PENGARUH PEMBERIA N RO DAMIN B TERHADAP STRUKTUR HISTO LO GIS SEL HATI MENC IT
SKRIPSI Untuk Mem enu hi Persyaratan Me mperole h Gel ar Sarjana Ke dokte ran
Albe rtus Se ptian Rahardi G0004036 FAKULTAS KEDO KTERAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET SURAKARTA 2010
i
PERSETUJ UAN
Skripsi dengan judul:
Pengaruh Pemberian Rodam in B te rhadap Struktur H istologi s Se l H ati Mencit
Albertus Sept ian Rahardi, G0004036, Tahun 2010
Telah disetujui unt uk dipertahankan di hadapan Tim Ujian Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta
Pada Hari ………. , Tanggal … Februari 2010 Pembimbing Utama
Penguji Utam a
Muthmai nah, dr., M.Kes.
B. Widjokongko, dr., M.Pd., PHK. NIP: 130543948
NIP: 132206586 Pembimbing Pendam ping
Anggot a Penguji
Kusm adewi E. Dam ayanti, dr.
Arif Suryawan, dr. NIP: 131569250
NIP: 132327439 Tim Skripsi
Muthmai nah, dr., M.Kes. NIP: 132206586
ii
PERNYATAAN Dengan ini m enyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan dalam memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan Tinggi, da sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam naskah dan disebutkan dalam daftar pustaka. Surakarta, ... Februari 2010
Albertus Septian Rahardi G0004036
iii
ABSTRAK Albertus Septian Rahardi, G004036, 2010. Pengaruh Pem berian Rodam in B terhadap Struktur Histologis Sel Hati Mencit. Skripsi, Fakultas Kedokteran, Universitas Sebelas Maret, Surakarta. Latar belakang: Rodamin b adalah bahan pewarna dasar yang dilarang digunakan dalam makanan oleh karena bahayanya bagi kesehatan. Penelitian ini dilakukan untuk m em bukt ikan bahwa pemberian rodamin b dapat m enimbulkan perubahan struktur histologis sel hati mencit. Metode Pe nelitian: Penelitian ini m enggunakan sampel sebanyak 28 ekor mencit yang dibagi m enjadi 4 kelompok, masing-masing kelompok terdiri dari 7 ekor mencit. Setiap m encit pada kelompok kontrol (KK) diberi aquades, sedangkan kelompok perlakuan I (KP I), kelompok perlakuan II (KP II), dan kelom pok perlakuan III (KP III) diberi rodam in b m asing-m asing dengan dosis 3,5 m g, 7 mg, dan 14 m g selam a 7 hari. Pada hari kedelapan, organ hatinya diam bil dan dibuat preparat dengan pengecatan HE. Kemudian sel hat i yang rusak dihitung. Data yang diperoleh dari keempat kelompok dibandingkan dengan uji one way Anova (α=0,01). Jika terdapat perbedaan yang signifikan, dilanjutkan dengan uji Post-hoc (α=0,01). Hasil: Hasil uji one way Anova (α=0,01) menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan di antara keempat kelompok sam pel (F=364,94, p=0,00). Hasil uji posthoc menunjukkan adanya perbedaan berm akna antara KK-KP I (p=0,00), KP I-KP II (p=0,00), dan KP II-KP III (p=0,00). Sim pulan: Pem berian rodamin b dapat menimbulkan perubahan struktur histologis sel hati pada mencit yang sebanding dengan besarnya dosis rodam in b yang diberikan. Kata kunci : Rodamin b, hati, kematian sel.
iv
ABSTRACT Albertus Septian Rahardi, G004036, 2010. The Effects of Rhodamine B to Mice Liver Histological Structure. Script, Faculty of Medicine, Sebelas Maret University, Surakarta. Background: Rhodam ine b is basic dye prohibited to be used in foods as it is hazardous to health. The research was carried out to evidence that rhodamine b can induce the change of mice liver histological structure. Methods: The research used 28 m ice in four groups, each of them contained seven m ice. Each of the control group (KK) mice was given aquadest, whereas the experim ental group I (KP I), the experimental group II (KP II), and the experim ent group III (KP III) was given 3.5 m gs, 7 mgs, and 14 m gs doses of rhodam ine b for 7 days. In the eighth day, all of m ice were sacrificed, their livers were m ade histological preparations stained by HE. Then death liver cell was counted. The data of the four groups were analyzed by one way Anova (α=0.01). If there was a significant difference, it was continued by Post-hoc multiple com parisons test (α=0,01). Result: One way Anova showed that there was a significant difference between the four groups (F=364,94, p=0,00). Post-hoc multiple comparisons showed that there were significant differences between KK-KP I (p=0,00), KP I-KP II (p=0,00), and KP II-KP III (p=0,00). Conclusion: Rhodam ine b can induce the change of mice liver histological structure that was coequal to the dose of rhodam ine b given. Keywords: Rhodam ine b, liver, cell death.
v
PRAKATA
Puji syukur kepada Tuhan yang Maha Kuasa yang telah m elimpahkan rahmat dan karunia-Nya, sehingga penulis dapat m enyelesaikan penulisan skripsi dengan judul “Pengaruh Pem berian Rodamin B terhadap Struktur Histologis Sel Hati Mencit”. Terselesaikannya penulisan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan dan bantuan berbagai pihak. Unt uk itu penulis ingin mengucapkan terima kasih yang sedalam-dalamnya kepada sem ua pihak yang telah membantu penyusunan dan penyelesaian skripsi ini. 1. Prof. Dr. A. A. Subijanto, dr., MS., selaku Dekan Fakultas Kedokt eran Universitas Sebelas Maret Surakarta. 2. Sri W ahjono, dr., M.Kes., selaku Ketua Tim Skripsi Fakultas Kedokt eran Universitas Sebelas Maret Surakarta. 3. Muthm ainah, dr. M. Kes., selaku pem bimbing utam a yang telah berkenan meluangkan wakt u m emberikan bim bingan, saran, dan motivasi. 4. Kusmadewi E. Damayant i, dr., selaku pem bimbing pendamping atas segala bimbingan, arahan, dan wakt u yang telah beliau luangkan bagi penulis. Juga sebagai Pembimbing Akadem ik yang selalu mendukung unt uk maju 5. Bambang Widjokongko, dr., M. Pd. Ked., PHK., selaku penguji utama yang telah berkenan m enguji dan m em berikan saran, bimbingan, nasihat untuk menyempurnakan kekurangan dalam penulisan skripsi ini. 6. Arif Suryawan, dr., selaku anggot a penguji yang telah memberikan saran dan nasihat unt uk memperbaiki kekurangan dalam penulisan skripsi ini. 7. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu-persatu, yang turut membantu penyelesaian skripsi ini. Penulis berharap semoga skripsi ini dapat berm anfaat bagi yang berkepentingan khususnya dan bagi pem baca um um nya. Penulis m enyadari m asih banyak kekurangan dalam skripsi ini, karenanya kritik dan saran dari para pem baca sangat penulis harapkan. Surakarta, ... Februari 2010
Albertus Septian Rahardi G0004036
vi
DAFTAR ISI PRAKATA ........................................................................................................ vi DAFTAR ISI ..................................................................................................... vii DAFTAR TABEL ............................................................................................ viii DAFTAR GAMB AR ........................................................................................
x
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xi PENDAHULUAN ............................................................................
1
A. Latar Belak an g Masalah .............................................................
1
B. Rum usan ....................................................................................
3
C. Tujuan Penelitian ........................................................................
3
D. Manfaat Penelitian ......................................................................
3
BAB II. LANDASAN TEO RI .......................................................................
5
A. Tinjauan Pustaka ........................................................................
5
BAB I.
1.
2.
Ro dam in B ...........................................................................
5
a.
Data kimia dan f isika ....................................................
5
b.
Bahaya ro dam in b terhadap k esehatan .........................
6
c.
Mekanisme toksisitas ro dam in b terhadap sel h ati .......
7
Str uktur Hati ........................................................................
8
a.
Str ukt ur m akroskopis hati ............................................
8
b.
Str ukt ur m ikro skopis hati .............................................
9
B. Kerangk a Penel itian ................................................................... 14 C. Hipotesis ..................................................................................... 14 BAB III. METO DE PENELITIAN ............................................................... 15 A. Jeni s Penelitian ........................................................................... 15 B. Lokasi Penelitian ........................................................................ 15 C. Subjek Penelitian ........................................................................ 15 D. Teknik Sam pling ........................................................................ 16 E. Ran can gan Penelitian ................................................................. 16 F. Identifik asi Variabel Penelitian .................................................. 17 G. Definisi Op era sional Variabel Penelitian ................................... 17
vii
H. Instrum en dan Bah an Penelitian ................................................. 19 I.
Car a Kerja ................................................................................... 20
J.
Anal isis Data .............................................................................. 24
BAB IV. HASIL PENELITIAN ..................................................................... 25 A. Data Hasil Penelitian .................................................................. 25 B. Anal isis Data .............................................................................. 29 1.
Uji Distribusi Normal .......................................................... 29
2.
Uji One Way Anova ............................................................. 30
3.
Uji LSD ............................................................................... 31
BAB V. PEMBAHASAN ............................................................................... 32 BAB VI. SIMPU LAN DAN SARAN .............................................................. 39 A. Simpulan ..................................................................................... 39 B. Saran ........................................................................................... 39 DAFTAR PUS TAKA ....................................................................................... 41 LAMPIRAN ...................................................................................................... 44
viii
DAFTAR TABEL Tabel 1.
Distribusi jum lah inti sel hati norm al dan yang mengalami kerusak an (pikno sis, karorek sis, dan kariolisis) dari 100 sel pada tiap preparat kelompok kontrol ....................................................... 26
Tabel 2.
Distribusi jum lah inti sel hati norm al dan yang mengalami kerusak an (pikno sis, karorek sis, dan kariolisis) dari 100 sel pada tiap preparat kelompok perlak uan I ................................................. 27
Tabel 3.
Distribusi jum lah inti sel hati norm al dan yang mengalami kerusak an (pikno sis, karorek sis, dan kariolisis) dari 100 sel pada tiap preparat kelompok perlak uan II ............................................... 27
Tabel 4.
Distribusi jum lah inti sel hati norm al dan yang mengalami kerusak an (pikno sis, karorek sis, dan kariolisis) dari 100 sel pada tiap preparat kelompok perlak uan III …........................................... 28
Tabel 5.
