cobas TaqScreen MPX Test, version 2.0 for use on the cobas s 201 system

®

cobas TaqScreen MPX Test, version 2.0 for use on the cobas s 201 system IN VITRO DIAGNOSZTIKAI CÉLRA.

cobas® TaqScreen MPX Test, v2.0 cobas® TaqScreen MPX Control Kit, v2.0 cobas® TaqScreen Wash Reagent

MPX v2.0

96 Tests

P/N: 05969492 190

MPX CTL v2.0

6 Sets

P/N: 05965411 190

TS WR

5.1 L

P/N: 04404220 190

A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlettel végzett kadáver minták vizsgálatához a felhasználónak a fenti készleteken kívül a következő készletre is szüksége van: cobas® TaqScreen Cadaveric Specimen Diluent Kit CADV SPEC DIL 96 Tests

P/N: 05002125 190

FELHASZNÁLÁS MÓDJA A cobas® TaqScreen MPX Teszt, 2.0-s verzió (v2.0) a cobas s 201 rendszerrel való együttes használatra egy kvalitatív, in vitro vizsgálat az 1-es típusú, M csoportú humán immundeficiencia vírus (HIV-1) RNS, az O csoportú HIV-1 RNS, a 2-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-2) RNS, a hepatitis C vírus (HCV) RNS és a hepatitis B vírus (HBV) DNS direkt kimutatására humán plazmából. A vizsgálat célja donorminták szűrése HIV-1 M csoport RNS, HIV-1 O csoport RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS kimutatására egyéni humán donorok plazmamintáiból, beleértve a teljes vér és véralkotórészek (vörösvértest, vérlemezke és plazma) donorait és egyéb élő donorokat. A vizsgálat használható továbbá szerv- és szövetdonorok szűrésére is, amennyiben a mintákat akkor vették le, amikor a donor szíve még dobogott, valamint kadáver (nincs szívműködés) szerv- és szövetdonoroktól származó vérminták alapján. A szűrés során az összes donortól származó plazmát egyéni mintaként kell kezelni. Teljes vér és véralkotórészek donorainak esetében a plazmaminták vizsgálhatóak külön-külön, illetve egyéni minták részleteiből álló csoportokba gyűjtve, a HIV-, HCV- és HBV-szerológiával egybekötve. Egyéni minta esetén a vizsgálat párhuzamosan kimutatott, de külön eredményt ad HIV, HCV és HBV vírusokra. A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt olyan kiegészítő tesztnek tekinthető, amely igazolja az olyan minták HIV-fertőzöttségét, amelyek ismételten reaktívnak bizonyulnak egy engedélyezett donorszűrő HIV-antitestvizsgálaton, és reaktívak a cobas® TaqScreen MPX v2.0 tesztben. A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt olyan kiegészítő tesztnek tekinthető, amely igazolja az olyan minták HCV-fertőzöttségét, amelyek ismételten reaktívnak bizonyulnak egy engedélyezett donorszűrő HCV-antitestvizsgálaton, és reaktívak a cobas® TaqScreen MPX v2.0 tesztben. A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt olyan kiegészítő tesztnek tekinthető, amely igazolja az olyan minták HBV-fertőzöttségét, amelyek ismételten reaktívnak bizonyulnak egy engedélyezett donorszűrő Hepatitis B felületi antigénvizsgálaton, és reaktívak a cobas® TaqScreen MPX v2.0 tesztben. Ez a vizsgálat nem a HIV-, HCV- vagy HBV-fertőzés diagnosztizálásának elősegítésére való.

A Dokumentum verzióinformációi rész a dokumentum végén található. 06327052001-04HU 1

Doc Rev. 4.0

A VIZSGÁLAT ÖSSZEGZÉSE ÉS MAGYARÁZATA A vér és véralkotórészek transzfúziója során lényeges problémát jelentenek a vírusfertőzések, különösen az 1-es és 2-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV-1, HIV-2), hepatitis C vírus (HCV) és hepatitis B vírus (HBV) esetleges átvitele. Ezen ágensek átvitele elsősorban fertőzött vér vagy vér- és plazmakészítmények, bizonyos szövetek vagy testfolyadékok által, nemi érintkezés során, illetve fertőzött anyáról újszülöttre lehetséges. A HIV-1 az egész világon elterjedt, becsült előfordulási gyakorisága világszerte 1,1% (0,56% ÉszakAmerikában és 0,25% Nyugat-Európában). A HIV-1 fertőzött személyek a fertőzéstől számított 3-6 héten belül rövid, kezdetben akut, influenzaszerű megbetegedést tapasztalhatnak, amelyhez a perifériás vérben magas szintű virémia társul.1 Jelenleg a HIV-1 három fő genetikai csoportja ismert: M csoport (main, fő), N csoport (nem-M-nem-O) és O csoport (outlier, kívülálló). Az M csoport igen elterjedt, és 9 szubtípusba, valamint számos cirkuláló rekombináns formába (CRF) sorolható.2 A HIV-2-t 1986-ban izolálták először nyugat-afrikai betegekből. Mind a HIV-1, mind a HIV-2 azonos módokon vihető át, és hasonló opportunista fertőzésekkel, valamint szerzett immunhiányos tünetegyüttes (Acquired Immunodeficiency Syndrome - AIDS) kialakulásával társul.3 A HIV-2 elterjedése egyes afrikai népek körében több, mint 1%-ra tehető, és a HIV-2 Európa bizonyos részein és Indiában is növekvő problémát jelent.4 A HCV-t tartják a poszttranszfúziós non-A, non-B hepatitis esetek 90%–95%-áért felelős fő fertőző ágensnek.5,6 A HCV világszerte előfordul, de incidenciája a fertőzés általános tünetmentessége miatt kevéssé ismert. Akárhogy is, a jelentett elterjedése a nyugat-európai 0,5–2,0% és az egyiptomi 20% között változik. A ma élő emberek közül több, mint 2 milliárdan fertőződtek életük folyamán valamikor HBV-vel. Közülük világszerte nagyjából 350 millióan maradtak krónikus fertőzöttek, és váltak vírushordozóvá.7-11 A világ népességének háromnegyede él magas átfertőzöttségű területeken. Évente több, mint 4 millió akut klinikai HBV eset fordul elő. A szerológiai szűrővizsgálatok jelentősen csökkentették, de nem számolták fel a vírusfertőzések vér és vérkészítmények transzfúziójával történő átvitelének kockázatát. A donoroktól levett teljes vér és plazma HBV szűrését az 1970-es évek elején kezdték meg HBsAg vizsgálattal, és az 1980-as években anti-HBc vizsgálattal. A HBV-szűrésen kívül rutinszerűen végzik a vér és plazma HIV-1, HIV-2 és anti-HCV szűrését enzim immunoassay (EIA) vizsgálatokkal. A transzfúziós készítmények fertőző ágensekre történő magasabb szintű szűrésére támasztott közigény előmozdította a nukleinsav-vizsgálati (nucleic 12-14 acid test, NAT) technológiák fejlődését. Klinikai vizsgálatok szerint a vírusnukleinsavak (HIV-1 RNS, HCV RNS5,13-16 és HBV DNS17-20) kimutatása tovább csökkentheti az ágensek ablakperiódus alatti véradásból eredő átviteli kockázatát. Az ablakperiódust átlagosan 22 napra becsülik, de a HIV-1 esetében akár 6 hónap is lehet.21 A HIV-1 kis csoportos minta (mini-pool) NAT vizsgálat kivitelezésével a fertőző ablakperiódus jelentősen lerövidíthető, így a HIV-1 átvitelének jelenlegi kockázatát hozzávetőleg 2 millió véradásból 1-re becsülik.13-15 Hasonlóan, a HCV RNS NAT bevezetése az antitestnegatív ablakperiódust körülbelül 60 nappal csökkentette13-16, a jelenlegi becsült kockázat hozzávetőleg 1 millió véradásból 1–2. A HBV DNS NAT szűrését egyre több helyen alkalmazzák. Az alacsony, közepes és magas HBV prevalenciájú országokban végzett klinikai vizsgálatok megmutatták a NAT eredményességét az ablakperiódus és késői HBV-fertőzött donorok esetében, és bebizonyították a HBV transzfúziós átviteli esélyének csökkenését.15,19,20,22,23 A többszörös target vizsgálatok hatásfokának javítása érdekében a többféle vírus egyidejű kimutatására egy multiplex (MPX) polimeráz láncreakciót (PCR) fejlesztettek ki. A MPX PCR folyamán egy reakciócsőben egynél több targetszekvencia amplifikálása és kimutatása zajlik többféle primerpár és próba segítségével. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 egy kvalitatív multiplex vizsgálat, amely lehetővé teszi a HIV RNS, HCV RNS és HBV DNS, illetve a belső kontroll egyidejű kimutatását és megkülönböztetését egyetlen vizsgálatban fertőzött csoportos és egyéni plazmamintákból. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 általános nukleinsav-előkészítési eljárást alkalmaz a COBAS® AmpliPrep készüléken. A HIV RNS (HIV-1 M és O csoport RNS, HIV-2 RNS), HCV RNS és HBV DNS amplifikációja, kimutatása és megkülönböztetése automatizált, valós idejű PCR eljárással történik a COBAS® TaqMan® Analizátoron. A vizsgálat nem tesz különbséget a HIV-1 M csoport, a HIV-1 O csoport és a HIV-2 között. Az eljárás egy belső kontrollt is magába foglal a teljesítmény monitorozására minden egyes vizsgálat során, és a megelőzően amplifikált anyag (amplikon) által okozott potenciális szennyezés csökkentésére AmpErase enzimet alkalmaz. HIV-1 O csoport és HIV-2 megkülönböztetésére alkalmas teszt nem áll rendelkezésre a Roche-tól. 06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 2

AZ ELJÁRÁS ALAPELVEI A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 cobas s 201 rendszeren való használatra 4 fő eljáráson alapul: 1. Automatizált mintacsoportosítás/pipettázás és kontroll pipettázás az opcionális Hamilton MICROLAB® STAR/STARlet IVD pipettorral 2. Automatizált minta-előkészítés a COBAS® AmpliPrep készülékkel 3. Nukleinsavak automatizált amplifikációja és PCR termékek valósidejű kimutatása és megkülönböztetése a COBAS® TaqMan® Analizátorral 4. Automatizált adatkezelés a csoportosító és adatkezelő (Pooling and Data Management, PDM) szoftverrel Automatizált mintacsoportosítás és pipettázás a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral A Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor a cobas s 201 rendszer részeként automatizálja a csoportok és egyéni donorminták pipettázását, a részletek átvitelét mély lyukú lemezekre (opcionális) és a vizsgálati kontrollok pipettázását. A cobas s 201 rendszer donor csoportok vizsgálatára, valamint a reaktív csoportok megerősítő vizsgálatára használatos, hogy azonosítsa a reaktív egyéni donormintákat. A cobas s 201 rendszert a minták tételekben történő feldolgozására tervezték. Egy tétel meghatározása a minták és kontrollok olyan gyűjteménye, amelyek pipettázása, kivonása, amplifikációja és kimutatása egyszerre zajlik. Miután a tétel pipettázása megtörtént a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral, a tétel a COBAS® AmpliPrep készülékbe kerül az eljárás következő fázisának elvégzésére. A kézzel pipettázott minták közvetlenül a COBAS® AmpliPrep készülékbe tölthetők, a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor előzetes használata nélkül. Megjegyzés:

Kadáver minták vizsgálatakor a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor alkalmazását megelőzően el kell végezni a minták 1:5 arányú manuális hígítását a cobas® TaqScreen kadáver minta oldószerben (CADV SPEC DIL).

Automatizált minta-előkészítés a COBAS® AmpliPrep készülékkel A targetből és a hozzáadott Armored RNA belső kontroll (internal control, IC) molekulákból (amelyek a minta-előkészítési és amplifikációs/kimutatási eljárás során kontrollként szolgálnak) származó nukleinsavak feldolgozása egyszerre zajlik. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 reagensei segítségével öt egymást követő lépés megy végbe a COBAS® AmpliPrep készüléken. A proteinázoldat a fehérjék emésztésével elősegíti a lízist, inaktiválja a nukleázokat és lehetővé teszi az RNS és DNS felszabadítását a vírusrészecskékből. A lízisreagens hozzáadása a vírusok lízisét és a nukleázok inaktiválását eredményezi a fehérjék denaturálása által a mintában. Az RNS és DNS felszabadul és egyidejűleg védve van a nukleázok hatásától. A felszabadult nukleinsavak a hozzáadott mágneses üvegpartikulumok szilikonfelületéhez kötnek. Ez elsősorban az üvegpartikulumok felszínének nettó pozitív töltése és a nukleinsavak nettó negatív töltése miatt következik be a kaotróp sókoncentráció alatt és a lízisreakció ionerőssége miatt. A mosóreagens eltávolítja a nem kötött anyagokat és a szennyeződéseket, mint denaturált fehérjék, sejttörmelék és lehetséges PCR inhibitorok (például hemoglobin stb.), valamint csökkenti a sókoncentrációt. A mágneses üvegpartikulumokról a tisztított nukleinsavakat emelt hőmérsékleten az eluáló puffer szabadítja fel. Nukleinsavak automatizált amplifikációja a COBAS® TaqMan® analizátor segítségével Az automatizált minta-előkészítés során, a tisztított nukleinsavak humán plazmából történő izolálását követően, a HIV (HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport és HIV-2) és HCV RNS, HBV DNS és IC RNS amplifikálása, kimutatása és megkülönböztetése a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 Master Mix (MPX2 MMX) segítségével történik. A mangán-acetátos aktiválást követően a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 master mix lehetővé teszi az RNS targetek reverz transzkripcióját, majd ezt követően a HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2 és HCV RNS, HBV DNS és IC RNS nagyfokban konzervált régióinak PCR amplifikációját specifikus primerekkel. Az amplifikált nukleinsavak párhuzamos kimutatása a master mixben ugyancsak jelenlevő HIV-1 (M és O csoport), HIV-2, HCV, HBV és IC próbák 5'-nukleolitikus bontása során keletkező fluoreszcens jelek segítségével megy végbe. Négy egyedi fluoreszcens festék használatos: egyik festék az IC próbát jelöli, a másik három pedig a HIV, HCV és HBV próbákat, lehetővé téve ezáltal a HIV, HCV és HBV targetek és az IC független azonosítását. A rendszer mindhárom HIV target azonosításához ugyanazt a festéket használja, így azokat nem különbözteti meg egymástól.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 3

Reverz transzkripció és PCR-amplifikálás A reverz transzkripciós és amplifikációs reakciókat egy hőstabil rekombináns enzim, a Z05D DNS-polimeráz végzi. Mangán (Mn2+) jelenlétében a Z05D DNS-polimeráz reverz transzkriptáz és DNSpolimeráz aktivitással rendelkezik. Ez lehetővé teszi a reverz transzkripció és a PCR-amplifikálás megtörténését ugyanazon reakcióelegyben. A PCR-amplifikálás a Z05D DNS-polimeráz segítségével megy végbe, amely a targettemplátok mentén meghosszabbítja a kapcsolódott primereket és dupla szálú DNS-t (amplikon) hoz létre. Ez a folyamat sok cikluson keresztül ismétlődik, és az amplikon DNS mennyisége minden ciklus során megduplázódik. Az targetgenomok amplifikálása csak a primerek közötti régiókban zajlik; a teljes genom nem amplifikálódik. Szelektív amplifikálás A mintában található targetnukleinsav szelektív amplifikálását a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 az AmpErase (uracil-N-glikoziláz) enzim és dezoxiuridin-trifoszfát (dUTP) használatával hajtja végre. Az AmpErase enzim felismeri és katalizálja az olyan DNS-szálak lebontását, amelyek dezoxiuridint tartalmaznak24, a dezoxitimidint tartalmazó DNS-ét és a ribouridint tartalmazó RNS-ét viszont nem.25,26 A dezoxiuridin a természetes DNS-ben nincs jelen, ugyanakkor az amplikonban mindig megtalálható, miután az MPX2 master mix reagens a dNTP-k egyikeként dezoxiuridin-trifoszfátot használ; így csak az amplikon tartalmaz dezoxiuridint. A dezoxiuridinnak köszönhetően a szennyező amplikont az AmpErase enzim még a target DNS amplifikálását megelőzően lebontja. Az AmpErase enzim lebont továbbá minden olyan nem specifikus terméket, amely a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 master mix kezdeti, mangán okozta aktiválódása után képződik. Az MPX2 master mix reagensben lévő AmpErase enzim katalizálja a dezoxiuridint tartalmazó DNS hasítását a dezoxiuridin-csoportoknál úgy, hogy a dezoxiribózlánc felnyílását okozza a C1 helyen. Az első hevítési lépésben az amplikon DNS-lánc eltörik a dezoxiuridin helyén, tehát a DNS nem lesz amplifikálható. Az AmpErase enzim, ha egyszer 55 °C feletti hőmérsékletnek lett kitéve, hosszabb ideig inaktív marad, ezért nem semmisíti meg a PCR után képződött targetamplikont. A PCR-termékek valósidejű automatizált kimutatása a COBAS® TaqMan® Analizátor segítségével A PCR-amplifikálás ciklusai során a váltakozó magas hőmérsékleten a target- és IC-amplikon denaturálódik, és egyszálú DNS-molekula keletkezik. A specifikus kimutatási oligonukleotid próbák az amplifikált DNS egyszálú molekuláihoz hibridizálnak. Az amplifikálás, hibridizáció és kimutatás egymással egyidőben zajlik. A PCR-termékek kimutatása27,28 A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 master mix a HIV-1 (M és O csoport), HIV-2, HCV, HBV, illetve IC nukleinsavra specifikus kimutatási próbákat tartalmaz. A HIV, HCV, HBV és IC kimutatási próbák mindegyike jelölve van 1) a négy közül egy, jelzőfestékként viselkedő, és 2) egy másik, blokkolófestékként viselkedő fluoreszcens festékkel. Három egyedi jelzőfesték a HIV-, HCV- vagy HBV-specifikus próbákhoz kapcsolódik, és mérésük adott hullámhosszakon történik. Egy negyedik jelzőfesték pedig az IC-specifikus próbához kapcsolódik, és mérése egy eltérő hullámhosszon történik. Minden próba esetében egyféle blokkolófesték használatos. Ez a rendszer lehetővé teszi az amplifikált HIV-, HCV- és HBV-targetek és az IC egyidejű kimutatását és megkülönböztetését négy hullámhosszon. A PCR-amplifikálás kezdete előtt a próbák még érintetlenek, és a blokkoló festék a jelzőfesték fluoreszcenciáját Förster-típusú energiatranszfer-effektus révén gátolja. A PCR-amplifikálás során a próbák a specifikus, egyszálú DNS-szekvenciákhoz hibridizálnak, amit az amplifikálással egyidőben a Z05D DNS-polimeráz 5'–3' nukleáz aktivitása révén hasít. Amint a hasítás következtében a jelző- és a gátlófesték elválik, a jelzőfesték fluoreszcens aktivitásának gátlása megszűnik. Minden egyes PCRciklus során megnő a hasított próbák mennyisége, és ennek velejárójaként növekszik a jelzőfestékből származó jel összesített nagysága is. A PCR-termékek valós idejű kimutatása és megkülönböztetése a felszabadult, vírustargeteket és IC-t reprezentáló jelzőfestékek fluoreszcencenciájának mérésével megy végbe.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 4

Automatizált adatkezelés a PDM szoftver segítségével A Roche PDM szoftver lehetővé teszi, hogy a felhasználó áttekintse az eredményeket és jelentést készítsen. A Roche PDM szoftver minden vizsgálati eredményt nem reaktív, reaktív vagy érvénytelen jelöléssel lát el. A PCR-eredmények lekérésén és vizsgálatán felül a Roche PDM szoftver lehetővé teszi, hogy az üzemeltető a jelentéseket visszakeresés és tanulmányozás céljából kinyomtassa, az eredmények között keressen, a donoreredményeket elfogadja, illetve egy LIS kiszolgálóra továbbítsa. A ROCHE ÁLTAL BIZTOSÍTOTT ANYAGOK A HIV-1 (M és O csoport), HIV-2, valamint HCV RNS és HBV DNS plazmamintákból való kimutatásához három készlet szükséges: 1) cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0, 2) cobas® TaqScreen MPX kontrollkészlet, v2.0 és 3) cobas® TaqScreen mosóreagens. A biztonsági adatlapok (SDS) igény esetén hozzáférhetőek a helyi Roche irodában. cobas® TaqScreen MPX Test, v2.0 (P/N: 05969492 190)

MPX v2.0

96 teszt

MPX2 CS1 (MPX mágneses üvegpartikulum reagenskazetta) MPX2 CS2 (MPX lízis reagenskazetta) MPX2 CS3 (MPX multireagens kazetta) MPX2 CS4 (MPX tesztspecifikus reagenskazetta) ® cobas TaqScreen MPX Control Kit, v2.0 cobas® TaqScreen MPX kontrollkészlet, v2.0 (P/N: 05965411 190)

6 készlet

MPX CTL v2.0

MPX M(+)C, v2.0 (cobas® TaqScreen MPX multi-pozitív kontroll, v2.0) (HIV-1 M pozitív kontroll) (HBV pozitív kontroll) (HCV pozitív kontroll) MPX O(+)C, v2.0 (cobas® TaqScreen MPX HIV-1 O pozitív kontroll, v2.0) MPX 2(+)C, v2.0 (cobas® TaqScreen MPX HIV-2 pozitív kontroll, v2.0) MPX (–) C, v2.0 (cobas® TaqScreen MPX negatív kontroll, v2.0) cobas® TaqScreen Wash Reagent cobas® TaqScreen mosóreagens (P/N: 04404220 190)

