SKRIPSI. Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi. Oleh: Carolina Dea Sekar Panintra

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

UJI IN VIVO DAN VALIDASI PROTOKOL SLUG IRRITATION TEST PADA SEDIAAN BEDAK TABUR AMILUM MANIHOT (Manihot utilissima L.) MENGGUNAKAN PEWARNA KAROTENOID DARI UMBI WORTEL (Daucus carota L.) DENGAN METODE CLASSIFICATION AND REGRESSION TREE (CART)

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh: Carolina Dea Sekar Panintra NIM: 118114046

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2015


UJI IN VIVO DAN VALIDASI PROTOKOL SLUG IRRITATION TEST PADA SEDIAAN BEDAK TABUR AMILUM MANIHOT (Manihot utilissima L.) MENGGUNAKAN PEWARNA KAROTENOID DARI UMBI WORTEL (Daucus carota L.) DENGAN METODE CLASSIFICATION AND REGRESSION TREE (CART)

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh: Carolina Dea Sekar Panintra NIM: 118114046

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2015

ii


iii


iv


LEMBAR PERSEMBAHAN

THE SAME BOILING WATER THAT SOFTENS THE POTATO HARDENS THE EGG. IT’S ABOUT WHAT YOU’RE MADE OF, NOT THE CIRCUMSTANCES.

Kupersembahkan untuk: Keluargaku, Mama, Papa, Mas Aan, Vano Saudara, Sahabat, Teman dan Almamaterku

v


vi


PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah Yang Maha Kuasa atas berkat dan rahmat-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji In Vivo dan Validasi Protokol Slug Irritation Test pada Sediaan Bedak Tabur Amilum Manihot (Manihot utilissima L.) Menggunakan Pewarna Karotenoid dari Umbi Wortel (Daucus carota L.) dengan Metode Classification and Regression Tree (CART)”. Penelitian ini merupakan bagian dari Penelitian Validasi Protokol Uji Iritasi Kulit Sediaan Bahan Alam berdasarkan Prinsip 3R (Reduce, Refinement, and Replace). Skripsi ini disusun guna memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Selama perkuliahan, penelitian dan penyusunan skripsi, penulis telah banyak mendapatkan bantuan, sarana, dukungan, nasehat, bimbingan, kritik dan saran dari berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis ingin mengucapkan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada: 1.

Tuhan Yesus atas segala berkat dan karunia-Nya kepada penulis mulai dari awal penelitian hingga selesai penyusunan naskah.

2.

Dr. Sri Hartati Yuliani, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing dan Kepala Program Studi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma atas masukan, bimbingan, kritik, saran dan bahan penelitian yang diberikan kepada penulis.

3.

Enade Perdana Istyastono, Ph.D., Apt., selaku dosen penguji dan juga atas saran serta dukungan selama penyusunan naskah.

vii


4.

Dr. Nunung Yuniarti, M.Si., Apt. selaku dosen penguji dan juga atas saran serta dukungan kepada penulis.

5.

Agustina Setiawati, M.Sc., Apt. selaku Kepala Laboratorium atas ijin yang diberikan.

6.

Seluruh dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah membagikan ilmu serta pengalaman selama perkuliahan.

7.

Mas Agung, Pak Musrifin, Pak Iswandi dan semua laboran atas bantuan dan kerjasamanya selama penulis melakukan penelitian.

8.

Mama, Papa, Mas Aan dan Vano atas doa, dukungan, kasih sayang, cinta dan semangatnya yang diberikan kepada penulis selama proses penelitian hingga penyusunan naskah.

9.

Stevanus Nonot Pratito atas doa, dukungan, kasih sayang, cinta dan semangatnya.

10. Tiyut dan Cik Ailing, tim siput atas kerjasama dan sukaduka selama penelitian hingga penyusunan naskah. 11. Lala, Lisul, Ocha dan Henra untuk kebersamaan, canda tawa, motivasi dan dukungan selama 4 tahun berdinamika bersama. 12. Dara Prabandari Sumardi atas semangat, dukungan dan saran yang diberikan kepada penulis. 13. Ines, Mbak Rini, Mbak Tyas, Verlita, Ocita dan teman-teman kos Caritas. Terimakasih sudah menjadi teman yang luar biasa selama di kos, berbagi canda tawa serta dukungan yang telah diberikan selama bersama-sama di kos Caritas.

viii


14. Teman ngelab lantai 1 (Dara, Mpit, Lukas, Deni, Ahen, Lauren, Ardha, Sheilla, teman-teman FST A 2011, FSM A 2011 dan seluruh angkatan 2011 atas kebersamaan dan keceriaan selama ini. 15. Serta semua pihak yang telah membantu penulis dan tidak dapat disebutkan satu per satu. Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam penyusunan skripsi ini. Penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun dari semua pihak. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak.

Yogyakarta,

Penulis

ix


x


DAFTAR ISI

Halaman HALAMAN JUDUL .................................................................................... ii HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................. iii HALAMAN PENGESAHAN ....................................................................... iv HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................... v LEMBAR

PERNYATAAN

PUBLIKASI

ILMIAH

UNTUK

KEPENTINGAN AKADEMIS ..................................................................... vi PRAKATA ................................................................................................... vii PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ........................................................ x DAFTAR ISI ................................................................................................ xi DAFTAR TABEL ........................................................................................ xiv DAFTAR GAMBAR .................................................................................... xv DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. xvi DAFTAR SINGKATAN .............................................................................. xvii INTISARI ..................................................................................................... xviii ABSTRACT ................................................................................................... xix BAB I PENGANTAR ................................................................................... 1 A. Latar Belakang ......................................................................................... 1 1.

Perumusan Masalah ........................................................................... 3

2.

Keaslian Penelitian ............................................................................ 3

3.

Manfaat Penelitian ............................................................................. 4

B. Tujuan Penelitian ..................................................................................... 4 BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ............................................................ 5 A. Kulit ......................................................................................................... 5 1. Epidermis ............................................................................................ 6 2. Dermis ................................................................................................. 6 B. Iritasi ........................................................................................................ 7 C. Bedak ....................................................................................................... 8 D. Bedak Tabur ............................................................................................. 8

xi


E. Karakteristik Bedak Tabur ........................................................................ 8 1. Daya penutupan bedak ......................................................................... 8 2.

Daya serap ......................................................................................... 9

3.

Daya lekat ......................................................................................... 10

4.

Pewarna ............................................................................................. 10

5.

Pengawet ........................................................................................... 11

F. Wortel ...................................................................................................... 12 1.

Keterangan botani.............................................................................. 12

2.

Kandungan wortel ............................................................................. 12

G. Bahan Uji Iritasi ....................................................................................... 13 1. Asam salisilat ..................................................................................... 13 2. Arbutin ............................................................................................... 14 3. Sodium Lauryl Sulfate......................................................................... 15 I. Slug Irritation Test ................................................................................... 16 1. Slug Mucosal Irritation (SMI) ............................................................ 16 2. Laevicaulis alte .................................................................................. 17 a. Klasifikasi..................................................................................... 17 b. Deskripsi umum ............................................................................ 18 c. Keterangan biologis ...................................................................... 18 d. Habitat .......................................................................................... 18 J. Spektrofotometri ...................................................................................... 18 K. Validasi Alternatif Tes ............................................................................. 19 L. Classification and Regression Tree (CART) ............................................. 20 M. Keterangan Empiris .................................................................................. 21 BAB III METODE PENELITIAN ................................................................ 23 A. Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................................ 23 B. Variabel Penelitian ................................................................................... 23 C. Definisi Operasional ................................................................................. 23 D. Bahan Penelitian....................................................................................... 24 E. Alat Penelitian .......................................................................................... 25 F. Tata Cara Penelitian ................................................................................. 26

xii


1. Formulasi bedak tabur.......................................................................... 26 2. Pengumpulan dan penyiapan sari umbi wortel...................................... 26 3. Penghomogenan dan pewarnaan bedak tabur ....................................... 26 4. Pembuatan kontrol positif dan kontrol negatif ...................................... 27 5. Slug Irritation Test ............................................................................... 27 a. Pengumpulan dan determinasi siput ................................................. 27 b. Slug irritation test ........................................................................... 28 c. Pengukuran kadar albumin .............................................................. 28 d. Pengukuran ALP ............................................................................. 29 e. Pengukuran LDH ............................................................................ 29 G. Analisis hasil ............................................................................................ 30 1. Validasi protokol slug irritation test..................................................... 30 2. Prediksi sifat iritatif sediaan bedak tabur .............................................. 31 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 32 A. Formulasi ................................................................................................. 32 B. Pembuatan Bedak Tabur ........................................................................... 32 C. Pembuatan Kontrol Positif dan Kontrol Negatif Sediaan ........................... 34 D. Slug Irritation Test ................................................................................... 36 1. Pengumpulan dan determinasi siput ..................................................... 36 2. Slug Irritation Test ............................................................................... 36 3. Validasi menggunakan metode Classification and Regression Tree (CART) ............................................................................................... 40 4. Prediksi sifat iritatif bedak tabur .......................................................... 43 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN......................................................... 45 A. Kesimpulan .............................................................................................. 45 B. Saran ........................................................................................................ 45 DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 46 LAMPIRAN ................................................................................................. 50 BIOGRAFI PENULIS .................................................................................. 67

xiii


DAFTAR TABEL

Tabel I.

Komposisi kandungan gizi wortel per 100 g bahan ..................... 13

Tabel II.

Penggunaan SLS pada berbagai keperluan .................................. 15

Tabel III. Komposisi dan konsentrasi reagen ALP ...................................... 25 Tabel IV. Komposisi dan konsentrasi reagen LDH ..................................... 25 Tabel V.

Komposisi dan konsentrasi reagen albumin ................................. 25

Tabel VI. Formula acuan (Dewi, 2012) ....................................................... 26 Tabel VII. Formula bahan uji ....................................................................... 27 Tabel VIII. Confusion Matrix ........................................................................ 31 Tabel IX. Data slug irritation test ............................................................... 37 Tabel X.

Confusion Matrix prediksi CART ............................................... 42

Tabel XI. Perbandingan nilai cut off dengan persen mukus sediaan bedak tabur ........................................................................................... 43

xiv


DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Diagram kulit dengan perbedaan lapisan epidermis ..................... 5 Gambar 2. Struktur metil paraben ................................................................ 11 Gambar 3. Struktur asam salisilat ................................................................. 14 Gambar 4. Struktur arbutin........................................................................... 15 Gambar 5. Laevicaulis alte........................................................................... 17 Gambar 6. Classification (a) and Regression (b) Tree (CART) ..................... 41

xv


DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Data penimbangan dan dokumentasi formula ............................ 51 Lampiran 2. Dokumentasi Slug Irritation Test............................................... 52 Lampiran 3. Data penimbangan siput ............................................................ 54 Lampiran 4. Data selisih absorbansi ALP, LDH dan albumin ........................ 56 Lampiran 5. Data persen mukus, LDH, ALP dan Albumin ............................ 58 Lampiran 6. Data prediksi true positive, true negative, false positive dan false negative............................................................................ 60 Lampiran 7. Data Classification and Regression Tree (CART) menggunakan RStudio .............................................................. 62 Lampiran 8. Surat determinasi siput .............................................................. 66

xvi


DAFTAR SINGKATAN

alb

Albumin

ALP

Alkaline Phospatase

anova

Analysis of Variance

CART

Classification and Regression Tree

FN

False Negative

FP

False Positive

LDH

Lactate Dehydrogenase

PBS

Phospate Buffer Saline

SLS

Sodium Lauryl Sulfate

TN

True Negative

TP

True Positive

xvii


INTISARI

Produk sediaan farmasi, terutama kosmetik sudah sangat tersebar luas di pasaran. Dalam kosmetik, digunakan berbagai macam bahan yang diformulasikan sedemikian rupa agar menghasilkan sediaan yang baik dan aman. Perlu dilakukan uji iritasi terhadap sediaan agar keamanan konsumen terjamin. Penelitian mengenai Uji In Vivo dan Validasi Protokol Slug Irritation Test Pada Sediaan Bedak Tabur Amilum Manihot (Manihot utilissima L.) menggunakan Pewarna Karotenoid dari Umbi Wortel (Daucus carota L.) dengan Metode Classification And Regression Tree (CART) bertujuan untuk mengetahui validitas Slug Irritation Test dalam pengujian sediaan bedak tabur amilum manihot menggunakan pewarna karotenoid dari umbi wortel. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental kuasi dan eksploratif. Dilakukan uji in vivo menggunakan siput telanjang dan validitas metode diuji. Validitas protokol Slug Irritation Test dilihat berdasarkan nilai sensitivitas dan selektivitas. Metode dinyatakan valid apabila nilai sensitivitas dan spesifisitas >60%. Hasil penelitian menunjukkan persen mukus sebagai variabel penting dalam klasifikasi dengan nilai cut off sebesar 0,0325. Didapatkan nilai sensitivitas 100% dan spesifisitas 77,5% dan metode dinyatakan valid. Potensi iritasi sediaan bedak tabur diprediksi dibandingkan dengan cut off dari persen mukus. Bedak tabur memiliki rata-rata persen mukus sebesar 0,0836±0,01, sehingga disimpulkan bahwa bedak tabur memiliki potensi iritasi. Kata kunci: Slug Irritation Test, bedak tabur, pewarna, validasi, cut off, Classification and Regression Tree

