Rapid-VIDITEST Calprotectin Card Jednokrokový kazetový test pro diagnostiku kalprotektinu
Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II č. 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, ČR, tel: 261 090 565, web: www.vidia.cz
POUŽITÍ: Rapid-VIDITEST Calprotectin Card je rychlý imunochromatografický (neinvazivní) test pro kvalitativní detekci kalprotektinu ve vzorcích lidské stolice, který lze využít při diagnostice zánětlivých gastrointestinálních onemocnění. ÚVOD: Kalprotektin je protein vázající vápníkový ion a tvoří 5% z celkových a 60% z cytoplazmatických proteinů neutrofilů. Má bakteriostatické a fungicidní vlastnosti a jeho hladina ve stolici je šestkrát vyšší než v plazmě. Stanovení tohoto biomarkeru ve stolici je vhodným ukazatelem při diagnostice nespecifických střevních zánětů. Nespecifické střevní záněty (IBD, zkratka z angl. Inflammatory bowel disease) zahrnují Crohnovu chorobu a ulcerózní kolitidu a jsou spojeny se zvýšenou hladinou neutrofilů. Stanovení koncentrace kalprotektinu ve vzorku stolice je důležité pro odlišení funkčních poruch zažívacího ústrojí od zánětlivých postižení. Vyšetření tohoto biomarkeru je jednoduché a neinvazivní, což je zvláště vhodné u dětí, protože tam vyžaduje kolonoskopické vyšetření celkovou anestézii. Kromě toho test slouží k predikci relapsu onemocnění. PRINCIP TESTU: Rapid-VIDITEST Calprotectin Card je kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení kalprotektinu ve vzorcích stolice. V testovacích zónách membrány jsou navázány myší polyklonální protilátky proti kalprotektinu. V průběhu testování vzorek reaguje s barevnými částicemi, na kterých jsou navázány protilátky proti lidskému kalprotektinu a které byly předem ponechány vyschnout na testovacím proužku. Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve „výsledkové zóně“ projeví jako barevná linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v „kontrolní zóně“, kde se vždy na konci testu objeví zelená linka. Přítomnost zelené linky ověřuje, že byl použit dostatečný objem vzorku, že došlo ke správnému vzlínání vzorku, a představuje interní kontrolu reagencií. OBSAH SOUPRAVY: -
Testovací kazety Rapid-VIDITEST Calprotectin Odběrové zkumavky obsahující ředicí roztok pro vzorky Návod k použití certifikát kontroly balení 1
POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU: -
Nádoba na sběr vzorků Jednorázové rukavice Stopky
SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ: Odeberte přiměřené množství stolice (1-2 g nebo ml tekutého vzorku). Vzorky odebírejte do čistých a suchých odběrových nádob (bez konzervantů nebo transportních médií). Vzorky mohou být skladovány v chladničce (2-4ºC) po dobu 7 dnů před testováním. V případě delšího skladování je nutno vzorky uchovávat zmrazené při -20°C. Před použitím nechte vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu. PRACOVNÍ POSTUP: Příprava vzorků: Pro každý vzorek použijte zvláštní odběrovou zkumavku. 1) Odšroubujte víčko odběrové zkumavky a aplikační tyčinku třikrát ponořte do vzorku stolice, abyste nabrali vzorek (obr. 1). Zavřete zkumavku s ředicím roztokem a vzorkem stolice. Zkumavka se vzorkem může být skladována po dobu 5 dnů. 2) Za účelem dobré homogenizace vzorku zkumavku důkladně promíchejte (obr. 2). V případě, že je vzorek tekutý, odsajte vzorek stolice kapátkem a aplikujte do odběrové zkumavky s ředicím roztokem 10-20 μl vzorku.
vzorek stolice
odběrová zkumavka
Před testováním nechte testovací kazetu, vzorek stolice a roztok vytemperovat na laboratorní teplotu (15 - 30°C). Neotvírejte obal, dokud nejste připraveni provést test. 1. Vyjměte kazetu Rapid-VIDITEST Calprotectin Card z uzavřeného obalu a použijte kazetu co nejdříve. Položte kazetu na čistý a rovný povrch. Znova protřepejte odběrovou zkumavku se vzorkem stolice za účelem dobré homogenizace vzorku. Uřízněte nebo ustřihněte konec špičky zkumavky (obr. 3). 2. Pro každý vzorek a kontrolu použijte samostatnou odběrovou zkumavku a kazetu. Aplikujte 4 kapky nebo 100 µL do jamky pro aplikaci vzorku (S) (obr. 4). Zapněte stopky. 3. 10 minut po aplikaci vzorku odečtěte výsledek.
2
Přidejte 5 kapek
Kontrolní zóna
Výsledková zóna
INTERPRETATION OF RESULTS:
GREEN ZELENÁ RED ČERVENÁ
Negativní
RED ČERVENÁ
Pozitivní
Neplatný
Neplatný
POZITIVNÍ: V okénku se objeví dvě linky: jedna červená ve výsledkové zóně (T) a druhá zelená v kontrolní zóně (C). Kalprotektin-pozitivní výsledek indikuje přítomnost zánětu v gastrointestinálním traktu. NEGATIVNÍ: V okénku se objeví pouze zelená kontrolní linka (C). Negativní výsledek svědčí o nepřítomnosti aktivního gastrointestinálního zánětu. NEPLATNÝ: Test je neplatný, pokud se v kontrolní zóně neobjeví zelená linka bez ohledu na přítomnost červené linky ve výsledkové zóně. Pozn.: Nejčastější příčinou selhání testu je nedostatečný objem vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte prosím svého dodavatele.
