VI. BAHAN TAMBAHAN (ADDITIVES)

VI. BAHAN TAMBAHAN (ADDITIVES) Additif atau preservative biasanya mereka disebut, ditambahkan pada beberapa radiofarmasetik atau senyawa berlabel agar mencegah integritas mereka dan efikasi. Seperti diterangkan dimuka, senyawa berlabel adalah prone to degradation disebabkan oleh radiolisis dan ada kemungkinan dari pertumbuhan bakteri dalam beberapa radiofarmasetik. Dalam beberapa hal additif mencegah komplikasi ini. Perservatif dapat berfiingsi sebagai stabilizer, antioksidan, atau agen bakterisidal, dan beberapa additive dapat menunjukkan semua fungsi ini secara simultan. Additif harus tidak bereaksi dengan semua ingridien dari sediaan radiofarmasetik. Stabilizer ditambahkan untuk menjaga integritas dari radiofarmasetik atau senyawa berlabel dalam keadaan originalnya. Mereka sangat penting dalam sediaan radiofarmasetik, terutama bila sediaan untuk disimpan dalam waktu lama. Asam askorbat, asam gentisat, sitrat dan asetat semua adalah stabilizer untuk beberapa sediaan

9m

Tc -berlabel. Agen aktif-permukaan seperti tween-80 digunakan dalam

sediaan dari

99m

Tc-berlabel albumin mikrospher untuk mencegah agregasi. Gelatin

banyak 'digunakan stabilizer untuk sediaan koloidal, tetapi sifatnya sebagai media tumbuh cenderung untuk encourage pertumbuhan bakteri. Alasan ini stabilkizer yang baik dan penanganan aseptik dari sediaan yang mengandung gelatin adalah penting. Agen baketeriosidal digunakan untuk mencegah microbial atau pertumbuhan bakteri dalam larutan. Benzil alkohol dalam konsentrasi 0,9% banyak digunakan untuk maksud ini. Konsentrasi serendah ini dari senyawa ini digunakan sebab dia mempunyai efek fasodilatating. Benzil alkohol juga mereduksi radiolisis dalam sediaan radiofarmasetik. Kadang-kadang etanol 2,0% digunakan sebagai agen bakterisidal. Agen ini umumnya tidak ditambahkan pada 9mTc -khelat. pH dari radiofarmasetik sangat penting untuk stabilitas dan sifat biologik. Maintenan dari pH yang baik dari larutan adalah penting. Ini dicapai dengan menambahkan asam, alkali atau buffer yang tepat seperti Tris-bufer atau fosfat bufer untuk sediaan radiofarmasetik. Hilangnya radioiodine disebabkan oleh oksidasi iodine dalam larutan iodide sering dicegah dengan penambahan agen reduksi seperti sodium tiosulfat, sodium sulfit, atau asam askorbat.

Universitas Gadjah Mada

RADIO IMMUNOASSAY (RIA) Metoda Radio Immunoassay (RIA) poertama dikembangkan oleh S.A. Berson dan RS.Yallow dalam akhir 1950 untuk menentukan insulin dalam serum albumin. Sekarang, metoda digunakan secara ekstensif untuk menentukan beberapa hormon, enzim, dan obat dalam jumlah kecil (10-9 — 10-12 M). Dalam plasma manusia agar supaya Assess berbagai kondisi penyakit. Term umum untuk metoda ini di dalam keduanya sistem immun dan non immun adalah penetapan kadar ikatan kompetitif (CBA) Prinsip Metoda RIA di dasarkan pada pembentukan kompleks antigen antibodi dan terutama prinsip dari teknik pengenceran isotop. Antigen (Ag) adalah substansi (misalnya hormon) yang dapat menginduksi produksi antibodi dalam badan dan mengikat pada antibodi yang sangat spesifik. Sebaliknya, antibodi (Ab) umumnya adalah protein yang diproduksi dalam respon imunologik pada antigen dan membentuk kompleks spesifik dengan antigen. Dalam metoda RIA, campuran antigen radiolabel (Ad) dan antigen tak berlabel ditambahkan pada sejumlah antibodinya yang tak cukup untuk membentuk kompleks antigen-antibodi dengan semua antigen (keduanya berlabel dan tak berlabel). Dalam pembentukan kompleks ini, kedua tipe antigen akan berkompetisi untuk menempati tempat ikatan pada antibodi, dan keduanya kompleks berlabel dan tak berlabel akan dibentuk dalam proporsi pada sejumlah antigen yang sesuai. Jadi dalam campuran MA, akan terjadi reaksi sebagai berikut : Ab + Ag Ab — Ag + Ag Ab + Ag* +-* Ab — Ag* + Ag* Di sini antibodi berada dalam jumlah tak cukup untuik mengikat semua antigen berlabel dan tak berlabel. Sering sekali, di dalam campuran RIA antigen berlabel yang tak bereaksi dipilih untuk sebagai antigen bebas dan konsentrasinya dinyatakan sebagai F, dan kompleks antigen-antibodi berlabel (Ab - Ag*) dipilih sebagai ikatan antigen dan konsentrasinya dinyatakan sebagai B. Untuk sejumlah konstan dari antibodi dan antigen berlabel (dengan antibodi tak cukup untuk membentuk kompleks dengan semua antigen berlabel dan tak berlabel), jumlah dari ikatan antigen akan membalik proporsional menjadi jumlah dari antigen tak berlabel. Maka, bila jumlah antigen talc berlabel dinaikkan, jumlah dari antigen terikat akan turun dengan concomitant kenaikan dalam jumlah antigen bebas yang