xviii


ABSTRACT

Pharmaceutical dosage forms, especially cosmetics, have been spread widely in the market. Wide varieties of materials are used in order to formulate good as well as safe cosmetics products. The irritation test is needed to guarantee the product safety for the consumers. The study about In Vivo Test and Protocol Validation of Slug Irritation Test on Amylum Manihot (Manihot utilissima L.) Face Powder Using Carotenoid Dye from Carrot’s Tuber (Daucus carota L.) by the Method of Classification and Regression Tree (CART) aims to discover the Slug Irritation Test’s validity in the examination of Amylum manihot face powder using carotenoid dye from carrot’s tuber. This study is a quasi experimental and an explorative research. The in vivo test using slugs was performed and the protocol validity of Slug Irritation Test was determined by the sensitivity and the selectivity. This method is valid if the value of both are >60%. The result of the study shows the mucus production (in percent) as the important variable in the classification with the cut off value of 0.0325. The sensitivity value is 100% and the specification value is 77.5%. Therefore, the method is valid. The irritation potential of face powder dosage form is predicted by the cut off from the mucus production. The powder has the average mucus production of 0.0836±0.01 percent. From the result, it can be concluded that the powder has the irritation potential. Keywords: Slug Irritation Test, powder, dye, validity, cut off, Classification and Regression Tree

xix


BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Iritasi adalah adalah gejala inflamasi yang terjadi pada kulit atau membran mukosa segera setelah perlakuan berkepanjangan atau berulang dengan menggunakan bahan kimia atau bahan lain. Iritasi kulit disebabkan oleh suatu bahan dapat terjadi pada setiap orang dan tidak melibatkan sistem imun tubuh. Ada beberapa faktor-faktor yang memegang peranan seperti keadaan permukaan kulit, lamanya bahan bersentuhan dengan kulit, dan konsentrasi dari bahan (Irsan dkk., 2013). Produk sediaan farmasi, terutama kosmetik sudah sangat tersebar luas di pasaran. Dalam kosmetik, digunakan berbagai macam bahan yang diformulasikan sedemikian rupa agar menghasilkan sediaan yang baik. Tanpa disadari, bahanbahan tersebut memiliki potensi untuk mengiritasi pengguna kosmetik. Salah satu bahan yang dinilai memberikan potensi iritasi adalah bahan pewarna. Pewarna yang merupakan bahan alam sangat penting untuk diuji potensi iritasinya, karena kandungan senyawa dalam bahan alam tersebut belum diketahui dengan pasti. Dewi (2012), telah memformulasikan sediaan bedak tabur dengan menggunakan pewarna bahan alam yaitu karotenoid dari umbi wortel. Sudah dilakukan uji iritasi pada penelitian tersebut dengan menggunakan hewan uji kelinci. Didapatkan hasil bahwa sediaan bedak tabur yang diformulasikan bersifat non-iritatif.

1

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 2

European Chemical Agency telah menggalakkan larangan penggunaan hewan vertebrata (hewan bertulang belakang) untuk beberapa uji laboratorium. Telah diminimalisir beberapa metode standar yang menggunakan hewan vertebrata sebagai model untuk memprediksi efek dari senyawa kimia pada manusia (Casati dkk., 2013). Tikus maupun kelinci sebagai hewan untuk uji iritasi telah diminimalisir penggunaannya, sehingga dikembangkan cara lain untuk melakukan uji iritasi. Slug Mucosal Irritation assay (SMI) kemudian dikembangkan sebagai salah satu alternatif untuk uji iritasi menggantikan Draize Test yang menggunakan kelinci sebagai hewan uji oleh Adriaens pada tahun 2006. SMI assay yang dikembangkan oleh Adriaens menggunakan hewan avertebrata slug (Arion lusitancius) yang mempunyai luas permukaan mukosa yang besar. SMI assay dapat memprediksi toleransi lokal dari sediaan solid, semi-solid maupun liquid. Potensi iritasi dapat diprediksi berdasarkan jumlah total dari mukus yang diproduksi, sedangkan parameter kerusakan jaringan dilihat dari produksi enzim dan protein (Dhondt, 2005). Untuk dapat memenuhi syarat keamanan, sediaan bedak tabur diuji dengan metode Slug Irritation Test. Validasi metode diuji menggunakan metode Classification and Regression Test (CART). Validasi protokol Slug Irritation Test pada sediaan bedak tabur dengan pewarna karotenoid dari umbi wortel perlu dilakukan agar dapat menjadi salah satu alternatif untuk uji iritasi dengan menggunakan hewan avertebrata.


1. Perumusan masalah Berdasarkan latar belakang, permasalahan yang diangkat penulis dalam penelitian ini adalah: a. Apakah protokol slug irritation test dapat menunjukkan hasil yang valid untuk pengujian iritasi sediaan bedak tabur amilum manihot menggunakan pewarna karotenoid dari umbi wortel dengan metode Classification and Regression Tree (CART)? b. Apakah sediaan bedak tabur amilum manihot menggunakan pewarna karotenoid dari umbi wortel bersifat iritatif atau non-iritatif sebagai sediaan topikal? 2. Keaslian penelitian Sejauh penelusuran yang dilakukan oleh penulis, penelitian tentang Uji In Vivo dan Validasi Protokol Slug Irritation Test pada Sediaan Bedak Tabur Amilum Manihot (Manihot utilissima L.) menggunakan Pewarna Karotenoid dari Umbi Wortel (Daucus carota L.) dengan Metode Classification And Regression Tree (CART) belum pernah dilakukan. Penelitian ini dilakukan berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Els Adriaens pada tahun 2006 tentang The Slug Mucosal Irritation assay: an alternative assay for local tolerance testing. Formula yang digunakan dalam penelitian ini mengacu pada penelitian yang dilakukan oleh Intan Chintya Dewi pada tahun 2012 tentang Perbandingan Sifat Fisis Bedak Tabur Berbahan Dasar Amilum solani (Solanum tuberosum L.) dan Amilum manihot (Manihot uttilisima L.) dengan Pewarna Karotenoid dari Umbi Wortel (Daucus carota L.).


3. Manfaat penelitian a.

Manfaat Teoretis. Dengan adanya penelitian ini, diharapkan dapat

diketahui apakah slug irritation test dapat menunjukkan hasil yang valid untuk menguji sediaan bedak tabur. b.

Manfaat Praktis. Dengan adanya penelitian ini, diharapkan penggunaan

hewan uji mamal untuk uji iritasi dapat diminimalkan mengingat penggunaan hewan mamal untuk uji iritasi sudah banyak dilarang.

B. Tujuan Penelitian 1.

Untuk mengetahui validitas Slug Irritation Test dalam pengujian sediaan

bedak tabur amilum manihot menggunakan pewarna karotenoid dari umbi wortel dengan metode Classification and Regression Tree (CART). 2.

Jika protokol Slug Irritation Test pada sediaan bedak tabur Amilum Manihot

(Manihot utilissima L.) menggunakan pewarna karotenoid dari umbi wortel (Daucus carota L.) dengan metode Classification and Regression Tree (CART) dinyatakan valid, digunakan untuk mengetahui potensi iritasi sediaan bedak tabur Amilum Manihot (Manihot utilissima L.) menggunakan pewarna karotenoid dari umbi wortel (Daucus carota L.) sebagai sediaan topikal.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Kulit Kulit merupakan organ yang menutupi seluruh permukaan tubuh dan memiliki fungsi utama sebagai pelindung dari berbagai macam gangguan dan rangsangan luar. Fungsi perlindungan ini terjadi melalui sejumlah mekanisme biologis, seperti pembentukan lapisan tanduk secara terus menerus (keratinisasi dan pelepasan sel-sel yang sudah mati), respirasi dan pengaturan suhu tubuh, produksi sebum dan keringat, dan pembentukan pigmen melanin untuk melindungi kulit dari bahaya sinar UV, sebagai peraba dan perasa, serta pertahanan terhadap tekanan dan infeksi dari luar (Tranggono dkk., 2007). Diagram kulit dengan perbedaan lapisan epidermis disajikan pada Gambar 1.

Gambar 1. Diagram kulit dengan perbedaan lapisan epidermis (Wibowo, 2000).

5


1. Epidermis Epidermis (kulit ari) merupakan lapisan paling luar dari kulit. Para ahli histologi membagi epidermis dari bagian terluar hingga ke dalam menjadi 5 lapisan yaitu stratum korneum, stratum lusidum, stratum granulosum, stratum spinosum dan stratum germinativum. Ketebalan epidermis berbeda-beda pada berbagai bagian tubuh, yang paling tebal berukuran 1 mm, misalnya pada telapak kaki dan tangan, dan lapisan yang tipis berukuran 0,1 mm terdapat pada kelopak mata, pipi, dahi dan perut. Sel-sel epidermis ini disebut keratinosit (Tranggono dkk., 2007). 2. Dermis Bagian dermis terdiri dari bahan dasar serabut kolagen dan elastin yang berada di dalam substansi dasar yang bersifat koloid dan terbuat dari gelatin mukopolisakarida. Serabut kolagen dapat mencapai 72% dari keseluruhan berat kulit manusia bebas lemak (Tranggono dkk., 2007). Di dalam dermis terdapat jaringan-jaringan kulit seperti folikel rambut, papilla rambut, kelenjar keringat, saluran keringat, kelenjar sebasea, otot penegak rambut, ujung pembuluh darah, ujung saraf dan sebagian serabut lemak yang terdapat pada lapisan lemak bawah kulit (subkutis/hipodermis) (Tranggono dkk., 2007).


B. Iritasi Iritasi adalah adalah gejala inflamasi yang terjadi pada kulit atau membran mukosa segera setelah perlakuan berkepanjangan atau berulang dengan menggunakan bahan kimia atau bahan lain. Iritasi kulit disebabkan oleh suatu bahan dapat terjadi pada setiap orang, tidak melibatkan sistem imun tubuh dan ada beberapa faktor-faktor yang memegang peranan seperti keadaan permukaan kulit, lamanya bahan bersentuhan dengan kulit, dan konsentrasi dari bahan (Irsan dkk., 2013). Iritasi kulit karena induksi kimia dipicu oleh kerusakan sel dan jaringan. Sel kulit

melepaskan mediator inflamasi (kemokin dan sitokin) yang

meningkatkan diameter dan permeabilitas pembuluh darah, membuat sel imun menuju jaringan yang rusak dan memicu migrasi sel imun melewati endotelium ke dalam jaringan dimana sel imun berperan dalam perbaikan jaringan. Selain itu, mediator inflamasi dapat merangsang ujung saraf yang mengarah ke gejala seperti rasa terbakar, gatal atau sensasi menyengat. Respon inflamasi lokal mengarah ke gejala-gejala seperti kemerahan, panas, nyeri dan bengkak pada jaringan yang mengalami inflamasi. Kemerahan dan rasa panas pada kulit disebabkan oleh kenaikan aliran darah pada area inflamasi. Pembengkakan pada kulit disebabkan oleh peningkatan permeabilitas dari sel endotel yang membentuk dinding pembuluh darah (Zuang dkk., 2013).


C. Bedak Bedak (face powder) termasuk dalam kosmetik dekoratif yang ditujukan untuk menyembunyikan kekurangan pada kulit wajah, misalnya untuk menutupi kulit wajah yang mengilap (skin imperfection and shininess). Fungsi utama bedak adalah untuk menutupi kulit wajah secara visual. Untuk maksud itu, bedak hampir selalu berisi bahan-bahan dasar dengan sifat-sifat penutup yang paling efektif, yaitu zink oksida dan titanium oksida, yang daya penutupnya tidak menurun jika terkena air atau petrolatum sebagaimana bahan dasar penutup lainnya (Tranggono dkk., 2007).

D. Bedak Tabur Bedak tabur adalah bedak kering yang hampir semua bahan bakunya terbuat dari serbuk bahan bedak. Pengaplikasian bedak tabur dengan menggunakan puff dan harus tersebar merata. Pembuatan bedak tabur cukup mudah, yaitu dengan cara mencampurkan bahan bedak dan pigmen dengan blender. Pencampuran bedak harus homogen dan tahap terakhir adalah tahap pengayakan bedak untuk mencapai ukuran yang ditentukan (Mitsui, 1997).

E. Karakteristik Bedak Tabur 1. Daya penutupan bedak Daya penutupan bedak adalah kemampuan untuk menutupi cacat dan kemerahan pada wajah. Kemampuan ini dapat diperoleh dari bahan-bahan seperti kaolin, zinc oksida dan titanium dioksida (Poucher, 1992).