Ran gk uman hasil uji distribusi norm al j um lah kematian sel keempat kelompok sampel .............................................................. 30
Tabel 6.
Ran gk uman hasil ana lisa uji one way Anova jumlah kematian sel hati keempat kelompok sampel ....................................................... 30
Tabel 7.
Ran gk uman hasil uji LSD jumlah kematian sel hat i keem pat kelom pok sam pel ............................................................................. 31
Tabel 8.
Hasil uji distibusi normal jum lah kematian sel ............................... 48
Tabel 9.
Hasil uji homogenitas
jumlah kem atian sel hati
keem pat
kelom pok sam pel ............................................................................. 48 Tabel 10. Hasil uji one wa y Anova jum lah kematian sel hati keem pat kelom pok sam pel ............................................................................. 48 Tabel 11. Hasil uji LSD jum lah kem atian sel hati keem pat kelom pok sam pel .............................................................................................. 49 Tabel 12. Konver si dosis m anusia dan hewan ................................................ 50 Tabel 13. Vol um e m aksimal bahan uji pada pemberian secara oral ............... 51
ix
DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Diagr am
rerata j umlah kem atian sel pada masing-masing
kelom pok sampel .......................................................................... 29 Gambar 2. Gambaran histologis sel hati norm al dan yang m engalam i kerusakan pada zona I h ati kelompok kontrol ................................................ 44 Gambar 3. Gambaran histologis sel hati norm al dan yang m engalam i kerusakan pada zona I h ati kelompok perlakuan I ......................................... 45 Gambar 4. Gambaran histologis sel hati norm al dan yang m engalam i kerusakan pada zona I h ati kelompok perlakuan II ........................................ 46 Gambar 5. Gambaran histologis sel hati norm al dan yang m engalam i kerusakan pada zona I h ati kelompok perlakuan III ...................................... 47
x
DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Fot o gam baran histologis hasil penelitian dari hati mencit masing-masin g kelom pok sam pel .............................................. 44 Lampiran 2. Hasil p engolah an data penelitian ................................................ 48 Lampiran 3. Perhitun gan do sis pem berian ...................................................... 50
xi
PENG ESAH AN SKRIPSI Skri psi dengan ju dul: Pe ngaruh Pemberian Rodam in B te rhadap Struktur Histologis Sel Hati Mencit Albertus Sept ian Rahardi, NIM: G0004036, Tahun: 2010 Fakultas Kedokt eran Universitas Sebelas Maret Pada Hari Kamis, Tanggal 4 Februari 2010 Pembimbing Utama Nam a
: Muthmainah, dr., MKes.
NIP
: 196607021998022001
.....................................................
Pembimbing Pendam ping Nam a
: Kusmadewi Eka Damayant i, dr.
NIP
: 198305092008012005
.....................................................
Penguji Utam a Nam a
: S.B. Widjokongko, dr., PHK., MPd.
NIP
: 194812311976091001
.....................................................
Anggota Penguji Nam a
: Arif Suryawan, dr.
NIP
: 195803271986011001
.....................................................
Surakarta, ... Februari 2010 Ketua Tim Skripsi
Dekan FK UNS
Sri W ahjono, dr., Mkes.
Prof. Dr. A.A. Subijant o, dr., MS.
NIP: 194508241973101001
NIP: 194811071973101003
1
BAB I PENDAH ULUAN
A.
Latar Belakang Zat pewarna m akanan alami sejak dulu telah dikenal dalam industri makanan untuk meningkatkan daya tarik produk makanan tersebut, sehingga konsum en tergugah untuk m em belinya. Namun sudah sejak lama pula terjadi penyalahgunaan pewarna buatan yang tidak diizinkan untuk digunakan sebagai zat pewarna makanan. Sebagai salah satu contohnya adalah penggunaan bahan pewarna rodamin b, yaitu zat pewarna yang lazim digunakan dalam industri tekstil, nam un berbahaya bila digunakan sebagai pewarna makanan (Depkes RI, 2006). Rodamin b berbahaya bagi kesehat an. Pada paparan akut dapat m enyebabkan iritasi hingga kerusakan m ata, gangguan saluran pernapasan, iritasi kulit, nyeri dada, nyeri tenggorok, sakit kepala, dan m ual-mual (Dire dan
Wilkinson,
1987).
Unt uk
paparan jangka panjang, ditem ukan
peningkat an kejadian tumor pada berbagai organ (Kremer, 2004). Hingga sekarang diperkirakan m asih terdapat penyalahgunaan rodam in b. Pada tahun 2008 lalu, ditemukan penyalahgunaan rodam in b terutama pada minum an ketika diadakan inspeksi mendadak oleh Dinas Kesehatan
di
pasar-pasar
tradisional
di
Mojokerto
(Julan,
2008).
Sebelumnya pada tahun 2004, ditem ukan 67% cabe merah giling yang m engandung
rodam in
b di pasar-pasar tradisional di DKI
1
Jakarta
2
(Djarism awati et al., 2004). Pada penelitian sebelumnya lagi, pada tahun 2003,
telah diadakan suatu penelitian di Kabupaten Bandung, dan
ditem ukan rodamin b pada berbagai jenis kerupuk, jeli/agar-agar, aromanis, dan m inuman dalam kadar antara 7.841-3.226,55 ppm (Trestiati, 2003). Hati merupakan salah satu organ penting. Semua zat m akanan yang diserap akan melalui hati sebelum diedarkan ke seluruh tubuh. Dalam hati zat makanan akan mengalami metabolisme, dem ikian pula dengan zatzat lain akan mengalami tahap metabolism e, bahkan beberapa zat akan m engalami netralisasi dan detoksikasi dalam organ ini (Guyton dan Hall, 1997). Rodamin b merupakan salah satu zat yang dimetabolisme di hati (Webb et al., 1961). Rodamin b yang masuk ke dalam saluran cerna akan diserap oleh dinding usus halus (Damge et al., 1996). Kemudian didistribusikan ke dalam
hati
m etabolisme
untuk rodamin
dim etabolisme b tidaklah
m elalui
proses
deetilasi.
Proses
sem purna, proses metabolism enya
m enyisakan 3,6-diaminofluoran yang akan terakumulasi dalam hati (W ebb dan Hansen, 1961). Metabolit tersebut akan m enyebabkan perubahan aktivitas
m etabolisme
sel-sel
hati, antara lain perubahan aktivitas
m etabolisme glikosaminoglikan (Robert et al., 2006) dan ATP (Loo dan Clarke, 2002), sehingga jika terus berlanjut akan terjadi ketidakseimbangan dalam sel yang mengakibatkan cedera dan bahkan sampai pada kem atian sel hati.
2
3
Berdasarkan
hal tersebut
di atas, peneliti tertarik untuk
m elakukan penelitian apakah pemberian rodam in b dapat m enimbulkan perubahan strukt ur histologis sel hati pada mencit. B.
Rumusan Masalah 1.
Apakah pemberian rodam in b dapat menimbulkan perubahan struktur histologis sel hati pada mencit?
2.
Apakah jum lah kematian sel hati pada mencit sebanding dengan besar dosis rodam in b yang diberikan?
C.
Tujuan Penelitian Tujuan penelitian ini adalah: 1.
Untuk mem buktikan bahwa pemberian rodamin b dapat m enimbulkan perubahan strukt ur histologis sel hati pada m encit.
2.
Untuk membuktikan bahwa jum lah kematian sel hati pada mencit sebanding dengan besar dosis rodamin b yang diberikan.
D.
Manfaat Penelitian 1.
Manfaat Empiris Pengetahuan Diharapkan supaya hasil penelitian ini dapat mem berikan informasi ilmiah mengenai pengaruh pemberian rodamin b terhadap struktur histologis sel hati mencit.
2.
Manfaat Aplikatif Diharapkan supaya hasil penelitian ini dapat mem berikan informasi ilmiah kepada masyarakat tentang bahaya rodamin b terhadap kesehatan, sehingga masyarakat tidak m enyalahgunakan
3
4
rodam in b sebagai bahan pewarna unt uk m akanan dan tidak mengkonsumsi m akanan yang mengandung rodamin b.
4
5
BAB II LANDASAN TEO RI
A.
Tinjauan Pustaka 1.
Rodamin B Rodamin b adalah salah satu bahan kimia yang digunakan sebagai pewarna dasar unt uk berbagai kegunaan (Djarismawati et al., 2004). Rodam in b wajarnya digunakan sebagai zat pewarna untuk kertas, tekstil (sutra, wool, dan kapas), sabun, kayu dan kulit, sebagai reagensia di laboratorium, serta untuk pewarnaan biologis (Direkt orat POM, 2006). Rodamin b juga merupakan salah satu zat warna yang dilarang
digunakan
unt uk
m akanan,
sesuai
dengan
peraturan
perundang-undangan yang berlaku, yaitu Peraturan Menteri Kesehatan Republik
Indonesia Nom or: 239/Menkes/Per/V/1985
tentang Zat
Warna tertentu yang Dinyatakan sebagai Bahan Berbahaya. Pelarangan tersebut
terkait
dengan
dampaknya
yang
merugikan
kesehatan
(Direktorat POM, 2006). Namun demikian, dalam masyarakat m asih dijum pai penyalahgunaan zat pewarna ini pada m akanan (Julan, 2008). a.
Data kimia dan fi sik a IUPAC
: N-[9-(2-karboksifenil)-6-(dietilamino)-3Hxanthen-3-yliden]-N-etiletanam inium klorida
5
6
Sebutan lain
: Tetraetil-3,6-diaminofluoran (Webb et al., 1961), tetraetil-rodamin, reonin B (Depkes RI, 2006), safranilin (Kremer, 2004)
Rumus molekul : C29H31 ClN2O3 Rumus bangun
:
Titik lebur
: 1650 C
Kelarutan
: Sangat larut dalam air dan alkohol, lemah dalam asam klorida dan natrium hidroksida
Tampilan
: Kristal hijau atau bubuk ungu kemerahan
Fluoresensi UV : Maksimal 546 nm (OSHA, 1989) b.
