perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK LABU SIAM (Sechium edule (Jacq.) Sw.) TERHADAP KADAR KOLESTEROL TOTAL TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus) YANG DIBERI PAKAN HIPERKOLESTEROLEMIK
SKRIPSI Untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran
RIZKA DEWI PARAMITHA G0007144
FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET SURAKARTA 2010 to user commit
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR ISI
PRAKATA .......................................................................................................... i DAFTAR ISI ....................................................................................................... ii DAFTAR TABEL .............................................................................................. iv DAFTAR GRAFIK ............................................................................................ v DAFTAR LAMPIRAN....................................................................................... vi BAB I PENDAHULUAN .................................................................................. 1 A. Latar Belakang Masalah ................................................................... 1 B. Perumusan Masalah........................................................................... 3 C. Tujuan Penelitian .............................................................................. 3 D. Manfaat Penelitian ............................................................................ 4 BAB II LANDASAN TEORI............................................................................. 5 A. Tinjauan Pustaka .............................................................................. 5 1. Kolesterol ................................................................................... 5 2. Labu Siam ..................................................................................11 3. Peran Ekstrak Labu Siam dalam Menurunkan Kolesterol Total Darah ......................................................................................... 13 B. Kerangka Berpikir ........................................................................... 20 C. Hipotesis .......................................................................................... 21 BAB III METODE PENELITIAN ................................................................... 22 A. Jenis Penelitian ................................................................................ 22 B. Lokasi Penelitian ............................................................................. 22 commit to user
ii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
C. Subjek dan Besar Sampel Penelitian ............................................... 22 D. Teknik Sampling ............................................................................. 23 E. Identifikasi Variabel Penelitian ....................................................... 23 F. Definisi Operasional Variabel.......................................................... 24 G. Rancangan Penelitian ...................................................................... 30 H. Alat Yang Digunakan....................................................................... 31 I. Bahan Penelitian .............................................................................. 31 J. Jalannya Penelitian........................................................................... 32 K. Teknik Analisis Data ....................................................................... 34 BAB IV HASIL PENELITIAN ........................................................................ 36 BAB V PEMBAHASAN................................................................................... 42 BAB VI SIMPULAN DAN SARAN................................................................ 47 A. Simpulan........................................................................................... 47 B. Saran ................................................................................................. 47 DAFTAR PUSTAKA........................................................................................ 48 LAMPIRAN
commit to user
ii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR TABEL
Tabel 4.1 Data Hasil Pengukuran Kadar Kolesterol Total Tikus Putih Sebelum Diberi Perlakuan ………………………………………...……….... 36 Tabel 4.2 Data Hasil Pengukuran Kadar Kolesterol Total Tikus Putih Setelah Diberi Perlakuan ………………………………………...……….... 37 Tabel 4.3 Data Hasil Pengukuran Kadar Kolesterol Total Tikus Putih Sebelum dan Setelah Diberi Perlakuan………………………………………. 38 Tabel 4.4 Data Hasil Pengukuran Selisih Kadar Kolesterol Total Tikus Putih..39 Tabel 4.5 Hasil Uji Normalitas Saphiro-Wilk terhadap Rerata Selisih Kadar Kolesterol Total……………………………………………………. 40 Tabel 4.6 Nilai Signifikansi Rerata Selisih Kadar Kolesterol Total Antar Kelompok pada Uji Mann-Whitney …………………………….…. 41
commit to user
ii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR GRAFIK
Grafik 4.1 Histogram Rerata Kadar Kolesterol Total Tikus Putih Sebelum dan Setelah Diberi Perlakuan (mg/dl)……….……………………….....38 Grafik 4.2 Histogram Rerata Selisih Kadar Kolesterol Total Tikus Putih (mg/dl)………………………………………………………………39
commit to user
ii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Komposisi Pakan Pelet AD-2 Lampiran 2 Data Kadar Kolesterol Total Keempat Kelompok Perlakuan Pre Test dan Post Test Lampiran 3 Data Statistik Uji Deskriptif, Normalitas, dan Varians Selisih Kadar Kolesterol Total Tiap Kelompok Sebelum dan Setelah Diberi Perlakuan Lampiran 4 Hasil Uji Kruskal-Wallis untuk Selisih Kadar Kolesterol Total Tiap Kelompok Sebelum dan Setelah Diberi Perlakuan Lampiran 5 Hasil Uji Mann-Whitney untuk Selisih Kadar Kolesterol Total Tiap Kelompok Sebelum dan Setelah Diberi Perlakuan Lampiran 6 Ethical Clearance
commit to user
ii
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
ABSTRAK
Rizka Dewi Paramitha, G0007144, 2010, Pengaruh Pemberian Ekstrak Labu Siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) terhadap Kadar Kolesterol Total Tikus Putih (Rattus norvegicus) yang Diberi Pakan Hiperkolesterolemik. Fakultas Kedokteran, Universitas Sebelas Maret, Surakarta. Latar Belakang: Penyakit kardiovaskuler, khususnya Penyakit Jantung Koroner (PJK) dan stroke adalah penyakit yang sangat mematikan. Salah satu upaya mencegah terjadinya PJK adalah dengan menurunkan kadar kolesterol total dalam darah. Tujuan : Untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak Labu Siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) terhadap kadar kolesterol total tikus putih (Rattus norvegicus) yang diberi pakan hiperkolesterolemik Metode : Desain penelitian ini adalah pre and post test with control group, dilakukan di Laboratorium Biokimia Universitas Sebelas Maret Surakarta. Objek penelitian adalah tikus putih jantan strain Wistar sebanyak 28 ekor.. Tikus diberi pakan hiperkolesterolemik dan Propiltiourasil sebanyak dua kali sehari selama 7 hari dan diperiksa kadar kolesterol total pretest. Selama 21 hari berikutnya, diberi perlakuan pada kelompok I sebagai kontrol, kelompok II diberi ekstrak Labu Siam dosis 80 mg/200gr BB, kelompok III dengan dosis 160 mg/200gr BB, dan kelompok IV dengan dosis 240 mg/200gr BB, masing-masing perlakuan dua kali sehari. Pembuatan ekstrak Labu Siam menggunakan metode perkolasi. Semua tikus diperiksa kadar kolesterol total postest setelah dipuasakan 12 jam sebelumnya. Data kadar kolesterol total darah tikus dianalisis menggunakan uji Kruskal-Wallis dan Mann-Whitney dengan bantuan program SPSS for Windows versi 16. Hasil : Tidak terdapat perbedaan yang signifikan pada kadar kolesterol total tikus putih dalam 4 kelompok coba (p=0,006). Simpulan : Pemberian ekstrak Labu Siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) tidak dapat mencegah kenaikan kadar kolesterol total tikus putih (Rattus norvegicus) yang diberi pakan hiperkolesterolemik. Kata kunci : Ekstrak Labu Siam, kolesterol total, tikus putih.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
ABSTRACT
