LAMPIRAN Lampiran 1. Skema Kerja Penelitian Peremajaan Isolat
Pembuatan Suspensi Trichoderma spp.
Perhitungan kepadatan spora suspensi Trichoderma spp.
Pembuatan inokulum Trichoderma spp.
Pengujian kemampuan isolat Trichoderma spp.
Penyaringan media hasil pengujian - Pemisahan miselium dengan media - Pemisahan media dengan minyak - Uji Biosurfaktan Analisis TPH dengan Metode Gravimetri
Perhitungan Bobot Miselium Kering
Penulisan Laporan Penelitian
24
Lampiran 2. Pembuatan media Potato Dextrose Agar (PDA) (Sudarmaji et al., 1884). Komposisi Media Potato Dextrose Agar (PDA) per 1000 ml. Kentang (tanpa kulit)
: 200 g
Agar
: 20 g
Dextrose
: 20 g
Akuades
: 1000 ml
Cara Kerja : Disiapkan kentang yang sudah dikupas dari kulitnya dipotong-potong kecil. Kentang direbus sampai matang dengan akuades 500 ml, kemudian disaring untuk mendapatkan ekstrak. Agar dilarutkan dalam akuades mendidih sebanyak 500 ml, ditambahkan ekstrak kentang dan dextrose. Campuran tersebut ditambahkan akuades hingga volume mencapai 1000 ml, kemudian dihomogenkan di atas hot plate dan dituangkan ke dalam erlenmeyer. Mulut erlenmeyer ditutup dengan kapas dan alumunium foil kemudian disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121oC selama 30 menit dengan tekanan 2 atm.
25
Lampiran 3. Pembuatan media Mineral Salt Medium (MSM) (Mills et al., 1978) (Modifikasi).
Komposisi Media Mineral Salt Medium (MSM) per 1000 ml NaCl
: 10.0 g
MgSO47H2O
: 0.420 g
KCL
: 0.29 g
KH2PO4, Na2HPO4
: 1.25 g
NaNO3
: 0.42 g
Akuades
:1L
Cara Kerja : Disiapkan semua bahan tersebut dan dimasukkan pada beaker glass 1000 ml. Dihomogenkan di atas hot plate dengan kecepatan 3 rpm dan suhu 3oC. Media yang sudah homogen diukur hingga pH media mencapai 5.5 dengan menambahkan 1 M HCL atau 1 M NaOH. Masing-masing media sebanyak 100 ml dituangkan pada erlenmeyer 250 ml dan disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121oC selama 15 menit.
26
Lampiran 4. Data Persentase Penurunan Kadar Minyak (%) Pada Limbah Minyak Pelumas. Perlakuan
Penurunan Kadar Minyak (%)
1.
K
0
2.
Tj
36.68
3.
Tn
28.47
4.
Tp
23.58
5.
Tb
27.90
No.
Keterangan: K : Limbah minyak pelumas tanpa isolat Trichoderma spp. Tj : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 1 Tn : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 2 Tp : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 3 Tb : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 4
27
Lampiran 5. Data Bobot Miselium Kering (g) Isolat Trichoderma spp.
No.
Perlakuan
Bobot Miselium Kering (g)
1.
Kontrol
0
2.
Tj
0.1031
3.
Tn
0.1109
4.
Tp
0.1162
5.
Tb
0.1129
Keterangan: K : Limbah minyak pelumas tanpa isolat Trichoderma spp. Tj : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 1 Tn : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 2 Tp : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 3 Tb : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 4
28
Lampiran 6. Data pH Perlakuan. pH No
Perlakuan Awal
Akhir
1.
K
7.0
6.5
2.
Tj
6.6
6.7-6.8
3.
Tn
6.5
6.2-6.8
4.
Tp
6.6
6.4-6.7
5.
Tb
6.8
6.4-6.8
Keterangan: K : Limbah minyak pelumas tanpa isolat Trichoderma spp. Tj : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 1 Tn : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 2 Tp : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 3 Tb : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 4
29
Lampiran 7. Data nilai Total Petroleum Hydrocarbons (TPH). No
Perlakuan
TPH (g/l)
1.
