POUŽITÍ BioNexia® Strep A kazeta je imunologická testovací souprava pro rychlé a kvalitativní stanovení antigenů Streptokoku skupiny A přímo z výtěru z krku. ÚVOD Beta-hemolytické streptokoky skupiny A jsou hlavní bakteriální příčinou infekcí horního dýchacího ústrojí, jako jsou akutní tonsilitida, akutní zánět hltanu a spála. Bylo prokázáno, že včasná diagnóza a léčba infekcí způsobených streptokoky skupiny A významně snižují výskyt klinicky závažných příznaků a infekčních komplikací jakými jsou revmatická horečka a poststreptokoková glomerulonefritida. Standardní kultivační diagnostické metody těchto onemocnění jsou založeny na izolaci a následné identifikaci organismů (1,2), které trvají zpravidla 24 - 48 hodin. Vývin nových imunologických technik (3,4) detekce streptokoků skupiny A přímo z výtěrového tampónu umožňují lékaři rychlé stanovení diagnózy a nasazení okamžité cílené léčby.
PRINCIP TESTU Diagnostika streptokoků skupiny A v BioNexia® Strep A testovací kazetě je na základě imunologické sendvičové eseje. Test obsahuje proužek nitrocelulózové membrány v místě diagnostické linie potažený králičími protilátkami proti streptokoku skupiny A a v oblasti kontrolní linie kozími protilátkami proti králičím protilátkám. Při zpracování výtěrového tampónu dochází použitím extrakčních činidel 1 a 2 k získání antigenů streptokoků skupiny A a jeho následovným aplikováním do testovací kazety dochází k navázání barevně značené zlatem konjugované protilátky na přítomné antigeny streptokoků skupiny A a tvorbě komplexu protilátka - strep A antigen. Kapilárním vzlínáním dochází k pohybu komplexu membránou směrem k testovací linii s vázanými králičími protilátkami anti-Strep A. Jestliže vzorek obsahoval streptokoky skupiny A a došlo tedy k tvorbě komplexu, vzniká v oblasti testovací linie sendvičovou reakcí barevný komplex. Při nepřítomnosti antigenů streptokoka zůstává linie bez zabarvení. Nezávisle na přítomnosti antigenu streptokoků skupiny A vždy dochází k barevné reakci v oblasti kontrolní linie s navázanými kozími protilátkami proti králičím protilátkám. Přítomnost barevné kontrolní linie slouží jako potvrzení 1) aplikace dostatečného množství vzorku 2) dostatečného pohybu vzorku membránou a 3) také jako kontrola použitých reagencií.
REAGENCIE A POSKYTOVANÝ MATERIÁL reagencie A: 1.0 M dusitan sodný (7 ml): T toxický; R25: toxický při požití reagencie B: 0.4 M kyselina octová (7 ml) 20 testovacích kazet 20 extrakčních zkumavek s kapátky 20 sterilních výtěrových tampónů 1 stojan na zkumavky ●
● ● ● ● ●
POTŘEBNÝ MATERIÁL, KTERÝ NENÍ SOUČÁSTÍ KITU stopky
●
SKLADOVÁNÍ Všechny reagencie, včetně BioNexia® Strep A testovací kazety, mohou být uchovávány při pokojové teplotě nebo v ledničce (2°C - 30°C). Bezpečnostní pokyny ● Pouze pro in-vitro diagnostiku. ● Pouze pro použití v laboratořích a lékařských ordinacích odborným personálem. ● Každá testovací kazeta je jen na jedno použití. ● Nekombinujte reagencie a kazety z různých šarží. ● Nezaměňujte uzávěry reakčních činidel. ● Neužívejte po datu exspirace. ● Při provádění testu nekuřte, nejezte a nepijte. ● Neprovádějte test, pokud je poškozen obal testu. ● Nepoužívejte výtěrové tampony, pokud je poškozen obal tamponu. ● Užívejte jen dakronové či tampony z umělého hedvábí s plastovými špejlemi. Neužívejte calciumalginátové a vatové tampony či tampóny s dřevěnými špejlemi. ● Vždy dodržujte aplikaci požadovaného množství vzorku. ● Reagencie A je toxická při požití. ● Pozitivní a negativní kontroly obsahují azid sodný, který je potenciálně reaktivní s olovem a mědí za tvorby explozivních azidů kovů. ● Test provádějte při pokojové teplotě s temperovanou testovací soupravou (na 15- 30°C). ● Neaplikujte vzorky do detekční oblasti (testovací linie). ● Nedotýkejte se detekční oblasti a vyhněte se jejímu znečištění. ● Během celého průběhu testu vždy dodržujte bezpečnostní postupy pro manipulaci s infekčním materiálem a chemickými sloučeninami. ● S výtěrovými tampóny, BioNexia® Strep A testovacími kazetami a extrakty zacházejte jako s infekčním odpadem a zajistěte i jejich náležitou likvidaci dle platných bezpečnostních předpisů. ● Výsledek testu odečítejte vždy po uplynutí doporučeného času (5 minut). ● Skladujte a přepravujte soupravu pouze při