Rizka Dewi Paramitha, G0007144, 2010, The Effect of Chayote Extract (Sechium edule (Jacq.) Sw.) on Total Cholesterol Level of White Rat (Rattus norvegicus). Medical Faculty, Sebelas Maret University, Surakarta. Background : Cardiovascular disease, especially coroner heart disease and stroke, is the most common death cause. Decreasing the level of total blood cholesterol is one of ways to prevent coroner heart disease. Objective:. To find the effect of Chayote Extract (Sechium edule (Jacq.) Sw.) on total cholesterol level of white rat (Rattus norvegicus) induced by hypercholesterolemic food. Methods: The design of this research is a pre and post test with control group, was done in Biochemistry Laboratorium of Sebelas Maret University, Surakarta, Indonesia. The research subjects are 28 white Wistar strain male rats. Rats were feed with hypercholesterolemic food and Propiltiourasil twice a day for 7 days and the cholesterol level were checked as pretest. For the next 21 days, induced to group I as control, group II induced by 80 mg/200gr BB of Chayote Extract, group III induced by 160 mg/200gr BB of Chayote Extract and group IV induced by 240 mg/200gr BB of Chayote Extract, twice a day for every inducing. The Chayote extraction used a percolation method. Then, the cholesterol level was checked as a posttest after the rats had a fasting for 12 hours before. The data of total blood cholesterol level of rats was analyzed with Kruskal-Wallis test and Mann-Whitney test with SPSS for Windows 16 version program. Result: The test shows there is not a significant total cholesterol level difference between 4 groups of rats (p= 0,006). Conclusion: The treatment of Chayote Extract (Sechium edule (Jacq.) Sw.) cannot prevent the increase of total cholesterol level of white rat (Rattus norvegicus) induced by hypercholesterolemic food. Keywords : Chayote Extract, total cholesterol, white rats.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah Penyakit kardiovaskuler, khususnya Penyakit Jantung Koroner (PJK) dan stroke adalah penyakit yang sangat mematikan. Suatu survey yang dilakukan Departemen Kesehatan RI tahun 1992 menyebutkan bahwa penyakit kardiovaskuler menjadi penyebab kematian nomor satu di Indonesia (Rifqi, 2004). Tiap 34 detik diperkirakan satu orang meninggal dunia karena penyakit ini (Siswono, 2005). Data terakhir menyebutkan, hingga tahun 2010 penyakit kardiovaskuler merupakan penyakit peringkat teratas penyebab kematian. Proses dasar yang menyebabkan PJK adalah infiltrasi lemak pada arteri koronaria yang dikenal sebagai aterosklerosis (Sargowo, 1998). Aterosklerosis adalah penyakit arteri besar dan sedang di mana lesi lemak timbul pada permukaan dalam dinding arteri. Penyebab utama aterosklerosis adalah konsentrasi kolesterol yang tinggi dalam plasma darah atau hiperkolesterolemia. Sejauh ini tindakan preventif utama untuk menurunkan hiperkolesterolemia adalah konsumsi diet rendah lemak. Selain itu dapat juga menggunakan obat penurun kolesterol yang terjadi melalui berbagai mekanisme (Guyton and Hall, 2007). Diperkirakan bahwa terapi obat kombinasi dapat memberikan hasil terapi yang lebih bermakna dibandingkan dengan pemberian obat tunggal. Namun terapi kombinasi dapat meningkatkan efek samping,
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
intoleransi pasien, mempengaruhi compliance pasien, serta interaksi obat (Arif, 2008). Selain dengan obat-obatan, juga terdapat terapi herbal untuk mengatasi hiperkolesterol. Terapi herbal adalah penggunaan tanaman obat atas kemampuannya untuk menyembuhkan penyakit (Parto, 2010). World Health Organization (WHO) merekomendasikan penggunaan herbal karena dinilai lebih aman daripada penggunaan obat modern karena herbal memiliki efek samping yang relatif lebih sedikit dari pada obat modern (Kumalasari, 2006). Beberapa tanaman yang berkhasiat menurunkan kolesterol adalah teh (Camelia sinensis) dan Labu Siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.). Salah satu tanaman penurun kolesterol yang murah dan mudah didapat adalah Labu Siam. Labu Siam diketahui memiliki efek diuretik, antioksidan, antimikroba, dan antihipertensi (Astawan, 2007a). Berdasarkan penelitian sebelumnya, perasan Labu Siam dapat dimanfaatkan sebagai penurun glukosa darah (Khikmawati, 2009). Khasiat lain adalah ekstra Labu Siam dapat menurunkan kadar kolesterol total dan trigliserida darah yang disebutkan Marlina dalam Agustini et al. (2006a). Labu Siam mengandung saponin yang bermanfaat untuk menghambat dan mencegah penyerapan kolesterol di dalam tubuh, dan alkaloid yang mampu memperlancar peredaran darah sehingga mencegah penyakit stroke (Maryam, 2009). Selain itu, terdapat niasin yang berfungsi menurunkan produksi kolesterol LDL (Low Density Lipoprotein) dan trigliserida (Astawan, 2007b). Berdasarkan fakta-fakta tersebut maka dilakukan
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
penelitian tentang pengaruh pemberian ekstrak Labu Siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) terhadap kadar kolesterol total tikus putih (Rattus norvegicus) yang diberi pakan hiperkolesterolemik. B. Perumusan Masalah 1. Apakah pemberian ekstrak Labu Siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) dapat mencegah kenaikan kadar kolesterol total tikus putih (Rattus norvegicus) yang diberi pakan hiperkolesterolemik? 2. Adakah perbedaan pengaruh pemberian beberapa dosis ekstrak Labu Siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) terhadap kadar kolesterol total tikus putih (Rattus norvegicus) yang diberi pakan hiperkolesterolemik? C. Tujuan Penelitian 1. Untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak Labu Siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) terhadap pencegahan kenaikan kadar kolesterol total tikus putih (Rattus norvegicus) yang diberi pakan hiperkolesterolemik. 2. Untuk mengetahui perbedaan pengaruh pemberian beberapa dosis ekstrak Labu Siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) terhadap kadar kolesterol total tikus putih (Rattus norvegicus) yang diberi pakan hiperkolesterolemik.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
D. Manfaat Penelitian 1. Manfaat teoretis: Penelitian ini diharapkan dapat memberikan bukti-bukti empiris atau informasi tentang manfaat ekstrak Labu Siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) terhadap pencegahan kenaikan kadar kolesterol total darah tikus putih (Rattus norvegicus) yang diberi pakan hiperkolesterolemik. 2. Manfaat praktis Penelitian ini dapat dijadikan dasar untuk mengolah Labu Siam menjadi suatu bentuk yang mudah diambil manfaatnya guna mencegah kenaikan kadar kolesterol darah yang menjadi faktor risiko penyakit kardiovaskuler.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
BAB II LANDASAN TEORI
A. Tinjauan Pustaka 1. Kolesterol a. Definisi dan Fungsi Kolesterol merupakan lipid amfipatik yang menjadi komponen struktural esensial yang membentuk membran sel dan lapisan luar lipoprotein plasma (Mayes, 2009). Kolesterol diklasifikasikan menjadi kolesterol endogen yang sintesisnya berasal dari tubuh sendiri dan kolesterol eksogen yang didapat dari makanan. 1) Kolesterol endogen Prekursor untuk sintesis kolesterol adalah asetil Ko-A sitosol. Asetil Ko-A dihasilkan dari prekursor utamanya, glukosa dan asam lemak, terutama di mitokondria, serta dibentuk juga dari katabolisme asam amino (Marks et al., 2000). Semua jaringan yang mempunyai sel berinti mampu mensintesis kolesterol khususnya hati, korteks adrenal, kulit, usus, testis, aorta, fraksi mikrosom dan sitosol sel. Sintesa kolesterol terjadi di sitoplasma sedangkan enzimnya terdapat dalam retikulum endoplasma. Biosintesis kolesterol dapat dibagi menjadi
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
lima tahap, yaitu: a) Asetil Ko-A membentuk HMG Ko-A dan mevalonat, b) Mevalonat membentuk unit isopenoid yang aktif, c) Enam unit isoprenoid membentuk skualen, d) Skualen dikonversi menjadi lanosterol, e) Lanosterol dikonversi menjadi kolesterol (Mayes, 2009). 2) Kolesterol eksogen Jenis-jenis makanan yang banyak mengandung kolesterol antara lain
daging (sapi maupun unggas), susu dan produk olahannya.
