Drog Fókuszpont, Budapest, 2011. december 6.
Új pszichoaktív anyagok kimutatása biológiai mintákból Hidvégi Előd, Dobos Adrienn, Dr. Somogyi Gábor Pál ISZKI - Országos Toxikológiai Intézet
Általános bevezetés
A toxikológia definíciója Kémiai anyagok élő szervezetekre gyakorolt súlyos hatásával foglalkozó tudomány.
A toxikológia ágai • • • • • •
Ökotoxikológia Klinikai toxikológia Környezeti toxikológia In vitro toxikológia Igazságügyi toxikológia Stb.
Toxikológiai vizsgálatok célja 1. DIAGNOSZTIKUS SZOLGÁLTATÁS (büntetőeljárást nem von maga után, klinikai és igazságügyi labor is nyújthat) • • • •
SZIMPTOMATOLÓGIA (adott tünetegyüttes hátterében van-e toxikus hatás) TERÁPIA (hatásos gyógymód megválasztása) MONITORIZÁLÁS (a terápia hatásosságát méri intoxikált esetben) REHABILITÁCIÓ (indikátor a további kezeléshez)
2. IGAZSÁGÜGYI SZOLGÁLTATÁS (büntetőeljárást vonhat maga után, csak igazságügyi toxikológiai labor nyújthatja, 282/2007. Korm., 2. melléklet, 3. pont): Toxikológiai vizsgálatok: a) igazságügyi boncolásból származó minták megerősítő vizsgálata b) biológiai minták toxikológiai vizsgálata, ha nem esik az a) pontban foglaltak alá (+egyetemi intézetekkel együtt) ISZKI Toxikológiai Intézet c) anyagmaradványok, minták toxikológiai vizsgálata (+MH Honvéd Egészségügyi Központ) g) mérgező hatású anyaggal történt emberi mérgezési eset toxikológiai szakkérdései (+OKBI, MH HEK)
3. KUTATÁS (módszerek fejlesztése, új eljárások bevezetése, a tudomány gazdagítása)
IGAZSÁGÜGYI SZOLGÁLTATÁS Leggyakrabban a Btk. 282. §-ára hivatkoznak A vizsgálat célja lényegét tekintve általában kétféle: Kábítószer-fogyasztás megállapítása, valószínűsítése
Vizsgálat a kábítószeres befolyásoltság megítélésének elősegítésére
Rendelkezésre álló minták •Vizelet (fogyasztás-vizsgálathoz) •Vér (fogyasztás- és befolyásoltság-vizsgálatokhoz)
Kérdések - válaszok: •Fogyasztott-e kábítószert, ha igen mit? Megadható. •Milyen mennyiségben van jelen? Megadható. •Mekkora a kábítószeres befolyásoltság mértéke? Orvosszakértői feladat. •Mikor fogyasztotta, mennyit, milyen rendszerességgel? Legfeljebb igen nagy bizonytalansággal adható meg.
A vizsgálatok típusai
TOXIKOLÓGIAI VIZSGÁLATI MÓDSZEREK •
ELV: független két módszer, az egyik specifikus
•
SZŰRŐVIZSGÁLAT – színreakciók – vékonyréteg-komatográfia (TLC) – immunoassay (gyorstesztek, FPIA, CEDIA, stb.)
•
MEGERŐSÍTÉS – – – –
gázkromatográfia (GC) nagyhatékonyságú-folyadékkromatográfia (HPLC) tömegspektrometria (MS) kapcsolt technikák: GC-MS, LC-MS, MS-MS
MÓDSZEREK JELLEMZŐI SZŰRŐVIZSGÁLATOK – –
egyszerű gyors
–
NEM KELLŐEN SPECIFIKUS ÉS SZELEKTÍV!!!!!