TS WR

5,1 l

TS WR (cobas® TaqScreen mosóreagens) Megjegyzés:

A HIV-1 M csoport RNS, HIV-1 O csoport RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS kimutatásához kadáver mintából a fent említett készleteken kívül a következő készlet szükséges és biztosított: cobas® TaqScreen kadáver minta oldószer.

cobas® TaqScreen Cadaveric Specimen Diluent Kit cobas® TaqScreen kadáver minta oldószer készlet (P/N: 05002125 190)

CADV SPEC DIL

96 teszt

CADV SPEC DIL (cobas® TaqScreen kadáver minta oldószer) 06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 5

EGYÉB SZÜKSÉGES, DE KÜLÖN ÁRUSÍTOTT ANYAGOK (A Roche-tól külön vásárolható) A vizsgálatot a cobas s 201 rendszeren kell végezni. A cobas s 201 rendszert egy Roche Diagnostics területi szerviz képviselőnek kell telepítenie, és egy komplett rendszer-konfigurációként kell azt használni. A cobas s 201 rendszer egyes komponensei nem használhatóak különálló készülékekként, és más komponensek sem helyettesíthetőek. A cobas s 201 rendszer az alábbi komponenseket használja. További részletekért kérjük, tanulmányozza a Termékinformáció kártyát. Műszerezettség és szoftver a cobas s 201 rendszerhez ·

Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor, Pooling Manager munkaállomás és szoftver (opcionális)

·

COBAS® AmpliPrep készülék

·

COBAS® TaqMan® Analizátor

·

Dokkoló állomás (opcionális)

·

AMPLILINK adatállomás és szoftver

·

Roche PDM szerver, adatkezelő munkaállomás és szoftver

·

Vizsgálatdefiníciós fájl a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0-hoz

·

cobas s 201 konfigurációs fájl az AMPLILINK szoftverhez

Állványok és egyszer használatos anyagok ·

COBAS® AmpliPrep mintaállványok (SK24) (P/N: 28122172001)

·

COBAS® AmpliPrep SPU-állványok (P/N: 05471664001)

·

COBAS® AmpliPrep reagensállványok (P/N: 28122199001)

·

Mintafeldolgozó egységek (SPU): (P/N: 03755525001)

·

Mintabeviteli csövek (S-csövek) vonalkódklipszekkel (P/N: 03137040001)

·

K-hegy állványok (P/N: 03287343001)

·

K-cső doboz 12 x 96 (P/N: 03137082001)

·

COBAS® TaqMan® K-hordozó (P/N: 28150397001)

·

Nagy térfogatú CO-RE hegyek (1000 µl), filter (P/N: 04639642001)

·

Mély lyukú lemezek vonalkódcímkékkel (P/N: 04639634001)

·

Mély lyukú lemezek zárótetejei (P/N: 04789288001)

·

Mintahordozó 24 vizsgálati cső számára (P/N: 04639502001)

·

Mintahordozó 32 vizsgálati cső számára (P/N: 04639529001)

·

Hegyhordozó (P/N: 04639545001)

·

Mély lyukú lemez hordozó (P/N: 04639553001)

·

SK24 állványhordozó (P/N: 04639600001)

·

Hamilton fertőtlenítő spray készlet (P/N: 06254250001)

·

Hamilton MICROLAB detergens készlet (P/N: 06254268001)

·

Egyszer használatos kesztyűk, púdermentes

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 6

REAGENSEK cobas® TaqScreen MPX Test, v2.0 (P/N: 05969492 190)

MPX v2.0

MPX2 CS1 MGP (mágneses üvegpartikulumok) mágneses üvegpartikulumok 93% izopropanol Xi

96 teszt 2 x 48 teszt 2 x 7,0 ml

93% (w/w) izopropanol

Irritatív F

93% (w/w) izopropanol

Tűzveszélyes MPX2 CS2 LYS (lízisreagens) nátrium-citrát-dihidrát 42,5% guanidin-tiocianát < 14% polidokanol 0,9% ditiotreitol Xn

2 x 48 teszt 2 x 78 ml

42,5% (w/w) guanidin-tiocianát

Ártalmas MPX2 CS3 Pase (proteináz oldat) trisz puffer < 0,05% EDTA kalcium-klorid kalcium-acetát < 7,8% proteináz glicerin Xn

2 x 48 teszt 2 x 3,8 ml

< 7,8% (w/w) proteináz

Ártalmas EB (eluáló puffer) trisz puffer EDTA 0,09% nátrium-azid < 0,002% poli-rA RNS (szintetikus)

2 x 7,0 ml

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 7

MPX2 CS4 MPX v2.0 MMX-R1 (MPX v2.0 master mix reagens 1) kálium-acetát mangán-acetát glicerin 14,4% dimetil-szulfoxid 0,08% nátrium-azid ecetsav

2 x 48 teszt 2 x 3,0 ml

MPX MMX-R2, v2.0 (MPX master mix reagens 2, v2.0) tricin puffer kálium-klorid kálium-hidroxid 6% dimetil-szulfoxid glicerin EDTA Tween 20 Igepal CA630 < 0,12% dATP, dGTP, dCTP, dUTP < 0,01% upstream és downstream HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV, HBV és belső kontroll primerek < 0,01% fluoreszcens-jelölt HIV-1, HIV-2, HCV, HBV próbák < 0,01% fluoreszcens-jelölt belső kontroll próba < 0,01% oligonukleotid aptamer < 0,01% Z05D DNS-polimeráz (mikrobiális) < 0,01% AmpErase (uracil-N-glikoziláz) enzim (mikrobiális) 0,09% nátrium-azid

2 x 2,5 ml

MPX IC, v2.0 (MPX belső kontroll, v2.0) trisz puffer < 0,002% poli-rA RNS (szintetikus) EDTA 0,05% nátrium-azid < 0,001% nem fertőző, szintetikus belső kontroll RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva

2 x 8,0 ml

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 8

cobas® TaqScreen MPX Control Kit, v2.0 cobas® TaqScreen MPX kontrollkészlet, v2.0 (P/N: 05965411 190)

MPX CTL v2.0

6 szett

MPX M(+)C, v2.0 (cobas® TaqScreen MPX multi-pozitív kontroll, v2.0) < 0,001% nem fertőző, szintetikus HIV-1 M csoport RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva < 0,001% nem fertőző, szintetikus HBV DNS, lambda bakteriofág burokfehérjébe csomagolva < 0,001% nem fertőző, szintetikus HCV RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre, HBsAg-re, HBcAg-re és HIV p24 Ag-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki 0,1% ProClin® 300 tartósítószer Xi 5-klór-2-metil-4-izotiazolin-3-on és 2-metil-4-izotiazolin-3-on (3:1) arányú keveréke

6 x 1,6 ml

Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat (szenzibilizáló hatású lehet). S24: A bőrrel való érintkezés kerülendő. S37: Megfelelő védőkesztyűt kell viselni. MPX O(+)C, v2.0 (cobas® TaqScreen MPX HIV-1 O pozitív kontroll, v2.0) < 0,001% nem fertőző, szintetikus HIV-1 O csoport RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre, HBsAg-re, HBcAg-re és HIV p24 Ag-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki 0,1% ProClin® 300 tartósítószer Xi 5-klór-2-metil-4-izotiazolin-3-on és 2-metil-4-izotiazolin-3-on (3:1) arányú keveréke

6 x 1,6 ml

Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat (szenzibilizáló hatású lehet). S24: A bőrrel való érintkezés kerülendő. S37: Megfelelő védőkesztyűt kell viselni.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 9

MPX 2(+)C, v2.0 (cobas® TaqScreen MPX HIV-2 pozitív kontroll, v2.0) < 0,001% nem fertőző, szintetikus HIV-2 RNS, MS2 bakteriofág burokfehérjébe csomagolva Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre, HBsAg-re, HBcAg-re és HIV p24 Ag-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki 0,1% ProClin® 300 tartósítószer Xi 5-klór-2-metil-4-izotiazolin-3-on és 2-metil-4-izotiazolin-3-on (3:1) arányú keveréke

6 x 1,6 ml

Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat (szenzibilizáló hatású lehet). S24: A bőrrel való érintkezés kerülendő. S37: Megfelelő védőkesztyűt kell viselni. MPX (–) C, v2.0 (cobas® TaqScreen MPX negatív kontroll, v2.0) Negatív humán plazma, engedélyezett tesztek alapján nem reaktív HCV antitestre, HIV-1/2 antitestre, HBsAg-re, HBcAg-re és HIV p24 Ag-re; HIV-1 RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS PCR-technikákkal nem mutatható ki 0,1% ProClin® 300 tartósítószer Xi

6 x 1,6 ml

5-klór-2-metil-4-izotiazolin-3-on és 2-metil-4-izotiazolin-3-on (3:1) arányú keveréke

Irritatív R43: Bőrrel érintkezve túlérzékenységet okozhat (szenzibilizáló hatású lehet). S24: A bőrrel való érintkezés kerülendő. S37: Megfelelő védőkesztyűt kell viselni. cobas® TaqScreen Wash Reagent cobas® TaqScreen mosóreagens (P/N: 04404220 190)

TS WR

5,1 l

TS WR (cobas® TaqScreen mosóreagens) nátrium-citrát-dihidrát 0,1% metilparabén tartósítószer cobas® TaqScreen Cadaveric Specimen Diluent Kit cobas® TaqScreen kadáver minta oldószer készlet (P/N: 05002125 190) CADV SPEC DIL (cobas® TaqScreen kadáver minta oldószer) EDTA

CADV SPEC DIL

96 teszt

4 x 100 ml

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 10

TÁROLÁSI ÉS KEZELÉSI KÖVETELMÉNYEK A. A szobahőmérséklet meghatározása 15–30 °C. B. A reagenseket és kontrollokat ne fagyassza le. C. Az MPX2 CS1, MPX2 CS2, MPX2 CS3 és MPX2 CS4 reagenseket 2–8 °C között tárolja. Használaton kívül ezek a reagensek a feltüntetett lejárati időn belül stabilak. D. Felbontást követően a reagensek 2–8 °C-on 20 napig stabilak (vagy a lejárati dátumig, amelyik előbb következik). E. A reagenseket a COBAS® AmpliPrep készüléken legfeljebb 5 vizsgálati futtatás alakalmával és legfeljebb 40 összesített órán át lehet felhasználni. A futtatások között a reagenseket 2 és 8 °C között tárolja. Az AMPLILINK szoftver ellenőrzi a reagenskazetták COBAS® AmpliPrep készülékben töltött összesített idejét, és meggátolja a kazetták felhasználását a 40. összesített óra elérése után. F. A COBAS® AmpliPrep készülékben a reagensek egyhuzamban összesen 24 órán keresztül maradnak stabilak. Az AMPLILINK szoftver nem ellenőrzi a reagenskazetták COBAS® AmpliPrep készülékben töltött folyamatos idejét, sem a kazettákat felhasználó gépi ciklusok számát. A felhasználó felelőssége, hogy a 24 folyamatos óra vagy 5 gépi ciklus elérése után eldobja a reagenskazettákat. G. Az MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0, MPX 2(+)C, v2.0 és MPX (–) C, v2.0 reagenseket 2–8 °C között tárolja. A kontrollok a feltüntetett lejárati időn belül stabilak. Felbontást követően a fel nem használt részt ki kell dobni. H. A TS WR reagenst 15–30 °C között tárolja. Felbontás nélkül a TS WR reagens a feltüntetett lejárati időn belül stabil. Felbontást követően ez a reagens 15–30 °C között 30 napig stabil (vagy a lejárati dátumig, amelyik előbb következik). I.

A megbontatlan CADV SPEC DIL oldószert 15–30 °C között tárolja. Felbontás nélkül a CADV SPEC DIL a feltüntetett lejárati időn belül stabil. Felbontást követően ez a reagens 2–8 °C között 30 napig, illetve a lejárati dátumig stabil, amelyik előbb következik.

ÓVINTÉZKEDÉSEK IN VITRO DIAGNOSZTIKAI CÉLRA. A. A minták fertőzőek lehetnek. A vizsgálat elvégzése közben be kell tartani az általános érvényű óvintézkedéseket.29, 30 Csak a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt használatához jól értő és a fertőző anyagok kezelésére kiképzett személyek végezhetik a munkafolyamatot. 0,5%-os nátrium-hipoklorit frissen készített desztillált vagy ioncserélt vizes oldatával (10%-os hígítású fehérítőszerrel) minden laboratóriumi felületet alaposan tisztítani és fertőtleníteni kell. Ezután törölje át 70%-os etanollal a felületet. B. FIGYELMEZTETÉS: Az MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0, MPX 2(+)C, v2.0 és MPX (–) C, v2.0 emberi vérből származó plazmát tartalmaznak. A forrásanyag tesztekkel vizsgálva nem bizonyult reaktívnak HIV-1/2 antitestre, HCV antitestre, HIV p24 antigénre, HBsAg-re és antiHBcAg antitestre. A forrásanyagot a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével ugyancsak vizsgálták. A negatív humán plazma PCR-technikákkal történő vizsgálata során HIV-1 (M és O csoport) RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS vagy HBV DNS nem volt kimutatható. Egyetlen ismert vizsgálati módszer sem nyújthat teljes garanciát arra, hogy a humán vérkészítményekben nincs jelen fertőző anyag. Minden humán vér eredetű anyagot potenciálisan fertőzőnek kell tekinteni, és az általános érvényű óvintézkedések betartásával kezelni. Kiömlés esetén azt azonnal fertőtlenítse frissen készített hígított fehérítőszer-oldattal, illetve kövesse a megfelelő helyszíni eljárásokat. C. Alkalmazza a szokásos laboratóriumi óvintézkedéseket. Ne pipettázzon szájjal. Ne egyen, igyon vagy dohányozzon a kijelölt munkaterületen. Viseljen egyszer használatos kesztyűt, köpenyt és szemvédőt a minták és a készlet reagenseinek kezelése közben. A minták és tesztreagensek kezelését követően gondosan mosson kezet.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 11

D. Az EB, MPX v2.0 MMX-R1, MPX MMX-R2, v2.0 és MPX IC, v2.0 tartósítószerként nátrium-azidot tartalmaznak. Ne használjon fém vezetékezést a reagenstranszferhez. Amennyiben azidot tartalmazó oldatot önt a vízvezeték-hálózatba, hígítsa azt fel, és öblítse le nagy mennyiségű folyóvízzel. Ezek az óvintézkedések arra szolgálnak, hogy elkerülje az üledék lerakódását a fém csővezetékben, ahol azáltal robbanásra alkalmas körülmények alakulhatnak ki. E. A heparinról kimutatták, hogy gátolja a PCR-t. Az eljáráshoz ne használjon heparinos plazmát. F. Steril, egyszer használatos pipetták és nukleázmentes pipettahegyek használata javasolt. Álpozitív eredmények fordulhatnak elő, ha nem ügyel a minták keresztszennyeződésének elkerülésére a mintakezelés és -feldolgozás során. G. Az optimális vizsgálati feltételek biztosítása érdekében csak a szállított vagy az előírtan szükséges egyszer használatos eszközöket alkalmazza. H. A minták és kontrollok keresztszennyeződésének elkerülésére kezeljen minden mintát és kontrollt tartalmazó anyagot a helyes laboratóriumi gyakorlat (GLP) szerint. I.

Felhasználás előtt szemrevételezzen minden reagenskazettát, kontrollcsövet és mosóreagenst, hogy nem tapasztal-e szivárgásra utaló jeleket. Szivárgás esetén azt az anyagot ne használja fel a vizsgálathoz.

J.

Minden anyagot, amely mintákkal vagy reagensekkel kapcsolatba került, az országos, szövetségi, állami és helyi szabályozások szerint semmisítsen meg.

K. Ne használjon lejárt cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0, cobas® TaqScreen MPX kontrollkészlet, v2.0, vagy cobas® TaqScreen mosóreagens vagy cobas® TaqScreen kadáver minta oldószer készleteket. A különböző készletekből származó, illetve eltérő tételszámú reagensek felcserélése, összekeverése vagy kombinálása tilos. Ne töltsön kevert tételszámú reagenseket a COBAS® AmpliPrep készülékbe. L. A biztonsági adatlapok (SDS) igény esetén hozzáférhetőek a helyi Roche irodában. M. Kerülje a reagensek bőrrel, szemmel vagy nyálkahártyákkal való érintkezését. Ha érintkezés mégis bekövetkezik, azonnal mossa le nagy mennyiségű vízzel, ellenkező esetben égési sérülés jelentkezhet. Ha ezek a reagensek kiömlenek, feltörlés előtt hígítsa fel azokat vízzel. N. Ne engedje, hogy a LYS reagens, amely guanidin-tiocianátot tartalmaz, nátrium-hipoklorit (fehérítőszer) oldattal érintkezzen. Az ilyen keverékből erősen mérgező gáz fejlődhet. O. A vizsgálat helyes kivitelezésének biztosítása végett szigorúan tartsa be a megadott eljárásokat és irányelveket. A megadott eljárásoktól és irányelvektől való bármilyen eltérés befolyásolhatja a vizsgálat teljesítményét. P. Ne használjon nagymértékben hemolizált élő donor mintákat. Q. A plazmaminták vörösvértest-szennyezettsége (> 2,5%) gátolhatja a cobas® TaqScreen MPX v2.0 vizsgálatot. R. A vizsgálat egyik szakaszában se használjon sérült vonalkódú összetevőket. S. Az összes mintát tárolja az előírt hőmérséklettartományban. A vizsgálat eredményét befolyásolhatja a helytelenül tárolt minta. Sajátos utasításokért tanulmányozza a MINTAVÉTEL, -TÁROLÁS ÉS CSOPORTOSÍTÁS részt. Egyes HCV izolátumok hőérzékenyek lehetnek. Minimalizálni kell a minták magas hőmérsékletnek való kitettségét. KONTROLLOK ÉS REAGENSEK ELŐKÉSZÍTÉSE A cobas® TaqScreen MPX v2.0 kontrollkészletet és a cobas® TaqScreen MPX v2.0 tesztet a használat előtt legalább 30 perccel ki kell venni a hűtőből.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 12

MINTAVÉTEL, -TÁROLÁS ÉS -CSOPORTOSÍTÁS MEGJEGYZÉS: Valamennyi mintát fertőző ágensként kell kezelni. Élő donor minták A. EDTA, CPD, CPDA1 és CP2D-beli plazma és 4%-os nátrium-citrát antikoaguláns alkalmazható a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszthez. A minták kezelésére és centrifugálásra vonatkozóan kövesse a mintavevő cső/zacskó gyártójának utasításait. A minták stabilitását befolyásolja a magasabb hőmérséklet. B. Az EDTA, CPD, CPDA1 vagy CP2D antikoagulánsban gyűjtött vérre az alábbi tárolási feltételek vonatkoznak: ·

2 és 25 °C között max. 48 óráig, 2 és 8 °C között max. 72 óráig tárolható.

·

A sejtektől való elkülönítés után a plazma 2 és 8 °C között max. 7 napig, 3 fagyasztás-kiolvasztás ciklus mellett –18 °C alatt pedig max. 30 napig tárolható.

C. A Becton Dickinson Vacutainer® PPT használatával gyűjtött vér a plazma vörösvértestektől való centrifugás elkülönítése előtt 2 és 30 °C között max. 72 óráig tárolható. A PPT-beli gélelkülönített plazma 2 és 8 °C között további kilenc napig tárolható.40

D. A 4%-os nátrium-citrát antikoagulánsbeli plazma az alábbi két feltétel teljesülésével tárolható: ·

2 és 25 °C között max. 48 óráig, 2 és 8 °C között max. 28 napig, valamint 1 fagyasztáskiolvasztás ciklus mellett –18 °C alatt max. 30 napig tárolható.

·

2 és 25 °C között max. 48 óráig, 2 és 8 °C között max. 20 napig, valamint 2 fagyasztáskiolvasztás ciklus mellett –18 °C alatt max. 6 hónapig tárolható.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 13

E. A plazmatérfogatokra vonatkozó következő előírások 13 x 100 mm-es műanyag donorcsövekből Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral történő pipettázáson alapulnak. A felsorolt mennyiségek a csomagolt vörösvértesteken felüli plazmára vonatkoznak, és a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt futtatásakor alkalmazandók. Csoporttípus Elsődleges csoport Ismételt csoport Megerősítési csoport

Legkisebb plazmatérfogat 3 ml 1,5 ml 2 ml

F. A teljes vért tilos fagyasztani.40 G. Fedett mély lyukú tálcában lévő plazma az alábbi két feltétel teljesülésével tárolható: ·

2 és 8° C között max. hét napig.

·

–18° C alatt max. 7 napig.

H. A csoportosított vagy egyenként hűtött donormintákat használat előtt legalább 30 percig kell állni hagyni szobahőmérsékleten. I.

Eltérő gyűjtési és tárolási feltételeket a felhasználónak validálnia kell. Amennyiben a minták szállítása szükséges, akkor azokat a minták és kóroki ágensek transzportjára vonatkozó szövetségi és nemzetközi előírásoknak megfelelően kell csomagolni és felcímkézni.31

J.

Álpozitív eredmények fordulhatnak elő a minták keresztszennyeződéséből adódóan, ha azok nem voltak megfelelően kontrollálva a mintakezelés és -feldolgozás során.