Sebagian kolesterol yang terkandung dalam produk hewani ini terdapat dalam bentuk ester kolesterol sehingga lipase yang diaktifkan garam empedu mengkatalisis reaksi hidrolisis ester kolesterol, ester vitamin yang larut dalam lemak, fosfolipid dan trigliserida (Ganong, 2002). Kolesterol siap diserap dari usus halus jika terdapat empedu dan getah pankreas. Kolesterol diubah melalui proses esterifikasi menjadi kolesterol bebas dan asam lemak dengan katalisator kolesterol esterase (Gropper, et al., 2005). Saat lipid masuk usus halus, kandung empedu berkontraksi dan mensekresi empedu yang diproduksi oleh hati. Empedu mengemulsi partikel lemak sampai enzim pencerna lemak dari pankreas mengubahnya menjadi partikel yang lebih kecil untuk diserap (Sizer and Whitney, 2006). Partikel hasil digesti lipid yang bercampur dengan garam empedu membentuk agregat polimolekuler yang disebut misel (Gropper, et al., 2005). Pembentukan misel selanjutnya
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
melarutkan lipid dan memungkinkan mekanisme transportnya ke enterosit. Misel bergerak ke konsentrasi yang lebih rendah ke brush border sel-sel mukosa. Hampir semua kolesterol yang diserap tergabung dalam kilomikron yang masuk ke sirkulasi melalui aliran limfatik (Ganong, 2002). Hepar merupakan tempat metabolisme utama kolesterol. Kolesterol di hepar berasal dari sintesis di hepar sendiri dan dari plasma. Kolesterol plasma berasal dari diet maupun dari jaringan perifer. Sebagian kolesterol akan disimpan dalam bentuk kolesterol ester dan sebagian lagi akan dikatabolisme menjadi asam empedu, disekresi ke dalam empedu sebagai kolesterol bebas atau disekresi ke dalam bentuk lipoprotein (Grundy, 1978). Sebagian kolesterol hepar akan dibawa ke jaringan perifer untuk memenuhi kebutuhan jaringan-jaringan tersebut. Kolesterol memerlukan lipoprotein untuk transpor dalam plasma, karena sifatnya yang tidak larut air (Mayes, 2009). Ada 4 kelompok besar lipoprotein yang penting (Mayes, 2009), yaitu: a) Kilomikron Kilomikron berasal dari penyerapan triasilgliserol di dalam usus. Kilomikron hanya ditemukan di dalam chylus yang dibentuk
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
oleh cairan limfatik. Kilomikron bertanggung jawab dalam transportasi lipid dari makanan ke saluran darah (Mayes, 2009). b) Very Low Density Lipoprotein (VLDL) Very Low Density Lipoprotein (VLDL) disintesis dan disekresikan oleh hepar. Very Low Density Lipoprotein (VLDL) merupakan alat pengangkut triasilgliserol dari hepar ke jaringan di luar hepar (ekstrahepatik) (Mayes, 2009). c) Low Density Lipoprotein (LDL) Low
Density Lipoprotein merupakan derivat dari VLDL.
Perubahan VLDL menjadi LDL terjadi dengan adanya enzimenzim tertentu. (Mayes,2009). d) High Density Lipoprotein (HDL) High Density Lipoprotein disintesis dalam hepar dan usus dari zat bakal yang mengandung fosfolipid, kolesterol bebas dan apoprotein HDL yaitu apoprotein A, apoprotein C dan apoprotein E (Mayes, 2009). Fungsi utama HDL dalam sirkulasi yaitu sebagai reservoir apoprotein C dan E yang diperlukan untuk metabolisme kilomikron dan VLDL (Mayes, 2009). Fungsi lain adalah sebagai scavenger kelebihan kolesterol bebas dan fosfolipid, serta sebagai media transpor kolesterol bebas dari jaringan perifer ke hepar untuk dikatabolisasi dan diekskresi (Miller, 1987).
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
b. Metabolisme kolesterol Kolesterol diangkut oleh lipoprotein plasma dan proporsi terbesar kolesterol terdapat dalam LDL. Kolesterol akan diangkut ke dalam plasma oleh VLDL yang terbentuk di hati (Montgomery, et al., 1993). Very Low Density Lipoprotein (VLDL) akan mengalami hidrolisis oleh lipoprotein lipase segera setelah keluar dari hepar dan masuk ke dalam sirkulasi, sehingga akan kehilangan sebagian trigliserida dan terbentuklah Intermediate Density Lipoprotein (IDL/VLDL remnant). Intermediate Density Lipoprotein (IDL) akan mengalami hidrolisis lagi dan terbentuklah LDL. Low Density Lipoprotein (LDL) kemudian akan diambil oleh reseptor LDL dalam hepar dan jaringan ekstrahepatik. Pengambilan LDL dari sirkulasi terutama melalui reseptor LDL di permukaan sel. Hampir semua jaringan tubuh mampu mensintesis reseptor LDL dan hepar merupakan organ dengan tingkat aktivitas reseptor paling tinggi. Kolesterol bebas dikeluarkan dari jaringan oleh HDL dan kemudian diangkut ke hati (Murray, et al., 2003). HDL yang telah diambil oleh hepar akan diekskresikan dalam bentuk asam empedu dan kolesterol, yang melengkapi proses transpor balik kolesterol (Brewer, 2004). Transformasi kolesterol menjadi asam empedu hanya terjadi
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
dalam hepar. Asam empedu tersebut akan masuk ke duodenum dan digunakan dalam pencernaan makanan. Sebagian besar asam empedu (98%-99%) akan direabsorbsi melalui ileum dan selanjutnya akan mengikuti sirkulasi enterohepatik atau digunakan lagi dalam pencernaan makanan. Asam empedu yang tidak direabsorbsi akan dibuang bersamasama feses (Mayes, 2009). Ekskresi kolesterol dalam feses melalui bentuk: 1) Sterol netral yang dipengaruhi oleh enzim-enzim bakteri usus 2) Garam empedu (Montgomery, et al., 1993). c. Peranan kolesterol terhadap kejadian aterosklerosis Aterosklerosis merupakan penyakit terbentuknya plak di dinding arteri besar sehingga mempersempit lumen pembuluh darah tersebut, aliran darah menjadi terganggu serta menurunkan elastisitas pembuluh darah tersebut. Aterosklerosis terbentuk oleh akumulasi lipoprotein di dalam intima pembuluh darah arteri, adhesi monosit di dalam endotelium arteri, dan migrasi monosit ke intima arteri yang merupakan respons terhadap rangsang kemotaktik. Pada tahap berikutnya, sel otot halus bermigrasi dari tunika media arteri ke intima, kemudian terjadi proliferasi dan akumulasi kolesterol (Marks, et al., 2000). Jika aterosklerosis terjadi di dalam arteri ke otak (arteri karotid) maka dapat terjadi stroke, sedangkan jika terjadi di dalam arteri yang menuju ke jantung (arteri koroner) dapat terjadi PJK (Oentoro, 2007).
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
2. Labu Siam a. Taksonomi Kingdom
: Plantae (Tumbuhan)
Subkingdom
: Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)
Super Divisi
: Spermatophyta (Menghasilkan biji)
Divisi
: Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)
Kelas
: Magnoliopsida (berkeping dua / dikotil)
Sub Kelas
: Dilleniidae
Ordo
: Violales
Famili
: Cucurbitaceae (suku labu-labuan)
Genus
: Sechium
Spesies
: Sechium edule (Jacq.) Sw. (Plantamor, 2008).
