010512

Chlamydia pneumoniae-IgG-sELISA medac

Magyar

 0123

430-TMB-VPU/010512

GYÁRTÓ medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbH Fehlandtstraße 3 D-20354 Hamburg FORGALMAZÓ medac Gesellschaft für klinische Spezialpräparate mbH Geschäftseinheit Diagnostika Theaterstraße 6 D-22880 Wedel Tel.: Fax:

++49/ 4103 / 8006 - 348 ++49/ 4103 / 8006 - 359

RENDELÉSI CÍM Tel.: Fax:

++49/ 4103 / 8006 - 111 ++49/ 4103 / 8006 - 113

430-TMB-VPU/010512

Chlamydia pneumoniae-IgG-sELISA medac Enzim immunoassay Chlamydia pneumoniae IgG antitestek kimutatására Katalógusszám: 430-TMB IN VITRO DIAGNOSZTIKAI HASZNÁLATRA! BEVEZETÉS A Chlamydiae nemzetség Gram-negatív bakteriális patogénekből áll. Van egy obligát intracelluláris életciklusuk a nyálkahártyák felületén, a hámsejtekben, a simaizom sejtekben és a legújabb felismerések szerint a központi idegrendszer bizonyos szövet szerkezeteiben. A Chlamydiák a gazdasejtek nagy energia tartalmú foszfátjaitól függnek, ezért energia paraziták. A Chlamydia nemzetség négy fajból áll: C. pneumoniae, C. trachomatis, C. psittaci, és C. pecorum. A C. pneumoniae és a C. trachomatis obligát humán patogének. A C. psittaci emberre és néhány állatfajra patogén. A C. pecorum-ot eddig csak állatokból izolálták. A C. pneumoniae fertőzések világszerte előfordulnak. A betegség spektruma az influenza-szerű megbetegedéseken túl magában foglalja az alábbiakat: sinusitis, pharyngitis, bronchitis, krónikus obstruktív tüdőbetegségek, pneumonia, és reaktív arthritis. A C. pneumoniae okozati összefüggésbe hozása az alábbi betegségekkel: fertőző asztma, sarcoidosis, tüdőrák, atherosclerosis, acute myocardial infarction, brain stroke, multiple sclerosis, és az Alzheimer kór késői kifejlődése az aktuális kísérletek területe marad. Grayston és Saikku (1989) szerint, akik először írták le ezeket a fajokat, élete során szinte mindenki megfertőződik és újrafertőződik C. pneumoniae-vel. A C.pneumoniae fertőzés gyakran gyenge és/vagy diffúz tünetei a kimutatást megnehezítik; a nem detektált fertőzés komoly következményekkel járó krónikus betegséghez vezethet. A C. pneumoniae fertőzés kimutatására használt módszerek: izoláció sejtkultúrákból, direkt antigén kimutatás, nukleinsav amplifikációs tesztek és szerológia. A sejttenyészetből történő izolálás rendszerint különböző egymást követő passzálást igényel, időigényes, speciális laborokra korlátozódik és csak kevés esetben sikeres. A direct immunfluoreszcens módszert (IFA) és az antigén enzim immunoassay-t (EIA) csak szűk körben használják, alacsony érzékenységet és specificitást tulajdonítanak nekik. 430-TMB-VPU/010512

1

A fajspecifikus antitestek kimutatására a mikroimmunfluoreszcens (MIF) módszert tekintik “arany standardnak". A MIF munkaigényes, szubjektív és nagy gyakorlatot igényel. Ezt a teszt rendszert nem standardizálták, a különböző antigének használata, a régi és jelen fertőzéshez alkalmazott eltérő cut-off kritériumok az eredmények jelentős laborok közötti variációját okozzák. A Chlamydia pneumoniae-sELISA medac kitben nagytisztaságú és specifikus antigént használtak. Az IgM, IgA és IgG antitestek kimutatása lehetővé teszi a fertőzés állapotának megállapítását és a kezelés utáni nyomonkövetést. A Chlamydia pneumoniae-sELISA medac eleget tesz a standardizálási, objektivitási, reprodukálhatósági és automatizálási követelményeknek a rutin laborokban.

