PŘÍRUČKA PRO ODBĚR VZORKŮ. GENvia, s.r.o

Laboratorní řád PŘÍRUČKA PRO ODBĚR VZORKŮ Vypracoval Schválil

Mgr. Petra KAJANOVÁ RNDr. Miroslava KRKAVCOVÁ

Platnost od Nahrazuje

28.4.2015 1.9.2013

BR04 Strana č. Výtisk č.

1/11 1

PŘÍRUČKA PRO ODBĚR VZORKŮ GENvia, s.r.o. Obsah: 1. Účel a oblast platnosti 2. Seznam prováděných vyšetření 3. Původní dokumenty 4. Informace a návody pro klienty 5. Postupy pro odběry vzorků 5.1 Odběrové nádobky 5.2 Vyplnění štítků 5.3 Vlastní odběr 5.3.1 Odběr plodové vody-amniocentéza (AMC) 5.3.2 Odběr fetální (pupečníkové) krve 5.3.3 Odběr periferní krve 5.3.4 Odběr choriové tkáně 5.3.5 Odběr tkáně z potraceného plodu. 5.3.6 Odběr stěru ze sliznice dutiny ústní 6. Dostupnost Žádanek a Souhlasů 6.1 Kritéria pro odmítnutí vzorků 6.2 Postup při nesprávné identifikaci vzorku 7. Postup pro příjem vzorku 8. Klinické informace 9. Způsob skladování vzorků 10. Dodatečná a opakovaná vyšetření 11. Doba odezvy 12. Zásady na ochranu osobních informací 13. Sdělování výsledků 13.1 Hlášení výsledků v kritických intervalech 13.2 Vydávání výsledků 13.3 Obsah výsledkové zprávy 13.4 Změny výsledků

2 2 3 3 3 3 4 4 4 4 5 5 5 5 5 7 7 7 7 8 9 9 9 10 10 10 10 11

Laboratorní řád

BR04

PŘÍRUČKA PRO ODBĚR VZORKŮ Vypracoval: Schválil:


Platnost od: Nahrazuje:

28.4.2015 1.9.2013

Strana č. Výtisk č.

2/11 1

1. Účel a oblast platnosti dokumentu Odběr vzorku je nedílnou součástí úspěšně provedeného laboratorního vyšetření. Příručka pro odběr vzorků (dále jen Příručka) byla vypracována se záměrem seznámit klienty, lékaře a zdravotnický personál s nezbytnými požadavky pro odběr vzorků na vyšetření tak, aby výsledek vyšetření nebyl nesprávně provedeným odběrem negativně ovlivněn či dokonce znemožněn. Příručka je volně přístupná na webových stránkách laboratoře, stejně tak je vydána i v tištěné podobě a je součástí řízené dokumentace akreditované laboratoře.

2. Seznam prováděných laboratorních vyšetření Genetická laboratoř GENvia, s.r.o. nabízí aktuálně tato vyšetření: Cytogenetická a molekulárně cytogenetická vyšetření: 

Chromozomální vyšetření (stanovení karyotypu) plodové vody, fetální krve, choria a potracených plodů. Vedle vyšetření karyotypu provádí molekulárně cytogenetické vyšetření metodou FISH (fluorescenční in situ hybridizace) k vyloučení aneuploidií (např. Downova syndromu tj. trizomie chromozómu č.21, Edwardsova syndromu tj. trizomie chromozómu č.18, Patauova syndromu tj. trizomie chromozómu č.13, i dalších méně obvyklých) a numerických odchylek pohlavních chromozomů X a Y (Turnerův syndrom, Klinefelterův syndrom,aj.).



Preimplantační genetická diagnostika (PGD) metodou FISH k vyloučení numerických i strukturních aberací embryí



Chromozomální vyšetření (stanovení karyotypu) periferní krve, včetně vyšetření HRT ke zjištění strukturních přestaveb



Vyšetření mikrodelečních syndromů metodou FISH s použitím lokus-specifických sond (např. syndromů Prader-Williho , Angelmanova, DiGeorgeova , Wolf-Hirshornova, Cri-du-chat atp.)



Vyšetření k vyloučení chromozomálního mozaicistu



Vyšetření bezdětných manželských párů, u nichž je podezření na genetickou příčinu neplodnosti použitím cytogenetických a molekulárně cytogenetických metod



Vyšetření dárců spermií a oocytů,



Vyšetření získaných hromozomálních aberací z periferní krve u jedinců, kteří pracují v rizikovém prostředí, po onkologické léčbě apod.



Vyšetření novorozenců, dětí s psychomotorickou retardací, vrozenými vývojovými vadami, hypotrofií, nezralostí, atd.



Vyšetření mrtvorozených dětí

Molekulárně genetická vyšetření: 

Molekulární vyšetření genu pro cystickou fibrózu – 50 mutací (sterilita, azoospermie)



Molekulární vyšetření trombofilních mutací – mutace faktoru V Leiden, mutace v protrombinovém genu 20210A, mutace 677T v MTHFR genu a mutace 1298C v MTHFR genu.