b. Morfologi Habitus Labu Siam berupa perdu dan merambat. Batangnya lunak, beralur, banyak cabang, terdapat pembelit berbentuk spiral, kasap, dan berwarna hijau. Daunnya tunggal, bentuk jantung, tepi bertoreh, ujung meruncing, pangkalnya runcing, kasap, panjang 425 cm, lebar 3-20 cm, tangkai panjang, pertulangan menjari, dan
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
berwarna hijau. Bunga merupakan bunga majemuk, berada di ketiak daun, kelopak bertaju lima, mahkota beralur, benang sari lima, kepala sari berwarna jingga, putik satu, dan berwarna kuning. Buah berbentuk buni bulat, menggantung, permukaan berlekuk, dan berwarna hijau keputih-putihan. Biji berbentuk pipih, berkeping dua, dan berwarna putih. Akar berupa akar tunggang, dan berwarna putih kecoklatan (Backer and Van Den Brink, 1968). c. Komponen Seratus gram Labu Siam mengandung zat-zat antara lain: Energi 17 kkal, protein 0,82 gr, lemak 0,13 gr, karbohidrat 3,9 gr, serat 1,7 gr, gula 1,85 gr, kalsium 17 mg, besi 0,34 mg, magnesium 12 mg, fosfor 18 mg, kalium 125 mg, atrium 2 mg, seng 0,74 mg, tembaga 0,12 mg, mangan 0,19 mg, selenium 0,2 mg, vitamin C 7,7 mg, tiamin 0,03 mg, riboflavin 0,03 mg, niasin 0,47 mg, vitamin B6 0,08 mg, folat 93 mkg, vitamin E 0,12 mkg, vitamin K 4,6 mkg (Astawan, 2007), serta mengandung saponin 1,65%, alkaloida 1,57%, dan flavonoid 0,95% (Pramono, 2005). Labu Siam mempunyai kegunaan sebagai penurun tekanan darah, mempunyai efek diuretik, dapat menyembuhkan gangguan sariawan, panas dalam, demam pada anak-anak serta baik digunakan oleh penderita asam urat dan diabetes mellitus. Labu Siam juga memiliki efek
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
antioksidan,
antimikrobial,
diuretik,
antihipertensi,
dan
hipokolesterol. Selain itu Labu Siam mempunyai efek hipoglikemik (Khikmawati, 2009). 3. Peran Ekstrak Labu Siam dalam Menurunkan Kolesterol Total Darah Ekstrak Labu Siam mengandung beberapa bahan aktif yang dapat menurunkan kadar kolesterol total darah, antara lain: a. Saponin Saponin
adalah
glikosida
yang
setelah
dihidrolisis
akan
menghasilkan gula (glikon) dan sapogenin (aglikon). Senyawa sapogenin mempunyai bagian bukan gula yang larut dalam lemak dan bagian gula yang larut dalam air. Sebagian besar saponin mudah bergabung dengan kolesterol yang menyebabkan rendahnya aktifitas saponin, rasa pahit dan memiliki sifat yang berbusa. Saponin membentuk molekul kompleks dengan berbagai senyawa 3β-hidroksisteroid. Reseptor yang berupa 3βhidroksisteroid termasuk kolesterol membran merupakan tempat aktivitas hemolitik saponin. Saponin mampu berikatan dengan berbagai senyawa 3β-hidroksisteroid dan membentuk molekul kompleks yang sulit untuk dipisahkan (Widodo, 2010). Terbentuknya molekul kompleks saponin-kolesterol menyebabkan terganggunya organisasi dalam sel karena pelepasan ikatan normal antara kolesterol dan fosfolipida dalam membran. Saponin dapat membentuk
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
senyawa kompleks dengan kolesterol yang kokoh ikatannya. Hal ini dapat dibuktikan dengan terjadinya penurunan kolesterol dalam jaringan dan dalam darah, maupun penurunan absorpsi kolesterol dan peningkatan ekskresi kolesterol dalam feses. Saponin juga dapat terikat dengan garam-garam empedu yang diperlukan untuk proses absorpsi kolesterol atau karena permukaan golongannya menjadi aktif, dapat juga menyebabkan garam-garam empedu menjadi terhimpit yang akhirnya menjadi polisakarida dalam otot. Pengaruh saponin terhadap rendahnya kolesterol darah akan menghalangi penyerapan kolesterol kembali setelah dikeluarkan dari empedu sehingga meningkatkan asam empedu dan sterol netral pada feses (Widodo, 2010). b. Niasin Niasin merupakan derivat asam monokarboksilat dari pirimidin. Bentuk aktif dari niasin adalah Nikotinamida Adenin Dinukleotida (NAD+) dan Nikotinamida Adenin Dinukleotida Phosphat (NADP+) yang merupakan komponen penting dalam lintasan metabolik yang melibatkan karbohidrat, lipid serta asam amino. Niasin menurunkan kadar kolesterol plasma melalui inhibisi aliran asam lemak bebas dari jaringan adiposa yang mengurangi pembentukan lipoprotein yang membawa kolesterol, yaitu VLDL, IDL, LDL, yang pada akhirnya dapat menurunkan kadar kolesterol total dalam darah (Tika, 2002).
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
c. Alkaloid Alkaloid secara umum mengandung paling sedikit satu buah atom nitrogen yang bersifat basa dan merupakan bagian dari cincin heterosiklik. Kebanyakan alkaloid berbentuk padatan kristal. Alkaloid dapat juga berbentuk amorf atau cairan (Putra, 2007). Kandungan alkaloid memiliki efek menghambat aktivitas enzim lipase, sehingga dapat menghambat pemecahan lemak menjadi molekul-molekul lemak yang lebih kecil. Hal ini mengakibatkan terjadinya pengurangan jumlah lemak yang dapat diabsorpsi (Agustina, 2009). d. Vitamin A Secara garis besar, senyawa vitamin A dibagi menjadi dua, yaitu preformed vitamin A (vitamin A, retinoid, retinol, dan derivatnya) dan provitamin A (karotenoid/karoten dan senyawa sejenis) yang merupakan prekursor vitamin A (Dewoto, 2007). Dalam Labu Siam itu sendiri, vitamin A yang terkandung didapat dalam bentuk karoten (Mélo, et al., 2006) Vitamin A berperan dalam melindungi endotelium dan juga merupakan antioksidan yang dapat melindungi
peroksidasi lemak.
Vitamin A dapat melindungi kejadian agregasi platelet, mempengaruhi transpor oksigen dan penggunaannya, meningkatkan HDL dan meningkatkan kemampuan asam nikotinat dalam menurunkan lipid
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
darah. Vitamin A dapat berperan dalam pencegahan primer terhadap kelainan metabolisme yang merupakan penyebab hiperlipoproteinemia, dan dapat pula berperan dalam pencegahan sekunder utuk mengurangi lipid darah yang dapat menyebabkan risiko aterogenesis (Herman, 1991). e. Vitamin C Vitamin C atau asam askorbat mula-mula dikenal sebagai asam heksuronat dengan rumus C6H8O6. Vitamin C bekerja sebagai suatu koenzim dan pada keadaan tertentu merupakan reduktor dan antioksidan (Dewoto, 2007). Dalam metabolisme kolesterol, vitamin C berperan meningkatkan laju ekskresi kolesterol dalam bentuk asam empedu, meningkatkan kadar HDL, dan berfungsi sebagai pencahar sehingga meningkatkan pembuangan kotoran. Pada gilirannya, hal ini akan menurunkan penyerapan kembali asam empedu dan pengubahannya menjadi kolesterol (Sotyaningtyas, 2007). Vitamin C dapat menurunkan kolesterol dan trigliserida pada sejumlah orang yang biasanya memiliki kadar kolesterol dan trigliserida tinggi. Namun, sayangnya hal itu tidak berlaku pada orang dengan kadar kolesterol dan trigliserida normal. Jadi, rupanya vitamin C berperan
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
menjaga keseimbangan (homeostasis) di dalam tubuh (Sotyaningtyas, 2007). f. Flavonoid, Polifenol, dan Proantosianidin Senyawa flavonoid adalah suatu kelompok senyawa fenol yang terbesar yang ditemukan di alam, serta berpotensi sebagai antioksidan dan
mempunyai
bioaktivitas
sebagai
obat
(Rohyami,
2008).
Kemampuan flavonoid sebagai antioksidan tergantung pada struktur molekulnya. Posisi rantai hidroksil pada flavonoid penting untuk perannya sebagai antioksidan dan untuk mengatasi aktivitas radikal bebas (Buhler and Cristobal, 2000). Berdasarkan penelitian, flavonoid dapat menangkap radikal bebas dan dapat mencegah proses peroksidasi lipid di mikrosom dan liposom (Peng and Kuo, 2003). Fenol adalah senyawa dengan suatu gugus OH yang terikat pada cincin aromatik. Senyawa fenolik dalam tumbuhan dapat berupa fenol sederhana, antraquinon, asam fenolat, kumarin, lignin, tanin, dan proantosianidin (Rohyami, 2008; Pratimasari, 2009). Senyawa polifenol dan proantosianidin memiliki aktivitas antioksidan yang berfungsi dalam menangkal radikal bebas serta mencegah proses oksidasi LDL (Mélo, et al., 2006). Polifenol memiliki andil dalam menurunkan sekresi lipoprotein yang terdapat di hepar dan usus. Polifenol yang terdapat mengurangi proses esterifikasi kolesterol sehingga terjadi penurunan
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
kadar ester kolesterol, dimana ester kolesterol merupakan komponen pembentuk utama kilomikron dan VLDL. Efek lain dari polifenol adalah menghambat sintesis Apo B-48 dan Apo B-100 yang disintesis di dalam enterosit dan hepar. Kadar Apo B-48 dan Apo B-100 yang menurun menyebabkan pembentukkan kilomikron, VLDL, IDL, dan LDL terganggu sehingga kadar trigliserida darah juga menurun (Vidal, et al., 2007). Proantosianidin penghambatan
menghambat
pembentukan
absorbsi
misel.
kolesterol
Proantosianidin
melalui
menurunkan
aktivitas enzim HMG-KoA reduktase sehingga proses produksi VLDL di hati turun dan aliran VLDL yang keluar dari hati berkurang. Akibatnya, produksi kolesterol total, LDL, trigliserida plasma menurun (Yoko, et al., 2005). g. Serat Larut (Pektin) dan Serat Tidak Larut Serat adalah bagian dari tanaman yang tidak dapat diserap oleh tubuh. Serat makanan, terutama yang terdiri dari selulosa, hemiselulosa, dan lignin sebagian besar tidak dapat dihancurkan oleh enzim-enzim dan bakteri di dalam traktus digestivus. Di samping menyerap air, serat makanan juga menyerap asam empedu sehingga proses pencernaan lemak akan terhambat. Serat makanan dapat berikatan dengan garam
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
asam lemak di dalam usus halus, dan kemudian dilepaskan untuk kerja bakteri di dalam kolon (Kusharto, 2006). Pektin merupakan serat makanan yang dapat larut, yang diketahui dapat mencegah hiperkolesterol, kanker usus besar, dan diabetes. Efek pektin yang terpenting adalah penurunan absorbsi asam-asam empedu (Agustini, et al., 2006). Pektin menstimulasi ekskresi lipid melalui pembuangan kolesterol dan
koprostanol, peningkatan oksidasi
kolesterol melalui efek induksi pada enzim 7α-hidroksilase dan mengurangi absorbsi lemak di dalam usus (Aprikian, et al., 2003).
