Výsledky testování sady 19 glukometrů
Drahomíra Springer ÚLBLD VFN a 1.LF UK Praha
Konstrukce glukometrů • Princip stanovení – GOD • stabilní, vysoká specifita pro glukózu • může být ovlivněna rozpuštěným O2
– PQQ-GDH (pyrrolchinolin chinon)
• není ovlivněna rozpuštěným O2, vysoká rychlost reakce • širší substrátová specifita
– NAD+-GDH • není ovlivněna rozpuštěným O2
– FAD+-GDH
Většinou elektrochemická detekce
– přenos elektronů prostřednictvím mediátoru
Mediátor - malá molekula schopná existovat v oxidované i redukované formě s redox potenciálem blízkým redox potenciálu koenzymu, stabilní. rozpustná ve vodě, redox potenciál nezávislý na pH
Přenos elektronů mezi redukovaným koenzymem a elektrodou • Přímý přenos • vysoká citlivost a selektivita • jednoduchá konstrukce • problematická vzdálenost koenzymu od elektrody
elektroda
substrát
produkt
Použití mediátoru • nižší selektivita • přenos elektronů z interferujících reakcí •
např. u GOD kompetice O2 a mediátoru o elektrony
elektroda
substrát
produkt
Osobní glukometry
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
glukometr One Touche Ultra smart Accu-Chec Performa Nano OneTouche VerioPro SD CodeFree Bionime BM 100 Glucocard X-mini plus Contour TS One Touche Vita Contour Link FreeStyle Freedom Glucocard X-Meter One Touche Ultra easy Wellion Calla Beurer GL50 Bionime BM 550 Beurer GL44 Optium Xceed Bionime BM 300 EasyGluco
Princip stanovení GOD a ferrikyanid draselný. PQQ-GHD FAD-GDH a ferrikyanid draselný. FAD-GDH a ferrikyanid draselný. GOD a ferrikyanid draselný. GHD a hexaaminruthenium chlorid FAD-GDH a ferrikyanid draselný. GOD a ferrikyanid draselný. FAD-GDH a ferrikyanid draselný. FAD-GDH GHD a hexaaminruthenium chlorid GOD a ferrikyanid draselný GOD chinoprotein FAD-GDH a ferrikyanid draselný. GODa ferrikyanid draselný. FAD-GDH a ferrikyanid draselný. FAD-GDH GOD a ferrikyanid draselný. Biosenzorová technologie. PQQ-GHD NAD-GHD GOD FAD-GDH
glucose dehydrogenase with pyrrolchinolin-chinon komplex glucose-1-dehydrogenase with nicotinamidadenindinucleotid coenzym glucose oxidase glucose-1-dehydrogenase with flavinadenindinucleotid coenzym
Substrátová specifita enzymů GOD
NAD-GHD
100
100
100
D-galaktóza
0
0
12
D-manóza
3
10
17
maltóza
0
0
71
sacharóza
0
0
0
fruktóza
0
0
0
laktóza
0
1
56
D-glukóza
PQQ-GHD
PQQ-GHD
glucose dehydrogenase with pyrrolchinolin-chinon komplex
NAD-GHD
glucose-1-dehydrogenase with nicotinamidadenindinucleotid coenzym
GOD
glucose oxidase
FAD-GDH
glucose-1-dehydrogenase with flavinadenindinucleotid coenzym
Roche
Interference • Hematokrit vysoké hodnoty glukóza , nízké hodnoty glukóza • Hct - viskozita krve - zpomalení difúze ampérometrický proud • proužky s GOD: O2 z erytrocytů soutěží s mediátorem o elektrony ampérometrický proud • běžné přístroje: Hct 30 – 55 %, • glukometry s impedanční korekcí: Hct 0 – 70 %
• Kyslík – Zvýšený parciální tlak O2 • glukometry s GOD výsledky glukózy – Vliv kyslíku výrazný při pO2 > 13,3 kPa •
glukóza
Kompetice O2 a mediátoru o elektrony z redukovaného koenzymu FADH2
glukometr 1 2