Titanium dioksida (titanium dioxide). Titanium dioksida memiliki indeks refraktif yang tinggi dan memiliki ukuran diameter partikel yang sangat kecil sehingga memiliki kemampuan sebagai penutup (covering) yang baik pada bedak. Bersifat ringan, stabil terhadap panas dan kimia membuat titanium dioksida sangat baik digunakan untuk pigmen warna putih (Mitsui, 1997). Pada penelitian yang dilakukan oleh Roy dan Saha (1981), pengaplikasian 100 g titanium dioksida pada kulit kelinci albino jantan selama 24 jam tidak menimbulkan iritasi. Tidak ditemukan potensi iritasi titanium dioksida pada kulit manusia maupun kulit hewan (Scientific Committee On Cosmetic Products And Non-Food Products, 2000). 2. Daya serap Bedak wajah diharapkan mampu menutupi kekurangan wajah, salah satunya adalah menghilangkan kilau pada kulit. Kilau pada kulit dihilangkan dengan proses penyerapan sekresi minyak dan keringat. Oleh karena itu pada formulasi bedak wajah diperlukan bahan yang memiliki daya serap yang tinggi. Biasanya bahan yang digunakan adalah amilum (starch) (Poucher, 1992). Amilum (starch). Amilum merupakan serbuk putih tidak berbau, memiliki kelarutan yang rendah dalam air (Dirjen Pengawasan Obat dan Makanan, 1995). Selain itu amilum juga memiliki daya serap sekresi minyak dan keringat yang baik sehingga akan menyamarkan kilauan pada wajah. Amilum tersusun dari amilosa dan amilopektin. Tiap-tiap tanaman memiliki karakteristik amilum dan kandungan amilosa dan amilopektin yang berbeda. Pada amilum manihot mengandung amilosa sebesar 17-20%, dengan diameter granul sekitar 4-


35 µm, diameter rata-rata sebesar 15 µm. Tidak ditemukan adanya potensi iritasi pada amilum (BeMiller dkk., 2009). 3. Daya lekat Daya lekat mengindikasikan seberapa baik bedak melekat pada kulit. Daya lekat juga membantu menentukan daya tahan bedak (lasting power) (Mitsui, 1997). Daya lekat diperoleh dari penggunaan magnesium stearat. Magnesium stearat (magnesium stearate). Magnesium stearat adalah serbuk sangat halus, berwarna putih terang, hampir tidak terasa dikarenakan densitas bulk yang rendah. Magnesium stearat memiliki sifat greasy dan mampu melekat jika diaplikasikan pada kulit. Tidak ditemukan potensi iritasi ketika diaplikasikan secara topikal (Rowe dkk., 2009). 4. Pewarna Pewarna adalah bahan tambahan alam dalam sebuah produk kosmetik dekoratif, seperti bedak. Fungsi utama pewarna adalah menyamarkan bintik atau noda serta menghasilkan warna yang indah untuk menciptakan daya tarik. Pewarna terbagi menjadi pewarna bahan organik sintetik, pigmen inorganik dan pewarna alami (Mitsui, 1997). Carotenoid adalah salah satu contoh dari pewarna alami. Carotenoid merupakan pigmen yang disintesis oleh tanaman alga, bakteri fotosintetik, yang berwarna kuning, orange dan merah dan larut dalam minyak (Asgar dan Musaddad, 2006). Karoten dapat terdegradasi cepat mulai suhu 60C, cahaya dan oksigen. Contoh karoten adalah -carotene, -carotene, -cryptoxanthin, lutein, lycopene, zeaxanthin (Mortensen, 2009).


5. Pengawet Pengawet (preservative) adalah bahan untuk mencegah tumbuhnya mikroorganisme yang bisa merusak produk atau tumbuh pada produk kosmetik (Tranggono dkk., 2007). Bahan pengawet yang sering digunakan dalam dunia farmasi salah satunya adalah metil paraben. Metil paraben. Metil paraben digunakan secara luas sebagai pengawet antimikroba dalam kosmetik, produk makanan dan produk farmasi. Dapat digunakan dalam bentuk tunggal atau dikombinasikan dengan golongan paraben atau dengan agen antimikroba lainnya. Pada kosmetik, metil paraben merupakan bahan yang paling sering digunakan sebagai pengawet antimikroba (Rowe dkk., 2009). Berdasarkan Annex VI, kadar maksimal metil paraben yang dapat digunakan sebagai pengawet adalah sampai 0,4% di dalam produk hasil ester tunggal dan 0,8% untuk campuran ester (Scientific Committee on Consumer Products, 2005). Struktur metil paraben ditunjukkan pada Gambar 3.

Gambar 2. Struktur metil paraben (Rowe dkk., 2009).


F. Wortel 1. Keterangan botani Wortel (Daucus carota L.) termasuk jenis tanaman sayuran umbi semusim, berbentuk semak (perdu) yang tumbuh tegak dengan ketinggian antara 30 cm – 100 cm atau lebih, tergantung jenis atau varietasnya. Tanaman wortel berumur pendek yaitu berkisar antara 70 – 120 hari, tergantung pada varietasnya (Cahyono, 2002). Umbi wortel terbentuk dari akar tunggang yang berubah fungsi menjadi tempat penyimpanan cadangan makanan (karbohidrat, albumin, lemak, vitamin, mineral dan air). Ukuran umbi wortel bervariasi bergantung varietasnya. Umbi yang berukuran besar berdiameter 6,3 cm sedangkan wortel yang berukuran kecil berdiameter 3,5 cm. Berat umbi dapat mencapai 300 g sedangkan yang berukuran kecil mempunyai berat 100 g (Cahyono, 2002). 2. Kandungan wortel Berdasarkan angka yang tercantum pada daftar komposisi bahan makanan yang disusun Direktorat Gizi Departemen Kesehatan RI, kandungan gizi wortel dapat dilihat pada Tabel I.


Tabel I. Komposisi kandungan gizi wortel per 100 g bahan Bahan penyusun Kandungan gizi Kalori (kal) 42,00 Karbohidrat (g) 9 Lemak (g) 0,2 Albumin (g) 1 Kalsium (mg) 33 Fosfor (mg) 35 Besi (mg) 0,66 Vitamin A (SI) 835 Vitamin B (mg) 0,6 Vitamin C (mg) 1,9 Air (g) 88,20 Bagian yang dapat dimakan (%) 88.00 (Direktorat Gizi, 1979). Menurut Cheng dkk., (cit., Dewi, 2012), pada jus wortel mengandung 62,5 µg mL-1 -karoten; 27,6 µg mL-1 -karoten; 6,0 µg mL-1 lutein; 3,4 µg mL-1 13-cis--karoten; 1,3 µg mL-1 13,15 di-cis--karoten; 1,1 µg mL-1 15-cis-karoten; 1,1 µg mL-1 9-cis--karoten; 0,6 µg mL-1 13-cis-lutein; 0,4 µg mL-1 9-cislutein; 0,2 µg mL-1 13--karoten; 0,2 µg mL-1 9-cis--karoten.

G. Bahan Uji Iritasi 1. Asam salisilat Asam salisilat dengan rumus molekul C7H6O3 merupakan serbuk hablur ringan tidak berwarna atau serbuk berwarna putih, hampir tidak berbau, memiliki rasa agak manis dan tajam. Dalam bidang farmasi biasa digunakan sebagai keratolitikum dan antifungi (Dirjen POM, 1979). Menurut Kepala Badan POM dalam Peraturan Kepala Badan POM (PerKBPOM) no. HK.03.1.23.08.11.07517 Tahun 2011 tentang Persyaratan Teknis Bahan Kosmetika, kadar maksimum asam salisilat yang boleh digunakan dalam kosmetik adalah 3,0% untuk sediaan


perawatan rambut dibilas dan 2,0% untuk sediaan lainnya. Asam salisilat mempunyai potensi iritasi yang tinggi pada konsentrasi tinggi, sehingga digunakan konsentrasi 1,5% atau kurang pada krim kosmetik kulit. (Leyden dkk., 2002). Struktur asam salisilat dapat dilihat pada Gambar 5.

Gambar 3. Struktur asam salisilat (Scientific Committee On Cosmetic Products And Non-Food Products, 2002). 2. Arbutin Arbutin merupakan agen pemutih kulit yang efektif dan dapat berfungsi sebagai antioksidan.

Arbutin terhidrolisis

menjadi

hidrokuinon,

dimana

hidrokuinon juga memiliki efek yang kuat dalam memutihkan kulit. Penggunaan hidrokuinon dalam kosmetik jenis leave-on dilarang pada tahun 1999 karena dapat menimbulkan efek buruk pada pigmentasi seperti ochronosis dan kanker kulit. Efek pemutihan kulit dari arbutin berdasarkan inhibisi enzim tirosinase yang merupakan enzim utama dalam biosintesis melanin. Arbutin meningkatkan disintegrasi melanin sehingga warna kulit merata dan kulit menjadi terlihat lebih cerah (Council of Europe, 2008). Kadar maksimum yang diperbolehkan adalah sampai 7% dalam sediaan. Kadar 10% larutan β-Arbutin dapat menimbulkan sedikit potensi iritasi primer (Scientific Committee on Consumer Products, 2008). Struktur arbutin dapat dilihat pada Gambar 6.


Gambar 4. Struktur arbutin (Council of Europe, 2008). 3. Sodium Lauryl Sulfate Sodium Lauryl Sulfate (SLS) secara luas digunakan pada produk kosmetik, formulasi sediaan oral dan sediaan topikal. SLS digolongkan sebagai bahan yang dapat menyebabkan toksisitas moderat dengan efek toksisitas akut termasuk iritasi pada kulit, mata, membrane mukosa, saluran pernapasan bagian atas dan lambung. Jika pemakaian dilakukan berulang-ulang akan mengakibatkan kekeringan dan pecah-pecah pada kulit, bahkan dapat menyebabkan dermatitis kontak. Penggunaan SLS pada berbagai keperluan dapat dilihat pada Tabel II. Tabel II. Penggunaan SLS pada berbagai keperluan Penggunaan Konsentrasi (%) Emulsifier anionik 0,5-2,5 Detergen pada sampo 10 Pembersih topikal 1 Agen solubilisasi >0,0025 Pelicin tablet 1,0-2,0 Wetting agent 1,0-2,0 (Rowe dkk., 2009). Untuk sediaan topikal digunakan pada konsentrasi 0,1-12,7% (Michael dan Ash, 2004). Pada uji okular akut, 10% SLS menyebabkan kerusakan korneal pada mata kelinci. Pada uji Draize suatu produk yang mengandung 5,1% SLS menyebabkan iritasi ringan, dan dengan konsentrasi 21% menyebabkan iritasi


hebat. Berdasarkan studi iritasi kulit akut pada hewan disimpulkan bahwa 0,5% 10% SLS menyebabkan iritasi ringan. Aplikasi 10% - 30% menyebabkan korosi kulit dan iritasi hebat. Untuk kontak jangka panjang pada kulit konsentrasi SLS seharusnya tidak lebih dari 1% (Robinson dkk., 2010).

H. Slug Irritation Test 1. Slug Mucosal Irritation (SMI) Slug Mucosal Irritation (SMI) dikembangkan di Laboratorium Teknologi Farmasi (Ghent University, Belgium). Siput telanjang jenis Arion lusitanicus dipilih sebagai hewan uji. Menurut Adriaens (cit., Dhondt, 2005), karena tubuh siput yang tidak terlindung dari bahan iritan memproduksi mukus untuk melindungi dirinya, maka produksi mukus siput dipilih sebagai poin kunci untuk mengetahui potensi iritasi dari bahan iritan. Sebagai tambahan, kerusakan jaringan dapat diprediksikan dengan pelepasan albumin dan enzim dari tubuh siput. Produksi albumin, enzim Lactate Dehydrogenase (LDH) dan Alkaline Phospatase (ALP) dipilih sebagai penanda yang paling relevan untuk evaluasi kerusakan jaringan yang disebabkan oleh bahan uji. (Adriaens, cit., Dhondt, 2005). Secara umum, enzim ALP terdapat pada 3 daerah pada tubuh moluska yaitu saluran pencernaan, organ excretory dan pada bagian mantel. Aktivitas ALP akan meningkat jika terjadi kerusakan sel maupun infeksi pada snails dan slugs. Enzim LDH merupakan enzim sitosolik dan akan dikeluarkan pertama kali saat terjadi kerusakan jaringan (McComb dkk., 1979).