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
B. Kerangka berpikir Labu Siam Saponin
Senyawa saponin berikatan kuat dengan senyawa 3bhidroksisteroid
Menurunkan absorbsi kolesterol Meningkatkan ekskresi kolesterol
Senyawa saponin berikatan dengan garam empedu Niasin
Alkaloid
Vitamin C
Pektin
Menurunkan aliran asam lemak dari jaringan adiposa Menghambat aktivitas enzim lipase Menurunkan absorbsi kembali asam empedu Menaikkan kadar HDL
Faktor lain yang dapat menghambat penurunan kadar kolesterol : stress, penyakit hati, makanan, hormon, genetik, jenis kelamin, varietas Labu Siam
Vitamin A Meningkatkan kemampuan niasin dalam menurunkan lipid darah
Menurunkan kadar kolesterol total darah
Mencegah peroksidasi lipid di mikrosom Flavonoid Proantosianidin
Menurunkan aktivitas enzim HMG-KoA reduktase Berikatan dengan asam empedu
Polifenol
Serat
Menurunkan sintesis Apo B-48 dan Apo B-100 Berikatan dengan asam lemak di dalam usus
commit to
Menyerap asam empedu
Menurunkan VLDL,LDL, dan kilomikron Menurunkan absorbsi kolesterol user
Faktor lain yang dapat memicu penurunan kadar kolesterol : psikologis, makanan, genetik, jenis kelamin, varietas Labu Siam
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Keterangan Gambar: : kandungan zat di dalam tubuh : menimbulkan efek Beberapa kandungan zat di dalam Labu Siam bekerja di dalam tubuh dengan mekanisme tertentu. Misalnya pada saponin dan serat, kedua zat tersebut bekerja dengan cara menurunkan absorbsi kolesterol dan meningkatan ekskresi kolesterol. Sedangkan niasin menurunkan aliran asam lemak dari jaringan adiposa. Dari keseluruhan mekanisme tersebut menyebabkan penurunan kadar kolesterol total darah. C. Hipotesis 1. Pemberian ekstrak Labu Siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) dapat mencegah kenaikan kadar kolesterol total tikus putih (Rattus norvegicus) yang diberi pakan hiperkolesterolemik. 2. Ada perbedaan pengaruh pemberian beberapa dosis ekstrak Labu Siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) terhadap kadar kolesterol total tikus putih (Rattus norvegicus) yang diberi pakan hiperkolesterolemik.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
BAB III METODE PENELITIAN
A. Jenis Penelitian Penelitian ini bersifat experimental laboratorium dengan menggunakan rancangan penelitian pre and post test control group design. B. Lokasi Penelitian Penelitian dilakukan di Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta. C. Subjek dan Besar Penelitian 1. Tikus putih dengan kriteria galur Wistar, jantan, berumur kira-kira 3 bulan dengan berat badan kira-kira 200 gram. Tikus putih diperoleh dari Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu (LPPT) Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. 2. Besarnya sampel ditentukan dengan menggunakan Rumus Federer, dengan perhitungan sebagai berikut: Rumus Federer : (n-1) (t-1) > 15 n : besar sampel t : jumlah kelompok
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Jadi besarnya sampel yang diperlukan, menurut rumus Federer: (n-1) (t-1) > 15
;t=4
(n-1) (4-1) > 15 3n-3
> 18
n
>6 Jumlah sampel harus lebih besar dari 6 ekor tikus tiap kelompok.
Dalam penelitian ini, setiap kelompok terdiri dari 7 ekor tikus, sehingga besarnya sampel menjadi 28 ekor tikus. D. Teknik Sampling Pengambilan sampel sebanyak 28 ekor tikus jantan dilakukan secara purposive random sampling, dengan kriteria tikus jantan, galur Wistar, sehat dan mempunyai aktivitas normal, tidak kawin, berumur 3 bulan dengan berat badan kira-kira 200 gram. Dua puluh delapan ekor tikus putih tersebut dibagi menjadi 4 kelompok dengan cara random sampling, tiap-tiap kelompok terdiri atas 7 ekor tikus putih. Kelompok I sebagai kelompok kontrol sedangan kelompok II, III dan IV sebagai kelompok perlakuan. E. Identifikasi Variabel Penelitian 1. Variabel bebas
: Ekstrak Labu Siam.
2. Variabel terikat
: Kadar kolesterol total darah tikus putih
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
3. Variabel luar a. Dapat dikendalikan
: Makanan, minuman, genetik tikus putih, jenis kelamin tikus putih, varietas Labu Siam.
b. Tidak dapat dikendalikan : Kondisi psikologis (stress), hormon, penyakit hati. F. Definisi Operasional Variabel 1. Variabel Bebas Ekstrak Labu Siam Ekstrak Labu Siam adalah hasil ekstraksi buah labu yang menggunakan beberapa metode pada prosesnya. Dalam penelitian ini, digunakan metode perkolasi. Metode perkolasi adalah penyarian zat aktif yang dilakukan dengan cara serbuk simplisia, yaitu bahan baku alamiah setelah dikeringkan, yang dimaserasi selama 3 jam, kemudian simplisia dipindahkan ke dalam bejana silinder yang bagian bawahnya diberi sekat berpori, cairan penyari dialirkan dari atas ke bawah melalui simplisia tersebut, cairan penyari akan melarutkan zat aktif dalam sel-sel simplisia yang dilalui sampai keadaan jenuh (Utami, 2009). Ekstrak kasar hasil perkolasi yang berbentuk semisolid diencerkan dalam air dengan dosis yang berbeda-beda. Pada penelitian ini digunakan 3 dosis ekstrak yaitu 80 mg/200gr BB (dosis terapi), 160 mg/200gr BB (2 kali dosis terapi), dan
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
240 mg/200gr BB (3 kali dosis terapi) untuk diuji pengaruhnya pada kadar kolesterol total. Ekstrak Labu Siam diperoleh dari Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu (LPPT) Universitas Gadjah Mada Yogyakarta sehingga dapat dikendalikan. Skala data: ordinal. 2. Variabel Terikat Kadar Kolesterol Total Darah Yang dimaksud dengan kadar kolesterol total darah adalah kadar kolesterol total darah hewan uji yang diukur dengan alat spectofotometry, setelah subjek dipuasakan selama 12 jam dengan satuan mg/dl. Pengukuran kadar kolesterol total dapat dilakukan dengan mengambil darah tikus putih melalui sinus orbitalis dengan pipet mikro hematokrit, lalu darah ditampung dalam tabung sentrifuge. Setelah itu, diperiksa kadar kolesterol totalnya di laboratorium klinik. Skala data: rasio.