430-TMB-VPU/010512

2

A TESZT ELVE

A lemezt nagy tisztaságú C. pneumoniae-specifikus antigennel vonták be.

A mintában levő C. pneumoniaespecifikus antitestek kötődnek az antigénekhez.

Peroxidázzal konjugált anti-humán IgG antitestek kötődnek az IgG antitestekhez (P = peroxidáz).

Inkubálás TMB-szubsztráttal (*). A reakciót kénsav hozzáadásával állítjuk le. Az abszorbanciát fotometrikusan mérjük.

A teszt előnyei  Nagy érzékenység és specificitás.  A törhető csíkok lehetővé teszik a teszt gazdaságos felhasználását.

430-TMB-VPU/010512

3

A KIT TARTALMA Kat. szám: 430-TMB 1.

MTP Mikroplate: 12 x 8 lyuk, (jelölés: CPG, kerettel és szárítószerrel, vákuumzárású alumínium zacskóban), törhető, U-alakú, Chlamydia pneumoniae specifikus antigénnel és FCS-sel bevonva, felhasználásra kész.

2.

CONTROL Negatív kontroll: 1 fiola, 1,5 ml, humán szérum, felhasználásra kész, kék színű, NBCS, fenol, ProClinTM 300 és gentamicin-szulfát tartalmú.

3.

CONTROL + Pozitív kontroll: 1 fiola, 1,5 ml, humán szérum, felhasználásra kész, kék színű, BSA, fenol, ProClinTM 300 és gentamicin-szulfát tartalmú.

4.

WB Mosó puffer: 1 flakon, ProClinTM 300 tartalmú.

5.

100

ml

PBS/Tween

(10x),

pH

7,2

–

7,4,

BAC-DIL Mintahígító: 1 flakon, 110 ml PBS/Tween/NBCS, pH 7,0 – 7,2, felhasználásra kész, kék színű, ProClinTM 300 tartalmú.

6.

CON Konjugátum: 4 fiola, mindegyikben 4,5 ml, kecske anti-humán IgG, HRP-vel konjugált, felhasználásra kész, zöld színű, BSA, fenol, ProClinTM 300 és gentamicin-szulfát tartalmú.

7.

TMB TMB szubsztrát: 1 flakon, 10 ml, felhasználásra kész.

8.

STOP Leállító oldat: 2 flakon, mindegyikben 11 ml, 0,5 M kénsav (H2SO4), felhasználásra kész.

430-TMB-VPU/010512

4

1. TÁROLÁS ÉS STABILITÁS Anyag/reagens Kit Mikroplate

Állapot bontatlan bontott

Kontrollok Mosó puffer Mintahígító Konjugátum TMB szubsztrát Leállító oldat

bontott hígított bontott bontott bontott bontott

Tárolás 2...8 °C 2...8 °C szárítószeres zacskóban 2...8 °C 2...8 °C 2...8 °C 2...8 °C 2...8 °C 2...8 °C

Stabilitás lejárati időig 12 hét 12 hét 12 hét 12 hét 12 hét 12 hét lejárati időig

Ne használjuk a reagenseket a lejárati időn túl! 2. SZÜKSÉGES, DE A KITBEN NEM SZÁLLÍTOTT ANYAGOK ÉS REAGENSEK 2.1. Injekció tisztaságú víz (bidesztillált használata zavarhatja az eljárást.

víz).

