cobas TaqScreen MPX Test for use on the cobas s 201 system

cobas® TaqScreen MPX Test for use on the cobas s 201 system IN VITRO DIAGNOSZTIKAI CÉLRA. ®

MPX

®

MPX CTL

®

TS WR

cobas TaqScreen MPX Test cobas TaqScreen MPX Control Kit cobas TaqScreen Wash Reagent

96 Tests

P/N: 04584244 190

6 Sets

P/N: 04626290 190

5.1 L

P/N: 04404220 190

FELHASZNÁLÁS MÓDJA ®

A cobas TaqScreen MPX teszt a cobas s 201 rendszerrel való együttes használatra egy kvalitatív, in vitro vizsgálat az 1-es típusú, M csoportú humán immundeficiencia vírus (HIV-1) RNS, 1-es típusú, O csoportú humán immundeficiencia vírus RNS, 2-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-2) RNS, hepatitis C vírus (HCV) RNS és hepatitis B vírus (HBV) DNS direkt kimutatására humán plazmából. A vizsgálat célja a donorszűrő-vizsgálatok során a HIV-1 M csoportú, HIV-1 O csoportú, HIV-2, HCV RNS és HBV DNS kimutatása egyéni véradók plazmamintáiból, beleértve a teljes vér, valamint véralkotórészek donorait és egyéb élő donorokat. A vizsgálat használható továbbá egyéni szerv- és szövetdonorok szűrésére is, amennyiben a mintákat akkor vették le, amikor a donor szíve még dobogott. A szűrés során az összes donortól származó plazmát egyéni mintaként kell kezelni. Teljes vér és véralkotórészek donorainak esetében a plazmaminták vizsgálhatóak külön-külön, illetve egyéni minták egyenlő részleteiből álló csoportokba gyűjtve, a HIV, HCV vagy HBV szerológiával egybekötve. Ez a vizsgálat nem a diagnózis elősegítésére való. A VIZSGÁLAT ÖSSZEGZÉSE ÉS MAGYARÁZATA A vér és véralkotórészek transzfúziója során lényeges problémát jelentenek a vírusfertőzések, különösen az 1-es és 2-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-1, HIV-2), hepatitis C vírus (HCV) és hepatitis B vírus (HBV) esetleges átvitele. Ezen ágensek átvitele elsősorban fertőzött vér vagy vér- és plazmakészítmények, bizonyos szövetek vagy testfolyadékok által, nemi érintkezés során, illetve fertőzött anyáról magzatra lehetséges. A HIV-1 az egész világon elterjedt, előfordulási gyakorisága világszerte 1,1% (0,56% ÉszakAmerikában és 0,25% Nyugat-Európában). A HIV-1 fertőzött személyek rövid, kezdetben akut, influenzaszerű megbetegedést tapasztalhatnak, amelyhez a perifériás vérben magas szintű virémia 1 társul a fertőzéstől számított 3-6. hét múlva. Jelenleg a HIV-1 két fő genetikai csoportja ismert: M csoport (main, fő) és O csoport (outlier, kívülálló). Az M csoport a legelterjedtebb, és 10 szubtípusa 2 található meg világszerte. A HIV-1 fertőzés széleskörű előfordulásával szemben a HIV-2 fertőzés elsősorban Nyugat-Afrikára korlátozódik, valamint az annak területén zajló vagy áthaladó 2 népességmozgásokat érinti. A HIV-2 nemi úton kisebb mértékben terjed, mint a HIV-1. Ennek oka a fertőzés korai és késői szakaszában fennálló alacsonyabb vírusszint lehet. A HIV-2 a betegség késői szakaszában is (a vírusszint megemelkedésének időszakában) lassabban fejlődik, mint a HIV-1. Részben ezek az okok magyarázhatják a HIV-2 korlátozott terjedését a világban, szemben a HIV-1gyel.3 A HCV-t tartják a poszttranszfúziós non-A, non-B hepatitis esetek 90%–95%-áért felelős fő 4,5 A HCV világszerte előfordul, de elterjedtsége a fertőzés általános fertőző ágensnek. tünetmentessége miatt kevéssé ismert. Akárhogy is, a jelentett elterjedése a nyugat-európai 0,5–2,0%-tól az egyiptomi 20%-ig változhat. A HBV az akut és krónikus hepatitis, májcirrózis és 6,7,8 Világszerte nagyjából 350 millió ember hepatocelluláris karcinóma egyik fő fertőző ágense. 9 krónikus hordozója a vírusnak, főleg a magas prevalenciájú területeken. A HBV világszintű elterjedési gyakorisága Nyugat-Európában és az Egyesült Államokban < 2%, de Ázsia és Afrika 10 országaiban > 8% is lehet. A szerológiai szűrővizsgálatok jelentősen csökkentették, de nem számolták fel a vírusfertőzések vér és vérkészítmények transzfúziójával történő átvitelének kockázatát. A donoroktól levett teljes vér és

1

plazma HBV szűrését az 1970-es évek elején kezdték meg HBsAg vizsgálattal. A HBV-szűrésen kívül rutinszerűen végzik a vér és plazma HIV-1, HIV-2 és anti-HCV szűrését enzim immunoassay (EIA) vizsgálatokkal. A transzfúziós készítmények fertőző ágensekre történő magasabb szintű szűrésére támasztott közigény előmozdította a nukleinsav-vizsgálati (nucleic acid test, NAT) 11-13 , HCV technológiák fejlődését. Klinikai vizsgálatok szerint a vírusnukleinsavak (HIV-1 RNS 4,12-15 16-19 RNS és HBV DNS ) kimutatása tovább csökkentheti az ágensek ablakperiódus alatti véradásból eredő átvitel kockázatát. Az ablakperiódust átlagosan 22 napra becsülik, de a HIV-1 20 esetében akár 6 hónap is lehet. A HIV-1 kis csoportos minta (mini-pool) NAT vizsgálat kivitelezésével a fertőző ablakperiódus jelentősen lerövidíthető, így a HIV-1 átvitelének jelenlegi kockázatát hozzávetőleg 1-re becsülik 2 millió véradásból.12-14 Hasonlóan, a HCV RNS NAT 12-15 , a jelenlegi bevezetése az antitest negatív ablakperiódust körülbelül 60 napra csökkentette becsült kockázat hozzávetőleg 1 millió véradásból 1–2. A HBV DNS NAT szűrést még nem végzik rutinszerűen, jóllehet, a NAT szűrés tovább csökkenthetné a HBV transzfúziós átvitelének 14,18,19,21 kockázatát. A többszörös target vizsgálatok hatásfokának javítása érdekében a többféle vírus egyidejű kimutatására egy multiplex (MPX) polimeráz láncreakciót (PCR) fejlesztettek ki. A MPX PCR folyamán egy reakciócsőben egynél több targetszekvencia amplifikálása és kimutatása zajlik többféle primerpár és próba segítségével. ®

A cobas TaqScreen MPX teszt egy minőségi multiplex vizsgálat, amely lehetővé teszi a HIV-1 M és O csoport RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS egyidejű szűrését és kimutatását fertőzött ® csoportos és egyéni plazmamintákból. A cobas TaqScreen MPX teszt általános nukleinsav® előkészítési eljárást alkalmaz a COBAS AmpliPrep készüléken. HIV-1 M és O csoport RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS amplifikációja és kimutatása automatizált, valós idejű PCR eljárással ® ® történik a COBAS TaqMan analizátoron. A vizsgálat a teljesítmény monitorozására minden egyes vizsgálat során egy belső kontrollt foglal magába, valamint a megelőzően amplifikált anyag (amplikon) által okozott potenciális szennyezés csökkentésére AmpErase (uracil-N-glikoziláz) ® enzimet alkalmaz. A cobas TaqScreen MPX teszt nem különbözteti meg, hogy melyik vírus ® mutatható ki a mintából. A HIV-1 M csoport, HCV és HBV megkülönböztető vizsgálatára a COBAS ® ® AmpliScreen HIV-1 teszt, v1.5, a COBAS AmpliScreen HCV teszt, v2.0 és a COBAS AmpliScreen HBV teszt áll rendelkezésre. HIV-1 O csoport és HIV-2 megkülönböztetésére alkalmas teszt nem áll rendelkezésre a Roche-tól. AZ ELJÁRÁS ALAPELVEI ®

A cobas TaqScreen MPX teszt cobas s 201 rendszeren való használatra 4 fő eljáráson alapul: ®

1.

Automatizált mintacsoportosítás és kontrollpipettázás HAMILTON Microlab STAR IVD pipettorkészülékkel

2.

Automatizált minta-előkészítés COBAS AmpliPrep készülékkel

3.

Nukleinsavak automatizált amplifikációja és PCR termékek valósidejű kimutatása a COBAS ® TaqMan analizátorral

4.

Automatizált adatkezelés az csoportosító és adatkezelő (Pooling and Data Management, PDM) szoftverrel

®

®

Automatizált mintacsoportosítás és pipettázás a HAMILTON Microlab STAR IVD pipettorral A HAMILTON Microlab STAR IVD pipettor automatizálja az egyéni donorminták pipettázását, a többszörös donorminták csoportosítását, a részletek átvitelét a mély lyukú lemezekre és a vizsgálati kontrollok pipettázását. A cobas s 201 rendszer a reaktív csoportokat visszabontja egyéni összetételű mintaeredményekké. A cobas s 201 rendszert a minták tételekben történő feldolgozására tervezték. Egy tétel meghatározása a minták és kontrollok olyan gyűjteménye, amelyek pipettázása, kivonása, amplifikációja és kimutatása egyszerre zajlik. Egy tétel pipettázását ® követően a HAMILTON Microlab STAR IVD pipettorral az egész mintaállvány a COBAS AmpliPrep készülékbe kerül az eljárás következő lépésének elvégzésére. ®

Automatizált minta-előkészítés a COBAS AmpliPrep készülékkel A targetből és a hozzáadott armored RNS belső kontroll (internal control, IC) molekulákból (amely a minta-előkészítési és amplifikációs/kimutatási eljárás során kontrollként szolgál) származó ® nukleinsavak feldolgozása egyszerre zajlik. A cobas TaqScreen MPX teszt reagensei segítségével ® öt egymást követő lépés megy végbe a COBAS AmpliPrep készüléken. A proteázoldat a fehérjék emésztésével elősegíti a lízist, inaktiválja a nukleázokat és lehetővé teszi az RNS és DNS

2

felszabadítását a vírusrészecskékből. A lízisreagens hozzáadása a vírusok lízisét és a nukleázok inaktiválását eredményezi a fehérjék denaturálása által a mintában. Az RNS és DNS felszabadul és egyidejűleg védve van a nukleázok hatásától. A felszabadult nukleinsavak a hozzáadott mágneses üvegpartikulumok szilikonfelületéhez kötnek. Ez elsősorban az üvegpartikulumok felszínének nettó pozitív töltése és a nukleinsavak nettó negatív töltése miatt következik be a kaotróp sókoncentráció alatt és a lízisreakció ionerőssége miatt. A mosóreagens eltávolítja a nem kötött anyagokat és a szennyeződéseket, mint denaturált fehérjék, sejttörmelék és lehetséges PCR inhibitorok (például hemoglobin stb.), valamint csökkenti a sókoncentrációt. A mágneses üvegpartikulumokról a tisztított nukleinsavakat emelt hőmérsékleten az eluáló puffer szabadítja fel. ®

®

Nukleinsavak automatizált amplifikációja a COBAS TaqMan analizátor segítségével Az automatizált minta-előkészítés során a tisztított nukleinsavak humán plazmából történő izolálását követően a HIV-1 (M és O csoport), HIV-2 és HCV RNS, HBV DNS és IC RNS amplifikálása és ® kimutatása a cobas TaqScreen MPX master mix (MMX) segítségével történik. A mangán-acetátos ® aktiválást követően a cobas TaqScreen MPX master mix lehetővé teszi az RNS targetek reverz transzkripcióját, majd ezt követően a HIV-1 (M és O csoport), HIV-2 és HCV RNS, HBV DNS és IC RNS nagyfokban konzervált régióinak PCR amplifikációját specifikus primerekkel. Az amplifikált nukleinsavak párhuzamos kimutatása a master mixben ugyancsak jelenlevő HIV-1 (M és O csoport), HIV-2, HCV, HBV és IC-specifikus próbák 5'-nukleolitikus bontása során keletkező fluoreszcens jelek segítségével megy végbe. Két fluoreszcens festék használatos: az egyik festék az IC próbát jelöli, a másik pedig az összes targetspecifikus próbát, lehetővé téve ezáltal a vírustargetek többrétű, kombinált azonosítását, valamint az IC független azonosítását. Reverz transzkripció és PCR-amplifikálás A reverz transzkripciós és amplifikációs reakciókat egy hőstabil rekombináns enzim, a Z05 2+ DNS-polimeráz végzi. Mangán (Mn ) jelenlétében a Z05 DNS-polimeráz reverz transzkriptáz és DNS-polimeráz aktivitással rendelkezik. Ez lehetővé teszi, hogy a reverz transzkripció és a PCRamplifikálás ugyanazon reakcióelegyben menjen végbe. A PCR-amplifikálás a Z05 DNS-polimeráz segítségével megy végbe, amely a targettemplátok mentén meghosszabbítja a kapcsolódott primereket és duplaszálú DNS-t (amplikon) hoz létre. Ez a folyamat sok cikluson keresztül ismétlődik, és az amplikon DNS mennyisége minden ciklus során megduplázódik. Az targetgenomok amplifikálása csak a primerek közötti régiókban zajlik; a teljes genom nem amplifikálódik. Szelektív amplifikálás A mintában található targetnukleinsav szelektív amplifikálását a cobas® TaqScreen MPX teszt az AmpErase (uracil-N-glikoziláz) enzim és dezoxiuridin-trifoszfát (dUTP) használatával hajtja végre. Az AmpErase (uracil-N-glikoziláz) enzim felismeri és katalizálja az olyan DNS-szálak lebontását, 22 amelyek dezoxiuridint tartalmaznak , a dezoxitimidint tartalmazó DNS-ét és a ribouridint tartalmazó 23,24 RNS-ét viszont nem . A dezoxiuridin a természetes DNS-ben nincs jelen, ugyanakkor az amplikonokban mindig megtalálható, miután a master mix reagens a dNTP-k egyikeként dezoxiuridintrifoszfátot használ timidin-trifoszfáttal, tehát csak az amplikonok tartalmaznak dezoxiuridint. A dezoxiuridin lehetővé teszi, hogy az AmpErase (uracil-N-glikoziláz) enzim a szennyező amplikont még a target DNS amplifikálását megelőzően lebontsa. Az AmpErase (uracil-N-glikoziláz) enzim lebont továbbá minden olyan nem specifikus terméket, amely a master mix kezdeti, mangán okozta aktiválódása után képződik. A master mix reagensben lévő AmpErase (uracil-N-glikoziláz) enzim katalizálja a dezoxiuridint tartalmazó DNS hasítását a dezoxiuridin-csoportoknál úgy, hogy a dezoxiribóz lánc felnyílását okozza a C1 helyen. Az első hevítési lépésben az amplikon DNS-lánc eltörik a dezoxiuridin helyén, tehát a DNS nem lesz amplifikálható. Az AmpErase (uracil-N-glikoziláz) enzim, ha egyszer 55 ºC feletti hőmérsékletnek lett kitéve, hosszabb ideig inaktív marad, ezért nem bontja le a PCR után előállt targetamplikont.