Bahaya rodamin b terhadap kesehatan Rodamin b berbahaya bagi kesehatan. Pada paparan akut dapat menyebabkan iritasi hingga kerusakan mata, gangguan saluran pernapasan, iritasi kulit, nyeri dada, nyeri tenggorok, sakit kepala, dan mual-m ual (Dire dan Wilkinson, 1987). Pada uji toksisitasnya ditemukan LDLo per oral 500 mg/kgBB tikus dan LD50 per oral 887 mg/kgBB mencit (EMD Chem. Inc., 2007). Untuk paparan jangka panjang, ditemukan peningkatan kejadian tumor pada berbagai organ (Kremer, 2004).
6
7
c.
Mekanism e toksi sitas rodamin b terhadap sel hati Rodam in b yang masuk ke dalam saluran cerna akan diserap oleh dinding usus halus (Damge et al., 1996). Oleh vena usus, rodam in b didistribusikan ke dalam hat i untuk dimetabolisme melalui proses deetilasi. Proses metabolisme rodamin b tidaklah sem purna, pada proses deetilasi terjadi pelepasan m onoetil dari rodamin b dan menyisakan 3,6-diam inofluoran. Senyawa 3,6diam inofluoran merupakan senyawa yang tidak dapat diuraikan dan akan terakumulasi dalam hati (W ebb dan Hansen, 1961). Senyawa tersebut akan menyebabkan perubahan aktivitas m etabolisme selsel hati, antara lain perubahan m etabolisme glikosaminoglikan (Kaji et al., 1991; Robert et al., 2006) dan ATP (Loo dan Clarke, 2002). Senyawa
3,6-diaminofluoran
glikosaminoglikan
dengan
menghambat
menghambat
proses
produksi
pemanjangan
(elongasi) gugus rant ainya (Robert et al., 2006), sedangkan pelepasan glikosam inoglikan tidak m engalami perubahan (Kaji et al., 1991). Selain itu, senyawa tersebut juga meningkatkan aktivitas ATP-ase sedemikian
hingga meningkatkan
pemecahan ATP
menjadi ADP dan monofosfat. Pada kondisi yang berlebihan akibat akumulasi
senyawa
tersebut,
pem ecahan
ATP
lebih
cepat
dibandingkan penyusunannya (Loo dan Clarke, 2002). Kedua kejadian tersebut
akan
m enyebabkan
7
gangguan keseimbangan
8
energi
sedem ikian
hingga menyebabkan
cedera dan bahkan
kem atian sel. Perubahan strukt ur hati oleh karena rodam in b terutam a terjadi pada zona 1, karena m erupakan zona yang paling dekat dengan pem buluh darah (Braakman et al., 1987). 2.
Struktur H ati a.
Struktur makroskopis hati Hati adalah kelenjar terbesar di dalam tubuh, berat rataratanya sekitar 1500 gram, atau 2,5% berat badan pada orang dewasa normal. Hati merupakan organ plastis lunak yang tercetak oleh strukt ur sekitarnya. Permukaan superior adalah cembung dan terletak dibawah kubah kanan diafragm a dan sebagian kubah kiri. Permukaan posterior hati berbentuk cekung dan terdapat celah transversal sepanjang 5 cm dari sistem porta hepatis (Price dan Wilson, 1997). Hati m em iliki dua lobus utama, kanan dan kiri. Lobus kanan dibagi menjadi segmen anterior dan posterior oleh fisura segment alis kanan yang tidak terlihat dari luar. Lobus kiri dibagi menjadi segmen medial dan lateral oleh ligament um falsiforme yang dapat dilihat dari luar. Tiap lobus hat i terbagi menjadi struktur-struktur
yang dinamakan lobulus, yang merupakan unit
mikroskopis dan fungsional organ (Price dan Wilson, 1997).
8
9
b. Struktur mikroskopis hati 1) Lobulus hati Secara histologis hati tersusun atas lobulus-lobulus. Lobulus hat i m erupakan suatu unit fungsional yang terbagi atas tiga zona, yaitu: a) Zona 1 : zona aktif, sel-selnya paling dekat dengan pem buluh
darah,
akibatnya zona ini yang
pertam a kali dipengaruhi oleh pem buluh darah yang m asuk. b) Zona 2 : zona intermedia, sel-selnya m emberi respons kedua terhadap darah. c) Zona 3 : zona pasif,
akt ifitas sel-selnya rendah dan
tampak akt if bila kebutuhan m eningkat. Lobulus hati membentuk m asa poligonal prismatis jaringan hepar dengan ukuran sekitar 0,7×2 m m (Junqueira dan Carneiro, 1995). 2) Parenkim hati Parenkim rangkaian
atau
sel-sel
lem peng-lempeng,
hati
atau
tersusun
dalam
lem baran-lembaran
bercabang-cabang dan beranastomosis m em bent uk labirin dan di ant aranya terdapat sinusoid. Lempeng-lem peng ini secara radial bermula dari tepi lobulus menuju ke vena sent ralis sebagai pusatnya. Sel hat i berbentuk poligonal dengan enam
9
10
atau lebih permukaan, berukuran sekitar 20-35 µm . Inti bulat atau lonjong dengan perm ukaan teratur dan besarnya bervariasi dari sel satu dengan lainnya. Masing-masing int i berbentuk vesikuler dengan granula kromatin tam pak jelas dan tersebar dengan satu atau lebih anak inti (Leeson dkk, 1996). 3) Sinusoid hati Sinusoid merupakan suatu pembuluh yang melebar tidak teratur dan hanya terdiri dari satu lapisan sel endot el yang tidak kontinu. Sinusoid kapiler hati mem punyai pembatas yang tidak sem purna dan mem ungkinkan pengaliran makromolekul dengan m udah dari lum en ke sel-sel hepar dan sebaliknya. Sinusoid dikelilingi dan disokong oleh serabut retikuler halus yang pent ing unt uk mempertahankan bentuknya (Junqueira dan Carneiro, 1995) 4) Kanalikuli biliaris Kanalikuli biliaris berbentuk jala-jala tiga dimensi di ant ara sel-sel hati. Dinding kanalikuli terdiri atas sel-sel parenkim yang berdampingan. Pada bagian perifer lobulus, selsel parenkim yang m embentuk dinding kanalikuli biliaris secara bertahap diganti dengan sel kecil jernih dengan int i gelap dan organel-organel yang tak sem purna. Sel-sel ini yaitu sel duktulus, yang terletak diatas lam ina basal yang jelas (Leeson dkk, 1996).
10
11
5) Mikroskopis kerusakan hati Terdapat banyak cara suatu sel dapat mengalam i cedera atau m ati, tetapi m odalitas yang pent ing dari cedera cenderung dibagi menjadi beberapa kategori, yaitu: hipoksia, agen fisika, agen kimia, agen biologi, m ekanisme imun, defek genetika, malnutrisi dan proses ketuaan (Robbins dan Kumar, 1995a). Rodamin b merupakan salah satu agen kimia yang dapat menyebabkan cedera pada sel. Kematian sel dan kem atian jaringan pada tubuh yang hidup dapat dibagi menjadi dua, yaitu nekrosis dan apoptosis
dimana
keduanya
berbeda
dalam
ukuran
sel,
int regitas mem bran plasma dan perubahan pada isi sel (Kumar et al., 2004). Nekrosis merupakan perubahan m orfologi sel sebagai akibat tindakan degenerasi progresif oleh enzim-enzim pada sel yang terjejas lethal. Sel yang m engalami nekrosis ukuran
selnya
biasanya
membesar,
sering
tidak
bisa
mempertahankan integritas m em brannya dan komponen dalam sel tersebut m engalami penghancuran oleh enzim dan sering keluar dari sel yang mengalami nekrosis. Sedangkan apoptosis dapat diartikan sebagai proses kematian sel yang diinduksi melalui program kematian sel, hal ini akan m engaktifkan enzim yang dapat menyebabkan kem atian sel yang sudah terprogram sebelumnya. Sel yang m engalam i proses apoptosis
11
12
selnya mengecil, intregritas mem brannya tetap hanya berubah pada strukt ur orientasi lem aknya dan komponen dalam sel tersebut tetap berada dalam sel atau dilepaskan ke badan apoptosis (Kumar et al., 2007). Hati merupakan organ tubuh yang paling sering menerima jejas (Robbins dan Kumar, 1995b). Um um nya perubahan–perubahan lisis yang terjadi pada sel nekrotik dapat terjadi pada semua bagian sel. Tetapi perubahan pada int i sel adalah petunjuk paling jelas pada kem atian sel. Biasanya sel yang telah m ati intinya menyusut, batasnya tidak teratur dan berwarna gelap, proses ini dinamakan piknosis dan int inya disebut piknot ik. Kemungkinan lain, inti dapat hancur dan meninggalkan pecahan-pecahan zat kromatin yang tersebar di dalam sel, proses ini disebut karioreksis. Pada beberapa keadaan inti sel yang mati kehilangan kem am puan untuk diwarnai dan m enghilang begitu saja, proses ini disebut kariolisis (Price dan Wilson, 1997). Pada nekrosis hati juga ditemukan fragmen sel atau sel hati nekrotik tanpa pulasan inti, kolaps dan bendungan rangka hati dengan eritrosit. Nekrosis itu dapat m engenai satu atau beberapa lobulus dengan pulau jaringan hati normal di dalamnya. Pada permulaan nekrosis terjadi proliferasi sel kupffer yang melakukan fagositosis tercam pur dengan eritrosit
12
13
di dalam dan di luar sinusoid, serta menem pati ruangan lebih banyak daripada lapisan hati yang masih utuh. Pada tingkat yang lebih lanjut sel darah dan eksudat yang berlebihan hilang sehingga lobulus menjadi kecil (ghost lobule) yang m asih dibatasi oleh vena hepat ika dan susunan portal yang saling berdekatan. W alaupun sinusoid sering melebar namun vena sent ralis relatif tidak m elebar sehingga susunan portal dapat dibedakan
dari
yang
kolaps,
karena
lebih
padat
dan
mengandung infiltrasi sel radang. Nekrosis hati seringkali menyebabkan hilangnya sel-sel parenkim hat i (Darmawan, 1998). Nekrosis biasanya m erupakan kerusakan akut, jadi merupakan m anifestasi toksik yang berbahaya tetapi tidak selalu kritis. Sel hat i akan mengadakan regenerasi untuk mengembalikan
fungsi
normalnya
setelah terjadi cedera
hepatik (O’Connor, 2002) karena hati m empunyai kapasitas regenerasi yang luar biasa (Wenas, 1999). Pada percobaan telah dibuktikan bahwa dengan pengambilan 80-90% parenkim hati sudah cukup unt uk mempertahankan fungsi normalnya, sehingga
kerusakan
hati
haruslah
luas
sekali
untuk
menimbulkan gejala klinik m anifestasi hati (Robbins dan Kumar, 1995b).