Ioncserélt

víz

2.2. Állítható mikropipetták. 2.3. Tiszta üveg, vagy műanyag edények a mosó puffer és a minták hígítására. 2.4. Mikroplatek mosására alkalmas mosó (vagyis többcsatornás pipetta, vagy ELISA mosó). 2.5. Inkubátor, 37 °C. 2.6. Lemezleolvasó 450 és 620 – 650 nm-es szűrőkkel. 3. A REAGENSEK ELŐKÉSZÍTÉSE Az eljárás megkezdése kell hozni.

előtt

az

összes

reagenst

szobahőmérsékletűre

Számoljuk ki a szükséges lyukakat. 3.1. Mikroplate A szükséges csíkok eltávolítása után a maradékot szorosan zárjuk vissza az alumínium zacskóba, a szárítószerrel együtt. A tárolást és stabilitást ld. 1. pont alatt.

430-TMB-VPU/010512

5

3.2. Mosó puffer Keverjünk össze egy térfogategység mosó puffer koncentrátumot (10x) kilenc térfogategység bidesztillált vízzel (pl. 50 ml mosó puffer koncentrátumot 450 ml vízzel). 10 ml hígított mosó puffer szükséges 8 lyukhoz. A mosó puffer koncentrátumban esetlegesen jelenlevő kristályok 37 °C-ra történő melegítéssel és/vagy szobahőmérsékleten történő keveréssel oldhatók fel. A specifikus reagenseket (mikroplate, kontrollok, konjugátum) ne keverjük a különböző gyártási számú kiteknél. Ezzel szemben, a mintahígító, a mosó puffer, a TMB-szubsztrát és a leállító reagens általában felcserélhető az összes Chlamydia-és Mycoplasma-ELISA medac kitben. Más gyártók reagensei nem használhatók. Érvényes és reprodukálható eredmények csak az eljárás pontos követése esetén nyerhetők. 4.

MINTÁK

4.1. A kit szérum minták vizsgálatára alkalmas, plazma nem használható. A beteg minták 7 napig tárolhatóak 2-8 ºC-on. Hosszabb tárolás ≤ -20 °C alatt. Kerüljük az ismételt felolvasztást és fagyasztást. 4.2. A szérumok előkezelése (pl. inaktiválás) nem szükséges. Azonban, a minták ne legyenek baktériumokkal szennyezettek és ne tartalmazzanak vörösvérsejteket. 4.3. A szérumokat 1:50 arányban hígítani kell mintahígítóval. 5.A. AZ ELJÁRÁS MENETE 5.1. Vágjuk el az alumínium zacskót a simítózár felett és vegyük ki a szükséges számú csíkokat (ld. 3.1. pont). A csíkok felhasználásra készek, előmosás nem szükséges. 5.2. Pipettázzunk 50 μl mintahígítót az A1 lyukba, ez lesz a háttér (ld. 6.A.), a következő két lyukba 50 μl negatív kontrollt, az azt követő két lyukba 50 μl pozitív kontrollt, az utána következő lyukakba pedig egyenként 50 μl szérummintát. Ha szükséges, a csíkokat nedves kamrában tarthatjuk 30 percig szobahőmérsékleten a feldolgozás előtt.

430-TMB-VPU/010512

6

5.3. Inkubáljuk a csíkokat 60 percig (± 5 perc) 37 °C-on (± 1 °C) nedves kamrában, vagy a fedőfóliával lezárva. 5.4. Az inkubáció után mossuk a lyukakat háromszor, lyukanként 200 μl hígított mosó pufferrel. Ügyeljünk arra, hogy az összes lyuk tele legyen. Mosás után óvatosan csapkodjuk a lemezt szűrőpapírra. Ne engedjük a lyukakat kiszáradni! Azonnal dolgozzuk fel! 5.5. Adjunk 50 μl konjugátumot (zöld színű) minden lyukba. 50 µl kjugátumot pipettázzunk a lyukakba, ha manuálisan végezzük a végezzük a vizsgálatot. Kérjük figyeljen: Ha automata készülékkel dolgozunk, 60 μl kjugátumot pipettázzunk minden lyukba, a készülék inkubációs kamrájában előforduló nagyobb párolgás miatt. A teszt automatán való alkalmazhatóságát a kiértékelés során megerősítették. Mindazonáltal javasoljuk, hogy a laborban működő automatával való kompatibilitást ellenőrizzük. 5.6. Inkubáljuk a csíkokat ismét 60 percig (± 5 perc) (± 1 °C) nedves kamrában, vagy a fedőfóliával lezárva.