3

®

®

A PCR-termékek valósidejű automatizált kimutatása a COBAS TaqMan analizátor segítségével A PCR-amplifikálás ciklusai során a váltakozó magas hőmérsékleten a target- és IC-amplikon denaturálódik, és egyszálú DNS-molekula keletkezik. A specifikus kimutatási oligonukleotid próbák az amplifikált DNS egyszálú molekuláihoz hibridizálnak. Az amplifikálás, hibridizáció és kimutatás egymással egyidőben zajlik. A PCR-termékek kimutatása

25,26

®

A cobas TaqScreen MPX MMX a HIV-1 (M és O csoport), HIV-2, HCV, HBV, illetve IC nukleinsavra specifikus kimutatási próbákat tartalmaz. Mindegyik kimutatási próba jelölve van 1) a kettő közül egy, jelzőfestékként viselkedő, és 2) egy másik, blokkolófestékként viselkedő fluoreszcens festékkel. Az egyik specifikus jelzőfesték a vírusspecifikus próbákhoz kapcsolódik és egy meghatározott hullámhosszon lehet kimutatni. Egy másik jelzőfesték pedig az IC-specifikus próbához kapcsolódik és kimutatása egy eltérő hullámhosszon történik. Minden próba esetében egyféle blokkolófesték használatos. A rendszer lehetővé teszi, hogy az összes amplifikált vírustarget egy hullámhosszon, az amplifikált IC nukleinsav pedig egy másik hullámhosszon legyen kimutatható. A PCR-amplifikálás kezdete előtt a próbák még érintetlenek, és a blokkoló festék a jelzőfesték fluoreszcenciáját Förster-típusú energiatranszfer-effektus révén gátolja. A PCR-amplifikálás során a próbák a specifikus, egyszálú DNS-szekvenciákhoz hibridizálnak, amit az amplifikálással egyidőben a Z05 DNS-polimeráz 5' - 3' nukleáz aktivitása révén hasít. Amint a hasítás következtében a jelző- és a gátlófesték elválik, a jelzőfesték fluoreszcens aktivitásának gátlása megszűnik. Minden egyes PCR-ciklus során megnő a hasított próbák mennyisége, és ennek velejárójaként növekszik a jelzőfestékből származó jel összesített nagysága is. A PCR-termékek valós idejű kimutatása a felszabadult, vírustargeteket és IC-t egymástól függetlenül reprezentáló jelzőfestékek fluoreszcencenciájának mérésével megy végbe. Automatizált adatkezelés a PDM segítségével A Roche PDM adatkezelő lehetővé teszi, hogy a felhasználó áttekintse az eredményeket és jelentést készítsen. A Roche PDM adatkezelő minden vizsgálati eredményt nem reaktív, reaktív vagy érvénytelen jelöléssel lát el. A PCR-eredmények lekérésén és vizsgálatán felül a Roche PDM adatkezelő szoftver lehetővé teszi, hogy az üzemeltető a jelentéseket visszakeresés és tanulmányozás céljából kinyomtassa, az eredmények között keressen, a donoreredményeket elfogadja, illetve egy LIS kiszolgálóra továbbítsa.

4

A ROCHE ÁLTAL BIZTOSÍTOTT ANYAGOK A HIV-1 (M és O csoport), HIV-2, valamint HCV RNS és HBV DNS kimutatására három készlet ® ® szükséges és áll rendelkezésre: 1) cobas TaqScreen MPX teszt, 2) cobas TaqScreen MPX ® kontrollkészlet és 3) cobas TaqScreen mosóreagens. Az anyagok biztonsági adatlapjai (MSDS) igény esetén hozzáférhetőek a helyi Roche irodában. ®

cobas TaqScreen MPX Test (P/N: 04584244 190)

MPX

96 teszt

MPX CTL

6 szett

MPX CS1 (MPX mágneses üvegpartikulum-reagens kazetta) MPX CS2 (MPX lízisreagens kazetta) MPX CS3 (MPX multireagens kazetta) MPX CS4 (MPX tesztspecifikus reagens kazetta) ®

cobas TaqScreen MPX Control Kit ® cobas TaqScreen MPX kontrollkészlet (P/N: 04626290 190) HIV-1 M (+) C (HIV-1 M pozitív kontroll) HIV-1 O (+) C (HIV-1 O pozitív kontroll) HIV-2 (+) C (HIV-2 pozitív kontroll) HCV (+) C (HCV pozitív kontroll) HBV (+) C (HBV pozitív kontroll)

TS (–) C ® [cobas TaqScreen negatív kontroll (humán plazma)] ®

cobas TaqScreen Wash Reagent ® cobas TaqScreen mosóreagens (P/N: 04404220 190)

TS WR

5,1 l

TS WR ® (cobas TaqScreen mosóreagens) EGYÉB SZÜKSÉGES, DE KÜLÖN ÁRUSÍTOTT ANYAGOK (A ROCHE-TÓL KÜLÖN VÁSÁROLHATÓ) A vizsgálatot a cobas s 201 rendszeren kell végezni. A cobas s 201 rendszert egy komplett rendszer-konfigurációként kell telepíteni és használni. A cobas s 201 rendszer egyes komponensei nem használhatóak különálló készülékekként, és más komponensek sem helyettesíthetőek. A cobas s 201 rendszer az alábbi komponenseket használja fel.

5

Műszerezettség és szoftver a cobas s 201 rendszerhez •

HAMILTON Microlab STAR IVD pipettor, mintacsoport-kezelő munkaállomás és szoftver

•

COBAS AmpliPrep készülék

•

COBAS TaqMan analizátor

•

AMPLILINK adatállomás és szoftver

•

Roche PDM adatkezelő szerver, adatkezelő munkaállomás és szoftver

® ®

®

Állványok és egyszer használatos anyagok ®

•

COBAS AmpliPrep mintaállványok (SK24) (P/N: 28122172001)

•

COBAS AmpliPrep SPU-állványok (P/N: 28122806001)

•

COBAS AmpliPrep reagensállványok (P/N: 28122199001)

•

Mintafeldolgozó egységek (SPU): (P/N: 03755525001)

•

Mintabeviteli csövek (S-csövek) vonalkódklipszekkel (P/N: 03137040001)

•

K-hegy-állványok (P/N: 03287343001)

•

K-cső-doboz 12 x 96 (P/N: 03137082001)

•

COBAS TaqMan K-hordozó (P/N: 28150397001)

•

Nagytérfogatú CO-RE hegyek (1000 µl), filter (P/N: 04639642001)

•

Mély lyukú lemezek vonalkódcímkékkel (P/N: 04639634001)

•

Mély lyukú lemezek zárótetejei (P/N: 04789288001)

•

Mintahordozó 24 vizsgálati cső számára (P/N: 04639502001)

•

Mintahordozó 32 vizsgálati cső számára (P/N: 04639529001)

•

Hegyhordozó (P/N: 04639545001)

•

Mély lyukú lemez-hordozó (P/N: 04639553001)

•

SK24 állvány-hordozó (P/N: 04639600001)

•

Microcide SQ™ vagy HAMILTON fertőtlenítő spray (P/N: 04864425001)

•

Egyszer használatos kesztyűk, púdermentes

® ®

®

®

REAGENSEK cobas® TaqScreen MPX Test (P/N: 04584252 190)

MPX

MPX CS1

2 x 48 teszt

MGP (mágneses üvegpartikulumok) mágneses üvegpartikulumok 93% izopropanol Xi

2 x 7,0 ml

93% (w/w) izopropanol

Irritatív F

96 teszt

93% (w/w) izopropanol

Igen tűzveszélyes

6

MPX CS2

2 x 48 teszt

LYS (lízisreagens) nátrium-citrát-dihidrát 42,5% guanidin-tiocianát < 14% polidokanol 0,9% ditiotreitol Xi 42,5% (w/w) guanidin-tiocianát

2 x 78 ml

Ártalmas MPX CS3

2 x 48 teszt

Pase (proteináz oldat) trisz puffer < 0,05% EDTA kalcium-klorid kalcium-acetát ≤ 7,8% proteináz glicerin Xn ≤ 7,8% (w/w) proteináz

2 x 3,8 ml

Ártalmas EB (eluáló puffer) trisz puffer 0,2% metilparabén tartósítószer

2 x 7,0 ml

MPX CS4

2 x 48 teszt

MPX MMX-R1 (MPX master mix reagens 1) trisz puffer kálium-acetát glicerin mangán-acetát betain 0,08% nátrium-azid

2 x 3,0 ml

MPX MMX-R2 (MPX master mix reagens 2) tricin puffer kálium-klorid kálium-hidroxid < 21% dimetil-szulfoxid glicerin EDTA Tween 20 Igepal CA630 < 0,09% dATP, dGTP, dCTP, dUTP, dTTP < 0,01% upstream és downstream HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV, HBV primerek < 0,01% fluoreszcens-jelölt HIV-1, HIV-2, HCV, HBV próbák < 0,01% fluoreszcens-jelölt belső kontroll próba < 0,01% oligonukleotid aptamer < 0,07% Z05 DNS-polimeráz (mikrobiális) < 0,4% AmpErase [uracil-N-glikoziláz] enzim (mikrobiális) 0,08% nátrium-azid

2 x 2,5 ml

7

MPX IC (MPX belső kontroll) trisz puffer ≤ 0,002% poli rA RNS (szintetikus) EDTA 0,05% nátrium-azid < 0,001% nem fertőző, szintetikus belső kontroll RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva cobas® TaqScreen MPX Control Kit ® cobas TaqScreen MPX kontrollkészlet (P/N: 04626290 190)

MPX CTL

HIV-1 M (+) C (HIV-1 M pozitív kontroll) < 0,001% nem fertőző, szintetikus HIV-1 M csoportú RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre és HBsAg-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki ® 0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi

2 x 15 ml

6 szett

6 x 1,6 ml

(3:1) 5-klór-2-metil-2H-izotiazol-3-on és 2-metil-2H-izotiazol-3-on keveréke Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat.

HIV-1 O (+) C (HIV-1 O pozitív kontroll) < 0,001% nem fertőző, szintetikus HIV-1 O csoportú RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva. Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre és HBsAg-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki ® 0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi

6 x 1,6 ml

(3:1) 5-klór-2-metil-2H-izotiazol-3-on és 2-metil-2H-izotiazol-3-on keveréke Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat.

HIV-2 (+) C (HIV-2 pozitív kontroll) < 0,001% nem fertőző, szintetikus HIV-2 RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre és HBsAg-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki ® 0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi

(3:1) 5-klór-2-metil-2H-izotiazol-3-on és 2-metil-2H-izotiazol-3-on keveréke Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat.

8

6 x 1,6 ml

HCV (+) C (HCV pozitív kontroll) < 0,001% nem fertőző, szintetikus HCV RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre és HBsAg-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki ® 0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi

6 x 1,6 ml

(3:1) 5-klór-2-metil-2H-izotiazol-3-on és 2-metil-2H-izotiazol-3-on keveréke Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat.