SMI dapat digunakan sebagai skrining awal pada tahap riset dan pengembangan formulasi sediaan baru untuk mengevaluasi toleransi lokal tanpa menggunakan hewan mamalia. Uji SMI telah divalidasi sebelumnya untuk skrining potensi iritan mata dari bahan-bahan kimia. Uji SMI

juga

direkomendasikan sebagai salah satu uji alternatif untuk menggantikan Uji Draize (Adriaens, 2006). 2. Laevicaulis alte

Gambar 5. Laevicaulis alte a. Klasifikasi Regnum

: Animalia

Phylum

: mollusca

Classis

: gastropoda

Ordo

: systellommatophora

Familia

: veronicellidae

Genus

: laevicaulis

Species

: Laevicaulis alte Férussac, 1822 (Brodie dkk., 2012).

b. Deskripsi umum. Siput telanjang dengan nama latin Laevicaulis alte (Gambar 7) masuk dalam famili Veronicellidae. Memiliki mantel yang


menutupi seluruh punggung sampai kepala; memiliki sepasang mata yang dekat dengan tentakel anterior. Mata dan tentakel hewan dapat terlihat ketika hewan dalam keadaan aktif. Mantel pada siput agak kasar dan pada permukaannya terlihat ada titik-titik kecil. Mantel siput berwarna coklat tua sampai kehitaman dengan garis pucat yang membujur di tengah-tengah punggung siput (Barker dkk., 2005). c. Keterangan biologis. Siput telanjang merupakan hewan hermaprodit dan dapat berubah jenis kelamin dari jantan ke betina selama masa hidupnya. Panjang tubuhnya berkisar antara 0,5 cm sampai dengan lebih dari 4 cm. Populasi siput mencapai populasi maksimum pada saat musim hujan yaitu mencapai 20 siput/m2 (Barker dkk., 2005). d. Habitat. Siput telanjang hidup di darat, biasa ditemukan di sampah dedaunan dan di bawah kayu yang sudah lapuk; hidup di dataran rendah sampai dataran tinggi hutan dan padang rumput dengan kelembaban yang tinggi (Barker dkk., 2005).

I. Spektrofotometri Metode pengukuran menggunakan prinsip spektrofotometri berdasarkan absorpsi cahaya pada panjang gelombang tertentu melalui suatu larutan yang mengandung kontaminan yang akan ditentukan konsentrasinya. Prinsip kerja metod ini adalah jumlah cahaya yang diabsorpsi oleh larutan sebanding dengan konsentrasi kontaminan dalam larutan. Prinsip ini dijabarkan dalam Hukum Beer-


Lambert yang menghubungkan antara absorbansi cahaya dengan konsentrasi pada suatu bahan yang mengabsorpsi berdasarkan persamaan berikut: A = log (Iin/Iout) = (1/T) = a x b x c A

= Absorbansi

Iin

= Intensitas cahaya yang masuk

Iout

= Intensitas cahaya yang keluar

T

= Transmitansi

a

= tetapan absorpsitivitas molar

b

= panjang jalur

c

= konsentrasi pada suatu bahan yang mengabsorpsi (Lestari, 2007).

J. Validasi Alternatif Tes Menurut Balls dkk. (1990), validasi dari sebuah metode alternatif dapat didefinisikan sebagai proses dimana reliabilitas dan relevansi dari sebuah metode alternatif terjamin untuk tujuan penelitian tersebut. Archer dkk. (1997), mendeskripsikan bahwa sebuah metode untuk penggantian dari uji menggunakan hewan meliputi uji sistem dan model prediksi. Model prediksi dikembangkan dengan pengalaman dan metode statistika. Klasifikasi model prediksi dilakukan dengan membuat prediksi pada skala kategori, sedangkan model matematik dilakukan dengan membuat prediksi pada skala yang berulang (Worth dkk., 2001).


Relevansi dari metode dievaluasi menggunakan beberapa metode secara statistik. Indeks, sensitifitas, dan spesifisitas dihitung untuk menentukan validasi metode. Indeks merupakan jumlah bahan yang diklasifikasikan secara benar melalui uji alternatif, dibagi dengan total bahan yang diuji. Sensitivitas (evaluasi jumlah negatif palsu) adalah jumlah total bahan iritan yang diklasifikasikan secara benar dengan uji alternatif, dibagi dengan jumlah total bahan iritan yang dites. Spesifisitas (evaluasi jumlah positif palsu) adalah jumlah total bahan non-iritan yang diklasifikasikan secara benar dengan uji alternatif, dibagi dengan jumlah total bahan non-iritan yang diuji. Metode dinyatakan valid jika nilai sensitivitas dan spesifisitas >60% (Fentem et al., cit., Dhondt, 2005).

K. Classification and Regression Tree (CART) Classification and Regression Tree (CART) adalah suatu metode statistik non-parametrik yang dapat menggambarkan hubungan antara variabel respon (dependent variable) dengan satu atau lebih variabel prediktor (independent variable). Menurut Breiman dkk. (1993), apabila variabel respon berbentuk kontinu maka metode yang digunakan adalah metode regresi pohon (regression tree), sedangkan apabila variabel respon memiliki skala kategorik maka metode yang digunakan

adalah metode klasifikasi pohon (classification

tree).

Pembentukan pohon klasifikasi terdiri atas 3 tahap yang memerlukan learning sample L. Tahap pertama adalah pemilihan pemilah. Setiap pemilahan hanya bergantung pada nilai yang berasal dari satu variabel independen. Tahap kedua


adalah penentuan simpul terminal. Simpul t dapat dijadikan simpul terminal jika tidak terdapat penurunan keheterogenan yang berarti pada pemilahan, hanya terdapat satu pengamatan (n=1) pada tiap simpul anak atau adanya batasan minimum n serta adanya batasan jumlah level atau tingkat kedalaman pohon maksimal. Tahap ketiga adalah penandaan label tiap simpul terminal berdasar aturan jumlah anggota kelas terbanyak. Proses pembentukan pohon klasifikasi berhenti saat terdapat hanya satu pengamatan dalam tiap simpul anak atau adanya batasan minimum n, semua pengamatan dalam tiap simpul anak identik, dan adanya batasan jumlah level/kedalaman pohon maksimal (Hartati, 2012).

Keterangan Empiris Telah diminimalisir penggunaan hewan vertebrata untuk uji iritasi pada sediaan farmasi. Tikus maupun kelinci sebagai hewan untuk uji iritasi telah diminimalisir penggunaannya, sehingga dikembangkan cara lain untuk melakukan uji iritasi. Slug Mucosal Irritation assay (SMI) kemudian dikembangkan sebagai salah satu alternatif untuk uji iritasi menggantikan Draize Test yang menggunakan kelinci sebagai hewan uji oleh Adriaens pada tahun 2006. SMI dikembangkan menggunakan hewan avertebrata slug (Arion lusitancius) yang mempunyai luas permukaan mukosa yang besar. Slug Mucosal Irritation assay dapat memprediksi toleransi lokal dari sediaan solid, semi-solid maupun liquid. Karena tubuh siput yang tidak terlindung dari bahan iritan memproduksi mukus untuk melindungi


dirinya, maka produksi mukus siput dipilih sebagai poin kunci untuk mengetahui potensi iritasi dari bahan iritan. Penelitian ini merupakan adaptasi dari penelitian yang dilakukan Adriaens (2006) tentang Slug Mucosal Irritation Test. Parameter-parameter yang digunakan antara lain produksi mukus, enzim ALP dan LDH serta protein albumin. Potensi iritasi dapat diprediksi dari produksi mukus yang dihasilkan oleh siput ketika diberi bahan uji. Kerusakan jaringan pada siput diprediksi dari produksi enzim ALP dan LDH serta protein albumin.


BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian dengan judul Uji In Vivo dan Validasi Protokol Slug Irritation Test pada Sediaan Bedak Tabur Amilum Manihot (Manihot utilissima L.) menggunakan Pewarna Karotenoid dari Umbi Wortel (Daucus Carota L.) dengan Metode Classification and Regression Tree (CART) merupakan jenis penelitian eksperimental kuasi dan eksploratif.

B. Variabel Penelitian 1. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah jenis bahan uji iritasi. 2. Variabel tergantung dalam penelitian ini adalah sifat iritatif yang ditinjau dari produksi mukus, albumin, LDH, dan ALP setelah diberi perlakuan bahan uji. 3. Variabel pengacau terkendali dalam penelitian ini adalah berat siput yang akan digunakan untuk slug irritation test (3-4 g). 4. Variabel pengacau tak terkendali dalam penelitian ini adalah umur dan kondisi patologis siput serta subjektivitas pengamatan.

C. Definisi Operasional 1. Iritasi adalah keadaan di mana siput mengeluarkan jumlah mukus yang lebih banyak dari normal.

23


2. Mukus adalah lendir yang dikeluarkan oleh siput dan berada di luar tubuh siput. 3. Siput atau slug adalah siput telanjang spesies Laevicaulis alte (FéR), mantel berwarna hitam dan memiliki berat 3-4 g. 4. Bedak wajah (face powder) merupakan kosmetik dekoratif yang digunakan untuk pemakaian pada wajah. 5. Bedak tabur (loose powder) merupakan bedak berbentuk serbuk yang digunakan untuk pemakaian pada wajah. 6. Umbi wortel yang digunakan merupakan jenis wortel nantes. 7. Sari wortel (juice wortel) diperoleh dari wortel dengan menggunakan blender dan disaring hingga tidak ada ampasnya.

D. Bahan Penelitian Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah siput telanjang (3-5 g) spesies Laevicaulis alte (FéR) yang diperoleh dari daerah Ungaran, Jawa Tengah, umbi wortel yang diperoleh dari Lottemart Wholesale Yogyakarta, amilum manihot (PT. Brataco Chemica Yogyakarta), titanium dioksida (PT. Brataco Chemica Yogyakarta), Sodium Lauryl Sulfate (SLS) (PT. Brataco Chemica Yogyakarta), arbutin (PT. Brataco Chemica Yogyakarta), metil paraben, magnesium stearat, asam salisilat farmasetis, reagen LDH (DiaSys), reagen ALP (ReiGed Diagnostics), reagen albumin (ReiGed Diagnostics), Phospate Buffer Saline (PBS), larutan NaCl 0,9% dan akuades. Komposisi reagen ALP, LDH dan albumin dapat dilihat pada Tabel III, IV dan V.


Tabel III. Komposisi dan konsentrasi reagen ALP Komposisi Konsentrasi (mM) Diethanolamine 1,0 Reagen 1 Magnesium chloride 0,5 p- Nitrophenylphosphatase Reagen 2 10,0 pH 10,4 ± 0,2

Tabel IV. Komposisi dan konsentrasi reagen LDH Komposisi pH Konsentrasi (mmol/ L) Phosphate buffer 7,5 64 Reagen 1 Pyruvate 0,80 Good’s buffer 9,6 Reagen 2 NADH 1,0

Tabel V. Komposisi dan konsentrasi reagen albumin Komposisi Konsentrasi (mM) Bromcresol green 0,25 Succinat Buffer 85 Surfactant pH 4,20 ± 0,1

E. Alat Penelitian Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah blender, oven Memmert, Software statistic RStudio, alat-alat gelas (Iwaki TE-32 Pirex Unmderli), neraca analitik Mettler-Todelo AB204, indikator pH universal Merck, Spektrofotometer UV-VIS Shimadzu® tipe UV mini-1240, kain saring dan kertas saring Whatman 0,45 µm.


F. Tata Cara Penelitian 1. Formulasi bedak tabur Formula pada penelitian ini menggunakan formula sediaan bedak tabur dari penelitian yang dilakukan oleh Dewi (2012). Formula sediaan bedak tabur dapat dilihat pada Tabel VI. Tabel VI. Formula Acuan (Dewi, 2012) Formula Jumlah yang Digunakan (g) Titanium dioksida 6 Metil paraben 0,3 Magnesium stearat 3 Sari wortel 150 Amilum manihot 92,7

2. Pengumpulan dan penyiapan sari umbi wortel (Daucus carota L.) Umbi wortel diperoleh dari Lottemart Wholesale Yogyakarta. Umbi dicuci dengan air mengalir kemudian dilakukan sortasi basah. Umbi dikupas kulitnya tipis-tipis. Umbi ditimbang bobotnya lalu dilakukan pengambilan sari menggunakan blender kemudian disaring untuk menghilangkan ampas sehingga didapat sari wortel murni. 3. Penghomogenan dan pewarnaan bedak tabur Bahan-bahan bedak dihomogenkan dengan bantuan blender mulai dari bobot yang terkecil. Sebanyak 150 ml ekstrak wortel ditambahkan dan didiamkan selama 6 hari untuk mewarnai komponen bedak. Kandungan air dikeringkan dengan oven pada suhu 40-45C selama 3 hari. Dilakukan pengecilan ukuran serbuk bedak dengan menggunakan blender kering dan serbuk bedak diayak dengan ayakan dengan nomer Mesh 40.