37

°C-on

5.7. Az inkubáció után ismét mossuk a lyukakat (ld. 5.4. pont). 5.8. Adjunk 50 μl TMB szubsztrátot minden lyukba és inkubáljuk sötétben 30 percig (± 2 perc) 37 °C-on (± 1 °C) nedves kamrában, vagy fedőfóliával lezárva. A pozitív minták kék színűek lesznek. 5.9. Állítsuk le a reakciót 100 μl leállító oldattal minden lyukban. A pozitív minták sárgák lesznek. Leolvasás előtt tisztítsuk meg a lemezek alját és győződjünk meg, hogy nincsenek légbuborékok a lyukakban. A leolvasást a leállító reagens hozzáadása után 15 percen belül el kell végezni.

430-TMB-VPU/010512

7

5.B. AZ ELJÁRÁS MENETE TÁBLÁZATOSAN Háttér (A1) Mintahígító Negatív kontroll Pozitív kontroll Minta

50 µl -

Negatív kontroll 50 µl -

Pozitív kontroll 50 µl -

Minta 50 µl

Inkubálás 60 percig 37 °C-on, mosás háromszor 200 μl mosó pufferrel Konjugátum

50/60 µl*)

50/60 µl*)

50/60 µl*)

50/60 µl*)

Inkubálás 60 percig 37 °C-on, mosás háromszor 200 μl mosó pufferrel TMB-szubsztrát

50 µl

50 µl

50 µl

50 µl

Inkubálás 30 percig 37 °C-on, sötétben Leállító oldat

100 µl

100 µl

100 µl

100 µl

Leolvasás fotométerrel 450 nm-en (620 – 650 nm referencia hullámhossz) *) manuális/automata eljárás (ld. 5.5.)

6.A. AZ EREDMÉNYEK SZÁMOLÁSA (VALIDÁLÁS)       

Mérjük meg az OD értékeket 450 nm-en (620 – 650 nm referencia hullámhossz). A háttér (A1) OD értéket minden mért OD-ből vonjuk ki. A háttér OD értéke kisebb legyen, mint 0,100. A negatív kontrollok átlag OD értéke kisebb legyen, mint 0,100. A pozitív kontrollok átlag OD értéke nagyobb legyen, mint 0,800. Cut-off (küszöbérték) = negatív kontrollok átlaga + 0,380 Szürke zóna = Cut-off ± 10 % Ismételjük meg a vizsgálatot, ha az eredmények nem felelnek meg a specifikációnak.

430-TMB-VPU/010512

8

6.B. AZ EREDMÉNYEK ÉRTÉKELÉSE 6.B.1. KVALITATÍV

6.B.2.

Eredmény

Értékelés

OD < szürke zóna Cut – off ± 10 % OD > szürke zóna

negatív határérték pozitív

FÉLKVANTITATÍV OD minta Cut-off-Index: OD Cut-off

Értékelés

< 0,9 0,9 – 1,1 > 1,1

negatív határérték pozitív



A szürke zónába eső mintákat újra kell vizsgálni együtt egy 14 nappal később vett mintával, hogy meg tudjuk határozni a titer változását.



Az eredményeket mindig az IgA és IgM, illetve a klinikai adatokkal és egyéb diagnosztikai paraméterekkel együtt kell értékelni.



Magas hemoglobin-, bilirubinfolyásolja az eredményeket.



Keresztreakciót anti-nukleáris antitestekkel, heterofil antitestekkel, C. psittaci és C. trachomatis antitestekkel bizonyos esetekben nem lehet kizárni.

és

430-TMB-VPU/010512

lipidkoncentráció

nem

be-

9

6.C. SPECIFIKUS IgM/IgA/IgG ÉRTELMEZÉS

Lehetséges eredmény IgM IgA IgG COI* COI COI

Értelmezés

>1,1 +

<0,9 -

<0,9 -

1.