HBV (+) C (HBV pozitív kontroll) 0,001% nem fertőző, szintetikus HBV DNS, lambda bakteriofág burokfehérjébe csomagolva Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre és HBsAg-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki ® 0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi (3:1) 5-klór-2-metil-2H-izotiazol-3-on és 2-metil-2H-izotiazol-3-on keveréke

6 x 1,6 ml

Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat. TS (–) C ® [cobas TaqScreen negatív kontroll (humán plazma)] Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre és HBsAg-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki ® 0,1% ProClin 300 tartósítószer Xi

6 x 1,6 ml

(3:1) 5-klór-2-metil-2H-izotiazol-3-on és 2-metil-2H-izotiazol-3-on keveréke Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat.

cobas® TaqScreen Wash Reagent ® cobas TaqScreen mosóreagens (P/N: 04404220 190)

TS WR

TS WR ® (cobas TaqScreen mosóreagens nátrium-citrát-dihidrát 0,1% metilparabén tartósítószer

9

5,1 l

TÁROLÁSI ÉS KEZELÉSI KÖVETELMÉNYEK A. A szobahőmérséklet meghatározása 15–30 °C. B. A reagenseket és kontrollokat ne fagyassza le. C. A MPX CS1, MPX CS2, MPX CS3 és MPX CS4 reagenseket 2 és 8 °C között tárolja. Használaton kívül ezek a reagensek a feltüntetett lejárati időn belül stabilak. D. Felbontást követően a reagensek 2–8 °C-on 30 napig, illetve a lejárati dátumig stabil, amelyik előbb következik. ®

E. A reagenseket a COBAS AmpliPrep készüléken legfeljebb 6 vizsgálati futtatás alakalmával, legfeljebb 40 összesített órán át lehet felhasználni. A futtatások között a reagenseket 2 és 8 °C között tárolja. ®

F. A COBAS AmpliPrep készülékben a reagensek egyhuzamban összesen 24 órán keresztül maradnak stabilak. G. A HIV-1 M (+) C, HIV-1 O (+) C, HIV-2 (+) C, HCV (+) C, HBV (+) C és TS (–) C reagenseket 2 és 8 °C között tárolja. A kontrollok a feltüntetett lejárati időn belül stabilak. Felbontást követően a fel nem használt részt ki kell dobni. H. A TS WR reagenst 15 és 30 °C között tárolja. Felbontás nélkül a TS WR reagens a feltüntetett lejárati időn belül stabil. Felbontást követően ez a reagens 15 és 30 °C között 30 napig illetve a lejárati dátumig stabil, amelyik előbb következik. ÓVINTÉZKEDÉSEK IN VITRO DIAGNOSZTIKAI CÉLRA. A. A minták fertőzőek lehetnek. A vizsgálat kivitelezése során alkalmazza az általános érvényű 27,28 ® óvintézkedéseket. Csak a cobas TaqScreen MPX rendszer használatában jártas és a fertőző anyagok kezelésében képzett személy végezheti ezt az eljárást. Gondosan tisztítson meg, és desztillált vagy ioncserélt vízből frissen készített 0,5% nátrium-hipoklorit oldattal fertőtlenítsen minden laboratóriumi munkafelületet. Ezután törölje át 70%-os etanollal a felületet. B. FIGYELMEZTETÉS: A HIV-1 M (+) C, HIV-1 O (+) C, HIV-2 (+) C, HCV (+) C, HBV (+) C és TS (–) C reagensek emberi vérből származó humán plazmát tartalmaznak. A forrásanyag tesztekkel vizsgálva nem bizonyult reaktívnak HIV-1/2 antitestre, HCV antitestre és HBsAg-re. A forrásanyagot a cobas® TaqScreen MPX teszttel is vizsgálták. A negatív humán plazma PCR-technikákkal történő vizsgálata során HIV-1 (M és O csoprt) RNS, HIV2 RNS, HCV RNS vagy HBV DNS nem volt kimutatható. Egyetlen ismert vizsgálati módszer sem nyújthat teljes garanciát arra, hogy a humán vérkészítményekben nincs jelen fertőző anyag. Minden humán vér eredetű anyagot potenciálisan fertőzőnek kell tekinteni, és az általános érvényű óvintézkedések betartásával kezelni. Kiömlés esetén azt azonnal fertőtlenítse frissen készített 0,5%-os nátrium-hipoklorit oldattal (hígított fehérítőszer), illetve kövesse a megfelelő helyszíni eljárásokat. C. Alkalmazza a szokásos laboratóriumi óvintézkedéseket. Ne pipettázzon szájjal. Ne egyen, igyon vagy dohányozzon a kijelölt munka területen. Viseljen egyszer használatos kesztyűt, köpenyt és szemvédőt a minták és a készlet reagenseinek kezelése közben. A minták és tesztreagensek kezelését követően gondosan mosson kezet. D. Az MPX MMX-R1, MPX MMX-R2 és MPX IC reagensek tartósítószerként nátrium-azidot tartalmaznak. Ne használjon fém vezetékezést a reagenstranszferhez. Amennyiben azidot tartalmazó oldatot önt a vízvezeték-hálózatba, hígítsa azt fel, és öblítse le nagy mennyiségű folyóvízzel. Ezek az óvintézkedések arra szolgálnak, hogy elkerülje az üledék lerakódását a fém csővezetékben, ahol azáltal robbanásra alkalmas körülmények alakulhatnak ki. E. A heparinról kimutatták, hogy gátolja a PCR-t. Az eljáráshoz ne használjon heparinos plazmát. F. Steril, egyszer használatos pipetták és nukleázmentes pipettahegyek használata javasolt. Álpozitív eredmények fordulhatnak elő, ha nem ügyel a minták keresztszennyeződésének elkerülésére a mintakezelés és -feldolgozás során.

10

G. Az optimális vizsgálati feltételek biztosítása érdekében csak a szállított vagy az előírtan szükséges egyszer használatos eszközöket alkalmazza. H. A minták és kontrollok keresztszennyeződésének elkerülésére kezeljen minden mintát és kontroll tartalmazó anyagot a helyes laboratóriumi gyakorlat (GLP) szerint. I.

Felhasználás előtt szemmel ellenőrizzen minden reagenskazettát, kontrollcsövet és mosóreagenst, hogy nem tapasztal-e szivárgásra utaló jeleket. Szivárgás esetén azt az anyagot ne használja fel a vizsgálathoz.

J.

Minden anyagot, amely mintákkal vagy reagensekkel kapcsolatba került, az országos, szövetségi, állami és helyi szabályozások szerint semmisítsen meg. ®

®

K. A cobas TaqScreen MPX tesztkészletet, cobas TaqScreen MPX kontrollkészletet, illetve ® a cobas TaqScreen mosóreagenst a lejárati idő után ne használja fel. A különböző készletekből származó, illetve eltérő tételszámú reagensek felcserélése, összekeverése vagy kombinálása ® tilos. Ne töltsön kevert tételszámú reagenseket a COBAS AmpliPrep készülékbe. L. Az anyagok biztonsági adatlapjai (MSDS) igény esetén hozzáférhetőek a helyi Roche irodában. M. Kerülje a reagensek bőrrel, szemmel vagy nyálkahártyákkal való érintkezését. Ha érintkezés mégis bekövetkezik, azonnal mossa le nagy mennyiségű vízzel, ellenkező esetben égési sérülést okozhat. Ha ezek a reagensek kiömlenek, feltörlés előtt hígítsa fel azokat vízzel. Ne engedje, hogy a LYS reagens, amely guanidin-tiocianátot tartalmaz, nátrium-hipoklorit (fehérítőszer) oldattal érintkezzen. Az ilyen keverékből erősen mérgező gáz fejlődhet. N. A vizsgálat helyes kivitelezésének biztosítása végett szigorúan tartsa be a megadott eljárásokat és irányelveket. A megadott eljárásoktól és irányelvektől való bármilyen eltérés befolyásolhatja a vizsgálat teljesítményét. O. Ne használjon nagymértékben hemolizált mintákat. ®

P. A plazmaminták vörösvértest-szennyezettsége (> 2,5%) gátolhatja a cobas TaqScreen MPX vizsgálatot. Q. A vizsgálat egyik szakaszában se használjon sérült vonalkódú összetevőket. REAGENSEK ELŐKÉSZÍTÉSE ®

A. Használat előtt 30 percig hagyja, hogy a cobas TaqScreen MPX kontrollkészlet felvegye ® a szobahőmérsékletet. A cobas TaqScreen MPX teszt reagenseit hagyja 30 percen át ® a COBAS AmpliPrep készülékben, hogy felvegyék a szobahőmérsékletet.

11

MINTAVÉTEL, -TÁROLÁS ÉS -CSOPORTOSÍTÁS Megjegyzés: Valamennyi mintát fertőző ágensként kell kezelni. A. EDTA, CPD, CPDA1, CP2D, ACDA és 4% nátrium-citrát antikoagulánssal levett plazmaminták ® dolgozhatóak fel a cobas TaqScreen MPX teszttel. Kövesse a mintacső gyártójának utasításait. B. Az EDTA-s vér minták 2–30 °C-on a levételtől számított legfeljebb 72 óráig, 2–8 °C-on további két napig tárolhatóak. Öt napnál hosszabb tároláshoz távolítsa el a plazmát a vörösvértestekről centrifugálással (800–1600 × g, 20 perc). Eltávolítást követően a plazma 2–8 °C-on még további hét napig tárolható. A plazma hosszabb időn át való tárolására ≤ -18 °C-on van lehetőség. Az EDTA-s plazma legfeljebb három (3) alkalommal fagyasztható le és olvasztható fel. 2 – 30 ºC

Hőmérséklet (oC)

30

EDTA véralvadásgátló

20

10

2 – 8 ºC

Teljes vér

Plazma

0 0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

Levételt követő napok

C. A CPD, CPDA1 vagy CP2D antikoagulánssal levett minták a plazma elválasztását megelőzően 2–30 °C-on, legfeljebb 72 órán tárolhatóak. A CPD, CPDA1 vagy CP2D tartalmú minták centrifugálását (800–1600 x g, 20 perc) követően a plazma 2–8 °C-on további hét napig tárolható. A vörösvértestektől elválasztott plazma hosszabb időn át való tárolására ≤ -18 °C-on van lehetőség. A CPD, CPDA1 és CP2D tartalmú plazma legfeljebb három (3) alkalommal fagyasztható le és olvasztható fel. 2 – 30 ºC

Hőmérséklet (oC)

30

CPD, CPDA1 vagy CP2D véralvadásgátló

20 10

2 – 8 ºC

Teljes vér

Plazma

0 0

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

Levételt követő napok

D. Az ACDA vagy 4% nátrium-citrát antikoagulánst tartalmazó elválasztott plazma a levételt követően 2–30 °C-on, legfeljebb 72 órán át tárolható. Az elválasztott plazma hosszabb időn át való tárolására ≤ -18 °C-on van lehetőség. E. A következő, plazmatérfogatokra vonatkozó előírások 13 x 100 mm-es üveg vagy műanyag donorcsövekből HAMILTON Microlab STAR IVD pipettorral történő pipettázásra alapulnak. A felsorolt térfogatok a leülepedett vörösvérsejtek tetejéről vett plazmára vonatkoznak és ® a cobas TaqScreen MPX teszt futtatásakor alkalmazandóak. Csoporttípus Legkisebb plazmatérfogat Elsődleges csoport * 3 ml Ismételt csoport 1,5 ml Visszabontási csoport 2 ml *Mély lyukú lemezt használva (könyvtárlemez)

12

F. A teljes vért nem szabad lefagyasztani. G. A heparinról kimutatták, hogy gátolja a PCR-t. Heparinozott plazma használata nem ajánlott. H. A lefedett mély lyukú lemezek 2–8 °C-on legfeljebb hét napig tárolhatóak attól az időponttól számítva, amikor a plazmát a vörösvértestekről eltávolították. Hosszabb időn át való tárolásukra ≤ -18 °C-on van lehetőség. I.

Háromszori fagyasztás-olvasztás ciklusnak kitett plazmaminták esetében a vizsgálatra gyakorolt semmiféle nemkívánatos hatást nem figyeltek meg.

J.

Hagyja, hogy az csoportosított vagy egyéni donorminták felhasználás előtt felvegyék a szobahőmérsékletet.

K. Eltérő gyűjtési és tárolási feltételeket a felhasználónak validálnia kell. Amennyiben a mintákat szállítani kell, akkor azokat a minták és kóroki ágensek transzportjára vonatkozó alkalmazandó 29 szövetségi és nemzetközi előírásoknak megfelelően kell csomagolni és felcímkézni. L. Álpozitív eredmények fordulhatnak elő a minták keresztszennyeződéséből adódóan, ha azok nem voltak megfelelően kontrollálva a mintakezelés és -feldolgozás során. MINTACSOPORTOSÍTÁS ÉS -PIPETTÁZÁS 1. A cobas s 201 rendszer a HAMILTON Microlab STAR IVD pipettort használja minden pipettázási és csoportosítási tevékenységhez. A HAMILTON Microlab STAR IVD pipettor elvégzi a vonalkód leolvasási és csoportosítási műveleteket, minek során a mintatérfogatok egyenlő részleteiből csoportokat hoz létre. ®

2. Ha a cobas TaqScreen MPX teszt reaktív csoportot mutat kit, a HAMILTON Microlab STAR IVD pipettor pipettázza az egyéni mintákat a mély lyukú lemezekből vagy eredeti mintacsövekből az visszabontási vizsgálathoz. ELJÁRÁSSAL KAPCSOLATOS MEGJEGYZÉSEK A. Felszerelés 1. A használathoz készítse elő a cobas s 201 rendszert a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv utasításainak megfelelően. 2. A helyes működés érdekében végezze el a javasolt karbantartást a készülékeken. B. Reagensek ®

1. Felhasználás előtt a cobas TaqScreen MPX teszt reagenseit hagyja 30 percen át ® ® a COBAS AmpliPrep készülékben, hogy felvegyék a szobahőmérsékletet. A cobas ® TaqScreen mosóreagensnek TaqScreen MPX kontrollkészletnek és a cobas a felhasználáskor szobahőmérsékletűnek kell lennie. A reagensek tárolási körülményeire vonatkozóan tanulmányozza a Tárolási és kezelési követelmények fejezetet. ®

2. Valmennyi cobas TaqScreen MPX tesztkészlet összesen 96 vizsgálat elvégzéséhez elegendő reagenst tartalmaz. 3. Minden kontrollt csak egyszer lehet felhasználni. 4. A rendszer megakadályozza, hogy eltérő tételből származó reagenseket, a készülékben tölthető időt túllépő reagenseket, kevert reagenseket, illetve a négykazettás szettből olyan lejárt vagy kevert kazettákat használjon, amelyek használatára a rendszerben már ® előzőleg sor került. Ne töltsön kevert tételszámú reagenseket a COBAS AmpliPrep készülékbe.