MEGERŐSÍTŐ VIZSGÁLATOK GC :
- nagy felbontás - kritikus a forráspont - hőstabilitás - széles lineáris tartomány (FID)
HPLC : - kisebb felbontás - egyszerűbb mintaelőkészítés - hőérzékeny vegyületekre is alkalmas MS:
- nagy szelektivitás és érzékenység - „ujjlenyomat” (tömegspektrum) a különböző molekulákról - direkt szerkezetazonosítás
„Érzékenység” (1/LOD)
Specifikus — Általános Egy általános vizsgálatnak kisebb az „észlelőképessége” adott vegyületcsoport esetén, mint a célvizsgálatnak. Egy specifikus célvizsgálat eleve csak bizonyos előre definiált vegyület(csoport) érzékeny kimutatására alkalmas.
ncélvegyület
Szűrés - megerősítés Alkalmas Fluoreszcens polarizációs immunkémiai eljárás
Abbott AxSym® Gázkromatográftömegspektrometriás minőségi és mennyiségi megerősítő vizsgálat
Shimadzu GCMS
Nem alkalmas
Vegyületcsoportspecifikus kimutatásra (szűrésre)
Vegyületspecifikus kimutatásra
Vegyületspecifikus kimutatásra, azonosításra, mennyiségi meghatározásra (megerősítésre)
Pl. optikai izomérek elválasztására
Az FPIA vizsgálat elve Antitesthez kötődve lassú a FL rotációja: nagyobb arányban emittál az eredetihez hasonló polarizációs síkban A célvegyületet nem tartalmazó minta Intenzív jel
FL
FL
Emisszió: 525-550 nm
Gerjesztés: 485 nm
Síkban polarizált fény
Polárszűrő
Gyenge jel
Célvegyületet tartalmazó minta Kötődés nélkül szabad a FL rotációja. FL : Fluoreszceinhez (FL) kapcsolt célmolekula
Abbott AxSYM Fluorescence Polarization Immunoassay (FPIA) LOD-értékek: Ópiátok: Kokain-metabolit: Kannabinoidok: Amfetaminok: Benzodiazepinek: Barbiturátok:
50 ng/ml 30 ng/ml 15 ng/ml 100 ng/ml 40 ng/ml 60 ng/ml
Mire kalibráljuk a tesztet? TDx® teszt neve
(Amphetamine class)* Amphetamine/Methamphetamine II Cannabinoids Cocaine metabolite Opiates
Kalibrációhoz használt komponens
d,l-Amfetamin d-Amfetamin 11-nor-9-karboxi-∆9-THC Benzoil-ekgonin Morfin
Barbiturates II
Szekobarbital
Benzodiazepine
Nordiazepam
*Nem érzékeny a metiléndioxi-származékokra (pl. MDMA), de pl. efedrinre igen.
Keresztreakciók FPIA vizsgálatnál Abbott TDx® Amphetamine/Methamphetamine II assay Kalibráció: d-Amfetamin (150-8000 ng/ml) Vegyület
Hozzáadott koncentáció (µg/ml)
Mért koncentráció (µg/ml)
Keresztreaktivitás (%)
l-Amfetamin
3,0
0,92
31
d,l-Amfetamin
3,0
6,51
217
d-MA
3,0
2,86
95
d,l-MDA
3,0
5,31
177
d,l-MDE
3,0
1,22
41
d,l-MDMA
3,0
3,06
102
Fenetilamin
10
0,24
2,4
Fentermin
10
4,40
44
d,l-Efedrin
3000
n.d.
-
„Cut off” értékek SAMHSA
A megerősítő vizsgálatok alapelvei 1. Kromatográfiás és spektrális információk a célvegyületekről. 2. SIM vizsgálat esetén 3 különböző fragmension szükséges az azonosításhoz. 3. Mennyiségi meghatározáskor a mérési bizonytalanság ismerete szükséges: 3 független mintavételt és extrakciót követő 3 párhuzamos analízis.
4. A mennyiségi meghatározáshoz belső standard használatán alapuljon, ami ideális esetben a célvegyület deuterált analógja. Ellenőrizni kell a deuterált ISTD specifikus fragmenseit és az ISTD tisztaságát.
