A Sebagai Faktor Kerentanan Pejamu pada Pasien Tuberkulosis Multidrug Resistant

Novita Eva Sawitri: Polimorfisme Gen IL-10 -1082 G/A Sebagai Faktor Kerentanan Pejamu pada Pasien Tuberkulosis Multidrug Resistant

Polimorfisme Gen IL-10 -1082 G/A Sebagai Faktor Kerentanan Pejamu pada Pasien Tuberkulosis Multidrug Resistant Novita Eva Sawitri,1 Reviono,1 Suradi,1 Afiono Agung Prasetyo2 1

Bagian Pulmonologi dan Kedokteran Respirasi, Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret, RSUD Dr. Moewardi, Surakarta Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret, Surakarta

2

Abstrak

Latar belakang: Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui hubungan antara polimorfisme gen interleukin (IL)-10 -1082 G/A pada kerentanan terhadap multidrug resistant tuberculosis (TB-MDR). Polimorfisme gen IL-10 -1082 G/A sebagai suatu single nucleotide polymorphism (SNP) gen IL-10 mempengaruhi produksi sitokin IL-10. Sitokin IL-10 adalah imunoregulator poten terhadap infeksi TB. Sitokin IL-10 membatasi respons imun sehingga bersifat aktivasi pada infeksi TB. Polimorfisme gen IL-10 -1082 G/A rentan TB. Metode: Data sosio-epidemiologi dan specimen darah diambil dari 30 subjek TB-MDR, 29 subjek TB non MDR dan 34 subjek sehat. Spesimen darah diperiksa untuk mengetahui polimorfisme gen IL-10 -1082 G/A menggunakan PCR. Penelitian ini merupakan studi potonglintang dilakukan di RS Dr Moewardi Surakarta pada bulan November dan Desember 2014. Frekuensi genotip IL-10 -1082 G/A, IL-10 -1082 A/A, dan IL-10 -1082 G/G dibandingkan antar kelompok penelitian. Hasil: Genotip IL-10 -1082 A/A lebih banyak didapat pada kelompok TB-MDR 33,3% (10/30) dibandingkan dengan kelompok TB non MDR 10,3% (3/29) dan kelompok sehat 8.8% (3/34). Frekuensi genotip IL-10 -1082 G/A pada kelompok TB-MDR 66,7% (20/30), kelompok TB non MDR 89,7% (26/29), dan kelompok sehat 91,2% (31/34). Frekuensi genotip IL-10 -1082 A/A dan IL-10 -1082 G/A berbeda secara signifikan di antara kelompok penelitian (p= 0,051). Polimorfisme gen IL-10 -1082 G/A berhubungan dengan kejadian TB-MDR. Genotip IL-10 -1082 G/G tidak didapatkan pada penelitian ini. Kesimpulan: Polimorfisme gen IL-10 -1082 G/A mempunyai hubungan dengan kerentanan terhadap TB-MDR pada penelitian ini. (J Respir Indo. 2016; 36: 1-10) Kata kunci: TB-MDR, kerentanan, polimorfisme gen IL-10 -1082 G/A.

Interleukin-10 -1082 G/A Gene Polymorphism as a Potential Host Susceptibility Factor In Patients With Multidrug Resistant Tuberculosis Abstract Background: This study was conducted to determine the association between polymorphism of interleukin (IL)-10 -1082 G/A gene on susceptibility of multidrug resistant tuberculosis (MDR-TB). Polymorphism of IL-10 -1082 G/A as a single nucleotide polymorphism of IL-10 gene affects IL-10 cytokine production. The IL-10 cytokine is a potent immunoregulator to TB infection. Polymorphism of IL-10 -1082 G/A gene is susceptible for TB. Methods: Socio-epidemiological data and blood specimens were collected from 30 MDR-TB subjects, 29 non MDR-TB subjects and 34 healthy subjects. Blood specimens were analyzed for IL-10 -1082 G/A gene polymorphism by PCR.This study was a cross-sectional study conducted in Dr Moewardi Hospital Surakarta on November and December 2014. We compared the frequencies of IL-10 -1082 G/A, IL-10 -1082 A/A, and IL-10 -1082 G/G genotypes among groups. Results: Genotype of IL-10 -1082 A/A was more frequent in MDR-TB group 33.3% (10/30) compares to non MDR-TB group 10.3% (3/29) and healthy group 8.8% (3/34). The frequency of IL-10 -1082 G/A genotype in MDR-TB group 66.7% (20/30), TB group 89.7% (26/29), and healthy group 91.2% (31/34). The frequency of IL-10 -1082 A/A and IL-10 -1082 G/A genotypes were significantly different between these groups (p= 0.051). Polymorphism of IL-10 -1082 G/A gene is associated to MDR-TB. There was no IL-10 -1082 G/G find in this study. Conclusion: Polymorphism of IL-10 -1082 G/A gene is associated to susceptibility of MDR-TB in this study. (J Respir Indo. 2016; 36: 1-10) Keywords: MDR-TB, susceptibility, polymorphism of IL-10 -1082 G/A gene.