Molekulární vyšetření mikrodelecí chromozomu Y



AmnioPCR z plodové vody a choriové tkáně (rychlé vyšetření trizomie chromozomu 13, 18, 21, X a Y)



Gilbertův syndrom (hyperbilirubinémie)



Vyšetření mutace genu pro Connexin 26 (porucha sluchu)



Vyšetření mutací genu pro kolagen COL1 a COL2



Prenatální i postnatální vyšetření DNA na čipu – Microarray-CGH



Test příbuznosti osob (test otcovství)

Laboratorní řád

BR04




28.4.2015 1.9.2013


3/11 1

3. Průvodní dokumenty Pro každé vyšetření prováděné v laboratoři GENvia je vždy nezbytné dodat ke vzorku i řádně vyplněnou průvodní dokumentaci. Jedná se o tyto dva dokumenty: 

Źádanka o vyšetření (BF33), resp. Žádanka na vyšetření testu příbuznosti osob (BF41) V žádance musí být vždy vyplněny identifikační údaje klienta (příjmení, jméno, RČ, adresa, pojišťovna), zaškrtnuta požadované vyšetření, musí být vždy opatřena razítkem pracoviště, které požaduje vyšetření s uvedením platného IČZ a ODBORNOSTi a musí být lékařem podepsána (podrobně viz. kapitola 6).



Souhlas vyšetřovaného (zákonného zástupce) s genetickým laboratorním vyšetřením (BF45/BF70), resp. Informovaný souhlas (BF42) Lékař je povinen plně informovat klienta o všech okolnostech týkajících se daného vyšetření a seznámit ho se všemi riziky plynoucími z prováděného vyšetření. Klient podpisem potvrdí, že byl se všemi skutečnostmi seznámen a s daným vyšetřením souhlasí a indikující lékař podpisem potvrdí, že takto učinil (podrobně viz. kapitola 6).

Oba výše uvedené formuláře zasílá indikující lékař zároveň se vzorkem do laboratoře. Bez dodání těchto dokumentů nebude vyšetření provedeno, resp. nebude vydán výsledek vyšetření. Poznámka: Oba formuláře (BF45 a BF70) obsahují stejný text, rozdíl je pouze v tom, že ve formuláři BF70 jsou předvyplněná zaškrtávací pole často opakovaných výkonů a v grafické úpravě.

4. Informace a návody pro klienty Většina odběrů pro genetická vyšetření se provádí ambulantně. Po invazivních odběrech (odběru plodové vody, fetální krve a choriové tkáně) se nedoporučuje fyzická námaha. Žádný z odběrů není potřeba provádět nalačno, jídlo ani pití neovlivňují výsledky vyšetření . Odběr plodové vody, fetální krve a choriových klků patří mezi vyšetření invazivní s rizikem možných těhotenských ztrát 0,5 - 1%. Žadatelům o zkoušku otcovství jsou poskytnuty informace ke zkoušce osobně nebo telefonicky. Základní informace o rozsahu prováděných vyšetřeních jsou dostupné na www stránkách laboratoře GENvia, s.r.o. (www.genvia.cz). Podrobné informace o jednotlivých vyšetřeních včetně interpretace výsledků je plně v kompetenci ošetřujícího lékaře-specialisty. Laboratoř poskytuje výsledky vyšetření a doplňující informace k provedenému vyšetření výhradně lékaři, který požadoval vyšetření, nikoliv vyšetřovanému klientovi nebo třetím osobám.

5. Postupy pro odběry vzorků 5.1. Odběrové nádobky Vzorky se odebírají sterilně do sterilních nádobek na jedno použití. Plodová voda a chorium se odebírají do sterilních zkumavek. Odebraná plodová voda se rozdělí do dvou sterilních zkumavek z důvodu kultivace dvou nezávislých kultur. K odběru fetální a periferní krve se nejčastěji používá uzavřený vakuový systém Vacuteiner (firma Becton Dickinson) s barevně rozlišenými zkumavkami s různými přísadami. Pro chromozomální vyšetření je nutno použít zkumavku se zeleným uzávěrem (obsahuje Na-heparin, popř. Li-heparin), pro izolaci DNA je nutno použít zkumavku s fialovým uzávěrem (obsahuje EDTA). Zcela výjimečně, nejsou-li k dispozici heparinizované podtlakové zkumavky, použijí se stříkačky heparinizované dle následujícího návodu: Do 5 ml stříkačky se natáhne cca 0,3 ml heparinu a stříkačka se jím protáhne. Po nasazení jehly se stiskne píst na doraz, takže zůstane heparin pouze v kónusu stříkačky a v jehle, kterou se bude provádět odběr. Je nezbytné postupovat přesně podle tohoto návodu, protože kultivaci nepříznivě ovlivňuje nedostatek heparinu i jeho nadbytek! Na chromosomální vyšetření nelze použít sraženou krev. Srážení krve brání heparin, který ale v přebytku

Laboratorní řád PŘÍRUČKA PRO ODBĚR VZORKŮ Vypracoval: Schválil:



28.4.2015 1.9.2013


4/11 1

znemožňuje kultivaci buněk. Použití nesprávného množství heparinu je nejčastější příčinou neúspěšné kultivace, proto je potřeba dodržet přesně tento postup. Pozor, krev též nesmí zmrznout! Potracená tkáň se odebírá do sterilní zkumavky nebo sterilní lahvičky. Taktéž je nutné zabránit zmrznutí vzorku! Odběr stěru z dutiny ústní k získání DNA na test příbuznosti osob (zkoušky otcovství, kontaminace mateřskou tkání) se provádí stěrovou soupravou s certifikátem pro soudní účely. Přesný postup při odběru je popsán v přiloženém letáčku.