Kontrol
36.91
2.
Tj
28.45
3.
Tn
31.37
4.
Tp
34.95
5.
Tb
33.28
Keterangan: K : Limbah minyak pelumas tanpa isolat Trichoderma spp. Tj : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 1 Tn : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 2 Tp : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 3 Tb : Limbah minyak pelumas dengan isolat Trichoderma 4
30
Lampiran 8. Data clear zone hasil uji biosurfakatan 4 isolat Trichoderma spp.
No
Perlakuan
Clear Zone
1.
Kontrol
-
2.
Tj
+
3.
Tn
+
4.
Tp
+
5.
Tb
+
Keterangan: : Tidak membentuk clear zone + : Membentuk clear zone
31
Lampiran 9. Spesifikasi Bahan dan Peralatan No.
Nama Alat
Merek/Tipe
Kegunaan
Tempat
1.
Hotplate dan stirrer
Stuart
Menghomogenkan media
Lab. Mikologi dan Fitopatologi
2.
Mikroskop
Olympus CH20
Melihat spora
Lab. Fisiologi Hewan
3.
Mikropipet
Isolab
Mengambil sample minyak dan inokulum
Lab. Mikologi dan Fitopatologi
4.
Sentrifugator
Eppendorf 5451 R
Memisahkan supernatan
Lab. Genetika dan Molekuler
5.
Vortex mixer
Stuart
Menghomegenkan suspensi isolat
Lab. Mikologi dan Fitopatologi
6.
Timbangan Analitik
Explorer Ohaus USA
Menimbang media
Lab. Mikologi dan Fitopatologi
7.
pH Meter
pH Testr30 Waterproof
Mengukur nilai pH
Lab. Mikologi dan Fitopatologi
8.
Oven
Jeio Tech on-50
Mengeringkan miselium dan minyak
Lab. Mikologi dan Fitopatologi
9.
Corong Pisah
Schott Duran 500 ml
Memisahkan minyak dan media
Lab. Mikologi dan Fitopatologi
10.
Erlenmeyer
Iwaki pyrex 250 ml
Menguji isolat pada minyak
Lab. Pengajaran I
11.
Gelas Ukur
Pyrex 250ml/2
Mengukur akuades
Lab. Mikologi dan Fitopatologi
12.
Beaker Glass
Iwaki pyrex 1000 ml
Membuat media
Lab. Mikologi dan Fitopatologi
No.
1. 2. 3.
Nama Bahan
Glukosa
Spesifikasi
Kegunaan Sumber karbon media MSM (Mineral Salt Medium).
180.16 g/mol 1.07 g/cm3
Meluruhkan spora dari media pertumbuhan
74.12 g/mol
Mengikat bahan minyak pada media pertumbuhan
Tween 80 Dietil eter
32
Lampiran 10. Gambar Hasil Penelitian 1. Preparasi Pengujian Kemampuan Trichoderma spp.
Gambar 1a. Pemurnian isolat Trichoderma spp.
Gambar 1b. Spora Trichoderma spp.
2. Pengujian Kemampuan Trichoderma spp. pada Media yang Mengandung Limbah Minyak Pelumas
Gambar 2b. Perlakuan sesudah inkubasi 9 hari
Gambar 2a. Perlakuan sebelum inkubasi 9 hari
33
3. Pengukuran Perlakuan Setelah Inkubasi 9 Hari
Gambar 3a. Pengukuran TPH Metode Gravimetri (Media MSM + Minyak Pelumas + Dietil eter)
Gambar 3b. Pengukuran TPH Metode Gravimetri (Minyak Pelumas + Dietil eter)
Gambar 2c. Pengukuran TPH Metode Gravimetri (Minyak Pelumas)
Gambar 2d. Bobot miselium kering Trichoderma spp.
Gambar 2c. Clear zone hasil uji biosurfaktan isolat Trichoderma spp.
34
