INFEKČNÍ SÉROLOGIE Virologie
IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAV Y K DIAGNOSTICE KLÍŠŤOVÉ ENCEFALITIDY Virus klíšťové encefalitidy (TBEV) ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy IgG a IgM v lidském séru, plazmě nebo mozkomíšním moku Souprava EIA TBEV Ig je určena ke stanovení protilátek všech tříd v lidském a zvířecím séru (kromě myší)
Úvod
Klíšťová encefalitida je infekční virové onemocnění, jehož původce řadíme mezi arboviry do čeledi Flaviviridae. Jedná se o nákazu s přírodní ohniskovostí. Rezervoárem viru jsou drobná i větší lesní zvířata a přenašečem různá vývojová stádia klíšťat. Člověk se nejčastěji nakazí po přisátí (i krátkodobém) infikovaného klíštěte, výjimečně požitím tepelně nezpracovaného infikovaného mléka. Nejvíce hlášených případů klíšťové encefalitidy je v létě a na podzim. Manifestní onemocnění mívá často dvoufázový průběh. Po inkubační době (3-14 dní) nastupují nespecifické chřipkové příznaky (horečka, bolesti hlavy a svalů, malátnost). Následuje několikadenní zlepšení stavu a poté dochází k rozvoji neurální fáze nemoci (prudké bolesti hlavy, poruchy vidění, zvracení, malátnost, meningeální příznaky, postižení hlavových nervů, parézy končetin). Akutní fáze klíšťové encefalitidy trvá 1-3 týdny. Těžší průběh, často i s trvalými následky, lze pozorovat u seniorů.
Diagnostika onemocnění: Pro diagnostiku onemocnění je důležitá anamnéza, klinický obraz a výsledky laboratorních testů. Vzhledem ke krátkému trvání viremické fáze není přímý průkaz antigenu pro diagnostiku onemocnění vhodný. Sérologie, spolu s biochemickým a cytologickým vyšetření likvoru jsou v laboratorní diagnostice klíšťové encefalitidy klíčové.
Diagnostický význam jednotlivých tříd protilátek IgM:
IgG:
Marker akutní infekce
Anamnestické nebo postvakcinační protilátky
Mohou přetrvávat až 10 měsíců
Přetrvávají dlouhodobě (několik let), zajišťují ochranu vůči další infekci Stanovení avidity umožňuje přesnější určení fáze onemocnění
Protilátková odpověď Infekční a postinfekční protilátková odpověď Akutní infekce Prodromální stádium Inkubační doba Titr protilátek
IgG IgG avidita
Hraniční IgM 2
4
6
8
3
Dny
4 5 Měsíce
6
1
2
Čas
Roky
Protilátky třídy IgM lze detekovat počátkem neurální fáze onemocnění. Nejvyšších titrů dosahují po 2-6 týdnech. Mohou přetrvávat až 10 měsíců. Nástup tvorby protilátek třídy IgG je paralelní s tvorbou IgM nebo může být o několik dnů opožděn.
Postvakcinační protilátková odpověď AU/ml 200 180
Titr protilátek
160
IgG
140 IgG avidita
120 100 80 60 40 20
Hraniční 1
1. dávka
2 2. dávka
3
4
5 6 Měsíce
7
Použití souprav Průkaz onemocnění klíšťovou encefalitidou Kontrola účinnosti očkování proti klíšťové encefalitidě
8
9
11
12 3. dávka
2
3 Roky
Čas
Princip testu
Pracovní postup
Soupravy EIA TBE Virus IgG a IgM jsou založeny na sendvičovém typu ELISA metody.
Sandwich ELISA
HRP
HRP
Anti-Hu IgG
Krok č.