4. Pembuatan kontrol positif dan kontrol negatif Tabel VII. Formula bahan uji Bahan Amilum Magnesium stearat Titanium dioksida Sari wortel Metil paraben SLS Asam salisilat Arbutin

F1 1g -

F2 1g -

F3 F4 F5 F6 92,7 g 92,7 g 92,7 g 92,7 g 3g 3g 3g 3g 6g 6g 6g 6g 150 g 0,3 g 0,3 g 0,3 g 0,3 g 1g 0,5 g 5g

Tabel VII. Keterangan: F1=amilum; F2=magnesium stearat; F3=SLS; F4=asam salisilat; F5=sediaan bedak tabur; F6=arbutin. Kontrol positif = F3; Kontrol negatif = F1, F2, F4, F6

Bahan-bahan yang digunakan sebagai kontrol positif yaitu SLS, dihomogenkan dengan basis dan bahan tambahan yang digunakan kecuali sari umbi wortel. Untuk kontrol negatif digunakan amilum manihot, asam salisilat, arbutin dan magnesium stearat. Bahan uji dibuat dengan konsentrasi 1% untuk SLS, asam salisilat dengan konsentrasi 0,5% dan arbutin dengan konsentrasi 5%. 5. Slug Irritation Test a. Pengumpulan dan determinasi siput Siput

diperoleh dari wilayah Perumda, Ungaran,

Kabupaten

Semarang. Determinasi dilakukan dengan mencocokan karakteristik siput dengan literatur. Untuk klasifikasi spesies siput, dilakukan pembedahan untuk mengetahui bentuk alat kelamin siput sebagai pembeda yang khas berdasarkan literatur. Siput yang digunakan untuk prosedur uji adalah siput yang memiliki berat antara 3-4 g.


b. Slug Irritation Test Uji iritasi menggunakan slug irritation test diadaptasi dari prosedur uji Slug Mucosal Test mengacu pada penelitian yang dilakukan oleh Adriaens (2006). Uji iritasi dievaluasi dengan menempatkan siput pada 1 g bahan uji dengan konsentrasi bahan uji amilum 100%, magnesium stearat 100%, SLS 1%, asam salisilat 0,5% dan arbutin 5% dalam periode waktu 60 menit dan diukur jumlah lendir diproduksi. Masing-masing siput dan cawan petri ditimbang. Bahan uji dimasukkan ke dalam cawan petri, kemudian siput diletakkan di atas bahan uji dan ditunggu selama 60 menit. Siput kemudian dipindah ke cawan petri baru, kemudian ditambahkan 1 ml Phospate Buffer Saline (PBS) di dekat bagian bawah tubuh siput dan didiamkan selama 60 menit untuk menarik biomarker yang dikeluarkan oleh siput (ALP, LDH dan albumin). Setelah 60 menit, cairan PBS yang telah kontak dengan tubuh siput ditampung dalam microtube. c. Pengukuran kadar albumin Pengukuran kadar albumin menggunakan metode spektrofotometri. Sebanyak 8 µl mukus yang diproduksi oleh siput setelah diberi PBS diambil dan ditambahkan dengan 800 µl reagen albumin dan diencerkan menggunakan akuades sebanyak 3200 µl. Komposisi reagen albumin disajikan pada Tabel V. Absorbansi dibaca pada panjang gelombang 630 nm.


d. Pengukuran ALP Pengukuran kadar ALP menggunakan metode spektrofotometri. Mukus yang diproduksi setelah ditambahkan PBS diambil 20 µl, dimasukkan ke dalam labu ukur 5 ml, ditambahkan reagen pertama sebanyak 800 µl dan reagen kedua sebanyak 200 µl, kemudian ad dengan akuades hingga tanda batas 5 ml. Komposisi reagen ALP disajikan pada Tabel III. Larutan didiamkan selama 3 menit dan diukur. Pengukuran absorbansi dilakukan kembali pada waktu 4, 5 dan 6 menit. Absorbansi dibaca pada panjang gelombang 405 nm. e. Pengukuran LDH Pengukuran kadar albumin menggunakan metode spektrofotometri. Mukus yang diproduksi setelah ditambahkan PBS diambil 20 µl, dimasukkan kedalam labu ukur 5 ml, ditambahkan reagen pertama sebanyak 800 µl dan reagen kedua 200 µl, kemudian ad dengan NaCl 0,9% hingga tanda batas 5 ml. Komposisi reagen LDH disajikan pada Tabel IV. Larutan didiamkan selama 1 menit dan diukur. Pengukuran absorbansi dilakukan kembali pada waktu 2, 3 dan 4 menit. Absorbansi dibaca pada panjang gelombang 340 nm.


G. Analisis hasil 1. Validasi protokol slug irritation test a. Perhitungan persen mukus % mukus =

bobot mukus yang dikeluarkan x 100% bobot siput

b. Perhitungan ALP ALP [U/L] = Δabsorbansi/menit x faktor koresponding (3300) c. Perhitungan albumin Albumin

g

Absorbansi sampel g dL = absorbansi standar x konsentrasi standar ( dL)

d. Perhitungan aktivitas LDH Aktivitas LDH [U/L] = Δabsorbansi/menit x faktor koresponding (10.080) e. Penentuan nilai cut off Dicari nilai cut off dari faktor yang digunakan untuk prediksi respon iritasi berdasarkan variabel persen mukus, kadar ALP, kadar albumin, dan kadar LDH menggunakan Classification And Regression Tree pada program RStudio. f. Penentuan jumlah data true positive, false positive, true negative, false negative Data slug irritation test diprediksi sebagai iritan maupun non-iritan sesuai nilai cut off dari faktor yang digunakan. Dinyatakan true positive, false positive, true negative, false negative jika :


Tabel VIII. Confusion Matrix

Literatur

Prediksi CART Iritan

Non-iritan

Iritan

true positive

false negative

Non-iritan

false positive

true negative

g. Perhitungan nilai spesifisitas dan sensitivitas TN

1) Spesifisitas = TN+FP TP

2) Sensitivitas = TP+FN Keterangan: TP = True Positive TN = True Negative FP = False Positive FN = False Negative 2. Prediksi sifat iritatif sediaan bedak tabur Jika nilai sensitivitas dan spesifisitas metode dengan prediksi CART >60% maka dapat dilakukan prediksi sifat iritatif dari sediaan. Prediksi dilakukan sesuai dengan faktor klasifikasi dan nilai cut off yang didapatkan dari metode CART.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Formulasi Formula yang digunakan pada penelitian ini adalah formula bedak tabur acuan dari Dewi (2012). Bahan-bahan yang digunakan dalam pembuatan bedak tabur antara lain amilum manihot, magnesium stearat, titanium dioksida, metil paraben dan sari wortel. Sedian bedak tabur akan diuji potensi iritasinya menggunakan Slug Irritation Test jika protokol telah dinyatakan valid dengan metode Classification and Regression Tree (CART).

B. Pembuatan Bedak Tabur Sebelum dilakukan pencampuran komponen-komponen bedak tabur, hal yang pertama dilakukan adalah pembuatan sari umbi wortel. Wortel dipotongpotong kemudian dicuci bersih dengan air mengalir. Wortel yang sudah bersih kemudian dihancurkan menggunakan blender untuk mendapatkan sari wortel yang diinginkan. Tidak digunakan juice extractor dikarenakan keterbatasan alat penelitian. Untuk memisahkan sari wortel dengan ampasnya digunakan kain saring. Penghomogenan sari wortel dilakukan dengan cara diaduk. Proses pencampuran komponen bedak tabur yang meliputi amilum, titanium dioksida, dan metil paraben dilakukan dengan menggunakan blender. Hal ini bertujuan agar pencampuran lebih homogen dan praktis apabila dibandingkan dengan


penggunaan mortir dan stamper. Pencampuran bahan dilakukan dengan urutan kuantitas bahan yang kecil hingga kuantitas yang terbesar yaitu metil paraben, titanium dioksida dan amilum dengan tujuan mempermudah pencampuran bahan sehingga didapatkan campuran yang homogen. Penambahan sari umbi wortel dilakukan setelah semua bahan tercampur. Sari wortel kemudian dicampur menggunakan blender dengan komponen bedak lainnya kecuali magnesium stearat. Digunakan 150 g sari wortel dalam setiap

100

g

sediaan

bedak

tabur.

Penghomogenan

berguna

untuk

menghomogenkan komponen-komponen bedak tabur dan untuk memperkecil ukuran partikel. Penghomogenan dilakukan selama 1 menit yang merupakan waktu optimal penghomogenan serbuk mengacu pada penelitian yang dilakukan oleh Dewi (2012). Setelah komponen bedak terbasahi sempurna, dilakukan pendiaman selama 6 hari pada suhu kamar yang bertujuan agar sari wortel dapat mewarnai seluruh komponen bedak tabur. Pengeringan dilakukan setelah pendiaman 6 hari di oven dengan suhu tidak lebih dari 45C karena senyawa karotenoid dapat terdegradasi pada pemanasan tinggi di atas 60C (Ruswanti, 2010). Untuk meminimalkan degradasi karotenoid, digunakan suhu 40-45C. Pengeringan dilakukan selama 3 hari. Setelah dilakukan pengeringan, serbuk bedak akan membentuk cake, dikarenakan komponen air sudah menguap pada saat pemanasan. Cake yang sudah kering kemudian dihaluskan dan dihomogenkan kembali menggunakan blender. Waktu yang digunakan untuk penghomogenan tidak boleh terlalu lama


karena proses penghomogenan menggunakan blender akan menghasilkan energi panas yang dikhawatirkan dapat mendegradasi senyawa karotenoid pada bedak. Penambahan magnesium stearat dilakukan di akhir pembuatan bedak dikarenakan sifat nonpolar yang dimiliki magnesium stearat. Jika penambahan dilakukan bersamaan dengan bahan lainnya, maka magnesium stearat tidak bisa bercampur dengan bahan lain. Pencampuran dilakukan menggunakan blender selama 1 menit untuk meminimalisir kontak senyawa karotenoid dengan panas yang dihasilkan blender.

C. Pembuatan Kontrol Positif dan Kontrol Negatif Sediaan Kontrol positif dan kontrol negatif dibuat dengan prosedur yang sama dengan pembuatan sediaan bedak tabur (kecuali amilum manihot dan magnesium stearat) tanpa menggunakan sari wortel. Seluruh bahan-bahan tanpa sari wortel dihomogenkan menggunakan blender dari kuantitas bahan terkecil sampai kuantitas bahan terbesar. Penghomogenan dilakukan selama 1 menit. Tidak dilakukan proses pendiaman dan pemanasan karena pada kontrol positif tidak digunakan pewarna dari sari wortel. Amilum dan magnesium strearat digunakan sebagai bahan uji karena kedua bahan tersebut terdapat dalam formula sediaan bedak tabur. Amilum digunakan sebagai komponen daya serap bedak sedangkan magnesium stearat digunakan sebagai komponen daya lekat pada bedak. Tidak ditemukan potensi iritasi pada amilum dan magnesium stearat sehingga kedua bahan ini dapat digunakan sebagai kontrol negatif (BeMiller dkk., 2009; Rowe dkk., 2009).


Sodium Lauryl Sulfate (SLS) dibuat dengan kadar 1% dalam 100 g sediaan. Berdasarkan studi iritasi kulit akut pada hewan disimpulkan bahwa 0,5% - 10% Sodium Lauryl Sulfate menyebabkan iritasi ringan (Robinson dkk., 2010). Sodium Lauryl Sulfate (SLS) dengan kadar 1% digunakan karena mampu mengiritasi siput tetapi tidak membuat siput mati. Pada tahap orientasi digunakan kadar 1, 2 dan 5%. Hasilnya siput yang diberi SLS kadar 2 dan 5% mati, sedangkan pada kadar 1% siput tetap hidup. Jika siput mati selama penelitian, maka mukus yang sudah dihasilkan tidak bisa digunakan karena siput akan berhenti memproduksi ALP, albumin dan LDH yang akan diukur sebagai parameter kerusakan jaringan pada siput. Asam salisilat dibuat dengan kadar 0,5% dalam 100 g sediaan. Dalam kosmetik, penggunaan asam salisilat dibatasi maksimal 2% karena penggunaan berlebihan akan menyebabkan iritasi pada kulit (Kepala Badan Pengawasan Obat dan Makanan, 2011). Asam salisilat dengan kadar 0,5% digunakan karena asam salisilat dengan kadar 0,5% tidak membuat siput mati. Pada tahap orientasi digunakan kadar 0,5, 1, 1,5 dan 2%. Hasilnya siput yang diberi asam salisilat kadar 1, 1,5 dan 2% mati, sedangkan pada kadar 0,5% siput tetap hidup. Kontrol negatif arbutin dibuat dengan kadar 5% dalam 100 g sediaan. Digunakan 5% karena batas penggunaan arbutin pada sediaan topikal adalah 7% (Scientific Committee on Consumer Products, 2008). Penggunaan arbutin dengan kadar 5% dianggap tidak menimbulkan iritasi dan dapat digunakan sebagai kontrol negatif.


