Autoimmuun Hemolytische Anemie Serologisch Onderzoek
Serologisch onderzoek AIHA • Casus 1. Mevrouw vd H, 1924: • Onderzoek bij aanwezigheid warmte autoantistoffen • Casus 2. Mevrouw K, 1956: • Onderzoek bij aanwezigheid koude autoantistoffen
Onderzoek verdenking AIHA (ery’s) Hoe ziet materiaal eruit? •Autoagglutinatie / Pseudoagglutinatie? Wat is gebonden op de erytrocyten van de patiënt: •Directe antiglobulinetest • Polyspecifiek (anti-IgG en C3d) • Anti-IgG • Anti-complement • (anti-IgA) •Eluaat: welke antistoffen zijn gebonden?
C
C
Onderzoek verdenking AIHA (serum) Hoe ziet het materiaal eruit? • Hemolyse? • Agglutinerende en/of hemolyserende antistoffen? Hoe reageren de antistoffen in de testen? • Temperatuur (16°C / 37°C) • Immunoglobuline klasse (IgG, IgM, IgA) Uitgebreid onderzoek ivm mogelijke transfusie
Begrijpen In vivo effect Instellen therapie
Casus 1: Mevr. vd H. 1924 •Juni ‘09 veel transfusies gehad •In AMC bekend met warmte autoantistoffen en alloantistoffen antiJk(a)….en gedacht aan anti-C? Vragen: •Nu hemolyse op basis van warmte autoantistoffen? •Verzorgen eenheden voor transfusie zijn er meer alloantistoffen?
4 februari 2014
5
Casus 1: Mevr. vd H.1924 Resultaten Sanquin (1) Onderzoek erytrocyten Bloedgroep O , Rh feno: ccdee Autoagglutinatie: geen DAT: alleen positief met anti-IgG Eluaat: positief met alle testerytrocyten Onderzoek serum Positief met alle testerytrocyten Doorgeven serologisch beeld tbv kliniek Afstemmen urgentie transfusievraag 4 februari 2014
6
Warmte autoantistoffen Typeren voor:
Adsorptie-onderzoek:
Spoed: RhCcDEe, K, Jk(a), Jk(b), S, s
Uitsluiten van alloantistoffen na adsorptie van autoantistoffen aan testerytrocyten
DNA:
Fy(a), Fy(b), Jk(a), Jk(b), S, s
(overdag)
Vaststellen specifieke autoantistoffen
Transfusieadvies: preventief matchen voor: RhCcDEe, K, Jka, Jkb, evt S, en Wr(a) (evt Cw/Kp(a) Bijstellen transfusieadvies: RhCcDEe en K compatibel (evt rekening houden met auto-Rh) en neg indien alloas
Sanquin beschikt over uitgetypeerd donorbestand Typeringen staan op het etiket
Casus 1: Mevr vd H., 1924 Resultaat Sanquin (2) •Bloedgroep O, ccdee, K-negatief •Na adsorptie: •Allo anti-C + anti Wr(a), de anti-Jk(a) niet meer aantoonbaar •Auto anti-e en aspecifieke warmte autoantistoffen •Eluaat: aspecifiek (passend bij autoantistoffen) •Typering DNA: Fy(a-), Fy(b+), S-, s+
4 februari 2014
9
Casus 1: Mevr vd H, 1924 Transfusie advies Sanquin Conform CBO Richtlijn Bloedtransfusie 2011 • ECs negatief voor C, Jk(a) en Wr(a) • En in het kader van preventie eveneens E en K neg
Vervolg Mevr. bleef gedurende langere tijd transfusiebehoeftig: Transfusie advies 72 uur geldig! Afspraak met KC AMC: volledig serol. onderzoek 1/2wkn en/of bij veranderde kliniek Tussentijds volledig compatibel transfunderen (dus ook Fy(a) en S neg, Kp(a))
Casus 2 Mevr., 1956 Resultaat Sanquin (1) Bloedgroep A, CcDee, K neg (alleen te bepalen na wassen van de erytrocyten met warm zout) Onderzoek erytrocyten: • Autoagglutinatie: positief • DAT sterk positief met anti-complement • Eluaat: negatief Onderzoek serum: • Aspecifieke koude autoantistoffen (onderzoek bij 16ºC) • Antistof onderzoek in IAT: alle panels positief…….
Koude agglutininen, uitgangsmateriaal klinisch belang vs transfusieadvies Klinisch belang Voor aantonen antistoffen: Buis warm afnemen en warm afdraaien Antistoffen blijven in plasma/serum
Bepalen temperatuursamplitude: reactiviteit 30ºC: dan in vivo actief Bij transfusie: zo mogelijk toedienen via voorverwarmingselement
Koude agglutininen, uitgangsmateriaal klinisch belang vs transfusieadvies Uitsluiten achter koude antistoffen • Buis in koelkast laten staan zodat zoveel mogelijk koude antistoffen uit het serum binden aan de erytrocyten (autoadsorptie) Uitsluiten van aanwezigheid van alloantistoffen: -Warm voegen -Warm voegen/warm wassen -Serum behandelen met DTT (afbraak IgM koude agglutininen)
Casus 2 mevr. K. Transfusieadvies Sanquin Meest voorkomende klinisch belangrijke antistoffen uitgesloten Conform CBO consensus 2011: Ivm aanwezige autoantistoffen: Rh en K compatibel In deze casus: E, K negatieve eenheden selecteren. Negatieve kruisproeven met serum niet mogelijk; kruisen met DTT-behandeld serum
Verder onderzoek bij complexe cases Let op bij koude agglutininen! Kolomtechniek: Anti-IgG: 2+ Anti-compl: 3+
DAT in buisjestechniek Anti-IgG: negatief Anti-compl: 2+
Eluaat negatief
Antistofonderzoek: koude agglutininen Conclusie: fout-positieve reactie met anti-IgG in kolomtechniek
Verder onderzoek bij complexe cases Let op zwakke reacties met anti-complement en tekenen van hemolyse bij patiënt. Kolomtechniek: Anti-IgG: negatief Anti-compl: +
DAT in buisjestechniek Anti-IgG: negatief Anti-compl: (+)
Eluaat negatief
Antistofonderzoek: negatief Onderzoek naar monofasische hemolysinen: positief Gevoelige techniek met enzym-behandelde testerytrocyten Conclusie: antistof-gemedieerde complement-depositie en verkorte overleving van de erytrocyten