3 4 5 6 7
8 9 10 11 12 13
14 15 16 17 18
19
One Touche Ultra smart Accu-Chec Performa Nano OneTouche VerioPro SD CodeFree Bionime BM 100 Glucocard X-mini plus Contour TS One Touche Vita Contour Link FreeStyle Freedom Glucocard X-Meter One Touche Ultra easy Wellion Calla Beurer GL50 Bionime BM 550 Beurer GL44 Optium Xceed Bionime BM 300 EasyGluco
HCT % 30- 55 10 – 65 30- 55 30 – 55 30 – 55 30 – 55 0-70 30 – 55 0-70 15- 65 30 – 55 30- 55 30- 55 30- 55 30 – 55 30- 55 15- 65 30-55 30- 55
Elektrochemické interference Řada látek interferuje při elektrochemické detekci poskytováním elektronů falešné zvýšení hodnoty glukózy • s askorbátem reagují všechny komerčně vyráběné proužky • interference většiny látek není významná – např. bilirubin, TAG, kyselina močová • vliv léčiv podávaných v terapeutických dávkách je zanedbatelný – při podezření na otravu acetaminofenem (paracetamol) nutno analyzovat glukózu standardní laboratorní technikou
ABBOTT
Správnost v nízkých a vysokých hladinách mmol/l 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
One Touche Ultra smart Accu-Chec Performa Nano OneTouche VerioPro SD CodeFree Bionime BM 100 Glucocard X-mini plus Contour TS One Touche Vita Contour Link FreeStyle Freedom Glucocard X-Meter One Touche Ultra easy Wellion Calla Beurer GL50 Bionime BM 550 Beurer GL44 Optium Xceed Bionime BM 300 EasyGluco
<3,6 90 100 100 90 75 100 100 90 100 100 100 90 100 100 80 100 100 20 90
>20,0 75 100 85 90 85 65 95 65 90 90 55 65 80 80 85 65 70 85 70
Glucocard Arkray
Opakovatelnost 8,00
průměr 12,37 mmol/l
7,00
průměr 4,74 mmol/l
6,00
CV %
5,00 4,00 3,00 2,00
1,00 0,00 0
1
2
3
4
5
6
7
8
9 10 11 Glukometr
12
13
14
15
16
17
18
19
BEURER
Mezilehlá preciznost 6,00
průměr 4,31 mmol/l průměr 9,53 mmol/l
5,00
CV %
4,00
3,00
2,00
1,00
0,00 0
1
2
3
4
5
6
7
8
9 10 Glukometr
11
12
13
14
15
16
17
18
19
Bionime
Srovnání s výsledkem získaným HK metodou
Dvě hladiny glukózy kontrolní materiál pro EHK 15,00
13,00
glukóza (mmol/l)
11,00
9,00
7,00
5,00
3,00 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
One Touch
Hodnocení osobních glukometrů v RL pro klinickou biochemii při ÚLBLD VFN a 1. LF UK
Wellion CALLA light Accu-Chek Performa Nano Fora Diamond Prima - DM10 Fora Diamond Mini - DM30 Glukometr Contour TS Glucocard X-meter Glucocard X-mini plus
Hodnocení osobních glukometrů • s ohledem na normu EN ISO 15197, doporučení NACB: „Summary Guidelines and Recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of diabetes mellitus“ (2011) a české doporučení „Diabetes mellitus - laboratorní diagnostika a sledování stavu pacientů“ (2012).
Hodnocení osobních glukometrů • Testování je prováděno akreditovanou metodu Stanovení glukózy systémem glukometr – měřící proužek pro ověření funkce glukometru. • Srovnání výsledků měření získaných glukometrem a hexokinázovou metodou ve venózní krvi. Metoda testování byla v roce 2013 reakreaditována dle normy ISO 17 025 Českým institutem pro akreditaci. • Testování systémů glukometr-proužek - žadatel o posouzení dodá 2 glukometry a minimálně 400 proužků ze dvou šarží.
