Overzicht pathogeenreductie (PR) methoden: effecten op in vitro kwaliteit van cellulaire bloedproducten Pieter van der Meer 17 november 2010
“Marktklare” methodes Trombocyten
S59 (amotosalen)/UVA Riboflavine/UVB UVC
Rode cellen
S303
Vol bloed
S303 Riboflavine/UVB
Waarom pathogeen reductie? • Bacteriële verontreiniging van trombocyten concentraten die je met BacT/Alert mist • Incubatie-fase van virussen tot de testen positief zijn • Bescherming tegen virussen/bacteriën waar je niet op test • Opdoemende ziekteverwekkers • Inactivatie van witte bloedcellen
Waarom pathogeen reductie? • Publieke mening / maximale veiligheid
Elsevier, 9 jan 2010, p.68
PASSPORT studie
16 gerapporteerde transmissies; [41/106; 95% CI: 24-67/106] geen doden Dumont, Transfusion 2010;50:589
Risico’s op transmissie Ziekte en dood, ondanks bacteriële screening: • MMWR 2005 2 dood in 2004 • Te Boekhorst 2005 2 sepsis • TRIP 4 ziek in 2008 • Walther-Wenke 2009 1 dood
Trombocyten concentraten
Bij kamertemperatuur bewaard Intercept (Cerus) - op de markt Mirasol (Caridian) - fase 3/marktklaar TheraFlex (MacoPharma) – fase 1b
Intercept behandeling
Intercept behandeling
www.cerus.com
Intercept behandeling
HLA-DQα
Methode Dosis, µM mod/1000bp
S59
gamma
10 100 150 25 Gy 1.4 8.9 12.0 0.03
Corash, Bone Marrow Transplant 2004;33:1
Intercept behandeling Trombocyten Dag 7 Controle Intercept pH 6.93±0.08 6.89±0.08 Glucose, mM 2.8±1.2 2.3±1.0 Lactaat, mM 14.6±0.8 16.0±1.9 ATP, µmol/1011 PLT 4.5±1.2 5.3±0.6 HSR, % 32±13 29±7 ESC, % 5.6±3.8 5.9±2.8 gemiddelde±SD, n=8, verschillen niet significant Knutson, Vox Sang 2000;78:209
Mirasol behandeling
+
+
Mirasol behandeling
• Geactiveerd riboflavine geeft chemische wijziging aan functionele groepen • pathogenen kunnen niet meer vermenigvuldigen
Vitamine B2/riboflavine
• Riboflavine en de foto-producten zijn niet schadelijk, en komen normaal in bloed voor • Hoeven niet verwijderd te worden
Mirasol behandeling Trombocyten Dag 7 Controle pH 7.32±0.27 ATP, % start 59±44 gemiddelde±SD, n=7, *p<0.05
Li et al. Transfusion 2005;45:920-6
Mirasol 6.90±0.22* 44±19*
Mirasol behandeling Trombocyten
JC-1, %
Li et al. Transfusion 2005;45:920-6
Mirasol behandeling Trombocyten
MTT
Li et al. Transfusion 2005;45:920-6
Mirasol behandeling Trombocyten Dag 7 GpIbα GpIIb-IIIa vWF Fibrinogeen Fibronectine P-selectine Annexine V Factor V Perez-Pujol, Transfusion 2005;45:911
Studie vs controle geen effect geen effect geen effect geen effect geen effect verhoogd, p<0.05 geen effect geen effect
Vergelijking van methoden Trombocyten Dag 7 Controle Intercept Mirasol pH 7.05±0.06 6.77±0.04* 6.96±0.06 45±8 75±15* 37±6 PO2, mmHg PCO2, mmHg 8±1 6±2* 8±2 ATP, µmol/dL 9.5±2.8 8.1±2.7 9.3±1.0 mediaan±95%CI, n=9, *=significant
Picker, Vox Sang 2009;97:26
Vergelijking van methoden Trombocyten Dag 7 Controle Intercept HSR, % 60±9 36±13 TRAP respons, % 76±9 14±10 CD62P expr., % 60±7 73±6 Annexine V, % 18±5 28±12 JC-1, % 87±5 64±12 mediaan±95%CI, n=9, *=significant
Picker, Vox Sang 2009;97:26
Mirasol 43±11 43±24 77±8 11±5 83±9
TheraFlex UVC
Mohr, Transfusion 2009;49:1956
TheraFlex UVC UVC (en deels ook UVB): • Directe interactie met DNA • Vorming van cyclobutaanpyrimidine en (6-4) pyrimidone dimeren • Blokkeren DNA transcriptie • PLT in bewaarvloeistof Mohr, Transfusion 2009;49:1956
TheraFlex UVC Trombocyten Dag 7 Controle pH 7.25±0.01 HSR, % 71±6 Aggregatie, % spontaan 7±1 collageen 54±6 CD62P, % 33±6 Annexine V, % 6±1 gemiddelde±SD, n=4, *p<0.01
Mohr, Transfusion 2009;49:1956
Theraflex 7.15±0.01* 69±3 9±1 67±2 52±10 8±1
Samenvattend: Voor trombocyten concentraten • methodes vergevorderd/reeds in gebruik • enige vermindering van in vitro kwaliteit – hogere activatie – beeld van verminderde kwaliteit van mitochondriën
• … maar klinische betekenis?