Korespondensi: Novita Eva Sawitri Email: [email protected]; HP: +6282137573055

J Respir Indo Vol. 36 No. 1 Januari 2016

1


PENDAHULUAN Tuberkulosis (TB) masih menjadi masalah kese hatan di dunia. Tahun 1993 World Health Organization (WHO) menetapkan TB sebagai kedaruratan global. Munculnya koinfeksi Human Immunodeficiency Virus (HIV) dan kasus TB multidrug resistant (TB-MDR) menambah beban penyakit TB.1 Tahun 2013 terdapat 5,7 juta kasus baru TB dan 480 ribu orang menderita TB-MDR. Kasus TB-MDR terutama berada tiga negara yaitu India, Cina, dan Rusia.2 Kasus TB-MDR disebabkan M. tuberculosis resisten terhadap isoniazid dan rifampisin secara bersamaan dengan atau tanpa obat anti tuberkulosis (OAT) lini pertama lainnya.3 Definisi TB-MDR menu rut WHO adalah M. tuberculosis dengan resis tensi terhadap sekurang-kurangnya isoniazid dan rifampisin.4 Kasus TB-MDR mempunyai angka kema tian lebih tinggi. Pengobatan TB-MDR lebih kompleks. Efektifitas pengobatan TB-MDR lebih rendah meskipun OAT lebih banyak dan waktu lebih lama. Regimen OAT lini kedua yang digunakan untuk terapi TB-MDR mempunyai toksisitas lebih tinggi tetapi efikasinya kurang dibanding OAT lini pertama.5 Kasus TB resisten OAT merupakan fenomena buatan manusia (man-made phenomena). Kejadian resistensi ini akibat pengobatan TB yang tidak adekuat. Penularan langsung dari individu terinfeksi M. tuberculosis resisten OAT dapat terjadi.6 Terdapat lima faktor yang mempengaruhi terjadinya TB-MDR. Faktor tersebut adalah faktor mikrobiologik, faktor program, faktor kuman, faktor HIV/AIDS, dan faktor klinik.7 Peran faktor pejamu penyebab terjadinya kasus TB-MDR belum banyak diteliti. Penelitian saat ini masih belum membedakan faktor pejamu terhadap kejadian TB dan TB-MDR. Mekanisme yang menyebabkan terjadinya resistensi obat primer atau didapat pada agen penyebab sudah banyak diteliti8,9 Respons imun terhadap M. tuberculosis tidak sepenuhnya efektif mengeliminasi M. tuberculosis. Respons imun hanya membatasi dan mengontrol M. tuberculosis pada kondisi laten. Kondisi laten ini bersifat reversible. Reaktivasi infeksi laten merupakan sumber utama penularan (transmisi). Infeksi TB

2

merupakan proses yang kompleks dan multistage sejak awal terpajan hingga menjadi sakit.10 Sitokin IL-10 diproduksi oleh makrofag, sel T, dan sel B. Sitokin IL-10 merupakan regulator utama dari respons imun alamiah dan respons imun adaptif. Pengaruh langsung IL-10 pada sel T cluster of differentiation (CD)4+ antara lain menghambat ekspresi IL-2, tumor necroting factor (TNF)-α, IL-5, dan reseptor kemokin (CXCR)-4. Aktivasi sel T karena IL-10 memicu non-responsivitas atau anergi yang tidak dapat dilawan oleh stimulasi IL-2. Sitokin IL-10 juga memicu sel B dengan meningkatkan ekspresi molekul major histocompatibility (MHC) kelas II dan meningkatkan kemampuan untuk bertahan hidup.11 Sitokin IL-10 menghambat fagositosis dan microbial killing. Hambatan microbial killing oleh IL-10 melalui pembatasan produksi ROS dan RNS. Maturasi fagosom dihambat oleh IL-10 pada respons imun alamiah terhadap M. tuberculosis. Hambatan maturasi fagosom meningkatkan daya tahan dan pertumbuhan M. tuberculosis.12,13 Gen pengkode IL-10 terletak pada kromosom 1 (1q31-1q32). Polimorfisme IL-10 -1082 G/A (rs 1800896), -819 C/T (rs 1800871) dan -592 C/A (rs 1800872) di regio proksimal mempengaruhi transkripsi mRNA IL-10 dan ekspresi dari IL-10 secara in vitro.14,15 Produksi sitokin IL-10 dikendalikan pada tingkat transkripsional. Tingkat aktivasi transkripsi gen bergantung pada ikatan faktor regulator dengan pengenalan sekuensi spesifik pada promoter.15 Polimorfisme berbeda ditemukan pada 5 region gen IL-10. Polimorfisme ini meliputi dua polimor fisme repeat microsatellite dan tiga single nucleotide polymorphisms (SNP). Polimorfisme repeat micro satellite tersebut adalah IL-10.G dan IL-10.R yang berlokasi di -1.1 dan -4 kb dari tempat inisiasi transkripsi. Single nucleotide polymorphisms terdapat pada lokus -1082 G/A, -819 C/T, dan -592 C/A.11,15 Penelitian sebelumnya oleh Jae-Hee Oh dkk menunjukkan polimorfisme gen IL-10 -1082 A/G ber hubungan dengan grup TB baik TB kasus baru maupun TB kasus kambuh. Genotip IL-10 tipe AA secara signifikan muncul pada penderita TB dibandingkan kontrol sehat.16 Penelitian polimorfisme gen IL-10 oleh MS Afzal dkk terhadap orang Pakistan menunjukkan J Respir Indo Vol. 36 No. 1 Januari 2016


polimorfisme gen IL-10 -1082 G/A dan gen IL-10 -819

adalah pasien dengan hasil uji sensitivitas obat M.

C/T tidak berbeda secara signifikan antara penderita

tuberculosis resisten terhadap rifampisin dan isoniazid

TB dengan subjek sehat. Penelitian Maliheh Metanat

secara bersamaan dengan atau tanpa OAT lini satu

dkk terhadap penderita TB di Iran memperlihatkan

lainnya. Kadar sitokin IL-10 adalah kadar sitokin IL-

frekuensi genotip IL-10 -1082 A/G, IL-10 -819 T/C tidak

10 dalam plasma diukur dengan pemeriksaan ELISA.

berbeda antara penderita TB dan subjek sehat.