Metoda pro hodnocení glukometrů v RL • Referenční metoda – vysoká specifita reakce 1. katalýza hexokinázou: fosfátová skupina z ATP se váže na glukózu 2. katalýza glukóza-6-fosfátdehydrogenázou: oxidace glukóza-6fosfátu na 6-fosfoglukonát – oxidační činidlo NADP+ se přitom redukuje na NADPH2 růst absorbance při 340 nm – IFCC doporučení: před analýzou deproteinace HClO4 – stanovení ruší hemolýza a léčiva absorbující v UV
BAYER
Korelační graf Scatterplot of glucometr against HK method glucometr = 1,2928+0,8794*x 35
30
glucometr
25
20
15
10
5
0 0,00
5,00
HK method:glucometr: r 2 = 0,9624
10,00
15,00
20,00
HK method
25,00
30,00
35,00
Rozdílový graf
30
25
20
15
10
5
0 kapilární
žilní
Hodnocení osobních glukometrů – Hodnocení: • Závazná úspěšnost 95% výsledků +/- 0,8 mmol/l pro < 5,6 mmol/l +/- 15% pro >5,6 mmol/l Další rozdělení naměřených výsledků: Do ±0,3 mmol/L
Do ± 0,55 mmol/L
Do ± 0,8 mmol/L
18/40 (45 %)
28/40 (70 %)
38/40 (95 %)
Do ±5 %
Do ± 10 %
Do ± 15 %
36/160 (22 %)
78/160 (49 %)
156/160 (97 %)
Celkem: Do ± 0,8 mmol/L a ± 15 % 194/200 (97%)
WELLION Calla Luna
Srovnání hexokinázové metody s YSI • Venózní krev od dobrovolníků • Upravená – „zestárnutím“ přes noc – nízké hladiny – Přídavkem glukózy
• Měření během 60 minut na YSI a spektrofotometru Viva E
YSI 2300 Glucose Analyzer Specifický enzym je imobilizován mezi dvě membrány, polykarbonátovou a z acetátcelulózy. Peroxid vodíku jako produkt enzymatické reakce prochází acetátcelulózovou memránou k platinové elektrodě, kde dochází k jeho oxidaci. Výsledek koreluje s původní koncentrací substrátu ve vzorku
Srovnání 26 24 22 C
20 E
Hexokinase
18 16 14 12
B
10 8
D
D
6 4 B
2
E C
0 0
2
4
6
8
10
12 YSI
14
16
18
20
22
24
26
Infopia
Code Free
SEKK Stanovení glukózy (včetně glukometrů) • Kontrola je určena pro všechny systémy, které umožňují stanovení glukózy, včetně systémů POCT glukometrů • Vzorky : sérum, 1 sada obsahující 2 lyofilizované vzorky po cca 2 ml • Zprávy pro účastníky: osvědčení o účasti, certifikát, výsledkový list (kvantitativní výsledky), komplexní statistika • Certifikát není vystavován pro systémy POCT. • Minimální objednávka: 2 cykly • Každý účastník si v rámci tohoto programu může otestovat až 10 glukometrů. • Pracoviště, která nedisponují potřebným laboratorním vybavením si mohou objednat jednoduchou soupravu (plastová pipeta 2 ml dělená po 0,2 ml + silikonový dudlík) určenou pro odměření rekonstituentu. • • Cena jednoho cyklu EHK (včetně jedné sady vzorků) 1200 Kč • Pipetovací souprava 190 Kč
Výsledky externí kontroly 14 12 GLC 1/10 A
10 GLC 1/10 B
8
GLC 2/10 A
6
GLC 2/10 B
4
GLC 1/11 A
2 0
GLC 1/11 B
SEKK 2011 - 2012 18,0 16,0 14,0 12,0 GLC2/11 A
10,0
GLC2/11 B
8,0
GLC 1/12 A
6,0
GLC 1/12 B
4,0 2,0 0,0 target value
Accu chekOne Touch UltraOptium Xceed Performa Nano
Glucocard X metr Arkray
Accu chek Inform
Contour Bayer Element Infopia
Accuchek Performa, Nano
SEKK 2012 - 2012
Accuchek Inform II One Touch Vita
One Touch Ultra Nova StatStrip Contour Optium Xceed Glucocard Arkray Element target value
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Děkuji za pozornost
Nejsou zdraví lidé, jsou jen nedostatečně vyšetření