D. Slug Irritation Test 1. Pengumpulan dan determinasi siput Siput diperoleh dari wilayah Perumda, Ungaran, Kabupaten Semarang. Populasi siput paling banyak ditemukan ketika musim hujan. Siput ditempatkan di wadah plastik berlubang dan diberi makan sayuran. Determinasi dilakukan dengan mencocokan karakteristik siput dengan literatur. Determinasi siput dilakukan untuk menentukan spesies siput yang digunakan. Perlu dilakukan determinasi karena perbedaan spesies siput dapat menyebabkan perbedaan data yang didapatkan. Untuk klasifikasi spesies siput, dilakukan pembedahan untuk mengetahui bentuk alat kelamin siput sebagai pembeda yang khas berdasarkan literatur. Hasil determinasi (Lampiran 8) menyatakan bahwa siput yang digunakan merupakan jenis Laevicaulis alte. 2. Slug Irritation Test Pada Slug Irritation Test, siput yang sudah ditimbang kemudian diletakkan di cawan petri yang sudah dibersihkan dan ditimbang sebelumnya. Siput diberi perlakuan dengan diberi bahan-bahan uji yaitu amilum, magnesium stearat, Sodium Lauryl Sulfate, asam salisilat, sediaan bedak tabur dan arbutin selama 60 menit. Selama 60 menit perlakuan, siput akan memproduksi mukus sebagai mekanisme pertahanan diri. Semakin iritatif suatu bahan seharusnya produksi mukus akan semakin banyak karena produksi mukus pada siput merupakan mekanisme pertahanan diri untuk melindungi seluruh bagian tubuh siput dari bahan iritan. Oleh karena itu produksi mukus dapat digunakan untuk melihat adanya potensi iritasi suatu bahan.


Setelah 60 menit perlakuan, siput dibersihkan dari sisa sediaan menggunakan cotton bud kemudian dipindahkan ke cawan petri baru. Siput diberi Phospate Buffer Saline (PBS) pH 7,4 dan dibiarkan selama 60 menit. PBS berfungsi untuk menarik biomarker dari siput sebagai respon kerusakan jaringan. Sampel PBS kemudian diuji menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Didapatkan nilai absorbansi masing-masing sampel untuk 3 jenis variabel yaitu ALP, LDH dan albumin (data dapat dilihat pada Lampiran 4). Nilai absorbansi kemudian dikonversi menjadi kadar masing-masing variabel. Tabel IX. Data slug irritation test

Magnesium stearat

Amilum manihot

Bahan Uji

Replikasi 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Persen mukus (%) 4,412 5,561 2,927 4,276 1,379 3,148 8,477 9,845 3,598 0,006 1,054 0,525 0,147 0,868 -4,481 1,206 0,427 1,461 1,100 0,906

LDH (U/L) -3,360 0,000 -3,360 3,360 0,000 10,080 -3,360 0,000 -3,360 13,440 0,000 0,000 1,100 0,000 1,100 0,000 -1,100 -1,100 0,000 -2,200

ALP (U/L) 11,000 12,100 9,900 5,500 15,400 3,300 4,400 5,500 19,800 12,100 9,900 4,400 11,000 12,100 14,300 9,900 11,000 2,200 13,200 11,000

Albumin (g/dL) -0,208 0,127 0,509 0,106 0,172 0,172 0,220 0,110 0,157 -0,110 0,081 0,173 0,451 0,053 0,172 0,172 0,094 0,157 0,110 -0,055


Tabel IX. Data slug irritation test (lanjutan)

Arbutin

Sediaan


Bahan Uji

Replikasi 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Persen mukus (%) 3,837 4,500 5,519 4,602 3,447 3,660 6,278 10,277 27,397 6,791 2,168 4,535 9,040 10,799 8,209 10,814 6,146 10,031 10,632 8,445 4,922 0,955 1,496 0,170 1,861 2,048 1,002 1,370 1,712 3,045 3,350

LDH (U/L) -3,360 -16,800 -6,720 6,720 -3,360 0,000 -3,360 3,360 -6,720 -3,360 -3,360 0,000 -3,360 3,360 13,440 0,000 16,800 0,000 -3,360 0,000 0,000 0,000 3,360 3,360 3,360 3,360 6,720 10,080 -23,520 0,000 0,000

ALP (U/L) 33,000 18,700 5,500 29,700 16,500 24,200 27,500 2,200 8,800 23,100 9,900 8,800 9,900 13,200 8,800 11,000 7,700 6,600 4,400 7,700 6,600 7,700 24,200 16,500 9,900 7,700 6,600 9,900 13,200 7,700 4,400

Albumin (g/dL) 0,081 0,520 0,497 0,145 0,185 0,185 0,173 0,157 0,157 -0,152 -0,028 0,092 0,520 0,509 0,198 0,145 0,172 0,173 0,110 0,235 0,014 0,092 0,497 0,509 0,158 0,185 0,172 0,110 0,157 0,173 0,083

Parameter persen mukus dihitung dari produksi mukus yang dihasilkan dibagi dengan bobot siput kemudian dikalikan 100%. Prinsip pengukuran ALP pada penelitian ini adalah mengukur kecepatan pembentukan p-nitrofenol dari


reaksi antara reagen dan sampel uji. Jumlah p-nitrofenol yang terukur secara fotometrik sebanding dengan jumlah ALP pada sampel. Jika pada sampel terdapat enzim ALP, maka enzim tersebut akan mengubah p-nitrofenilfosfat (terdapat pada reagen) menjadi p-nitrofenol. Reaksi ditunjukkan pada reaksi (1). P-nitrofenilfosfat + H2O

ALP

Fosfat + P-nitrofenol

(1)

Parameter ALP dihitung dari selisih absorbansi permenit dikalikan dengan faktor koresponding yang tertera pada petunjuk kerja reagen ALP yaitu sebesar 3.300. Prinsip pengukuran LDH adalah dengan mengubah piruvat dan NADH pada reagen yang digunakan menjadi laktat dan NAD+ yang akan dibaca pada panjang gelombang 340 nm. Reaksi ditunjukkan pada reaksi (2). Piruvat + NADH

LDH

Laktat + NAD+

(2)

Parameter LDH dihitung dari selisih absorbansi permenit dikalikan dengan faktor koresponding yang tertera pada petunjuk kerja reagen LDH yaitu sebesar 10.080. Prinsip pengukuran albumin adalah membuat kompleks Bromocresol Green dengan albumin yang akan dibaca pada panjang gelombang 630 nm. Reaksi dapat dilihat pada reaksi (3). Bromocresol green (BCG) + albumin

Kompleks BCG-albumin (3)

Parameter albumin dihitung dari absorbansi sampel dibagi dengan absorbansi standar kemudian dikalikan dengan konsentrasi standar yang digunakan yaitu 4 g/dL. Data slug irritation test (Tabel IX) akan digunakan untuk validasi menggunakan metode Classification and Regression Tree (CART).


3. Validasi menggunakan metode Classification and Regression Tree (CART) Validasi protokol dilakukan dengan menggunakan metode Classification and Regression Tree (CART) pada program RStudio. Dilakukan prediksi sifat iritatif bahan uji dengan memasukkan data persen mukus, kadar ALP, LDH dan albumin sebagai faktor penentu klasifikasi. Persen mukus digunakan untuk memprediksi potensi iritasi, sedangkan kadar ALP, LDH dan albumin digunakan untuk memprediksi kerusakan jaringan pada siput. Ada beberapa tipe splitting dalam CART. Pada penelitian ini digunakan 2 tipe yaitu tipe class dan tipe anova. Keduanya dibandingkan dengan melihat output yang dihasilkan dari masing-masing tipe. Output yang diharapkan adalah output berupa pengelompokan dengan nilai binary (0 dan 1). Berdasarkan data pada Lampiran 6, baik menggunakan tipe class maupun tipe anova, keduanya memberikan variabel penting yang sama dengan nilai cut off yang juga sama, yaitu variabel persen mukus dengan nilai cut off sebesar 0,0325. Cut off pada CART merupakan titik di mana sensitivitas dan spesifisitas suatu metode mencapai titik maksimal. Karena variabel yang digunakan hanya persen mukus, maka dapat disimpulkan bahwa bahan uji yang digunakan memiliki potensi iritasi, tetapi tidak menimbulkan kerusakan jaringan pada siput. Penentuan parameter yang digunakan didapatkan dari validasi menggunakan metode CART. Validasi menggunakan metode CART dapat dilihat pada Lampiran 7. Prediksi

dilanjutkan

dengan

membuat

tree

construction

untuk

menentukan klasifikasi masing-masing bahan berdasarkan variabel yang sudah


ditentukan. Perbedaan antara keduanya terlihat ketika data diplot ke dalam bentuk tree construction.

a b Gambar 6. Classification (a) and Regression (b) Tree (CART) Classification Tree memiliki output berupa kelas. Pada Gambar 6(a). nilai 0 dan 1 menunjukkan kelas. Nol menunjukkan kelas non-iritan dan satu menunjukkan kelas

iritan.

Bahan

uji

dengan persen

mukus

<0,0325

diklasifikasikan sebagai bahan non-iritan dan bahan uji dengan persen mukus 0,0325 diklasifikasikan sebagai bahan iritan. Dari 50 data, didapatkan 31 masuk kelas 0 (non-iritan) dan 19 masuk kelas 1 (iritan). Regression Tree memiliki output berupa rata-rata dari node (nilai kontinu). Pada Gambar 6(b), nilai 0 dan 0,5263 merupakan rata-rata dari node. Nilai 0,5263 menunjukkan bahwa bahan uji yang masuk ke dalam kelompok iritan tidak mutlak bernilai 1. Karena penelitian ini bertujuan salah satunya untuk menentukan penggolongan bahan uji dalam bentuk kelas, maka lebih dipilih tipe class untuk menggambarkan klasifikasinya. Tipe anova tidak dipilih karena tidak diharapkan output berbentuk nilai kontinu.


Untuk melihat sensitivitas dan spesifisitas metode, dilakukan perhitungan nilai positif benar (true positive), negatif benar (true negative), positif palsu (false positive) dan negatif palsu (false negative) dengan menggunakan confusing matrix. Tabel X. Confusion Matrix prediksi CART

Literatur

Prediksi CART Iritan

Non-iritan

Iritan

10

0

Non-iritan

9

31

Data dikatakan positif benar (true positive) jika pada literatur bahan dikatakan iritan dan prediksi CART bahan dikatakan iritan. Data dikatakan negatif benar (true negative) jika pada literatur bahan dikatakan non-iritan dan pada prediksi CART dikatakan non-iritan. Data dikatakan positif palsu (false positive) jika pada literatur bahan dikatakan non-iritan dan pada prediksi CART bahan dikatakan iritan. Data dikatakan negatif palsu (false negative) jika pada literatur bahan dikatakan iritan dan prediksi CART bahan dikatakan non-iritan. Menurut Fentem et al. (cit., Dhondt, 2005), metode Slug Irritation Test dinyatakan valid jika nilai spesifisitas dan sensitivitas >60%. Pada penelitian didapatkan nilai spesifisitas sebesar 77,5% dan nilai sensitivitas 100% untuk kedua metode. Dapat disimpulkan bahwa metode valid untuk menentukan sifat iritatif sediaan bedak tabur.


4. Prediksi sifat iritatif sediaan bedak tabur Sediaan bedak tabur diprediksi sifat iritatifnya menggunakan metode yang telah divalidasi sebelumnya. Data persen mukus sediaan bedak tabur kemudian dibandingkan dengan nilai cut off yang didapatkan dari CART yaitu 0,0325. Tabel XI. Perbandingan nilai cut off dengan persen mukus sediaan bedak tabur Replikasi Persen mukus sediaan bedak tabur (x100%) Nilai cut off 1 0,045 2 0,090 3 0,108 4 0,082 5 0,102 6 0,061 0,0325 7 0,100 8 0,106 9 0,084 10 0,049 Mean ± SEM 0,0836 ± 0,01

Dari Tabel XI, dapat dilihat pada 10 replikasi yang dilakukan, nilai persen mukus sediaan bedak tabur lebih besar dari nilai cut off yang didapatkan. Dapat disimpulkan bahwa sediaan bedak tabur yang diuji memiliki potensi iritasi. Pada penelitian yang dilakukan Dewi (2012), telah dilakukan Uji Draize dengan menggunakan hewan uji kelinci. Hasil menunjukkan bahwa sediaan bedak tabur yang digunakan tidak mengiritasi. Jika kedua data dibandingkan, terjadi perbedaan kesimpulan. Hal ini disebabkan karena metode Slug Irritation Test yang sudah valid dinilai lebih sensitif untuk pengujian iritasi sediaan bedak tabur dibandingkan dengan uji iritasi pada kelinci, sehingga bahan yang mungkin tidak mengiritasi kelinci dapat mengiritasi siput. Metode Slug Irritation Test dikatakan lebih sensitif karena barrier pada tubuh siput tidak sekuat barrier pada kulit


kelinci. Uji kelinci tetap harus dilakukan sebagai pembanding karena sediaan yang diuji merupakan sediaan topikal dan kulit kelinci lebih dapat menggambarkan kulit manusia jika dibandingkan dengan bagian luar siput.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. KESIMPULAN 1. Protokol slug irritation test menunjukkan hasil yang valid untuk pengujian iritasi sediaan bedak tabur amilum manihot menggunakan pewarna carotenoid dari umbi wortel dengan metode Classification and Regression Tree (CART) baik dengan tipe splitting class maupun anova dengan nilai spesifisitas 77,5% dan sensitivitas 100%. 2. Berdasarkan nilai cut off yang didapatkan dari prediksi CART, sediaan bedak tabur amilum manihot menggunakan pewarna carotenoid dari umbi wortel diprediksi bersifat iritatif sebagai sediaan topikal.