Kroky testu
1
Ředění vzorků
2
Inkubace 10 min. při 37 °C
3
Dávkování kontrol a ředěných vzorků 100 µl
4
Inkubace 30 min. při 37 °C
5
Odsátí a promytí jamek 5 krát
6
Dávkování Konjugátu 100 μl
7
Inkubace 30 min. při 37 °C
8
Odsátí a promytí jamek 5 krát
9
Dávkování substrátu (TMB-Complete) 100 μl
séra/plazmy (1+100)
blank = 100 µl Ředicího roztoku vzorků
Anti-Hu IgM
IgG
IgM
Ag
Ag
Mikrotitrační destička
Souprava EIA TBEV Ig je založena na kompetitivním typu ELISA metody.
Kompetitivní ELISA
včetně blanku
včetně blanku
10
Inkubace 15 min. při 37 °C
11
Dávkování Zastavovacího roztoku 100 μl
12
Fotometrické měření při 450 nm
včetně blanku
EIA TBEV Ig má jiný EIA protokol (celkový čas testu 2,5 hodiny). HRP Anti-Mouse Ig
IgM
Myší Anti-TBEV
Antigeny Purifikovaný a inaktivovaný nativní antigen viru klíšťové encefalitidy
Uživatelský komfort IgG
Komponenty v pracovním ředění Barevně odlišené reagencie Zaměnitelnost komponent Ag
Ag
Ag
Ag
Barevně značené stripy s odlamovacími jamkami CUT-OFF kontrola
Mikrotitrační destička
Semikvantitativní hodnocení výsledků (Index pozitivity-IP) Kvantitativní hodnocení IgG protilátek (U/ml) Možnost převodu na VIEU/ml (Institut virologie Vídeň)
Výhody souprav
Interpretace výsledků
Vysoká diagnostická účinnost Dobrá reprodukovatelnost Vysoká dynamika testů Identický pracovní postup Celková doba vyšetření 1,5 hodiny Možnost kvantitativního stanovení (EIA TBE Virus IgG)
IgM
IgG
Hodnocení
+ + – –
– + + –
akutní infekce (velmi časné stádium)
Aviditní test (EIA TBE Virus IgG + avidity)
akutní infekce anamnestické nebo postvakcinační protilátky negativní výsledek
Charakteristiky souprav
Ředící roztok vzorků obsahuje RF sorb (EIA TBE Virus IgM) Vhodné pro otevřené automatické systémy Možnost nezávislé verifikace (CKS) Komplexní zákaznický servis
ELISA
Diagnostická citlivost
Diagnostická specifita
EIA TBE Virus IgG
98,7 %
97,7 %
EIA TBE Virus IgM
96,6 %
98,9 %
EIA TBEV Ig
95,7 %
95,7 %
Klinická data Akutní infekce – titr protilátek IgM a IgG, avidita IgG IgM titr protilátek
IgG titr protilátek
6
6
IgG avidita 100
5
4
4
3
80 70 Index avidity (IA) %
5
Index pozitivity (IP)
Index pozitivity (IP)
90
3
2
2
1
1
60 50 40 30 20 10
0
0 vzorky (n=47)
0 vzorky (n=47)
vzorky (n=47)
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Objednací údaje ELISA
CFT
Kód
Název soupravy
TBG096
EIA TBE Virus IgG
TBM096 TBE096 xxxTLN xxxTLP
Kód
Název soupravy
96
TBEKF1
TBEV – CF – Ag lyophil. (1 ml)
EIA TBE Virus IgM
96
KFAs00
CF – AMBOCEPTORset (0,5 ml)
EIA TBEV Ig
96
KFAs01
CF – AMBOCEPTORset (1 ml)
3,5 ml
KFC001
CF- COMPLEMENT (1 ml)
CKS negativní (dle seznamu na www.testlinecd.cz) CKS pozitivní (dle seznamu na www.testlinecd.cz)
Počet testů
3,5 ml
Kontakt
TestLine Clinical Diagnostics s.r.o. Křižíkova 68 612 00 Brno, Česká republika Tel.: +420 549 121 205 (237, 238) Fax: +420 541 243 390 E-mail:
[email protected]
www.testlinecd.cz
TestLine Clinical Diagnostics s.r.o. je držitelem certifikátů ISO 9001:2008 a ISO 13485:2003.