13

C. Mintafeldolgozás 1. A minták és kontrollok kezelése során ügyeljen a kesztyűk szennyezésének elkerülésére. 2. Legyen óvatos, hogy elkerülje a minták és a TS (–) kontroll szennyezését a pozitív kontrollal. D. Megkülönböztető vizsgálat 1. A megkülönböztető vizsgálatot megelőzően a mintát azonosítani kell egy érvényes ® csoporton belül és érvényes egyéni eredményt nyerni a cobas TaqScreen MPX teszt ® ® segítségével. Ez az egyéni reaktív minta a COBAS AmpliScreen HBV teszt, a COBAS ® AmpliScreen HCV teszt, v2.0 és a COBAS AmpliScreen HIV-1 teszt, v1.5 megkülönböztető vizsgálatokkal futtatható. További vizsgálatokra lehet szükség a HIV-1 O csoport és HIV-2 megkülönböztetésére. A Roche nem biztosít megkülönböztető teszteket a HIV-1 O csoport és HIV-2 vizsgálatára. 2. A megkülönböztető vizsgálati eljárásokra vonatkozóan tanulmányozza a COBAS® ® AmpliScreen HBV teszt használati utasítását, a COBAS AmpliScreen HCV teszt, v2.0 ® használati utasítását és a COBAS AmpliScreen HIV-1 teszt, v1.5 használati utasítását. HASZNÁLATI UTASÍTÁS A cobas s 201 rendszer négy fő eljárást foglal magában: Minta és kontroll pipettázása a HAMILTON ® ® Microlab STAR IVD pipettorral, minta-előkészítés a COBAS AmpliPrep készüléken a cobas ® ® TaqScreen MPX teszttel, amplifikálás/detektálás a COBAS TaqMan analizátoron, valamint adatkezelés. ®

Minden cobas TaqScreen MPX tesztkészlet nyolc kazettát tartalmaz: két MPX CS1 kazetta mágneses üvegpartikulumokkal, két MPX CS2 kazetta lízisreagenssel, két MPX CS3 kazetta proteázzal és eluáló pufferrel, valamint két MPX CS4 kazetta az IC-ral, MMX 1 és MMX ® ® 2 reagensekkel. A tesztkészletet a cobas TaqScreen MPX kontrollkészlettel és a cobas TaqScreen mosóreagenssel együtt kell használni. Ne nyissa ki a kazettákat. Ne öntsön össze különböző tételekből, vagy azonos tételből, de különböző flakonokból származó reagenseket. Ne keverje a különböző készletből származó reagenseket ® (a kazettákat se). Ne töltsön kevert tételszámú reagenseket a COBAS AmpliPrep készülékbe. Ne válassza le a kontrollcsöveket az adapterről. Végezzen el minden szükséges karbantartást a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv utasításait követve. Részletes használati útmutatás céljából tanulmányozza a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv utasításait. A. Kontrollok és minták pipettázása a HAMILTON Microlab STAR IVD pipettorral Megjegyzés:

A minták és kontrollok előkészítése során ügyeljen a kesztyűk szennyezésének elkerülésére.

Megjegyzés:

Ne vortexelje a kontrollokat.

1. Helyezze üzembe a HAMILTON Microlab STAR IVD pipettort, majd a képernyőn megjelenő utasításokat követve indítsa el a Roche PDM csoportosítási varázslót. 2. Ügyeljen rá, hogy ne sértse meg a minták és kontrollok azonosító vonalkódját. 3. Távolítsa el a kontrollcsövek kupakját és helyezze a mintákat, fogyóeszközöket és kontrollokat a HAMILTON Microlab STAR IVD pipettorba. A minták, fogyóeszközök és kontrollok betöltése után a készülék átviszi a kontrollokat és mintákat az S-csövekbe. 4. A pipettázási folyamatot követően tekintse át a figyelmeztetéseket és nyomtassa ki a csoportosítási jelentés(eke)t. Ellenőrizze a csoportokat és mély lyukú lemezeket lyukait. Érvénytelenítse a csoportokat és/vagy lyukakat, ha vörösvértest-szennyeződést észlel, illetve a térfogatok nem egyenletesek.

14

®

5. Zárja le az S-csöveket, és vigye át az SK24 állvány(oka)t a COBAS AmpliPrep készülékbe a nukleinsav-kivonás lépésének elvégzésére. Az S-csövekben a beméréstől számítva minden vírustarget és kontroll 6 órán át marad stabil 30 °C-on, és további 6 órán át 40 °C-on. 6. Zárja le és tárolja a mély lyukú lemezeket (amennyiben lemezek készültek a pipettázási lépés során). A mély lyukú lemezekben tárolva minden vírustarget 7 napig őrzi meg stabilitását 2–8 °C-on, illetve hosszabb időszakra ≤ -18 °C-on. 7. Távolítsa el a tároló- és donorcsöveket. A feltételek végett tanulmányozza a Mintavétel, -tárolás és -csoportosítás fejezetet. 8. Távolítsa el és dobja ki a kontrollcsöveket. (A kontrollcsöveket csak egyszer lehet felhasználni.) ®

B. A cobas TaqScreen MPX tesztreagensek előkészítése és betöltése Megjegyzés:

®

Ügyeljen rá, hogy ne sértse meg a kazetták címkéit. A COBAS AmpliPrep készülék vonalkód leolvasója automatikusan leolvassa minden kazetta vonalkódcímkéjét a reagensállvány készülékbe történő betöltése folyamán.

1. A mintafeldolgozás megkezdése előtt a reagenseket hagyja 30 percen át a COBAS® AmpliPrep készülékben. Nincs szükség egyéb reagens-előkészítési lépésre. 2. Az indítást megelőzően annyi kazettát kell betölteni, hogy elegendő legyen a feldolgozásra ® kerülő minták teljes számának befogadására a COBAS AmpliPrep készülék a folyamatos üzeme során. Mindegyik kazetta 48 vizsgálatra elegendő reagenst tartalmaz. A reagensek folyamatos üzem során való betöltéséről a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv vonatkozó fejezetében tájékozódhat. 3. Helyezze az MPX CS1 kazettát a reagensállványba úgy, hogy a kazetta vonalkódja egy vonalban legyen az állvány jobb oldalán található vonalkóddal. Az MPX CS1 kazettákat együtt, egy másik reagensállványon kell betölteni, mint a többi kazettát. ®

4. Helyezze be az MPX CS1 kazettákat tartalmazó reagensállványt a COBAS AmpliPrep készülék A állványpozíciójába, és csúsztassa be a tűvel való ütközésig, majd várjon, amíg a reagensállvány LED zöldre vált, mielőtt az állványt a készülék belsejében elhelyezkedő végső pozíciójába tolja. Ne töltsön kevert tételszámú reagenseket a készülékbe. 5. Helyezzen egy-egy szett MPX CS2, MPX CS3 és MPX CS4 kazettát mindegyik MPX CS1 kazetta számára a reagensállvány(ok)ba úgy, hogy a kazetta vonalkódja egy vonalban legyen az állvány jobb oldalán található vonalkóddal. ®

6. Helyezze be a reagensállvány(oka)t a COBAS AmpliPrep készülék B, C, D, illetve E állványpozíciójába, és csúsztassa be a tűvel való ütközésig, majd várjon, amíg a reagensállvány LED zöldre vált, mielőtt az állványt a készülék belsejében elhelyezkedő végső pozíciójába tolja. ®

7. A COBAS AmpliPrep készülék állapotsorán a LED-ek zöldre váltanak, ha minden szükséges készlet és összetevő a készülékben van és a készülék felismerte azokat. C. Nukleinsavak kivonása a pipettázott mintákból és kontrollokból Megjegyzés:

Az alábbi lépéseket tiszta munkapadon végezze el.

1. Távolítsa el a mintafeldolgozó egység (SPU) celofán csomagolását, de ne nyúljon a kék szalaghoz. 2. Az SPU-állvány nagy füle a felhasználó felé nézzen. Illessze az SPU-kat az SPU-állvány jobb oldali legtávolabbi pozíciójába úgy, hogy a ROCHE jel az állvány eleje felé legyen. 3. Távolítsa el a kék szalagot, és ellenőrizze, hogy minden SPU megfelelően be legyen nyomva, egy szintben legyen és teljes mértékben illeszkedjen az állványba. Egy elmozdult SPU műszerhibát okozhat. Ne nyomja meg a SPU-ban található S-hegyet.

15

®

4. Csúsztassa a betöltött SPU-állványokat a COBAS AmpliPrep készülék I, J, illetve K SPUpozícióiba addig, amíg teljesen nem illeszkednek és a készülék fel nem ismeri azokat. A készülék egyszerre 72 SPU befogadására alkalmas. Töltsön be a futtatáshoz megkívánt számú SPU-t, illetve helyezzen be továbbiakat, ha szükséges. 5. Távolítsa el a gyártó által betöltött K-csövek és K-hegyek celofán csomagolását, és vigyázzon, hogy ne döntse meg az állványokat. Ellenőrizze, hogy megfelelően helyezkednek-e el. 6. Csúsztassa a K-cső- és K-hegyállványokat a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv szerint meghatározott állványterületekre. 7. Az munkaállomáson az AMPLILINK szoftver segítségével adja meg a mintasorrendet. 8. Töltse be a HAMILTON Microlab STAR IVD pipettorral pipettázott mintákat és kontrollokat ® tartalmazó SK24 állványokat a COBAS AmpliPrep készülék F, G, illetve H pozícióiba. Csúsztassa kattanásig az állványokat. Ellenőrizze a rendszer mintaállapot ablakában, hogy a készülék az összes állvány összes mintáját felismerte-e. 9. Az AMPLILINK segítségével ellenőrizze, hogy elegendő mennyiségű reagens és fogyóeszköz lett-e betöltve a kívánt minta-előkészítési eljáráshoz. ®

10. Nyomja meg az AMPLILINK munkaállomás Start gombját, hogy elindítsa a COBAS AmpliPrep készülék minta-előkészítési eljárást. ®

11. Minden fel nem használt K-hegy és K-cső a COBAS AmpliPrep készüléken belül lezárva visszamarad a következő futtatásban való felhasználás céljára. D.

Amplifikáció és kimutatás ®

®

1. Vigye át a feldolgozott mintákat tartalmazó az SK24 állványokat a COBAS TaqMan analizátorra 1 órán belül attól számítva, hogy az adott állványban befejeződött a minta® ® előkészítés. A COBAS TaqMan analizátor automatikusan megkezdi az amplifikálási és kimutatási eljárást. Ha 1 órán belül nem viszi át az állványokat, azokra érvénytelen eredményt fog kapni. ®

®

2. Ha befejeződött az amplifikálás és kimutatás a COBAS TaqMan analizátoron, a vizsgált minták automatikusan a hulladékgyűjtőbe kerülnek. 3. Az AMPLILINK adatállomáson fogadja el az eredményeket. 4. Az eredmények automatikusan a PDM szoftverre továbbítódnak. E. Eredmények áttekintése és kiadása 1. Indítsa el a Roche PDM adatállomást. 2. Keresse ki a még nem értékelt tételeket az adatkezelő munkaállomás „Review Batches” füle alatt. 3. Tekintse át a figyelmeztetéseket úgy, hogy kijelöli a tételt és a „Next” gombra kattint. 4. Tekintse át a kontrolleredményeket a „Controls Review” fül alatt. A kontrollok érvényességi kikötéseinek megismerése céljából tanulmányozza a Minőség-ellenőrzés fejezetet. 5. Tekintse át a csoporteredményeket a kiválasztott tétel „Alarms Review” füle alatt. A nem reaktív csoportok szükség esetén a felhasználó által manuálisan érvényteleníthetőek. Az érvénytelen csoportok minden donormintáját újra kell vizsgálni. 6. Tekintse át és adja ki a donoreredményeket a kiválasztott tétel „Donor Review” füle alatt. 7. Nyomtassa ki a jelentéseket és küldje tovább a laboratóriumi információs rendszerre (LIS), ha ilyen rendelkezésre áll.