Kadáver minták A. Kadáver donor eredetű minták osztályozása: a szalmasárgától a rózsaszínűig mérsékelten hemolizált minta, a pirostól a sötétpiros, illetve barna színűig pedig nagyfokban hemolizált minta. B. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlettel EDTA antikoagulánst tartalmazó csövekbe, illetve szérumcsövekbe levett kadáver vérminták használhatók. Kövesse a cső gyártójának utasításait. Az emelkedett hőmérséklet befolyásolja a minták stabilitását. C. Az EDTA antikoagulánst tartalmazó csőbe vett kadáver eredetű vérminták a plazma elválasztását megelőzően 2–30 °C-on legfeljebb 24 óráig, 2–25 °C-on további 24 óráig tárolhatók. 48 óránál hosszabb tároláshoz válassza el a plazmát a vörösvértestekről centrifugálással, és távolítsa el a plazmát a vörösvértestekről tárolás előtt. Eltávolítást követően a plazma 2–8 °C-on még további nyolc napig tárolható. Máshogy: a vörösvértestek eltávolítása után a plazma ≤ –18 °C-on legtöbb 30 napig tárolható. A kadáver EDTA-s plazma legfeljebb három (3) alkalommal fagyasztható le és olvasztható fel.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 14

D. A szérumként vett kadáver eredetű vérminták a vértestek elválasztását megelőzően 2–30 °C-on legfeljebb 24 óráig, 2–25 °C-on további 24 óráig tárolhatók. 48 óránál hosszabb tároláshoz válassza el a szérumot az alvadéktól centrifugálással, és távolítsa el a szérumot az alvadékról tárolás előtt. Az alvadékról való eltávolítást követően a szérum 2–8 °C-on még további nyolc napig tárolható. Máshogy: az alvadékról való eltávolítása után a szérum ≤ –18 °C-on legtöbb 30 napig tárolható. A kadáver eredetű szérum legfeljebb három (3) alkalommal fagyasztható le és olvasztható fel. E. A PPT csövekbe vett kadáver eredetű vérminták a plazma centrifugálás útján való elválasztását megelőzően 2–30 °C-on legfeljebb 24 óráig, majd 2–25 °C-on további 24 óráig tárolhatók. 48 óránál hosszabb tároláshoz a gélben elválasztott plazma PPT csőben, 2–8 °C között további nyolc napig tárolható. F. A cobas® TaqScreen kadáver minta oldószerrel 1:5 arányban hígított kadáver minták 2–8 °C-on legfeljebb 7 napig tárolhatók, és újrakeverés után (fel-le pipettázás négyszer (4) minden csőben) vizsgálhatók a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlettel. G. A cobas® TaqScreen kadáver minta oldószerrel 1:5 arányban hígított kadáver minták ≤ –18 °C-on való tárolását nem vizsgálták. H. Amennyiben a minták szállítása szükséges, akkor azokat a minták és kóroki ágensek transzportjára vonatkozó szövetségi és nemzetközi előírásoknak megfelelően kell csomagolni és felcímkézni.31 I.

Álpozitív eredmények fordulhatnak elő a minták keresztszennyeződéséből adódóan, ha azok nem voltak megfelelően kontrollálva a mintakezelés és -feldolgozás során.

MINTACSOPORTOSÍTÁS ÉS -PIPETTÁZÁS A. A cobas s 201 rendszer a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettort használja pipettázási és csoportosítási tevékenységekhez. A Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor elvégzi a vonalkódleolvasási és csoportosítási műveleteket, minek során a mintákból csoportokat hoz létre. B. A cobas s 201 rendszer telepítése lehetséges Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor nélkül is, ekkor azonban a vonalkódazonosítók manuális bevitele szükséges. Használati útmutatás céljából tanulmányozza a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyvét. C. Ha a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 reaktív csoportot mutat kit, a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor használható az egyéni minták pipettázásához a mély lyukú lemezekből vagy eredeti mintacsövekből a másodlagos vizsgálathoz. ELJÁRÁSSAL KAPCSOLATOS MEGJEGYZÉSEK A.

Felszerelés 1. A használathoz készítse elő a cobas s 201 rendszert a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv utasításainak megfelelően. 2. A helyes működés érdekében végezze el a javasolt karbantartást a készülékeken.

B.

Reagensek 1. A cobas® TaqScreen MPX v2.0 kontrollkészletet és a cobas® TaqScreen MPX v2.0 tesztet a használat előtt legalább 30 perccel ki kell venni a hűtőből. A cobas® TaqScreen mosóreagens hőmérsékletét használat előtt szobahőmérsékletre kell hozni. A reagensek tárolási feltételeit a tárolási és kezelési követelményekről szóló rész ismerteti. 2. Valamennyi cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlet összesen 96 vizsgálat elvégzéséhez elegendő reagenst tartalmaz, amelyek futtatását SK24 állványonként 24 vizsgálatot tartalmazó tételekben célszerű kivitelezni. Minden egyes tétellel vagy SK24 állvánnyal együtt egy negatív kontrollt (MPX (–) C, v2.0) és a pozitív kontrollok mindegyikéből egyet-egyet (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0 és MPX 2(+)C, v2.0) is fel kell dolgozni.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 15

3. Minden cobas® TaqScreen MPX kadáver minta oldószer készlet összesen 96 vizsgálat elvégzéséhez elegendő anyagot tartalmaz, amelyek futtatását SK24 állványonként 24 vizsgálatot tartalmazó tételekben célszerű kivitelezni. Minden egyes tétellel vagy SK24 állvánnyal együtt egy negatív kontrollt (MPX (–) C, v2.0) és a pozitív kontrollok mindegyikéből egyet-egyet (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0 és MPX 2(+)C, v2.0) is fel kell dolgozni. A kontrollokat élő donor minta és kadáver minta esetében azonos módon kell feldolgozni a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlettel. 4. Minden kontrollt csak egyszer lehet felhasználni. 5. A rendszer megakadályozza, hogy a COBAS® AmpliPrep készülékben tölthető időt (a felbontást követően összesen 40 órát, vagy a felbontástól számítva 20 napot) túllépő reagenseket, lejárt reagenseket, illetve a rendszerben már korábban használt többkazettás szettből származó kevert kazettákat használjon. C.

Mintafeldolgozás 1. A minták és kontrollok kezelése során ügyeljen a kesztyűk szennyezésének elkerülésére. 2. Legyen óvatos, hogy elkerülje a minták és az MPX (–) C, v2.0 kontroll szennyezését a pozitív kontrollokkal.

D.

Egyéni vírustarget azonosítása A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 egyidejűleg kimutatja és megkülönbözteti a HIV, HCV és HBV targeteket. A rendszer a három HIV targetet (HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport és HIV-2) nem különbözteti meg egymástól.

HASZNÁLATI UTASÍTÁS A cobas s 201 rendszer négy fő eljárást foglal magában: Minta és kontroll pipettázása az opcionális Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral, minta-előkészítés a COBAS® AmpliPrep készüléken a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlettel, amplifikálás/kimutatás a COBAS® TaqMan® analizátoron, valamint adatkezelés. Minden cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlet nyolc kazettát tartalmaz: két MPX2 CS1 kazettát mágneses üvegpartikulumokkal, két MPX2 CS2 kazettát lízisreagenssel, két MPX2 CS3 kazettát proteináz-oldattal és eluáló pufferrel, valamint két MPX2 CS4 kazettát az MPX belső kontroll, v2.0, MPX v2.0 Master Mix Reagens 1 és MPX Master Mix Reagens 2, v2.0 reagensekkel. A tesztkészletet a cobas® TaqScreen MPX v2.0 kontrollkészlettel és a cobas® TaqScreen mosóreagenssel együtt kell használni, továbbá a kadáver eredetű minták feldolgozásához a cobas® TaqScreen kadáver minta oldószer készlettel. Megjegyzés:

Ne nyissa ki a kazettákat.

Megjegyzés:

Ne öntsön össze különböző tételekből, vagy azonos tételből, de különböző flakonokból származó reagenseket.

Megjegyzés:

Ne keverje a különböző készletből származó reagenseket (se a kazettákat). Ne töltsön kevert tételszámú reagenseket a COBAS® AmpliPrep készülékbe.

Megjegyzés:

Ne válassza le a kontrollcsöveket az adapterről (a műanyag kontrollcsőtartó).

Megjegyzés:

A PDM szoftver nyomon követi és biztosítja, hogy a tétel egyetlen COBAS® AmpliPrep készüléken és COBAS® TaqMan® analizátoron fusson, amelyek egyazon AMPLILINK adatállomáshoz csatlakoznak.

Megjegyzés:

Egy tételt tilos egynél több COBAS® AmpliPrep készüléken vagy COBAS® TaqMan® analizátoron futtatni.

Végezzen el minden szükséges karbantartást a cobas s 201 rendszer használati útmutatójának megfelelően. Részletes használati útmutatás céljából tanulmányozza a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyvét. Fontos, hogy a felhasználó kövesse a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv ének utasításait a vizsgálat megfelelő kivitelezése érdekében. 06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 16

A.

Kontrollok és minták pipettázása a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral

Megjegyzés:

A minták és kontrollok előkészítése során ügyeljen a kesztyűk szennyezésének elkerülésére.

Megjegyzés:

Keverje meg a kontrollokat legalább háromszori óvatos döntögetéssel úgy, hogy ne képződjenek buborékok, az alábbiak szerint. · A döntögetés minden alkalommal azt jelenti, hogy a kontrollt fejtetőre fordítja, majd vissza. · A döntögetés során mindig tartsa a kontroll legalább 2 másodpercig mindegyik helyzetben (azaz fordítsa a kontrollt fejtetőre, és tartsa így legalább 2 másodpercig. Majd fordítsa vissza a kontrollt, és így is tartsa legalább 2 másodpercig.)

Megjegyzés:

A kontrollbeli víruscélpontok, valamint a csoportosított és egyenkénti minták a rendszeren (max. 30 °C-ig) legalább 18 órán keresztül stabilak maradnak a COBAS® AmpliPrep készüléken történő extrakció előtt.

A1. Helyezze üzembe a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettort, majd a képernyőn megjelenő utasításokat követve indítsa el a Roche PDM csoportosítási varázslót. A2. Ügyeljen rá, hogy ne sértse meg a mintacsövek és kontrollcső adaptorok azonosító vonalkódját. Ha sérült, a rendszer nem fogja felismerni a mintákat vagy kontrollokat. A3. Távolítsa el a kontrollcsövek kupakját és helyezze a mintákat, fogyóeszközöket és kontrollokat a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorba. A minták, fogyóeszközök és kontrollok betöltése után a készülék átviszi a kontrollokat és mintákat az S-csövekbe. A4. Egyéni kadáver minták esetében pipettázzon 2000 µl CADV SPEC DIL oldószert a megfelelően jelölt 13 x 100 mm-es csövekbe, adagoljon minden egyes csőbe 500 µl kadáver mintát, és keverje meg azokat négyszeri (4) fel-le pipettázással. Ügyeljen a minták helyes azonosítására a manuális hígítási eljárás során. Töltse be a hígított kadáver mintákat, fogyóeszközöket és kontrollokat a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorba. A hígított kadáver minták, fogyóeszközök és kontrollok betöltése után a készülék átviszi a kontrollokat és hígított mintákat az S-csövekbe. A5. A pipettázási folyamatot követően tekintse át a figyelmeztetéseket és nyomtassa ki a csoportosítási jelentés(eke)t. Ellenőrizze a csoportokat és a mély lyukú lemezek lyukait. Érvénytelenítse a csoportokat és/vagy lyukakat, ha vörösvértest-szennyeződést észlel, illetve a térfogatok nem egyenletesek. A6. Helyezze vissza az S csövek tetejét, majd nukleinsav-extrakció céljából helyezze át az SK24 állvány(oka)t a COBAS® AmpliPrep készülékre. A7. Fedje le és helyezze tárolásba a mély lyukú tálcákat (ha a tálcák a pipettázással elkészültek). A8. Távolítsa el a tároló- és donorcsöveket. A feltételek végett tanulmányozza a „Mintavétel, -tárolás és -csoportosítás” részt. A9. Távolítsa el és dobja ki a kontrollcsöveket. (A kontrollcsöveket csak egyszer lehet felhasználni.) B.

A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 reagensek előkészítése és betöltése

Megjegyzés:

Ügyeljen rá, hogy ne sértse meg a kazetták címkéit. A COBAS® AmpliPrep készülék vonalkód leolvasója automatikusan leolvassa minden kazetta vonalkódcímkéjét a reagensállvány készülékbe történő betöltése folyamán.

B1. Használat előtt legalább 30 perccel vegye ki a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt reagenseit a hűtőből. Nincs szükség egyéb reagens-előkészítési lépésre. B2. Az indítást megelőzően annyi kazettát kell betölteni, hogy elegendő legyen a feldolgozásra kerülő minták teljes számának befogadására a COBAS® AmpliPrep készülék a folyamatos üzeme során. Mindegyik kazetta 48 vizsgálatra elegendő reagenst tartalmaz. A reagensek folyamatos üzem során való betöltéséről a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv vonatkozó fejezetében tájékozódhat. 06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 17

B3. Helyezze az MPX2 CS1 kazettát a reagensállványba úgy, hogy a kazetta vonalkódja egy vonalban legyen az állvány jobb oldalán található vonalkóddal. Az MPX2 CS1 kazettákat együtt, egy másik reagensállványon kell betölteni, mint a többi kazettát. B4. Helyezze az MPX2 CS1 kazettát tartalmazó reagensállványt az A állványpozícióba. Ne töltsön kevert tételszámú reagenseket a készülékbe. B5. Helyezzen egy-egy szett MPX2 CS2, MPX2 CS3 és MPX2 CS4 kazettát mindegyik MPX2 CS1 kazetta számára a reagensállvány(ok)ba úgy, hogy a kazetták vonalkódja egy vonalban legyen az állvány jobb oldalán található vonalkóddal. B6. Helyezze be a reagensállvány(oka)t a B, C, D, illetve E állványpozícióba. B7. A COBAS® AmpliPrep készülék állapotsorán a LED-ek zöldre váltanak, ha a készlet minden szükséges eleme a készülékben van, és a készülék felismerte azokat. C.

Nukleinsavak kivonása a pipettázott mintákból és kontrollokból

Megjegyzés:

Az alábbi lépéseket tiszta munkapadon végezze el.

C1. Távolítsa el a mintafeldolgozó egység (SPU) csomagolását, de hagyja a szalagot és a műanyag fedőt érintetlenül. C2. Úgy, hogy az SPU-állvány nagy füle a felhasználó felé nézzen, illessze az SPU-öblítő nyalábot az SPU-állvány jobb oldalához. C3. Távolítsa el a szalagot és a műanyag fedőt az állványba illesztett SPU-król. Ellenőrizze, hogy minden SPU megfelelően benyomva, egy szintben legyen és teljes mértékben illeszkedjen az állványba. Egy elmozdult SPU műszerhibát okozhat. Ne nyomja meg a SPU-ban található S-hegyet. C4. Csúsztassa a betöltött SPU-állványokat a COBAS® AmpliPrep készülék I, J, illetve K SPUpozícióiba addig, amíg teljesen nem illeszkednek és a készülék fel nem ismeri azokat. A készülék egyszerre 72 SPU befogadására alkalmas. Töltsön be legalább a futtatáshoz megkívánt számú SPU-t, illetve helyezzen be továbbiakat, ha szükséges. C5. Távolítsa el a gyártó által betöltött K-csövek és K-hegyek celofán csomagolását, és vigyázzon, hogy ne döntse meg az állványokat. Ellenőrizze, hogy megfelelően illeszkednek-e. C6. Csúsztassa be legalább a szükséges számú K-cső állványt a COBAS® AmpliPrep készülék M, N vagy O pozícióiba, illetve K-hegy állványt a készülék M, N, O vagy P pozícióiba. C7. Töltse be a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral pipettázott mintákat tartalmazó SK24 állványokat a COBAS® AmpliPrep készülék F, G, illetve H pozícióiba. Csúsztassa kattanásig az állványokat. Ellenőrizze a rendszer mintaállapot ablakában, hogy a készülék az összes állvány összes mintáját felismerte-e. C8. Az AMPLILINK szoftver segítségével ellenőrizze, hogy elegendő mennyiségű reagens és fogyóeszköz lett-e betöltve a kívánt minta-előkészítési eljáráshoz. C9. Nyomja meg az AMPLILINK szoftver munkaállomás Start gombját, hogy elindítsa a COBAS® AmpliPrep készülék minta-előkészítési eljárást. D.

Amplifikálás és kimutatás

Megjegyzés:

Az SK24 állványban lévő master mix munkareagens plusz feldolgozott minták korlátozott stabilitásúak. A COBAS® TaqMan® Analizátornak késznek kell lennie a minták fogadására, mire a COBAS® AmpliPrep készülék végez a mintaelőkészítési eljárással.

D1. Dokkolóállomás nélküli kiépítés esetén az amplifikálás és kimutatás automatikus indításához helyezze át a feldolgozott mintákat és a Master Mix reagenst tartalmazó SK24 állványt a COBAS® TaqMan® analizátorra. Az AMPLILINK szoftver az összes feldolgozott mintában nyomon követi a Master Mix hozzáadásának időpontját, és érvényteleníti a mintákat, ha az amplifikálás nem kezdődött meg a vizsgálatdefiníciós fájlban meghatározott időn belül. A munkafolyamat egyszerűsítése érdekében az állvány minta-előkészítésének elkészülte után 1 órán belül helyezze át az SK24 állványt a COBAS® TaqMan® analizátorra. 06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 18

D2. Ha befejeződött az amplifikálás és kimutatás a COBAS® TaqMan® Analizátoron, a vizsgált K-csövek automatikusan a hulladékgyűjtőbe kerülnek. D3. Az eredményeket a rendszer automatikusan elfogadja és a PDM szoftverre továbbítja. E.

Eredmények áttekintése és kiadása

E1. Jelentkezzen be a Roche adatkezelő munkaállomásra. E2. Keresse ki a még nem értékelt tételeket az adatkezelő munkaállomás „Review Batches” füle alatt. E3. Tekintse át a figyelmeztetéseket úgy, hogy kijelöli a tételt és a „Next” gombra kattint. E4. Tekintse át a kontrolleredményeket a „Controls Review” fül alatt. A kontrollok érvényességi kikötései a „Minőség-ellenőrzés” részben találhatók. E5. Tekintse át a csoporteredményeket a kiválasztott tétel „Pools Review” füle alatt. A nem reaktív csoportok szükség esetén a felhasználó által manuálisan érvényteleníthetők. Az érvénytelen csoportok minden donormintáját újra kell vizsgálni. E6. Tekintse át és adja ki a donoreredményeket a kiválasztott tétel „Donor Review” füle alatt. E7. Nyomtassa ki a jelentéseket és küldje tovább a laboratóriumi információs rendszerre (LIS), ha ilyen rendelkezésre áll. MINŐSÉG-ELLENŐRZÉS 1. Minden egyes tétellel együtt egy negatív kontrollt (MPX (–) C, v2.0) és a három pozitív kontroll mindegyikéből egyet-egyet (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0 és MPX 2(+)C, v2.0) is fel kell dolgozni. 2. Tétel állapota: A „Complete, Valid” tételállapot jelenik meg, ha a tételkontrollok érvényesek. Ha a tételen belül bármelyik kontroll érvénytelen, az egész tétel érvénytelen lesz, és a vizsgálatot meg kell ismételni. Az eredmények kontrollhibából adódó érvénytelenítését a PDM szoftver automatikusan elvégzi. a. Negatív kontroll Ahhoz, hogy egy tétel érvényes legyen, a negatív kontrollnak (MPX (–) C, v2.0) érvényesnek kell lennie. Ahhoz, hogy a negatív kontroll érvényes legyen, az eredmény nem reaktív kell, hogy legyen, valamint a járulékos belső kontrollnak érvényesnek kell lennie. Ha a negatív kontroll eredményének értékelése érvénytelen, az egész tétel érvénytelen lesz. b. Pozitív kontrollok Ahhoz, hogy egy tétel érvényes legyen, a 3 pozitív kontrollnak (MPX M(+)C, v2.0, MPX O(+)C, v2.0 és MPX 2(+)C, v2.0) érvényesnek kell lennie. Ahhoz, hogy a 3 pozitív kontroll érvényes legyen, az eredmény mindegyik pozitív kontroll esetén reaktív kell, hogy legyen, valamint a járulékos belső kontrollnak érvényesnek kell lennie. Ha a pozitív kontrollok bármelyike eredményének értékelése érvénytelen, az egész tétel érvénytelen lesz. 3. Donorminták belső kontrollja a. Ahhoz, hogy a donorminta érvényes, nem reaktív (–) vizsgálati eredményt adjon, a járulékos belső kontroll érvényes kell, hogy legyen, ellenkező esetben a nem reaktív eredmény érvénytelen lesz, és a donorminta vizsgálatát meg kell ismételni. b. Ahhoz, hogy a donorminta érvényes, reaktív vizsgálati eredményt adjon, a járulékos belső kontroll érvényes vagy érvénytelen is lehet.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 19

EREDMÉNYEK 1. A mintaeredmények csak akkor érvényesek, ha a teljes, őket tartalmazó tétel érvényes. Az elfogadhatóság feltételei a „Minőség-ellenőrzés” részben találhatók. Minden minta esetében négy paraméter mérésére kerül sor, egy-egy mindegyik vírustargetre, és egy másik a belső kontrollra vonatkozik. 2. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 PDM szoftver által jelentett végső donoreredményei a következők: Donorstátusz Completed Non-Reactive Accepted Non-Reactive Completed Reactive Accepted Reactive Completed Unresolved Accepted Unresolved

Magyarázat A rendszer meghatározta a végső eredményt mindegyik targetre, és valamennyi target nem reaktív. A Completed Non-Reactive eredményt elfogadták. A rendszer meghatározta a végső eredményt mindegyik targetre, és legalább egy target reaktív. A Completed Reactive eredményt elfogadták. Az életképességi időkorlát lejárt, mielőtt az eredményt elfogadták volna, és egyik eredmény sem volt reaktív. A Completed Unresolved eredményt elfogadták.

