2010 (č. 684) Průkaz DNA HSV a VZV

Státní zdravotní ústav Expertní skupina pro zkoušení způsobilosti Organizátor programů zkoušení způsobilosti akreditovaný ČIA, reg. č. 7001 Šrobárova 48, 100 42 Praha 10 – Vinohrady

Závěrečná zpráva Zkoušení způsobilosti v lékařské mikrobiologii (Externí hodnocení kvality)

PT#M/34/2010 (č. 684) Průkaz DNA HSV a VZV

Praha, leden 2011

Zařazeno do Národního programu zkoušení způsobilosti

Průkaz DNA HSV a VZV

PT# M/34/2010

Obsah 1. Souhrnné informace o přípravě a hodnocení PT (Proficiency Testing)

3

2. Hodnocení

4

3. Výsledky zúčastněných laboratoří

4

4. Závěr

5

5. Příloha – výsledkový protokol jednotlivé laboratoře

6

Program zkoušení způsobilosti PT#M/34/2010 byl zaměřen na průkaz DNA virů HSV a VZV. Návrh a realizace PT#M/34/2010 byly prováděny podle standardního operačního postupu SOP M/34 na pracovišti Expertní skupiny pro zkoušení způsobilosti (ESPT) Státního zdravotního ústavu (SZÚ). Toto pracoviště je akreditováno Českým institutem pro akreditaci, o.p.s. jako organizátor programů způsobilosti č. 7001.

S veškerými informacemi dodanými účastníky je zacházeno jako s důvěrnými a nejsou bez souhlasu účastníka poskytovány třetím stranám.

Nedílnou součástí závěrečné zprávy je výsledkový protokol jednotlivé laboratoře.

Koordinátor: Ing. Hana Hrbáčková Tel: 267 082 247(2476) Zprávu vypracoval: Ing. Hana Hrbáčková, NRL pro herpetické viry, SZÚ Praha Zprávu schválil: Ing. Hana Hrbáčková Dne: 14.1.2011 Pracoviště 2 ESPT (AP OML - Akreditační pracoviště Odboru mikrobiologických laboratoří): www.szu.cz/espt email: [email protected]

Státní zdravotní ústav Praha

2/6


PT# M/34/2010

1.Souhrnné informace o přípravě a hodnocení PT# M/34/2010 Identifikace kola/cyklu: Název: Organizátor: Vedoucí ESPT Koordinátor: Subdodavatel: Charakteristika materiálu: Podstata a účel PT/EHK: Kritéria pro účast na PT/EHK:

Způsob přípravy:

Množství připravovaného test. materiálu: Označení vzorků: Zabezpečení kvality vzorku:

PT#M/34/2010 Průkaz DNA HSV a VZV SZÚ – Centrum laboratorních činností - ESPT Šrobárova 48, Praha 10, 100 42 tel.: + 420 267082575, fax.: + 420 267082271 Ing. Věra Vrbíková Ing. Hana Hrbáčková není 7 + 1 vzorek lyofilizovaného supernatantu tkáňové kultury obsahující některý z testovaných virů nebo jen médium. Detekce DNA viru HSV1, HSV2 nebo VZV metodou PCR kvalitativním nebo kvantitativním způsobem. Vyšetření všech zaslaných vzorků a odeslání výsledků ve stanoveném termínu. Výchozím materiálem pro přípravu vzorků je tkáňová kultura buněk LEP zainfikovaná některým z virů nebo čistá. Po dostatečném pomnožení viru a jeho uvolnění do média je oddělen supernatant, který se ředící řadou naředí, otestuje a vybraný vzorek kvantitativně rozplní do lyofilizačních lahviček á 1 ml. Nejméně 30 ml od každého vzorku ESPT SZÚ PT # M/34/2010 – EHK 684 DNA HSV a VZV Pro zajištění stability jsou výchozí vzorky lyofilizovány.