5. Mérési sorozat: •
Vak minta
•
Ismeretlen minta
•
Vak minta
•
Kontrol/kalibráló minta
Mintaelőkészítés
Az katinon- és amfetamin-származékok kivonása vér- és vizeletminákból Egyensúly alakul ki: Sebességek azonosak A koncentráció-arány jellemző (K, logP)
folyadék-folyadék extrakció tert. butil-metil-éterrel NH NH22 A
vizelet, lúgosítás pH savas
NH23
A
A A
Szilárd fázisú extrakció (SPE)
Kondicionálás
Mintafelvitel
Öblítés
Elúció
Oktadecil-szilika (C18) Alacsony pH
-C18 THC
C18THC-COOH
-C18
Szerves oldószerkeverék
-C18
C18-C18
THC, THC-COOH
Mintafelvitel
Elúció
Kromatográfiás technikák
Kimutatás, azonosítás, mennyiségi meghatározás Mennyiségi meghatározás -kalibráció -reprodukálhatóság, linearitás
% 100.0
363 421
(x10,000) 2.5 337.00 391.00 377.00 461.00 2.0
73 75.0
Koncentráció
Azonosítás -retenciós idő és tömegspektrum -érzékenység, szelektivitás
50.0
41 0.0
475
1.5
25.0
351
115
1.0 100
307
423
249 177215 200
544 501
300
400
500
575606 634 600
0.5
Kimutatás -jel/zaj -érzékenység
0.0 12.3
12.4
12.5
12.6
A GC/MS-vizsgálatokra vonatkozó ajánlások Toxichem + Krimtech 65(1): 18-24 (1998)
Richtlinie der GTFCh zur Qualitätssicherung bei forensischtoxikologischen Untersuchungen, www.gtfch.org
A kromatográfiás elválasztás Felbontás Kritikus párok esetén az alapvonali elválasztás haladja meg az 1,5-ös értéket
t R , 2 − t R.1 Rs = 2 w2 + w1
Mintaelőkészítés-I. Amfetamin- és katinon-származékok Vizelet- és vérminta előkészítése: Egy 16 mm átmérőjű kémcsőben 2,5 ml vizeletvagy vérmintához 20 µl belső standardot (metoxifenamin), 0,25 ml 5 M KOH oldatot, kb. 1 g vízmentes nátrium-szulfátot és 4,2 ml tert.-butil-metil-étert (szerves oldószer) teszünk. Folyadék-folyadék extrakció (I.): Kirázás 3-szor 10 másodperces rázatással, centrifugálás 20 perc (3000 rpm). Az elkülönülő felső fázist (szerves oldószer) tiszta Vidal-csőbe különítjük el. Bepárlás: A szerves fázishoz 100 µl metanol-cc. sósav (9:1, v/v) elegyet pipettázunk, majd rotációs vákuum-koncentrátorral szárazra pároljuk be 40 perc alatt, 60 °C-on. (L. a következő diát is.) Folyadék-folyadék extrakció (II.): A száraz maradékhoz 20 µl 5 M KOH-t pipettázunk, majd 100 µl toluollal kirázzuk, majd újabb centrifugálás után a felülúszót szűkítős fiolába pipettázzuk.
Folyadék-folyadék extrakció amfetamin-származékoknál A bepárlás metanolos sósav (10 %, v/v) hozzáadása után rotációs vákuumkoncentrátorral történik, 60 °C-on 30 percig, 34 mintás kapacitással.
Különböző minták bepárlási maradékai.
On-line trifluoroacetilezés minta Metilén-bisz-trifluoroacetamiddal (MBTFA) való reakcióban A reakció a GC/MS-készülékbe történő, automatizált injektálással párhuzamosan, az üveggyapottal töltött injektortérben, pillanatszerűen, és gyakorlatilag 100 %-os hatásfokkal megy végbe. Ennek az a feltétele, hogy az MBTFA-t tartalmazó reagenst a mintával egyidejűleg injektálja a fecskendő.
F
F
R1
+
NH
R2 Amfetamin-származék
O
F
O N
O
R2 F
F
F
+
MBTFA
F
F F
N
F F
R1
MBTFA
O F HN
N-metil-trifluoroacetamid
Mintaelőkészítés-II. (alternatív eljárás)
Amfetamin- és katinon-származékok Vizelet- és vérminta előkészítése: Eppendorf-csőben 1 ml vizelethez 100 µl 5 M KOH-oldatot, majd 200 µl toluolt adunk. Folyadék-folyadék extrakció: A mintákat 15 percig rázatjuk 1200 RPM-en, majd 20 percig centrifugáljuk (8000 RPM). A toluolos fázisból 120 µl-t pipettázunk át megfelelő fiolába. Származékképzés: A toluolos fázishoz 25 µl N-metil-bisz(trifluoroacetamidot) (MBTFA) adunk, majd mintáinkat 20 percig 80 °C-on inkubáljuk, ezután 1 µl-t injektáltunk a GC-MS-készülékbe.