Egyéni minta ismétlése A vizsgálatot a többi target végső eredményétől függetlenül meg kell ismételni az olyan donorcsövek esetén, amelyek végső eredménye egy targetre érvénytelen. Ugyanakkor a felhasználónak lehetősége van a „Force Unresolve” gomb kiválasztásával befejezni a donorhoz tartozó munkafolyamatot. A „Force Unresolve” funkció „Accepted Unresolved” donorstátuszt ad azoknak a donoroknak, akiknek nincs reaktív végső eredményük egyetlen targetre sem, illetve „Accepted Reactive” státuszt ad azoknak a donoroknak, akiknek van reaktív eredményük egy vagy több targetre. Másodlagos csoportosítási vizsgálat A vizsgálatot meg kell ismételni az olyan több mintát tartalmazó csoport donorcsövei esetén, amelyek végső eredménye egy targetre érvénytelen, amennyiben a többi target eredménye nem reaktív vagy érvénytelen. Amikor egy több mintát tartalmazó csoport kap reaktív értékelést, a cobas s 201 rendszer a csoportban található összes donort megjelöli, hogy másodlagos csoportosítási vizsgálat szükséges. Ezeket a donormintákat a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor pipettázza (a mély lyukú lemezekből vagy az eredeti donorcsövekből) kevesebb donort vagy egyetlen donort tartalmazó kisebb csoportokba, és további vizsgálatuk a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel történik a megerősítő eljárás részeként a reaktív egyéni donorminták azonosítása céljából. A megerősítő vizsgálatra vonatkozó specifikus információk végett tanulmányozza a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv utasításait. Ha egy kisebb csoportokra osztott, több mintát tartalmazó csoport valamennyi targetre nem reaktívnak bizonyul, akkor az egyedi mintá(ka)t rendszer úgy adja ki, mint „Completed”, végső eredmény nem reaktív.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 20

ELJÁRÁSSAL KAPCSOLATOS KORLÁTOZÁSOK 1. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 vizsgálatot kizárólag a cobas® TaqScreen MPX kontrollkészlet, v2.0, a cobas® TaqScreen mosóreagens és a cobas s 201 rendszer együttes használatára értékelték. 2. Kadáver minták vizsgálatára a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készletet csak a cobas® TaqScreen kadáver minta oldószer készlet, a cobas® TaqScreen MPX kontrollkészlet v2.0, a cobas® TaqScreen mosóreagens és a cobas s 201 rendszer együttes használatára értékelték. 3. A heparinról kimutatták, hogy gátolja a PCR-t. Az eljáráshoz ne használjon heparinos plazmát. 4. A megbízható eredmény a megfelelő mintalevételen, valamint a helyes transzporteljárásokon múlik. 5. A plazmacsoportok automatikus előkészítésére csak a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettort validálták a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel való együttes használatra. Ragaszkodjon a cobas s 201 rendszer felhasználói kézikönyv és a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettor felhasználói kézikönyv hardver utasításaihoz és biztonsági óvintézkedéseihez. 6. A HIV-1 M csoport RNS, HIV-1 O csoport RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS kimutatása függ a mintában jelenlevő vírusrészecskék számától, és befolyásolhatják a mintalevételi módszerek, betegfaktorok (azaz kor, tünetek megléte) és/vagy a fertőzés stádiuma, valamint a mintacsoport mérete. 7. Ritkán bár, de előfordulhat, hogy a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 primerei és/vagy próbája által lefedett virális genom nagyfokban konzervált régióiban levő mutációk következtében a vírus kimutatása sikertelen lesz. 8. A technológiák különbözősége miatt javasolt, hogy az egyik technológiáról a másikra való áttéréskor a felhasználók végezzenek korrelációs laboratóriumi vizsgálatokat, hogy a technológiák közötti különbség minősíthető legyen. A felhasználóknak a helyi specifikus irányelveket/eljárásokat kell követniük.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 21

TELJESÍTMÉNYJELLEMZŐK Élő donor minták Analitikai érzékenység — WHO nemzetközi standardok/Roche standardok/CBER standard A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 kimutatási határ (LOD) meghatározása a HIV-1 M csoport RNS, HIV-1 O csoport RNS, HIV-2 RNS, HCV RNS és HBV DNS esetén az alábbi standardok szerint történt: a HIV-1 RNS WHO MÁSODIK NEMZETKÖZI STANDARD, MÁSODIK NEMZETKÖZI STANDARD (NIBSC 97/650)37, a NUKLEINSAV AMPLIFIKÁCIÓS TECHNOLÓGIAI (NAT) VIZSGÁLATOKRA SZOLGÁLÓ HEPATITIS B VÍRUS DNS WHO NEMZETKÖZI STANDARD (NIBSC 97/746) 32, a GENOM AMPLIFIKÁCIÓS TECHNOLÓGIAI VIZSGÁLATOKRA SZOLGÁLÓ HEPATITIS C VÍRUS RNS WHO MÁSODIK NEMZETKÖZI STANDARD (NIBSC 96/798)33 és a Roche Elsődleges HIV-1 O csoport és HIV-2 standardok. Emellett, a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 kimutatási határ meghatározása a HIV-2 esetén a HIV-2-RNS Nemzetközi Standardok (NIBSC 08/150)39 felhasználásával történt. HIV-1 O csoport RNS nemzetközi standard jelenleg nem áll rendelkezésre. A Roche Elsődleges HIV-1 O csoport RNS és HIV-2 RNS standardok kereskedelmi forgalomban kapható vírustörzs kultúrák, PN 2420 (Boston Biomedica, Inc.), katalógusszám 10-27-000 (Advanced Biotechnologies, Inc.). A Roche HIV-1 O csoport és HIV-2 standardok visszavezethetők a következőkre: CBER HIV-1 Subtype RNA Reference Panel #1 Lot 01, illetve CBER HIV-2 RNA Lot Release Panel ISD. A WHO és Roche standardok esetén minden egyes vírusstandardból 3 független hígítási sor készült EDTA véralvadásgátlóval gyűjtött poolozott humán plazma segítségével. Mindegyik hígítási sorozatot 3 különböző tételszámú cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlettel vizsgálták, készletenként körülbelül 20 ismétlésben, összesen mintegy 180 ismétlést végeztek koncentrációnként. A HIV-2 nemzetközi standard esetén 3 különböző tételszámú reagens készlettel, tételszámonként 3 független hígítási sorozatot vizsgáltak 10 ismétlésben, összesen 90 ismétlést végeztek koncentrációnként. A kimutatási határt (LOD) és a kétoldali 95%-os fiduciális konfidencia-intervallumokat úgy határozták meg, hogy a vizsgált ismétlések egyesített adataival minden vírus esetében PROBIT analízist végeztek (1. táblázat). Ugyancsak PROBIT analízissel becsülték fel a 95%-os kimutatási határt és a kétoldali 95%-os fiduciális konfidencia-intervallumokat az egyes vírusok egyéni tételeredményeinek esetében (8. táblázat). A 1-8. táblázat összefoglalja az analitikai érzékenységi vizsgálatok összesített eredményeit. A szokásos faktorok a nemzetközi egyséről (IU) kópiaszámra való átváltáshoz HIV-1 M csoport, HCV és HBV esetén rendre 0,634, 2,735 és 5,036. 1. táblázat A vírusstandardok PROBIT analízise Analát HIV-1 M csoport HIV-1 O csoport HIV-2

HIV-2

HCV

HBV

Standard WHO második Nemzetközi standard Roche elsődleges standard Roche elsődleges standard WHO Nemzetközi standard WHO második Nemzetközi standard WHO Nemzetközi standard

Mértékegység

Átlag 95% LOD

95% alsó határ

95% felső határ

IU/ml

50,3

43,3

59,9

kópia/ml

18,3

13,0

31,7

kópia/ml

57,4

49,7

68,1

IU/ml

7,9

5,6

13,8

IU/ml

6,8

5,8

8,3

IU/ml

2,3

2,0

2,8

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 22

2. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása: WHO HIV-1 nemzetközi standard (97/650) HIV-1 M csoport RNS-koncentráció (IU/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

95% alsó konfidencia határ (egyoldali)

100,00 75,00 50,00 25,00 12,50 7,50 2,50

180 179 175 147 118 65 23

180 183 183 183 183 183 183

100,0% 97,8% 95,6% 80,3% 64,5% 35,5% 12,6%

98,4% 95,1% 92,3% 74,9% 58,2% 29,6% 8,7%

3. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása: Roche elsődleges HIV-1 O csoport standard HIV-1 O csoport RNS-koncentráció (kópia/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

95% alsó konfidencia határ (egyoldali)

54,00 36,00 18,00 9,00 5,50 1,75

174 175 169 143 99 45

174 175 176 175 177 175

100,0% 100,0% 96,0% 81,7% 55,9% 25,7%

98,3% 98,3% 92,7% 76,2% 49,5% 20,3%

4. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása: Roche elsődleges HIV-2 standard HIV-2 RNSkoncentráció (kópia/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

95% alsó konfidencia határ (egyoldali)

184,00 123,00 91,50 61,00 31,00 18,50

184 183 182 171 153 131

184 184 182 184 184 185

100,0% 99,5% 100,0% 92,9% 83,2% 70,8%

98,4% 97,4% 98,4% 89,0% 77,9% 64,8%

6,00

52

185

28,1%

22,7%

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 23

5. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása: HIV-2 nemzetközi standard (08/150) HIV-2 RNSkoncentráció (IU/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

95% alsó konfidencia határ (egyoldali)

17,50 12,30 7,00 3,50 2,10 0,70

90 89 86 68 36 13

90 90 90 90 90 90

100,0% 98,9% 95,6% 75,6% 40,0% 14,4%

96,7% 94,8% 90,1% 67,0% 31,3% 8,8%

6. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása: WHO HCV nemzetközi standard (96/798) HCV RNSkoncentráció (IU/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

95% alsó konfidencia határ (egyoldali)

32,00 25,00 16,00 8,00 4,00 2,50 1,00

180 182 183 179 158 127 79

180 183 183 183 183 183 183

100,0% 99,5% 100,0% 97,8% 86,3% 69,4% 43,2%

98,4% 97,4% 98,4% 95,1% 81,4% 63,3% 37,0%

7. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása: WHO HBV nemzetközi standard (97/746) HBV DNSkoncentráció (IU/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

95% alsó konfidencia határ (egyoldali)

6,00 5,00 3,00 1,50 1,00 0,50

180 183 178 155 147 92

180 183 183 183 183 183

100,0% 100,0% 97,3% 84,7% 80,3% 50,3%

98,4% 98,4% 94,3% 79,6% 74,9% 44,0%

0,25

53

183

29,0%

23,5%

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 24

8. táblázat Egyéni reagenstétel kimutatási határok 1. reagenstétel

Mértékegység

Legkisebb észlelt konc. 95%-os reaktivitással

PROBIT 95% LOD

95% alsó határ

95% felső határ

HIV-1 M csoport HIV-1 O csoport HIV-2* HIV-2* HCV HBV

IU/ml kópia/ml kópia/ml IU/ml IU/ml IU/ml

100 36 91,5 12,3 8 3

58,6 21,7 56,6 8,0 7,2 2,9

45,8 16,7 45,1 6,0 5,5 2,3

80,0 31,2 76,7 12,4 10,8 4,1

2. reagenstétel

Mértékegység

Legkisebb észlelt konc. 95%-os reaktivitással

PROBIT 95% LOD

95% alsó határ

95% felső határ

HIV-1 M csoport HIV-1 O csoport HIV-2* HIV-2* HCV HBV

IU/ml kópia/ml kópia/ml IU/ml IU/ml IU/ml

50 18 91,5 7 8 3

48,3 19,0 63,2 8,9 7,0 2,0

29,1 14,6 50,0 6,5 5,4 1,6

127,5 27,6 86,1 14,4 10,1 2,9

3. reagenstétel

Mértékegység

Legkisebb észlelt konc. 95%-os reaktivitással

PROBIT 95% LOD

95% alsó határ

95% felső határ

HIV-1 M csoport HIV-1 O csoport HIV-2* HIV-2* HCV HBV

IU/ml kópia/ml kópia/ml IU/ml IU/ml IU/ml

50 18 61 7 8 3

41,6 14,3 51,7 6,8 6,2 2,0

33,1 8,6 40,3 5,1 4,1 1,6

56,2 50,4 72,9 10,5 15,2 2,8

* A Roche standard használatával kapott HIV-2 adatok mértékegysége kópia/ml. A 08/150 nemzetközi standard használatával kapott HIV-2 adatok mértékegysége IU/ml.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 25

Genotípus/szubtípus érzékenység és inkluzivitás A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 teljesítményét HIV-1 M csoport szubtípusokon, HIV-1 O csoporton és HIV-1 N csoporton, továbbá HCV és HBV genotípusokon határozták meg. HIV-1 M csoport Összesen 69 ismert szubtípusú HIV-1 M csoportú klinikai mintát és 28 ismert szubtípusú HIV-1 M csoportú izolátumkultúrát (10x A szubtípus, 5x AE szubtípus rekombináns, 10x AG szubtípus rekombináns, 10x B szubtípus, 1x B/D szubtípus, 10x C szubtípus, 10x D szubtípus, 9x E szubtípus, 10x F szubtípus, 10x G szubtípus, 10x G/BG szubtípus, 1x H szubtípus és 1x J szubtípus) mennyiségi meghatározását végezték el a COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HIV-1 Teszt, v2.0 segítségével, majd a minták normál, vírus-negatív humán plazmával készült, a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 HIV-1 M csoport kimutatási határának (LOD) 3X és 1X hígításait vizsgálták úgy, hogy legalább 7 ismétlést vizsgáltak minden egyes mintából a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. Mind a 69 klinikai mintát és a 28 izolátumkultúrát kimutatták mind 3X, mind 1X LOD hígítás mellett. 9. táblázat HIV-1 M csoportú minták és izolátumkultúrák Szubtípus

Klinikai minták

Kultúra felülúszók

Összes izolátum

Kimutatva Kimutatva 3X LOD mellett 1X LOD mellett

A

7

3

10

96% (74/77)

AE

5

0

5

86% (36/42)

83% (64/77) 69% (29/42)

AG

10

0

10

99% (69/70)

94% (66/70)

B

8

2

10

100% (70/70)

87% (61/70)

B/D

1

0

1

100% (24/24)

100% (24/24)

C

5

5

10

99% (69/70)

86% (60/70)

D

7

3

10

100% (74/74)

88% (66/75)

E

1

8

9

100% (63/63)

97% (61/63)

F

7

3

10

100% (70/70)

93% (65/70) 97% (68/70)

G

8

2

10

100% (70/70)

G/BG

10

0

10

100% (71/71)

96% (67/70)

H

0

1

1

100% (24/24)

100% (24/24)

J

0

1

1

100% (24/24)

96% (23/24)

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 26

HIV-1 O csoport és HIV-1 N csoport Összesen 9 HIV-1 O csoportú izolátumkultúrát és 1 HIV-1 N csoportú izolátumkultúrát vizsgáltak. A HIV-1 O csoportú izolátumok közül 6 esetében 3-3 ismétlést vizsgáltak, és 6-ból 6 izolátumot mutattak ki 10 víruspartikulum/ml koncentrációval. A fennmaradó 3 db. HIV-1 O csoportú izolátumból log hígítást készítettek normál, vírus negatív humán plazmával, és minden izolátumot a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel vizsgáltak minden hígításban 1 x 10-7-ig. A HIV-1 N csoportú izolátumkultúra mennyiségi meghatározását a COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HIV-1 Teszt, v2.0 segítségével végezték, majd a mintákat normál, vírus-negatív humán plazmával készült, a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 HIV-1 M csoport kimutatási határának (LOD) 3X és 1X hígításaiból 24 ismétlést vizsgáltak a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. Az izolátumot kimutatták 3X és 1X LOD hígításban is. 10. táblázat HIV-1 N csoportú és O csoportú izolátumok Szubtípus

Kultúra felülúszók

Kimutatva 3X LOD mellett

Kimutatva 1X LOD mellett

HIV-1 (N)

1

100% (24/24)

100% (24/24)

Szubtípus

Kultúra felülúszók

Kimutatva 100 víruspartikulum/ml mellett

Kimutatva 10 víruspartikulum/ml mellett

HIV-1 O csoport

6

88,9% (16/18)

83,3% (15/18)

HIV-2 Egy A szubtípusú HIV-2 és egy B szubtípusú HIV-2 izolátumkultúrát vizsgáltak. Az A szubtípusú HIV-2 izolátumkultúrát csoportos, vírus negatív humán plazmával hígították, és a vizsgálatok 100%ában kimutatták 91,5 kópia/ml koncentrációnál (~12,9 IU/ml a WHO nemzetközi egységekbe való konverzió szerint), de 6 kópia/ml koncentrációnál is kimutatták (~0,85 IU/ml a WHO nemzetközi egységekbe való konverzió szerint). A B szubtípusú HIV-2 izolátumkultúrából log hígítást készítettek normál, vírus negatív humán plazmával, és 3-3 ismétlést vizsgáltak a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel minden hígításból 1 x 10-5-ig. Ehhez a vizsgálathoz nem álltak rendelkezésre klinikai minták.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 27

HCV Összesen 95 ismert genotípusú HCV klinikai mintát (10x 1a genotípus, 10x 1b genotípus, 1x 2 genotípus, 7x 2a genotípus, 10x 2b genotípus, 7x 2a/c genotípus, 10x 3a genotípus, 6x 4 genotípus, 4x 4a genotípus, 1x 4c genotípus, 2x 4acd genotípus, 1x 4d genotípus, 1x 4p genotípus, 1x 4q genotípus, 10x 5a genotípus, 10x 6 genotípus, 3x 6a/b genotípus és 1x 6c genotípus) mennyiségi meghatározását végezték el a COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HCV Teszt segítségével, majd a minták normál, vírus-negatív humán plazmával készült, a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 HCV kimutatási határának (LOD) 3X és 1X hígításait vizsgálták úgy, hogy legalább 7 ismétlést vizsgáltak minden egyes mintából a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. Mind a 95 mintát kimutatták 3X és 1X LOD mellett egyaránt. Összesen 3, további HCV izolátumokból (2x 4 genotípus és 1x 6a genotípus) létrehozott transzkriptum mennyiségi meghatározását végezték el spektrofotométer segítségével, majd a minták RNáz-mentes pufferrel készített ~3 X LOD hígításait a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével vizsgálták. Mind a 3 mintát kimutatták ~3 x LOD mellett. 11. táblázat HCV minták Genotípus

Klinikai minták

Transzkriptumok

Kimutatva 3X LOD mellett

Kimutatva 1X LOD mellett

1a

10

0

100% (70/70)

93% (66/71)

1b

10

0

99% (76/77)

83% (64/77)

2

1

0

100% (24/24)

100% (24/24)

2a

7

0

100% (49/49)

100% (49/49)

2b

10

0

100% (70/70)

100% (70/70)

2a/c

7

0

98% (48/49)

88% (43/49)

3a

10

0

100% (70/70)

99% (69/70)

4

6

0

100% (52/52)

100% (52/52)

4a

4

0

100% (27/27)

100% (27/27)

4c

1

0

100% (24/24)

100% (24/24)

4acd

2

0

100% (24/24)

100% (24/24)

4d

1

0

100% (24/24)

100% (24/24)

4p

1

0

100% (24/24)

100% (24/24)

4q

1

0

100% (24/24)

96% (23/24)

5a

10

0

100% (70/70)

99% (69/70)

6

10

0

100% (70/70)

84% (59/70)

6a/b

3

0

100% (25/25)

83% (19/23)

6c

1

0

98% (47/48)

85% (41/48)

HCV 13 (Gt 4)

0

1

75% (3/4)

NT

HCV 96-2 (Gt 6a)

0

1

100% (4/4)

NT

HCV 38144-182 (Gt 4)

0

1

75% (3/4)

NT

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 28

HBV Összesen 58 HBV klinikai minta (10x A genotípus, 6x B genotípus, 10x C genotípus, 10x D genotípus, 10x E genotípus, 3x F genotípus, 2x G genotípus, 2x H genotípus és 5 pre-core mutáns) mennyiségi meghatározását végezték el a COBAS® TaqMan HBV Test for Use with the High Pure System segítségével, majd a minták normál, vírus-negatív humán plazmával készült, a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 HBV kimutatási határának (LOD) 3X és 1X hígításait vizsgálták úgy, hogy legalább 7 ismétlést vizsgáltak minden egyes mintából a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. A HBV pre-core mutáns minták mennyiségi meghatározását a COBAS® AmpliPrep/ COBAS® TaqMan® HBV Teszt segítségével végezték. Mind az 58 mintát kimutatták mind 3X, mind 1X LOD hígítás mellett. 12. táblázat HBV minták Kimutatva 3X LOD mellett