Výchozí materiál a finální (rozplněný a lyofilizovaný) vzorek je testován Testy homogenity a stability: na přítomnost cílových markerů metodami kvantitativní PCR dle SOPNRL/HV-05 a -06. Distribuce v předepsaném obalu. Přeprava a uchovávání vzorků před Podmínky distribuce a rekonstitucí v chladničce při teplotě 2 - 8 0C, uchovávání po rekonstituci uchovávání vzorků: á 1 ml destilované vody při -18 až -24°C. Nedodržení správné laboratorní praxe, lidský faktor, u kvantitativního Možné zdroje chyb: testování neexistence jednotného kvantitativního standardu. Počet účastníků: 22 laboratoří Termín distribuce: 2.11.2010 Způsob distribuce: Rozvoz přepravní službou Přílohy: pokyny účastníkům Písemně vyplněním tabulek a dotazníku distribuovaných spolu se vzorky Předání výsledků: a doručením doporučeným dopisem do 2.12.2010. Za vztažnou hodnotu kvalitativního vyhodnocení je považován výsledek Určení přijaté vztažné získaný v NRL, u kvantitativních výsledků je to průměr získaných hodnoty: výsledků bez nejmenší a největší odlehlé hodnoty. Kvalitativní hodnocení přiděluje každému shodnému výsledku 2 body. Hranice úspěšnosti se obvykle nachází mezi 80 až 90%. Způsob vyhodnocení Kvantitativně hodnotíme shodu se vztažnou hodnotou +- jeden řád, výsledků: případně půl řádu dvěma body, v případě větší diference jedním nebo žádným bodem. Určení maximální Nepoužívá se směrodatné odchylky: Termín rozeslání zprávy Leden 2011 účastníkům:


3/6


PT# M/34/2010

2. Hodnocení Série EHK 684 obsahovala 7 testovacích lyofilizovaných vzorků a jeden neoznačený edukativní (všechny k rekonstituci á 1 ml). Vzorky byly odeslány k testování 2.11.2010, termín pro ukončení testování byl 2.12.2010. K sérii 684 se přihlásilo 22 laboratoří, výsledky vrátily všechny laboratoře. Pro vyhodnocení jsou podstatné výsledky NRL, ale přihlíží se také k výsledkům všech zúčastněných laboratoří jako celku. Kvalitativně je shodný výsledek každého vzorku hodnocen dvěma body. Následně jsou porovnány hodnoty získaných součtů a stanovena hranice úspěšnosti v procentuálním vyjádření. Pro sérii 684 byla stanovena hranice 90%. Kvantitativně jsou porovnávány výsledky s průměrem všech zúčastněných bez nejvyšší a nejnižší hodnoty a hodnocena shoda do +- jeden řád dvěma body, případně u vzorků s výborně reprodukovatelnými výsledky +- půl řádu. Odchylka větší než jeden řád je hodnocena jedním bodem, větší než 2 řády bez přidělení bodu. Falešná pozitivita je sankcionována -1 až -2 body dle míry pozitivity, protože se jedná o závažný jev, který nelze tolerovat a je třeba mu maximálně předcházet.

Správné výsledky Vzorek

HSV výsl. kvalitativní

Vztažná hodnota (průměr) 363765

Kvant. rozsah pro 2 body [kopie/ml] 6 36400-3,64.10

VZV výsl. kvalitativní

1/2010

HSV2

2/2010

negativní

3/2010

HSV1

4/2010

negativní

negativní

5/2010

negativní

pozitivní

6/2010

HSV1

37515

3751 - 375150

negativní

7/2010

HSV2

2800

280 - 28000

negativní

Neoznače ný

negativní

920 - 92030

Kvant. rozsah pro 2 body [kopie/ml]

16040

1604 - 160397

60406

30205 - 302030

3063

_

negativní pozitivní

9203

Vztažná hodnota (průměr)