5.2. Vyplnění štítků Nezbytnou identifikaci biologického materiálu před přidělením laboratorního čísla tvoří štítek s příjmením a číslem pojištěnce. Pokud je nádobka s biologickým materiálem označena pouze jménem pacienta, laboratoř ji může přijmout pouze za předpokladu, že je jednoznačně připojena k žádance s kompletní identifikací pacienta (přilepením, v uzavřeném obalu). V případě, že se jedná o dva odběry např. plodové vody dvojčat, je nezbytné označit zvlášť (velkým písmenem či číslem) každou odběrovou zkumavku. Tímto způsobem je vzorek evidován i v laboratoři.

5.3 Vlastní odběr Před samotným odběrem vzorku odebírající (odběrová sestra nebo lékař) ověří totožnost pacienta, kterému je odebírán primární biologický vzorek dotazem na jméno a ověří, zda pacient splnil požadavky před vyšetřením [např. stav na lačno, podávání léků (čas posledního užití nebo vysazení léku), odběr vzorku v určený čas nebo v určených intervalech atd.].

5.3.1. Odběr plodové vody - amniocentéza (AMC) Vlastní odběr se provádí na specializovaném pracovišti v odběrovém sálku odborně proškoleným personálem pod kontrolou ultrazvukem, aby nedošlo k poranění plodu. Pacientky přicházejí na odběr zpravidla ráno po předchozím objednání. K chromozomálnímu vyšetření karyotypu z amniocytů (tj. z buněk v plodové vodě) je potřeba 15-20 ml plodové vody rozdělené už při odběru do 2 sterilních zkumavek. Rozdělení vzorku umožňuje 2 nezávislé kultivace a tudíž nezávislé dílčí výsledky, jejichž porovnáním je vydán výsledek definitivní. Místo vpichu se nejprve dezinfikuje lihem, protože jiné dezinfekční látky by mohly zapříčinit neúspěch při kultivaci. Tenkou jehlou (cca 0,5 mm v průměru) se nejprve nasaje cca 1ml plodové vody, která se přendá do zkumavky a nepoužije se na vyšetření. Tím se zajistí, že ve vzorku nezůstane část mateřské tkáně (kůže), která by byla schopna proliferace a výsledek zkoušky by obsahoval vedle chromozomálního vyšetření plodu i výsledky vyšetření matky. Potom se odebere cca 20 ml plodové vody, která se rozdělí do 2 zkumavek. Odběrové zkumavky na vyžádání dodává na odběrové pracoviště genetická laboratoř. Zkumavky se ihned po odběru dobře uzavřou, vloží se do igelitového sáčku s průvodní dokumentací a v co možno nejkratší době doručí do laboratoře – viz Pokyny pro dopravce (BR08).

5.3.2. Odběr fetální (pupečníkové) krve K chromozomálnímu vyšetření karyotypu je potřeba 1-2 ml fetální krve odebrané do zkumavky s protisrážlivým činidlem (heparinizovaná zkumavka, viz kap. 5.1). K izolaci DNA je potřeba 0,5-1 ml fetální krve odebrané do zkumavky s fialovým uzávěrem (EDTA). Místo vpichu se nejprve dezinfikuje lihem, jiné dezinfekční látky by mohly zapříčinit neúspěch při vlastní kultivaci. Odběr fetální krve je náročnější oproti odběru plodové vody, proto se provádí na vysoce specializovaném pracovišti odborně proškoleným personálem v odběrovém sálku pod kontrolou ultrazvukem. Zkumavku je nutné ihned po odběru opatrně promíchat, aby nedošlo k částečnému sražení odebraného vzorku krve. Označená zkumavka se vloží do igelitového sáčku a dopraví se spolu s průvodní dokumentací co nejrychleji do laboratoře, protože se jedná o statimové vyšetření – viz Pokyny pro dopravce (BR08).




28.4.2015 1.9.2013


5/11 1

5.3.3. Odběr periferní krve K odběru periferní krve se nejčastěji používá uzavřený vakuový systém Vacuteiner (firma Becton Dickinson) s barevně rozlišenými zkumavkami s různými přísadami. Pro chromozomální vyšetření je nutno, aby se krev nesrazila, proto je potřeba použít zkumavku s Na-heparinem se zeleným uzávěrem, pro izolaci DNA je nutno použít zkumavku s EDTA s fialovým uzávěrem. Odběr se provádí ze žíly v loketní jamce. Paže se volně položí na opěradlo odběrového křesla, dezinfikuje se místo vpichu lihem (jiné desinfekční látky by mohly být příčinou neúspěšné kultivace) a po stabilizaci polohy žíly se provede vpich jehlou s nasazeným nástavcem. Poté se do nástavce nasadí zkumavka. Pro stanovení karyotypu je optimální množství 4-5 ml venózní krve, u malých dětí 1-2 ml. Krev je nutno ihned po odběru několika pohyby promíchat, aby se nesrazila. Pro vyšetření cystické fibrózy, trombofilních mutací i k vyšetření mikrodelecí chromosomu Y jsou dostačující 2 ml venózní krve. Po odběru se místo vpichu zakryje čtvercem z buničiny, opatrně se přitlačí a pomalu se vytáhne jehla a čtverec buničiny se přelepí náplastí. Pacient si několik minut (cca 2-5) tiskne místo vpichu a po cca 30 minutách si odstraní náplast . Označená zkumavka nebo stříkačka se sterilně zajištěnou jehlou se vloží do igelitového sáčku a s úplně vyplněnou žádankou se odešle do laboratoře nebo se uloží dolu do lednice při teplotě 6-8° C. Vzorek nesmí zmrznout! Vzorek určený pro chromozomální vyšetření je možné skladovat v lednici (ne v mrazáku!) do druhého dne, pro molekulární vyšetření až 5dní.

