INFEKČNÍ SÉROLOGIE Virologie
IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE INFEKČNÍ MONONUKLEÓZY EBV VCA EBV EBNA-1 EBV EA-D ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy IgA, IgG a IgM v lidském séru, plazmě nebo mozkomíšním moku
Úvod
Virus Epstein – Barrové (EBV) patří do skupiny herpetických virů (4. lidský herpetický virus HHV4). Zdrojem infekce je nakažený člověk, přenos se děje kapénkovou infekcí nebo přímým kontaktem. Inkubační doba je 1–2 měsíce, 90 % nákaz proběhne v dětském věku. Infekce vyvolané EB virem způsobují onemocnění charakterizované horečkou, faryngitidou, generalizovaným zvětšením lymfatických uzlin. Projevy EB virózy jsou ovlivněny věkem a stavem imunitního systému organismu. EBV nevymizí z organizmu úplně, přetrvává v latentním stavu a může se reaktivovat.
Klinické projevy infekce EBV: Inaparentní průběh Primoinfekce
Nespecifické horečnaté onemocnění Infekční mononukleóza (angína, lymfadenopatie, splenomegalie, horečka)
Latentní chronická infekce
Asymptomatické vylučování viru slinami Zpravidla asymptomatická
Reaktivace
U imunodeficitu: maligní lymfoproliferace, leukoplakie jazyka, lymfocytická intersticiální pneumonie atd.) V určitých geografických oblastech: Burkittův lymfom, nazofaryngeální karcinom
Diagnostika onemocnění Pro diagnostiku onemocnění je důležitá anamnéza, klinický obraz a výsledky laboratorních testů. Vhodnou možností průkazu infekce a její fáze je stanovení specifických protilátek třídy IgA, IgG a IgM proti jednotlivým antigenům EBV v séru nebo plazmě metodou ELISA.
Důležité EBV antigeny Kapsidový antigen (VCA) – Protilátky třídy IgA a IgM jsou markery akutní infekce. Protilátky třídy IgM dosahují vysokých hladin v akutní a rekonvalescenční fázi infekční mononukleózy. U reaktivací dosahují protilátky třídy IgM obvykle nižších hladin než IgA. Obě třídy protilátek mohou perzistovat několik týdnů až měsíců. Protilátky třídy IgG mají anamnestický charakter a perzistují po celý život u většiny infikovaných osob. Sérokonverze IgG může být detekována v časné fázi primoinfekce, signifikantní vzestup doprovází i reinfekci a reaktivaci. Stanovení avidity IgG umožňuje rozlišit primární a dříve prodělanou infekci. Nukleární antigen (EBNA-1) – IgM protilátky jsou detekovatelné v průběhu akutní fáze primoinfekce. Protilátky třídy IgG se objevují s větším časovým odstupem a jsou detekovatelné po celý život. Dlouhodobá absence IgG protilátek u infikovaných osob může indikovat imunodeficit. Časný antigen (EA-D, diffuse) – Protilátky třídy IgM a IgG jsou tvořeny během primoinfekce, velmi časně kulminují a po několika měsících jsou již často nedekovatelné.
Protilátková odpověď
nízká avidita anti-VCA IgG
vysoká avidita anti-VCA IgG anti-EBNA -1 IgM
Koncentrace protilátek
anti-VCA IgM anti-EA-D IgM anti-VCA IgA anti-EA-D IgG anti-VCA IgG anti-EBNA -1 IgG
Čas Akutní infekce (dny)
Rekonvalescence (měsíce)
Použití souprav
Dříve prodělaná infekce (roky)
Antigeny Rekombinantní antigeny s vysoce specifickými imunodominantními epitopy
Vyhledávací test k průkazu EBV infekce u člověka Diagnostika fáze onemocnění
Princip testu
Uživatelský komfort
Soupravy jsou založeny na sendvičovém typu ELISA metody.