16

MINŐSÉG-ELLENŐRZÉS 1. Minden egyes tétellel együtt egy negatív kontrollt [TS (–) C] és az öt pozitív kontroll mindegyikéből egyet-egyet [HIV-1 M (+) C, HIV-1 O (+) C, HIV-2 (+) C, HCV (+) C és HBV (+) C] is fel kell dolgozni. 2. Tétel állapota: A „Complete, Valid” tételállapot jelenik meg, ha a tételkontrollok érvényesek. Ha a tételben bármelyik kontroll érvénytelen, az egész tétel eredménye érvénytelen lesz. a. Negatív kontroll Ahhoz, hogy a negatív kontroll [TS (–) C] érvényes legyen, az eredmény értékelése nem reaktív, valamint a járulékos belső kontroll érvényes kell, hogy legyen. Amennyiben a belső kontroll érvénytelen, a negatív kontroll eredményének értékelése is érvénytelen lesz. Ha a negatív kontroll eredményének értékelése érvénytelen, az egész tétel érvénytelen lesz, és a vizsgálatot meg kell ismételni. b. Pozitív kontrollok Ahhoz, hogy az 5 pozitív kontroll (HIV-1 M (+) C, HIV-1 O (+) C, HIV-2 (+) C, HCV (+) C és HBV (+) C) érvényes legyen, minden egyes pozitív kontroll eredményének értékelése reaktív, valamint a járulékos belső kontroll érvényes kell, hogy legyen. Amennyiben a belső kontroll érvénytelen, a pozitív kontroll eredményének értékelése is érvénytelen lesz. Ha bármelyik pozitív kontroll eredményének értékelése érvénytelen, az egész tétel érvénytelen lesz, és a vizsgálatot meg kell ismételni. 3. Donorminták belső kontrollja a. Ahhoz, hogy a donorminta érvényes, nem reaktív (–) vizsgálati eredményt adjon, a járulékos belső kontroll érvényes kell, hogy legyen, ellenkező esetben a nem reaktív eredmény érvénytelen lesz, és az egész vizsgálati eljárást meg kell ismételni. b. Ahhoz, hogy a donorminta érvényes, reaktív (Ct érték) vizsgálati eredményt adjon, a járulékos belső kontroll érvényes vagy érvénytelen is lehet. EREDMÉNYEK 1. A mintaeredmények csak akkor érvényesek, ha a teljes, őket tartalmazó tétel érvényes. Az elfogadhatóság feltételeit a Minőség-ellenőrzés fejezetben találja. Minden minta esetében két paraméter mérésére kerül sor, egyik a vírustargetre, másik a belső kontrollra vonatkozik. ®

2. A cobas TaqScreen MPX teszt PDM szoftver által jelentett végső donoreredményei a következők: Állapot

Jelentés

Complete Non-Reactive

A donor nem reaktív a vizsgált elem(ek)re.

Complete Reactive

A donor reaktív a vizsgált elem(ek)re.

Complete Unresolved

Az életképességi időkorlát lejárt, mielőtt a donor reaktív vagy nem reaktív státuszt kapott volna. A donor további vizsgálata nem végezhető el a rendszeren.

3. További vizsgálatot igénylő donorok: az érvénytelen csoportállapotú donorcsövek értékelése „Repeat Needed”, továbbá a reaktív csoportban található donorcső értékelése „Resolution Needed”.

17

Repeat Needed Az „invalid” értékelésű csoport donorcsöveinek vizsgálatát meg kell ismételni egy ismétlési csoport részeként, vagy egyéni meghatározás során. Csoportvizsgálat – Resolution Needed Amikor egy több mintát tartalmazó csoport kap reaktív értékelést, a cobas s 201 rendszer a csoportban található összes donort „Resolution needed” státusszal jelöli. Ezeket ez egyéni donormintákat a HAMILTON Microlab STAR IVD pipettor pipettázza (a mély lyukú lemezekből ® vagy az eredeti donorcsövekből), és további vizsgálatuk a cobas TaqScreen MPX teszttel történik a visszabontási eljárás részeként a reaktív és nem reaktív egyéni donorminták azonosítása céljából. A visszabontási vizsgálatra vonatkozó specifikus információk végett tanulmányozza a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv utasításait. Amikor egy több mintát tartalmazó csoport értékelése nem reaktív, illetve egy vagy minden, visszaoldási vizsgálatban résztvevő donorminta értékelése nem reaktív, az egyéni minta(ák) értékelése „Complete, Non-reactive” lesz. Minden reaktívnak talált egyéni minta további ® vizsgálata elvégezhető a COBAS AmpliScreen teszttel a vírus megkülönböztetése céljából. Egyéni vizsgálat Ha a donor vizsgálatára eredetileg egyéni mintaként került sor és nem reaktív eredményt adott, a minta értékelése „Complete, Non-reactive”. Amennyiben az egyéni minta eredménye reaktív, a minta értékelése „Complete, Reactive”. Minden reaktívnak talált egyéni minta további vizsgá® lata elvégezhető a COBAS AmpliScreen teszttel a vírus megkülönböztetése céljából. Megjegyzés:

Egy átfogó minőség-biztosítási program részeként a felhasználó további vizsgálatokat végezhet el, hogy meghatározza a minta reaktivitásának eredeti okát.

4. Megkülönböztető vizsgálat ®

Minden egyéni reaktív minta, amelyet a cobas TaqScreen MPX teszt reaktívnak ismert fel, tovább vizsgálható annak meghatározására, hogy melyik vírus(ok) kimutatása történt: HIV-1, HBV vagy HCV. A HIV-1 M csoport, HCV és HBV megkülönböztetése céljából tanulmányozza ® ® ® a COBAS AmpliScreen HBV teszt, a COBAS AmpliScreen HCV teszt, v2.0 és a COBAS AmpliScreen HIV-1 teszt, v1.5 használati útmutatójának multiprep mintafeldolgozási eljárásokra vonatkozó részét. HIV-1 O csoport és HIV-2 megkülönböztetésére alkalmas teszt nem áll rendelkezésre a Roche-tól. ®

Ha egy egyéni mintát, amelyet a cobas TaqScreen MPX teszt reaktívnak talált mind a három ® COBAS AmpliScreen teszt nem reaktívnak talál, a felhasználó további NAT vagy szerológiai vizsgálatokat végezhet el, illetve visszarendelheti a donort utánkövetési vizsgálatokra. A donor utánkövetésére és esetleges visszavételére a felhasználóknak a helyi specifikus irányelveket/ eljárásokat kell követniük. ELJÁRÁSSAL KAPCSOLATOS KORLÁTOZÁSOK ®

®

1. A vizsgálatot kizárólag a cobas TaqScreen MPX tesztkészlet, cobas TaqScreen MPX ® kontrollkészlet, a cobas TaqScreen mosóreagens és a cobas s 201 rendszer együttes használatára értékelték. 2. A heparinról kimutatták, hogy gátolja a PCR-t. Az eljáráshoz ne használjon heparinos plazmát. 3. A megbízható eredmény a megfelelő mintalevételen, valamint a helyes transzporteljárásokon múlik. 4. A plazmacsoportok automatikus előkészítésére csak a HAMILTON Microlab STAR IVD pipettort ® validálták a cobas TaqScreen MPX teszttel való együttes használatra. Ragaszkodjon a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv és a HAMILTON Microlab STAR IVD pipettor felhasználói kézikönyv hardver utasításaihoz és biztonsági óvintézkedéseihez.

18

5. A HIV-1 M csoport RNS, HIV-1 O csoport RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS kimutatása függ a mintában jelenlevő vírusrészecskék számától, és befolyásolhatják a mintalevételi módszerek, betegfaktorok (azaz kor, tünetek megléte) és/vagy a fertőzés stádiuma, valamint a mintacsoport mérete. ®

6. Ritkán bár, de előfordulhat, hogy a cobas TaqScreen MPX teszt primerei és/vagy próbái által lefedett virális genomok nagyfokban konzervált régióiban levő mutációk következtében a vírus kimutatása sikertelen lesz. 7. A technológiák különbözősége miatt javasolt, hogy az egyik technológiáról a másikra való áttéréskor a felhasználók végezzenek korrelációs laboratóriumi vizsgálatokat, hogy a technológiák közötti különbség minősíthető legyen. TELJESÍTMÉNYJELLEMZŐK Reprodukálhatóság ®

A cobas TaqScreen MPX teszt cobas s 201 rendszerrel való használatának reprodukálhatóságát 12 tagú, randomizált, két negatív plazmamintát és két-két, HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, ® HCV és HBV pozitív plazmamintát, minden vírus esetében megközelítőleg a cobas TaqScreen MPX teszt kimutatási határának (LOD) 0,54X és 3X koncentrációit tartalmazó vak panelű vizsgálattal állapították meg. A vizsgálatok kivitelezésére 3 vizsgálati helyen, helyenként 1 üzemeltető által, 3 különböző ® tételszámú cobas TaqScreen MPX tesztkészletet és 1 cobas s 201 rendszer alkalmazásával került sor. Mindegyik színhelyen naponta 4 panelt és 4 kontrollszettet vizsgáltak 5 napon keresztül mind a 3 tételű reagenskészlettel, a panelek minden egyes mintájával összesen 180 vizsgálatot végeztek (összesen 2160 vizsgálat). Valamennyi érvényes reprodukálhatósági adatot úgy értékeltek, hogy kiszámították valamennyi panel tag esetében a reaktív vizsgálati eredmények százalékos arányát. Az adatokat készlettétel és vizsgálati helyszín/üzemeltető szerint dolgozták fel. ®

Ez a vizsgálat megmutatta a cobas TaqScreen MPX teszt készlettétel és vizsgálati helyszín/ üzemeltető szerinti kivitelezésének következetességét.

19

1. táblázat ® cobas TaqScreen MPX teszt — Reprodukálhatósági eredmények Kés- Reaktív eredmény Vizsgálati hely/ Koncentráció zletreagenstétel Üzemeltető tétel alapján A 0,0% (0/120) 1 Negatív 0 B 0,0% (0/120) 2 C 0,0% (0/120) 3 A 75,0% (45/60) 1 HIV-1 M csoport 0,54 X LOD** B 80,0% (48/60) 2 C 75,0% (45/60) 3 A 96,7% (58/60) 1 HIV-1 O csoport 0,54 X LOD* B 98,3% (59/60) 2 C 98,3% (59/60) 3 A 83,3% (50/60) 1 HIV-2 0,54 X LOD* B 81,7% (49/60) 2 C 73,3% (44/60) 3 A 81,4% (48/59) 1 HCV 0,54 X LOD* B 78,3% (47/60) 2 C 61,7% (37/60) 3 A 98,3% (58/59) 1 HBV 0,54 X LOD* B 98,3% (59/60) 2 C 95,0% (57/60) 3 A 100,0% (60/60) 1 HIV-1 M csoport 3 X LOD* B 98,3% (59/60) 2 C 100,0% (60/60) 3 A 100,0% (60/60) 1 HIV-1 O csoport 3 X LOD* B 100,0% (60/60) 2 C 100,0% (60/60) 3 A 100,0% (59/59) 1 HIV-2 3 X LOD* B 100,0% (60/60) 2 C 100,0% (60/60) 3 A 100,0% (60/60) 1 HCV 3 X LOD* B 100,0% (60/60) 2 C 100,0% (60/60) 3 A 100,0% (60/60) 1 HBV 3 X LOD* B 100,0% (60/60) 2 C 100,0% (60/60) 3 * Kimutatási határ Vírus

Reaktív eredmény vizsgálati hely/ üzemeltelő alapján 0,0% (0/120) 0,0% (0/120) 0,0% (0/120) 75,0% (45/60) 71,7% (43/60) 83,3% (50/60) 100,0% (60/60) 95,0% (57/60) 98,3% (59/60) 73,3% (44/60) 80,0% (48/60) 85,0% (51/60) 71,7% (43/60) 71,2% (42/59) 78,3% (47/60) 96,7% (58/60) 98,3% (58/59) 96,7% (58/60) 98,3% (59/60) 100,0% (60/60) 100,0% (60/60) 100,0% (60/60) 100,0% (60/60) 100,0% (60/60) 100,0% (60/60) 100,0% (60/60) 100,0% (59/59) 100,0% (60/60) 100,0% (60/60) 100,0% (60/60) 100,0% (60/60) 100,0% (60/60) 100,0% (60/60)

Analitikai érzékenység — WHO nemzetközi szabvány/Roche szabvány ®

A cobas TaqScreen MPX teszt kimutatási határa a HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV és HBV ágensekre a következő szabványok alapján lett meghatározva: a WHO HBV nemzetközi standard (NIBSC kód 97/746)30, a WHO 2. HCV RNS nemzetközi standard (NIBSC kód 96/798)31 és a Roche HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport és HIV-2 standard. A Roche HIV-1 M csoport standard egy kereskedelmi forgalomban levő vírustörzs kultúra (HIV-1 LAV 8E5, PN 227, Boston Biomedica, st Inc.), amely visszavezethető a WHO 1 HIV-1 RNS nemzetközi standardra (NIBSC code 97/656), és ® ® a COBAS TaqMan HIV-1 teszt nagytisztaságú rendszerrel való felhasználásra módszerrel lett kalibrálva. HIV-1 O csoport és HIV-2 nemzetközi standard jelenleg nem áll rendelkezésre. A Roche HIV-1 O csoport és HIV-2 standardok kereskedelmi forgalomban levő vírustörzs kultúrák, PN 242O (Boston Biomedica, Inc.) és katalógusszám 10-127-000 (Advanced Biotechnologies, Inc.). A HIV-1 O

20

csoportú és HIV-2 vírustörzsek koncentrációit, melyek meghatározása elektronmikroszkópos részecskeszámlálással történt, a forgalmazó bocsátotta rendelkezésre. Három független hígítási sorozatot készítettek minden vírusstandardból normál, vírus negatív ® plazmával. Mindegyik hígítási sorozatot három különböző tételű cobas TaqScreen MPX tesztkészlettel vizsgálták, készletenként 22 ismétlésben, összesen 198 ismétlést végeztek koncentrációnként. A 95%-os kimutatási határt (LOD) és a kétoldali 95%-os fiduciális konfidenciaintervallumokat úgy határozták meg, hogy a vizsgált ismétlések egyesített adatival minden vírus esetében PROBIT analízist végeztek (2. táblázat). A 3-7. táblázat összefoglalja az analitikai érzékenységi vizsgálatok összesített eredményeit. 2. táblázat A vírusstandardok PROBIT analízise Elem