3. Variabel Luar a. Dapat Dikendalikan
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
1) Makanan Makanan merupakan nutrisi yang diperlukan makhluk hidup untuk mempertahankan metabolisme hidupnya. Makanan dapat mempengaruhi kadar kolesterol total tikus. Cara pengendaliannya adalah pengaturan pakan tikus. Selama masa adaptasi 7 hari dan perlakuan selama 21 hari setelah masa adaptasi, semua kelompok tikus diberikan makanan standar yaitu pelet standar AD-2. 2) Genetik Tikus Putih Faktor genetik adalah riwayat keturunan sifat fenotipe dan genotipe suatu organisme (Aji, 2005). Faktor genetik mempunyai peran dalam menentukan kadar kolesterol dan tidak dapat dikendalikan secara mutlak. Hal ini diatasi dengan pemilihan subjek penelitian yang berasal dari galur yang sama (galur Wistar) dan menggunakan sistem randomisasi sehingga diharapkan distribusi dari faktor genetik ini merata pada tiap kelompok penelitian. 3) Jenis Kelamin Tikus Putih Jenis kelamin merupakan perbedaan sistem reproduksi pada makhluk hidup. Penelitian ini menggunakan tikus putih (Rattus norvegicus) jantan supaya sampel bersifat homogen serta menghindari adanya pengaruh hormon esterogen. Hormon esterogen pada tikus
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
betina dapat berpengaruh terhadap penurunan kadar kolesterol total darah (Shin, et al., 2005). 4) Varietas Labu Siam Varietas merupakan keanekaragaman hayati pada organisme. Varietas dapat mempengaruhi kadar kandungan zat aktif dari Labu Siam. Varietas Labu Siam dapat dikendalikan dengan cara menggunakan Labu Siam yang diambil dari tempat yang sama, yaitu LPPT Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. b. Tidak Dapat Dikendalikan 1) Kondisi psikologis Kondisi psikologis merupakan status mental yang dimiliki makhluk hidup. Kondisi psikologi tikus dapat dipengaruhi oleh perlakuan yang berulang kali. Keadaan stress memacu produksi hormon epinefrin, norepinefrin, kortikotropin dan glukokortikoid yang akan mengaktifkan hormon peka lipase trigliserid yang memecah trigliserid dan meningkatkan asam lemak bebas (Guyton and Hall, 2007). Pengaruh ini dapat dikurangi dengan adanya waktu adaptasi sebelum percobaan dan pemisahan subjek penelitian dalam kandang yang terpisah.
2) Hormon
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Hormon merupakan zat kimiawi dalam darah yang bekerja pada target organ tertentu. Sistem hormon berpengaruh pada pengaturan kadar kolesterol darah. Hormon yang berpengaruh terhadap metabolisme kolesterol salah satunya adalah hormon tiroid. Hormon sensitif lipase akan diaktifkan oleh hormon tiroid sehingga proses katabolisme lipid dalam tubuh tikus tinggi (Mayes, 2009). Induksi hiperkolesterol dengan pakan hiperkolesterolemik dipermudah dengan menurunkan aktivitas hormon tiroid tikus putih dengan menggunakan propiltiourasil. Propiltiourasil (PTU) adalah zat kimia yang dapat menekan aktivitas kelenjar tiroid (Marina, 1994). Hotimah dalam Hardiningsih dan Nurhidayat (2006) menyebutkan bahwa pemberian propiltiourasil (PTU) ke dalam ransum tikus dapat meningkatkan konsentrasi kolesterol serum tikus. PTU diberikan dengan dosis 0,5 mg/kg BB (Hardiningsih dan Nurhidayat, 2006), setara dengan 0,1 mg/200gr BB. Pengendalian
hormon
tiroid
dilakukan dengan pemberian PTU, namun tidak sepenuhnya karena tidak dilakukan pengukuran kadarnya, apakah status eutiroid sudah tercapai atau belum.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
3) Penyakit hati Penyakit hati adalah gangguan pada sistem metabolisme pada hepar yang dapat menimbulkan kelainan pada kadar kolesterol karena hepar merupakan tempat metabolisme kolesterol. Penyakit hati pada tikus merupakan variabel yang tidak sepenuhnya dapat dikendalikan karena sulitnya pendeteksian dini dan membutuhkan pemeriksaan yang membutuhkan biaya besar. Namun, untuk mengurangi pengaruh faktor penyakit hati dapat dipilih tikus yang sehat dan aktif.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
G. Rancangan Penelitian Rancangan penelitian pre and post test control group design. 28 ekor tikus putih sesuai dengan kriteria penelitian Dikelompokkan menjadi empat kelompok dengan cara purposive random sampling
Kel. I 7 ekor tikus diadaptasikan 7 hari
Kel. II 7 ekor tikus diadaptasikan 7 hari
Induksi hiperkolesterolemik+PTU 7 hari
Induksi hiperkolesterolemik+PTU 7 hari
Induksi hiperkolesterolemik+PTU 7 hari
Dipuasakan 12 jam
Dipuasakan 12 jam
Pre test kadar kolesterol darah
Pre test kadar kolesterol darah
Pre test kadar kolesterol darah
Kel.I Hiperkolesterolemik +PTU
Kel.II Hiperkolesterolemik dan diberi ekstrak Labu Siam 80mg/200gBB+PTU Diberi perlakuan selama 21 hari
Kel.III Hiperkolesterolemik dan diberi ekstrak Labu Siam 160mg/200gBB+PTU Diberi perlakuan selama 21 hari
Dipuasakan 12 jam
Dipuasakan 12 jam
Dipuasakan 12 jam
Dipuasakan 12 jam
Post test kadar kolesterol darah
Post test kadar kolesterol darah
Post test kadar kolesterol darah
Post test kadar kolesterol darah
Dipuasakan 12 jam
Diberi perlakuan selama 21 hari
Kel. III 7 ekor tikus diadaptasikan 7 hari
Uji Statistik
commit to user
Kel. IV 7 ekor tikus diadaptasikan 7 hari
Induksi hiperkolesterolemik+PTU
7 hari
Dipuasakan 12 jam Pre test kadar kolesterol darah
Kel.IV Hiperkolesterolemi dan diberi ekstrak Labu Siam 240mg/200gBB+PTU
Diberi perlakuan selama 21 hari
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
H. Alat yang Digunakan 1. Kandang hewan percobaan beserta kelengkapan pemberian pakan dan minum 2. Gelas ukur 3. Pipet tetes 4. Pipet volume 5. Cawan petri 6. Timbangan 7. Tabung centrifuge 8. Centrifuge 9. Pipa kapiler 10. Spuit needle feeding 11. Rak tabung reaksi I. Bahan Penelitian 1. Makanan dan minuman hewan uji (pelet dan air putih) 2.Pakan hiperkolesterolemik (serbuk kolesterol, kuning telur itik, minyak babi, minyak goreng) 3. Ekstrak Labu Siam 4. Propiltiourasil (PTU) 0,1 mg
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
J. Jalannya Penelitian 1. Tikus putih sebanyak 28 ekor, dikelompokkan dalam empat kelompok secara purposive random sampling, masing-masing kelompok terdiri dari 7 ekor tikus lalu dimasukkan ke dalam kandang, diadaptasikan dengan lingkungan Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran UNS selama tujuh hari, diberi makan pelet dan air matang. 2. Setelah diadaptasikan selama seminggu, pada hari ke-8 semua tikus diinduksi pakan hiperkolesterolemik berupa campuran homogen yang mengandung 5 ml kuning telur itik, 10 ml minyak babi, 1 ml minyak kelapa, dan 0,1 gram serbuk kolesterol untuk menaikkan kolesterolnya sampai hari ke-14. 3. Pada hari ke-14 semua subyek diambil darah untuk pemeriksaan kadar kolesterol total darah pre test. Semua tikus dipuasakan selama 12 jam sebelum diambil darahnya. Pengambilan darah dilakukan dengan cara menusukkan pipa kapiler di daerah saccus medianus orbitalis kemudian darah akan mengalir di dalam pipa kapiler dan dimasukkan ke dalam tabung centrifuge. Darah dipusingkan selama 10-15 menit dengan kecepatan 3000 rpm sehingga didapatkan serum darah untuk diperiksa kadar kolesterol total pre test. Perbedaan rerata kadar kolesterol total pre test dianalisis menggunakan uji ANOVA.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
4. Pada hari ke-15, keempat kelompok diberikan perlakuan sebagai berikut: Kelompok I
: diinduksi pakan hiperkolesterolemik 2,5 ml dan minuman berupa air matang yang dicampur PTU 0,1 mg dalam 0,5 cc air secara oral dengan menggunakan sonde lambung sebanyak dua kali sehari (pukul 07.00 dan 15.00) sampai hari ke-35.
Kelompok II
: diinduksi pakan hiperkolesterolemik 2,5 ml dan minuman berupa air matang yang dicampur PTU 0,1 mg dalam 0,5 cc air secara oral dengan menggunakan sonde lambung sebanyak dua kali sehari serta ditambah ekstrak Labu Siam 80 mg/200gr BB juga dengan menggunakan sonde lambung, dua kali sehari (pukul 07.00 dan 15.00) sampai hari ke-35.