Mefedron kimutatása-II. S.I. vizeletmintája, 10-szeres hígítás
3.50 3.25
7.153
(x100,000) 3.75
110.00 (1.00) 121.00 (1.00) 148.00 (1.00) 154.00 (1.00) 119.00 (1.00)
Mefedron-TFA 6,07 µg/ml
3.00 2.75
O
2.50
N
2.25
CF3
2.00
O
1.75 1.50 1.25
Metoxifenamin-TFA (ISTD)
0.75
7.264
1.00
%
0.50
100
119
O N
CF 3 O
0.25
75 4.0
4.5
5.0
5.5
6.0
6.5
50 42
91
25
154
65 69
Mw= 273 Da
0 50
100
150
200
250
300
7.0
7.5
8.0
8.5
9.0
Kábítószerek származékolása Segura et al., 1998
1. Ópiátok: szililezés (BSTFA), acilezés (PFPA, HFBA) 2. Kokain és metabolitjai: szililezés (BSTFA, MTBSTFA), acilezés (PFPA, HFBA) 3. Kannabinoidok: szililezés (MSTFA, BSTFA, MTBSTFA), acilezés (PFPA, HFBA, TFA), metilezés 4. Amfetaminok: metil-, propil kloroformát, pentafluoro-oktanoil klorid, szililezés (MTBSTFA), acilezés (HFBA, PAA, AA, PFPA)
O NH2
HN
Amfetamin
Mefedron 100.0
58
75.0 50.0 25.0 91
65 0.0 50.0
75.0
100.0
125.0
100.0
150.0
175.0
119
75.0 42 91
50.0 25.0
65 154 56
69
110
120
0.0 50.0
75.0
100.0
125.0
150.0
175.0
Gázkromatográfiástömegspektrometriás jellemzők •Készülék: Shimadzu QP5000 •Kapilláris kolonna: HP-1MS, 25 m * 0,2 mm *0,33 µm •Injektálás: 1 µL minta + 1 µL MBTFA, 270 °C, splitless (0,1 perc) He-nyomás: 120 kPa •Kolonnatér-hőmérséklet: 90 °C 1 percig, 20 °C/perc 200 °C-ig, 30 °C/perc 290 °C-ig, 5 perc •Interface: 270 °C, ionizáció: EI, detektálás módja: SIM, mintázási időköz: 0,18 másodperc
Új designer-drogok elválasztása HP-1MS kapilláris kolonnán, MIC anyavegyület
MBTFA (x 10,000)
(x 100,000) 6.0 5.5
130.00 (1.00) 223.00 (1.00) 8.0
58.00 (1.00) 95.00 (1.00)
9.0
5,660 min
5.0 4.5
O
6.0
4.0
4-Fluor Fluor-metkatinon
6,319 min
7.0
3.5
5.0
3.0 2.5
F
2.0
4.0
HN
3.0
1.5
2.0 1.0
1.0
0.5 4.0 4.5 (x10,000)
5.0
5.5
58.00 (1.00) 95.00 (1.00) 4.0
6.0
6.5
7.0
7.5
8.0
8.5
9.0
9.5
10.0
10.5
0.0 11.0 4.0
4.5
(x10,000) 7.0
5.0
5.5
6.0
6.5
7.0
130.00 (1.00) 6.5 223.00 (1.00)
4.5
5,626 min
3.5
8.0
8.5
9.0
9.5
10.0
10.5
11.0
9.5
10.0
10.5
11.0
6,351 min
6.0
O
7.5
5.5 5.0
3-Fluor Fluor-metkatinon
3.0
4.5 4.0
2.5
3.5
HN
2.0
3.0 2.5
1.5 2.0
F
1.0
1.5 1.0
0.5 0.5
4.0
4.5
5.0
5.5
6.0
6.5
7.0
7.5
8.0
8.5
9.0
9.5
10.0
10.5
11.0
0.0 4.0
4.5
5.0
5.5
6.0
6.5
7.0
7.5
8.0
8.5
9.0
Új „designer drogok” előfordulása Fenetilaminok és katinonok előfordulásának aránya vizeletmintákban 100% 80%
MDPV metilon
60%
4-MEC mefedron
40%
4-fluoroamfetamin MDMA
20%
20 10 .j an 20 uá 10 r .m ár ciu 20 s 10 .m áj us 20 10 20 .j 10 úl .s iu ze s pt 20 em 10 be .n r ov em be 20 r 11 .j an 20 uá 11 r .m ár ciu 20 s 11 .m 20 áj 11 us .a ug us 20 zt us 11 .o kt ób er
0%
amfetamin
Vizeletben kimutatott „designer” fenetilaminok-1. (MS TFA-származékként) O
Trimetoxi-amfetamin
NH2
O O
%
14 0
10 0 90 80 70 60
4-Fluor-amfetamin
1 09
50
F
NH 2
40 30
45
20 10
69 8 3
47
115
5 0 .0
75 .0
10 0 .0
15 1
1 25 .0
15 0 .0
18 0 196 2 16 23 4 25 0 1 7 5.0
2 00 .0
22 5.0
2 77 2 95 30 9
2 50 .0
27 5 .0
3 00 .0
33 7 32 5 .0
%
12 1
1 00 90 80 70
4-Metoxi-amfetamin
60 50
O
NH 2
40
148
30 20
77
10
42 5 2 500 .