Mértékegységek

Átlag 95% LOD

95% alsó határ

95% felső határ

HIV-1 M csoport HIV-1 O csoport HIV-2 HCV HBV

IU/ml

49

42,4

58,1

kópia/ml

152

95,6

371

kópia/ml IU/ml IU/ml

2,2 11 3,8

1,9 7,0 3,3

2,6 21,7 4,4

3 táblázat Analitikai szenzitivitás összefoglalása: Roche másodlagos HIV-1 M csoport standard HIV-1 M csoport RNS-koncentráció (IU/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

190 60 50 40 20 6

196 193 187 180 143 72

196 197 195 195 196 196

100% 98,0% 95,9% 92,3% 73,0% 36,7%

95% alsó konfidencia kikötés (egyoldali) 98,5% 95,4% 92,7% 88,4% 67,2% 31,0%

4 táblázat Analitikai szenzitivitás összefoglalása: Roche elsődleges HIV-1 O csoport standard HIV-1 O csoport RNS-koncentráció (kópia/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

500 250 200 160 50 16

194 198 196 191 98 46

194 198 198 197 198 189

100% 100% 99,0% 97,0% 49,5% 24,3%

21

95% alsó konfidencia kikötés (egyoldali) 98,5% 98,5% 96,9% 94,1% 43,4% 19,3%

5 táblázat Analitikai szenzitivitás összefoglalása: Roche elsődleges HIV-2 standard HIV-2 RNSkoncentráció (kópia/ml) 12,0 4,0 3,1 2,3 1,3 0,4

Reaktívak száma 194 194 186 188 154 79

Egyéni 95% alsó konfidencia Reaktívak % vizsgálatok száma kikötés (egyoldali) 194 195 189 195 192 194

100,0% 99,5% 98,4% 96,4% 80,2% 40,7%

98,5% 97,6% 95,9% 93,4% 74,9% 34,8%

6 táblázat Analitikai szenzitivitás összefoglalása: WHO második HCV nemzetközi standard (96/798) HCV RNSkoncentráció (IU/ml) 30,0

97,9%

95% alsó konfidencia kikötés (egyoldali) 95,3%

184

99,5%

97,4%

183

186

98,4%

95,9%

10,0

180

193

93,3%

89,5%

3,0

128

192

66,7%

60,6%

1,0

67

192

34,9%

29,2%

188

Egyéni vizsgálatok száma 192

15,4

183

11,3

Reaktívak száma

Reaktívak %

7 táblázat Analitikai szenzitivitás összefoglalása: WHO HBV nemzetközi standard (97/746) HBV DNSkoncentráció (IU/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

95% alsó konfidencia kikötés (egyoldali)

12,0

193

193

100,0%

98,5%

5,0

194

197

98,5%

96,1%

4,0

186

193

96,4%

93,3%

3,6

186

197

94,4%

90,9%

1,3

121

192

63,0%

56,9%

0,4

47

191

24,6%

19,5%

Genotípus/szubtípus szenzitivitás és inkluzivitás ®

A cobas TaqScreen MPX teszt teljesítményét HIV-1 M csoport szubtípusok, HIV-1 O csoport, HIV-1 N csoport és HIV-2, továbbá HCV és HBV genotípusok alapján határozták meg. HIV-1 M csoport Ismert szubtípusú, harminchét HIV-1 M csoportú klinikai minta és 25 izolátumkultúra (7 A szubtípus, 7 AE kevert szubtípus, 12 B szubtípus, 9 C szubtípus, 7 D szubtípus, 5 E szubtípus, 4 F szubtípus, ® ® 8 G szubtípus, 2 H szubtípus és 1 J szubtípus) vizsgálatát végezték el a COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR teszt, v1.5 vizsgálattal történt mennyiségi meghatározást követően a minták normál, ® vírus negatív humán plazmával készült, a cobas TaqScreen MPX HIV-1 M csoport teszt kimutatási ® határának (LOD) 3X és 1X hígításaiból a cobas TaqScreen MPX teszttel. Mind a harminchét klinikai minta és 25 izolátumkultúra reaktív eredményt adott mind a 3X, mind az 1X LOD hígítás mellett.

22

8. táblázat HIV-1 M csoportú minták és izolátumkultúrák Szubtípus A AE B C D E F G H J

Klinikai minták 3 7 10 7 2 0 1 4 2 1

Kultúra felülúszók 4 0 2 2 5 5 3 4 0 0

Összes izolátum 7 7 12 9 7 5 4 8 2 1

Reaktív 3X LOD mellett 100% (7/7) 100% (7/7) 100% (12/12) 100% (9/9) 100% (7/7) 100% (5/5) 100% (4/4) 100% (8/8) 100% (2/2) 100% (1/1)

Reaktív 1X LOD mellett 100% (7/7) 100% (7/7) 100% (12/12) 100% (9/9) 100% (7/7) 100% (5/5) 100% (4/4) 100% (8/8) 100% (2/2) 100% (1/1)

HIV-1 O csoport és HIV-1 N csoport Nyolc HIV-1 O csoportú izolátumkultúrát és 1 HIV-1 N csoportú izolátumkultúrát vizsgáltak. Mivel nem áll rendelkezésre molekuláris módszer a HIV-1 O csoportú és N csoportú izolátumok mennyiségi meghatározására, fél-log hígításokat készítettek a törzskultúrákból normál, vírus negatív ® humán plazmával, és minden hígítást a cobas TaqScreen MPX teszttel vizsgáltak. ®

Mind a 8 HIV-1 O csoportú izolátum kimutatható volt a cobas TaqScreen MPX teszttel minden -7 -8 hígításban, egészen az 1 x 10 és 1 x 10 hígításokig. A HIV-1 N csoportú izolátum minden -10 hígításban kimutatható volt egészen a 3,3 x 10 hígításig. HIV-2 Kilenc HIV-2 izolátumkultúrát (5 A szubtípus, 1 A/B szubtípus, 1 B szubtípus és 2 nem ismert szubtípus) és 11 HIV-2 klinikai mintát (nem ismert szubtípus) vizsgáltak. Mivel nem áll rendelkezésre molekuláris módszer a HIV-2 minták mennyiségi meghatározására, fél-log hígításokat készítettek a törzskultúrákból és klinikai mintákból normál, vírus negatív humán plazmával, és minden hígítást ® a cobas TaqScreen MPX teszttel vizsgáltak. ®

Mind az 5 HIV-2 A szubtípusú izolátumkultúra kimutatható volt a cobas TaqScreen MPX teszttel -8 -9 minden hígításban, egészen az 1 x 10 to 3,3 x 10 hígításokig. A HIV-2 A/B szubtípusú izolátum az -9 1 x 10 hígításig volt kimutatható. A HIV-2 B szubtípusú izolátum az 3,3 x 10-9 hígításig volt -9 kimutatható. A 2 nem ismert szubtípusú HIV-2 izolátumkultúra a 3,3 x 10 hígításig volt kimutatható. ® Mind a 11 HIV-2 klinikai minta (ismeretlen szubtípus) kimutatható volt a cobas TaqScreen MPX teszttel egészen az 1:100 (2 minta), 1:30 (3 minta), 1:10 (2 minta), 1:3 (3 minta) hígításokig, és hígítás nélkül (1 minta). HCV Hetvennégy ismert genotípusú HCV klinikai minta (8 1a genotípus, 13 1b genotípus, 1 2 genotípus, 7 2a genotípus, 1 2a/c genotípus, 9 2b genotípus, 8 3a genotípus, 1 3a/b genotípus, 6 4 genotípus, 1 4a genotípus, 1 4b/4c genotípus, 1 4h genotípus, 2 5 genotípus, 9 5a genotípus, 2 6 genotípus és ® ® 4 6a genotípus) mennyiségi vizsgálatát végezték el a COBAS AMPLICOR HCV MONITOR teszt, v2.0 vizsgálattal történt mennyiségi meghatározást követően a minták normál, vírus negatív humán ® plazmával készült, a cobas TaqScreen MPX HCV teszt kimutatási határának (LOD) 3X és 1X ® hígításaiból a cobas TaqScreen MPX teszttel. Mind a hetvennégy izolátum reaktív eredményt adott 3X LOD hígítás mellett. 1X LOD hígítás mellett a 74 izolátumból 73 volt reaktív. Egy 1b genotípusú izolátum 1X LOD mellett nem volt reaktív, 3X LOD mellett viszont igen.

23

9. táblázat HCV minták Genotípus

Klinikai minták

Reaktív 3X LOD mellett

Reaktív 1X LOD mellett

1a 8 100% (8/8) 100% (8/8) 1b 13 100% (13/13)* 92% (12/13)* 2 1 100% (1/1) 100% (1/1) 2a 7 100% (7/7) 100% (7/7) 2a/c 1 100% (1/1) 100% (1/1) 2b 9 100% (9/9) 100% (9/9) 3a 8 100% (8/8) 100% (8/8) 3a/b 1 100% (1/1) 100% (1/1) 4 6 100% (6/6) 100% (6/6) 4a 1 100% (1/1) 100% (1/1) 4b/4c 1 100% (1/1) 100% (1/1) 4h 1 100% (1/1) 100% (1/1) 5 2 100% (2/2) 100% (2/2) 5a 9 100% (9/9) 100% (9/9) 6 2 100% (2/2) 100% (2/2) 6a 4 100% (4/4) 100% (4/4) * Egy 1b genotípusú izolátum 3X LOD mellett reaktív eredményt adott, 1X LOD mellett viszont nem. HBV Ismert genotípusú, hatvannégy HBV klinikai minta és egy molekuláris klón (13 A genotípus, 9 B genotípus, 10 C genotípus, 9 D genotípus, 14 E genotípus, 6 F genotípus, 2 G genotípus és ® ® 2 H genotípus) mennyiségi vizsgálatát végezték el a COBAS AMPLICOR HBV MONITOR teszttel történt mennyiségi meghatározást követően a minták normál, vírus negatív humán plazmával készült ® ® a cobas TaqScreen MPX HBV teszt kimutatási határának (LOD) 3X és 1X hígításaiból a cobas TaqScreen MPX teszttel. Mind a 65 minta reaktív eredményt adott mind 3X, mind 1X LOD hígítás mellett. 10. táblázat HBV minták Klinikai Reaktív 3X LOD Reaktív 1X LOD minták mellett mellett A 13 100% (13/13) 100% (13/13) B 9 100% (9/9) 100% (9/9) C 10 100% (10/10) 100% (10/10) D 9 100% (9/9) 100% (9/9) E 14 100% (14/14) 100% (14/14) F 6 100% (6/6) 100% (6/6) G 2* 100% (2/2) 100% (2/2) H 2 100% (1/1)** 100% (2/2) Egy G genotípusú minta klinikai minta helyett plazmid DNS volt

Genotípus

* **

Egy H genotípusú izolátum vizsgálatára 3X LOD mellett nem került sor az elégtelen térfogat miatt.

24

Szerokonverziós panelek ®

A cobas TaqScreen MPX teszt teljesítményét a szerokonverzió alatt HIV-1 M csoport, HCV és HBV esetében határozták meg 60, kereskedelmi forgalomban levő szerokonverziós panel segítségével. HIV-1 O csoportú és HIV-2 szerokonverziós panel nem áll rendelkezésre. HIV-1 szerokonverziós panelek Huszonkét kereskedelmi forgalomban levő, plazmaferezis donoroktól HIV antitest szerokonverzió ® során levett szerokonverziós panelt vizsgáltak a cobas TaqScreen MPX teszttel. Minden mintát ® tisztán és 1:6 hígításban vizsgáltak, 6 tagú donorcsoport vizsgálatát szimulálva. A cobas TaqScreen MPX teszt eredményeit összehasonlították az Abbott PRISM HIV O Plus vizsgálat és az Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA vizsgálat eredményeivel. A cobas® TaqScreen MPX teszt a tiszta mintákban 20-ból 20 panel esetében kimutatta a HIV RNS-t még a HIV antitest kimutathatóságát megelőzően, az Abbott PRISM HIV O Plus vizsgálattal és az ® Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA vizsgálattal együtt. A cobas TaqScreen MPX teszt a tiszta mintákban a HIV RNS-t a HIV antitest kimutathatóságát megelőzően az Abbott PRISM HIV O Plus vizsgálathoz képest és az Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA vizsgálathoz képest átlagosan 14 nappal mutatta ki. ®

A cobas TaqScreen MPX teszt a 6-szoros hígítású mintákban 20-ból 20 panel esetében kimutatta a HIV RNS-t még a HIV antitest kimutathatóságát megelőzően, az Abbott PRISM HIV O Plus ® vizsgálattal és az Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA vizsgálattal együtt. A cobas TaqScreen MPX teszt a 6-szoros hígítású mintákban a HIV RNS-t átlagosan 13 nappal a HIV antitest kimutathatóságát megelőzően mutatta ki, az Abbott PRISM HIV O Plus vizsgálat és az Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA vizsgálattal együtt. ®

Azokat a panelokat, amelyek első vérsorozata a cobas TaqScreen MPX teszttel vizsgálva reaktív és minden szerológiai vizsgálattal nem reaktív eredményt adtak, illetve azokat, amelyek esetében az elsődleges vérsorozat és első reaktív vérsorozat között több, mint 21 nap telt el, kizárták a HIV-1/2 antitest kimutatása előtti minimum, átlag és maximum napokat összegző számításokból.