13
14
B.
Kerangka Pem ikiran Rodam in b
m asuk ke
Lambung
Usus halus
dia bsor bsi oleh
Dinding usus
diba wa oleh
V. mesenterika ma suk ke dalam proses dalam sel
Hati
Metabolisme (deetilasi)
terurai m enj adi
3,6-diam inofluoran
seny awa y ang tidak dapa t diuraikan lagi
m onoetil
Gangguan keseimbangan energi
akibat pe mbe rian be rulang
Akumulasi Pemecahan ATP ↑ Penyusunan ATP tetap Sintesis m enurun Sekresi tetap
pe rubahan y ang terj adi
Peningkat an aktivitas ATPase
Pengham batan sintesa glikosaminoglikan
Cedera sel Inti piknotik Kem atian sel
Int i kariorektik Inti kariolitik
C.
H ipotesis 1.
Pem berian rodamin b dapat m enimbulkan kerusakan strukt ur histologis sel hati ditandai dengan perubahan inti sel hati (piknosis, karioreksis, dan kariolisis).
2.
Jum lah kem atian sel hati sebanding dengan besarnya dosis rodam in b yang diberikan.
14
15
BAB III METO DE PENELITIAN
A.
Je nis Penelitian Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorik (biom edik) (Taufiqqurohman, 2004).
B.
Lokasi Penelitian Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Histologi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.
C.
Subyek Penelitian Populasi subyek penelitian ini adalah m encit (Mus m usculus) jantan, galur Swiss webster, berum ur 3 bulan dengan berat badan sekitar 20 gram . Sampel sebanyak 28 ekor mencit dibagi menjadi em pat kelom pok, m asing-m asing kelompok terdiri dari tujuh ekor m encit. Jum lah ini diperhitungkan
menurut
rum us
Federer
yaitu (k-1)(n-1)>15, dengan
k=jum lah kelom pok, n=jumlah m encit untuk tiap kelompok (Alfiansyah, 2008). Kelompok kontrol adalah m encit yang diberi diet standar dan aquades, kelompok perlakuan I adalah kelom pok m encit yang diberi diet standar dan rodamin b dosis I, kelompok perlakuan II adalah kelom pok m encit yang diberi diet standar dan rodam in b dosis II, kelompok perlakuan III adalah kelom pok mencit yang diberi diet standar dan rodamin b dosis III.
15
16
D.
Tekni k Sam pling Pengam bilan sampel dilakukan secara incidental sampling. (T aufiqqurohman, 2004).
E.
Rancangan Penelitian Rancangan penelitian ini adalah post-test only control group design. (Taufiqqurohman, 2004).
X
KK
: (X0)
Oo
KP I
: (X1)
O1
KP II : (X2)
O2
KP III : (X3)
O3
Bandingkan dengan uji statistik
Keterangan: X
: Sampel penelitian
KK
: Kelom pok kontrol
KP I
: Kelom pok perlakuan I
KP II : Kelom pok perlakuan II KP III : Kelom pok perlakuan III (X0)
: Pemberian diet standar dan aquades
(X1)
: Pemberian diet standar dan rodamin b dosis I
(X2)
: Pemberian diet standar dan rodamin b dosis II
(X3)
: Pemberian diet standar dan rodamin b dosis III
O0
: Pengamatan jum lah inti sel hati piknotik, kariorekt ik, dan kariolitik pada kelom pok kontrol
O1
: Pengamatan jum lah inti sel hati piknotik, kariorekt ik, dan kariolitik pada kelom pok perlakuan I 16
17
O2
: Pengamatan jum lah inti sel hati piknotik, kariorekt ik, dan kariolitik pada kelom pok perlakuan II
O3
: Pengamatan jum lah inti sel hati piknotik, kariorekt ik, dan kariolitik pada kelom pok perlakuan III
F.
Identifi kasi Variabel Penelitian 1.
Variabel bebas adalah pem berian rodamin b dengan dosis tertent u.
2.
Variabel terikat adalah struktur histologis sel hati.
3.
Variabel luar yang dapat dikendalikan adalah gizi, makanan dan minuman, galur, um ur, dan jenis kelam in hewan coba.
4.
Variabel luar yang tidak dapat dikendalikan adalah kondisi psikologis dan sistem kekebalan tubuh hewan coba, dan keadaan awal hati mencit.
G.
Definisi O perasional Vari abel Penelitian 1.
Variabel bebas: pemberian rodamin b Yang
dim aksud
dengan
pemberian
rodamin
b
pada
penelitian ini adalah pemberian larutan rodamin dengan dosis tertentu. Dosis yang digunakan ditentukan dari dosis m aksimal yang dihitung berdasarkan Lethal Dose Low (LDLo), yaitu dosis terendah yang dapat menyebabkan kem atian pada hewan uji, unt uk menghindari kematian mencit sebelum tahap term inasi hewan uji. Perhitungan dosis maksimal didasarkan pada LDLo per oral 500 mg/kgBB tikus (EMD, 2007), dengan perhitungan konversi dari tikus 200 g ke mencit 20 g (fakt or konversi sebesar 0,14) (Ngatidjan, 1991) diperoleh LDLo per oral 14 m g/20 gBB m encit. Dosis m aksimal
17
18
ditentukan sebagai dosis III, dosis II ditentukan setengah dari dosis III, dan dosis I ditentukan setengah dari dosis II. Dosis I yaitu 3,5 mg/20 gBB m encit diberikan pada kelompok perlakuan I, dosis II yaitu 7 mg/20 gBB m encit diberikan pada kelom pok perlakuan II, dan dosis III yaitu 14 mg/20 gBB mencit diberikan pada kelompok perlakuan III. Larutan rodamin b diberikan secara per oral dengan sonde lambung setiap 24 jam selama 7 hari berturut-turut. Skala variabel ini adalah ordinal. 2.
Variabel terikat: struktur histologis sel hati Yang dimaksud dengan struktur histologis sel hati pada penelitian ini adalah perubahan struktur sel hati setelah pemberian rodamin b. Perubahan struktur histologis sel hati dinilai dengan cara menghitung jumlah sel hati yang intinya piknosis, karioreksis, dan kariolisis dari tiap 100 sel hati di zona 1 lobulus hati tiap preparat yang diwarnai HE, dan diam ati dengan mikroskop cahaya dengan perbesaran 400 kali. Inti piknotik ditandai dengan adanya inti sel yang tampak mengecil dan hiperkromatik. Int i kariorekt ik ditandai dengan adanya inti sel yang robek dan terbagi-bagi atas fragmen-fragmen. Int i kariolitik ditandai dengan adanya inti sel yang tidak lagi mengambil zat warna, tam pak pucat, dan tidak nyata. Skala pengukuran ini adalah rasio.
18
19
3.
Variabel luar yang dapat dikendalikan Variabel luar yang berupa faktor gizi, makanan dan minuman, galur, umur, dan jenis kelamin hewan coba dibuat seragam , sebagai berikut: a.
Gizi yang diketahui dari berat badan mencit yaitu sekitar 20 gram.
b.
Makanan dan minum an yaitu dengan mem beri m akan pelet dan minum air yang tidak terbatas.
4.
c.
Galur hewan coba yaitu m encit Swiss webster.
d.
Um ur dan jenis kelam in yaitu mencit jant an umur 2-3 bulan.
Variabel luar yang tidak dapat dikendalikan a.
Kondisi psikologis dapat dipengaruhi oleh lingkungan sekitar, pem berian perlakuan yang berulang kali, dan perkelahian antar hewan coba.
b.
Sistem
kekebalan
tubuh
masing-masing
hewan
coba
dapat
bervariasi c.
Keadaan awal hati mencit pada penelitian ini tidak dapat dikendalikan,
karena
peneliti
tidak
mungkin
melakukan
pem eriksaan strukt ur histologis hati m encit sebelum perlakuan. H.
Instrum en dan Bahan Penelitian 1.
Instrum en Penelitian a.
Kandang hewan percobaan
b.
Timbangan hewan
c.
Timbangan obat elektrik
19
20
d.
Sonde lambung
e.
Alat bedah hewan percobaan (skalpel, pinset, gunting, jarum, meja lilin)
2.
I.
f.
Alat untuk pem buatan preparat histologi
g.
Mikroskop cahaya, Olympus CX21
h.
Gelas ukur dan pengaduk
i.
Kam era digital, Canon IXUS-95IS
Bahan Penelitian a.
Rodamin b (serbuk)
b.
Makanan hewan percobaan (pelet)
c.
Air/aquades
d.
Bahan untuk m em buat preparat histologi pengecatan HE
C ara Kerja 1.
Tahap persiapan penelitian. a.
Sam pel m encit 28 ekor dibagi menjadi em pat kelom pok secara random , m asing-m asing kelompok 7 ekor.
b.
Mencit dibiarkan beradaptasi dengan lingkungan Laboratorium Histologi Fakultas Kedokt eran UNS selama 7 hari.
c.
Satu
hari
setelah
adaptasi
dilakukan
penim bangan
untuk
menent ukan dosis dan mulai dilakukan perlakuan. d.
Rodamin b dalam bent uk serbuk dalam dosis tertent u untuk masing-masing kelom pok tersebut sebelum nya dilarutkan dengan
20
21
aquades sedem ikian
hingga siap digunakan
unt uk pemberian
perlakuan. 2.
Tahap pemberian perlakuan hewan uji. a.
Sebelum perlakuan mencit dipuasakan selam a lebih kurang 3 jam , agar lambung mencit dalam keadaan kosong.
b.
Larutan diberikan dengan m enggunakan sonde lambung. Volume larutan yang diberikan untuk tiap m encit adalah 0,2 ml, hal ini sesuai kapasitas maksim al lambung m encit 20 g yaitu 1 m l (Ngatidjan, 1991). 1) Kelom pok kontrol diberi 0,2 ml aquades. 2) Kelom pok perlakuan I diberi 0,2 ml larutan rodam in b dosis I, yaitu 3,5 mg rodamin b dalam 0,2 ml aquades/20 gBB mencit per oral per hari. 3) Kelom pok perlakuan II diberi 0,2 ml larutan rodamin b dosis II, yaitu 7 mg rodam in b dalam 0,2 ml aquades/20 gBB mencit per oral per hari. 4) Kelom pok perlakuan III diberi 0,2 ml larutan rodamin b dosis III, yaitu 14 mg rodam in b dalam 0,2 ml aquades/20 gBB mencit per oral per hari.
c.