Bekas TB adalah penderita dengan riwayat minum

17

18

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui

OAT dan dinyatakan sembuh dan hasil pemeriksaan

hubungan polimorfisme gen IL-10 -1082 G/A pada

sputum BTA negatif. Bekas TB mewakili kelompok

kejadian TB-MDR. Penelitian ini diharapkan dapat

TB non MDR pada penelitian ini. Orang sehat adalah

menjelaskan hubungan antara polimorfisme gen

orang yang saat ini tidak terdiagnosis TB. Suku Jawa

IL-10 -1082 G/A dengan kejadian TB-MDR sebagai

adalah penduduk asli bagian tengah dan timur pulau

faktor prediksi dan dapat dimanfaatkan sebagai

jawa yang berbahasa Jawa.19

pengembangan penetalaksanaan terhadap kejadian

Penderita yang datang ke poli PMDT RSUD Dr.

TB-MDR apabila didapatkan gejala klinis TB dan

Moewardi Surakarta yang didiagnosis TB-MDR dicatat

polimorfisme gen IL-10 -1082 G/A.

sebagai kelompok TB-MDR diberikan penjelasan

METODE

tentang tujuan penelitian. Penderita dengan riwayat pengobatan OAT 6 bulan, hasil pemeriksaan sputum

Penelitian ini adalah studi potong lintang.

BTA sebanyak 3 kali negatif dicatat sebagai kelompok

Penelitian dilakukan di RSUD Dr. Moewardi Sura

TB non MDR. Keluarga penderita TB-MDR dengan

karta mulai bulan November sampai Desember

kontak erat tanpa gejala klinis TB, hasil pemeriksaan

2014. Populasi penelitian ini adalah pasien TB-

radiologis tidak didapatkan gambaran TB, dan hasil

MDR, pasien bekas TB yang menjalani perawatan

pemeriksaan sputum BTA sebanyak tiga kali negatif

di RSUD Dr. Moewardi Surakarta dan keluarganya.

dicatat sebagai kelompok sehat.

Sampel penelitian adalah pasien TB-MDR 30 subjek,

Pencatatan pada kelompok TB-MDR dan

pasien bekas TB mewakili kelompok TB non MDR

kelompok TB non MDR meliputi umur, jenis kelamin,

sebanyak 29 subjek dan orang sehat sebanyak 34

suku, berat badan, tinggi badan, indeks massa tubuh

subjek. Pengambilan sampel dilakukan dengan cara

(IMT), kebiasaan merokok, riwayat pengobatan

random purposive sampling.

OAT, hasil foto toraks, resistensi obat, dan penyakit

Kriteria inklusi penelitian ini adalah umur lebih

penyerta seperti DM serta status HIV. Kelompok

dari 18 tahun, suku jawa. Kriteria inklusi tambahan

sehat dianamnesis untuk mengetahui kontak erat

untuk kelompok TB-MDR adalah penderita TB-MDR.

dengan penderita TB, gejala TB dan dilakukan

Riwayat pengobatan TB dan dinyatakan sembuh

pemeriksaan foto toraks.

adalah kriteria inklusi untuk kelompok TB non MDR.

Subjek yang bersedia ikut dalam penelitian

Kelompok sehat merupakan keluarga penderita TB-

diminta untuk menandatangani lembar persetujuan

MDR yang belum pernah mendapatkan pengobatan

(informed concent). Semua subjek penelitian baik

TB. Kriteria eksklusi penelitian ini adalah tidak

kelompok TB-MDR, kelompok TB non MDR, dan

bersedia ikut penelitian, mempunyai penyakit kega

kelompok sehat diambil darah vena sebanyak 5 cc

nasan, terinfeksi HIV, dan data tidak lengkap.

dengan spuit steril kemudian dikirim ke laboratorium

Definisi operasional polimorfisme gen IL-10 -1802

biomedik Universitas Negeri Sebelas Maret untuk

G/A adalah variasi genetik gen IL-10 pada lokus -1802

pemeriksaan PCR. Pemeriksaan kadar sitokin IL-10

dibuktikan dengan hasil gen yang diperiksa dibandingkan

dilakukan pada sampel darah kelompok MDR-TB

primer gen polimorfisme tersebut dengan teknik

(Gambar 1).

polymerase chainreaction (PCR). Pasien TB-MDR


3

TB non MDR, dan kelompok sehat diambil darah vena sebanyak 5 cc dengan spuit steril kemudian dikirim ke laboratorium biomedik Universitas Negeri Sebelas Maret untuk pemeriksaan PCR. Pemeriksaan kadar IL-10 dilakukan pada sampel darah kelompok Novita Eva Sawitri: Polimorfisme Gen IL-10 -1082 G/Asitokin Sebagai Faktor Kerentanan Pejamu pada Pasien Tuberkulosis Multidrug Resistant MDR-TB (gambar_1). Sehat

Riwayat kontak, gejala TB paru (), foto toraks normal

TB non MDR

TBMDR

Riwayat terapi OAT dinyatakan sembuh, BTA(), foto toraks lesi aktif ()

Hasil DST: Resistan R & H bersamaan tanpa atau dengan OAT lini I lain

Lembar persetujuan

Tidak setuju

Setuju

Pemeriksaan gen IL101082 G/A

Pemeriksaan kadar sitokin IL10

Analisis data

Gambar 1. Alur penelitian

Gambar 1. Alur penelitian Pemeriksaan polimorfisme gen IL-10 -1082 G/A.