Kimutatva 1X LOD mellett

10

90% (63/70)

84% (59/70)

6

100% (59/59)

76% (63/83)

C*

10

70% (86/122)

54% (79/146)

D

10

91% (71/78)

73% (57/78)

E

10

96% (67/70)

96% (68/71)

F

3

90% (43/48)

65% (31/48)

Genotípus

Klinikai minták

A B

G

2

100% (24/24)

96% (23/24)

H

2

100% (24/24)

92% (22/24)

Pre-core mutánsok

5

100% (35/35)

86% (30/35)

* A HBV genotípus C izoláció 6× kimutatási határ (LOD) koncentráció mellett 71% (15/21), 9× LOD mellett 100% (21/21) reaktív volt. Szerokonverziós panelek A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 teljesítményét a szerokonverzió alatt HIV-1 M csoport, HCV és HBV esetében határozták meg 32, kereskedelmi forgalomban kapható szerokonverziós panel segítségével. HIV-1 O csoportú és HIV-2 szerokonverziós panel nem áll rendelkezésre. HIV-1 szerokonverziós panelek Tíz, kereskedelmi forgalomban kapható, plazmaferezis donoroktól HIV-antitest szerokonverzió során levett szerokonverziós panelt vizsgáltak a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. Minden mintát tisztán és 1:6 hígításban vizsgáltak, 6 tagú donorcsoport vizsgálatát szimulálva. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 eredményeit összehasonlították az Abbott PRISM® HIV O Plus vizsgálat, az Abbott PRISM anti-HIV 1/2 és a cobas® TaqScreen MPX Teszt eredményeivel. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 10-ből 10 panel esetében kimutatta a HIV RNS-t átlagosan 13,2 nappal a HIV antitestnek az Abbott PRISM HIV O Plus vizsgálattal, illetve az Abbott PRISM anti-HIV 1/2 vizsgálattal való kimutathatóságát megelőzően. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 10-ből 5 panel esetében ugyanazon a panel tagon, 10-ből 1 panel esetében átlag 5 nappal korábban, és 10-ből 4 panel esetében átlag 4 nappal később mutatta ki a HIV RNS-t, mint a cobas® TaqScreen MPX Teszt. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 10-ből 10 panel esetében kimutatta a HIV RNS-t átlagosan 13,4 nappal a HIV antitestnek az Abbott PRISM HIV O Plus vizsgálattal, illetve az Abbott PRISM anti-HIV 1/2 vizsgálattal való kimutathatóságát megelőzően. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 10-ből 7 panel esetében ugyanazon a panel tagon, 10-ből 1 panel esetében átlag 3 nappal korábban, és 10-ből 2 panel esetében átlag 3 nappal később mutatta ki a HIV RNS-t, mint a cobas® TaqScreen MPX Teszt. 06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 29

Azokat a paneleket, amelyek az első vértől kezdve konzisztensen reaktívnak mutatkoztak a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt során, kihagyták a HIV-antitestnél korábbi kimutatást jelző napok minimális, átlagos és maximális számának összegző számítása során. 13. táblázat A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 teljesítménye HIV szerokonverziós panelekkel Napok a HIV-1/2 antitest vagy HIV RNS kimutatása előtt Abbott PRISM HIV O Plus: Abbott PRISM anti-HIV 1/2: cobas® TaqScreen MPX: HIV Tiszta Tiszta Tiszta, 1:6 szerokonverziós panel cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 Tiszta

1:6

Tiszta

1:6

Tiszta

1

14

9

14

9

5

1:6 0

2

14

14

14

14

0

-2

3

12

12

12

12

-2

0

4

14

14

14

14

0

0

5

11

11

11

11

-3

-4

6*

14

14

14

14

-7*

0

7

9

9

9

9

0

0

8

14

14

14

14

0

0

9

15

15

15

15

0

3

10

15

22

15

22

4

0

Minimum

9

9

9

9

-7

-4

Átlag

13,2

13,4

13,2

13,4

-1,1

-0,3

Maximum

15

22

15

22

5

3

* HBV koinfekciót mutattak ki a tiszta és az 1:6 hígítású mintákban a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével ugyanazon a paneltagokon, mint ahol a cobas® TaqScreen MPX Teszt „HIV” NAT reaktivitást mutatott. Két másik panel intermittáló HBV reaktivitást mutatott, de nem voltak hatással a HIV NAT kimutatás időpontjára. HCV szerokonverziós panelek Tizenkét, kereskedelmi forgalomban kapható, plazmaferezis donoroktól HCV antitest szerokonverzió során levett szerokonverziós panelt vizsgáltak a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. Minden mintát tisztán és 1:6 hígításban vizsgáltak, donorcsoportok vizsgálatát szimulálva. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 eredményeit összehasonlították az Abbott PRISM® HCV vizsgálat és az ORTHO® HCV Version 3.0 ELISA Test System, valamint a cobas® TaqScreen MPX Teszt eredményeivel. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 12-ből 12 panel esetében kimutatta a HCV RNS-t átlagosan 29,5 nappal a HCV antitestnek az Abbott PRISM HCV vizsgálattal, illetve az ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System vizsgálattal való kimutathatóságát megelőzően. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 12-ből 12 panel esetében ugyanazon a panel tagon mutatta ki a HCV RNS-t, mint a cobas® TaqScreen MPX Teszt. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 12-ből 12 panel esetében kimutatta a HCV RNS-t átlagosan 29,5 nappal a HCV antitestnek az Abbott PRISM HCV vizsgálattal, illetve az ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System vizsgálattal való kimutathatóságát megelőzően. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 12-ből 12 panel esetében ugyanazon a panel tagon mutatta ki a HCV RNS-t, mint a cobas® TaqScreen MPX Teszt. 06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 30

Azokat a paneleket, amelyek az első vértől kezdve konzisztensen reaktívnak mutatkoztak a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt során, kihagyták a HCV-antitestnél korábbi kimutatást jelző napok minimális, átlagos és maximális számának összegző számítása során. 14. táblázat A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 teljesítménye HCV szerokonverziós panelekkel Napok a HCV-antitest vagy HCV RNS kimutatása előtt Abbott PRISM HCV: Tiszta

ORTHO HCV Version 3.0 ELISA Test System: Tiszta

cobas® TaqScreen MPX: Tiszta, 1:6

HCV szerokonverziós panelek

Megjegyzések

Tiszta

1:6

Tiszta

1:6

Tiszta

1:6

1

A,B

12

12

23

23

0

0

2

A,B

30

30

32

32

0

0

23

23

23

23

0

0 0

cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0

3 4

A,B

25

25

25

25

0

5

A,B

28

28

28

28

0

0

6

A,B

4

4

4

4

0

0

7

A,B

11

11

11

11

0

0

8

A,B

24

24

24

24

0

0

9

A,B

7

7

18

18

0

0

10

33

33

33

33

0

0

11

32

32

32

32

0

0 0

12

A. B.

30

30

30

30

0

Minimum

23

23

23

23

0

0

Átlag

29,5

29,5

29,5

29,5

0

0

Maximum

33

33

33

33

0

0

A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 tiszta eredménye reaktív volt az első vérsorozat minden tiszta mintája esetében; az összegző számításokból ezeket kihagyták. ® A cobas TaqScreen MPX Teszt, v2.0 1:6 hígítású eredménye reaktív volt az első vérsorozat minden tiszta mintája esetében; az összegző számításokból ezeket kihagyták.

HBV szerokonverziós panelek Tíz, kereskedelmi forgalomban kapható, plazmaferezis donoroktól HBsAg szerokonverzió során levett szerokonverziós panelt vizsgáltak a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 segítségével. Minden mintát tisztán és 1:6 hígításban vizsgáltak, 6 tagú donorcsoport vizsgálatát szimulálva. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 eredményeit összehasonlították az Abbott PRISM® HBsAg vizsgálat és az ORTHO® HBsAg ELISA Test System 3, valamint a cobas® TaqScreen MPX Teszt eredményeivel. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 10-ből 9 panel esetében kimutatta a HBV DNS-t átlagosan 14,9 nappal a HBsAg-nek az Abbott PRISM HBsAg vizsgálattal való kimutathatóságát megelőzően, és 10-ből 1 panel esetében 14 nappal utána. Az ORTHO HBsAg ELISA Test System 3 vizsgálattal összehasonlítva, a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 10-ből 10 panel esetében kimutatta a HBV DNS-t átlagosan 21,9 nappal a HBsAg kimutathatósága előtt. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a tiszta mintákban 10-ből 7 panel esetében ugyanazon a panel tagon, 10-ből 3 panel esetében pedig átlag 4,3 nappal később mutatta ki a HBV DNS-t, mint a cobas® TaqScreen MPX Teszt. 06327052001-04HU Doc Rev. 4.0 31

A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 10-ből 6 panel esetében kimutatta a HBV DNS-t átlagosan 13,7 nappal a HBsAg-nek az Abbott PRISM HBsAg vizsgálattal való kimutathatóságát megelőzően, 10-ből 3 panel esetében ugyanazon a paneltagon és 10-ből 1 panel esetében 14 nappal utána. Az ORTHO HBsAg ELISA Test System 3 vizsgálattal összehasonlítva, a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 10-ből 10 panel esetében kimutatta a HBV DNS-t átlagosan 16,1 nappal a HBsAg kimutathatósága előtt. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 a 6-szoros hígítású mintákban 10-ből 6 panel esetében ugyanazon a panel tagon, 10-ből 3 panel esetében átlag 8 nappal korábban, és 10-ből 1 panel esetében átlag 10 nappal később mutatta ki a HBV DNS-t, mint a cobas® TaqScreen MPX Teszt. Azokat a panelokat, amelyek az első vértől kezdve konzisztensen reaktívnak mutatkoztak a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt során, kihagyták a HBsAg-nál korábbi kimutatást jelző napok minimális, átlagos és maximális számának összegző számítása során. 15. táblázat A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 teljesítménye HBV szerokonverziós panelekkel Napok a HBsAg vagy HBV DNS kimutatása előtt HBV szerokonverziós panelek

Megjegyzések

1

A

cobas® TaqScreen MPX: Tiszta, 1:6

cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 Tiszta

1:6

Tiszta

1:6

Tiszta

1:6

3

0

25

22

0

4

2

12

12

19

19

0

0

3

8

0

19

11

-2

-10

4

-14

-14

14

14

0

0

5

22

13

22

13

0

13

6

A.

ORTHO HBsAg Abbott PRISM HBsAg: ELISA Test System 3: Tiszta Tiszta

7

0

23

16

0

0

7

A

20

8

20

8

-7

0

8

11

11

11

11

0

0

9

28

14

30

16

-4

7

10

33

24

40

31

0

0

Minimum

-14

-14

11

8

-7

-10

Átlag

15

6,8

21,9

16,1

-1,6

1,4

Maximum

33

24

40

31

0

13

A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 tiszta eredménye reaktív volt az első vérsorozat minden tiszta mintája esetében; az összegző számításokból ezeket kihagyták.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 32

Analitikai specificitás – Potenciálisan keresztreagáló és zavarást okozó mikroorganizmusok A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 analitikai specificitását egy 20 mikroorganizmust, ezen belül 13 vírusizolátumot, 6 baktériumtörzset és egy élesztőizolátumot 106 partikulum, kópia, illetve PFU/ml koncentrációban tartalmazó panel vizsgálatával értékelték. A mikroorganizmusokat normál, vírus-negatív humán plazmához adták, és HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélkül, illetve hozzáadásával, minden vírus esetében a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 3X LOD hígítása mellett vizsgálták. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 valamennyi, HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélküli mikroorganizmus-minta esetében nem reaktív eredményt adott, kivéve egy mintát, ami kezdetben reaktív, az ismételt vizsgálat során azonban nem reaktív eredményt adott. A vizsgált mikroorganizmusok nem adtak keresztreakciót a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel. Valamennyi, HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadásával készített mikroorganizmus-minta reaktív eredményt adott. A vizsgált mikroorganizmusok nem zavarják a cobas® TaqScreen MPX v2.0 tesztet. 16. táblázat Vizsgált mikroorganizmusok Analitikai specificitás – Vizsgált mikroorganizmusok Adenovírus 5 Humán cytomegalovírus Epstein-Barr vírus Varicella-zoster vírus Herpes simplex vírus 1

Humán herpes vírus 6 A Humán T-lymphotrop vírus I Influenzavírus A West Nile vírus Dengue vírus 1, Hawaii törzs

Candida albicans Propionibacterium acnes Staphylococcus epidermidis Staphylococcus haemolyticus Escherichia coli

Herpes simplex vírus 2 Hepatitis G vírus

Chikungunya vírus Staphylococcus aureus

Streptococcus viridans

Analitikai specificitás – Egyéb kórállapotok Minden egyes, a következőkben felsorolt betegségkategóriára (humán cytomegalovírus, Epstein-Barr vírus, herpes simplex vírus 1, herpes simplex vírus 2, humán T-sejtes lymphotrop vírus 1, humán T-sejtes lymphotrop vírus 2, humán T-sejtes lymphotrop vírus 1/2, hepatitis A vírus, West Nile vírus és parvovírus B19) vizsgáltak plazmamintákat HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélkül és hozzáadásával, minden vírus esetében a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 3X LOD hígítása mellett. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 valamennyi, HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélküli kórállapot-minta esetében nem reaktív eredményt adott. A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt reaktív eredményt adott az összes kórállapotú mintánál HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV és HBV hozzáadása esetén, kivéve 1 esetben a 10 HTLV l/ll minta közül, ahol a HCV nem volt reaktív. Ezek a kórállapotok nem zavarják a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 érzékenységét, illetve specificitását.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 33

Potenciálisan zavaró anyagok Endogén zavarást okozó anyagok Abnormálisan magas szintű trigliceridet (max. 3 300 mg/dl), hemoglobint (max. 500 mg/dl), nem-konjugált bilirubint (50 mg/dl), albumint (max. 9,6 g/dl), illetve humán DNS-t (max. 0,4 mg/dl) tartalmazó plazmamintákat vizsgáltak HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélkül és hozzáadásával, minden vírus esetében a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 3X LOD hígítása mellett. A felsorolt anyagok nem zavarják a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 érzékenységét, illetve specificitását. Abnormálisan nagy mennyiségben hozzáadott vörösvértesteket (max. 10% v/v) tartalmazó plazmamintákat vizsgáltak HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélkül és hozzáadásával, minden vírus esetében a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 3X LOD hígítása mellett. A plazma 2,5% (v/v) vörösvértest tartalma nem zavarta a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 vírusérzékenységét, illetve specificitását. A plazma 5,0% (v/v) vörösvértest tartalma csökkentette a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 HCV kimutatásának érzékenységét. A plazma 7,5% (v/v) vörösvértest tartalma zavarta a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 HBV és HCV kimutatásának érzékenységét. A HIV vírustargetek kimutatása 97%-os volt 10% vörösvértestet tartalmazó plazmában. Vírustargetek 3X LOD melletti jelenlétében a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 belső kontroll (IC) kimutatásának érzékenysége nem csökkent 1,0% (v/v) vörösvértest tartalmú plazmában. Vírustargetek jelenléte nélkül a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 belső kontroll (IC) kimutatásának érzékenysége nem csökkent 2,5% (v/v) vörösvértest tartalmú plazmában. A belső kontroll (IC) a vizsgálati folyamat valamennyi lépését (minta-előkészítés, amplifikálás és kimutatás) monitorozza, és a vizsgálat teljesítményét befolyásoló helyzetekben válik nem kimutathatóvá. Exogén zavaró anyagok Abnormálisan nagy koncentrációjú paracetamol (1324 µmol/l), acetil-szalicilsav (3,62 mmol/l), aszkorbinsav (342 µmol/l), atorvastatin (600 µg Eq/l), fluoxetin (11,2 µmol/l), ibuprofen (2425 µmol/l), loratadin (0,78 µmol/l), nadolol (3,88 µmol/l), naproxen (2170 µmol/l), paroxetin (3,04 µmol/l), fenilefrin HCl (491 µmol/l) és sertralin (1,96 µmol/l) tartalmú humán plazmamintákat vizsgáltak HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV hozzáadása nélkül és hozzáadásával, minden vírus esetében a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 3X LOD hígítása mellett. Az exogén anyagok nem zavarják a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 érzékenységét, illetve specificitását. Teljesítményjellemzők ÉLŐ DONOR MINTÁK Reprodukálhatóság A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt reprodukálhatóságát a cobas s 201 rendszeren egy 32 tagú panellel állapították meg, amely a HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV és HBV mindegyikére 2 negatív plazmamintát és 2 pozitív plazmamintát tartalmazott. A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt kimutatási határ (LOD) koncentrációja az egyes vírusoknál közelítőleg 0,5×, 1,0× és 3,0× volt. A kezelők 3 telephelyen, telephelyenként 1 cobas s 201 rendszerrel végeztek vizsgálatokat 5 napon keresztül mind a 3 cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt-reagenstétellel. A panel napi kétszeri érvényes futtatásával paneltag-vírustípusonként akár 180 tesztet teljesítettek. Az összes érvényes tételt és vizsgálati eredményt a reaktív teszteredmények százalékos arányának kiszámításával és a negatív kontrollpanel-tagokra vonatkozó nem reaktív eredmények százalékos arányának kiszámításával minden paneltagra analizálták (17–19. táblázat). A negatív kontrollpaneltagok 168 vizsgálatból 167 alkalommal adtak negatív eredmény, ami 99,4%-os egyezést jelent. A vizsgálat bebizonyította, hogy a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt a cobas s 201 rendszeren a legkülönfélébb esetekben (készlet, telephely, reagenstétel, vizsgálati nap, futtatás) és mind az öt vizsgált analit esetben reprodukálható eredményt biztosít.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 34

17. táblázat cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt – reprodukálhatósági eredmények a pozitív paneltagok tétel, telephely/készülék, futtatás és vizsgálati nap szerinti összesítésben – 0,5× LOD víruskoncentráció mellettb Víruskoncentráció 0,5× LODb HIV-1 M csop. 1 2 3

Tétel Hely/készülék 71,7% 43/60 1 87,9% 51/58 1 91,4% 53/58 2 84,7% 50/59 2 85,5% 47/55 3 75,0% 42/56

HIV-1 O csop.b 1 2 3

64,4% 64,4% 79,6%

38/59 1 38/59 2 43/54 3

72,9% 73,7% 60,7%

43/59 1 42/57 2 34/56

a) b)

Megfelelési aránya

HIV-2

1 2 3

81,7% 80,0% 82,8%

49/60 1 48/60 2 48/58 3

90,0% 81,4% 72,9%

54/60 1 48/59 2 43/59

HCV

1 2 3

73,3% 82,5% 84,7%

44/60 1 47/57 2 50/59 3

82,8% 81,7% 75,9%

48/58 1 49/60 2 44/58

HBV

1 2 3

73,3% 78,3% 69,0%

44/60 1 47/60 2 40/58 3

79,7% 74,6% 66,7%

47/59 1 44/59 2 40/60

Futás 84,5% 71/84 1 80,9% 72/89 2 3 4 5 69,8% 60/86 1 68,6% 59/86 2 3 4 5 86,5% 77/89 1 76,4% 68/89 2 3 4 5 80,7% 71/88 1 79,5% 70/88 2 3 4 5 75,3% 67/89 1 71,9% 64/89 2 3 4 5

Nap 84,8% 85,3% 75,0% 91,4% 77,1% 63,6% 74,3% 60,0% 68,6% 79,4% 77,1% 83,3% 75,0% 83,3% 88,6% 76,5% 83,3% 80,6% 80,0% 80,0% 69,4% 71,4% 72,2% 82,9% 72,2%

28/33 29/34 27/36 32/35 27/35 21/33 26/35 21/35 24/35 27/34 27/35 30/36 27/36 30/36 31/35 26/34 30/36 29/36 28/35 28/35 25/36 25/35 26/36 29/35 26/36

Megfelelési arány = pozitív eredmények/összes érvényes eredmény száma A HIV-1 O csoport 3×, 1× és 0,5× paneltagjainak ténylegesen észlelt koncentrációja 1,7×, 0,7×, illetve 0,4× volt.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 35

18. táblázat cobas® TaqScreen MPX teszt 2.0 verziója – reprodukálhatósági eredmények a pozitív paneltagok tétel, telephely/készülék, futtatás és vizsgálati nap szerinti összesítésben – 1× LOD víruskoncentráció mellettb Víruskoncentráció 1,0× LODb HIV-1 M csop. 1 2 3

Tétel Hely/készülék 94,8% 55/58 1 96,6% 57/59 1 88,1% 52/59 2 94,7% 54/57 2 100,0% 55/55 3 91,1% 51/56

HIV-1 O csop.b 1 2 3

79,7% 91,2% 88,5%

a) b)

Megfelelési aránya

47/59 1 52/57 2 46/52 3

89,7% 84,9% 84,2%

52/58 1 45/53 2 48/57

HIV-2

1 2 3

98,3% 58/59 1 96,4% 54/56 2 100,0% 58/58 3

100,0% 60/60 1 98,2% 55/56 2 96,5% 55/57

HCV

1 2 3

94,8% 98,2% 89,5%

55/58 1 55/56 2 51/57 3

98,3% 92,7% 91,2%

58/59 1 51/55 2 52/57

HBV

1 2 3

93,3% 96,7% 94,7%

56/60 1 58/60 2 54/57 3

93,1% 96,7% 94,9%

54/58 1 58/60 2 56/59

Futás 92,0% 80/87 1 96,5% 82/85 2 3 4 5 88,1% 74/84 1 84,5% 71/84 2 3 4 5 100,0% 87/87 1 96,5% 83/86 2 3 4 5 91,8% 78/85 1 96,5% 83/86 2 3 4 5 93,3% 83/89 1 96,6% 85/88 2 3 4 5