5.3.4. Odběr choriové tkáně Vlastní odběr je náročnější oproti odběru plodové vody, proto se provádí na vysoce specializovaném pracovišti v odběrovém sálku odborně proškoleným personálem pod kontrolou ultrazvukem. Odběr se provádí do speciálních odběrových zkumavek typu Vacutainer (zajišťuje si odběrový lékař) nebo se odebrané kousky choria vloží do sterilní zkumavky se sterilním fyziologickým roztokem (dodává na vyžádání laboratoř) a takto se dopravují ihned do laboratoře.

5.3.5. Odběr tkáně z potraceného plodu. Důvodem odběru potracené tkáně je požadavek na chromozomální vyšetření buněk potraceného plodu nebo na vyšetření vrozených trombofilních stavů. K vyšetření je potřeba dodat kousek tkáně minimálně o velikosti několika mm, která se vloží do sterilní zkumavky, do které se přidá cca 5-10 ml fyziologického roztoku. Vzorek se dopraví do laboratoře nejlépe ihned po odběru, není-li to možné z provozních důvodů, je možné uložit vzorek na spodní patro v ledničce (6-10°C). Vzorek nesmí v žádném případě zmrznout!

5.3.6. Odběr stěru ze sliznice dutiny ústní. Důvodem odběru stěru z dutiny ústní je získání buněk klienta neinvazivním způsobem. Vyizolovaná DNA slouží k identifikaci jedince pro dané vyšetření. V případě plodové vody a choriové tkáně se potvrzuje skutečnost, že vyšetřovaný vzorek obsahuje buňky plodu nikoli matky. Při vyšetřování příbuznosti osob slouží k získání DNA vyšetřované osoby. Při odběru je potřeba dodržet přesně pokyny výrobce, aby bylo zajištěno dostatečné množství materiálu pro dané vyšetření. Stěrové soupravy se vzorky lze uchovávat při pokojové teplotě.

6. Dostupnost Žádanek a Souhlasů Dostupnost formulářů Žádanka o vyšetření (BF33) a Souhlas vyšetřovaného (zákonného zástupce) s genetickým laboratorním vyšetřením (BF45/BF70): 1) Oba formuláře jsou primárně dostupné na webových stránkách laboratoře: www.genvia.cz, v sekci „Ke stažení“ 2) Formuláře je možné vytisknout, po přihlášení, z ePortálu GENvia 3) Vytištěné formuláře lze, na požádání, dodat přímo z laboratoře

Laboratorní řád

BR04

PŘÍRUČKA PRO ODBĚR VZORKŮ Vypracoval: Schválil: 



28.4.2015 1.9.2013


6/11 1

Źádanka o vyšetření (BF33) musí obsahovat tyto údaje: A) Osobní údaje vyšetřované osoby - jednoznačná identifikace klienta – příjmení a jméno, rodné číslo/číslo pojištěnce, u cizinců uveďte datum narození, číslo pojištěnce, číslo zdravotní pojišťovny a uvedení pohlaví (M nebo F u cizinců). Pohlaví u občanů ČR lze odvodit z rodného čísla, - základní diagnóza číselným kódem, popř. slovní podrobnější popis příznaků, - datum odběru vzorku, B) Požadované vyšetření - zaškrtnout název požadovaného vyšetření (není-li v nabídce uvedeno, je nutné ho dopsat), - jasné označení statimového vyšetření, C) Identifikační údaje žadatele - jednoznačná identifikace odesílajícího oddělení a lékaře – razítko (IČZ a odbornost), čitelné jméno a podpis,