Universitas Gadjah Mada

meninggalkan dalam campuran dan sebaliknya. Jadi rasio antigen terikat dan bebas (B/F) adalah fungsi dari konsentrasi dari antigen talc berlabel dalam campuran RIA dan dapat di utamakan dalam penentuan antigen dari koinsentrasi yang tidak diketahui dalam sampel dengan menggunakan standard atau kurva dosis-respon sebagai yang diterangkan terakhir. Inkubasi Dalam banyak hal waktu inkubasi pada temperatur tertentu dipersyaratkan untuk memacu pembentukan kompleks antara antibodi dan antigen. Misalnya, untuk MA dari digoksin, campuran diinkubasikan selama 2 jam pada 25°C; untuk vitamin B12 waktu inkubasi adalah 90 menit pada temperatur kamar; Untuk insulin 18 jam pada 14°C. Strict adherence pada temperatur tertentu dan waktu inkubasi adalah esensial. Pemisahan kompleks antibodi-antigen Untuk menentukan konsentrasi antigen terikat dan bebas dalam campuran RIA, keduanya hams dipisahkan satu sama lain. Sejumlah metoda pemisahan telah dibuat di dasarkan pada sifat fisiko kimia dari antigen terikat dan bebas. Beberapa dari metoda umum yang digunakan untuk pemisahan dua sepsies adalah :

1.

Presipistasi dengan reagen seperti etanol, polietilenglikol, dan amonium sulfat.

2.

Adsorbsi antigen pada solid surface seperti talk, charcoal, selulosa, dan silika.

3.

Adsorbsi antibodi pada solid fase seperti gelas atau plastik.

4.

Gel filtrasi menggunakan sephadex dan bio-gel.

5.

Metoda antibodi-ganda di mana antiodi kedua ditambahkan pada campuran MA agar supaya mengendapkan antigen terikat.

Metoda Pertama standard atau kurva dosis-respon dibuat menggunakan seri sampel yang mengandung antigen tak berlabel dengan kenaikkan konsentrasi yang diketahui, termasuk satu sampel dengan antigen yang tanpa tak berlabel; yang akhir ini dipilih sebagai standard nol. Untuk masing-masing sampel ini, sejumlah diketahui dari antigen berlabel dan sejumlah konstan dari antibodi (ingat, antibodi tak cukup untuk berik atan dengan semua antigen berlabel dan tak berlabel (ditambahkan ). Setelah inkubasi untuk perioda tertentu, pada temperatur tertentu, antigen terikat dan bebas dari masing-masing sampel dipisahkan dengan metoda kimia yang sesuai. Baik

Universitas Gadjah Mada

jumlah antigen terikat maupun bebas ditentukan dan rasio B/F atau persen dari ikatan dihitung. Harga ini kemudian diplotkan terhadap logaritma dari konsentrasi antigen tak berlabel dari masing-masing sampel. Plot ini adalah kurva standard untuk RIA dari senyawa tertentu yang diteliti. Kurva standard tipikal ditunjukkan dalam gambar 11-1. Untuk sampel dengan jumlah antigen yang tidak diketahui, diikuti prosedur yang identik, B/F atau persen terikat dihitung dan tingkat hubungan dari antigen dibaca dari kurva standard. Dalam konstruksi dari kurva standard, kadang-kadang F/B dan B/Bo juga dipolotkan pada ordinat dalam tempat B/F. Disini Bo adalah konsentrasi dari antigen terikat dalam sampel standard 0 di mana tidak ada antigen tak berlabel ditambahkan. Kurva ini tidak linier, sebagai bukti dari gambar 11-1 maka, plot linier dari data bisa di dapat dengan menggunakan fungsi cahaya, yang didifinisikan sebagai