Pemberian perlakuan dilakukan setiap hari per 24 jam selam a 7 hari berturut-turut. Lam anya pem berian perlakuan pada penelitian ini didasarkan pada pernyataan bahwa uji toksisitas akut dilaksanakan setidaknya selama 7 hari (Taufiqqurohman, 2004).
21
22
Unt uk pem eliharaan, mencit diberi diet standar sejak awal tahap persiapan penelitian hingga akhir tahap pemberian perlakuan hewan uji. 3.
Tahap term inasi hewan uji dan pembuatan preparat histologi. a.
Sem ua mencit dikorbankan satu hari setelah perlakuan selesai dengan cara neck dislocation.
b.
Lobus hati kanan diambil untuk pem buatan preparat histologi dengan pengecatan HE. Pengambilan lobus hati bagian kanan bertujuan untuk penyeragaman sam pel dan irisan unt uk preparat dilakukan dibagian tengah dari lobus tersebut dengan tebal irisan + 5 µm. Tiap hewan percobaan dibuat 3 preparat.
4.
Tahap pengamatan preparat histologis. a.
Dipilih satu preparat dari tiap hewan percobaan untuk dievaluasi intinya. Dua sisanya digunakan sebagai cadangan apabila preparat yang
akan
dievaluasi
intinya
mengalami
kerusakan
pada
pem buatannya sehingga preparat tersebut tidak dapat dievaluasi. b.
Pengam atan preparat jaringan hati dengan perbesaran 100 kali untuk m engam ati seluruh bagian dari preparat.
c.
Kem udian dengan perbesaran 400 kali ditent ukan 1 zona aktif yang terlihat mengalami kerusakan paling berat.
d.
Dari 1 zona aktif
ini kem udian dihitung jum lah sel hati yang
intinya piknosis, karioreksis, dan kariolisis dari tiap 100 sel hati.
22
23
Secara umum, cara kerja penelitian ini adalah sebagai berikut: 28 ekor menci t
7 ekor
7 ekor
7 ek or
7 ekor
7 hari
P ro ses adaptasi
1 hari Penilaian status gizi
K elompok kontrol (K K)
K elompok perlak uan I (KP I)
K el ompok perl akuan II (KP II)
K el ompok perlakuan III (K P III)
P embuatan laru tan untuk perlakuan
7 hari Dip uasak an sebelum pemberian perlakuan
3 jam
0,2 ml aquad es
0,2 ml ro damin b dosi s I
0,2 ml ro damin b dosi s II
0,2 ml ro damin b dosis III
Pemberian dengan sonde lambung Tiap hari per 24 jam
P embed ahan
P embed ahan
P embed ahan
Pembedahan
Terminasi dengan neck dislocation P embuat an prep arat histo logis hati pewarn aan HE
Lobus kanan
Lobus k anan
Lobus k anan
Lobus k anan
Preparat
P rep arat histolo gis KP I
P reparat his tolo gis KP II
P reparat his tologis K P III
histolo gis KK
P en gamatan dengan mikroskop cahaya perbes aran 400× per 100 sel hati
Data KK
D ata K P I
D at a KP II
23
D at a KP III
Pen gambilan data
24
J.
Analisis Data Data
yang
diperoleh
dianalisis
secara
statistik
dengan
m enggunakan uji statistik one way Anova untuk mengetahui adanya perbedaan rerata jum lah
sel hati yang mengalami kerusakan antara
kelom pok kontrol (KK), kelom pok perlakuan I (KP I), kelompok perlakuan II (KP II), dan kelompok perlakuan III (KP III). Jika terdapat perbedaan yang bermakna maka dilanjutkan dengan
uji Post Hoc unt uk mengetahui
letak perbedaan terdapat di antara kelompok yang mana. Derajat kem aknaan yang digunakan adalah α=0,01.
24
25
BAB IV HASIL PENELITIAN
A.
Data Hasil Penelitian Penelitian ini menggunakan 28 mencit (Mus m usculus) jantan galur Swiss webster berusia 3 bulan dengan berat badan sekitar 20 gram . Sebelum perlakuan, mencit-mencit tersebut dibagi menjadi em pat kelom pok secara acak, masing-masing 7 ekor m encit untuk setiap kelompoknya. Satu kelom pok sebagai kelompok kontrol, sedangkan ketiga kelompok lain sebagai kelompok perlakuan. Sem ua mencit diberi perlakuan selama satu m inggu yang kemudian dibedah untuk diam bil hatinya. Hati yang sudah diam bil dibuat preparat histologi dengan pewarnaan HE. Jumlah kematian sel hati pada preparat dihitung sebagai data hasil penelitian. Data hasil penelitian berupa data rasio, yaitu jum lah inti sel hati yang m engalam i kerusakan (piknosis, karioreksis, dan kariolisis) yang dihitung dari tiap 100 sel pada zona 1 unt uk setiap preparat. Hasil pengamatan inti sel hat i yang mengalam i kerusakan (piknosis, karioreksis, dan kariolisis) untuk masing-masing kelom pok sampel disajikan dalam tabel. Kelompok
pertam a adalah kelom pok kontrol, merupakan
kelom pok kontrol negatif. Mencit-mencit dalam kelompok ini adalah m encit-m encit
yang
diberi
aquades
sebagai
perlakuannya. Tabel 1
m enunjukkan bahwa pada kelompok kontrol, jum lah inti sel hati yang m asih
25
26
norm al adalah 652, jum lah inti sel hati yang m engalam i kerusakan adalah 48, dan rerata jumlah inti sel yang rusak adalah 6,86 ± 2,478 dari 100 sel hati. Tabel 1.
Distribusi jumlah inti sel hati normal dan sel hati rusak dari 100 sel pada tiap preparat kelom pok kontrol
Jumlah inti No.
Jum lah inti sel rusak Kariolitik Jum lah
Total
sel normal
Piknotik
Kariorektik
1.
95
5
-
-
5
100
2.
90
10
-
-
10
100
3.
90
6
-
4
10
100
4.
94
-
2
4
6
100
5.
95
4
1
-
5
100
6.
96
1
3
-
4
100
7.
92
-
-
8
8
100
∑
652
26
6
16
48
700
Rerata jumlah inti sel hati yang m engalam i kerusakan
:
6,86
Sim pangan baku
:
2,478
Sumber: Data primer, 2009 Kelompok
kedua
adalah
kelompok
perlakuan
I,
adalah
kelom pok m encit yang diberi rodamin b sebesar 3,5 m g setiap m encitnya selam a seminggu. Dari tabel 2 terlihat bahwa pada kelompok perlakuan I, jumlah inti sel hati yang m asih normal adalah 377, jumlah inti sel hati yang m engalami kerusakan adalah 323, dan rerata jumlah inti sel yang rusak adalah 46,14 ± 5,669 dari 100 sel hati.
26
27
Tabel 2.
Distribusi jumlah inti sel hati normal dan sel hati rusak dari 100 sel pada tiap preparat kelom pok perlakuan I
No.
Jum lah inti sel rusak
Jumlah inti
Kariolitik Jum lah
Total
sel normal
Piknotik
Kariorektik
1.
56
5
15
24
44
100
2.
45
4
14
37
55
100
3.
54
8
14
24
46
100
4.
63
11
10
16
37
100
5.
51
6
18
25
49
100
6.
57
11
17
15
43
100
7.
51
5
39
5
49
100
∑
377
50
127
146
323
700
Rerata jumlah inti sel hati yang m engalam i kerusakan
:
46,14
Sim pangan baku
:
5,669
Sumber: Data primer, 2009 Tabel 3.
Distribusi jumlah inti sel hati normal dan sel hati rusak dari 100 sel pada tiap preparat kelom pok perlakuan II
No.
Jum lah inti sel rusak
Jumlah inti
Kariolitik Jum lah
Total
sel normal
Piknotik
Kariorektik
1.
23
30
9
38
77
100
2.
27
29
8
36
73
100
3.
28
42
24
6
72
100
4.
13
13
19
55
87
100
5.
35
17
17
31
65
100
6.
27
15
9
49
73
100
7.
19
18
15
48
81
100
∑
172
164
101
263
528
700
Rerata jumlah inti sel hati yang m engalam i kerusakan
:
75,43
Sim pangan baku
:
7,068
Sumber: Data primer, 2009
27
28
Tabel 3 menunjukkan hasil perlakuan pada kelompok perlakuan II, yaitu kelom pok m encit yang diberi rodam in b sebesar 7 m g setiap m encitnya selam a seminggu. Jumlah inti sel hati yang m asih normal adalah 172, jum lah int i sel hat i yang mengalami kerusakan adalah 528, dan rerata jumlah inti sel yang rusak adalah 75,43 ± 7,068 dari 100 sel hati. Kelompok terakhir adalah kelompok perlakuan III, yaitu kelom pok m encit yang diberi rodamin b sebesar 14 m g setiap m encitnya selam a sem inggu. Dari tabel 4 dapat disimpulkan bahwa pada kelom pok perlakuan III, jumlah inti sel hati yang m asih normal adalah 96, jum lah int i sel hati yang m engalam i kerusakan adalah 604, dan rerata jum lah int i sel yang rusak adalah 86,29 ± 2,928 dari 100 sel hati. Tabel 4.
Distribusi jumlah inti sel hati normal dan sel hati rusak dari 100 sel pada tiap preparat kelom pok perlakuan III
No.
Jumlah inti
Jum lah inti sel rusak
Total
sel normal
Piknotik
Kariorektik
Kariolitik Jum lah
1.
14
4
35
47
86
100
2.
18
6
20
56
82
100
3.
15
3
29
53
85
100
4.
11
18
25
46
89
100
5.
15
10
16
59
85
100
6.
14
8
16
62
86
100
7.