Souhlas vyšetřovaného (zákonného zástupce) s genetickým laboratorním vyšetřením (BF45/BF70) musí obsahovat tyto údaje: A) Osobní data vyšetřovaného - jednoznačná identifikace klienta – příjmení a jméno, rodné číslo/číslo pojištěnce, u cizinců uveďte datum narození, číslo pojištěnce, číslo zdravotní pojišťovny a uvedení pohlaví (M nebo F u cizinců). Pohlaví u občanů ČR lze odvodit z rodného čísla, B) Účel genetického laboratorního vyšetření - zaškrtnout požadovaný účel vyšetření (není-li v nabídce uveden, je nutné ho dopsat), C) Prohlášení lékaře - zaškrtnout jméno lékaře, který klientovi vysvětlil účel, povahu, předpokládaný prospěch, následky i možná rizika vyšetření (není-li lékař v nabídce uveden, je nutné ho dopsat), D) Prohlášení vyšetřované osoby - zaškrtnout název vyšetření a druh vzorku (není-li v nabídce uvedeno, je nutné ho dopsat), E) Výběr osoby, která bude informována o výsledku vyšetření - zaškrtnout osobu, které bude poskytnut výsledek vyšetření, F) Další nakládání se vzorkem - zaškrtnout výběr, zda má být vzorek po vyšetření archivován nebo zlikvidován, G) Datum a podpis - datum a podpis vyšetřovaného (případně zákonného zástupce), - jméno zákonného zástupce, rodné číslo/číslo pojištěnce a vztah k vyšetřované osobě (podepisuje-li souhlas zákonný zástupce),

6.1. Kritéria pro odmítnutí vzorků Odmítnout lze: × Žádanku s biologickým materiálem, na které chybí nebo jsou nečitelné základní údaje a není možné je doplnit na základě dotazu na lékaře a/nebo obsahuje požadavek (požadavky) na vyšetření, které laboratoř neprovádí, × Žádanku nebo odběrovou nádobu znečištěnou biologickým vzorkem, *




28.4.2015 1.9.2013


7/11 1

× Nádobu s biologickým vzorkem, kde není způsob identifikace materiálu z hlediska nezaměnitelnosti dostatečný, za dostatečnou identifikaci materiálu se považuje splnění všech požadavků na nezbytnou identifikaci biologického vzorku, * × Nádobu s biologickým vzorkem, kde zjevně došlo k porušení doporučení na preanalytickou fázi, * × Neoznačenou nádobu se vzorkem* × Vzorek bez žádanky* × Žádanku bez podpisu a razítka žadatele (lékaře) × Rozbitá nebo jinak znehodnocená nádoba s biologickým vzorkem * netýká se vzácného a jedinečného vzorku, který již nelze odebrat (plodová voda, potracená tkáň, pupečníková krev atd.) Výjimku tvoří nemocní, u nichž není kompletní identifikace k dispozici (neznámé osoby nebo osoby, u nichž jsou k dispozici informace jen v částečném rozsahu). Odesílající oddělení je povinno o této skutečnosti laboratoř informovat a zajistit nezaměnitelnost biologického materiálu a dokumentace. Při nedostatečné identifikaci klienta na žádance (pokud je k dispozici údaj o odesílajícím oddělení a alespoň základní identifikace nemocného), pracovníci laboratoře kontaktují odesílatele a pokusí se doplnit chybějící údaje a následně zahájí kultivaci. Zároveň odešlou požadavek o dodání nové žádanky s úplnou identifikací klienta. Není-li k dispozici údaj o odesílajícím oddělení a základní identifikace klienta, laboratoř se pokusí zjistit indikujícího lékaře. Nepodaří-li se dohledat původ a identifikaci vzorku, je dodávka označena jako neshodná a laboratoř provede pouze základní vyšetření vzorku. O dané skutečnosti se provede zápis do Knihy neshod. Výjimku tvoří pouze požadavek na zkoušku otcovství, která se bez prokazatelné identifikace žadatele neprovádí. Doručený vzorek je uložen v laboratoři 1 týden, pokud se během této doby neprokáže jiný důvod k vyšetření, poté se zlikviduje. O likvidaci je proveden záznam.

6.2. Postupy při nesprávné identifikaci vzorku 1) Biologický vzorek není přijat do laboratoře.* 2) Odesílající subjekt obdrží informaci o odmítnutí nesprávně identifikovaného biologického vzorku. 3) Je navržen způsob řešení neshody na příjmu. 4) Tato skutečnost je v laboratoři evidována. * netýká se vzácného a jedinečného vzorku, který již nelze odebrat (plodová voda, potracená tkáň, pupečníková krev atd.)

7. Postup pro příjem vzorku Příjem vzorku probíhá na místě k tomu vyhrazeném. Eviduje se datum a čas příjmu vzorku a podpisem pracovníka, který vzorek přijal. Vzorky se při přebírání desinfikují a umisťují do příjmových boxů, poté se odnášejí do laboratoře. Při příjmu vzorku do laboratoře pověřený pracovník ihned zkontroluje, zda je odběrová nádobka (zkumavka, lahvička, apod.) čitelně označena (jméno, příjmení, rodné číslo/číslo pojištěnce) a zda připojená žádanka obsahuje veškeré potřebné údaje k provedení požadovaného vyšetření. Po provedené kontrole je žádanka označena přiřazeným identifikačním a pořadovým číslem. Vzorek je označen a zaevidován pod pořadovým číslem podle požadovaného vyšetření do příslušného pracovního sešitu s datem příjmu a podpisem pracovníka, který se vzorkem dále pracoval (nasazení ke kultivaci, izolace DNA) V pracovních sešitech se vedle jména a příjmení pacienta eviduje též rodné číslo/číslo pojištěnce, druhy požadovaných vyšetření a červeně se označují vyšetření statimová. Také se zde zaznamenávají údaje o vzorku, které by mohly ovlivnit výsledek vyšetření (např. příměs krve ve vzorku plodové vody, sražená krev, atd.). Tyto, včetně všech dalších údajů na žádance, jsou následně zaneseny do databázového informačního systému – tím je přiděleno identifikační (sumární číslo), zároveň se vytisknou formuláře pracovních protokolů pacienta, obsahující jméno a příjmení, pořadové číslo, rodné číslo/číslo pojištěnce pacienta, datum odběru vzorku, jméno indikujícího lékaře a kód diagnózy. Tím je zajištěna dohledatelnost veškerých informací souvisejících s příjmem vzorku.