Nap 93,3% 100,0% 88,6% 94,3% 94,4% 81,3% 85,7% 81,8% 88,6% 93,9% 100,0% 94,4% 97,1% 100,0% 100,0% 88,2% 97,1% 94,1% 94,3% 97,0% 97,1% 91,7% 94,4% 91,4% 100,0%

28/30 36/36 31/35 33/35 34/36 26/32 30/35 27/33 31/35 31/33 33/33 34/36 33/34 35/35 35/35 30/34 34/35 32/34 33/35 32/33 33/34 33/36 34/36 32/35 36/36

Megfelelési arány = pozitív eredmények/összes érvényes eredmény száma A HIV-1 O csoport 3×, 1× és 0,5× paneltagjainak ténylegesen észlelt koncentrációja 1,7×, 0,7×, illetve 0,4× volt.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 36

19. táblázat cobas® TaqScreen MPX teszt 2.0 verziója – reprodukálhatósági eredmények a pozitív paneltagok tétel, telephely/készülék, futtatás és vizsgálati nap szerinti összesítésben – 3× LOD víruskoncentráció mellettb Víruskoncentráció 3,0× LODb HIV-1 M csop. 1 2 3

Tétel Hely/készülék 98,3% 59/60 1 100,0% 60/60 1 98,2% 55/56 2 98,3% 58/59 2 100,0% 60/60 3 98,2% 56/57

HIV-1 O csop.b 1 2 3

100,0% 60/60 1 100,0% 55/55 2 98,2% 55/56 3

98,3% 58/59 1 100,0% 55/55 2 100,0% 57/57

a) b)

Megfelelési aránya

HIV-2

1 2 3

100,0% 60/60 1 100,0% 60/60 2 100,0% 58/58 3

100,0% 59/59 1 100,0% 59/59 2 100,0% 60/60

HCV

1 2 3

100,0% 60/60 1 100,0% 57/57 2 100,0% 58/58 3

100,0% 59/59 1 100,0% 58/58 2 100,0% 58/58

HBV

1 2 3

100,0% 60/60 1 98,25 55/56 2 98,35 57/58 3

100,0% 58/58 1 100,0% 59/59 2 96,5% 55/57

Futás 100,0% 88/88 1 97,7% 86/88 2 3 4 5 98,8% 83/84 1 100,0% 87/87 2 3 4 5 100,0% 88/88 1 100,05 90/90 2 3 4 5 100,0% 87/87 1 100,0% 88/88 2 3 4 5 97,6% 83/85 1 100,0% 89/89 2 3 4 5

Nap 97,2% 100,0% 100,0% 97,1% 100,0% 100,0% 100,0% 97,1% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 97,0% 100,0% 100,0% 100,0% 97,1%

35/36 36/36 34/34 33/34 36/36 33/33 35/35 33/34 36/36 33/33 35/35 36/36 36/36 36/36 35/35 34/34 36/36 34/34 36/36 35/35 32/33 36/36 36/36 35/35 33/34

Megfelelési arány = pozitív eredmények/összes érvényes eredmény száma A HIV-1 O csoport 3×, 1× és 0,5× paneltagjainak ténylegesen észlelt koncentrációja 1,7×, 0,7×, illetve 0,4× volt.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 37

Klinikai specificitás Reaktivitás teljes vér donor populációban A mintákat 5 vizsgálati telephelyen toborzott hozzájáruló vérdonoroktól gyűjtötték. A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel két vizsgálati algoritmus szerint végeztek vizsgálatot; az egyik 1 csoportos (egyszintű vizsgálatot igénylő), a másik 6 csoportos volt (egyszintű vizsgálatot igénylő a nem reaktív elsődleges csoportokra és 2 szintű vizsgálatot – elsődleges csoport és egyenkénti donoreredmény-vizsgálat – a reaktív elsődleges csoportra). A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel összesen 77 020 leadott mintát vizsgáltak, és az összesített klinikai specificitási eredmény 99,992% volt (77 014/77 020; 95% CI = 99,983–99,996). A 6 vizsgálatos mintacsoportban a klinikai specificitás 99,998% volt (63 768/63 769; 95% CI: 99,991–100%). A 6-os csoport 5 hamis pozitív eredménye esetén (20. táblázat), amely a 6-os csoport klinikai specificitási számításában szerepelt (10 499/10 504; 99,952%), a csoportok közül a 6-os tesztelési algoritmus szerinti egyenkénti donoreredmény-vizsgálatot követően négy volt nem reaktív. Az 1 vizsgálatos mintacsoportban a klinikai specificitás 99,962% volt (13 246/13 251; 95% CI: 99,912–99,984%). Az érvénytelen tételek aránya a cobas® TaqScreen MPX v2.0 tesztben a 6-os csoportos kezdeti tesztelési mintákból 4,7%, míg az egyenkénti mintákból 5,4% volt. Az érvénytelen eredmények aránya csoportos mintáknál 1,4%, míg egyenkénti mintáknál 0,8% volt. A vizsgálatban NAT-eredményű esetet nem azonosítottak. 20. táblázat Csoportreaktivitás önkéntes vérdonoroknál Kategória

Csoportok száma

Vizsgált csoportok százaléka

Vizsgált csoportok

10 519

100

Nem reaktív csoportok

10 499

99,81

Reaktív csoportok

20

0,19

Reaktív csoportok pozitív donorstátusz mellett

15

0,14

Reaktív csoportok negatív donorstátusz mellett (hamis pozitív)

5

0,05

Reaktivitás a forrásplazma donor populációban Összesen 103 980 érvényes minta bizonyult egyenként negatívnak anti-HCV, anti-HIV-1/2 és HBsAg tekintetében. Ezeket 14 776 különféle donortól gyűjtötték, és 96-os csoportokban tesztelték mind a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel, mind a cobas® TaqScreen MPX teszttel, és egyenként a COBAS® AmpliScreen (CAS) teszttel HBV, HCV és HIV tekintetében. A kezdeti mintastátuszt a cobas® TaqScreen MPX teszt, a CAS tesztek és a negatív szerológiai státusz alapján állapították meg. Összesen 1104 érvényes csoportot teszteltek a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel, amelyből 1068 (96,7%) nem volt reaktív és 36 (3,3%) reaktív volt. Az 1068 nem reaktív csoportból 1067 csoport tartalmazott különféle státuszú negatív mintákat és 1 csoport tartalmazott egy pozitív mintastátuszú mintát (21. táblázat). Ehhez a HBV pozitív mintastátuszú mintához a csoport egy cobas® TaqScreen MPX teszt reaktív mintájából származott, amelyet egy további cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel és egy COBAS® AmpliScreen HBV teszttel igazoltak, de a donor nem kívánt utánkövetést, és előfordulhat, hogy rejtett HBV-fertőzött. 17 különféle donor adott 35 reaktív mintát; a 17 donor közül 3 mintája eredményezett hamis reaktív eredményt a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt eredményében (3 HCV). Ebből a 3 donorból 1 nem kívánt utánkövetést, és 2 utánkövetésre elveszett.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 38

A 35 reaktív mintából a többi 32 mintát tizennégy donor szolgáltatta. Ebből a 14 donorból 8 részt vett az utánkövetésen, 1 nem kívánt utánkövetést és 5 utánkövetésre elveszett. A 8 utánkövetett donor közül egy donor szerokonverziót mutatott anti-HIV-1/2 tekintetében, és 5 donor konverziót mutatott anti-HCV tekintetében. Egy elveszett utánkövetésűnek számolt donor egy következő véradáskor szerokonverziót mutatott anti-HCV tekintetében. Egy donor továbbá következetesen reaktívnak bizonyult HCV-re, és egy donor következetesen reaktívnak bizonyult HBV-re az utánkövetésben. Ugyanakkor egyik donor sem mutatott szerokonverziót az utánkövetési időszak végéig. Az elveszett utánkövetésű 5 donor közül 4 donor ismételten reaktívnak bizonyult az első és a későbbi véradáskor HCV-re, és közülük egy szerokonverziót mutatott anti-HCV tekintetében, amit azt fentebb említettük. Az ötödik elveszett utánkövetésű donor potenciálisan reaktív volt, mert a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt, a cobas® TaqScreen MPX teszt, valamint a további cobas® TaqScreen MPX teszt/CAS reaktív volt HBV-re. Az utánkövetéstől elzárkózó donor eredetileg csak a cobas® TaqScreen MPX teszt szerint volt reaktív, majd egy külön további cobas® TaqScreen MPX v2.0 és CAS teszten is HBV-reaktívnak bizonyult. Összességében tehát a 14 776 különböző vizsgált donorból 1 HIV-1 ablakperiódus-fertőzés, 10 HCV ablakperiódus-fertőzés és 1 lehetséges rejtett HBV-fertőzés volt igazolható. A vizsgálatban „csak NAT" eredmény 1:14 776 volt HIV-1, 1:1478 volt HCV és 1:14 776 volt HBV tekintetében a forrásplazmamintákban. A szerokonverziót mutató 7 donor közül a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt szerint 6 volt HCVreaktív és 1 volt HIV-reaktív. A HCV-reaktív donorok közül 1 mutatott szerokonverziót 9 nappal az első reaktív cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt után, míg a többi 5 donor 40–55 nappal az első reaktív cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt után mutatott szerokonverziót. Egy donor a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt szerint HIV-reaktív volt, és az első reaktív cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt után 27 nappal mutatott szerokonverziót. 21. táblázat A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt reaktivitása maximum 96 forrásplazmamintából álló csoporttal Csoportok száma

Kategória

Vizsgált csoportok százaléka

A vizsgált 96-osa csoportok összes száma:

1104

100

Nem reaktív csoportokb

1068

96,7

Nem reaktív csoportok csak negatív donorstátusszal

1 067

96,6

Nem reaktív csoportok legalább egy pozitív donorstátusszal

1

0,1

Reaktív csoportok

b

36

3,3

Reaktív csoportok legalább egy pozitív donorstátusszal

30

2,7

Reaktív csoportok csak negatív donorstátusszal (álpozitív csoportok)

6

0,5

a) Megjegyezzük, hogy az 1104 csoportból 301 tartalmazott 96-nál kevesebb mintát. A minták 97%-a (1073) tartalmazott 90 vagy több mintát. ® ® ® b) A minták státuszát egy kezdeti cobas TaqScreen MPX teszt és COBAS AmpliScreen teszt eredményével határozták meg.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 39

A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt forrásplazmacsoportra vonatkozó klinikai specificitását 14 776 különböző donor 103 980 értékelhető mintájának analízisével határozták meg. Értékelhetőnek azok a minták minősültek, amelyek érvényes cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszteredményt, cobas® TaqScreen MPX teszteredményt, valamint COBAS® AmpliScreen HIV-1, HCV és HBV teszteredményt adtak a csoportok vizsgálatakor, és érvényes szerológiai eredményeket (különféle analitokra) a minták egyenkénti tesztelésekor. A fenti 103 980 értékelhető mintából 103 949 negatív mintának bizonyult, amelyből 103 946 a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt szerint nem volt reaktív. Ez 99,997% klinikai specificitást jelent. A 95%-os konfidenciaintervallum 99,972–99,999%. A csoportos vizsgálati algoritmus vagy az utánkövetés eredménye szerint hat hamis reaktív cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszteredményű 96-os reaktív csoport tartalmazta az összes nem reaktív cobas® TaqScreen MPX v2.0 mintát. A 14 776 különféle vizsgált donorból 14 763 volt negatív státuszú és 3 adott hamis reaktív eredményt, tehát a specificitás (donorszinten) 99,980% (95% CI: 99,940–99,993%). Vizsgálatok nagy kockázatú népességben Külső partnerünk gyűjtött mintákat a HIV, HCV, és/vagy HBV szempontjából nagy kockázatú népességbe tartozó személyektől. Nagy kockázatú tényező volt egyebek mellett, de nem kizárólag a tetoválás és testékszer, injektált drog használata, több szexuális partner, tűszúrásos balesetek, vér vagy vértermék transzfúziója, korábbi nemi úton terjedő betegség és dialízis. A nagy kockázatú népességből összesen 570 minta érkezett, amelyeket a 4 telephely között egyenlően osztottunk szét a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt és a cobas® TaqScreen MPX teszt elvégzésére. Minden mintát az RMS-nél panelként készítettek elő: a hígított mintákat manuálisan hígították csoportosított, HIV-1/2, HCV és HBV tekintetében negatív humán plazmával. A vizsgálati helyszíneken a mintákat tisztán és hígítva (1:6) is vizsgálták, így szimulálva a 6-os csoportot a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszten; majd tisztán és hígítva (1:6) vizsgálták, így szimulálva a 6-os csoportot az engedélyezett cobas® TaqScreen MPX teszten. A reaktív cobas® TaqScreen MPX teszteredményű minták célfelbontási tesztje a COBAS® AmpliScreen (HIV-1, HCV, HBV) tesztekkel a cobas® TaqScreen MPX teszt használati utasításában javasolt szabványos mintafeldolgozási munkafolyamatnak megfelelően történt. A tiszta minták közül 567 mintának volt cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt és cobas® TaqScreen MPX teszt szerinti eredménye. A 87 reaktív cobas® TaqScreen MPX teszteredményű tiszta mintából 82 (94,3%) adott reaktív cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszteredményt; ezek közül 71 HCV- és 5 HIV-minta a COBAS® AmpliScreen tesztek szerint is reaktív volt. A többi 6 minta reaktív cobas® TaqScreen MPX v2.0 és cobas® TaqScreen MPX teszteredményt adott, de nem volt reaktív a COBAS® AmpliScreen tesztek szerint. A nem reaktív cobas® TaqScreen MPX teszteredményű 480 tiszta mintából 464 (96,7%) adott nem reaktív cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszteredményt. Összességében 21 minta (3,7%) mutatott eltérést a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt és a cobas® TaqScreen MPX teszt eredményében. A vizsgálatban nem tapasztaltak HBV-reaktív mintát sem a tiszta, sem a hígított minták között. A forrásplazma klinikai specificitására vonatkozó 96-os csoportokban végzett vizsgálatunk eredményei és az ismert pozitív HBV-minták vizsgálata alapján viszont a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt érzékenységet mutatott a HBV jelenlétére. A 22. táblázat a pozitív (köztük a célvírus-specifikus), a negatív és az összesített megfelelési arányt tartalmazza a cobas® TaqScreen MPX v2.0 és a cobas® TaqScreen MPX teszt eredményei között a nagy kockázatú népességből származó 567 tiszta minta esetében.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 40

22. táblázat Megfelelési arány az MPX2 és az MPX teszteredmények között – tiszta minták Egyezés az MPX teszteredményekkel a

Megfelelési arány

Összes minták számab

Egyezés

Eltérés

Százalékbecslés (95% CI)

PPAc

87

82

5

94,3 (87,2, 97,5)

HIV PPA

5

5

0

100,0 (56,6, 100,0)

HCV PPA

71

71

0

100,0 (94,9; 100,0)

HBV PPA

0

0

0

NA (NA, NA)

NPA

480

464

16

96,7 (94,7; 97,9)

OPA

567

546

21

96,3 (94,4; 97,6)

Megjegyzés: MPX2 = cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt; MPX = cobas® TaqScreen MPX teszt; CAS = COBAS® AmpliScreen HIV-1, HCV és HBV teszt, NA = nincs adat a) PPA = pozitív megfelelési arány, NPA = negatív megfelelési arány, OPA = összesített megfelelési arány b) A megfelelési arány számításánál figyelembe vett minták összes száma. c) A PPA számításánál figyelembe vettük, de a HIV PPA, HCV PPA és HBV PPA számításakor kihagytuk azokat a reaktív cobas® TaqScreen MPX teszteredményű mintákat, amelyek a cobas® TaqScreen MPX teszt használati utasításában javasolt szabványos mintafeldolgozási munkafolyamat szerint negatív CAS HIV-1, HCV, HBV teszteredményűek voltak.

A hígított minták közül 570 mintának volt cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt és cobas® TaqScreen MPX teszt szerinti eredménye. A 78 reaktív cobas® TaqScreen MPX teszteredményű hígított minta közül 73 (93,6%) adott reaktív cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszteredményt (23. táblázat). A többi 5 minta a cobas® TaqScreen MPX teszt szerint reaktív volt, de nem volt reaktív a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt szerint, és az 5-ből 4 nem volt reaktív a COBAS® AmpliScreen teszt szerint sem. A 492 nem reaktív cobas® TaqScreen MPX teszteredményű hígított mintából 485 (98,6%) adott nem reaktív cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszteredményt; ezek közül 68 HCV- és 4 HIV-minta a COBAS® AmpliScreen tesztek szerint is reaktív volt. Összességében 12 minta (2,1%) mutatott eltérést a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt és a cobas® TaqScreen MPX teszt eredményében.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 41

23. táblázat Megfelelési arány az MPX2 és az MPX teszteredmények között – hígított minták Egyezés az MPX teszteredményekkel a

Megfelelési arány PPAc

Összes minták számab

Egyezés

Eltérés

Százalékbecslés (95% CI)

78

73

5

93,6 (85,9; 97,2)

HIV PPA

4

4

0

100,0 (51,0; 100,0)

HCV PPA

69

68

1

98,6 (92,2; 99,7)

HBV PPA

0

0

0

NA (NA, NA)

NPA

492

485

7

98,6 (97,1; 99,3)

OPA

570

558

12

97,9 (96,4; 98,8)

Megjegyzés: MPX2 = cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt; MPX = cobas® TaqScreen MPX teszt; CAS = COBAS® AmpliScreen HIV-1, HCV és HBV teszt, NA = nincs adat a) PPA = pozitív megfelelési arány, NPA = negatív megfelelési arány, OPA = összesített megfelelési arány b) A megfelelési arány számításánál figyelembe vett minták összes száma. c) A PPA számításánál figyelembe vettük, de a HIV PPA, HCV PPA és HBV PPA számításakor kihagytuk azokat a reaktív cobas® TaqScreen MPX teszteredményű mintákat, amelyek a cobas® TaqScreen MPX teszt használati utasításában javasolt szabványos mintafeldolgozási munkafolyamat szerint negatív CAS HIV-1, HCV, HBV teszteredményűek voltak.

Szeropozitív és NAT-pozitív népességben végzett vizsgálat Összesen 2949 HIV, HCV és HBV NAT-pozitív mintát teszteltek 4 helyszínen a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel (4 reagenstétel), a cobas® TaqScreen MPX teszttel és a COBAS® AmpliScreen HIV-1 v1.5 teszttel; valamint a COBAS® HCV v2.0 teszttel és COBAS® AmpliScreen HBV teszttel (a továbbiakban gyűjtőnéven CAS). Ezek közül 2799 olyan mintát vizsgáltak tisztán és hígítva (1:6) a cobas s 201 rendszerrel, amely ismert szeropozitív volt HIV (n = 1158), HCV (n = 1137) vagy HBV (n = 504) tekintetében. A cobas® TaqScreen MPX teszt használati utasításában javasolt szabványos mintafeldolgozási munkafolyamatnak megfelelően csak tiszta mintákat vizsgáltak – 2 helyszínen – az engedélyezett CAS tesztekkel. HIV-szeropozitív és HIV NAT-pozitív népesség Tiszta HIV-mintából 1093, míg hígított HIV-mintából 1109 mintának volt értékelhető vizsgálati eredménye (24. táblázat). A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt 1082 (99,0%) tiszta mintánál és 1069 (96,4%) hígított mintánál adott reaktív eredményt. A cobas® TaqScreen MPX teszt 1082 (99,0%) tiszta mintánál és 1064 (95,9%) hígított mintánál adott reaktív eredményt. A cobas® TaqScreen MPX v2.0 és a cobas® TaqScreen MPX teszt eredménye közötti PPA-egyezés tiszta HIV-mintáknál 99,7%, míg hígított HIVmintáknál 98,8% volt.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 42

24. táblázat Az MPX2 és MPX teszteredmények összesített reaktivitásának összevetése HIV-1 ismert pozitív mintáknál MPX-eredmény – tiszta

MPX2-eredmény – tiszta HIV-1 reaktív

Nem reaktív

Összes

HIV-reaktív

1079

3

1082

Nem reaktív

3

8

11

Összes

1082

11

1093

MPX-eredmény – hígított

MPX2-eredmény – hígított HIV-1 reaktív

Nem reaktív

Összes

HIV-reaktív

1051

18

1069

Nem reaktív

13

27

40

Összes

1064

45

1109

Megjegyzés: MPX2 = cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt; MPX = cobas® TaqScreen MPX teszt; CAS = COBAS® AmpliScreen HIV-1, HCV és HBV teszt. Megjegyzés: A határozatlan vagy érvénytelen teszteredményt adó minták ebben az analízisben nem szerepelnek.