Kelaikan etik penelitian ini disetujui oleh Panitia

Isolasi deoxyribonucleic acid (DNA) menggunakan high

Kelaikan Etik RSUD Dr. Moewardi Surakarta. Subjek

pure preparation kit disadap dari sampel darah vena

penelitian menandatangani lembar persetujuan setelah

EDTA. Polimorfisme pada posisi -1082 dari gen IL-10

diberikan penjelasan secara terperinci dan mengerti

diidentifikasi menggunakan alell spesifik pada PCR

tentang tujuan dan manfaat penelitian sebelum dila

dengan kit Roche Applied Science. Amplifikasi PCR

kukan prosedur penelitian.

menggunakan denaturasi awal pada 95˚C selama

Data dianalisis dengan program SPSS Statistic

Pemeriksaan PCR selanjutnya dilakukan

2.0. Uji normalitas digunakan untuk mengetahui nor

sebanyak 40 siklus berupa denaturasi (95˚C selama

ma litas sebaran data secara analitik. Uji normalitas

30 detik), annealing (55˚C selama 60 detik), dan

pada penelitian ini menggunakan uji Kolmogorov-

ekstensifikasi (72˚C selama 30 detik). Produk amplifikasi

Smirnov dan Saphiro Wilk. Uji beda antara kelompok

berjalan gel agarose 2% pada buffer berisi 0,5 µg/ml

TB-MDR, kelompok TB non MDR dan kelompok sehat

ethidium bromide.

dilakukan dengan uji Kruskal wallis.20 Uji korelasi antara

8 menit.

Pemeriksaan kadar IL-10 plasma. Pemeriksaan kadar sitokin IL-10 plasma dengan metode berbasis ELISA menggunakan Human Interleukin-10Quantikine

polimorfisme IL-10-1082 G/A dengan kadar IL-10 menggunakan uji pearson. Batas kemaknaan nilai p > 0,05: tidak bermakna dan nilai p ≤0,05: bermakna.

ELISA Kit (R&D System). Pemeriksaan dilakukan sesuai protokol kit.

4



HASIL

semua kelompok subjek penelitian. Karakteristik dasar Hasil pemeriksaan uji kepekaan didapatkan

penelitian dapat dilihat pada tabel satu.

65 orang resisten terhadap rifampisin dan INH secara

Subjek penelitian dengan riwayat penggunaan

bersamaan. Kelompok TB-MDR diambil sebanyak

OAT hanya terdapat pada kelompok TB-MDR dan

30 dari 65 subjek secara random. Penelitian ini diikuti

kelompok TB non MDR. Riwayat penggunaan OAT

oleh 93 orang subjek terdiri dari 30 subjek kelompok

dibagi menjadi OAT kategori 1 dan OAT kategori 2.

TB-MDR, 29 orang subjek kelompok TB non MDR

Riwayat penggunaan OAT kategori 2 didapatkan

dan 34 orang subjek kelompok sehat. Pemeriksaan

lebih banyak pada kelompok TB-MDR dibandingkan

genotip IL-10 -1082 G/A dilakukan terhadap kelompok

kelompok TB non MDR.

TB-MDR, kelompok TB non MDR dan kelompok

Polimorfisme IL-10 -1082 G/A diketahui ber

sehat. Kelompok TB-MDR dilakukan pemeriksaan

dasarkan pemeriksaan PCR dengan menggu nakan

tambahan kadar sitokin IL-10. Pengambilan data

sekuens alel spesifik. Gen IL-10 -1082 mempunyai

berupa jenis kelamin, usia, riwayat merokok, dan

genotip G/A, A/A, dan G/G. Genotip IL-10 -1082 G/A

riwayat pengobatan OAT sebagai karakteristik

yang didapat pada penelitian secara rinci terdapat

dasar dilakukan pada kelompok TB-MDR, kelompok

pada Tabel 1.

TB non MDR, dan kelompok sehat. Pemeriksaan

Analisis dilakukan terhadap frekuensi kemun

dan pengambilan data dilakukan setelah subjek

culan tiap genotip pada setiap kelompok penelitian.

menandatangani lembar persetujuan.

Analisis hubungan polimorfisme IL-10 -1082 G/A dengan

Karakteristik subjek penelitian meliputi jenis

kejadian TB-MDR menggunakan uji Kruskal-Wallis. Dua

kelamin, usia, riwayat merokok, dan riwayat pengo

jenis genotip didapatkan pada penelitian ini yaitu genotip

batan OAT sebelumnya. Subjek penelitian dibagi

IL-10 -1082 A/A dan genotip IL-10 -1082 G/A. Genotip

menjadi tiga kelompok. Kelompok TB-MDR terdiri dari

IL-10 -1082 G/G tidak muncul pada subjek penelitian.

30 subjek. Kelompok TB non MDR sebanyak 29 subjek dan kelompok sehat terdiri 34 subjek.

Polimorfisme IL-10 -1082 G/A berhubungan dengan kejadian TB-MDR. Uji Kruskal-Wallis dilakukan

Usia subjek penelitian berdasarkan uji nor

pada kelompok TB-MDR dan kelompok TB non MDR

malitas dinyatakan tidak normal. Median usia kelompok

didapatkan perbedaan dengan p ≤ 0,05. Genotip IL-

TB non MDR adalah 53,0 (18,0-75,0) tahun lebih tinggi

10 -1082 A/A lebih banyak didapat pada kelompok TB-

dibandingkan median usia kelompok TB-MDR. Median

MDR dibandingkan kelompok TB non MDR dengan

usia kelompok TB-MDR adalah 40,0 (23,0-65,0) dan

perbedaan bermakna. Tabel 2 memperlihatkan uji

median usia kelompok sehat adalah 48,0 (23,0-66,0)

Kruskal-Wallis genotip IL-10 -1082 G/A pada kelompok

tahun. Genotip IL-10 -1082 G/G tidak didapatkan pada

TB MDR dan kelompok TB non MDR.