1 40
9 0 1 07 7 5.0
10 0 0 .
1 2 5.0
1 50 .0
17 4 192 2 08 2 28 24 6 2 61 17 5.0
2 0 0.0
2 25 .0
25 0.0
28 6 306 2 75 .0
30 0 0 .
2 60 2 75
2 98
3 27 3 44 3 2 5.0
3 50 .0
%
12 1
1 00 90
148
80 70
4-Metoxi-metamfetamin
60
O
HN
50 40 30
110 42
20 10
56
0 50 .0
77 80 7 5 .0
14 7 1 0 0.0
1 25 .0
1 50 .0
1 77 17 5 .0
2 06 2 0 0.0
23 6 2 25 .0
2 50 .0
27 5 .0
3 0 0.0
34 1 3 2 5.0
3 50 .0
Vizeletben kimutatott „designer” katinonok-2. „Designer” katinonok-2. (MSfenetilaminok, TFA-származékként) %
11 9
1 00
O
90 80
NH
Mefedron
70 60 50 40 30 20
42
10
15 4
11 0 56 69 80
500 .
7 5.0
1 45 1 00 .0
12 5.0
17 4
1 50 .0
2 04 2 21
17 5 0 .
2 0 0.0
24 4 258 27 3 291 3 05
2 25 .0
25 0.0
2 7 5.0
3 00 .0
3 27 32 5.0
3 50 .0
%
14 9
1 00
O
90 80
Metilon
NH
O
70 60 50 40
O
30 20
121 110
42
10
56
0 5 0.0
80 75 .0
1 48 1 0 0.0
1 25 .0
1 90 207
15 0 0 .
17 5.0
2 00 .0
2 34 2 25 .0
2 65 2 81 25 0.0
2 75 .0
3 03 3 00 .0
3 25 34 1 32 5.0
%
11 9
1 00
O
90 80
NH
4-Metil-etilkatinon (4-MEC)
70 60 50 40
168
30 20
1 40
10
42 56 7 0
0
500 .
7 5.0
9 6 11 3 1 00 .0
14 8
12 5.0
19 0
1 50 .0
17 5 0 .
21 8
2 0 0.0
24 2 2 57 2 72
2 25 .0
25 0 0 .
2 7 5.0
3 16 3 00 .0
32 5.0
34 1 3 50 .0
%
12 6
1 00 90
O
Metiléndioxi-pirovaleron (MDPV)
80
N
O
70 60 50 40 30
O
20 10
42 55 69 84 97
0
500 .
7 5.0
135 1 49
1 00 .0
12 5.0
177 1 91 20 7
1 50 .0
17 5 0 .
2 0 0.0
232 2 25 .0
2 57 25 0 0 .
2 81 2 7 5.0
3 10 3 27 34 1 3 00 .0
32 5.0
% 1 00
123
1 54
90
O
80 70
NH
4-Fluor-metkatinon (4-FMC)
60
42 1 10
50
95
40 30
F
20
69 56
10
1 41
0 5 0.0
75 .0
1 0 0.0
1 25 .0
15 0.0
16 4 182 1 75 .0
20 8 20 0 0 .
23 0 2 46 2 62 2 77 2 2 5.0
2 50 .0
27 5.0
2 99 3 00 .0
32 4 32 5 0 .
