Praktické zkušenosti s diagnostikou pertuse Ivana Stiborová, Josef Richter, Eva Jílková, Romana Mikešová, Vlastimil Král Centrum imunologie a mikrobiologie Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem
„Aktuality v diagnostice virových a bakteriálních infekcí“ odborný seminář firmy VIDIA, SZÚ Praha, 26.5.2014
Osnova sdělení • Pertuse v ZU UL – Historie – Metody používané v diagnostice pertuse
• Interpretace výsledků, mezinárodní standardy • Vakcinace proti B. pertussis • Příklady z laboratoře
Alergie Supplementum 1/2012
Metody používané v diagnostice pertuse CIM ZU UL • Celkové (polyvalentní) protilátky proti celobuněčnému antigenu – aglutinace (Test-Line), titr
• Protilátky proti toxinu B. pertussis – IgG, IgA, IgM – ELISA (Sekisui Virotech), jednotky VE/ml
• Protilátky proti PT, FHA, ACT – IgG, IgA – Imunoblot (Euroimmun)
• Přímý průkaz – PCR (Cepheid) • B. pertussis (103 bp IS481), B. parapertussis (101 bp IS1001) • Odběr nasofaryngeálního aspirátu (vykloktání cca 15-20 ml sterilního fyziologického roztoku po dobu cca 10 s, odběr do sterilní zkumavky, centrifugace 5 000 rpm, odsát supernatant, ponechat cca 0,5 ml, sediment resuspendovat, kolonková izolace soupravou fy QIAGEN )
Mezinárodní standardy WHO Reference Reagent Pertussis Antiserum (Human) 1st RR NIBSC code: 06/142
• •
• •
Mezinárodní porovnávací studie - zpráva WHO (Expert commitee on Biological standardization 10/2008) Postup přípravy standard (anti-PT, anti-FHA, anti-PRN) a ověření jejich možnosti využití při stanovení postvakcinačních i postinfekčních hladin protilátek proti B. pertussis na ákladě nově stanovených standardů lidského antiséra proti antigenům B. pertussis byly porovnány výsledky ELISA stanovení 22 laboratoří z 15 zemí světa Podle dokumentu ECDC „Guidance and protocol for the serological diagnosis of human infection with Bordetella pertussis“(2012) odpovídají IU/ml dříve používaným jednotkám EU/ml (ELISA units/ml), ve kterých jsou také uvedené výsledky mezinárodních studií ESEN.
Interpretace sérologických výsledků – postinfekční hladiny protilátek ECDC TECHNICAL DOCUMENT Guidance and protocol for the serological diagnosis of human infection with Bordetella pertussis As part of the EUpert-Labnet surveillance network Stockholm, October 2012, ISBN 978-92-9193-394-5, doi 10.2900/64470
Produkce protilátek 1 – 4 týdny po infekci Anti-PT IgG
< 40 IU/ml
40 – 100 IU/ml
Žádné známky akutní infekce B. pertussis
Nejasný sérologický nález
> 100 IU/ml
Akutní infekce B. pertussis
Stanovení anti-PT IgA (anti-FHA IgG, IgA)
Sérologické metody vs. přímý průkaz
Senzitivita testu Kultivace PCR Sérologie
Katarální stadium ++ ++ -/+
Paroxysm. stádium -/+ ++ ++
Rekonvalescence ++
Epidemiol. Mikrobiol. Imunol., 62, 2013, č. 3, s. 106–111
Iniciály pacienta
Vzestup titru
Výsledky ELISA
PCR
Rodinné vztahy
M
Doba trvání příznaků 3 týdny
8x (P)
N
P
9
M
3 týdny
4x (P)
N
P
bratři (dvojčata)
BJ
29
Ž
3 týdny
2x (N)
IgM i IgG
N
JJ
52
Ž
4 týdny
4x (P)
N
P
TJ
56
M
4 týdny
2x (N)
IgG
P
DP
32
Ž
5 týdnů
2x (N)
IgM
P
TP
13
M
10 týdnů
0x (N)
IgG
N
JŽ
22
M
3 týdny
2x (N)
N
P
VŽ
20
M
3 týdny
4x (P)
N
P
AP
8
Ž
5 týdnů
8x (P)
N
N
AP
18
Ž
5 týdnů
32x (P)
IgG
N
ML
10
M
5 týdnů
4x (P)
N
N
Věk
Pohlaví
AP
9
MP
dcera, matka, otec matka a syn bratři
sestřenice a bratranec
Interpretace sérologických výsledků – postvakcinační hladiny protilátek
• Séronegativní jedinci <5 EU/mL • U séronegativních osob postvakcinační hladiny anti-PT IgG >20 EU/mL. • U séropozitivních jedinců (>5 EU/mL a <20 EU/mL) čtyřnásobný vzestup původní hladiny anti-PT IgG • U séropozitivních jedinců >20 EU/mL nejméně dvojnásobný vzestup původní hladiny anti-PT IgG • Není znám korelát séroprotekce!