Kelompok III
: diinduksi pakan hiperkolesterolemik 2,5 ml dan minuman berupa air matang yang dicampur PTU 0,1 mg dalam 0,5 cc secara oral dengan menggunakan sonde lambung sebanyak dua kali sehari serta ditambah ekstrak Labu Siam 160 mg/200gr BB juga dengan menggunakan sonde lambung, dua kali sehari (pukul 07.00 dan 15.00) sampai hari ke-35.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
Kelompok IV
digilib.uns.ac.id
: diinduksi pakan hiperkolesterolemik 2,5 ml dan minuman berupa air matang yang dicampur PTU 0,1 mg secara oral dengan menggunakan sonde lambung sebanyak dua kali sehari serta ditambah ekstrak Labu Siam 240 mg/200gr BB juga dengan menggunakan sonde lambung, dua kali sehari (pukul 07.00 dan 15.00) sampai hari ke-35.
5. Setelah perlakuan, semua subyek penelitian yang telah dipuasakan 12 jam sebelumnya, diambil darahnya untuk pemeriksaan kadar kolesterol total darah post test. Pengambilan darah dilakukan dengan cara menusukkan pipa kapiler di daerah saccus medianus orbitalis kemudian darah akan mengalir di dalam pipa kapiler dan dimasukkan ke dalam tabung centrifuge. Setelah itu, diperiksa kadar kolesterol totalnya dengan menggunakan alat spectophotometer. 6. Membandingkan kadar kolesterol total tiap kelompok dan mengolah data hasil pemeriksaan kadar kolesterol total tikus putih. K. Teknik Analisis Data Perbedaan rerata keempat kelompok dianalisis dengan ANOVA test menggunakan software SPSS for Windows versi 16. Data yang diolah menggunakan ANOVA test harus memenuhi syarat yaitu memiliki sebaran yang normal dan kesamaan varian, yang dapat diperiksa dengan uji normalitas
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
dan uji homogenitas varian. Jika terdapat perbedaan yang bermakna dilanjutkan dengan uji komparatif Post Hoc dengan derajat kemaknaan a = 0,05.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
BAB IV HASIL PENELITIAN
A. Hasil Penelitian Penelitian ini menggunakan sampel tikus putih (Rattus norvegicus) yang dibagi secara acak menjadi 4 kelompok perlakuan, masing-masing kelompok terdiri dari 7 ekor sampel tikus. Semua sampel diadaptasikan selama tujuh hari dan untuk mencapai kondisi hiperkolesterolemia, pada hari ke-8 semua tikus diinduksi pakan hiperkolesterolemik sampai hari ke-14. Pada hari ke-14 semua sampel diperiksa kadar kolesterol total pre test dengan hasil sebagai berikut: Tabel 4.1. Data hasil pengukuran kadar kolesterol total tikus putih sebelum diberi perlakuan Kelompok
N
Rerata kadar kolesterol total ± SB (mg/dl)
Kelompok I
7
107,89 ± 45,54
Kelompok II
7
83,10 ± 10,74
Kelompok III
7
87,81 ± 12,10
Kelompok IV
7
80,39 ± 16,36
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Perlakuan yang diberikan adalah pada kelompok I sebagai kontrol, kelompok II diberi pakan hiperkolesterolemik dan ekstrak labu siam dosis 80 mg/200gr BB, kelompok III diberi pakan hiperkolesterolemik dan ekstrak labu siam dosis 160 mg/200gr BB, serta kelompok IV diberi pakan hiperkolesterolemik dan ekstrak labu siam dosis 240 mg/200gr BB. Pada hari ke-36, semua sampel diperiksa kadar kolesterol total post test. Hasilnya sebagai berikut: Tabel 4.2. Data hasil pengukuran kadar kolesterol total tikus putih setelah diberi perlakuan Kelompok
N
Rerata kadar kolesterol total postest ± SB (mg/dl)
Kelompok I
7
107,89 ± 45,54
Kelompok II
7
83,10 ± 10,74
Kelompok III
7
87,81 ± 12,10
Kelompok IV
7
80,39 ± 16,36
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Bila hasil postest dan pretest kita analisis, maka hasilnya adalah sebagai berikut:
Tabel 4.3. Data Hasil Pengukuran Kadar Kolesterol Total Tikus Putih Sebelum dan Setelah Diberi Perlakuan Kelompok
N
Rerata kadar kolesterol total sebelum perlakuan + SB (mg/dl)
Rerata kadar kolesterol total setelah perlakuan ± SB (mg/dl)
Kelompok I
7
107,89 ± 45,54
88,59 ± 27,51
Kelompok II
7
83,10 ± 10,74
91,49 ± 33,23
Kelompok III 7
87,81 ± 12,10
71,67 ± 13,58
7
80,39 ± 16,36
114,77 ± 75,80
Kelompok IV
Grafik 4.1. Histogram Rerata Kadar Kolesterol Total Tikus Putih Sebelum dan Setelah Diberi Perlakuan (mg/dl)
Pada kelompok I dan III terdapat penurunan rerata kadar kolesterol total. Sedangkan kelompok II dan IV mengalami kenaikan rerata kadar kolesterol total.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Dari data rerata kadar kolesterol total sebelum dan setelah perlakuan, dapat diperoleh data selisih kadar kolesterol total, yaitu sebagai berikut: Tabel 4.4. Data Hasil Pengukuran Selisih Kadar Kolesterol Total Tikus Putih
Kelompok
N
Rerata kadar kolesterol total sebelum perlakuan + SB (mg/dl)
Rerata kadar kolesterol total setelah perlakuan ± SB (mg/dl)
Rerata selisih kadar kolesterol total + SB (mg/dl)
Kelompok I
7
107,89 ± 45,54
88,59 ± 27,51
-19,30 + 19,74
Kelompok II
7
83,10 ± 10,74
91,49 ± 33,23
8,39 + 31,09
Kelompok III
7
87,81 ± 12,10
71,67 ± 13,58
-16,14 + 16,28
Kelompok IV
7
80,39 ± 16,36
114,77 ± 75,80
47,13 + 52,47
60 40 20 0
Series 1
-20 -40 Kontrol
Ekstrak 80mg/200gBB
Ekstrak 160mg/200gBB
Ekstrak 240mg/200gBB
Grafik 4.2. Histogram Rerata Selisih Kadar Kolesterol Total Tikus Putih (mg/dl)
Dari hasil uji normalitas Saphiro-Wilk terhadap rerata selisih kadar kolesterol total pada kelompok I sampai dengan kelompok IV, didapatkan hasil sebagai berikut :
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Tabel 4.5. Hasil Uji Normalitas Saphiro-Wilk terhadap rerata selisih kadar kolesterol total
Kelompok
Nilai P
Keterangan distribusi data
Kelompok I
0.025
Tidak normal
Kelompok II
0.002
Tidak normal
Kelompok III
0.021
Tidak normal
Kelompok IV
0.653
Normal
Dari hasil di atas dapat diketahui bahwa data kelompok I, II, dan III tidak memenuhi syarat untuk dapat dianalisis secara parametrik. Untuk itu, dalam langkah selanjutnya akan digunakan uji non parametrik, yaitu Kruskal-Wallis (lampiran 4) untuk menganalisis bahwa di antara kelompok-kelompok tersebut paling sedikit terdapat satu kelompok yang berbeda kadar kolesterol dimana hasil p=0,006 (p<0,05) sehingga dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan rerata selisih kadar kolesterol total sebelum dan setelah perlakuan yang bermakna. Selanjutnya digunakan uji Mann-Whitney untuk mengetahui antarkelompok manakah yang memiliki perbedaan rerata selisih kadar kolesterol total sebelum dan setelah perlakuan yang signifikan. Dari hasil uji Mann-Whitney (lampiran 5), didapatkan hasil sebagai berikut:
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Tabel 4.6. Nilai Signifikansi Rerata Selisih Kadar Kolesterol Total Antarkelompok pada Uji Mann-Whitney
Kelompok I
II
III
IV
Kelompok
Nilai p
Keterangan
II
0.013
signifikan
III
0.565
tidak signifikan
IV
0.013
signifikan
I
0.013
signifikan
III
0.035
signifikan
IV
0.142
tidak signifikan
I
0.565
tidak signifikan
II
0.035
signifikan
IV
0.013
signifikan
I
0.013
signifikan
II
0.142
tidak signifikan
III
0.013
signifikan
Dari tabel di atas, dapat dilihat bahwa terdapat perbedaan rerata selisih kolesterol total yang signifikan (p<0,05) pada kelompok I dengan kelompok II, kelompok I dengan kelompok IV, kelompok II dengan kelompok III, dan kelompok III dengan kelompok IV.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
BAB V PEMBAHASAN
Dari tabel Tabel 4.4 yang berisi data hasil pengukuran selisih kadar kolesterol total tikus putih, dapat dilihat bahwa terdapat penurunan kadar kolesterol total pada kelompok I (kontrol) yaitu sebesar -19,30 mg/dl. Hal yang sama juga terlihat pada kelompok III (kelompok perlakuan dengan dosis ekstrak 160 mg/200gr BB). Pada kelompok III terjadi penurunan kadar kolesterol total sebesar 16,14 mg/dl. Sementara pada kelompok II dan IV terjadi peningkatan kadar kolesterol total. Pada kelompok I, tidak seharusnya mengalami penurunan kadar kolesterol total yang berarti karena kelompok kontrol hanya diinduksi pakan hiperkolesterolemik tanpa diberi ekstrak Labu Siam sehingga diharapkan kelompok kontrol mengalami peningkatan kadar kolesterol total. Akan tetapi pada penelitian ini ternyata terjadi penurunan. Hal ini mungkin disebabkan oleh pakan hiperkolesterolemik yang tidak adekuat untuk membuat kondisi hiperkolesterolemia. Penurunan kadar kolesterol total pada kelompok III memiliki kemungkinan bahwa dosis pada kelompok III yaitu 160 mg/200gr BB adalah dosis paling optimal dibanding dosis 80 mg/200gr BB dan dosis 240 mg/200gr BB. Sedangkan peningkatan kadar kolesterol total pada kelompok II dan IV dapat disebabkan oleh faktor pemberian dosis yang tidak tepat. Selain itu, ekstrak sebaiknya diberikan satu jam setelah pemberian pakan (Agustini, et al., 2006b).