25

11. táblázat ® A cobas TaqScreen MPX teszt teljesítménye HIV szerokonverziós panelekkel Napok a HIV-1/2 antitest kimutatása előtt Abbott PRISM HIV O Plus HIV szerokonverziós Megjegy Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA ® panel zések cobas TaqScreen MPX teszt 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20

A C A B, C

B, D

E B, C B

Minimum Átlag Maximum A. B. C. D. E.

Tiszta 15 14 18 5 9 10 17 7 10 13 19 25 19 7 19 89 7 14 11 15

1:6 15 14 18 5 9 10 11 7 10 13 19 25 14 7 19 89 7 11 7 15

Tiszta 15 14 18 5 14 10 17 10 10 13 19 25 19 7 19 9 7 14 11 15

1:6 15 14 18 5 14 10 11 10 10 13 19 25 14 7 19 9 7 11 7 15

7 14 25

7 13 25

7 14 25

7 13 25

®

A cobas TaqScreen MPX teszt eredménye reaktív volt a teljes első sorozat minden tiszta és 1:6 hígított mintájának esetében; az összegző számításokból kihagyták. Nincs HIV antitest szerokonverzió az Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA vizsgálattal; az Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA összegző számításokból kihagyták. Nincs HIV antitest szerokonverzió az Abbott PRISM HIV O Plus vizsgálattal; az Abbott PRISM HIV O Plus összegző számításokból kihagyták. ® Az összegző számításokból kihagyták az első vér és az első cobas TaqScreen MPX teszttel reaktív vér között eltelt hosszú idő miatt (40 nap). Az Abbott HIVAB HIV-1/HIV-2 EIA összegző számításokból kihagyták az első vér és az első szerológiailag reaktív vér között eltelt hosszú idő miatt (80 nap).

HCV szerokonverziós panelek Húsz kereskedelmi forgalomban levő, plazmaferezis donoroktól HCV antitest szerokonverzió során ® levett szerokonverziós panelt vizsgáltak a cobas TaqScreen MPX teszttel. Minden mintát tisztán és ® 1:6 hígításban vizsgáltak, 6 tagú donorcsoport vizsgálatát szimulálva. A cobas TaqScreen MPX teszt eredményeit összehasonlították az Abbott PRISM HCV vizsgálat és az ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System vizsgálat eredményeivel. ®

A cobas TaqScreen MPX teszt tiszta minták esetében 20-ból 19 panelnél a HCV RNS-t a HCV antitest kimutathatósága előtt kimutatta, 20-ból 1 panelnél pedig a HCV antitest kimutathatóságával megegyező napon, az Abbott PRISM HCV vizsgálattal és az ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test ® System vizsgálattal együtt. A cobas TaqScreen MPX teszt tiszta minták esetében a HCV RNS-t a HCV antitest kimutathatósága előtt az Abbott PRISM HCV vizsgálathoz képest átlag 24 nappal, az ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System vizsgálathoz képest átlag 25 nappal korábban mutatta ki.

26

®

A cobas TaqScreen MPX teszt 6-szoros hígítású minták esetében 20-ból 19 panelnél a HCV RNS-t a HCV antitest kimutathatósága előtt kimutatta, 20-ból 1 panelnél pedig a HCV antitest kimutathatóságával megegyező napon, az Abbott PRISM HCV vizsgálattal és az ORTHO HCV ® Version 3.0 ELISA Test System vizsgálattal együtt. A cobas TaqScreen MPX teszt 6-szoros hígítású minták esetében a HCV RNS-t a HCV antitest kimutathatósága előtt az Abbott PRISM HCV vizsgálathoz képest átlag 23 nappal, az ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System vizsgálathoz képest átlag 24 nappal korábban mutatta ki. ®

Azokat a panelokat, amelyek első vérsorozata a cobas TaqScreen MPX teszttel vizsgálva reaktív és minden szerológiai vizsgálattal nem reaktív eredményt adtak, illetve azokat, amelyek esetében az elsődleges vérsorozat és első reaktív vérsorozat között több, mint 21 nap telt el, kizárták a HCV antitest kimutatása előtti minimum, átlag és maximum napokat összegző számításokból. 12. táblázat ® A cobas TaqScreen MPX teszt teljesítménye HCV szerokonverziós panelekkel Napok a HCV antitest kimutatása előtt HCV szerokonverziós Megjegy ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Abbott PRISM HCV Plus panel zések ® cobas TaqScreen MPX teszt 1:6 Tiszta 1:6 Tiszta 1 A 97 97 97 97 2 A 85 85 85 85 3 A 16 16 13 13 4 A 7 7 7 7 5 7 7 3 3 6 A, B 27 27 24 24 7 A 19 19 13 13 8 A 8 8 8 8 9 A 14 14 14 14 10 A, B 9 9 7 7 11 A 23 23 16 16 12 A 21 21 18 18 13 A 39 39 37 37 14 32 32 32 32 15 A 31 31 28 28 16 23 23 23 23 17 39 33 39 33 18 C 32 32 32 32 19 C 38 38 38 38 20 D 0 0 0 0 Minimum Átlag Maximum A. B. C. D.

7 25 39

7 24 33

®

3 24 39

3 23 33

A cobas TaqScreen MPX teszt eredménye reaktív volt a teljes első sorozat minden tiszta és 1:6 hígított mintájának esetében; az összegző számításokból kihagyták. Nincs HCV antitest szerokonverzió az ORTHO HCV Version 3.0 ELISA vizsgálattal; az ORTHO HCV Version 3.0 ELISA összegző számításokból kihagyták. Az összegző számításokból kihagyták az első vér és az első szerológiailag reaktív vér között eltelt hosszú idő miatt (28 nap, 18. panel; 31 nap 19. panel). Az összegző számításokból kihagyták az első, mindegyik módszerrel nem reaktív vér és a második, mindegyik módszerrel reaktív vér között eltelt hosszú idő (69 nap) miatt.

27

HBV szerokonverziós panelek Húsz kereskedelmi forgalomban levő, plazmaferezis donoroktól HBsAg szerokonverzió során levett ® szerokonverziós panelt vizsgáltak a cobas TaqScreen MPX teszttel. Minden mintát tisztán és 1:6 ® hígításban vizsgáltak, 6 tagú donorcsoport vizsgálatát szimulálva. A cobas TaqScreen MPX teszt ® eredményeit összehasonlították az Abbott PRISM HBsAg vizsgálat és az ORTHO® HBsAg ELISA Test System 3 vizsgálat eredményeivel. ®

A cobas TaqScreen MPX teszt tiszta minták esetében a HBV DNS-t a 20-ból 17 panelnél a HBsAg Abbott PRISM HBsAg vizsgálattal való kimutathatósága előtt kimutatta, 20-ból 2 panelnél a HBsAg kimutathatóságával megegyező napon, 20-ból 1 panelnél pedig a HBsAg kimutathatóságánál egy ® nappal később. Az ORTHO HBsAg ELISA Test System 3 vizsgálattal összehasonlítva, a cobas TaqScreen MPX teszt tiszta minták esetében a HBV DNS-t a HBsAg kimutathatósága előtt 20-ból ® 19 panelnél, és a HBsAg kimutathatósága után 20-ból 1 panelnél mutatta ki. A cobas TaqScreen MPX teszt tiszta minták esetében a HBV DNS-t a HBsAg kimutathatósága előtt az Abbott PRISM HBsAg vizsgálathoz képest átlag 19 nappal, az ORTHO HBsAg ELISA Test System 3 vizsgálathoz képest átlag 24 nappal korábban mutatta ki. ®

A cobas TaqScreen MPX teszt 6-szoros hígítású minták esetében a HBV DNS-t a 20-ból 15 panelnél a HBsAg Abbott PRISM HBsAg vizsgálattal való kimutathatósága előtt kimutatta, 20-ból 3 panelnél a HBsAg kimutathatóságával megegyező napon, 20-ból 2 panelnél pedig a HBsAg kimutathatóságánál egy nappal később. Az ORTHO HBsAg ELISA Test System 3 vizsgálattal ® összehasonlítva, a cobas TaqScreen MPX teszt 6-szoros hígítású minták esetében a HBV DNS-t a 20-ból 17 panelnél a HBsAg kimutathatósága előtt kimutatta, 20-ból 2 panelnél a HBsAg kimutathatóságával megegyező napon, 20-ból 1 panelnél pedig a HBsAg kimutathatóságánál egy ® nappal később. A cobas TaqScreen MPX teszt 6-szoros hígítású minták esetében a HBV DNS-t a HBsAg kimutathatósága előtt az Abbott PRISM HBsAg vizsgálathoz képest átlag 8 nappal, az ORTHO HBsAg ELISA Test System 3 vizsgálathoz képest átlag 13 nappal korábban mutatta ki. ®

Azokat a panelokat, amelyek első vérsorozata a cobas TaqScreen MPX teszttel vizsgálva reaktív és azokat, amelyeknél az elsődleges vérsorozat és első reaktív vérsorozat között több, mint 21 nap telt el, kizárták az összegző vizsgálatokból. Ezen felül egy panelt, amelynek első vérsorozata az ® Abbott PRISM HBsAg vizsgálattal reaktív volt, és egy panelt, amely a cobas TaqScreen MPX teszttel vizsgálva időszakosan volt reaktív egy 97 napos időtartamon át, kizártak a HBsAg kimutatása előtti minimum, átlag és maximum napokat összegző számításokból.

28

13. táblázat ® A cobas TaqScreen MPX teszt teljesítménye HBV szerokonverziós panelekkel Napok a HBsAg kimutatása előtt HBV szerokonverziós panel 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Minimum Átlag Maximum A. B. C. D. E.

Megjegyz ések E A, B B, C, D A, B A, B A, B A, B A, B A, B

D A, B A, C, D

ORTHO HBsAg ELISA Test Abbott PRISM HBsAg Plus S t 3 ® cobas TaqScreen MPX teszt Tiszta -5 18 35 31 7 21 8 13 14 18 28 7 19 21 21 26 12 18 35 21

1:6 -7 16 35 24 43 0 8 13 14 18 16 7 19 12 9 0 12 18 12 17

Tiszta 22 16 35 21 -36 21 4 9 7 7 26 2 12 23 19 8 0 7 0 18

1:6 20 14 35 14 0 0 4 9 7 7 14 2 12 14 7 -18 0 7 -23 14

18 24 31

0 13 24

8 19 26

-18 8 14

®

A cobas TaqScreen MPX teszt eredménye reaktív volt a teljes első sorozat minden tiszta mintájának esetében; az összegző számításokból kihagyták. ® A cobas TaqScreen MPX teszt eredménye reaktív volt a teljes első sorozat minden 1:6 hígítású mintájának esetében; az összegző számításokból kihagyták. Az Abbott PRISM HBsAg vizsgálat eredménye reaktív volt a teljes első sorozat mintáinak esetében; az Abbott PRISM HBsAg vizsgálat összegző számításokból kihagyták. ® Az összegző számításokból kihagyták az első vér és az első cobas TaqScreen MPX teszttel reaktív vér között eltelt hosszú idő miatt (5. panel: 36 nap, 17. panel: 146 nap, 19. panel: 23 nap). ® A cobas TaqScreen MPX teszt tiszta mintáinak reaktív eredményeit a 4., 16. és 26. napokon nem vették bele a „Napok a kimutatás előtt” számításba, mivel a 7., 19., 23., 76. és 101. napok nem reaktív eredményt adtak. ® A cobas TaqScreen MPX teszt 4. nap 1:6 hígítású minta reaktív eredményét nem vették bele a „Napok a kimutatás előtt” számításba, mivel a következő 8 minta (7–106. nap) nem reaktív eredményű volt. Ezt a panelt kihagyták az összegző számításokból hosszú, időszakosan reaktív periódus miatt.