A korai fertőzés, vagy poliklonális B-sejt stimuláció szerológiai indikációja. Vizsgáljuk újra az IgM-t, IgAt és IgG-t 14 nap múlva.

>1,1 +

>1,1 +

<0,9 -

2.

Akut fertőzés szerológiai indikációja. Vizsgáljuk újra az IgG-t 14 nap múlva.

>1,1 +

<0,9 -

>1,1 +

3.

Akut fertőzés kációja.

szerológiai

indi-

>1,1 +

>1,1 +

>1,1 +

4.

Akut fertőzés kációja.

szerológiai

indi-

<0,9 -

>1,1 +

>1,1 +

5.

Jelenlegi fertőzés szerológiai indikációja1. Vizsgáljuk újra az IgA-t és IgG-t 14 nap múlva.

<0,9 -

<0,9 -

>1,1 +

6.

Korábbi fertőzés szerológiai indikációja. Klinikai gyanú esetén vizsgáljuk újra 14 nap múlva az IgA és IgG antitestek alakulását.

<0,9 -

>1,1 +

<0,9 -

7.

A fertőzés korai szakaszának szerológiai indikációja, illetve egyedüli, perzisztáló IgA2. Vizsgáljuk újra az IgM-t, IgA-t és IgG-t 14 nap múlva.

<0,9 -

<0,9 -

<0,9 -

8.

Nincs szerológiai indikációja jelenlegi, illetve korábbi fertő-zésnek3. Klinikai gyanú esetén vizsgáljuk újra 14 nap múlva az IgM, IgA és és IgG antitesteket.

* Cut-off-Index

Megjegyzés: A határérték eredmények kezdődő, illetve járulékos fertőzést jelezhetnek. Ajánlott 14 nap múlva újra vizsgálni.

430-TMB-VPU/010512

10

1

A jelenlegi fertőzés az alábbiakat jelentheti: - krónikus fertőzés perzisztáló patogénekkel: Az antitestek COI értéke több héten keresztül állandó marad. - akut fertőzés: Az antitestek COI értéke szignifikánsan megnövekszik. - nagy IgG koncentráció: Akut fertőzés nem zárható ki. Grayston és tsai. (1989) szerint, MIF IgG titer ≥ 1:512 akut fertőzést jelent.

2

Egyedi esetekben egyedülálló IgA antitestek perzisztálhatnak. Ez az immunológiai jelenség különböző bakteriális fertőzések esetén megjelenik. A klinikai jelentősége nem becsülhető meg.

3

Friss akut C. pneumoniae fertőzések esetén a szerológiai antitest eredmény negatív lehet, a klinikai tünetek és a pozitív antigén teszt ellenére. Amennyiben a pozitív antigén eredmény megerősítése, illetve a követés szükséges, javasoljuk 14 nap múlva a.

430-TMB-VPU/010512

11

7.

A KIT TELJESÍTŐKÉPESSÉGE

Az alábbi teljesítőképességi adatokat határoztuk meg a diagnosztikus kiértékelés során. 7.A.

ÉRZÉKENYSÉG ÉS FAJLAGOSSÁG

Légúti fertőzés tünetei nélküli paciensek szérumait vizsgálták a fajlagosság meghatározására. MIF-fel nem mutattak ki C. pneumoniae elleni antitesteket. Légúti fertőzés gyanús betegek szérumait használták az érzékenység vizsgálatára. MIF-fel minden szérumban C. pneumoniae antiteseket mutattak ki.

Paciens csoport

Fajlagosság

Paciensek légúti fertőzés nélkül; MIF-fel nincs C. pneumoniae antitest.

IgA

IgG

93% (n=86)

95% (n=42)

Paciens csoport

Érzékenység IgA

Paciensek légúti fertőzéssel; MIF-fel minden szérum C. pneumoniae antitestet tartalmazott.