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
Tetapi pada penelitian, ekstrak diberikan 15 menit setelah pemberian pakan dimana hal ini dapat mengurangi fungsi penyerapan ekstrak secara optimal di dalam tubuh. Selain itu, wadah penyimpanan juga mempengaruhi kualitas ekstrak. Pada penelitian, ekstrak disimpan dalam tabung plastik bening yang ditutupi dengan plastik dan karet. Hal-hal tersebut memungkinkan terjadinya kerusakan kandungan zat aktif yang terdapat dalam ekstrak sehingga memiliki efek toksik. Selanjutnya dari tabel 4.6 di atas dapat dilihat bahwa terdapat perbedaan yang signifikan pada kelompok kontrol dengan kelompok II (dosis 80 mg/200gr BB), kelompok kontrol dengan kelompok IV (dosis 240 mg/200gr BB), kelompok II (dosis 80 mg/200gr BB) dengan kelompok III (dosis 160 mg/200gr BB), dan kelompok III (dosis 160 mg/200gr BB) dengan kelompok IV (dosis 240 mg/200gr BB). Namun karena kelompok kontrol telah mengalami penurunan kadar kolesterol total yang seharusnya tidak terjadi maka perbedaan yang signifikan pada kelompokkelompok tersebut menjadi tidak bermakna. Selain itu, dapat diketahui bahwa tidak setiap pemberian dan kenaikan dosis ekstrak Labu Siam diikuti dengan penurunan kadar kolesterol total. Hasil tersebut tidak sesuai dengan hipotesis awal bahwa pemberian ekstrak Labu Siam dapat menurunkan kadar kolesterol total tikus putih yang diberi pakan hiperkolesterolemik. Marlina dalam Agustini et al. (2006a) juga menyebutkan bahwa Labu Siam dapat menurunkan kadar kolesterol total dan trigliserida darah. Hasil penelitian tersebut berbeda dengan hasil penelitian ini di
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
mana ekstrak Labu Siam tidak dapat menurunkan kadar kolesterol total. Ada beberapa faktor yang dapat mempengaruhi hal tersebut, antara lain: A. Pakan Hiperkolesterolemik Seperti
yang
sudah
disebutkan
sebelumnya
bahwa
pakan
hiperkolesterolemik dan lama pemberian juga berpengaruh dalam peningkatan kadar hiperkolesterolemia sehingga perlu diteliti, apakah sudah sesuai untuk mencapai kondisi hiperkolesterolemia bagi tikus putih. B. Teknik Pemberian Ekstrak Langkah-langkah pemberian ekstrak juga perlu diperhatikan, seperti interval waktunya, antara ekstrak dengan pemberian oral lainnya. Ekstrak sebaiknya diberikan satu jam setelah pemberian pakan (Agustini, et al., 2006b). C. Kualitas Ekstrak Kualitas kandungan ekstrak Labu Siam yang seharusnya diperhatikan pada saat pemberian ekstrak agar diketahui apakah masih dapat digunakan. Sebaiknya ekstrak diberikan dalam keadaan segar agar dapat berfungsi secara optimal. Pada penelitian ini dilakukan pengenceran ekstrak Labu Siam setiap dua hari. Selanjutnya, wadah penyimpanan juga mempengaruhi kualitas ekstrak. Ekstrak sebaiknya disimpan dalam botol gelap steril yang kedap udara (Chevallier, 1996).
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
D. Kondisi Psikologis dan Lingkungan Perlakuan sonde lambung dan pengambilan darah yang berulang sangat rentan menyebabkan gangguan kondisi psikologis seperti stres. Selain itu, kondisi kandang dan lingkungan tikus putih kurang ideal, baik dari segi sanitasi, kelembapan dan suhunya. Kondisi ini juga dapat mempengaruhi metabolisme tubuh dari tikus putih. E. Penimbangan Berat Badan Tikus Putih Berat badan seharusnya ditimbang secara berkala agar dapat dilakukan penyesuaian dosis ekstrak Labu Siam (Hartanto, 2008). Pada penelitian ini tidak dilakukan penimbangan berat badan tikus putih. F. Efek Farmakologi Zat aktif pada tanaman obat umunya dalam bentuk metabolit sekunder, sedangkan satu tanaman bisa menghasilkan beberapa metabolit sekunder, sehingga memungkinkan tanaman tersebut memiliki lebih dari satu efek farmakologi. Efek tersebut adakalanya saling mendukung, tetapi ada juga yang seakan-akan saling berlawanan atau kontradiksi (Katno et al., 2003). Kemungkinan hanya salah satu zat aktif yang mendominasi metabolisme tubuh dapat terjadi dikarenakan dosis ektrak yang tidak tepat. G. Standar Deviasi Standar Deviasi juga turut berperan dalam pengaruh pemberian ekstrak Labu Siam terhadap kadar kolesterol total. Simpangan data yang
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
terlalu besar menyebabkan margin of error turut menjadi besar sehingga semakin tidak presisi. H. Jumlah Sampel Pada penelitian ini jumlah sampel terlalu sedikit sehingga dapat mengurangi kekuatan dari penelitian ini.
commit to user
perpustakaan.uns.ac.id
digilib.uns.ac.id
BAB VI SIMPULAN DAN SARAN
A. Simpulan 1. Pemberian ekstrak labu siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) tidak dapat mencegah kenaikan kadar kolesterol total tikus putih (Rattus norvegicus) yang diberi pakan hiperkolesterolemik. 2.
Tidak ada perbedaan pengaruh pemberian beberapa dosis ekstrak labu siam (Sechium edule (Jacq.) Sw.) yang signifikan terhadap kadar kolesterol total tikus putih (Rattus norvegicus) yang diberi pakan hiperkolesterolemik.
B. Saran Pada penelitian lanjutan, perlu diperhatikan: 1. Kualitas kandungan ekstrak labu siam agar dapat memberikan efek secara optimal baik dari waktu maupun cara penyimpanan. 2. Kandungan pakan dan lama pemberian pakan
hiperkolesterolemik agar
tercapai kondisi hiperkolesterolemia. 3. Penimbangan berat badan secara berkala sehingga penyesuaian dosis ekstrak dapat dilakukan. 4. Standar Deviasi dan jumlah sampel yang sesuai. 5. Teknik, metode dan fasilitas penunjang yang lebih baik.
commit to user