B. SARAN 1. Kontrol positif dan kontrol negatif yang digunakan perlu diperbanyak agar hasil yang didapatkan semakin valid dan dapat merepresentasikan bahan-bahan yang digunakan di pasaran. 2. Perlu diseimbangkan proporsi antara kontrol positif dan kontrol negatif dengan menambahkan bahan iritan untuk kontrol positif dan bahan non-iritan untuk kontrol negatif dengan klasifikasi yang benar. 3. Perlu dilakukan optimasi langkah kerja dari preparasi sampel sampai sampel siap diukur.

45


DAFTAR PUSTAKA Adriaens, E., 2006, The Slug Mucosal Irritation assay: an alternative assay for local tolerance testing, Research, pp. 1-9. Archer, G., Balls, M., Bruner, L.H., Curren, R.D., Fentem, J.H., Holzhütter, H.G., dkk., 1997, The validation of toxicological prediction models, ATLA, 25, pp. 505-516. Asgar, A., dan Mussadad, 2006, Optimasi, Cara, Suhu, dan Lama Blansing sebelum Pengeringan pada Wortel, J. Hort., 16(3), hal. 245-252. Balls, M., Goldberg, A.M., Fentem, J.H., Broadhead, C.L., Burch, M.F.W., Fraizer, J.M., dkk., 1990, The Three Rs: The Way Forward: The Report and Recommendations of ECVAM Workshop, Utrecht University, The Netherlands. Barker, G.M., Price, R. dan Briggs, C., 2005, Priorities for addition to the fijian protected natural areas network: an assasment based on complementary in land snail assemblages, New Zealand Landcare Research contract report prepared for Wildlife Conservation Society, Suva, p. 162. BeMiller J. dan Whistler R., 2009, Starch: Chemistry and Technology, Elsevier, USA, pp. 527, 544, 550. Breiman, L., Friedman J.H., Olshen R.A., dan Stone C.J., 1993, Classification And Regression Tree, Chapman And Hall, New York. Brodie, G., dan Barker, G.M., 2012, Laevicaulis alte (Férussac, 1822), Family Veronicellidae, USP Introduced Land Snails of The Fiji Island Fact Sheet Series, No. 3. Cahyono, B., 2002, Wortel Teknik Budidaya dan Analisa Usaha Tani, Kanisius, Yogyakarta, hal. 15, 18-19. Casati, S., Worth, A., Amcoff, P. dan Whelan, M., 2013, EURL ECVAM Strategy for Replacement of Animal Testing for Skin Sensitisation Hazard Identification and Classification, Publications Office of the European Union, Luxembourg, p. 3. Council of Europe, 2008, Active ingredients used in cosmetic: safety survey, Council of Europe Publishing, Strasbourg, pp. 33-34.

46


Dewi, I.C., 2012, Perbandingan Sifat Fisis Bedak Tabur Berbahan Dasar Amilum Solani (Solanum tuberosum L.) dan Amilum Manihot (Manihot utilissima L.) dengan Pewarna Karotenoid dari Umbi Wortel (Daucus carota L.), Skripsi, 23-24, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Dhondt, M., 2005, Optimisation and Validation of An Alternative Mucosal Irritation Test, Dissertation, Ghent University, Belgium, 2, 14, 36. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1979, Farmakope Indonesia, jilid III, Departemen Keseharan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 56. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995, Farmakope Indonesia, jilid IV, Departemen Keseharan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 107-108. Fentem, J.H., Briggs, D., Chesne, C., Elliott, G., Harbell, J., Heylings, J.R., Portes, P., Rouget, R., Van De Sandt, J. dan Botham, P., 2001, A prevalidation study on in vitro tests for acute skin irritation: results and evaluation by the management team. Toxicology in Vitro, 15, 57-93. Hartati, A., Zain, Ismaini dan Ulama, Brodjol Sutijo S., 2012, Analisis CART (Classification And Regression Tree) pada Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Kepala Rumah Tangga di Jawa Timur Melakukan Urbanisasi, Jurnal Sains Dan Seni ITS Vol. 1, No. 1, (Sept. 2012), D100. Irsan, Manggau, M.A., Pakki, E,, dan Usmar, 2013, Uji Iritasi Krim Antioksidan Ekstrak Biji Lengkeng (Euphoria longana Stend) pada Kulit Kelinci (Oryctolagus cuniculus), Majalah Farmasi dan Farmakologi, Vol. 17, No.2 – Juli 2013, hal. 55 – 60. Kepala Badan Pengawasan Obat dan Makanan, 2011, Persyaratan Teknis Bahan Kosmetika, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 40. Lestari, F., 2007, Bahaya Kimia: Sampling & Pengukuran Kontaminan Kimia di Udara, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, hal. 189. Leyden, J.J., dan Rawling, A.V., (Eds.), 2002, Skin Moisturization, Cosmetic Science and Technology Series, Marcel Dekker, Inc., New York, pp. 324328, 331, 354-356, 613-614, 625.


McComb, R., Bowers, G., dan Posen, S., 1979, Alkaline Phospatase, Plenum Press, New York, pp. 44-46. Michael dan Ash, 2004, Handbook of Preservatives, Synapes Information Resources Inc., USA, p. 535. Mitsui, T., 1997, New Cosmetic Science, 2th ed, (Ed), Elsevier Science B. V., Netherlands, pp. 375-376. Mortensen, A., 2006, Carotenoids and Other Pigment as Natural Colorant, Pure and Applied Chemistry., 78(8), 1447-1491. Poucher, W.A., 1992, Poucher’s Perfumes, Cosmetics and Soaps, volume 3 Cosmetics, in Butler, H., (Ed.), Poucher’s Perfumes, Cosmetics and Soaps, volume 3 Cosmetics, Academic Publishers, Netherlands, pp. 111112, 178-183. Robinson, V.C., Bergfeld W.F., Belsito D.V., Hill R.A., Klaassen C.D., Marks J.G., dkk., 1983, Final Report on the Safety Assessment of Sodium Lauryl Sulfate, International Journal of Toxicology, 29(4), 127-181. Rowe, R.C., Sheskey, P.J., dan Quinn, M.E., 2009, Handbook of Pharmaceutical Excipient, 6th edition, Pharmaceutical Press and American Pharmacists Association 2009, Washington D. C., pp. 405-406, 441-442, 651-653. Roy, D., dan Saha, J., 1981, Acute Toxicity of Dyes used in Drugs and Cosmetics, The Eastern Pharmacist, pp. 125-126. Ruwanti, S., 2010, Optimasi Kadar -caroten pada Proses Pembuatan Tepung Ubi Jalar Oranye (Ipamoea batatas L.) dengan Menggunakan Response Surface Methodology (RSM), Laporan Penelitian, Fakultas Pertanian Universitas Sebelas Maret, Surakarta. Scientific Committee on Consumer Products, 2005, Extended Opinion on the Safety Evaluation of Parabens, European Commission, Europe, p. 3. Scientific Committee on Consumer Products, 2008, Opinion on β-arbutin, European Commission, Europe, p. 10. Scientific Committee On Cosmetic Products And Non-Food Products, 2002, Opinion Of The Scientific Committee On Cosmetic Products And NonFood Products Intended For Consumers Concerning: Salicylic Acid, European Commission, Europe, p. 4. Scientific Committee On Cosmetic Products And Non-Food Products, 2000, Opinion Of The Scientific Committee On Cosmetic Products And Non-


Food Products Intended For Consumers Concerning: Titanium dioxide, European Commission, Europe, p. 30. Tranggono, R.I., dan Latifah, F., 2007, Buku Pedoman: Ilmu Pengetahuan Kosmetik, Gramedia Pustaka Utama, hal. 11, 13. Wibowo, D.S., 2000, Anatomi Tubuh Manusia, Grasindo, Jakarta, hal. 26. Worth, A. P., dan Balls, M., 2001, The Importance of the Prediction Model in the Validation of Alternative Tests, ECVAM, Institute for Health and Consumer Protection, European Commission Joint Research Centre, 21020 Ispra (VA), Italy. Zuang, V., Schäffer, M., Tuomainen, A.M., Amcoff, P., Bernasconi, C., Bremer, S., dkk., 2013, EURL ECVAM progress report on the development, validation and regulatory acceptance of alternative methods, Publications Office of the European Union, Luxembourg, p. 12.


LAMPIRAN

50


Lampiran 1. Data penimbangan dan dokumentasi formula

1. Data penimbangan wortel Wortel yang digunakan

: 2,5 kg

Sari yang didapatkan

: 750 g sari wortel

1 kg wortel mendapatkan

: 300 g sari wortel

100 g bedak tabur membutuhkan : 150 g sari wortel Orientasi yang dilakukan

: 3 formula

Bedak tabur akhir

: 1 formula

Total sari yang digunakan

: 4 x 150 g = 600 g sari wortel

2. Dokumentasi bedak tabur

Formula bedak tabur akhir


Lampiran 2. Dokumentasi Slug Irritation Test

Laevicaulis alte

Perlakuan amilum manihot

Perlakuan texapon

Organ dalam Laevicaulis alte

Perlakuan magnesium stearat

Perlakuan asam salisilat


Perlakuan sediaan bedak tabur

Perlakuan arbutin


Lampiran 3. Data penimbangan siput

Sodium lauril sulftat

Magnesium stearat

Amilum manihot

Bahan Uji

Rep

Bobot siput (g)

Berat petri (g)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

3,128 3,129 3,143 3,204 3,335 3,145 3,421 3,169 3,613 3,904 3,415 3,046 3,406 3,457 3,370 3,896 3,980 3,765 3,456 3,973 3,362 3,111 3,515 3,433 3,800 4,044 3,393 3,902 3,004 3,711

34,480 35,794 46,451 34,476 35,788 46,433 38,331 46,922 34,487 39,142 45,667 45,925 40,632 45,653 43,362 40,625 43,378 48,796 46,459 46,450 46,916 47,759 39,095 46,909 45,313 46,818 45,668 39,103 51,027 46,881

Berat petri+ sediaan (g) 35,480 36,795 47,453 35,481 36,791 47,451 39,343 47,923 35,491 40,148 46,674 46,940 41,637 46,455 44,365 41,625 44,378 49,796 47,459 47,444 47,929 48,781 40,099 47,911 46,315 47,830 46,685 40,104 52,036 47,891

Berat petri+ sediaan+ CottonBud (g) 35,643 36,962 47,613 35,645 36,933 47,601 39,374 48,093 35,661 40,329 46,848 47,102 41,803 46,810 44,502 41,792 44,524 49,941 47,629 47,590 48,106 48,932 40,275 48,040 46,477 47,988 46,839 40,252 52,196 48,044

Berat petri+ sediaan+ CottonBud+ mukus (g) 35,781 37,136 47,705 35,782 36,979 47,700 39,664 48,405 35,791 40,555 46,884 47,118 41,808 46,840 44,351 41,839 44,541 49,996 47,667 47,626 48,235 49,072 40,469 48,198 46,608 48,136 47,052 40,653 53,019 48,296

Berat mukus (g) 0,138 0,174 0,092 0,137 0,046 0,099 0,290 0,312 0,130 0,226 0,036 0,016 0,005 0,030 -0,151 0,047 0,017 0,055 0,038 0,036 0,129 0,140 0,194 0,158 0,131 0,148 0,213 0,401 0,823 0,252


Arbutin

Sediaan

Asam salisilat

Bahan Uji

Rep

Bobot siput (g)

Berat petri (g)

Berat petri+ sediaan (g)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

3,692 3,800 3,654 3,219 4,032 3,498 3,328 3,988 3,810 3,690 3,881 3,031 3,565 3,216 3,699 3,677 3,868 3,847 3,742 3,596 3,981 3,610 3,537 3,117 3,125 3,792 3,430 3,564 3,875 3,701

48,793 40,587 38,323 48,785 47,748 38,316 37,922 41,813 46,831 38,322 41,810 51,020 45,322 41,803 51,013 40,581 45,931 40,640 40,589 45,370 37,914 43,370 46,828 37,907 39,091 45,916 35,794 45,325 47,766 35,794

49,801 41,593 39,337 49,783 48,752 39,314 38,925 42,814 47,835 39,359 42,811 52,021 46,321 42,816 52,014 41,580 46,937 41,647 41,589 46,390 38,915 44,389 47,831 38,852 40,095 46,918 36,796 46,331 48,776 36,795

Berat petri+ sediaan+ CottonBud (g) 49,978 41,747 39,506 49,937 48,931 39,456 39,076 42,961 47,977 39,505 42,984 52,190 46,497 42,988 52,150 41,744 47,077 41,807 41,754 46,545 39,077 44,555 48,000 39,052 40,263 47,091 36,970 46,472 48,933 36,964