Tabel 1. Karakteristik dasar subjek penelitian Variabel Jenis kelamin Laki-laki Perempuan Umur (tahun) Genotip A/A G/A G/G R. merokok Ya Tidak

TB-MDR N (%)

N (%)

Sehat N (%)

16 (53,3) 14 (46,7) 40,0 (23,0-65,0)

13 (44,8) 16 (55,2) 53,0 (18,0-75,0)

17 (50) 17 (50) 48,0 (23,0-66,0)

10 (33,3) 20 (66,7) 0 (0)

3 (10,3) 26 (89,7) 0 (0)

3 (8,8) 31 (91,2) 0 (0)

10 (33,3) 20 (66,7)

9 (31,0) 20 (69,0)

10 (29,4) 24 (70,6)


TB non MDR

P

0,20

5


Tabel 2. Uji Kruskal-Wallis genotip IL-10 -1082 G/A antara kelompok TB paru MDR dengan kelompok TB non MDR Genotip IL-10 A/A G/A G/G Total

Kelompok TB MDR TB non MDR 10 3 20 26 0 0 30 29

Total 13 46 0 59

P

A/A G/A G/G Total

Kelompok TB non MDR Sehat 3 3 26 31 0 0 29 34

G/A dengan kadar sitokin IL-10 kelompok TB-MDR menggunakan uji Mann Whitney U didapatkan kadar sitokin IL-10 tidak berbeda antara genotip

0,05

IL-10 -1082 A/A maupun genotip IL-10 -1082 G/A pada kelompok TB-MDR. Kadar sitokin IL-10 diubah

Tabel 3. Uji Kruskal-Wallis genotip IL-10 -1082 G/A antara kelompok TB non MDR dengan kelompok sehat Genotip

Analisis hubungan polimorfisme IL-10 -1082

Total

P

6 57 0 63

1,00

Polimorfisme IL-10 -1082G/A tidak berhu bungan dengan kejadian TB pada kelompok TB non MDR dan kelompok sehat. Uji Kruskal-Wallis terhadap kelompok TB non MDR dan kelompok sehat tidak didapatkan perbedaan bermakna dengan p > 0,05. Frekuensi didapatnya genotip IL-10 -1082 A/A tidak berbeda pada kelompok TB non MDR dan kelompok sehat. Tabel 3 memperlihatkan uji Kruskal-Wallis genotip IL-10 -1082 G/A pada kelompok TB non MDR dan kelompok sehat. Analisis statistik untuk mengetahui hubungan

menjadi variabel kategorik dengan cut off point nilai 0,012. Tabel 5 memperlihatkan uji Kruskal-Wallis genotip IL-10 -1082 G/A dengan kadar sitokin IL-10 pada kelompok TB-MDR. Uji Kruskal-Wallis terhadap genotip IL-10 -1082 G/A dengan kadar sitokin IL-10 pada kelompok TBMDR menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan kadar sitokin IL-10 pada subjek dengan genotip IL10 -1082 A/A maupun subjek dengan genotip IL-10 -1082 G/A kelompok TB-MDR (p>0,05). Tabel 4. Uji Kruskal-Wallis genotip IL-10 -1082 G/A antara kelompok TB dengan kelompok sehat Genotip

TB

A/A G/A G/G Total

13 46 0 59

Kelompok TB adalah gabungan kelompok TB-MDR dan kelompok TB non MDR. Polimorfisme IL-10 -1082 G/A dengan kejadian TB antara kelompok TB dengan

Total

3 31 0 34

16 77 0 93

P 0,15

Tabel 5. Uji Kruskal-Wallis genotip IL-10 -1082 G/A dengan kadar sitokin IL-10 pada kelompok TB-MDR.

polimorfisme IL-10 -1082 G/A dengan kejadian TB paru dilakukan pada kelompok. TB dan kelompok sehat.

Kelompok Sehat

Genotip A/A G/A G/G Total

Kadar IL-10 Tinggi Rendah 5 5 10 10 0 0 15 15

Total 10 20 0 30

P

odds ratio (OR)

0.90

1,10 (95% CI 0,24-4,96)

kelompok sehat berdasarkan uji Kruskal-Wallis tidak didapatkan perbedaan bermakna dengan p > 0,05. Frekuensi didapatnya genotip IL-10 -1082 A/A tidak berbeda pada kelompok TB dan kelompok sehat. Tabel 4 memperlihatkan uji Kruskal-Wallis genotip IL-10 -1082 G/A pada kelompok TB dan kelompok sehat.

PEMBAHASAN Penelitian ini melibatkan 93 orang subjek pene litian terdiri dari 30 orang subjek kasus TB-MDR, 29 orang subjek TB non MDR, dan 34 orang sehat. Karakteristik subjek penelitian berdasarkan jenis kelamin

Pemeriksaan kadar sitokin IL-10 dilakukan

didapatkan perempuan lebih banyak yaitu 47 orang (50,

terhadap kelompok TB-MDR. Hasil kadar sitokin

54%) dibandingkan laki-laki 46 orang (49,46%). Tidak

IL-10 kelompok TB-MDR didapatkan sebaran data

didapatkan perbedaan bermakna antara jenis kelamin

tidak normal berdasarkan uji Saphiro Wilk dengan

laki-laki maupun perempuan antara genotip IL-10 -1082

p=0,000. Nilai median kadar sitokin IL-10 kelompok

A/A atau IL-10 -1082 G/A dengan p>0,05.