HCV-szeropozitív és HCV NAT-pozitív népesség Tiszta HCV-mintából 1123, míg hígított HCV-mintából 1107 mintának volt értékelhető vizsgálati eredménye. A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt 1104 (98,3%) tiszta mintánál és 1091 (98,6%) hígított mintánál adott reaktív eredményt (25. táblázat). A cobas® TaqScreen MPX teszt 1 105 (98,4%) tiszta mintánál és 1 092 (98,6%) hígított mintánál adott reaktív eredményt. A cobas® TaqScreen MPX v2.0 és a cobas® TaqScreen MPX teszt eredménye közötti PPA-egyezés tiszta és hígított HCV-mintáknál egyaránt 99,8% volt.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 43

25. táblázat Az MPX2 és MPX teszteredmények összesített reaktivitásának összevetése ismert HCV-pozitív mintáknál MPX-eredmény – tiszta

MPX2-eredmény – tiszta HCV-reaktív 1103

Nem reaktív 1

Nem reaktív

2

17

19

Összes

1105

18

1123

HCV-reaktív

Összes 1104

MPX-eredmény – hígított

MPX2-eredmény – hígított

HCV-reaktív 1090

Nem reaktív 1

Nem reaktív

2

14

16

Összes

1092

15

1107

HCV-reaktív

Összes 1091

Megjegyzés: MPX2 = cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt; MPX = cobas® TaqScreen MPX teszt; CAS = COBAS® AmpliScreen HIV-1, HCV és HBV teszt. Megjegyzés: A határozatlan vagy érvénytelen teszteredményt adó minták ebben az analízisben nem szerepelnek.

HBV-szeropozitív és HBV NAT-pozitív népesség Tiszta HBV-mintából 483, míg hígított HBV-mintából 495 mintának volt értékelhető vizsgálati eredménye. A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt 493 (100,0%) tiszta mintánál és 490 (99,0%) hígított mintánál adott reaktív eredményt (26. táblázat). A cobas® TaqScreen MPX teszt 483 (100,0%) tiszta mintánál és 486 (98,2%) hígított mintánál adott reaktív eredményt. A cobas® TaqScreen MPX v2.0 és a cobas® TaqScreen MPX teszt eredménye közötti PPA-egyezés tiszta HBV-mintáknál 100%, míg hígított HBV-mintáknál 99,6% volt. 26. táblázat Az MPX2 és MPX teszteredmények összesített reaktivitásának összevetése ismert HBV-pozitív mintáknál MPX2-eredmény – tiszta HBV-reaktív Nem reaktív Összes MPX2-eredmény – hígított HBV-reaktív Nem reaktív Összes

MPX-eredmény – tiszta HBV-reaktív 483 0 483

Nem reaktív 0 0 0

Összes 483 0 483

HBV-reaktív 484 2 486

MPX-eredmény – hígított Nem reaktív 6 3 9

Összes 490 5 495

®

®

®

Megjegyzés: MPX2 = cobas TaqScreen MPX v2.0 teszt; MPX = cobas TaqScreen MPX teszt; CAS = COBAS AmpliScreen HIV-1, HCV és HBV teszt. Megjegyzés: A határozatlan vagy érvénytelen teszteredményt adó minták ebben az analízisben nem szerepelnek.

A vizsgálatban szereplő összes ismert pozitív mintára vonatkozó összesített PPA-egyezés a cobas® TaqScreen MPX v2.0 és a cobas® TaqScreen MPX teszt között tiszta mintáknál ≥99,7%, míg hígított mintáknál ≥98,8% volt.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 44

Klinikai érzékenység HIV-1 O csoport és HIV-2 szeropozitív népesség esetében HIV-1 O csoport szeropozitív népesség Összesen 11 HIV-1 O csoportos szeropozitív mintát vizsgáltak 1:6 hígítás után a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel. A mintákat kis térfogatuk miatt vizsgálták 1:6 hígítás után. A 11-ből összesen 8 minta volt reaktív, ami a szerológiához viszonyítva 72,7% klinikai érzékenységet jelent. A 3 nem reaktív minta víruskoncentrációja nem érte el az Abbot Real Time HIV-1 teszt érzékelési küszöbét (<60 kópia/ml), és a három közül egyik sem adott reaktív cobas® TaqScreen MPX teszteredményt. Összesen 9 HIV-1 O csoportos tenyészetet vizsgáltak cobas® TaqScreen MPX teszttel és cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel. Az összes minta reaktív volt mindkét teszttel. 27. táblázat A cobas® TaqScreen MPX teszt és a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt összehasonlítása HIV-1 O csoportos mintákra vonatkozó összesített reaktivitás szerint Mintaazonosító/hígítás BSE191_1:6 HJ1230_1:6 HJ1357_1:6 HJ162_1:6 HJ1977_1:6 HJ367_1:6 HJ736_1:6 HJ2044_1:6 K1043_1:6 HJ100_1:6 HJ1322_1:6 60736_1:1000 BCF02_1:1000 MVP 5180_1:1000 BV5003_1:2000 BV 5051_1:1000 BV 5024_1:1000 BCF11_1:2000 BCF01_1:2000 BCF06_1:2000

cobas® TaqScreen cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt MPX teszt Eredmények R R R R NR NR R R R R NR NR NR NR R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R

Megjegyzés: R = reaktív; NR = nem reaktív

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 45

HIV-2 szeropozitív népesség A HIV-2 szeropozitív minták közül összesen 312 mintát teszteltek cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszttel és cobas® TaqScreen MPX teszttel. A 312-ből összesen 181 minta volt reaktív, ami a szerológiához képest 58%-os klinikai érzékenységet jelent a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt használatakor (28. táblázat). A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt hasonló érzékenysége derült ki HIV-2 tekintetében is, amikor a mintákat mindkét vizsgálati eljárás előtt 1:6 arányban hígították (29. táblázat). A 131 nem reaktív minta közül egy sem volt reaktív az alternatív mennyiségi NATeljárással (amelyet csak kutatási célra fejlesztett ki Dr. Florence Damond – Hopital Bichat Claude Bernard).38 28. táblázat Párosított pozitív minták és tiszta HIV-2 szeropozitív minták aránya cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt (tiszta) Összes

cobas TaqScreen MPX teszt (tiszta)

Reaktív

Nem reaktív

Pozitív

145

27

172

Negatív

36

104

140

Összes

181

131

312

29. táblázat Párosított pozitív minták és 1:6 hígítású HIV-2 szeropozitív minták aránya cobas® TaqScreen MPX teszt (1:6)

cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt (1:6) Reaktív

Nem reaktív

Összes

107

30

137

Negatív

30

151

181

Összes

137

181

318

Pozitív

KADÁVER DONOR MINTÁK Reprodukálhatóság Húsz különböző kadáver EDTA-s plazmamintát vizsgáltak, melyekhez az egyes vírusoknak és az egyes minták hemolízis mértékének megfelelően megközelítőleg 3X LOD végkoncentrációban adtak hozzá HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV vírustargetet a Roche másodlagos HIV-1 M csoport és HCV standard, Roche elsődleges HIV-1 O csoport és HIV-2 standard, illetve WHO nemzetközi HBV standard (NIBSC 97/746) felhasználásával. A Roche Elsődleges HIV-1 O csoport RNS és HIV-2 RNS standardok kereskedelmi forgalomban kapható vírustörzs kultúrák, PN 2420 (Boston Biomedica, Inc.), katalógusszám 10-27-000 (Advanced Biotechnologies, Inc.). A Roche HIV-1 O csoport és HIV-2 standardok visszavezethetők a következőkre: CBER HIV-1 Subtype RNA Reference Panel #1 Lot O1, illetve CBER HIV-2 RNA Lot Release Panel ISD. HIV-1 O csoport RNS nemzetközi standard jelenleg nem áll rendelkezésre. A Roche másodlagos HIV-1 M csoport RNS standard egy kereskedelmi forgalomban kapható vírustörzs kultúra (HIV-1 LAV 8E5, PN 227, Boston Biomedica, Inc.), amely visszavezethető a WHO első HIV-1 RNS NAT nemzetközi standardra (NIBSC kód 97/650)37. A Roche másodlagos HCV standardot a Roche cég készítette egy kereskedelmi forgalomban kapható klinikai mintából (Millennium Biotech Inc., Ft. Lauderdale, FL), és visszavezethető a WHO második HCV RNS NAT nemzetközi standardra (NIBSC 96/798)33.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 46

A HIV-1 M csoport, HCV és HBV esetében kevert mintát, míg a HIV-1 O csoport és a HIV-2 esetében különálló mintát használtak. 15 mérsékelten hemolizált, illetve 5 nagyfokban hemolizált kadáver mintát használtak. Ezenfelül húsz élő donor EDTA-s mintájához is hozzáadták ezeket a standardokat, megközelítőleg 3X LOD koncentrációnak megfelelő mennyiségben. A kadáver mintákat 1:5 arányban hígították a cobas® TaqScreen kadáver minta oldószerrel, és a kadáver mintákra vonatkozó vizsgálati eljárás szerint vizsgálták. A vizsgálatokat három reagenstétellel és két üzemeltető-készülék párral végezték. Minden érvényes reprodukálhatósági eredményt elemeztek, összehasonlítva az élő donor és kadáver mintákba oltott HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV vagy HBV vírustargetek reaktív arányát a készlettételek között (30. táblázat), valamint a két üzemeltető-készülék pár között (31. táblázat). Kiszámították a pontos kétoldalú p-értéket a kadáver és élő donor minták reaktivitási aránya közötti különbség statisztikai jelentőségének megállapítására. Nem tapasztaltak jelentős eltéréseket. 0,05-nél nagyobb pontos kétoldalú p-értékek nem számítanak statisztikailag jelentősnek. 30. táblázat Kadáver és élő donor minták eredményeinek összehasonlítása reagens-tételenként Vírustarget

HIV-1 M csoport

HIV-1 O csoport*

Általános reaktivitási arány

Donortípus

1. tétel

2. tétel

Kadáver

39/40 97,5%

40/40 100%

39/40 97,5% 118/120 98,3%

Élő

40/40 100%

40/40 100%

40/40 100%

Kadáver

40/40 100%

39/40 97,5%

39/40 97,5% 118/120 98,3%

Élő

40/40 100%

40/40 100%

40/40 100%

120/120 100%

Kadáver

39/40 97,5%

39/40 97,5%

40/40 100%

118/120 98,3%

Élő

40/40 100%

40/40 100%

40/40 100%

120/120 100%

Kadáver

40/40 100%

40/40 100%

40/40 100%

120/120 100%

Élő

40/40 100%

40/40 100%

40/40 100%

120/120 100%

Kadáver

40/40 100%

40/40 100%

40/40 100%

120/120 100%

Élő

40/40 100%

40/40 100%

40/40 100%

120/120 100%

3. tétel

Kétoldalú p-érték élő vs. kadáver minta, targetenként

0,2 120/120 100% 0,2

HIV-2

0,2

HBV

1,0

HCV

1,0

* 3 különböző tételt használtak további 5, nagyfokban hemolizált HIV-1 O csoport minta újravizsgálása miatt.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 47

31. táblázat Kadáver és élő donor minták eredményeinek összehasonlítása készülék-üzemeltető páronként Vírustarget

HIV-1 M csoport

HIV-1 O csoport

Mintatípus

Készüléküzemeltető 1

Készüléküzemeltető 2

Általános reaktivitási arány

Kadáver

58/60 96,7%

60/60 100%

118/120 98,3%

Élő donor

60/60 100%

60/60 100%

120/120 100%

Kadáver

58/60 96,7%

60/60 100%

118/120 98,3%

Élő donor

60/60 100%

60/60 100%

120/120 100%

Kadáver

58/60 96,7%

60/60 100%

118/120 98,3%

Élő donor

60/60 100%

60/60 100%

120/120 100%

Kadáver

60/60 100%

60/60 100%

120/120 100%

Élő donor

60/60 100%

60/60 100%

120/120 100%

Kétoldalú p-érték élő vs. kadáver minta, targetenként

0,2

0,2

HIV-2

0,2

HBV

1,0 Kadáver

60/60 100%

60/60 100%

120/120 100%

Élő donor

60/60 100%

60/60 100%

120/120 100%

HCV

1,0

Analitikai érzékenység kadáver mintákon A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 határhígításos vizsgálatát végezték el HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV és HBV vírustargetekre kadáver mintákon, a következő standardok használatával: Roche elsődleges HIV-1 O csoport és HIV-2 standardok, Roche másodlagos HIV-1 M csoport, HBV és HCV standardok. A Roche másodlagos HBV DNS standard egy kereskedelmi forgalomban kapható vírustörzs kultúra (Eurohep HBV DNA Standard No. 1 genotype A [adw2]), amely visszavezethető a NAT vizsgálatokra szolgáló HBV DNS WHO nemzetközi standardra (NIBSC 97/746)32. A HIV-1 M csoport, HCV és HBV esetében kevert mintát, míg a HIV-1 O csoport és a HIV-2 esetében különálló mintát használtak. Mindegyik vírustargetre hét paneltagot készítettek a HIV-1 M csoport, HCV és HBV, HIV-1 O csoport vagy a HIV-2 vírusstandardok három különböző, mérsékelten hemolizált kadáver EDTA-s poolba való hígításával, amelyeket három különböző tételszámú cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0, készlettel vizsgáltak, illetve két különböző, nagyfokban hemolizált kadáver EDTA-s poolba való hígításával, amelyeket egy tétel cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0, készlettel vizsgáltak. A mérsékelten hemolizált poolok egyéni, vírus negatív, szalmasárgától rózsaszínig terjedő színű kadáver minták csoportosításával készültek. A nagyfokban hemolizált poolok egyéni, vírus negatív, pirostól barnáig terjedő színű kadáver minták csoportosításával készültek. Az eredmények összegzését a 32–41. táblázatok tartalmazzák.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 48

32. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása HIV-1 M csoport vírustargetre mérsékelten hemolizált kadáver mintában HIV-1 M csoport koncentráció (IU/ml) 750 500 375 250 125 75 25

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

61 58 60 58 47 42 18

63 63 63 64 64 64 63

96,8% 92,1% 95,2% 90,6% 73,4% 65,6% 28,6%

95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 90,3% 84,0% 88,2% 82,3% 62,9% 54,7% 19,4%

33. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása HIV-1 M csoport vírustargetre nagyfokban hemolizált kadáver mintában HIV-1 M csoport koncentráció (IU/ml) 750 500 375 250 125 75 25

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

40 40 38 40 25 20 14

40 40 40 40 40 41 43

100,0% 100,0% 95,0% 100,0% 62,5% 48,8% 32,6%

95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 92,8% 92,8% 85,1% 92,8% 48,3% 35,1% 20,9%

34. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása HCV vírustargetre mérsékelten hemolizált kadáver mintában HCV koncentráció (IU/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

120 80 60 40 20 12 4

62 58 61 52 41 22 9

63 63 63 63 64 63 63

98,4% 92,1% 96,8% 82,5% 64,1% 34,9% 14,3%

06327052001-04HU

95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 92,7% 84,0% 90,3% 72,8% 53,1% 25,0% 7,7%

Doc Rev. 4.0 49

35. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása HCV vírustargetre nagyfokban hemolizált kadáver mintában HCV koncentráció (IU/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

120 80 60 40 20 12 4

40 39 39 37 21 17 5

40 40 41 40 40 40 40

100,0% 97,5% 95,1% 92,5% 52,5% 42,5% 12,5%

95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 92,8% 88,7% 85,4% 81,7% 38,5% 29,2% 5,1%

36. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása HBV vírustargetre mérsékelten hemolizált kadáver mintában HBV koncentráció (IU/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

60 40 30 20 10 6 2

63 62 60 52 33 23 12

63 63 63 64 64 63 63

100,0% 98,4% 95,2% 81,3% 51,6% 36,5% 19,0%

95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 95,4% 92,7% 88,2% 71,4% 40,6% 26,4% 11,4%

37. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása HBV vírustargetre nagyfokban hemolizált kadáver mintában HBV koncentráció (IU/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

150 100 75 50 25 15 5

40 40 41 39 33 21 13

40 40 41 40 40 41 43

100,0% 100,0% 100,0% 97,5% 82,5% 51,2% 30,2%

06327052001-04HU

95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 92,8% 92,8% 93,0% 88,7% 69,6% 37,4% 18,9%

Doc Rev. 4.0 50

38. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása HIV-1 O csoport vírustargetre mérsékelten hemolizált kadáver mintában HIV-1 O csoport koncentráció (kópia/ml) 360 240 180 120 60 36 12

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Reaktívak %

60 60 64 61 54 56 29

63 63 64 63 63 63 63

95,2% 95,2% 100,0% 96,8% 85,7% 88,9% 46,0%

95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 88,2% 88,2% 95,4% 90,3% 76,4% 80,1% 35,2%

39. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása HIV-1 O csoport vírustargetre nagyfokban hemolizált kadáver mintában HIV-1 O csoport koncentráció (kópia/ml) 360 240 180 120 60 36 12

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Pozitív (%)

40 36 38 36 37 34 8

40 40 40 40 40 40 40

100,0% 90,0% 95,0% 90,0% 92,5% 85,0% 20,0%

95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 92,8% 78,6% 85,1% 78,6% 81,7% 72,5% 10,4%

40. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása HIV-2 vírustargetre mérsékelten hemolizált kadáver mintában HIV-2 koncentráció (kópia/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Pozitív (%)

600 400 300 200 100 60 20

62 63 58 60 34 28 12

62 64 63 63 63 63 63

100,0% 98,4% 92,1% 95,2% 54,0% 44,4% 19,0%

06327052001-04HU

95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 95,3% 92,8% 84,0% 88,2% 42,9% 33,7% 11,4%

Doc Rev. 4.0 51

41. táblázat Analitikai érzékenység összefoglalása HIV-2 vírustargetre nagyfokban hemolizált kadáver mintában HIV-2 koncentráció (kópia/ml)

Reaktívak száma

Egyéni vizsgálatok száma

Pozitív (%)

600 400 300 200 100 60 20

43 38 38 38 27 17 10

43 39 40 40 40 40 40

100,0% 97,4% 95,0% 95,0% 67,5% 42,5% 25,0%

95% alsó konfidencia határ (egyoldali) 93,3% 88,4% 85,1% 85,1% 53,4% 29,2% 14,2%

Érzékenységi vizsgálat klinikai minták használatával HIV-1 M csoport, HCV, HBV Hatvan, véletlenszerűen kiválasztott kadáver EDTA-s plazmamintát, amely nem reaktív HIV-1 M csoport, HIV-1 O csoport, HIV-2, HCV RNS-re és HBV DNS-re, mérsékelten hemolizált (szalmasárgától rózsaszínűig), illetve nagyfokban hemolizált (pirostól barna színűig) mintaként osztályoztak, és egyenlő arányban 5, csoportonként 12 mintát tartalmazó tesztfertőzött klinikai mintacsoportba soroltak. Minden kadáver mintát az adott csoportokon belül beoltottak a három egyéni, egyszeresen fertőzött HIV-1 M csoport, HCV, vagy HBV ismert koncentrációit tartalmazó klinikai minta egyikével a kimutatási határ háromszorosának (3X LOD) megfelelő végkoncentrációban, az egyes vírusoknak, illetve a hemolízis szintjének megfelelően. A kadáver mintákat manuálisan 1:5 arányban hígították a cobas® TaqScreen kadáver minta oldószerrel, és a kadáver mintákra vonatkozó vizsgálati eljárás szerint vizsgálták. Három reagenstételt használtak a vizsgálat során, és minden csoportot megosztottak a tételek között, így összesen 20 minta jutott targetenként és tételenként. A reaktivitás aránya 93,3% volt (95% CI: 84,07–97,38%) a HIV-1 M csoport esetén, illetve 100% (95% CI: 94–100%) HCV és HBV esetén a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 használatával. A vizsgálat eredményeinek összefoglalása a 42. táblázatban látható.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 52

HIV-1 O csoport, HIV-2 A HIV-1 O csoportú és HIV-2 vírustargetek esetében a Roche elsődleges standardokat használták a kadáver EDTA-s plazmaminták beoltására, megközelítően 3X LOD mennyiségben, az egyes vírusoknak és a hemolízis szintjének (mérsékelten hemolizált, illetve nagyfokban hemolizált) megfelelően. Következésképpen, ezeknek a targeteknek csak egy tesztcsoportja volt. A kadáver mintákat manuálisan 1:5 arányban hígították a cobas® TaqScreen kadáver minta oldószerrel, és a kadáver mintákra vonatkozó vizsgálati eljárás szerint vizsgálták. Három reagenstételt használtak a vizsgálat során, és minden csoportot megosztottak a tételek között, így összesen 12 minta jutott targetenként és tételenként. A tizenkét, HIV-1 O csoportra és HIV-2-re vizsgált minta reaktivitási aránya 91,7% volt [95% CI: 61,5–99,8%) a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 használatával. A vizsgálat eredményeinek összefoglalása a 42. táblázatban látható. Kiszámították a pontos kétoldalú p-értéket az egyes targetek esetében tapasztalt reaktivitási arány és az elméleti 95%-os reaktivitás közötti különbség statisztikai jelentőségének megállapítására. 42. táblázat A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 érzékenységi vizsgálatának összefoglalása mérsékelten hemolizált (MH) és nagyfokban hemolizált (HH) kadáver minták esetében M csoport