9
9
19
63
91
100
∑
96
58
160
386
604
700
Rerata jumlah inti sel hati yang m engalam i kerusakan
:
86,29
Sim pangan baku
:
2,928
Sumber: Data primer, 2009
28
29
Dari
data
hasil
penelitian,
dapat
dibuat
grafik
yang
menggambarkan rerata kematian sel pada masing-masing kelompok sampel,
Rerat a jumlah kematian sel
seperti yang terdapat dalam gambar 1.
90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
86.29 75.43 Kelompok kontrol 46. 14
Kelompok perlakuan I Kelompok perlakuan II Kelompok perlakuan III
6.86 Kelompok sampel
Gambar 1. Diagram rerata jumlah kematian sel pada masing-m asing kelompok sampel B.
Analisis Data 1.
Uji Distribusi Norm al Uji Anova dilakukan untuk menget ahui adanya perbedaan yang bermakna antar kelompok sampel. Persyaratan uji Anova adalah adanya distribusi data yang normal. Dari data jumlah kematian sel hati masing-m asing kelompok sampel mula-m ula dilakukan uji distribusi normal dengan menggunakan uji Shapiro-Wilk karena jumlah sampel kurang dari 50 sampel. Hasil uji distribusi norm al Shapiro-Wilk dapat dilihat pada tabel 5. Dari masing-m asing kelompok sampel didapatkan nilai kemaknaan p>0,05 yang berart i setiap kelompok sampel memiliki distribusi data normal.
29
30
Tabel 5.
Rangkuman hasil uji distribusi normal jumlah kematian sel keempat kelom pok Statistik
df
p
Kelom pok kontrol
0,874
7
0,203
Kelom pok perlakuan I
0,979
7
0,954
Kelom pok perlakuan II
0,964
7
0,854
Kelom pok perlakuan III
0,942
7
0,659
Sum ber: Hasil uji distribusi normal data penelitian, 2010 (Lampiran 2) 2.
Uji One Way Anova Dari keem pat data primer di atas dilakukan uji one way Anova untuk m engetahui adanya perbedaan jum lah kemat ian sel hati yang bermakna pada keem pat kelompok. Hasil perhitungan statistik uji Anova dapat disajikan dalam tabel 6. Tabel 6.
Rangkuman hasil analisis uji one way Anova jumlah kem atian sel hati keem pat kelompok sam pel Df
F
p
Ant ar kelompok
3
364,940
0,000
Dalam satu kelom pok
24
Tot al
27
Sum ber: Hasil analisis uji Anova data penelitian, 2010 (Lam piran 2) Hasil analisis uji one way Anova jum lah kemat ian sel hati pada semua kelom pok didapat kan nilai kem aknaan p<0,01 (p=0,000) sehingga dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan rerata jumlah kem atian sel hati yang bermakna pada keempat kelompok sampel (tabel 6). Unt uk mengetahui letak perbedaan di ant ara kelompok yang m ana, selanjutnya diuji dengan uji Post Hoc. Dari uji hom ogenitas diperoleh hasil p>0,01 atau berarti memiliki varian data yang homogen (lihat
30
31
lampiran 2) maka jenis uji Post Hoc yang dipilih adalah uji LSD (Least Significant Difference). 3.
Uji LSD (Least Significant Difference) Hasil perhitungan statistik uji LSD (Least Significant Difference) dapat dilihat pada tabel 7. Perhitungan statistik dengan uji LSD (Least Significant Difference) dengan derajat kem aknaan α=0,01 diperoleh nilai kemaknaan p<0,01 unt uk keenam perbandingan dua kelompok sam pel, antara lain kelom pok kontrol dan kelom pok perlakuan I (p=0,000), kelom pok kontrol dan kelompok perlakuan II (p=0,000), kelompok kontrol dan kelom pok perlakuan III (p=0,000), kelompok perlakuan I dan kelompok perlakuan II (p=0.000), kelom pok perlakuan I dan kelompok perlakuan III (p=0,000), dan kelom pok perlakuan II dan kelompok perlakuan III (p=0,000), dengan demikian Ho ditolak (ada perbedaan bermakna antara dua kelompok sam pel yang dibandingkan). Tabel 7.
Rangkuman hasil uji LSD jum lah kem atian sel hati keem pat kelompok sampel
Kelompok sam pel
Kelom pok sampel pembanding
Kelompok kont rol
Kelom pok perlakuan I
0,000
Kelompok kontrol
Kelom pok perlakuan II
0,000
Kelompok kontrol
Kelom pok perlakuan III
0,000
Kelompok perlakuan I
Kelom pok perlakuan II
0,000
Kelompok perlakuan I
Kelom pok perlakuan III
0,000
Kelompok perlakuan II
Kelom pok perlakuan III
0,000
Sum ber: Hasil uji LSD data penelitian, 2010 (Lampiran 2) 31
p
32
BAB V PEMBAHASAN
Dari penelitian, diperoleh data jum lah kematian sel. Data keem pat kelompok sam pel diuji distribusi normalnya dengan Shapiro-Wilk. Dari masingmasing kelom pok sampel diperoleh nilai kemaknaan p>0,05 yang berarti distribusi data normal. Data yang terdistribusi normal m erupakan syarat bagi suatu data yang akan diolah dengan uji one way Anova, selain skala ukur interval atau rasio. Selanjutnya data tersebut diuji dengan one way Anova dengan derajat kem aknaan α=0,01. Dari uji one way Anova diperoleh nilai kem aknaan p<0,01 yang berarti terdapat perbedaan yang berm akna di antara keem pat kelom pok. Unt uk mengetahui letak perbedaan di antara kelompok yang mana, data selanjutnya diuji Post Hoc. Dari uji homogenitas varian, diperoleh nilai kem aknaan p>0.01 yang berarti varian data homogen, m aka jenis uji Post Hoc yang dipilih adalah
uji LSD (Least Significant Difference) dengan derajat
kem aknaan α=0,01. Dari keenam perbandingan kelompok sam pel, diperoleh nilai kem aknaan p<0,01 yang berarti masing-masing dari keenam perbandingan kelompok sam pel mem iliki perbedaan yang berm akna. Perbedaan yang bermakna dari kelom pok kontrol terhadap ketiga kelompok perlakuan menunjukkan bahwa pemberian rodam in selama 7 hari berturut-turut dapat m enyebabkan kemat ian sel hati mencit. Kematian sel hati mencit dapat ditandai dengan perubahan int i sel (piknosis, karioreksis, dan
32
33
kariolisis). Dalam penelitian ini ditem ukan perbedaan yang bermakna antara kelompok perlakuan I dan kelompok perlakuan II, kelom pok perlakuan II dan kelompok perlakuan III. Rerata jum lah kemat ian sel hati yang sem akin besar, pada kelom pok m encit yang diberi rodamin b sebesar 3,5 mg ditemukan 46,14 ± 5,669 kem atian sel dari seratus sel hati yang dihitung, sedangkan pada kelom pok mencit yang diberi rodam in b sebesar 7 mg dan 14 mg masing-m asing ditem ukan 75,43 ± 7,068 dan 86,29 ± 2,928 kemat ian sel dari seratus sel hati yang dihitung. Hal ini m enunjukkan bahwa semakin besar dosis rodam in b yang diberikan, sem akin besar pula jumlah kemat ian sel hati yang terjadi. Kem atian sel hati akibat pem berian rodamin b dapat terjadi karena adanya sisa metabolism e yang berupa 3,6-diaminofluoran yang dapat mengganggu m etabolisme glikosaminoglikan dan ATP dalam sel hati. Hati m erupakan salah satu organ penting. Sem ua zat makanan yang diserap akan melalui hati sebelum diedarkan ke seluruh tubuh. Dalam hati zat makanan akan mengalam i m etabolisme, demikian pula dengan zat-zat lain akan mengalami tahap metabolisme, bahkan beberapa zat akan m engalam i netralisasi dan detoksikasi dalam organ ini (Guyton dan Hall, 1997). Rodamin b merupakan salah satu zat yang dimetabolisme di hati (W ebb et al., 1961). Proses m etabolisme rodamin
b
tidaklah
sempurna, proses
metabolismenya menyisakan
3,6-
diam inofluoran yang akan terakumulasi dalam hati (Webb dan Hansen, 1961). Metabolit tersebut akan menyebabkan perubahan akt ivitas metabolisme sel-sel hati, antara lain perubahan aktivitas m etabolisme glikosaminoglikan (Robert et al., 2006) dan ATP (Loo dan Clarke, 2002), sedemikian hingga jika terus
33
34
berlanjut akan terjadi ketidakseimbangan dalam sel yang mengakibatkan cedera dan bahkan sam pai pada kem atian sel hati. Kematian sel hati antara lain ditandai oleh adanya perubahan pada intinya. Perubahan pada inti sel adalah petunjuk paling jelas pada kemat ian sel. Biasanya sel yang telah m ati int inya m enyusut, batasnya tidak teratur dan berwarna gelap, proses ini dinamakan piknosis dan int inya disebut piknotik. Kem ungkinan lain, inti dapat hancur dan m eninggalkan pecahan-pecahan zat kromatin yang tersebar di dalam sel, proses ini disebut karioreksis. Pada beberapa keadaan inti sel yang m ati kehilangan kemampuan unt uk diwarnai dan menghilang begitu saja, proses ini disebut kariolisis (Price dan Wilson, 1997). Pada kelompok kontrol ditemukan juga kem atian sel hati mencit yang ditandai dengan perubahan inti sel (piknotis, karioreksis, dan kariolisis). Hal ini dapat terjadi oleh adanya variabel luar yang tidak dapat dikendalikan yaitu kondisi psikologis mencit selama pemberian perlakuan, kekebalan tubuh masing-masing mencit, serta keadaan awal hat i m encit pada penelitian ini. Pada penelitian ini, ditemukan perubahan struktur histologis sel hati mencit yaitu kem atian sel yang ditandai dengan perubahan inti. Pada penelitian eksperimental laboratorik terdahulu, Webb dkk. (1961) m enemukan bahwa pem berian rodamin b pada tikus menyebabkan perubahan makroskopis hati yaitu pem besaran ukuran hati, sedangkan pada pada tahun 1987 Braakman dkk. menem ukan adanya gam baran fluoresen terbanyak pada pemeriksaan mikroskop hati mencit di zona 1 yang m enunjukkan bahwa akumulasi terbanyak dari rodamin b terdapat di zona 1. Dua tahun berikutnya (1989), Braakm an dkk. dalam
34
35
penelitian serupa m elaporkan bahwa rodamin b cepat diserap dan masuk ke dalam hati dan lam bat dalam proses ekskresinya ke dalam empedu. Dalam penelitian Webb dkk. (1961), ditemukan pem besaran ukuran hati. Pembesaran ukuran hati dapat terjadi oleh karena adanya nekrosis sel-sel penyusun jaringan hat i. Sel yang mengalami nekrosis ukuran selnya biasanya membesar, sehingga secara m akroskopis terjadi pembesaran ukuran hati (Kumar et al., 2007). Petunjuk adanya nekrosis sel dapat ditunjukkan dengan jelas oleh adanya perubahan
lisis pada inti yang mengalam i nekrosis, yang dapat berupa
perubahan piknosis, karioreksis, maupun kariolisis (Price dan W ilson, 1997). Dari kedua penelitian Braakman dkk. pada tahun 1987 dan 1989, dapat disimpulkan bahwa akumulasi terbanyak dari rodamin b terdapat di zona I hati. Hal ini dapat terjadi karena zona 1 hati juga m erupakan zona yang paling dekat dengan pem buluh darah yang merupakan percabangan dari pem buluh darah yang berasal dari usus. Saluran em pedu dalam organ hati juga terdapat dalam zona 1 (Junqueira dan Carneiro, 1995). Dalam penelitian ini, menilai spesifik perubahan strukt ur histologis sel hati. Terkait dengan penelitian yang telah dilakukan Webb dkk. (1961), pemberian rodamin m enyebabkan pembesaran ukuran hati karena terjadi pem bengkakan selsel penyusun jaringan hat i oleh adanya proses nekrosis. Berdasarkan penelitian Braakm an dkk. (1987 dan 1989) dan penelitian ini, dapat disim pulkan paparan langsung rodam in b dan akum ulasinya dalam zona 1 menyebabkan kematian sel hati. Penelitian ini kiranya dapat menjadi sum ber informasi tambahan dan kelengkapan informasi mengenai pengaruh rodamin b terhadap kesehatan.