TB-MDR adalah 0,012 (0,000-9,740).

6



Karakteristik subjek penelitian Karakteristik subjek penelitian berdasarkan umur mempunyai sebaran yang tidak normal. Median umur kelompok TB-MDR, kelompok TB non MDR, dan sehat berbeda tetapi tidak bermakna. Median umur subjek penelitian ini lebih tua yaitu 40,0 tahun, 53,0 tahun, dan 48,0 tahun dibandingkan penelitian tentang polimorfisme gen pada kerentanan TB di Indonesia oleh Pakasi dkk dengan median 27,5 tahun pada kelompok kasus TB dan 33 tahun pada kelompok kasus.21 Penelitian tentang polimorfisme gen IL-10 pada kerentananTB-MDR belum pernah dilakukan di Indonesia. Genotip IL-10-1082 G/G tidak didapatkan pada subjek penelitian ini. Genotip IL-10 pada penelitian ini adalah IL-10 -1082 A/A sebanyak 16 orang (17,2%) dan IL-10 -1082 G/A sebanyak 77 orang (82,8%). Penelitian sebelumnya tentang polimorfisme IL-10 -1082 G/A di Asia frekuensi munculnya genotip IL-10 -1082 G/G jarang terjadi. Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Guo J dkk di Cina mendapatkan 1 orang subjek (0,29%) dengan genotip IL-10 -1082 G/G diantara 350 orang subjek penelitiannya.22 Riwayat penggunaan OAT merupakan faktor risiko kuat terjadi TB-MDR. Riwayat penggunaan OAT terutama OAT kategori-2 terjadi lebih banyak pada kelompok TB MDR yaitu 23 orang (76,67%) dibandingkan kelompok TB non MDR sebesar 3 orang (10,34%). Individu dengan riwayat pengobatan OAT mempunyai risiko TB-MDR sepuluh kali lebih tinggi dibandingkan individu tanpa riwayat pengobatan OAT. Riwayat pengobatan OAT tidak dijelaskan apakah OAT kategori-1 atau OAT kategori-2 Kasus kronik TB didefinisikan sebagai penderita TB dengan hasil pemeriksaan BTA tetap positif setelah pengobatan OAT kategori-2. Kasus kronik sering dieksklusikan pada banyak penelitian sehingga riwayat pengobatan OAT kategori-2 tidak masuk dalam penelitian.23 Penelitian di Gujarat India menunjukkan 3080% kasus TB dengan riwayat pengobatan OAT ulang menjadi kasus TB-MDR.24 Resitensi terhadap OAT terjadi karena mutasi spontan genom M. tuberculosis. Mutasi spontan terhadap setiap jenis OAT terjadi dalam


jumlah koloni tertentu. Kuman M. tuberculosis yang mendapatkan OAT tunggal akan mengalami seleksi dan terjadi fall and rise phenomena. Penambahan OAT pada koloni M. tuberculosis yang telah resisten satu OAT akan menciptakan kuman yang resisten terhadap lebih dari satu jenis OAT atau multidrug resistance.8 Analisis hubungan antara polimorfisme IL-10 -1082 G/A pada kejadian TB-MDR antara kelompok TBMDR dengan kelompok TB non MDR pada penelitian ini didapatkan perbedaan bermakna dengan p ≤ 0,05. Genotip IL-10 -1082 A/A lebih banyak muncul pada kelompok TB-MDR dibandingkan kelompok TB non MDR. Uji Kruskal-Wallis terhadap munculnya genotip IL-10 -1082 A/A dengan genotip IL-10 -1082 G/A pada kelompok TB-MDR dan TB non MDR didapatkan p=0,05. Hal ini menunjukkan bahwa genotip IL-10 -1082 A/A mempunyai frekuensi didapat lebih sering pada kelompok TB-MDR dibandingkan genotip IL-10 -1082 G/A dengan perbedaan bermakna. Penelitian lain tentang polimorfisme IL-10 -1082 G/A pada penderita TB-MDR belum pernah dilakukan. Peneliti tidak bisa membandingkan hasil analisis hubungan antara polimorfisme IL-10 -1082 G/A pada kejadian TB-MDR. Geffner dkk melakukan penelitian terhadap sel Treg CD4+ dan CD8+ pada kultur peripheral blood mononuclear cell (PBMC) penderita TB-MDR, TB sensitif OAT (S-TB), dan kontrol sehat. Sel Treg CD4+ dan CD8+ secara ex vivo meningkat pada kelompok TB-MDR dibandingkan kelompok S-TB dan kelompok kontrol sehat. Sel Treg CD4+ dan CD8+ meningkatkan produksi sitokin IL-10 dan menghambat sitokin IFN-γ. Penelitian ini memperlihatkan respons sel Th-2 lebih dominan dibandingkan sel Th-1 pada kultur PBMC kelompok TB-MDR.25 Polimorfisme IL-10 -1082 G/A dengan kejadian TB antara kelompok TB non MDR dengan kelompok sehat berdasarkan uji Kruskal-Wallis tidak didapatkan perbedaan bermakna dengan p > 0,05. Frekuensi kemunculan genotip IL-10 -1082 A/A dan genotip IL-10 -1082 G/A tidak berbeda pada kelompok TB non MDR dan kelompok sehat. Uji Kruskal-Wallis terhadap munculnya genotip IL-10 -1082 A/A dengan

7


genotip IL-10 -1082 G/A pada kelompok TB non MDR

Overproduksi sitokin IL-10 berhubungan dengan

dengan kelompok sehat didapatkan p= 1,00.

homozigositas alel T pada lokus -3575, alel A lokus

Analisis statistik antara polimorfisme IL-10

-1082, alel T lokus -819, dan alel A lokus -592.