95% (n=74)

430-TMB-VPU/010512

IgG 99% (n=117)

12

7.B. PONTOSSÁG Minta

NC BC PC N° 1 N° 2

Intraassay variáció átlag OD 0,032 0,772 1,990 1,951 0,731

Minta

SD

CV (%)

n

0,009 0,038 0,062 0,098 0,030

28 5 3 5 4

21 21 21 21 21

NC BC PC N° 3 N° 4

Interassay variáció (n = 11) átlag OD SD CV (%) 0,035 0,824 2,133 1,655 1,027

0,004 0,073 0,149 0,140 0,087

11 9 7 8 8

NC = negatív kontroll; BC = gyenge pozitív kontroll (a kit nem tartalmazza); PC = pozitív kontroll

ÁLTALÁNOS KEZELÉSI TANÁCSOK  A kereszt szennyeződések elkerülése érdekében ne cseréljük fel az edényeket és a kupakokat.  A reagenseket használat után azonnal zárjuk le, a párolgás és a mikrobiológiai szennyeződés elkerülése érdekében.  Használat után a reagenseket előírás szerint kell tárolni az eltarthatóság garantálása érdekében.  Használat után az összes komponenst az eredeti edényében tároljuk, a más gyártási számú, illetve más gyártók reagenseivel történő keveredés elkerülése érdekében (ld. 3. pont). EGÉSZSÉGI ÉS BIZTONSÁGI INFORMÁCIÓK  Vegyük figyelembe a helyi biztonsági és egészségügyi előírásokat.  Az emberi eredetű reagenseket megvizsgálták és negatívnak találták HBsAg-re, anti-HIV-1/2-re és anti-HCV-re. Ennek ellenére, ezeket az anyagokat, illetve az állati eredetű reagenseket potenciálisan fertőzőnek kell tekinteni és minden szükséges előírást be kell tartani. MEGSEMMISÍTÉSI SZEMPONTOK A vegyi anyagok és preparátumok maradékai általánosságban veszélyes hulladéknak tekintendők. Az ilyen hulladékok megsemmisítése a nemzetközi és a helyi törvények és előírások szerint szabályozottak. Vegyük fel a kapcsolatot a helyi hatóságokkal, illetve hulladékkezelő cégekkel, melyek segítséget tudnak nyújtani a veszélyes hulladékok megsemmisítésében. Kibocsátás dátuma: 01.05.2012 430-TMB-VPU/010512