uvedených teplotách. ODBĚR VZORKŮ A SKLADOVÁNÍ Výtěr z krku (tonsil) se získává standardním provedením dle doporučených postupů, jak popsán viz Facklam (1) a Ross (5). Používejte jen dakronové tampóny či tampóny z umělého hedvábí s plastovými držadly. Neužívejte kalcium alginátové a vatové tampóny či tampóny s dřevěnými špejlemi. Je doporučeno provádět test vzorku co nejrychleji po jeho odběru. Jestliže není toto možné, uchovávejte výtěrový tampón ve sterilní, suché a dobře utěsněné nádobě v chladničce. Pokud je vzorek třeba transportovat v kapalné formě, lze použít upravené Stuartovo transportní médium podle pokynů uvedených výrobcem. Neužívejte žádné přepravní média obsahující agar čí živočišné uhlí. Výtěrové tampóny mohou být skladovány v chladničce až 3 dny. Pokud je zároveň prováděno kultivační vyšetření, lze po získání vzorku tampón lehce otřít o misku s 5% krevním agarem před použitím BioNexia® Strep A testovací kazety. Extrakční reagencie zabíjí bakterie na tampónu a tudíž je pro kultivační vyšetření po provedení testu nepoužitelný. NÁVOD K PROVEDENÍ TESTU Obecné pokyny: 1) Všechny vzorky a reagencie včetně BioNexia® Strep A testovací kazety je třeba před provedením testu nechat temperovat na pokojovou teplotu. 2) Je třeba dbát na zamezení kontaktu lahviček s reagenciemi a nádob s výtěrovými tampóny, aby nedošlo ke zkřížené kontaminaci roztoků.
Postup extrakce: 1) Do čisté extrakční zkumavky přidejte 4 kapky reagencie A. 2) Přidejte 4 kapky reagencie B, okamžitě přitiskněte tampon se vzorkem ke stěně extrakční zkumavky a několikrát s ním otočte, aby se uvolnil vzorek z tamponu do roztoku. Poté ponechte zkumavku při pokojové teplotě a to nejméně 1 minutu, ale ne déle než 15 minut. Postup testu: 1) Nasaďte kapátko na extrakční zkumavku a nakapejte 3 kapky (přibližně 120 µl) vzorku z extrakční zkumavky do kruhové jamky v testovací kazetě. 2) Odečtěte výsledek testu během 5 minut. V závislosti na koncentraci antigenu mohou být pozitivní výsledky čitelné již po 1 minutě. Pro potvrzení negativního výsledku je třeba dodržet čas odečítání výsledku minimálně 5 minut. Výsledky by se neměly odečítat po více jak 10 minutách. INTERPRETACE VÝSLEDKŮ
Negativní výsledek: Jen jedna červená linie v kontrolní zóně (C). Žádná červená linie v testovací zóně (T) se neobjeví. Strep A antigen není detekovatelný.
Pozitivní výsledek: K červené linii v kontrolní zóně (C) se objeví druhá červená linie v testovací zóně (T). V tomto případě může mít barva v testovací zóně různou intenzitu v závislosti na množství antigenu. Tento výsledek dokazuje přítomnost Strep A.
Chybný test: Na testovací kazetě se neobjeví žádná linie nebo se objeví jen linie v testovací zóně. Opakujte celý test znovu.
KONTROLA JAKOSTI Správná laboratorní praxe vyžaduje použití kontroly jak o zkoušky správné funkčnosti testu. Tyto kontroly je možné objednat. Pozitivní kontrola obsahuje tepelně inaktivovaný antigen Streptokoka skupiny A.. Příprava pozitivní kontroly: Do čisté extrakční zkumavky přidejte 4 kapky reagencie A a 4 kapky reagencie B. Pozitivní kontrolu protřepáním dobře promíchejte a přidejte 1 kapku do extrakční zkumavky. Promíchejte výsledný roztok opatrně sterilním tamponem. OMEZENÍ Přesnost testu je velmi závislá na kvalitě odebraného vzorku. Falešně negativní výsledky mohou vzniknout špatným odběrem vzorku nebo špatným skladováním. Negativní výsledky byly pozorovány také u počínajícího onemocnění, kdy je ještě nízká koncentrace antigenu. Je-li v tomto případě předpokládaná Strep A pharingilis a ® test BioNexia Strep A je negativní, měla by být provedena kultivace. Test vzhledem k detekci antigenu nerozliší bezpříznakové bacilonosiče streptokoku skupiny A a pacienty s akutní infekcí. Pokud nesouhlasí klinické příznaky onemocnění s výsledkem testu, je nutné provést klasické kultivační vyšetření. Ve výjimečných případech při výrazném výskytu Staphylococcus aureus může dojít k falešně pozitivním výsledkům. Akutní infekce horních cest dýchacích, včetně akutní tonsilitidy mohou být způsobeny i streptokoky jiných sérologických skupin, stejně jako jinými patogeny. Stejně jako u všech laboratorních testů musí být výsledky interpretovány v souvislosti se všemi ostatními informacemi, které jsou ohledně pacienta k dispozici.