28.4.2015 1.9.2013


8/11 1

8. Klinické informace Důvodem odběru plodové vody je většinou požadavek na chromozomální vyšetření buněk plodu – amniocytů, popř. vyšetření jednotlivých genů. Odběr se provádí nejčastěji mezi 16. - 18. týdnem gravidity, lze ho však provést již od 14. týdne gravidity. Odběr se provádí i v pozdějších týdnech gravidity, zde je potřeba brát v úvahu, že přerušení těhotenství z důvodu poškození plodu je až na výjimky povoleno pouze do konce 24. týdne těhotenství. Vlastní kultivace a zhodnocení preparátu se pohybuje mezi 12-16 dny podle množství a typu amniocytů. Jedná se o invazivní vyšetření, kdy riziko komplikací se pohybuje okolo 1%. Proto musí být uveden jasný důvod provedení amniocentézy. Buňky se začínají kultivovat v den odběru, kultivace a vyhodnocení výsledku trvá asi 2 týdny. Při odběru je tedy potřeba počítat s dostatečnou lhůtou na kultivaci a zpracování vzorku. Důvodem odběru fetální krve je požadavek na chromozomální vyšetření buněk plodu, popř. vyšetření jednotlivých genů. Odběr se provádí v pozdějších stádiích těhotenství, nejčastěji po 19. týdnu gravidity. Odběr se provádí i v pozdějších týdnech gravidity, zde je potřeba brát v úvahu, že přerušení těhotenství z důvodu poškození plodu je až na výjimky povoleno do konce 24. týdne těhotenství. Jedná se o invazivní vyšetření, kdy riziko komplikací se pohybuje okolo 1-2%. Fetální krev se začíná zpracovávat ihned po odběru, protože se jedná o vyšetření statimové. Výsledek vyšetření je k dispozici za 3-5 dnů. Chromozomální vyšetření z krve se provádí z dělících se buněk T-lymfocytů stimulovaných phytohaemaglutininem. Nelze odebírat pacientovi a zejména novorozenci krev po infúzi a už vůbec ne po transfúzi (výsledkem zkoušky by byl karyotyp dárce ne pacienta). Výsledek vyšetření je k dispozici do 3 týdnů, v případě statimového požadavku za 4-7 dnů. Důvodem odběru choriové tkáně je požadavek na chromozomální vyšetření buněk plodu, popř. vyšetření jednotlivých genů. Odběr se provádí v častějším stadiu gravidity nejčastěji mezi 11. - 13. týdnem gravidity. Vzorek se začíná zpracovávat ihned po odběru, protože se jedná o vyšetření statimové. Výsledek zkoušky je k dispozici za 2-3 týdny. Rychlá diagnostika Amnio-PCR (vyšetření aneuploidií chromosomů 13, 18, 21 a gonosomů) u prenatálních vzorků (plodová voda, choriová tkáň, fetální krev) poskytuje výsledky do 2 dnů (pracovních) po odběru. Vyšetření potracené tkáně se provádí z několika oddělených kultivací, výsledek vyšetření je k dispozici za 3-4 týdny po odběru. Veškerá vyšetření molekulární se provádí z DNA po předchozí izolaci z buněk různých tkání. Vyšetření se provádí nejčastěji na základě požadavku indikujícího lékaře.

9. Způsob skladování vzorků Neprodleně po odběru se biologický materiál transportuje tak, aby nedošlo k jeho znehodnocení fyzikálními vlivy a k ohrožení fyzických osob. – viz Pokyny pro dopravce (BR08). Plodová voda, fetální krev a chorium musí být přepravovány v termostabilních přepravkách. Periferní krev a potracená tkáň během transportu nesmí zmrznout, ani být vystaveny přímému slunci! Plodová voda se ihned po příjmu do laboratoře připraví ke kultivaci popř. k dalším vyžádaným vyšetřením. Malá část vzorku cca do 1ml zůstává zamražena v původních odběrových zkumavkách k případné zpětné identifikaci vzorku a to až do stanovené likvidace, kdy se likviduje jakožto nebezpečný odpad. Ze vzorku fetální krve se odebere potřebné množství pro dvě časově odlišné kultivace a další vyžádaná vyšetření. Zbytek vzorku se uloží do chladničky do doby vydání výsledku. Potom se likviduje jako nebezpečný odpad. Ze vzorku periferní krve se odebere potřebné množství pro kultivaci a další vyžádaná vyšetření. Zbytek vzorku se uloží do chladničky do doby vydání výsledku. Vzorek je možné použít na opakovanou kultivaci, pokud výsledek zkoušky z první kultivace nebyl dostatečný. Potom se likviduje jako nebezpečný odpad. Choriová tkáň se zpracovává ihned po doručení do laboratoře. Malá část vzorku zůstává zamražena v původních odběrových zkumavkách k případné zpětné identifikaci vzorku a to až do stanovené likvidace, kdy se likviduje jakožto nebezpečný odpad Vzorek potracené tkáně se většinou nezpracovává celý. Malá část vzorku se uchovává zamražena ve zkumavkách k případnému dalšímu vyšetření. Nespotřebovaná část se ihned likviduje jako nebezpečný odpad.