HIV-1 O csoport

MH

13/14

HH

6/6

Összes

19/20

MH

14/15

HH

5/5

Összes

19/20

MH

15/16

Reagenstétel Hemolízisszint

1. tétel

2. tétel

3. tétel

Érzékenység

HIV-1

HIV-2

HBV

HCV

4/4

3/3

14/14

14/14

NT

1/1

6/6

6/6

4/4

4/4

20/20

20/20

3/3

3/3

15/15

15/15

1/1

1/1

5/5

5/5

4/4

4/4

20/20

20/20

3/4

3/4

16/16

16/16

HH

3/4

NT

NT

4/4

4/4

Összes

18/20

3/4

3/4

20/20

20/20

Reaktivitási arány % 95% konfidenciaintervallum Kétoldalú p-érték

93,3%*

91,7%*

91,7%*

100%

100%

84,07% 97,38%

61,5% 99,8%

61,5% 99,8%

94,0% 100%

94,0% 100%

0,8

0,9

0,9

1,0

1,0

* Az általános érzékenység kadáver HIV esetén 78/84, 92,9%. Az NT bejegyzés azt jelzi, hogy a vírust nem vizsgálták az illető hemolízisszinten. A HIV-1 O csoportú és HIV-2 minták száma mindegyik vírustarget esetében 12 volt.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 53

Specificitás Kadáver plazma Hatvan egyéni, szeronegatív élő donor (pre-mortem) és hatvan kadáver (39 db. mérsékelten hemolizált, 21 db. nagyfokban hemolizált) EDTA-s plazmamintát három csoportba soroltak, és minden csoport mintáit a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlet három reagenstétele egyikével vizsgálták. A kadáver mintákat manuálisan 1:5 arányban hígították a cobas® TaqScreen kadáver minta oldószerrel, és a kadáver mintákra vonatkozó vizsgálati eljárás szerint vizsgálták. Mind a kadáver, mind az élő donor mintákból hatvan-hatvan érvényes ismétlést vizsgáltak a három készlettel. Az élő donor minták egyike eleinte HCV-re reaktív eredményt adott. A cobas® TaqScreen MPX Teszt segítségével végzett megerősítő vizsgálat nem reaktív eredményt adott, így a mintát nem zárták ki a vizsgálatból. Kiszámították a pontos kétoldalú p-értéket a kadáver és élő donor minták között észlelt nem-reaktív eredmények aránya közötti különbség statisztikai jelentőségének megállapítására. A specificitási vizsgálat eredményeinek összefoglalása a 43. táblázatban látható. 43. táblázat A cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt kadáverspecificitási eredményeinek összesítése

Reagenstétel

Kadáver-donorminták (cobas® TaqScreen kadávermintahígítóval 1:5 arányban hígítva) Érvényes Nem reaktív eredmények eredmények száma száma

Élő donor minták (tiszta) Érvényes eredmények száma

Nem reaktív eredmények száma

1. tétel

20

20

20

20

2. tétel

20

20

20

19

3. tétel

20

20

20

20

Összes

60

60

60

Specificitás 95% konfidenciaintervallum Kétoldalú p-érték

59

100%

98,3%

94,0–100,0%

91,1–100,0% 0,5

Kadáver szérum Hatvan különálló kadáver-szérummintát (46 mérsékelten hemolizált és 14 erősen hemolizált) osztottak három csoportba, és az egyes mintacsoportokat a cobas® TaqScreen MPX v2.0 teszt három különböző tételével vizsgálták. A kadávermintákat cobas® TaqScreen kadáver-mintahígítóval 1:5 arányban hígították, majd kadáver-mintavizsgálati módszerrel tesztelték. A kadáverszérumminták eredménye egyaránt nem reaktív lett. A 95%-os konfidenciaintervallum 94,0–100,0%.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 54

Korreláció a cobas® TaqScreen MPX Teszt és a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 között kadáver minták esetében A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 és a cobas® TaqScreen MPX Teszt teljesítményének értékeléséhez 50 db. mérsékelten hemolizált és 10 db. nagyfokban hemolizált EDTA-s plazma kadáver mintát beoltottak az elsődleges, illetve másodlagos standard vírusmintákkal (leírásuk fentebb olvasható), a kimutatási határ mintegy háromszorosának (3X LOD) megfelelő végkoncentrációban, az egyes vírusoknak, illetve a hemolízis szintjének megfelelően. HIV-1 M csoportú, HCV és HBV vírustargetekkel külön-külön kadáver mintákat oltottak be, és ezeket a cobas® TaqScreen MPX Teszt egy reagenstételével vizsgálták. HIV-1 M csoportú, HCV és HBV vírustargetekkel ugyanazon mintákat, a HIV-1 O csoportú és HIV-2 vírustargetekkel külön-külön kadáver mintákat oltottak be, és ezeket a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 három reagenstételével vizsgálták. Kiszámították a pontos kétoldalú p-értéket az egyes targetek esetében a cobas® TaqScreen MPX Teszt, illetve a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 készlettel való vizsgálat során tapasztalt reaktivitási arányok közötti különbség statisztikai jelentőségének megállapítására. Az eredmények összefoglalása a 44. táblázatban látható. 44. táblázat A cobas® TaqScreen MPX Teszt és a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 érzékenységének összehasonlítása ~3X LOD hígítású egyéni kadáver minták használatával Reaktivitási arány % Target

HIV-1 M csoport

cobas® TaqScreen MPX Teszt

cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0

(60/60) 100%

(58/60) 97%

Kétoldalú p-érték kadáver mintákra, targetenként 0,5

HIV-1 O csoport

(59/60) 98%

(59/60) 98%

0,5

HIV-2

(57/60) 95%

(59/60) 98%

0,6

HBV

(57/60) 95%

(59/60) 98%

0,5

HCV

(59/60) 98%

(59/60) 98%

1,0

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 55

Kadáver szérum és plazma összehasonlítása A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 különböző kadáver minta mátrixok vizsgálatában nyújtott teljesítményének ekvivalenciáját húsz pár kadáver minta vizsgálatával értékelték, a húsz pár mindegyike egy kadáver szérum mintából és egy kadáver K2 EDTA plazmamintából állt, ugyanazon donortól. A donor minták közül tizenöt mérsékelten hemolizált, öt pedig nagyfokban hemolizált volt. Mindegyik kadáver szérum és plazma mintapárt beoltották ~3X LOD koncentrációban HIV-1 M csoportú, HIV-1 O csoportú vagy HIV-2 vírustargettel, majd ezekhez hozzáadtak ~3X LOD koncentrációban HBV és ~3X LOD koncentrációban HCV vírustargetet, majd ezeket (mintánként 10 ismétlésben) a cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 használatával vizsgálták. Kiszámították a pontos kétoldalú p-értéket a kadáver szérum, illetve plazma minták reaktivitási aránya közötti különbség statisztikai jelentőségének megállapítására. Az eredmények összefoglalása a 45. táblázatban látható. 45. táblázat Nagyfokban vagy mérsékelten hemolizált szérum és plazma kadáver minták eredményei

Target

Hemolízisszint

Nagyfokban hemolizált HIV-1 M csoport Mérsékelten hemolizált

Nagyfokban hemolizált HIV-1 O csoport Mérsékelten hemolizált

Nagyfokban hemolizált

Típus

Vizsgálatok Reaktívak Reaktivitási száma száma arány

Plazma

20

19

95%

Szérum

20

20

100%

Plazma

100

97

97%

Szérum

100

100

100%

Plazma

10

10

100%

Szérum

10

9

90%

Kétoldalú p-érték hemolízis-szintre és kadáver minta típusokra, targetenként 0,5

0,10

0,5 Plazma

30

30

100%

Szérum

30

30

100%

1,0

Plazma

20

19

95%

Szérum

20

20

100%

0,5

HIV-2 Mérsékelten hemolizált

Nagyfokban hemolizált

Plazma

20

20

100%

Szérum

20

20

100%

1,0

Plazma

50

50

100%

Szérum

50

50

100%

Plazma

150

150

100%

Szérum

150

150

100%

Plazma

50

50

100%

Szérum

50

50

100%

Plazma

150

149

99,3%

Szérum

150

150

100%

1,0

HBV Mérsékelten hemolizált

Nagyfokban hemolizált

1,0

1,0

HCV Mérsékelten hemolizált

0,5

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 56

HIVATKOZÁSOK 1. Kahn JO, Walker BD. Current Concepts: acute human immunodeficiency virus type 1 infection. N Engl J Med. 1998; 339:33-39. 2. McCutchan FE. Global Epidemiology of HIV. Journal of Medical Virology, 78:S7-S12 (2006). 3. Centers for Disease Control and Prevention (www.cdc.gov). Fact Sheet – Human Immunodeficiency Virus Type 2. October 1998. 4. Reeves JD and Doms WR. Human Immunodeficiency Virus Type 2. Journal of General Virology (2002), 83:1253-1265. 5. Choo Q-L, Weiner AJ, Overby LR, et al. Hepatitis C virus: the major causative agent of viral non-A, non-B hepatitis. Br Med Bull. 1990; 46(2):423-441. 6. Alter HJ. Descartes before the horse: I clone, therefore I am: the hepatitis C virus in current perspective. Ann Intern Med. 1991; 115(8):644-649. 7. Chisari FV, Ferrari C. Viral Hepatitis. In: Nathanson N et al., eds. Viral Pathogenesis, Philadelphia, Lippincott-Raven, 1997: 745-748. 8. Hollinger FB, Liang TJ. Hepatitis B Virus. In: Knipe DM et al., eds. Fields Virology, 4th ed. Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkins, 2001: 2971-3036. 9. Mahoney FJ, Kane M. Hepatitis B Vaccine. In: Plotkin SA and Orenstein WA, eds. Vaccines, 3rd ed. Philadelphia, W.B. Saunders Company, 1999: 158-182. 10. Viral Hepatitis Prevention Board. Prevention and Control of Hepatitis B in the Community. Communicable Disease Series, 1996, 1. 11. World Health Organization. Introduction of Hepatitis B Vaccine into Childhood Immunization Services. Geneva, WHO, 2001 (unpublished document WHO/V&B/01.31 available on request from Department of Vaccines and Biologicals, World Health Organization, 1211 Geneva 27, Switzerland). 12. Murthy KK, Henrard DR, Eichberg JW, et al. Redefining the HIV-infectious window period in the chimpanzee model: evidence to suggest that viral nucleic acid testing can prevent blood-borne transmission. Transfusion. 1999; 39:688-693. 13. Stramer SL, Glynn SA, Kleinman SH, et al. Detection of HIV-1 and HCV infections among antibodynegative blood donors by nucleic acid-amplification testing. N Engl J Med. 2004; 351:760-768. 14. Busch MP, Glynn SA, Stramer SL, et al. A new strategy for estimating risks of transfusion-transmitted viral infections based on rates of detection of recently infected donors. Transfusion. 2005; 45:254264. 15. Offergeld R, Faensen D, Ritter S, Hamouda O. Human immunodeficiency virus, hepatitis C and hepatitis B infections among blood donors in Germany 2000-2002: risk of virus transmission and the impact of nucleic acid amplification testing. Euro Surveill. 2005; 10(2):8-11. 16. Hitzler WE, Runkel S. Routine HCV PCR screening of blood donations to identify early HCV infection in blood donors lacking antibodies to HCV. Transfusion. 2001; 41:333-337. 17. Roth WK, Weber M, Petersen D, et al. NAT for HBV and anti-HBc testing increase blood safety. Transfusion. 2002; 42:869-875. 18. Biswas R, Tabor E, Hsia CC, et al. Comparative sensitivity of HBV NATs and HBsAg assays for detection of acute HBV infection. Transfusion. 2003; 43:788-798. 19. Minegishi K, Yoshikawa A, Kishimoto S, et al. Superiority of minipool nucleic acid amplification technology for hepatitis B virus over chemiluminescence immunoassay for hepatitis B surface antigen screening. Vox Sang. 2003; 84:287-291. 20. Kleinman SH, Strong DM, Tegtmeier GE, et al. Hepatitis B virus (HBV) DNA screening of blood donations in minipools with the COBAS® AmpliScreen HBV test. Transfusion. 2005; 45:1247-1257. 21. Busch MP, Lee LL, Satten GA, et al. Time course of detection of viral and serologic markers preceding human immunodeficiency type 1 seroconversion: implications for screening blood and tissue donors. Transfusion. 1995; 35:91-97.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 57

22. Yoshikawa A, Gotanda Y, Itabashi M, et al. Hepatitis B NAT virus-positive blood donors in the early and late stages of HBV infection: analyses of the window period and kinetics of HBV DNA. Vox Sang. 2005; 88:77-86. 23. Comanor L and Holland P. Hepatitis B virus blood screening: unfinished agendas. Vox Sanguinis (2006) 91:1-12. 24. Longo MC, Berninger MS, Hartley JL. Use of uracil DNA glycosylase to control carry-over contamination in polymerase chain reactions. Gene. 1990; 93:125-128. 25. Savva R, McAuley-Hecht K, Brown T, Pearl L. The structural basis of specific base-excision repair by uracil-DNA glycosylase. Nature. 1995; 373:487-493. 26. Mol CD, Arvai AS, Slupphaug G, et al. Crystal structure and mutational analysis of human uracil-DNA glycosylase: structural basis for specificity and catalysis. Cell. 1995; 80:869-878. 27. Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith R. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. Biotechnology (NY). 1992; 10:413-417. 28. Heid CA, Stevens J, Livak JK, Williams PM. Real time quantitative PCR. Genome Res. 1996; 6:986994. 29. Richmond JY, McKinney RW, eds. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication Number (CDC) 99-8395, 1999. 30. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections. Approved Guideline-Third Edition. CLSI Document M29-A3. Wayne, PA:CLSI, 2005. 31. International Air Transport Association, Dangerous Goods Regulations. 41st ed. Quebec, Canada. 2000. 32. Saldanha J, Gerlich W, Lelie N, Dawson P, Heermann K, Heath A & The WHO Collaborative Study Group: An international collaborative study to establish a World Health Organization international standard for hepatitis B virus DNA nucleic acid amplification techniques. Vox Sang. 2001; 80: 63-71 33. Saldanha J, Heath A, Aberham C, Albrecht J, Gentili G, Gessner M and Pisani G: WHO Collaborative Study to Establish a Replacement WHO International Standard for HCV RNA NAT Assays. WHO/BS/03.1958 Expert Committee on Biological Standardization, Geneva, 17 to 21 February 2003. 34. Palla P, Vatteroni M L, Vacri L, Maggi F and Baicchi U. HIV-1 NAT minipool during pre-conversion window period: detection of a repeat blood donor. Vox Sanguinis (2006) 90:59-62. 35. Pawlotsky J M. Use and interpretation of virological tests for Hepatitis C. Hepatology (2002) 36:S65S73. 36. Garson J A, Grant P R, Ayliff U et al, Real-time PCR quantitation of hepatitis B virus DNA using automated sample preparation and murine cytomegalovirus internal control. J. Virol. Methods (2005) 126:207-213. 37. Holmes H et al, WHO ECBS Report, 1999; J. Virol. Meth. (2001) 92:141-150. 38. Damond F, Collin G, Descamps D, et al., Improved Sensitivity of Human Immunodeficiency Virus Type 2 Subtype B Plasma Viral Load Assay. Journal of Clinical Microbiology, 2005; 43: 42344236. 39. HIV-2 RNA International Standard (NIBSC code 08/150): http://www.nibsc.ac.uk/products/biological_reference_materials/product_catalogue/detail_page.a spx?catid=08/150. 40. BD Vacutainer® PPT™ Plasma Preparation Tube Package Insert 5/2012 VPD40162-01web.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 58

Dokumentum verzióinformációi Doc Rev. 4.0 02/2014

Az ÓVINTÉZKEDÉSEK című részben a 10%-os nátrium-hipoklorit 0,5%-os nátrium-hipokloritra változott; bekerült a 10%-os hígítású fehérítőszer. KONTROLLOK ÉS REAGENSEK ELŐKÉSZÍTÉSE – a szöveg pontosítja, hogy a tesztet és a kontrollkészleteket használat előtt 30 perccel ki kell venni a hűtőből. Mintavétel – Élő donor minták A. A szöveg pontosítja a teszthez használatos antikoagulánsokat. B. Módosultak a vérstabilitási feltételek C. Módosultak a vérstabilitási feltételek és a BD Vacutainer® csövek grafikonja D. Módosultak a 4%-os nátrium-citrátbeli plazma stabilitási feltételei F. Bekerült a hivatkozás a BD Vacutainer® PPT™ plazma-előkészítő csőkészlet 5/2012 VPD40162-01web használati utasítására. G. Változott a mély lyukú tálca feltételeinek formátuma. H. A szöveg pontosítja, hogy a mintákat használat előtt 30 perccel ki kell venni a hűtőből ELJÁRÁSSAL KAPCSOLATOS MEGJEGYZÉSEK – B. Reagensek – a szöveg pontosítja, hogy a tesztet és a kontrollkészleteket használat előtt 30 perccel ki kell venni a hűtőből. HASZNÁLATI UTASÍTÁS – bekerült két megjegyzés a tételenkénti futtatásokról A. Kontrollok és minták pipettázása a Hamilton MICROLAB STAR/STARlet IVD pipettorral – a szöveg pontosítja, hogy a teljes rendszer mintastabilitása 18 óra. Törölve lettek a következő alpontokban megadott stabilitási időpontok. B. A cobas® TaqScreen MPX Teszt, v2.0 reagensek előkészítése és betöltése – a szöveg pontosítja, hogy a tesztkészleteket használat előtt 30 perccel ki kell venni a hűtőből. D. Amplifikálás és kimutatás – D1. A szöveg pontosítja a K csöveknek a COBAS AmpliPrep készülék és a COBAS TaqMan analizátor közötti átviteléhez szükséges időt. KADÁVER DONOR MINTÁK – Reprodukálhatóság: törölték a Hamilton STAR IVD pipettorral hígított élő donor mintákkal kapcsolatos állítást. Klinikai teljesítmény – a belső vizsgálatból származó két eredményt teljes klinikai vizsgálat eredménye váltotta fel. Bekerült a hivatkozás a 40 – BD Vacutainer® PPT™ plazma-előkészítő csőkészlet 5/2012 VPD40162-01web használati utasítására. A „Minden jog fenntartva” felirat eltávolítva a szerzői jogi nyilatkozatból. A használati utasítás végén frissítve lettek a harmonizált szimbólumoldal leírásai. Esetleges kérdésével forduljon a Roche helyi képviselőjéhez.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 59

Gyártva Svájcban

Roche Molecular Systems, Inc. 1080 US Highway 202 South Branchburg, NJ 08876 USA

Roche Diagnostics (Schweiz) AG Industriestrasse 7 6343 Rotkreuz, Switzerland

Roche Diagnostics 2, Avenue du Vercors 38240 Meylan, France

Roche Diagnostics GmbH Sandhofer Straße 116 68305 Mannheim, Germany

Distributore in Italia: Roche Diagnostics S.p.A. Viale G. B. Stucchi 110 20052 Monza, Milano, Italy

Distributed by

Roche Diagnostics, SL Avda. Generalitat, 171-173 E-08174 Sant Cugat del Vallès Barcelona, Spain

Distribuidor em Portugal: Roche Sistemas de Diagnósticos Lda. Estrada Nacional, 249-1 2720-413 Amadora, Portugal

Roche Diagnostics 201, boulevard Armand-Frappier H7V 4A2 Laval, Québec, Canada (For Technical Assistance call: Pour toute assistance technique, appeler le: 1-877 273-3433)

Roche Diagnostica Brasil Ltda. Av. Engenheiro Billings, 1729 Jaguaré, Building 10 05321-010 São Paulo, SP Brazil

A COBAS, a COBAS S, a TAQMAN, a TAQSCREEN, az AMPLILINK, az AMPERASE és az AMPLIPREP a Roche védjegyei. A ROCHE RESPONSE CENTER a Roche szolgáltatási védjegye. Valamennyi egyéb terméknév és védjegy az adott tulajdonosok tulajdona. Az Armored RNA az Ambion, Inc. és Cenetron Diagnostics LLC. által fejlesztett, szabadalommal védett technológia. #5,677,124, #5,919,625 és #5,939,262 U.S. szabadalmak, valamint a folyamatban lévő szabadalmak. Az ARMORED RNA az Ambion és a Cenetron védjegye. A termékben található cianin festékeket a GE Healthcare Bio-Sciences Corp. és a Carnegie Mellon University szabadalmi jogai védik, és a Roche kizárólag arra rendelkezik engedéllyel, hogy azokat a kutatásban és in vitro diagnosztikai rendszerek komponenseiként felhasználja. Az ilyen rendszereknek nem kutatási vagy in vitro diagnosztikai célú felhasználása a GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway, New Jersey, U.S.A. és a Carnegie Mellon University, Pittsburgh, Pennsylvania, U.S.A. további engedélyét kívánja meg. © 2014 Roche Molecular Systems, Inc. 02/2014 Doc Rev. 4.0

06327052001-04

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 60

A következő szimbólumok használatosak a Roche PCR diagnosztikai termékek jelölésére.

Segédszoftver

In vitro diagnosztikai felhasználásra

Meghatalmazott képviselő az Európai Közösségben

Megadott tartomány alsó határa

Vonalkód adatlap

Gyártó

Lotszám

Sötétben tárolandó

Biológiai veszély

Tartalma vizsgálathoz elegendő

Katalógusszám

Tárolási hőmérséklet

Olvassa el a használati útmutatót

Vizsgálatdefiníciós fájl

Készlet összetevői

Megadott tartomány felső határa

Forgalmazó

Lejárati dátum

Csak IVD teljesítmény értékelésre

Ez a termék teljesíti az in vitro orvosi diagnosztikai eszközökről szóló 98/79/EK irányelv előírásait.

06327052001-04HU

Doc Rev. 4.0 61