Rode cel concentraten
Bij 2-6°C bewaard Maar wel vaker toegediend! S-303 (Cerus) – fase 3 trial gestopt terug naar fase 1
S-303
Hanson, AABB poster, 2008 (www.interceptbloodsystem.com)
S-303
X wassen en bewaren Rios, Transfusion 2006;46:1778
S-303 Rode cellen S-303 gewassen AS5 Hemolyse, % 0.02±0.01 0.03±0.01* ATP, µmol/g Hb 5.4±0.4 5.2±0.5 K+, mM 7.8±0.7 1.0±0.1** gemiddelde±SD, n=6, *p<0.05; **p<0.001 Dag 4
Mufti, Biologicals 2010;38:14
Controle
S-303 Rode cellen S-303 gewassen AS5 Hemolyse, % 0.26±0.14 0.20±0.10* ATP, µmol/g Hb 2.9±0.7 1.8±0.6** K+, mM 44±3 38±2** gemiddelde±SD, n=6, *p<0.05; **p<0.001 Dag 35
Mufti, Biologicals 2010;38:14
Controle
S-303 Rode cellen S-303 gewassen AS5 Hemolyse, % 0.2±0.1 0.2±0.1 ATP, µmol/g Hb 3.6±0.8 3.3±0.8** K+, mM 53±7 40±4*** gemiddelde±SD, n=27, *p<0.05; **p<0.01; ***p<0.001 Dag 35
Controle
Cancelas, Transfusion 2010;Suppl., abstract 10A.
Samenvattend: Voor rode cel concentraten • methode pril • effect op energiehuishouding van de rode cel
Vol bloed
Eén processtap om alle componenten te behandelen S-303 (Cerus) – experimenteel Mirasol (Caridian) - experimenteel
S-303 RCC uit behandeld VB Dag 22 Hemolyse, % K+, mM ATP, µmol/g Hb n=?
Mufti, Biologicals 2010;38:14
Controle 0.44±0.12 18.6±1.0 3.08±0.35
S-303 0.55±0.25 18.7±0.9 3.14±0.27
S-303 PLT uit behandeld VB 20 h PLT activatie, % Morfologie (Kunicky) n=1
Mufti, Biologicals 2010;38:14
Controle 21 272
S-303 53 262
S-303 Plasma uit behandeld VB 20 h Fibrinogeen, mg/mL Factor II, IU/dL Factor V, IU/dL Factor VII, IU/dL Factor VIII, IU/dL Factor IX, IU/dL Factor X, IU/dL n=1
Mufti, Biologicals 2010;38:14
Controle 288 64 93 66 80 77 88
S-303 290 41 83 52 65 48 79
Mirasol Absorptie spectrum
virusinactivatie
DNA
Goodrich, Biologicals 2010;38:20
Vit.B2
Mirasol RCC uit behandeld VB
D42 D35 D28
Goodrich, Biologicals 2010;38:20
Mirasol RCC uit behandeld VB Dag 35
Controle
Hemolyse, % 0.74±0.44 ATP, µmol/g Hb 4.2±0.7 K+, mM 37±3 gemiddelde±SD, n=12
Cancelas, Transfusion 2010;Suppl., abstract 71A.
Mirasol (80 J/mLRBC) 0.92±1.07 2.6±0.5 59±2
S-303 PLT uit behandeld VB Dag 5
Controle
Swirl pH pO2, mmHg pCO2, mmHg gemiddelde±SD, n=6
3+ 7.07±0.14 47±36 33±6
Goodrich, Biologicals 2010;38:20
Mirasol (44 J/mLRBC) 3+ 7.10±0.16 77±16 23±3
S-303 Plasma uit behandeld VB Controle Fibrinogeen, mg/dL Factor V, % Factor VIII, % Factor XI, % gemiddelde±SD, n=6
Goodrich, Biologicals 2010;38:20
323±97 77±13 108±61 80±20
Mirasol (44 J/mLRBC) 251±58 61±9 92±20 69±13
Samenvattend: Voor vol bloed • experimenteel stadium, nog veel in vitro, ex vivo en in vivo onderzoek te doen • the way to go
WBC inactivatie Intercept
Intercept
Methode Dosis, µM mod/1000bp
S59
gamma
10 100 150 25 Gy 1.4 8.9 12.0 0.03
Corash, Bone Marrow Transplant 2004;33:1
Corash, Bone Marrow Transplant 2004;33:1
WBC inactivatie Mirasol Neg. controle
0.14
Pos. controle
Gamma
10.3 5.62 % gestimuleerde cellen
Jackman, Transfusion 2009;49:2686
Mirasol
0.66
Afrondend: Pathogeen-reductie is niet zonder schade, maar klinische betekenis? Met name rode cel concentraten en vol bloed nog véél werk te doen Hoeveel kwaliteit zijn we bereid in te leveren voor toename van veiligheid?