Registrované očkovací látky proti pertusi v ČR Název vakcíny
Složení vakcíny
Poznámka
ADACEL
toxoid DTP, FHA, pertaktin, fimbrie typ 2,3
Dospělí a děti >4 roky
ADACEL POLIO
toxoid DTP, FHA, pertaktin, fimbrie 2,3, PV1,2,3
>3 roky
BOOSTRIX
toxoid DTP, FHA, pertaktin
>4 roky
BOOSTRIX POLIO
toxoid DTP, FHA, pertaktin, PV 1,2,3
>4 roky
INFANRIX INFANRIX HEXA
toxoid DTP, FHA, pertaktin, HiB, VHB, PV
INFANRIX HiB INFANRIX POLIO INFANRIX – IPV+HiB
toxoid DTP, FHA, pertaktin HiB, PV
zdroj: www.vakciny.net, 2012
Muž, *1959 4.7.2013
22.7.2013
7.8.2013
18.10.2013
> 4069
512
512
1024
B. parapertussis [titr]
4069
> 4069
2048
1024
BP toxin IgM [VE/ml]
3,0
6,3
2,0
2,9
BP toxin IgA [VE/ml]
39,0
22,8
17,4
15,5
BP toxin IgG [VE/ml]
11,0
33,8
26,9
19,0
B. pertussis [titr]
Infekce B. pertussis, B. parapertussis (?)
Žena, *1973 24.1.2014
20.2.2014
28.3.2014
B. pertussis [titr]
64
128
128
B. parapertussis [titr]
32
32
32
BP toxin IgM [VE/ml]
6,1
3,0
3,8
BP toxin IgA [VE/ml]
43,1
18,8
6,6
BP toxin IgG [VE/ml]
24,5
27,3
21,3
Infekce B. pertussis
Žena, *1994 18.12.2013
24.1.2014
28.2.2014
13.5.2014
B. pertussis [titr]
64
512
256
256
B. parapertussis [titr]
32
2
2
nestanoveno
BP toxin IgM [VE/ml]
7,7
6,2
3,7
4,1
BP toxin IgA [VE/ml]
11,9
39,9
22,6
23,8
BP toxin IgG [VE/ml]
23,0
28,3
43,2
36,4
Infekce B. pertussis
Žena, AS *1953 17.3.2014
14.4.2014
32
64
BP toxin IgM [VE/ml]
nestanoveno
5,0
BP toxin IgA [VE/ml]
nestanoveno
3,0
BP toxin IgG [VE/ml]
4,0
12,9
B. pertussis [titr]
BOOSTRIX toxoid DTP, FHA, pertaktin
Muž, ZS *1951 17.3.2014
14.4.2014
16
128
BP toxin IgM [VE/ml]
nestanoveno
7,5
BP toxin IgA [VE/ml]
nestanoveno
3,5
BP toxin IgG [VE/ml]
0,9
5,6
B. pertussis IgG blot
nestanoveno
PT, FHA
B. pertussis IgA blot
nestanoveno
FHA
B. pertussis [titr]
BOOSTRIX toxoid DTP, FHA, pertaktin
Muž, OCh *1945 4.10.2010
17.3.2014
14.4.2014
B. pertussis [titr]
2
32
16
B. parapertussis [titr]
4
nestanoveno
nestanoveno
BP toxin IgM [VE/ml]
0,6
nestanoveno
3,0
BP toxin IgA [VE/ml]
1,3
nestanoveno
25,8
BP toxin IgG [VE/ml]
4,6
2,5
10,1
BOOSTRIX toxoid DTP, FHA, pertaktin
Žena, VCh, *1951 17.3.2014
14.4.2014
32
32
BP toxin IgM [VE/ml]
nestanoveno
3,2
BP toxin IgA [VE/ml]
nestanoveno
15,2
BP toxin IgG [VE/ml]
3,4
25,6
B. pertussis IgG blot
nestanoveno
ACT, PT, FHA
B. pertussis IgA blot
nestanoveno
FHA
B. pertussis [titr]
BOOSTRIX toxoid DTP, FHA, pertaktin
Muž, *1952 23.11.2013
18.6.2013
18.10.2013
25.11.2013
B. pertussis [titr]
2
4
32
16
B. parapertussis [titr]
32
32
16
4
BP toxin IgM [VE/ml]
nestanoveno
nestanoveno
2,8
3,8
BP toxin IgA [VE/ml]
nestanoveno
nestanoveno
5,6
10,0
BP toxin IgG [VE/ml]
0,9
nestanoveno
0,9
8,7 Anti-FHA IgG poz.
20.12.2013
4.4.2014
B. pertussis [titr]
256
16
B. parapertussis [titr]
32
32
BP toxin IgM [VE/ml]
nestanoveno
2,6
BP toxin IgA [VE/ml]
nestanoveno
0,6
BP toxin IgG [VE/ml]
8,5
3,8
B. pertussis IgG blot
nestanoveno
ACT, FHA
B. pertussis IgA blot
nestanoveno
ACT
ADACEL toxoid DTP, FHA, pertaktin, fimbrie typ 2,3
OA: pertuse v dětství
Pertussis: Challenges Today and for the Future James D. Cherry Pediatric Infectious Diseases, Mattel Children’s Hospital, Los Angeles, California, USA The Department of Pediatrics, David Geffen School of Medicine at the University of California Los Angeles, Los Angeles, California, USA
PLOS Pathogens | www.plospathogens.org | July 2013 | Volume 9 | Issue 7 | e1003418
The Future – Recently, much attention has been devoted to the resurgence of pertussis and solutions to the problem. On the table are new acellular pertussis vaccines and live attenuated vaccines. However, as I have stated previously, from the data presented above, the development of DTaP vaccines that are better than DTwP vaccines would seem unlikely. And, although not discussed here, it is my opinion that live vaccines will not provide as good protection as good DTwP vaccines. Therefore, I believe a high priority should be given to the development of less reactogenic whole-cell vaccines.
Děkuji za pozornost …
… a kolegům (Josef Richter, Eva Jílková, Romana Mikešová, Vlastimil Král)
za spolupráci