3
POZNÁMKA K INTERPRETACI VÝSLEDKU: Intenzita červené barevné linky v místě označeném T může být různá v závislosti na koncentraci kalprotektinu ve vzorku. PLATNOST TESTU: Součástí testu je interní kontrola průběhu testu. - Test je platný pouze v případě, když se v kontrolní zóně (C) objeví zelená linka, která potvrzuje dostatečný objem vzorku a správný průběh testu. - Interní negativní kontrolou je čisté pozadí. Pokud test funguje správně, pozadí ve výsledkovém okénku by mělo být čisté a nemělo by znesnadňovat odečtení výsledku testu. OMEZENÍ TESTU: 1. Rapid-VIDITEST Calprotectin Card indikuje pouze přítomnost kalprotektinu ve vzorku (kvalitativní detekce) a může být použit pouze pro detekci kalprotektinu ve vzorcích stolice. Pomocí tohoto testu nelze určit ani kvantitativní hodnotu, ani míru nárůstu koncentrace kalprotektinu ve vzorku. 2. Nadbytečné množství vzorku stolice může vést k nesprávnému výsledku (objevují se hnědé linky). V tomto případě nařeďte vzorek ředicím roztokem a opakujte test. 3. Některé vzorky stolice mohou způsobit snížení intenzity kontrolní zelené linky. 4. Vzorky stolice pacientů s aktivním nespecifickým střevním zánětem (Crohnova choroba, ulcerózní kolitis) by měly být kalprotektin-pozitivní. Rapid-VIDITEST Calprotectin Card může být použit i pro pacienty s chronickým průjmem. 5. Kalprotektin-pozitivní výsledek testu znamená přítomnost kalprotektinu ve stolici; nicméně příčina může být různá - IBD, kolorektální karcinom, některé enteropathie. Výsledek testu by měl být potvrzen dalšími diagnostickými metodami a správnou diagnózu by měl stanovit lékař. 6. U novorozenců byla publikována vyšší hladina kalprotektinu ve stolici než ve stolici starších dětí (prům. 167 µg/g stolice). PŘEDPOKLÁDANÉ HODNOTY: Zvýšená hladina kalprotektinu ve stolici je u pacientů s IBD spojena se zvýšeným rizikem relapsu. Pro pacienty s gastrointestinálními zánětlivými problémy uvádějí některé studie jako hodnotu cut-off ≥50 µg kalprotektinu/g stolice. PARAMETRY TESTU: Citlivost Rapid-VIDITEST Calprotectin Card test dává pozitivní výsledek u vzorků obsahujících kalprotektin v koncentraci ≥50µg/g. Pro stanovení detekčního limitu byly podle návodu k použití testovány vzorky s různým obsahem kalprotektinu ředěnými v ředicím roztoku nebo v negativních vzorcích stolice. Detekce lidského kalprotektinu testem Rapid-VIDITEST Calprotectin vykazovala >94% shodu v citlivosti v porovnání s jiným komerčním imunotestem (Calprest® Eurospital).
4
Specifita Detekce lidského kalprotektinu testem Rapid-VIDITEST Calprotectin Card vykazovala 93% shodu ve specificitě v porovnání s jiným komerčním imunotestem (Calprest® Eurospital). Rapid-VIDITEST Calprotectin Card test je specifický pro lidský kalprotektin a nevykazuje žádnou zkříženou reakci s ostatními kalprotektiny. SKLADOVÁNÍ A STABILITA: Skladujte v originálním obalu při teplotě 2 - 30°C. Test je stabilní do data exspirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ: -
Pouze pro in vitro diagnostiku. Nepoužívejte po uplynutí expirační doby. Skladujte uzavřené v originálním obalu až do použití. Nepoužívejte test z poškozeného obalu. Dodržujte správnou laboratorní praxi, používejte ochranné rukavice, při práci nejezte, nepijte a nekuřte. Se vzorky manipulujte jako s potenciálně infekčním materiálem. Odpad likvidujte jako biologický infekční odpad v souladu s příslušnými předpisy. Test musí být proveden do 2 hodin po otevření obalu.
REFERENCES: 1. VIEIRA, A. et al., “Inflammatory bowel disease activity assessed by fecal calprotectin and lactoferrin: correlation with laboratory parameters, clinical, endoscopic and histological indexes”, BMC Research Notes 2009, 2:221. 2. HANAI, H. et al. «“Relationship Between Fecal Calprotectin, Intestinal Inflammation, and Peripheral Blood Neutrophils in Patients with Active Ulcerative Colitis” Digestive Diseases and Sciences, Sept. 2004, Vol 49, No 9, pp 1438-1443. 3. BONNIN TOMAS, A, et al. “Calprotectina fecal como marcador diferencia entre patología gastrointestinal orgánica y funcional”. Rev. Esp. de Enf. Dig. 2007, Vol 99, No 12, pp. 689-693. POUŽITÉ SYMBOLY: Určeno pro diagnostiku in vitro
Číslo šarže (LOT)
Datum exspirace
Výrobce
Poslední revize tohoto návodu: 06/2012
5