13

IRODALOM Balin, B.J., Gérard, H.C., Arking, E.J., Appelt, D.M., Branigan, P.J., Abrams, J.T., Whittum-Hudson, J.A., Hudson, A.P.: Identification and localization of Chlamydia pneumoniae in the Alzheimer’s brain. Med. Microbiol. Immunol. 187, 23-42 (1998). Christiansen, G., Boesen, T., Hjerno, K., Daugaard, L., Mygind, P., Madsen, A.S., Knudsen, K., Falk, E., Birkelund, S.: Molecular biology of Chlamydia pneumoniae surface proteins and their role in immunopathogenicity. Am. Heart J. 138, 491-495 (1999). Danesh, J., Collins, R., Peto, R.: Chronic infections and coronary heart disease: is there a link? Lancet 350, 430-436 (1997). Elkind, M.S., Lin, I.F., Grayston, J.T., Sacco, R.L.: Chlamydia pneumoniae and the risk of first ischemic stroke. The Northern Manhattan stroke study. Stroke 31, 1521-1525 (2000). Gérard, H.C., Schumacher, H.R., El-Gabalawy, H., Goldbach-Manksy, R., Hudson, A.P.: Chlamydia pneumoniae present in the human synovium are viable and metabolically active. Microb. Pathog. 29, 17-24 (2000). Grayston, J.T.: Epidemiology of Chlamydia pneumoniae (TWAR). In: Chlamydia Research. Angelika Stary (ed.). Proceedings of the Third Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Vienna, Austria, 11.14. September, 211-214 (1996). Grayston, J.T., Aldous , M.B., Easton, A., Wang, S.P., Kuo C.C., Campbell, L.A., Altman, J.: Evidence that Chlamydia pneumoniae causes pneumonia and bronchitis. J. Infect. Dis. 168, 1231-1235 (1993). Gupta, S., Leatham, E.W., Carrington, D., Mendall, M.A., Kaski, J.C., Camm, A.J.: Elevated Chlamydia pneumoniae antibodies, cardiovascular events, and azithromycin in male survivors of myocardial infarction. Circulation 96, 404-407 (1997). Gurfinkel, E., Bozovich, G., Daroca, A., Beck, E., Mautner, B.: Randomised trial of roxithromycin in non-Q-wave coronary syndromes: ROXIS pilot study. Lancet 350, 404-407 (1997). Hahn, D.L., Peeling, R.W., Dillon, E., McDonald, R., Saikku, P.: Serologic markers for C. pneumoniae in asthma. Ann. Allergy Asthma Immunol. 84, 227-233 (2000). Hunter, S.F., Hafler, D.A.: Ubiquitous pathogens: Links between infection and autoimmunity in MS? Neurology 55, 164-165 (2000). Kuo, C. C., Jackson, L.A., Campbell, L.A., Grayston, J.T.: Chlamydia pneumoniae(TWAR). Clin. Microbiol. Rev. 8, 451-461 (1995). Layh-Schmitt, G., Bendl, C., Hildt, U., Dong-Si, T., Jüttler, E., Schnitzler, P., Grond-Ginsbach, C., Grau, A.J.: Evidence for infection 430-TMB-VPU/010512

14

with Chlamydia pneumoniae in a subgroup of patients with multiple sclerosis. Ann. Neurol. 47, 652-655 (2000). Maass, M., Bartels, C., Engel, P.M., Mamat, U., Sievers, H.H.: Endovascular presence of viable Chlamydia pneumoniae is a common phenomenon in coronary artery disease. J. Am. Coll. Cardiol. 31, 827-832 (1998). Muhlestein, J.B.: The link between Chlamydia pneumoniae and atherosclerosis. Infect. Med. 14, 380-382, 392, 426 (1997). Saikku, P.: Chronic Chlamydia pneumoniae infections. In: Chlamydia Research. Angelika Stary (ed.). Proceedings of the Third Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Vienna, Austria, 11.-14. September. 215-218 (1996). Saikku, P., Leinonen, M., Mattila, K., Ekman, M.R., Nieminen, M.S., Mäkela, P.H., Huttunen, J.K., Valtonen, V.: Serological evidence of an association of a novel Chlamydia, TWAR, with chronic coronary heart disease and acute myocardial infarction. Lancet 2, 983-986 (1988). Saikku, P., Leinonen, M., Tenkanen, L., Linnanmäki, E., Ekman, M.R., Manninen, V., Manttari, M., Frick, M.H., Huttunen, J.K.: Chronic Chlamydia pneumoniae infection as a risk factor for coronary heart disease in the Helsinki Heart Study. Ann. Intern. Med. 116, 272-278 (1992). Samra, Z., Soffer, Y.: IgA antichlamydial antibodies as a diagnostic tool for monitoring of active chlamydial infection. Eur. J. Epidemiol. 8, 882-884 (1992). Schumacher, H.R.: Chlamydial Arthritis. In: Chlamydia Research. Pekka Saikku (ed.). Proceedings of the 4th Meeting of the European Society for Chlamydia Research, Helsinki, Finland, 20.-23. August. 229 (2000). Sriram, S., Stratton, C.W., Yao, S.: Chlamydia pneumoniae infection in the central nervous system in multiple sclerosis. Ann. Neurol. 46, 614 (1999). Stille, W., Just-Nübling, G.: Argumente für eine Antibiotika-Therapie der Arteriosklerose. Chemotherapie Journal 6, 1-5 (1997).

430-TMB-VPU/010512

15