KLINICKÉ POZNÁMKY Je prokázáno, že přibližně 19% všech infekcí horních cest dýchacích je způsobeno streptokoky skupiny A (6). Infekce tohoto typu se většinou objevují v zimě a na jaře, zejména v oblastech s velkou hustotou obyvatelstva.
CHARAKTERISTIKY TESTU Hodnocení citlivosti testu ® Pro určení analytické citlivosti testovací kazety BioNexia Strep A, byly pěstovány streptokoky sk A na ® kultivačním médiu. Detekční limit testovací kazety BioNexia Strep A byl stanoven na 1,5 x105 mikroorganismů na test. Hodnocení specifity testu Pro určení specifity testovací kazety BioNexia® Strep A pro skupinu streptokoků A, byly použity následující kmeny streptokoků skupiny A s různým množstvím bakterií na test. Pozitivní výsledek, s detekčním limitem1,5 ® x105 bakterií na test pro všechny kmeny, ukazuje, že testovací kazeta BioNexia Strep A reaguje se specifickou relevantní skupinou streptokoků A. Testované kmeny Streptoccoccus pyogenes (skupiny A) SS-091; SS-410; SS-492; SS-496; SS-633; SS-634, SS-635, SS-721; SS-754; SS-799; ATCC-19615; Zkřížená reaktivita s ostatními mikroorganismy byly studovaná pomocí bakteriálních suspenzí v koncentraci 108 CFU/ml. Následující mikroorganismy nevykazovaly zkříženou reaktivitu s BioNexia® Strep A detekčním testem: Group B Streptococcus Group D Streptococcus Group G Streptococcus Streptococcus bovis Proteus vulgaris Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecium Corynebacterium diphtheriae Neisseria gororrhoeae Staphylococcus saprophyticus
Streptococcus mutans Neisseria meningitidis Streptococcus mitis Neisseria subflava Group F Streptococcus Pseudomonas aeruginosa Streptococcus faecalis Neisseria lactima Moraxella catarrhalis
Bordetella pertussis Streptococcus salivarius Candida albicans Group C Streptococcus Haemophilus parahaemolyticus Staphylococcus aureus Escherichia coli Streptococcus pneumoniae Neisseria sicca Streptococcus sanguis
SROVNÁVACÍ STUDIE Srovnávací studie byla provedena z výsledků vyšetření BioNexia® Strep A testovací soupravou a standardními kultivačními metodami, jež byly prováděny v několika různých mikrobiologických laboratořích. Výtěry z krku byly získány od dětí a dospělých s příznaky akutní tonsilitidy. Takto získané výtěrové tampony byly použity k inokulaci na krevní agar pro kultivační vyšetření a následně vyšetřeny BioNexia® Strep A testovacím kitem. Beta-hemolytické kolonie kultivované na krevním agaru byly skupinově identifikovány za využití standardní sérologické diagnostiky. Hodnocenými výsledky byla přítomnost či nepřítomnost streptokoka skupiny A. Kvantifikace u jednotlivých vzorků nebyla hodnocena. Získané výsledky: ®
BioNexia Strep A
Senzitivita 97.6% (95% CI,93.8% 99.4%) Specificita 97.5% (95% CI,93.7% 99.3%)
Literatura: 1. Facklam,R. R. and Carey, R. B., Streptococci and Aerococci, Manual of Clinical Microbiology, 4 th ed., Lennette, E. H., Balows, A., Hausler, W. J. and Shadomy, H. J. (eds), American Society for Microbiology, 1985, PP154-175. 2. Levinson, M. L. and Frank, P. F., Differentiation of Group A from other Beta Hemolytic Streptococci with Bacitracin, J. Bacteriol., 69,284-287(1995). 3. Edwards, e. a., phlillips, i. a., and Suiter, W. C., Diagnosis of Group A Streptococcal Infections Directly from throat secretions, J. Clin. Micro. 15,481-483 (1982). 4. Gupta, R., Talwar, G. P. And Gupta, S. K., Rapid Antibody Capture Assay for Detection of Group A Streptococci Using Monoclonal Antibody and Colloidal Gold-Monospecifi c Polyvalent Antibody Conjugate, J. Immunoassay, 13, 441-445 (1992) 5. Ross, P.W., Throat Swabs and Swabbing Technique, The Practitioner, 207,791-796 (1971). 6. Lauer, B. A., Rellar, L. B. and Mirrett, S., Effect of Atmosphere and Duration of Incubation on Primary Isolation of Group A Streptococci from Throat Cultures, J. Clin. Micro.,17,338-340 (1983). ____________________________________________________________
Symboly Pouze na jedno použití
Pro použití in-vitro Obsah
Datum exspirace
+30°C
Číslo šarže
+2°C
Skladujte při pokojové teplotě
____________________________________________________________
Máte nějaké otázky týkající se použití testu nebo jeho vyhodnocení?
Kontaktujte svého dodavatele nebo výrobce.
