Plán cvičení LS
Požadavky - obecně: Rozpisy
úloh na www.vscht.cz, stránky ÚTVP Vstupní a výstupní test Zásady BOZP, plášť Vlastní vzorky na hydrobiologii – 4 až 5 Na mikrobiologii není potřeba. Vzhled protokolů – v digi verzi před/v průběhu cvičení
Část hydrobiologie
1. Základy mikroskopování a práce s mikroskopem, typy objektivů, příprava preparátů, úprava vzorků před mikroskopováním, proměřování objektů v mikroskopu (měřicí okulár a objektivový mikrometr), počítací komůrky, konzervace vzorků, fixace objektů 2. Základní skupiny organismů, přítomné ve vodním prostředí 3. Stanovení koncentrace chlorofylu-a, stanovení objemové biomasy, stanovení saprobního indexu, hodnocení samočisticích procesů ve vodách 4. Hydrobiologický audit vodárenské soustavy - zdroj surové vody, technologické uspořádání a upravená voda (aplikace mikroskopické techniky pro vodárenské účely, hodnocení separační účinnosti, vločky koagulantu, průnik organismů filtry, apod.) 5. Hydrobiologický audit čistírny odpadních vod - aktivovaný kal, dosazovací nádrž (aplikace mikroskopické techniky pro čistírenské účely (hodnocení separační účinnosti, vločky aktivovaného kalu, průnik organismů přes dosazovací nádrže do recipientu, apod.)
pokryvnost v procentech 1 %, 3 %, 5 %, 10 %, 20 % a 40 % odhadovou stupnicí (stupnice abundance): 1, 2, 3, 5, 7 a 9 anorganické partikule, škrobová zrna, textilie, zbytky rostlinného a živočišného původu, saze, popílek, vločky koagulantu, korozní produkty, písek, atd. 1%
10 %
3%
20 %
5%
40 %
Saprobita L Vody
o x
n
S
S h I i
i 1
n
i
hi I i i 1
E
p i m
k
i
c
h
r
K
Odpadní vody u a
T Asaprobita
Sap rob ní val enc e
Postup: filtrace (skleněná vlákna), extrakce v 90% etanolu, vodní lázeň při 75°C (5 min), vyčištění extraktu (centrifugace), měření při 665 a 750 nm před a po okyselení vzorku HCl, výpočet (výsledky v µg/l) dle známých vlastností chlorofylu-a
Část mikrobiologie 1. Příprava selektivních a základních médií, roztoků a pomůcek pro mikrobiologický rozbor 2. Mikrobiologický rozbor I.- stanovení hygienických ukazatelů kvality vody, úprava vzorků, aplikace ředění, stanovení indikátorů fekálního znečištění, konfirmace (organotrofní MO, koliformní bakterie, E.coli, enterokoky), Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens, screeningové metody (Colilert) 3. Mikrobiologický rozbor II.- práce s kaly 5. Diagnostika - Gramova reakce, test na antibiotika, ENTEROtest Mikromycety (spady) subdeterminace
Přímý
výsev do půdy. AKE – KUMI22°C a KUMI36°C Vyjadřování počtů – přerostlé, nepočitatelné, splývající růst ….
Membránová
filtrace Tzv. indikátory fekálního znečištění: koliformní, E. coli, enterokoky. Quanti-Tray. Bazénové vody: pseudomonády a stafylokoky Anaerobní kultivace.
membránové filtry – 0,45 m, 100 ml vzorku
M-FC agar 24 hodin při 44 °C
termotolerantní koliformní bakterie modré
Escherichia coli -svítí podložky mCOLI test (po 2 hod při 36 °C) – pod UV světlem (360 nm)
Colilert:
Enterolert:
ČSN
EN ISO 16266 Jakost vod – Stanovení Pseudomonas aeruginosa – Metoda membránových filtrů ČSN EN ISO 6888-1 Mikrobiologie potravin a krmiv – Horizontální metoda stanovení počtu koagulázopozitivních stafylokoků (Staphylococcus aureus a další druhy) – Část 1: Technika s použitím agarové půdy podle Baird-Parkera
Pseudomonas aeruginosa
Konfirmace: acetamid, UV lampa, Kingovo B médium, oxidáza
Tabulka. Postup potvrzení kolonií rostoucích na Pseudomonas agar médiu/CN agaru Vzhled Test v kolonie na acetamidové CN agaru m tekutém médiu (produkce amoniaku z acetamidu) Modrozelené Není nutné provádět.