28.4.2015 1.9.2013


9/11 1

Likvidace DNA se provádí cca 1x měsíčně. Nespotřebovaná DNA se archivuje, takže je ji možné použít na případná další požadovaná vyšetření. Při písemném odmítnutí archivace DNA se zbytek vzorku zlikviduje ihned po ukončení požadovaných vyšetření jako nebezpečný odpad. Veškerá manipulace s biologickým materiálem musí probíhat dle ustanovení § 6 vyhlášky MZD č.440/2000Sb.

10. Dodatečná a opakovaná vyšetření Dodatečná vyšetření nelze provést vždy. V případě požadavku na dodatečné vyšetření je potřeba neprodleně informovat laboratoř (nejlépe telefonicky) a domluvit se, v jakém rozsahu, event. omezení, je možné dodatečné vyšetření provést. V případě, že lékař požaduje další molekulární vyšetření, laboratoř ho provede z archivované DNA, pokud je dostatečném množství a kvalitě pro dané vyšetření. Následně musí být dodána příslušná řádně vyplněná Źádanka o vyšetření (BF33) s požadavky na tato vyšetření a Souhlas vyšetřovaného (zákonného zástupce) s genetickým laboratorním vyšetřením (BF45/BF70). V případě požadovaných vyšetření u materiálu, který musí být okamžitě po doručení zpracován a nelze ho skladovat (plodová voda, choriová tkáň), lze některá dodatečná vyšetření provést pouze do doby, než byl vzorek zpracován. Některá dodatečná vyšetření lze provést z již nakultivovaných buněk, požadavky na dodatečná vyšetření lze v těchto případech podat po celou dobu probíhající kultivace. V případě vzorku periferní, event. fetální krve je možné dodatečně požadovaná vyšetření provést z opakované kultivace, avšak výsledek může být negativně ovlivněn dlouhodobým skladováním materiálu. Ve všech případech je nezbytné dostatečné množství vzorku. Je-li potřeba opakovat vyšetření z důvodu technické či analytické chyby, provede ho laboratoř na vlastní náklady. O potřebě zopakovat vyšetření však informuje okamžitě žadatele, tj. indikujícího lékaře.

11. Doba odezvy Cytogenetické vyšetření – 2-4 týdny Molekulárně genetické vyšetření - 2-4 týdny

12. Zásady na ochranu osobních informací V průběhu procesu zpracování a vyšetření vzorků je zabezpečena ochrana osobních údajů pacientů, tak aby nebyly dostupné nepovolaným osobám. Laboratoř disponuje vlastním laboratorním databázovým informačním systémem, ve kterém se shromažďují veškeré údaje týkající se pacienta, vyšetření, klinika i pracovníků laboratoře, kteří vyšetření provádějí. Počítačový databázový program je chráněn před neoprávněným přístupem, změnami nebo zničením nahodile přítomnými nebo nepovolanými osobami. V laboratoři je se všemi daty pacientů nakládáno jako s důvěrnými a jsou dodržovány následující zásady a pravidla: 

Prostory laboratoře, ve kterých se nachází informace o pacientech, nejsou cizím osobám volně přístupné.



Ukládání dokumentů probíhá v zajištěných prostorách laboratoře. Po uplynutí doby uložení je dokumentace skartována.



Počítače - jsou umístěny v prostorách laboratoře. Přístup k záznamům v počítačích je omezen na určené osoby, které mají přidělena přístupová práva a hesla. Uložení dat laboratorního databázového informačního systému (DIS) je na serveru laboratoře. Denně probíhá automatická záloha dat z pracovního počítače na server a záloha dat uložených na serveru z primárního (HDD1) na sekundární disk (HDD2). Jednou týdně probíhá kompletní záloha dat na externí datové úložiště (NAS).



Všichni pracovníci laboratoře podepsali prohlášení pracovníka o zachování mlčenlivosti.



Externí pracovníci zajišťující služby pro laboratoř v prostorách laboratoře se zavazují k udržování důvěrnosti informací podpisem.



Ochrana utajovaných informací - informace o pacientech, vyplněné v průvodkách k vyšetření jsou také uloženy v počítačích laboratoře, kam mají přístup pouze oprávněné osoby.




28.4.2015 1.9.2013


10/11 1



Dodatečné kopie výsledků mohou být pořizovány jen se souhlasem vedoucího laboratoře na základě požadavku zadávajícího lékaře.



Kontrola dodržování těchto postupů je prováděna manažerem kvality a plánovaně při interních auditech kvality a při přezkoumání SMK vedením.

Laboratoř se zavazuje, že v souladu s ustanoveními zákona č. 101/2000 Sb., o ochraně osobních údajů, v platném znění, a ust. § 51 a násl. zákona č. 372/2011 Sb., o zdravotnických službách, v platném znění, bude odborně nakládat se všemi citlivými údaji, nepředávat tyto citlivé údaje třetím osobám a zachovávat bezvýhradně mlčenlivost o všech informacích týkajících se vyšetření a výsledků pacienta v rozsahu platných právních předpisů.

