RNAse 10 mg/ml (dalam Na asetat 0,01 M pH 5,2) Timbang 0,01 g RNAse (SIGMA) masukan kedalam tabung 1,5 ml kocok dan panaskan pada suhu 100 oC selama 15 menit. Dinginkan pada suhu kamar dan tambahkan 100 µl ( 1/10 v) Tris-Cl pH 7,4 simpan pada suhu – 20oC. III. Pereaksi PCR 1. PCR kit ( PCR core system ) ( PROMEGA) Buffer reaksi MgCl2 25 nM PCR nukleotida (dNTP) 2,5 mµ Tag DNA polimerase 2.Primer 1 dan 2 3.DNA sampel 50 ng 4.H 2O (bebas ion) 5.Mineral oil 20 µl IV. Elektroforesis. 1. Buffer TAE 50 X Tris base : 24,2 g Asam asetat glacial : 5,7 ml EDTA 0,5 M pH 8,0 : 1 ml Larutkan dengan akuades hingga 100 ml 2. Ethidium bromida 1% Et br 1 ml Akuades 99 ml 3. Pembuatan gel agarose 0.8%
Lampiran 4. Penetapan kandungan nitrogen dengan metode semi-mikro kjeldahl
Pereaksi
:
1. 2. 3. 4.
H 2SO4 99% Campuran selen (K2 SO 4 : Cu SO4 : selenium = 50 : 10 :1) H3BO 3 4% Indikator con way (0,3 g Bromoresol hijau + 0,2 gr metil merah) + etanol 90%. 5. NaOH 50 %.
Cara kerja :
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.
Masukan 0,2 contoh kedalam kjeldahl Tambahkan 0,2 g campuran selenium Tambahkan 5 ml H2SO 4 99% Tambahkan parafin cair 5 tetes Destruksi pada suhu 300oC sampai berwarna jernih kehijauan. Dinginkan dan tambahkan 50 ml akuades. Masukan kedalam labu penyuling (labu didih), tambahkan 20 ml NaOH 50 %. Kemudian disuling segera Hasil sulingan (amoniak) ditampung dengan 10 ml H3BO 3 4%, ditambahkan 5 tetes indikator con way Titrasi sampai titik akhir dengan 0,3 N HCl
Perhitungan : Kadar N total = (Vc – Vb) x N x 14 mg contoh
x 100 %
Keterangan : Vc . Vb = ml peniter contoh dan blangko. N = kenormalan. 14 = berat atom nitrogen.
Lampiran 5. Penetapan kandungan P dan K dengan metode pengabuan. Pereaksi
:1. HCl 12 N dan 1 N. 2. Pelarut Pb (a) larutan 3,8 g amoniak molibdat dalam 30 ml pada suhu 60 oC dinginkan, saring. (b) larutkan 5 g H3BO 3 dalam 500 ml air lalu ditambahkan 75 ml HCl. (c) campurkan a dan b kemudian encerkan menjadi 1000 ml. 3. Larutkan pereduksi : campuran dan giling bersama-sama 2,5 g 1-amino-2-napthal-4-sulfanic acid, 5 g Na2So 4 dan 146 gr Na2S2O5 hingga menghasilkan serbuk pereduksi. Ambil 8 gr serbuk pereduksi tersebut kemudian masukan kedalam 50 ml air panas, biarkan selama 16 jam hingga menghasilkan larutan pereduksi.
Cara kerja
: 1. Masukan 1 g contoh kedalam cawan porselin. 2. Masukan ke alat pemanas “muffle” pemanas pada suhu 550 oC selama 2 jam sejak panas konstan. 3. Dinginkan kemudian tambahkan 5 tetes HCl pekat 12 N, aduk sampai rata, diamkan sampai kering. Ulangi sebanyak 3 kali. 4. Tambahkan 10 ml HCl 1 N kocok sampai kering. 5. Pipet 1 ml, masukan ke dalam labu ukur 50 ml. 6. Untuk penetapan kandungan K, ambil 5 ml kemudian ukur dengan alat flame fotometer. 7. Untuk penetapan kandungan P, ambil 5 ml tambahkan pelarut (b) 5 ml tambahkan larutan pereduksi 5 ml kemudian kandungan P diukur dengan alat spektrophotometer uv-vis.
Lampiran 6. Prosedur analisis hormon IAA ( Ergün et al. 2001)
1 g akar segar diekstrak (60 ml) (MeOH : CHCl3 : 2N NH4OH, 12 : 5 :3 v/v/v) + 25 ml aquades
Fase kloroform Dibuang
Fase air
Atur pH 2.5 dan ekstrak 3x dengan etil asetat (15 ml)
etil asetat (IAA bebas)
Evaporasi Fase air TLC (sistem pelarut : i-PrOH : NH4OH: H2O 10 : 1: 1 v/v/v)
Atur pH 11, dihidrolisis 1 jam suhu 70oC
Fase air
Dilarutkan dgn metanol Spektrofotometer 222 nm / 280 nm
Fase air Atur pH 2.5 dan ekstrak 3x dengan etil asetat (15 ml)
etil asetat (IAA terikat)
Evaporasi Fase air (dibuang)
TLC (sistem pelarut : i-PrOH : NH4OH: H2O 10 : 1: 1 v/v/v) Dilarutkan dgn metanol Spektrofotometer 222 nm / 280 nm