Vizeletben kimutatott „designer” „Designer”katinonok-3. fenetilaminok, katinonok-2. fenetilaminok, (MS TFA-származékként) %
13 3
1 00 90
O
3,4-dimetoxi-metkatinon (3,4-DMMC)
80
NH
70 60 50 40 30
10 5
20
42
10
79
1 54
56 5 0.0
34 5
1 15 75 .0
1 0 0.0
1 74 19 0
1 25 .0
15 0.0
1 75 .0
2 18
20 0.0
2 55 2 72 287
2 25 .0
25 0 0 .
2 7 5.0
3 10 3 00 .0
32 5.0
3 50 .0
32 5 .0
3 5 0.0
%
1 31
1 00
91
90 80
6-(2-aminopropil)benzofurán (6-APB)
70
O
60 50
NH2
15 8
40 30 20
65
10
73
0 5 0.0
75 .0
11 6 10 0.0
1 25 .0
1 44 15 0 0 .
18 2 1 7 5.0
209 2 00 .0
23 2 2 49 2 2 5.0
2 50 .0
2 71
29 4
27 5.0
3 0 0.0
%
1 49
1 00
O
90 80 70
O
Butilon
60 50
O
HN
40 30
42
20
1 21 1 10 7 1 83 9 8
10 0 500 .
75 .0
10 0 0 .
1 25 .0
16 8 15 2 1 50 .0
19 12 04 21 92 32 2 48 1 75 .0
2 0 0.0
22 5.0
25 0.0
28 1 27 5 0 .
30 2 3 17 3 00 .0
3 25 .0
34 1 3 50 .0
Szintetikus kannabinoidok-1. EDND adatbázisban 40 féle.
% 341
100
O
284
75
324 50
N
214
127 144
270
25
155
JWH-018 (1-pentil-3-(1-naftoil)indol) 55
241
77 89 101
0 50
254 186
100
150
200
250
300
350
% 327
100
75
O
284 310 200
50
127
N
144 270 25
JWH-073 (1-butil-3-(1-naftoil)indol)
167 57
0 50
77 89
254 241
101 100
213 150
200
298 250
300
350
Szintetikus kannabinoidok-2. Anyavegyület kimutatása vérszérumban, koncentráció: 5 ng/ml-nek megfelelő 17.014
(x1,000,000)
284.00 (18.54) 2.0 1.9
15.909
1.8 1.7 1.6
JWH-018
1.5
JWH-073 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 13.0
14.0
15.0
16.0
17.0
18.0
19.0
Szérumban 50 mg/kg JWH-018 elszívása után 15 perccel 10 ng/ml anyavegyület mérhető a vérben; a koncentráció 3 órán belül 0,5 ng/ml alá esik. (ElSohly, J. Anal. Toxicol. 2011.)
Szintetikus kannabinoidok-3. A GC/MS elemzés paraméterei •Készülék: Shimadzu QP2010Plus •Kapilláris kolonna: HP-1MS, 25 m * 0,2 mm *0,33 µm •Injektálás: 2 µL minta, 280 °C, splitless (1 perc) Kezdeti He-nyomás: 150 kPa (állandó lineáris sebesség) •Kolonnatér-hőmérséklet: 90 °C 1 percig, fűtés 20 °C/perccel, 290 °C 18 percig •Interface: 280 °C, ionforrás: 280 °C, ionizáció: EI, detektálás módja: SIM, mintázási időköz: 0,3 másodperc
Szintetikus kannabinoidok-4. Metabolizmusuk intenzív, a vizeletben az anyavegyület nem mutatható ki gyakorlatilag. (Logan et al., NMS Labs Technical Bullein, 2011.)
Kereskedelmi forgalomban kapható metabolitok:
Szintetikus kannabinoidok-5. Metabolizmusuk intenzív, a vizeletben az anyavegyület nem mutatható ki gyakorlatilag. (Logan et al., NMS Labs Technical Bullein, 2011.)
Újonnan szintetizált metabolitok:
Szintetikus kannabinoidok-6. Metabolizmusuk intenzív, a vizeletben az anyavegyület nem mutatható ki gyakorlatilag. (Logan et al., NMS Labs Technical Bullein, 2011.)