negativní

slabě pozitivní

Souhrnné vyhodnocení Všechny přihlášené laboratoře se série 684 zúčastnily a zaslaly výsledky. Kvalitativní část série dopadla výborně, pouze jedna laboratoř měla bodovou srážku a to za jednu slabou falešnou pozitivitu HSV2. Všechny laboratoře uspěly. Kvantitativní výsledky ukázaly rozdílné nastavení metod s rozdíly u většiny vzorků až o tři nebo dokonce čtyři řády. Následující tabulka naznačuje, že odlišnost může souviset s diagnostickou soupravou (systém Gene Proof) nebo s individuálními podmínkami v jednotlivých laboratořích (soupravy Artus). Dvě laboratoře měly téměř všechny výsledky silně podhodnoceny a mají proto nízké bodové ohodnocení. Z pohledu konkrétních vzorků nevytvořily výsledky jednu hlavní skupinu s jednotlivými odlehlými hodnotami, ale spíše se rozdělily na dvě skupiny – slabší a silnější pozitivita plus občasný extrém nízký či vysoký. Výjimku tvoří výsledky VZV u vzorku 5, které byly natolik podobné, že bylo možné a správné použít náročnější bodové ohodnocení (dvoubodové optimum v intervalu +- půl řádu). U ostatních vzorků, ať nízkých či vysokých, to přínosné nebylo. VZV slabě pozitivní neoznačený nebodovaný vzorek až na jednu výjimku určili všichni, laboratoř která ho nezachytila se VZV EHK účastnila kvalitativně.


4/6


PT# M/34/2010

3. Výsledky EHK Průkaz DNA HSV dle použitých souprav Výrobce kitu/izol.

Vz1HSV2

Vz2

Vz3HSV1

Vz4

Vz5

Vz6HSV1

Vz7HSV2

Gene Proof -„/ MP Artus / MP /Q /auto Q /Q /Q,viral /Q /Q TMB / MP Argene /Q in house/Q / MN /Q

1,53.106 1,25.106 2,02.105 46 000 1 960 6 450 4,22.105 1,7.105 1,78.105 48 000 90 000 1,57.105 2,77.105 3,5.105 1,6.106

-

19 740 35 300 7 975 12 000 443 257 34 500 7 900 1 250 NT 2 000 2 330 3 892 3 700 14 700

-

-

2,27.105 41 300 1,62.105 25 000 733 1 240 61 000 32 000 2 350 6 350 4 000 14 300 27 652 20 000 90 500

4 100 18 800 3 800 250 401 100 7 650 700 119 1445 <100 1 260 4 271 750 11 550

Q= Qiagen, auto Q= automat magn. Qiagen, MP= Magna Pure Roche, viral=High Pure Viral kit Roche, MN= Nucleospin Blood Macherey Nagel. Koncentrace jsou vyjádřeny dle formuláře v poču kopií virové DNA na 1 ml vzorku. NT= netestováno.

Výsledky EHK Průkaz DNA VZV dle použitých souprav Výrobce kitu/izol.

Vz1

Vz2

Vz3

Vz5

Vz6

Vz7

Neozn.

Gene Proof -„Artus / Q /auto Q /Q /Q TMB / MP /Q /Q Argene / Q in house /Q / MN

-

89 000 3,42.105 29,6 150 16 900 2 000 10 000 785 22 950 7 510 5 202 5 600

-

82 500 91 250 182 2,42.105 80 500 25 000 62 000 15 400 68 800 56 800 34 813 87 000

-

-

4 500 12 722 7 3 424 140 4 200 170 NT 4 200 1 208 40 000

Komentář: Ve skupině výsledků s kvantifikací nebyl žádný falešně negativní výsledek. Ojediněle bylo laboratořemi poskytnuto více sad výsledků (v souvislosti s použitím dvou izolačních nebo detekčních systémů).


5/6


PT# M/34/2010

4. Závěr Letošní série Průkaz DNA HSV, VZV ukázala celkově velmi dobrou úroveň PCR diagnostiky virů HSV a VZV v laboratořích v ČR. Kvantitativní vyhodnocení naopak ukazují příliš velké rozdíly způsobené odlišným kvantifikačním nastavením, odlišným charakterem výsledků některé komerční souravy a dalšími vlivy. Přesto je nezbytné, aby laboratoře se silně podhodnocenými výsledky optimalizovaly PCR reakci a systém vyhodnocení, neboť hrozí riziko falešné negativity u slabě pozitivních vzorků a zcela diskrepantní výsledky při zaslání vzorků pozitivního pacienta do různých laboratoří (například při kontrole po návratu z centralizované léčby aj.).


6/6

2010 (č. 684) Průkaz DNA HSV a VZV

Recommend Documents