Dimana Y = B/Bo. Bila logit (Y) diplotkan terhadap log (Ag), dihasilkan kurva linier, membuatnya ini lebih mudah untuk membaca data. Sensitifitas dan spesifisitas Penggunaan dari metoda RIA terletak pada sensitifitas dan spesifisitasnya untuk membentuk kompleks antigen-antibodi. Selebihnya, metoda sangat tepat dikarenakan sensitifitas dan spesifi sitasnya. Sensitifitas dari metoda menyatakan tingkat minimum dari antigen yang dapat dideteksi dengan metoda ini. Tingkat yang lebih rendah, ketinggian dari sensitifitas metoda ini. Metoda RIA sensitif tinggi disebabkan karena adanya radiaktivitas yang dapat dideteksi dalam jumlah kelumit. Spesifisitas menyatakan kemampuannya untuk menepatkan kadar hanya satu spesies dalam campuran beberapa senyawa. Dalam RIA, reaksi immunologik antara antigen dan antibodi sangat spesifik, dan maka dari itu metoda ini mempunyai spesifisitas tinggi. Peptida, hormon, obat dsb dapat dideteksi dalam jarak 10-9 — 10-12 M. Konsentrasi ini sebaliknya tidak mungkin untuk mengestimasi dengan beberapa metoda kimia. Ketelitian dari metoda tergantung pada berbagai faktor percobaan dan spesifisitas dari reaksi antigen-antibodi. Ketepatan dari MA sering di pengaruhi oleh kesalahan percobaan dalam memipet

Universitas Gadjah Mada

reagen, pemisahan kimia dari kompleks, dan penghitungan. Aplikasi Metoda RIA atau CBA sangat berguna dalam penetapan kadar berbagai hormon, enzim, steroid, dan peptida dalam plasma. Pengukuran ini menghasilkan informasi dalam keadaan normal dan abnormal dari pasien. Beberapa contoh dari substansi yang secara rutin ditetapkan dengan RIA atau CBA adalah T3, T4 dan ACTH, Calcitonin, Gastrin, Angiotensin, Insulin, Asam folat, Virus Hepatitis B, Antigen karsinoembrionik, Vitamin B12, Aldo-steron, Hormon pertumbuhan manusia, Prolaktin, Estradiol, Progesteron, Kortisol, dan banyak lagi. Yang lain adalah aplikasi MA telah dalam menentukan tingkat serum dari obat yang telah diberikan pada pasien. Contoh yang sangat penting adalah penetapan kadar tingkat digoksin dalam plasma pasien dengan penyakit jantung. Contoh lain adalah penetapan kadar berbagai antibiotik seperti gentamisin. Kit dipasarkan oleh pabrik untuk RIA dari senyawa yang disebutkan di atas. Dalam kit material berikut termasuk : 1.

Seri dari sampel standard yang mengandung kenaikan jumlah dari antigen tak berlabel.

2.

Vial dari antigen berlabel.

3.

Vial dari larutan antibodi dan

Zat pengendap atau antibodi kedua untuk mengendapkan kompleks antigen - antibodi dengan metoda antibodi-ganda. Tergantung dari tipe metoda RIA, material suplemen lain bisa disiapkan. Umumnya

125

I

atau 131I antigen berlabel digunakan. Semua dalam beberapa hal 3H — atau

14

C berlabel antigen digunakan, mereka

digunakan terbatas karena aktivitas spesifiknya rendah.

Universitas Gadjah Mada

SCHILLING TEST Schilling test menandakan absorbsi normal atau abnormal dari vitamin B12 (Sianokobalamin) sebagai anemia perniciosa. Vitamin B12 dilabel dengan

57

Co atau

60

Co diberikan untuk pasien puasa dan ekskresi urin 24 jam dan kelumit diukur dan

digunakan sebagai indeks dan keadaan sakit. Dalam prosedur aktual, pasien diminta untuk puasa semalam; 0,5 g

57

Co atau

60

Co -

vitamin B12 yang mengandung 0,5 Ci radioaktivitas diberikan secara oral, diikuti dengan pemberian intramuskuler dari jumlah besar dosis (~ 1000 g) vitamin B12 dingin. Yang akhir digunakan untuk menghilangkan ekskresi urin dan vitamin B12 dan menjenuhkan hati dan jaringan lain. Standard radioaktif disipakan dengan aliquot atau sejumlah identik dan dosis yang diberikan. Urin dikoleksi selama periode 24 jam. Aktivitas dalam 24 jam urin dan standard diukur, persen terekskresi dalam 24 jam dihitung. Harga normal dan ekskresi urin dari vitamin B12 dalam jarak 10% - 40% (rata-rata 18%). Harga di bawah batas ini menandakan mal absorbsi dan vitamin B12. Bila harga di bawah normal (< 7%), anemia perniciosa bisa dibedakan dan penyakit lain yang berhubungan. Prosedur diulangi beberapa hari kemudian dengan 30 mg faktor intrinsik yang diberikan secara oral selama dengan radioaktif vitamin B12. Dalam hal anemia perniciosa atau gastrektomi total, ekskresi urin 24 jam menjadi normal (10% - 40%). Di dalam sindrom tidak dipengaruhi oleh faktor intrinsik, harga masih tetap rendah. Secara alternatif, metoda isotop ganda bisa digunakan, dan ulangan dari schilling test dalam hal anemia perniciosa dihindari. Dalam metoda ini, kapsul yang mengandung keduanya

57

Co vitamin B12 dan intrinsik faktor, dan kapsul lain yang hanya

mengandung

58

Co vitamin B12 secara oral diberikan simultan. Kedua isotop dalam 24

jam sampel urin dihitung dalam well counter dalam dua windows energi.

Universitas Gadjah Mada