Komponenty v pracovním ředění Barevně odlišené reagencie
Sandwich ELISA
Zaměnitelnost komponent Barevně značené stripy s odlamovacími jamkami CUT-OFF kontrola a kalibrátory
HRP
HRP
Anti-Hu IgA
Anti-Hu IgM
Anti-Hu IgG
IgG
Semikvantitativní hodnocení výsledků (Index pozitivity-IP) nebo kvantitativní vyhodnocení výsledků (U/ml)
HRP
IgM IgA
Ag
Ag
Mikrotitrační destička
Ag
Pracovní postup Krok č.
Charakteristiky souprav
Kroky testu Ředění vzorků
1
séra/plazmy (1+100) mozkomíšní moky (1+2)
2
Dávkování kontrol a ředěných vzorků 100 µl
3
Inkubace 30 min. při 37 °C
4
Odsátí a promytí jamek 5 krát
5
Dávkování Konjugátu 100 μl
blank = prázdná jamka
blank = prázdná jamka
6
Inkubace 30 min. při 37 °C
7
Odsátí a promytí jamek 5 krát
8
Dávkování substrátu (TMB-Complete) 100 μl
9
Inkubace 30 min. při 37 °C
ELISA
Diagnostická citlivost
Diagnostická specifita
EIA EBV EA-D IgG
92,6 %
97,3 %
EIA EBV EA-D IgM
95,9 %
97,7 %
EIA EBV EBNA-1 IgG
96,9 %
98,9 %
EIA EBV EBNA-1 IgM
97,8 %
97,7 %
EIA EBV VCA IgA
97,7 %
97,9 %
EIA EBV VCA IgG
99,0 %
98,4 %
EIA EBV VCA IgM
98,4 %
98,6 %
Výhody souprav
včetně blanku
Vysoká diagnostická účinnost Dobrá reprodukovatelnost
10
Dávkování Zastavovacího roztoku 100 μl
11
Fotometrické měření při 450 nm
včetně blanku
Vysoká dynamika testů Identický pracovní postup Celková doba vyšetření 1,5 hodiny Možnost kvantitativního stanovení Vhodné pro otevřené automatické systémy
Interpretace výsledků
Expirace 15 měsíců od data výroby
Modelové situace při vyhodnocování výsledků VCA
EA-D
EBNA-1
Možnost nezávislé verifikace (CKS) Hodnocení
IgM
IgA
IgG
IgM
IgG
IgM
IgG
–
–
–
–
–
–
–
+
–
–
+
–
+
–
+
+
–
+
+
(+)
–
+
+
+
+
+
(+)
–
+
(+)
+
–
(+)
–
–
–
(+)
+
–
(+)
–
+
Postakutní stádium
–
–
+
–
–
–
+
Dříve prodělaná infekce
+
(+)
+
+
Reaktivace
(+) (+) (+)
Stanovení v mozkomíšním moku (EIA EBV VCA)
Seronegativita
Primární infekce
Komplexní zákaznický servis
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Objednací údaje Kód
Název soupravy
Počet testů
EAG096
EIA EBV EA-D IgG
96
EAM096
EIA EBV EA-D IgM
96
EBG096
EIA EBV EBNA-1 IgG
96
EBG192
EIA EBV EBNA-1 IgG (192)
EBM096
EIA EBV EBNA-1 IgM
96
VCA096
EIA EBV VCA IgA
96
VCG096
EIA EBV VCA IgG
96
VCG192
EIA EBV VCA IgG (192)
VCM096
EIA EBV VCA IgM
VCM192
EIA EBV VCA IgM (192)
xxxTLN
CKS negativní (dle seznamu na www.testlinecd.cz)
3,5 ml
xxxTLP
CKS pozitivní (dle seznamu na www.testlinecd.cz)
3,5 ml
192
192 96 192
Kontakt
TestLine Clinical Diagnostics s.r.o. Křižíkova 68 612 00 Brno, Česká republika Tel.: +420 549 121 205 (237, 238) Fax: +420 541 243 390 E-mail:
[email protected]
www.testlinecd.cz
TestLine Clinical Diagnostics s.r.o. je držitelem certifikátů ISO 9001:2008 a ISO 13485:2003