Oxidázový test (produkce oxidázy)
Výsledek: Potvrzeno (fluorescence) jako Kingovo médium B
Pseudomonas aeruginosa
Není nutné provádět.
Není nutné provádět.
ANO
Vykazující fluorescenci, ale NE modrozelené
+
Není nutné provádět.
Není nutné provádět.
ANO
Červenohnědé
+
+
+
ANO
Není nutné provádět.
Není nutné provádět.
Není nutné provádět.
NE
Ostatní
Pseudalert:
Staphylococcus aureus
Stanovení stafylokoků, vzhled kolonií na agarovém Baird-Parker médiu po 24 h (vlevo) a 48 h kultivace (vpravo).
Latexový test, vlevo příprava PASTOREXTMSTAPH-PLUS, vpravo test aglutinace na kartičce testu. Kruh označený „N“ slouží jako negativní kontrola, v dalších kruzích jsou již testy se suspektními koloniemi, které byly odebrány z Baird-Parker média tyčinkou a rozetřeny v latexu. Pouze jedna vykazuje pozitivní reakce, na kartičce je umístěna vpravo dole (pod negativní kontrolou).
Příprava anaerobního hrnce pro stanovení Clostridium perfringens, pohled na ukazatel manometru, který musí být v záporných hodnotách (dodržení anaerobního prostředí).
Různé typy půd pro stanovení plísní SBA, Médium a bromkresolová červeň, Dichloran glycerol apod. Různá aplikace vzorku: MF, spad, stěr
Rod Penicillium
Rod Rhizopus
Rod Fusarium (sp. poae)
MIKROLA-testy, např. ENTEROtest16 Nízké rozlišení. Pro přijatelnou identifikaci by byla potřebná alespoň 90% úspěšnost identifikace.
Hodnoty +/- jsou převedeny do číselné podoby (1, 2 a 4 za pozitivní reakce) a v případě negativní reakce 0. Po rozdělení do trojic (dvojic) jsou hodnoty sečteny, čímž vznikne šestimístné číslo. Zde: 400002 73,54 % jako Salmonella gallinarum, ze 7,84 % jako S. pullorum a z 11,82 % jako Shigella serovar A,B,C.
Chemické srážení - vyvločkování a tvorba vloček (elektrochemický proces, zeta-potenciál) TNV 75 5940 – “Mikroskopické posuzování separační účinnosti vodárenské biologie” (laboratorní koagulační, modelové a provozní zkoušky) Sleduje se: velikostní kategorie vloček, jejich tvar, charakter zachycených mikroorganismů (obaly, sliz, kategorie – koagulovatelnost) Separace vytvořených vloček: sedimentace (usazovací nádrže), čiření (čiřiče, vločkový mrak), flotace (flotační nádrže) Sledování stěn nádrží (biofilmy, nárosty, odkalování)
Kategorie organismů dle upravitelnosti
A
D
B
C
E
Stanovení organotrofních bakterií – aerobní/anaerobní Stanovení sporulátů – aerobní/anaerobní Patogenní mikroorganismy, nařízení vlády č.61/2003 Sb. ve znění 229/2007 Sb. – imisní standardy přípustného znečištění Hodnocení linky ČOV, recipient (TD) Kaly - Vláknité mikroorganismy (TD)
Identifikace do typů založena na mikroskopické analýze morfologických rysů v nativních preparátech existence větvení, pohyblivost tvar, umístění, délka a průměr růst epifytických bakterií přítomnost pouzdra tvar a velikost buněk přítomnost sirných a/nebo jiných granulí
Gram +
Gram v Gram –
a Neisserova barvení
Neisser –
Neisser + granule Neisser +