Berat petri+ sediaan+ CottonBud+ mukus (g)

Berat mukus (g)

50,024 41,757 39,569 49,978 49,007 39,533 39,204 43,118 48,075 39,585 43,160 52,464 46,882 43,252 52,550 41,970 47,465 42,216 42,070 46,722 39,115 44,609 48,006 39,110 40,327 47,129 37,017 46,533 49,051 37,088

0,046 0,010 0,063 0,041 0,076 0,077 0,128 0,157 0,098 0,080 0,176 0,274 0,385 0,264 0,400 0,226 0,388 0,409 0,316 0,177 0,038 0,054 0,006 0,058 0,064 0,038 0,047 0,061 0,118 0,124


Lampiran 4. Data selisih absorbansi ALP, LDH dan albumin Data ALP Replikasi 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Amilum 0,003 0,004 0,003 0,002 0,005 0,001 0,001 0,002 0,006 0,004

Mg Stearat 0,003 0,001 0,003 0,004 0,004 0,003 0,003 0,001 0,004 0,003

Absorbansi SLS Asam salisilat 0,010 0,008 0,006 0,005 0,002 0,005 0,009 0,006 0,005 0,003 0,007 0,005 0,008 0,002 0,001 0,003 0,003 0,006 0,007 0,003

Sediaan 0,003 0,003 0,004 0,003 0,003 0,002 0,002 0,001 0,002 0,002

Arbutin 0,002 0,007 0,005 0,003 0,002 0,002 0,003 0,004 0,002 0,001

Sediaan

Arbutin

0,000 0,000 0,000 0,001 0,000 0,002 0,000 0,000 0,000 0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,001 0,001 -0,002 0,000 0,000

Data LDH Replikasi 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Amilum

Mg Stearat

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,001 0,000 0,000 0,000 0,001

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 -0,001

Absorbansi SLS Asam salisilat 0,000 -0,002 -0,001 0,001 0,000 0,000 0,000 0,000 -0,001 0,000

0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 0,000 -0,001 0,000


Data albumin Replikasi 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Amilum -0,018 0,011 0,044 0,008 0,013 0,013 0,014 0,007 0,01 -0,008

Mg Stearat 0,007 0,015 0,039 0,004 0,013 0,013 0,006 0,01 0,007 -0,004

Absorbansi SLS Asam salisilat 0,007 0,013 0,045 0,043 0,043 0,046 0,011 0,009 0,014 0,012 0,014 0,013 0,011 0,006 0,01 0,008 0,01 0,007 -0,011 -0,002

Sediaan 0,008 0,045 0,044 0,015 0,011 0,013 0,011 0,007 0,015 0,001

Arbutin 0,008 0,043 0,044 0,012 0,014 0,013 0,007 0,01 0,011 0,006


Lampiran 5. Data persen mukus, LDH, ALP dan Albumin


Magnesium stearat

Amilum manihot

Bahan Uji

Replikasi 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Persen mukus (%) 4,412 5,561 2,927 4,276 1,379 3,148 8,477 9,845 3,598 0,006 1,054 0,525 0,147 0,868 -4,481 1,206 0,427 1,461 1,100 0,906 3,837 4,500 5,519 4,602 3,447 3,660 6,278 10,277 27,397 6,791

LDH (U/L) -3,360 0,000 -3,360 3,360 0,000 10,080 -3,360 0,000 -3,360 13,440 0,000 0,000 1,100 0,000 1,100 0,000 -1,100 -1,100 0,000 -2,200 -3,360 -16,800 -6,720 6,720 -3,360 0,000 -3,360 3,360 -6,720 -3,360

ALP (U/L) 11,000 12,100 9,900 5,500 15,400 3,300 4,400 5,500 19,800 12,100 9,900 4,400 11,000 12,100 14,300 9,900 11,000 2,200 13,200 11,000 33,000 18,700 5,500 29,700 16,500 24,200 27,500 2,200 8,800 23,100

Albumin (g/dL) -0,208 0,127 0,509 0,106 0,172 0,172 0,220 0,110 0,157 -0,110 0,081 0,173 0,451 0,053 0,172 0,172 0,094 0,157 0,110 -0,055 0,081 0,520 0,497 0,145 0,185 0,185 0,173 0,157 0,157 -0,152


Arbutin

Sediaan

Asam salisilat

Bahan Uji

Replikasi 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Persen mukus (%) 1,246 0,263 1,724 1,274 1,885 2,201 3,846 3,937 2,572 2,168 4,535 9,040 10,799 8,209 10,814 6,146 10,031 10,632 8,445 4,922 0,955 1,496 0,170 1,861 2,048 1,002 1,370 1,712 3,045 3,350

LDH (U/L) 3,360 0,000 0,000 3,360 0,000 0,000 0,000 -3,360 -6,720 -3,360 0,000 -3,360 3,360 13,440 0,000 16,800 0,000 -3,360 0,000 0,000 0,000 3,360 3,360 3,360 3,360 6,720 10,080 -23,520 0,000 0,000

ALP (U/L) 25,300 17,600 16,500 19,800 9,900 15,400 5,500 11,000 18,700 9,900 8,800 9,900 13,200 8,800 11,000 7,700 6,600 4,400 7,700 6,600 7,700 24,200 16,500 9,900 7,700 6,600 9,900 13,200 7,700 4,400

Albumin (g/dL) 0,150 0,497 0,532 0,119 0,158 0,172 0,094 0,125 0,110 -0,028 0,092 0,520 0,509 0,198 0,145 0,172 0,173 0,110 0,235 0,014 0,092 0,497 0,509 0,158 0,185 0,172 0,110 0,157 0,173 0,083


Lampiran 6. Data prediksi true positive, true negative, false positive dan false negative

Literatur

Persen mukus

LDH

ALP

alb

Prediksi

TP

FP

TN

FN

amilum

0

0.044

-3.360

11.00

-0.208

1

0

1

0

0

amilum

0

0.056

0.000

12.10

0.127

1

0

1

0

0

amilum

0

0.029

-3.360

9.90

0.509

0

0

0

1

0

amilum

0

0.043

3.360

5.50

0.106

1

0

1

0

0

amilum

0

0.014

0.000

15.40

0.172

0

0

0

1

0

amilum

0

0.031

10.080

3.30

0.172

0

0

0

1

0

amilum

0

0.085

-3.360

4.40

0.220

1

0

1

0

0

amilum

0

0.098

0.000

5.50

0.110

1

0

1

0

0

amilum

0

0.036

-3.360

19.80

0.157

1

0

1

0

0

amilum

0

0.000

13.440

12.10

-0.110

0

0

0

1

0

mg stearat

0

0.011

0.000

9.90

0.081

0

0

0

1

0

mg stearat

0

0.005

0.000

4.40

0.173

0

0

0

1

0

mg stearat

0

0.001

1.100

11.00

0.451

0

0

0

1

0

mg stearat

0

0.009

0.000

12.10

0.053

0

0

0

1

0

mg stearat

0

-0.045

1.100

14.30

0.172

0

0

0

1

0

mg stearat

0

0.012

0.000

9.90

0.172

0

0

0

1

0

mg stearat

0

0.004

-1.100

11.00

0.094

0

0

0

1

0

mg stearat

0

0.015

-1.100

2.20

0.157

0

0

0

1

0

mg stearat

0

0.011

0.000

13.20

0.110

0

0

0

1

0

mg stearat

0

0.009

-2.200

11.00

-0.055

0

0

0

1

0

sls

1

0.038

-3.360

33.00

0.081

1

1

0

0

0

sls

1

0.045

-16.800

18.70

0.520

1

1

0

0

0

sls

1

0.055

-6.720

5.50

0.497

1

1

0

0

0

sls

1

0.046

6.720

29.70

0.145

1

1

0

0

0

sls

1

0.034

-3.360

16.50

0.185

1

1

0

0

0

sls

1

0.037

0.000

24.20

0.185

1

1

0

0

0

sls

1

0.063

-3.360

27.50

0.173

1

1

0

0

0

sls

1

0.103

3.360

2.20

0.157

1

1

0

0

0

sls

1

0.274

-6.720

8.80

0.157

1

1

0

0

0

sls

1

0.068

-3.360

23.10

-0.152

1

1

0

0

0

salisilat

0

0.012

3.360

25.30

0.150

0

0

0

1

0

Bahan Uji


Literatur

Persen mukus

LDH

ALP

alb

Prediksi

TP

FP

TN

FN

salisilat

0

0.003

0.000

17.60

0.497

0

0

0

1

0

salisilat

0

0.017

0.000

16.50

0.532

0

0

0

1

0

salisilat

0

0.013

3.360

19.80

0.119

0

0

0

1

0

salisilat

0

0.019

0.000

9.90

0.158

0

0

0

1

0

salisilat

0

0.022

0.000

15.40

0.172

0

0

0

1

0

salisilat

0

0.038

0.000

5.50

0.094

1

0

1

0

0

salisilat

0

0.039

-3.360

11.00

0.125

1

0

1

0

0

salisilat

0

0.026

-6.720

18.70

0.110

0

0

0

1

0

salisilat

0

0.022

-3.360

9.90

-0.028

0

0

0

1

0

arbutin

0

0.010

0.000

7.70

0.092

0

0

0

1

0

arbutin

0

0.015

3.360

24.20

0.497

0

0

0

1

0

arbutin

0

0.002

3.360

16.50

0.509

0

0

0

1

0

arbutin

0

0.019

3.360

9.90

0.158

0

0

0

1

0

arbutin

0

0.020

3.360

7.70

0.185

0

0

0

1

0

arbutin

0

0.010

6.720

6.60

0.172

0

0

0

1

0

arbutin

0

0.014

10.080

9.90

0.110

0

0

0

1

0

arbutin

0

0.017

-23.520

13.20

0.157

0

0

0

1

0

Arbutin

0

0.030

0.000

7.70

0.173

0

0

0

1

0

Arbutin

0

0.034

0.000

4.40

0.083

1

0

1

0

0

10

9

31

0

Bahan Uji

Total

Perhitungan sensitivitas dan spesifisitas

1) Sensitivitas

=

TP TP + FN 10

= 10+0 = 1 2) Spesifisitas

=

TN TN +FP 31

= 31+9 = 0,775


Lampiran 7. Data Classification and Regression Tree (CART) menggunakan RStudio



Data di atas menggunakan 2 jenis tipe splitting yaitu class dan anova. Variabel yang digunakan pada klasifikasi (tree construction) pada kedua metode adalah persen mukus dengan cut off sebesar 0,0325. Yang membedakan dari kedua metode tersebut terlihat pada tree construction.


Tree construction

Pada Classification Tree, nilai 0 dan 1 menunjukkan kelas. Nol menunjukkan kelas non-iritan dan satu menunjukkan kelas iritan. Bahan uji dengan persen mukus <0,0325 masuk kelas 0 dan bahan uji dengan persen mukus >0,0325 masuk kelas 1. Pada Regression Tree, nilai 0 dan 0,5263 menunjukkan nilai rata-rata dari node. Pada metode anova, kelas tidak dibagi menjadi 0 dan 1, melainkan menggunakan rata-rata dari node. Bahan yang masuk kelompok iritan dianggap tidak mutlak bernilai 1.


Lampiran 8. Surat determinasi siput


BIOGRAFI PENULIS Penulis skripsi dengan judul Uji In Vivo dan Validasi Protokol Slug Irritation Test pada Sediaan Bedak Tabur Amilum Manihot (Manihot Utilissima L.) menggunakan Pewarna Karotenoid dari Umbi Wortel (Daucus Carota L.) dengan Metode Classification And Regression Tree (CART) memiliki nama lengkap Carolina Dea Sekar Panintra. Penulis lahir pada tanggal 5 Juli 1993 di Bandarlampung, Lampung sebagai anak kedua dari tiga bersaudara, pasangan Yohanes Handoko dan Katarina Murjiyati. Penulis telah menempuh pendidikan di TK Xaverius Way Halim Permai tahun 1997-1999, lalu melanjutkan pendidikan di Sekolah Dasar Xaverius Way Halim Permai pada tahun 1999-2005. Penulis melanjutkan pendidikan di SMP Fransiskus Tanjungkarang pada tahun 20052008. Penulis menyelesaikan jenjang SMA di SMA Fransiskus Bandarlampung pada tahun 2008-2011. Setamat dari SMA, penulis melanjutkan kuliah S1 di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2011-2015. Selama aktif sebagai mahasiswa, penulis pernah mengikuti kegiatan kepanitiaan antara lain kepanitiaan pelepasan wisuda Fakultas Farmasi (2012), kepanitiaan Temu Alumni Akbar Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma (2013), kepanitiaan Komisi Pemilihan Umum Gubernur BEMF dan Ketua DPMF Farmasi (2013) dan juga mengikuti berbagai macam acara dan seminar.

SKRIPSI. Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi. Oleh: Carolina Dea Sekar Panintra

Recommend Documents