29

Analitikai specificitás – Potenciálisan keresztreagáló és zavarást okozó mikroorganizmusok ®

A cobas TaqScreen MPX teszt analitikai specificitását egy 17 mikroorganizmust, ezen belül 12 vírusizolátumot, 4 baktériumtörzset és 1 élesztőizolátumot tartalmazó panel vizsgálatával értékelték. A mikroorganizmusokat normál, vírus-negatív humán plazmához adták, és HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélkül, továbbá minden vírus esetében ® a cobas TaqScreen MPX teszt 3X kimutatási határ hígítása mellett vizsgálták. ®

A cobas TaqScreen MPX teszttel mindegyik, HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélküli mikroorganizmus-minta nem reaktív eredményt adott. A vizsgált ® mikroorganizmusok nem adnak keresztreakciót a cobas TaqScreen MPX teszttel. Mindegyik, HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadásával vizsgált mikroorganizmus minta ® reaktív eredményt adott. A vizsgált mikroorganizmusok nem zavarják a cobas TaqScreen MPX tesztet. 14. táblázat Vizsgált mikroorganizmusok Analitikai specificitás — Vizsgált mikroorganizmusok Adenovírus 2

Humán herpes vírus 6

Staphylococcus aureus

Cytomegalovírus

Humán T-lymphotrop vírus I

Candida albicans

Epstein-Barr vírus

Humán T-lymphotrop vírus II

Propionibacterium acnes

Hepatitis A vírus

Staphylococcus epidermidis

Herpes simplex vírus 1

Influenzavírus

Staphylococcus haemolyticus

Herpes simplex vírus 2

Hepatitis G vírus (GBV C)

Varicella-zoster vírus

Analitikai specificitás – Egyéb kórállapotok Minden egyes, a következőkben felsorolt betegségkategóriára (Cytomegalovírus-fertőzés, Hepatitis A vírus-fertőzés, Epstein Barr vírus-fertőzés, valamint autoimmun megbetegedések, azaz systemás lupus erythematosus, antinukleáris ellenanyagok, rheumatoid arthritis) vizsgáltak plazmamintákat HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélkül és hozzáadásával, ® minden vírus esetében a cobas TaqScreen MPX teszt 3X kimutatási határ hígítása mellett. ® A cobas TaqScreen MPX teszt nem reaktív teszteredményeket szolgáltatott minden kórállapot mintára HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélkül egy minta kivételével, amely kezdetben reaktívnak, majd az ismételt vizsgálat során nem reaktívnak bizonyult, és reaktív eredményt szolgáltatott minden kórállapot mintára HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, ® HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása mellett. A kórállapotok nem zavarják a cobas TaqScreen MPX teszt szenzitivitását, illetve specificitását. Potenciálisan zavaró anyagok Endogén zavarást okozó anyagok Abnormálisan magas szintű triglicerideket (max. 3186 mg/dl), hemoglobint (max. 472 mg/dl), nem kötött bilirubint (max. 63 mg/dl), albumint (max. 9,6 g/dl), illetve humán DNS-t (max. 0,4 mg/dl) tartalmazó plazmamintákat vizsgáltak HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV ® hozzáadásával és anélkül, minden vírus esetében a cobas TaqScreen MPX teszt 3X kimutatási ® határ hígítása mellett. Az endogén anyagok nem zavarják a cobas TaqScreen MPX teszt szenzitivitását, illetve specificitását. Abnormálisan nagy mennyiségben hozzáadott vörösvértesteket (max. 10% v/v) tartalmazó plazmamintákat vizsgálták HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV ® vagy HBV hozzáadásával és anélkül, minden vírus esetében a cobas TaqScreen MPX teszt 3X kimutatási határ hígítása mellett vizsgálták. A plazma vörösvértest tartalma 2,5% (v/v) alatt nem ® zavarja a cobas TaqScreen MPX teszt szenzitivitását, illetve specificitását. A plazma vörösvértest ® tartalma 5,0% (v/v) fölött csökkenti HCV kimutatásának szenzitivitását a cobas TaqScreen MPX teszttel. A plazma vörösvértest tartalma 10,0% (v/v) fölött zavarta a HBV, HCV, HIV-1 O csoport és ® HIV-2 kimutatásának szenzitivitását a cobas TaqScreen MPX teszttel.

30

Exogén zavaró anyagok Abnormálisan nagy koncentrációjú paracetamol (1324 µmol/l), acetil-szalicilsav (3,62 µmol/l), aszkorbinsav (342 µmol/l), atorvastatin (600 Eq/l), fluoxetin (11,2 µmol/l), ibuprofen (2425 µmol/l), loratadin (0,78 µmol/l), nadolol (3,88 µmol/l), naproxen (2170 µmol/l), paroxetin (3,04 µmol/l), fenilefrin HCl (491 µmol/l)és sertralin (1,96 µmol/l) tartalmú humán plazmamintákat vizsgáltak HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadásával és anélkül, minden vírus ® esetében a cobas TaqScreen MPX teszt 3X kimutatási határ hígítása mellett. Az exogén anyagok ® nem zavarják a cobas TaqScreen MPX teszt szenzitivitását, illetve specificitását. KLINIKAI ALKALMAZÁS Reaktivitás teljes vér donor populációban A cobas® TaqScreen MPX teszt klinikai specificitását véletlenszerűen kiválasztott véradási teljes vér mintákban vizsgálták három külső laboratóriumi helyszínen. A vizsgálatot mint a leadott egyéni vérből, mind egyéni véradások egyenlő részleteiből készített csoportosított mintákból elvégezték. Összesen ® 72 281 véradási vizsgálat alapján a cobas TaqScreen MPX teszt klinikai specificitása 99,98% (72 266/72 281; 95% CI = 99,97–99,99). A csoportosított formában vizsgált donorminták esetében a reaktív csoportokat visszabontották az eredményt okozó egyéni véradási minta további vizsgálatára. A klinikai specificitás vizsgálata során kiszűrtek egy olyan esetet, ahol a donor HBV DNS pozitívnak bizonyult, amit adott laboratórium jelenlegi vizsgálati módszereivel nem sikerült kimutatni. ® A csoportok összesített cobas TaqScreen MPX teszt eredménye alább látható a 15. táblázatban. 15. táblázat Csoportreaktivitás önkéntes véradóknál Kategória

Csoportok

Százalék

Vizsgált csoportok

10 090

100%

Nem reaktív csoportok

10 054

99,64%

Eredetileg reaktív csoportok

36

0,36%

Eredetileg reaktív csoportok pozitív donorstátusszal

23

0,23%

Pozitív csoportok a kiszűrt eset miatt

1

0,01%

Eredetileg reaktív csoportok negatív donorstátusszal (álpozitív)

12

0,12%

31

HIVATKOZÁSOK 1. Kahn JO, Walker BD. Current Concepts: acute human immunodeficiency virus type 1 infection. N Engl J Med. 1998; 339:33-39. 2. Department of Health and Human Services Centers for Disease Control and Prevention, National Center for HIV, STD and TB Prevention, Divisions of HIV/AIDS Prevention. Fact Sheet – Human Immunodeficiency Virus Type 2. Available at: http://www.cdc.gov/hiv/pubs/facts/hiv2.htm. Accessed June 30, 2005. 3. O'Brien TR. HIV-2 Transmission: implications for spread of HIV-1. JAMA. 1994; 271(12):903-904. 4. Choo Q-L, Weiner AJ, Overby LR, et al. Hepatitis C virus: the major causative agent of viral nonA, non-B hepatitis. Br Med Bull. 1990; 46(2):423-441. 5. Alter HJ. Descartes before the horse: I clone, therefore I am: the hepatitis C virus in current perspective. Ann Intern Med. 1991; 115(8):644-649. 6. Beasley RP. Hepatitis B virus as etiologic agent in hepatocellular carcinoma – epidemiological considerations. Hepatology. 1982; 2(suppl):21S-26S. 7. Feitelson M. Hepatitis B virus infection and primary hepatocellular carcinoma. Clin Microbiol Rev. 1992; 15:257-301. 8. Mast EE, Alter MJ. Epidemiology of viral hepatitis: an overview. Semin Virol. 1993; 4:273-283. 9. Zuckerman AJ. More than a third of the world's population has been infected with hepatitis B virus [letter]. BMJ. 1999; 318:1213. 10. Maddrey WC. Hepatitis B: an important public health issue. J Med Virol. 2000; 61:362-366. 11. Murthy KK, Henrard DR, Eichberg JW, et al. Redefining the HIV-infectious window period in the chimpanzee model: evidence to suggest that viral nucleic acid testing can prevent blood-borne transmission. Transfusion. 1999; 39:688-693. 12. Stramer SL, Glynn SA, Kleinman SH, et al. Detection of HIV-1 and HCV infections among antibody-negative blood donors by nucleic acid-amplification testing. N Engl J Med. 2004; 351:760-768. 13. Busch MP, Glynn SA, Stramer SL, et al. A new strategy for estimating risks of transfusiontransmitted viral infections based on rates of detection of recently infected donors. Transfusion. 2005; 45:254-264. 14. Offergeld R, Faensen D, Ritter S, Hamouda O. Human immunodeficiency virus, hepatitis C and hepatitis B infections among blood donors in Germany 2000-2002: risk of virus transmission and the impact of nucleic acid amplification testing. Euro Surveill. 2005; 10(2):8-11. 15. Hitzler WE, Runkel S. Routine HCV PCR screening of blood donations to identify early HCV infection in blood donors lacking antibodies to HCV. Transfusion. 2001; 41:333-337. 16. Roth WK, Weber M, Petersen D, et al. NAT for HBV and anti-HBc testing increase blood safety. Transfusion. 2002; 42:869-875. 17. Biswas R, Tabor E, Hsia CC, et al. Comparative sensitivity of HBV NATs and HBsAg assays for detection of acute HBV infection. Transfusion. 2003; 43:788-798. 18. Minegishi K, Yoshikawa A, Kishimoto S, et al. Superiority of minipool nucleic acid amplification technology for hepatitis B virus over chemiluminescence immunoassay for hepatitis B surface antigen screening. Vox Sang. 2003; 84:287-291. 19. Kleinman SH, Strong DM, Tegtmeier GE, et al. Hepatitis B virus (HBV) DNA screening of blood donations in minipools with the COBAS® AmpliScreen HBV test. Transfusion. 2005; 45:12471257.

32

20. Busch MP, Lee LL, Satten GA, et al. Time course of detection of viral and serologic markers preceding human immunodeficiency type 1 seroconversion: implications for screening blood and tissue donors. Transfusion. 1995; 35:91-97. 21. Yoshikawa A, Gotanda Y, Itabashi M, et al. Hepatitis B NAT virus-positive blood donors in the early and late stages of HBV infection: analyses of the window period and kinetics of HBV DNA. Vox Sang. 2005; 88:77-86. 22. Longo MC, Berninger MS, Hartley JL. Use of uracil DNA glycosylase to control carry-over contamination in polymerase chain reactions. Gene. 1990; 93:125-128. 23. Savva R, McAuley-Hecht K, Brown T, Pearl L. The structural basis of specific base-excision repair by uracil-DNA glycosylase. Nature. 1995; 373:487-493. 24. Mol CD, Arvai AS, Slupphaug G, et al. Crystal structure and mutational analysis of human uracilDNA glycosylase: structural basis for specificity and catalysis. Cell. 1995; 80:869-878. 25. Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith, R. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. Biotechnology (NY). 1992; 10:413-417. 26. Heid CA, Stevens J, Livak JK, Williams PM. Real time quantitative PCR. Genome Res. 1996; 6:986-994. 27. Richmond JY, McKinney RW, eds. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication Number (CDC) 99-8395, 1999. 28. Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline – Third Edition. CLSI Document M29-A3 Wayne, PA:CLSI, 2005. 29. International Air Transport Association. Dangerous Goods Regulations. 41st ed. Quebec, Canada. 2000. 30. Saldanha, W. Gerlich, N. Lelie, P. Dawson, K. Heermann, A. Heath & The WHO Collaborative Study Group: An international collaborative study to establish a World Health Organization international standard for hepatitis B virus DNA nucleic acid amplification techniques. Vox Sang. 2001; 80:63-71. 31. J Saldanha, A Heath, C Aberham, J Albrecht, G Gentili, M Gessner and G Pisani: WHO Collaborative Study to Establish a Replacement WHO International Standard for HCV RNA NAT Assays. WHO/BS/03.1958 Expert Committee on Biological Standardization, Geneva, 17 to 21 February 2003.

33

Roche Molecular Systems, Inc., Branchburg, NJ 08876 USA A Roche csoport tagja

Roche Diagnostics Indianapolis, IN 46256 USA (For Technical Assistance call the Roche Response Center toll-free: 1-800 526 1247)

Roche Diagnostics H7V 4A2 Laval, Quebec (For Technical Assistance call: Pour toute assistance technique, appeler le: 1-877 273 3433)

Roche Diagnostics (Schweiz) AG CH-6343 Rotkreuz

Roche Diagnostics F-38240 Meylan

Roche Diagnostics GmbH D-68298 Mannheim, Germany

Distributore in Italia: Roche Diagnostics SpA Piazza Durante 11 I-20131 Milano

Roche Diagnostics S.L. E-08006 Barcelona

Distribuidor em Portugal: Roche Farmacêutica Química, Lda P-2700 Amadora

A ROCHE, COBAS, COBAS S, TAQMAN, TAQSCREEN, AMPLISCREEN, AMPLICOR, AMPLILINK, AMPERASE, HIGH PURE és AMPLIPREP a Roche védjegye. A ROCHE RESPONSE CENTER a Roche szolgáltatási védjegye. ®

A Microlab a Hamilton Company bejegyzett védjegye. Az armored RNS az Ambion, Inc. és Cenetron Diagnostics, LLC által fejlesztett, szabadalommal védett technológia. #5,677,124, #5,919,625 és #5,939,262 U.S. szabadalmak, valamint a folyamatban lévő szabadalmak. Az armored RNS az Ambion és a Cenetron bejegyzett védjegye. ®

A ProClin a Rohm and Haas Company bejegyzett védjegye. TM

A Microcide SQ

a Global Biotechnologies, Inc. bejegyzett védjegye.

®

A PRISM az Abbott Diagnostics bejegyzett védjegye. ®

Az ORTHO az Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. bejegyzett védjegye. A termékben található cianin festékeket a GE Healthcare Bio-Sciences Corp. és a Carnegie Mellon University szabadalmi jogai védik, és a Roche kizárólagos engedéllyel rendelkezik, hogy azokat a kutatásban és in vitro diagnosztikai rendszerek komponenseiként felhasználja. Az ilyen rendszereknek nem kutatási vagy nem in vitro diagnosztikai célú felhasználása a GE Healthcare BioSciences Corp., Piscataway, New Jersey, USA és a Carnegie Mellon University, Pittsburgh, Pennsylvania, USA további engedélyét kívánja meg. Copyright 2009, Roche Molecular Systems, Inc. Minden jog fenntartva. 2/2009 Doc Rev. 3.0

(04788397001-05ENGL) 05877717001-01

34