35
36
Secara epidemiologi, penelitian m engenai rodamin b juga telah dilakukan. Pada tahun 2003, Trestiati melakukan analisis m engenai kandungan rodamin b dalam jajanan anak SD. Pada tahun 2004, Djarismawati dkk. melaporkan m engenai penggunaan rodam in b dalam cabe m erah giling. Dalam penelitian Trestiati (2003), dilaporkan hasil analisis m engenai kandungan rodamin b dalam jajanan anak SD. Dilaporkan kandungan rodamin dalam sam pel sebesar 7.841-3.226,55 ppm. Dari kandungan rodam in b, diperoleh perkiraan asupan rodamin b anak kelas 4-6 SD setiap hari sebesar 0,455-0,379 mg/kb BB. Djarism awati dkk. (2004) m elaporkan beberapa informasi yang diperoleh dari penelitian mereka. Dilaporkan bahwa penjualan cabe m erah giling dengan pewarna rodam in b sudah terjadi lebih dari 5 tahun. Di dalam penelitian tersebut juga dilaporkan bahwa sebesar 63 % dari 90 sam pel yang diperiksa menggunakan rodamin b. Pemberian rodam in b dalam cabe m erah giling tersebut diket ahui karena ketidakpedulian para pedagang cabe merah giling terhadap adanya bahaya rodamin b terhadap kesehatan. Penelitian yang dilakukan oleh Trestiati (2003) telah melaporkan perkiraan besar asupan rodamin b pada manusia. Penelitian yang dilakukan Djarism awati dkk. (2004) m enunjukkan bahwa penyalahgunaan rodamin b telah dilakukan
setidaknya
selam a 5
tahun, sehingga dapat
dipastikan
bahwa
masyarakat baik secara sadar maupun tidak sadar telah mengkonsumsi rodam in b dalam wakt u yang cukup lama. Sedangkan penelitian ini menilai kerusakan struktur histologis hati m encit yang diinduksi oleh rodamin b dengan dosis yang
36
37
dihitung dari pengkonversian dari LDLo rodam in b tikus dan dilakukan dalam kurun wakt u selam a satu minggu. Keterbatasan sum ber daya dan wakt u m em buat penelitian ini dilaksanakan pada hewan uji dalam jangka wakt u singkat dan dengan dosis yang cukup besar. Hal tersebut m enjadi suatu kelemahan dari penelitian ini. Penelitian ini menunjukkan bahwa rodamin b m enyebabkan kerusakan organ hati yang dilihat secara mikroskopis. Kerusakan organ hati kemungkinan besar akan m enyebabkan gangguan fungsi hati. Oleh sebab itu diharapkan ada penelitian lebih lanjut mengenai gangguan fungsi hati oleh karena paparan rodamin b. Diharapkan pula ada penelitian lebih lanjut mengenai perlindungan organ hati dari pengaruh rodam in b. Selain m enimbulkan kerusakan organ hati, tidak m enutup kemungkinan bahwa rodamin b juga m emiliki pengaruh lain bagi kesehatan organ lain, sehingga diharapkan pula akan ada penelitian m engenai pengaruh lain rodamin b terhadap kesehatan selain organ hat i. Berdasarkan informasi ilmiah yang telah diperoleh dari penelitian ini maupun dari penelitian serupa m engenai pengaruh rodamin b terhadap kesehat an, masyarakat
dihimbau tidak m enyalahgunakan rodamin b sebagai pewarna
makanan dan tidak m engkonsum si m akanan yang mengandung rodam in b. Selain itu diperlukan peran serta pemerintah maupun m asyarakat secara terpadu melakukan pengawasan, pencegahan, dan penanganan penyalahgunaan rodam in b dalam makanan. Terkait dengan kelemahan penelitian ini, diharapkan ada penelitian lebih lanjut m engenai pengaruh rodamin b bagi kesehat an dengan dosis dan lama
37
38
perlakuan yang disesuaikan pada keadaan dalam m asyarakat. Selain itu juga diharapkan ada penelitian observasional mengenai perubahan kesehatan pada masyarakat yang telah mengkonsumsi rodamin b. Dengan adanya penelitianpenelitian tersebut, diharapkan laporan dari hasil penelitian-penelitian tersebut dapat lebih diaplikasikan dalam m asyarakat.
38
39
BAB VI SIMPULAN DAN SARAN
A.
Simpulan Setelah dilakukan analisis dan pembahasan, maka dapat diambil simpulan bahwa: 1.
Pem berian rodamin b dapat m enyebabkan kemat ian sel hat i yang ditandai dengan perubahan inti sel hati (piknosis, karioreksis, dan kariolisis).
2.
Jum lah kem atian sel hati sebanding dengan besarnya dosis rodam in b yang diberikan.
B.
Saran Untuk pengembangan pengetahuan diharapkan ada penelitian lebih lanjut m egenai: 1.
Pengaruh rodam in b terhadap fungsi hati.
2.
Perlindungan hati terhadap paparan rodam in b.
3.
Pengaruh lain rodamin b terhadap kesehatan selain terhadap organ hati.
4.
Pengaruh rodam in b bagi kesehat an dengan dosis dan lam a perlakuan yang disesuaikan pada keadaan dalam masyarakat .
5.
Perubahan kesehatan
pada masyarakat yang telah mengkonsumsi
rodamin b m elalui penelitian observasional.
39
40
Untuk masyarakat dihim bau agar
tidak m enyalahgunakan
rodam in b sebagai pewarna makanan.dan tidak m engkonsum si m akanan yang mengandung rodamin b.
40
41
DAFTAR PUSTAKA
Alfiansyah, M., 2008. Pengaruh Pemberian Boraks terhadap Perubahan Struktur Histologis Hati Mencit. Surakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret, hal. 14. Braakm an, I., Groothuis, G.M.M ., Meijer, D.K.F., 1987. Acinar Redistribution and Heterogeneity in Transport of The Organic Cation Rhodamine B in Rat Liver. Hepatology 7:849-55. Braakm an,
I., Groothuis, G.M.M., Meijer, D.K.F., 1989. Zonal Compartement ation of Perfused Rat Liver. Journal of Pharm acology and Experimental Therapeutics 249:869-73.
Dam ge, C., Apraham ian, M., Marchais, H., Benoit, J. P., Pinget, M., 1996. Int estinal absorpt ion of PLAGA Microspheres in the Rat. Journal of Anatom y 189:491-501. Darmawan, S., 1998. Hati dan Saluran Empedu. Jakarta: Fakultas Kedokt eran Universitas Indonesia, hal. 226-35. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2006. Bahaya Penggunaan Rhodam ine B Sebagai Pewarna Makanan. Jakarta: Departemen Kesehat an Republik Indonesia. Dire, D.J. dan Wilkinson, J.A., 1987. Acute Exposure to Rhodam ine B. Clinical Toxicology 24:603-7. Direktorat Pengawas Obat dan Makanan, 2006, Bahan Berbahaya yang Dilarang untuk Pangan. Jakarta: Departem en Kesehatan Republik Indonesia. Djarism awati, Sugiharti, Nainggolan, R., 2004, Pengetahuan Perilaku Pedagang Cabe Merah Giling dalam Penggunaan Rhodamine B di Pasar Tradisional di DKI Jakarta. Jurnal Ekologi Kesehatan 3:7-12. EMD Chemicals Inc., 2007. Material Safety Data Sheet: Rhodam ine B, HARLECO ® . New Jersey. Guyt on, A.C. dan Hall, J.E., 1997. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Jakarta: Penerbit Buku Kedokt eran EGC, hal. 1105-7. Julan, T., 2008. Awas, Makanan Mengandung Rhodam ine B Beredar Luas. Okezone.com 15 Juni 2008. Junqueira,
L.C. dan Carneiro, J., 1995. Histologi Dasar. Penerbit Buku Kedokt eran EGC. Jakarta, hal. 226-30.