13. Sdělování výsledků 13.1. Hlášení výsledků v kritických intervalech Kritické intervaly se na genetická vyšetření laboratoře nevztahují.

13.2. Vydávání výsledků Politikou laboratoře je dodávat výsledky úplné a včas zadavateli vyšetření. Výsledky jsou v podobě výsledkových zpráv, které obsahují všechny informace nezbytné pro interpretaci výsledků. Ukončený výsledek je zároveň dostupný v zabezpečené formě v laboratorním databázovém informačním systému v laboratoři. Formy vydávání výsledkový zpráv  Výdej tištěných výsledků - jsou zasílány poštou žadateli vyšetření  Výdej výsledků elektronicky - výsledky jsou elektronicky zasílány žadatelům, kteří využívají ePortál. Tyto výsledky jsou odesílány v zašifrované podobě, tak aby byla zajištěna maximálně jejich ochrana.  Výdej kopií výsledků - dodatečné kopie výsledků mohou být pořizovány jen se souhlasem lékaře, na základě požadavku zadávajícího lékaře. Výsledky vydány opakovaně jsou označeny jako kopie výsledku.  Výdej předběžných zpráv - v laboratoři nejsou vydávány klasické předběžné výsledky.  Telefonické vydávání výsledků – vzhledem k povaze vyšetření nelze výsledky sdělovat telefonicky.  Za čitelnost uvedených výsledků a za to, že výsledky vyšetření jsou předávány pouze oprávněným osobám, odpovídají všichni pracovníci laboratoře. Výsledky jsou uchovávány v elektronické podobě na serveru laboratoře. Archivace výsledků probíhá v souladu s platnými legislativními předpisy.

13.3. Obsah výsledkové zprávy Výsledky jsou čitelné bez chyb v přepisování a jsou sdělovány osobám oprávněným přijímat a užívat lékařské informace. Výsledková zpráva obsahuje: 

identifikaci laboratoře, která vydala zprávu spolu s odkazem na akreditaci



jasné a jednoznačné označení vyšetření



typ primárního vzorku a postup vyšetření (metoda, identifikace SOP)



v kolonce Osobní údaje - jednoznačnou identifikaci pacienta, identifikační označení žadatele včetně adresy



v kolonce Indikace - datum odběru primárního vzorku (v případě času se nejedná se o údaj podstatný pro péči o pacienta, pokud je dostupný, je uveden na žádance), indikujícího lékaře a diagnózu

Laboratorní řád

BR04




28.4.2015 1.9.2013


11/11 1



v kolonce údaje o provedeném vyšetření – evidenční číslo vyšetření a další identifikační čísla, podrobnosti vzhahující se k vyšetření



v kolonce výsledek vyšetření – výsledek a jiné poznámky ke kvalitě nebo dostatečnosti primárního vzorku, které mohou nežádoucím způsobem ovlivnit výsledek, atd.



pokud je ve výsledkové zprávě uvedeno např. u detekované mutace hvězdička * a u * věta: “Rozšíření v rámci uplatněné flexibility.“, což znamená, že např. daná mutace byla na přání zadávajícího lékaře zařazena v rámci flexibilního rozsahu akreditace do rozsahu již akreditovaných vyšetření



identifikaci osoby oprávněné uvolnit zprávu a datum uvolnění výsledku



datum přijetí vzorku do laboratoře



číslování stran spolu s celkovým počtem stran (identifikace pacienta je uvedena na každé straně)



identifikaci formuláře výsledkové zprávy

13.4. Změny výsledků Lékař je uvědoměn pracovníkem laboratoře o přepracování zprávy. Přepracovaná zpráva je zřetelně identifikovatelná jako přepracovaná a obsahuje odkazy na datum a identitu pacienta v původní zprávě, čas a datum změny a jméno osoby odpovědné za změnu. Původní údaje zprávy jsou zachovány v záznamu při přepracovávání. Výsledky, které byly k dispozici pro klinická rozhodnutí a byly pozměněny, musí být ponechány v následných souhrnných zprávách a zřetelně identifikovány jako přepracované. Záznam o úpravě nebo změně zprávy je zaznamenán v DIS, kde jsou všechna data dohledatelná. V případě, že vznikne potřeba upřesnit výsledek (např. změna pojišťovny, ČP, apod.), provede se tisk opraveného výsledku, který je automaticky informačním systémem graficky odlišen. Nastane-li případ, kdy nelze vystavit výsledek z důvodu neúspěšného vyšetření v laboratoři, informuje o této skutečnosti vedoucí laboratoře nebo vedoucí úseku lékaře. Je-li to možné, provede se alternativní vyšetření z dodaného biologického materiálu na náklady laboratoře. Pokud není možné provést alternativní vyšetření, řeší další postup s žadatelem vedoucí laboratoře nebo vedoucí úseku. Tato skutečnost je zaznamenána v DIS.

Konec BR04

PŘÍRUČKA PRO ODBĚR VZORKŮ. GENvia, s.r.o

Recommend Documents