-1082 G/A dengan kejadian TB pada kelompok TB dan

Perubahan produksi sitokin IL-10 melalui perubahan

kelompok sehat didapatkan tidak berbeda. Genotip IL-

aktivitas promoter IL-10.30 Penelitian oleh Geffner

10 -1082 A/A pada kedua kelompok tersebut ditemukan

pada kultur PBMC penderita TB-MDR yang diinduksi

tidak berbeda dengan p=0,15. Kelompok TB adalah

kuman M. tuberculosis menunjukkan peningkatan

gabungan kelompok TB-MDR dan kelompok TB non

produksi sitokin IL-10 dan hambatan produksi IFN-γ

MDR. Penelitian tentang polimorfisme IL-10 -1082 G/A

karena fungsi aktif sel Treg CD4+.25

terhadap kejadian TB dengan subjek kasus TB-MDR belum pernah dilakukan.

Analisis hubungan antara polimorfisme IL10 -1082 G/A pada kadar sitokin IL-10 kelompok

Hasil penelitian ini sesuai dengan penelitian

TB-MDR menggunakan uji Mann Whitney U. Hasil

sebelumnya tentang polimorfisme IL-10 -1082 G/A

penelitian ini didapatkan kadar sitokin IL-10 tidak

yang membandingkan antara penderita TB dengan

berbeda antara genotip IL-10 -1082 A/A maupun

kontrol sehat. Penelitian Amirzargar dkk terhadap

genotip IL-10 -1082 G/A pada kelompok TB-MDR.

40 orang penderita TB dan 40 orang sehat di Iran

Hal ini dapat terjadi karena pengukuran kadar sitokin

memeperlihatkan polimorfisme IL-10 -1082 G/A tidak

IL-10 tidak dilakukan secara in vitro sehingga sulit

terdapat hubungan.

mengendalikan faktor perancu.

26

Penelitian lain oleh Afzal SA

dkk dilakukan di Pakistan terhadap penderita TB dan kontrol sehat. Penelitian ini memperlihatkan bahwa

KESIMPULAN

frekuensi kemunculan genotip IL-10 -1082 G/A dan

Pada penelitian ini terdapat hubu ngan antara

IL-10 -1082 A/A tidak berbeda pada penderita TB

polimorfisme IL-10 -1082 G/A pada kerentanan TB-MDR,

maupun kelompok sehat.

tidak terdapat hubungan antara polimorfisme IL-10 -1082

17

Penelitian oleh Wu F dkk di Cina terhadap

G/A pada kadar sitokin IL-10 penderita TB-MDR.

penderita TB dibandingkan kontrol sehat menunjukkan

Penelitian lanjutan pada populasi yang berbeda

tidak terdapat perbedaan bermakna pada frekuensi

perlu dilakukan sehingga dapat memperkuat hasil

kemunculan polimorfisme IL-10 -1082 G/A. Penelitian

penelitian ini. Penelitian lajutan terhadap lokus poli

Shin HD dkk di Korea terhadap 459 orang penderita

morfisme IL-10 yang lain yaitu -592 A/C dan -819

TB dan 871 orang kontrol sehat memperlihatkan

C/T sehingga dapat diketahui hubungannya pada

tidak terdapat perbedaan bermakna antara frekuensi

kerentanan TB-MDR. Penelitian in vitro perlu dilakukan

kemunculan genotip IL-10 -1082 A/A di antara kedua

untuk membantu mengetahui mekanisme respons

kelompok tersebut.

polimorfisme IL-10 dalam patogenesis TB-MDR.

Hubungan antara polimorfisme IL-10 -1082 G/A

DAFTAR PUSTAKA

27

28

pada kadar IL-10 penderita TB-MDR Sitokin IL-10 adalah sitokin pleitropik yang diproduksi oleh monosit, makrofag, sel B dan sel T. Subset sel T penghasil IL-10 adalah sel T helper type 2 (Th2), sel Th0, dan sel T regulatory (Treg). Produksi IL-10 diatur pada tingkat translasional dan transkripsional. Fungsi utama IL-10 adalah antiinflamasi dan imunosupresif.14,29 Lima SNP dikenal sebagai haplotip promoter IL10 adalah lokus -3575, -2763, -1082, -819, dan -592.

8

1. Zumla A, Raviglione M, Hafner R, Von Reyn CF. Current concepts tuberculosis. N Engl J Med. 2013;368:745-55. 2. World Health Organization. Global tuberculosis control. In: WHO global report. Geneva: WHO. 2014 3. Isbaniyah F, Thabrani Z, Soepandi PZ, Burhan E, Reviono, Soedarsono, et al. Tuberkulosis pedoman diagnosis dan penatalaksanaan di Indonesia. Jakarta: PDPI. 2011.



4. World Health Organization. Global tuberculosis con trol. In: WHO global report. Geneva: WHO. 2012. 5. Lemos ACM,

Matos

ED.

Multidrug-resistant

tuberculosis. Braz J Infect Dis. 2013;17(2):239-46. 6. Kementerian

Kesehatan

Republik

15. Almeras L, Prin L. Genetic polymorphism of IL-10 and relevance to immune function. In: Marincola FM, editors. Interleukin-10. Texas: Landes Bioscience. 2006. p 1-10.

Indonesia.