JWH-018 A monohidroxiláción túl: •di-, és trihidroxiláció, •karboxiláció, •dehidráció, •N-dealkiláció, •ezek kombinációi. •Fő metabolit: N-pentanoát-származék
In vitro: GHB észtereződése
GHB-GBL
pH=2
GBL hidrolízise
O
O
O
OH OH O OOH
1.
GBL hidrolízise pH=12
2.
Antemortem GHB-koncentráció (cut off): • Vizelet: 10 µg/ml • Vér: 4 µg/ml Post mortem magas lehet (főleg vérben), ui. a GABA, borostyánkősav, putreszcin GHB-vá alakulhat, cut off: 30 µg/ml (vér)
3. 4.
GHB-aciduria (vizeletben 200 µg/ml<) Elimináció ált. 8 órán belül
In vitro: GHB észtereződése
GHB-GBL
pH=2
GBL hidrolízise
In vivo: laktonáz
O
O
O
OH OH OH
O O-
1,4-butándiol OH
OH
1.
GBL hidrolízise pH=12
2.
Antemortem GHB-koncentráció (cut off): • Vizelet: 10 µg/ml • Vér: 4 µg/ml Post mortem magas lehet (főleg vérben), ui. a GABA, borostyánkősav, putreszcin GHB-vá alakulhat, cut off: 30 µg/ml (vér)
3. 4.
GHB-aciduria (vizeletben 200 µg/ml<) Elimináció ált. 8 órán belül
GHB vizeletben (x1,000,000) TIC 1.25
1.00
1.00
(x10,000) 147
O
0.75
Si
0.75
NH
189
0.50
0.50 0.25
0.25
100
171
115 130
0.00 100 7.5
Si NH
7.6
7.7
7.8
7.9
8.0
8.1
8.2
8.3
157 150
191 204 200
8.4
250
300
350
Urea-2TMS
1.2(x100,000) 204.00 (10.00) 233.00 (10.00) 1.1
7.654
GHB-2TMS
1.0 0.9
1.00
0.8
(x10,000) 147 O
Si
Si
0.7
0.75
O
0.6 0.5
O
0.50
0.4
0.25
0.3
117 103
0.2
0.00
0.1 0.0 7.5
100 7.6
7.7
7.8
7.9
8.0
8.1
8.2
8.3
8.4
233 133
159 150
204 200
250
GHB-2TMS
300
350
Összefoglalás-1. Az új designer drogok megjelenése milyen új kihívást jelent? 3 lehetséges válasz, ezek nem függenek listára vételtől. 1. szűrővizsgálati spektrum bővítése 2. korszerű, szélesebb spektrumú, vegyületspecifikus, érzékeny analitikai rendszer telepítése (tandem LC/MS rendszerek) 3. meglévő rendszereken új módszer fejlesztése, amellyel az előzményi adatok alapján „véletlenszerűen”, vagy kérés esetén végzünk vizsgálatot
Összefoglalás-2. Az új szabályozás milyen új kihívást jelent? 1. Az ún. „C lista” hatályba lépése nem biztos, hogy jelentkezik nagyszámú, fogyasztás megállapítására irányuló kirendelésben. 2. Vizsgálati igény esetén a több referencia-anyag, több validálás, ill. több vizsgálat többletköltséget jelent. 3. A „generikus definíció” a korábbi analitikai követelményeket nem írja felül: azonosítás csak referencia-anyag alapján lehetséges. A referencia-anyagok beszerzésének, ill. a validálásoknak a költségei jelentősen nőnek.
Összefoglalás-3. Jelent-e speciális kihívást egy generikus szabályozás? 1. A „generikus definíció” által megadott vegyületekre „családspecifikus” vizsgálat nem létezik. 2. A „generikus definíció” sok, még nem ismert tulajdonságú vegyületet takar. Az elemzés kezdeti paramétereinek meghatározása is problémás. 3. A referencia-anyagok nagy része nem, vagy csak irreális költségek árán férhető hozzá. Egy vizsgálati módszer validálása így nem lehetséges. 4. Elvileg a vegyületcsaládra, ill. egy részére elképzelhető szűrővizsgálat (MS). Azonban a megerősítéshez szintén referencia-anyag kell, ill. olyan, szerkezetazonosító eljárások, amelyek esetenként ki tudják zárni a mátrix okozta fals pozitivitást és megelőzik a referencia-anyag felesleges beszerzését.