41
42
Leeson, C.R., Leeson, T.S., Paparo, A.A., 1996. Buku Ajar Histologi. Jakarta: Penerbit Buku Kedokt eran EGC, hal. 383-95. Loo, T .W. dan Clarke, D.M., 2002. Location of the Rhodamine-binding Site in the Human Multidrug Resistance P-glycoprotein. Journal of Biological Chemistry 277:443332-8. Kaji, T., Kawashima, T., Sakamoto, M., 1991, Rhodamine B Inhibition of Glycosaminoglycan Production by Cultured Hum an Lip Fibroblasts. Toxicology and Applied Pharmacology 111:82–89 Kremer Pigm ente, 2004. Material Safety Data Sheet: 94900–Rhodam ine B. Aichstetten. Kum ar, V., Abbas, A.K., Fausto, N., Mitchell, R.N., 2007. Robbins Basic th Pathology. 8 ed. Philadelphia: W. B. Saunders Co., pp. 9 and 19. Kum ar, V., Abbas, A.K., Fausto, N., 2004. Robbins and Cotran Pathologic Basis of Disease. 7 th ed. Philadelphia: Elsevier Saunders, p. 12. Ngatidjan, 1991. Metode Laboratorium dalam Toksikologi. Yogyakarta: Penerbit Pusat Ant ar Universitas Bioteknologi Universitas Gadjah Mada, hal. 94. Occupat ion Safety and Health Administration (OSHA), 1989, Rhodam ine B. Washington, D.C.: U.S. Department of Labor. nd
O’Connor, D.J., 2002. Crash Course Pathology. 2 ed. St. Louis: Mosby, p. 131. Price, S.A. dan W ilson, L.M., 1997. Patofisiologi Konsep Klinis Proses Penyakit. Jilid 1. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC, hal. 25-427. Robbins, S.L. dan Kumar, V., 1995a. Buku Ajar Patologi I. Ed. 4. Jakarta: Penerbit Buku Kedokt eran EGC, hal. 2-14. Robbins, S.L. dan Kumar, V., 1995b. Buku Ajar Patologi II. Ed. 4. Jakarta: Penerbit Buku Kedokt eran EGC, hal. 299. Roberts, A.L.K., Thomas, B.J., Wilkinson, A.S., Fletcher, J.M., Byers, S., 2006. Inhibition of Glycosam inoglycan Synthesis Using Rhodam ine B. Pediatric Research 60:309-14. Taufiqqurohman, M.A., 2004. Pengantar Metodologi Penelitian untuk Ilmu Kesehatan. Klaten: Penerbit CSGF (The Com munity Of Self Help Group Forum), hal. 10, 38-40, 62, dan 99-103. Trestiati, M., 2003. Analisis Rhodam in B pada Makanan dan Minum an Jajanan Anak SD. Bandung: Departemen Teknik Lingkungan Institut Teknologi Bandung.
42
43
Webb, J.M. dan Hansen, W.H., 1961. Studies of the Metabolism of Rhodamine B. Toxicology and Applied Pharmacology 3:86-95. Webb, J.M., Hansen, W.H., Desmond, A., Fitzhugh, O.G., 1961. Biochem ical and Toxicologic Studies of Rhodamine B and 3,6-Diam inofluoran. Toxicology and Applied Pharmacology 3:696-706. Wenas, N.T ., 1999. Kelainan Hati akibat Obat. Jakarta: Penerbit Gaya Baru, hal. 364.
43
44
Lampiran 1. Foto G am baran H istologis Hasil Penelitian dari Hati Mencit Masing-masing Kelompok Sam pel
N P
Kr
Kl
Gambar 2. Gambaran histologis sel hati norm al dan yang m engalam i kerusakan pada zona I hat i kelompok kontrol. N adalah sel hati normal, P adalah sel hat i piknotik, Kr adalah sel hati kariorektik, dan Kl adalah sel hati kariolitik. (pewarnaan HE; perbesaran mikroskop 1000 kali, perbesaran kamera 3 kali)
44
45
N P
Kr
Kl
Gambar 3. Gambaran histologis sel hati norm al dan yang m engalam i kerusakan pada zona I hati kelom pok perlakuan I. N adalah sel hati normal, P adalah sel hat i piknotik, Kr adalah sel hati kariorektik, dan Kl adalah sel hati kariolitik. (pewarnaan HE; perbesaran mikroskop 1000 kali, perbesaran kamera 3 kali)
45
46
N
P
Kr
Kl
Gambar 4. Gambaran histologis sel hati norm al dan yang m engalam i kerusakan pada zona I hati kelom pok perlakuan II. N adalah sel hati norm al, P adalah sel hat i piknotik, Kr adalah sel hati kariorektik, dan Kl adalah sel hati kariolitik. (pewarnaan HE; perbesaran mikroskop 1000 kali, perbesaran kamera 3 kali)
46
47
P N
Kr
Kl
Gambar 5. Gambaran histologis sel hati norm al dan yang m engalam i kerusakan pada zona I hati kelompok perlakuan III. N adalah sel hati norm al, P adalah sel hat i piknotik, Kr adalah sel hati kariorektik, dan Kl adalah sel hati kariolitik. (pewarnaan HE; perbesaran mikroskop 1000 kali, perbesaran kamera 3 kali)
47
48
Lampiran 2. Hasil Pengolahan Data Tabel 8.
Hasil uji distribusi normal jumlah kemat ian sel Tests of Normality a
Kolmog orov-Smirnov Kelompok Sampel Jumlah Kematian Sel
Kelompok Kontrol
Shapiro-Wilk
Statistic
df
Sig.
Statistic
df
Sig.
.207
7
.200*
.874
7
.203
*
Kelompok Perlakuan I
.164
7
.200
.979
7
.954
Kelompok Perlakuan II
.206
7
.200
*
.964
7
.854
Kelompok Perlakuan III
.253
7
.195
.942
7
.659
a. Lill iefors Sig nificance Corr ection *. This is a lower bound of the true significance.
Sum ber: Tabel 9.
Hasil uji normalitas data penelitian dengan SPSS 16 for Windows, 2010 Hasil uji homogenitas jumlah kem atian sel hati keem pat kelom pok sam pel Test of Homogeneity of Variances
Jumlah Kematian Sel Levene Statistic
df1
df2
Sig .
2.177
3
24
.117
Sum ber:
Hasil uji homogenitas data penelitian dengan SPSS 16 for Windows, 2010
Tabel 10. Hasil uji one way Anova jum lah kematian sel hati keempat kelom pok sam pel ANOVA Jumlah Kematian Sel
Between Groups Within Groups Total
Sum ber:
Sum of Squares
df
Mean Sq uare
F
Sig .
26497.250
3
8832.417
364.940
.000
580.857
24
24.202
27078.107
27
Hasil uji one way Anova data penelitian dengan SPSS 16 for Windows, 2010
48
49
Tabel 11. Hasil uji LSD jum lah kem atian sel hati keem pat kelom pok sam pel Multiple Co mparisons Jumlah Kematian Sel LSD 99% Confidence Interval Mean Std. Difference (I- J) Error
(I) Kelompok Sampel
(J) Kelompok Sampel
Kelompok Kontrol
Kelompok Perlakuan I
-39.286*
Kelompok Perlakuan II
-68.571
*
Kelompok Perlakuan III Kelompok Perlakuan I
Kelompok Perlakuan II
Sig .
Lower Bound
Upper Bound
2.630
.000
-46.64
-31.93
2.630
.000
-75.93
-61.22
-79.429
*
2.630
.000
-86.78
-72.07
Kelompok Kontrol
*
39.286
2.630
.000
31.93
46.64
Kelompok Perlakuan II
-29.286*
2.630
.000
-36.64
-21.93
Kelompok Perlakuan III
-40.143
*
2.630
.000
-47.50
-32.79
Kelompok Kontrol
68.571
*
2.630
.000
61.22
75.93
Kelompok Perlakuan I
29.286
*
2.630
.000
21.93
36.64
*
-10.857
2.630
.000
-18.21
-3.50
79.429
*
2.630
.000
72.07
86.78
Kelompok Perlakuan III Kelompok Perlakuan III Kelompok Kontrol Kelompok Perlakuan I
40.143
*
2.630
.000
32.79
47.50
Kelompok Perlakuan II
10.857
*
2.630
.000
3.50
18.21
*. The mean difference is sig nificant at the 0.01 level.
Sum ber:
Hasil uji LSD data penelitian dengan SPSS 16 for Windows, 2010
49
50
Lampiran 3. Perhitungan Dosis Pemberian Dosis yang digunakan ditent ukan dari dosis m aksimal yang dihitung berdasarkan Lethal Dose Low (LDLo). Tabel 12. Konversi dosis m anusia dan hewan Mencit Tikus Marm ut Kelinci Kucing Kera Anjing Manusia 20 g
200 g
400 g
20 g
1,0
7,0
12,25
27,8
29,7
64,1 124,2
387,9
200 g
0,14
1,0
1,74
3,9
4,2
9,2
17,8
56,0
Marm ut 400 g
0,08
0,57
1,0
2,25
2,4
5,2
10,2
31,5
Kelinci
1,5 g
0,04
0,25
0,44
1,0
1,08
2,4
4,5
14,2
Kucing
2 kg
0,03
0,23
0,41
0,92
1,0
2,2
4,1
13,0
Kera
4 kg
0,016
0,11
0,19
0,42
0,45
1,0
1,9
6,1
12 kg
0,008
0,06
0,10
0,22
0,24
0,52
1,0
3,1
Manusia 70 kg 0,0026 0,018
0,031
0,07
0,076
0,16
0,32
1,0
Mencit Tikus
Anjing
1,5 kg 2 kg
4 kg
12 kg 70 kg
Sum ber: Ngatidjan, 1991 Perhitungan dosis m aksimal didasarkan pada LDLo per oral 500 mg/kgBB tikus (EMD, 2007), dengan perhitungan konversi dari tikus 200 g ke mencit 20 g (faktor konversi sebesar 0,14, lihat tabel 12). LDLo per oral = 500 m g/kgBB tikus = 100 m g/200 gBB tikus = (100×0,14) m g/20 gBB mencit = 14 m g/20 gBB m encit Sehingga diketahui LDLo per oral 14 mg/20 gBB mencit. Volum e larutan rodamin b yang diberikan unt uk tiap m encit adalah 0,2 ml, hal ini sesuai kapasitas maksimal lam bung mencit 20-30 g yaitu 1 ml (lihat tabel 13). 50
51
Tabel 13. Volum e m aksimal bahan uji pada pemberian secara oral Jenis hewan
Berat rata-rata (gram)
Volume maksimal (ml)
Mencit
20-30
1,0
Tikus putih
100
5,0
Hamster
50
2,5
Marmot
250
10,0
Kelinci
2500
20,0
Kucing
3000
50,0
Anjing
5000
100
Sum ber: Ngatidjan, 1991
51