16. Oh JH, Yang CS, Noh YK, Kweon YM, Jung

Petunjuk teknis manajemen terpadu pengendalian

SG, Son JW, Kong SJ, et al. Polymorphisms

tuberkulosis resistan obat. Jakarta: Kementerian

of interleukin-10 and tumour necrosis factor-α

Kesehatan Republik Indonesia Direktorat jen

genes are associated with newly diagnosed and

deral Pengendalian Penyakit dan Penyehatan

recurrent pulmonary tuberculosis. Respirology.

Lingkungan. 2013.

2007;12:594-8.

7. Burhan E, Uyainah A, Syam AF, Setyanto DB,

17. Afzal MS, Anjum S, Salman A, Asraf S, Farooqi

Nawas MA, Rahajoe NN, et al. Pedoman nasional

ZUR, Ahmad T, et al. Interleukin-10 gene promoter

pelayanan kedokteran tata laksana tuberkulosis.

polymorphism as a potential host susceptibility

Jakarta:

factors in Pakistani patients with pulmonary

Kementerian

Kesehatan

Republik

Indonesia Direktorat jenderal Pengendalian

tuberculosis. African

Penyakit dan Penyehatan Lingkungan. 2013.

2011;10:14706-10.

Journal

Biotechnology.

8. Gandhi NR, Nunn P, Dheda K, Schaaf HS,

18. Metanat M, Nejad MN, Salehi M, Moazen J,

Zignal M, Soolingen D, et al. Multidrug-resistant

Sanei-Moghaddam E, Arbabi N. Comparison of

and extensively drug-resistant tuberculosis: a

genetic polymorphisms of TNF-α and IL-10 genes

threat to global control of tuberculosis. Lancet.

between tuberculosis patients and healthy blood

2010;375:1830-43.

donors. Arch Clin Infect Dis. 2013;8:e18270.

9. Matteelli A, Migliori GB, Cirillo D, Centis R,

19. SusenoF M. Etika Jawa. Sebuah analisa falasafi

Girard E, Raviglione M. Multidrug-resistant

tentang kebijaksanaan hidup Jawa. Jakarta: PT

and extensively drug-resistant Mycobacterium

Gramedia Pustaka Utama. 1984.

tuberculosis: epidemiology and control. Expert Rev Anti Infect Ther. 2008;5:857-71. 10. Ernst JD. The immunological life cycle of tuberculosis. Nature Reviews Immunology. 2012:12;581-91.

20. Dahlan, MS. Hipotesis komparatif variabel kategorik tidak berpasangan. In Statistik untuk kedokteran dan kesehatan. 3 th ed. Jakarta: Salemba Medika. 2013.

11. Mege JL, Meghari S, Honstettre A, Capo C,

21. Pakasi TA, Melani A, Bramantyo A, Putera I,

Rault D. The two faces of interleukin 10 in

Syahmar I, Karyadi E, et al. Distribution of D543N

human infectious disease. Lancet Infect Dis.

NRAMP1 polymorphism in tuberculosispatients

2006;6:557-69.

from Kupang, east region of Indonesia. MJI.

12. Redford PS, Murray PJ, O’Garra A. The role of IL10 in immune regulation during M. tuberculosis infection. Mucoosa Immunology. 2011;4:260-6. 13. O’Leary S, O’Sullivan MP, Keane J. IL-10 blocks

2012;21:160-5. 22. Faustini A., Hall A.J, Perucci CA. Risk factors for multidrug resistant tuberculosis in Europe: a systematic review. Thorax. 2006;61:158-63.

phagosome maturation in Mycobacterium tuber

23. Omerod LP. Multidrug-resistant tuberculosis (MDR-

culosis-infected human macrophages. Am J Respir

TB): epidemiology, prevention and treatment.

Cell Mol Biol. 2011; 45: 172-80.

British Medical Bulletin. 2005. p 73-74:17-24.

14. Kryworuchko M, Creery WD, Kumar A. IL-10:

24. Geffner L, Yokobori N, Basile J, Schierloh P,

role in infectious diseases. In: Marincola FM,

Balboa L, Romero MM, et al. Patients with

editor. Interleukin-10. Georgetown: Eurekah/

multidrug-resistant tuberculosis display impaired

Landes Bioscience. 2006. p 109-27.

Th1 responses and enhanced regulatory T-cell


9


levels in response to an outbreak of multidrug-

27. Shin HD, Park LB, Kim LH, Cheong HS, Lee HI,

resitant Mycobacterium tuberculosis M and Ra

Park SK. Common interleukin 10 polymorphism

strains. Infection and Immunity. 2009; 77:5025-34.

association with decresed risk of tuberculosis. Expe

25. Amirzagar AA, Danesh AA, Khosravi F, Niknam MH, Nikbin B. Cytokines genes polymorphisms in Iranian

rimental and Molecular Medicine. 2005; 37:128-32. 28. Sasindran SJ, Torrelles JB. Mycobacterium

with pulmonary tuberculosis. IJI. 2004;1:125-9.

tuberculosis infection and inflammation: what

26. Wu F, Qu Y, Tang Y, Cao D, Sun P, Xia Z.

is beneficial for the host and for the bacterium?

Lack of association between cytokine gene

10

Frontiers in microbiology. 2011;2:1-15.

polymorphisms and silicosis and pulmonary

29. Mosser DM, Zhang X. Interleukin-10: new

tuberculosis in Chinese iron miners. J Occup

perspective on an old cytokine. Immunol Rev.

Health. 2008;50:445-54.

2008; 226:205-18.


A Sebagai Faktor Kerentanan Pejamu pada Pasien Tuberkulosis Multidrug Resistant

Recommend Documents